本發(fā)明涉及一種厭氧發(fā)酵的方法、發(fā)酵產(chǎn)物以及包含該產(chǎn)物的動(dòng)物飼料。利用了生物技術(shù)改進(jìn)發(fā)酵產(chǎn)品的飼用價(jià)值，屬于飼料生產(chǎn)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

我國(guó)是世界上最大的養(yǎng)殖生產(chǎn)國(guó)之一，同時(shí)也是世界上飼料原料，特別是蛋白質(zhì)原料的需求大國(guó)，我國(guó)飼料工業(yè)生產(chǎn)中蛋白質(zhì)飼料資源嚴(yán)重不足，魚(yú)粉、肉骨粉以及血漿蛋白粉等高品質(zhì)動(dòng)物蛋白原料主要依賴(lài)國(guó)際進(jìn)口，而動(dòng)物性蛋白原料也面臨資源匱乏和飼料產(chǎn)品的安全性問(wèn)題。

豆粕，又稱(chēng)“大豆粕”，是大豆提取豆油后得到的一種副產(chǎn)品，其蛋白質(zhì)含量高達(dá)43-48％。按照提取的方法不同，可以分為一浸豆粕和二浸豆粕兩種，同時(shí)由于一浸豆粕的蛋白質(zhì)的含量更高，因此，其用途更廣。同時(shí)，豆粕作為一種質(zhì)量穩(wěn)定的植物蛋白原料，成為一種取代動(dòng)物蛋白的優(yōu)質(zhì)植物蛋白資源。我國(guó)有著豐富的豆粕資源，價(jià)格便宜，在中國(guó)豆粕年產(chǎn)約1000萬(wàn)噸。

但由于豆粕中的抗?fàn)I養(yǎng)因子如抗原蛋白、植酸、脲酶等的存在，尤其是胰蛋白酶抑制因子，它能阻礙豬體內(nèi)胰蛋白酶對(duì)豆類(lèi)蛋白的消化吸收造成腹瀉，影響生長(zhǎng)，適口性差，難于消化，飼料利用率低等，嚴(yán)重限制了豆粕的應(yīng)用范圍和應(yīng)用價(jià)值。目前，應(yīng)用發(fā)酵技術(shù)處理豆粕，可有效降解豆粕中抗?fàn)I養(yǎng)因子，提高其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。

發(fā)酵指人們借助微生物在有氧或無(wú)氧條件下的生命活動(dòng)來(lái)制備微生物菌體本身、或者直接代謝產(chǎn)物或次級(jí)代謝產(chǎn)物的過(guò)程。豆類(lèi)植物原料的發(fā)酵過(guò)程通常可以分為有氧發(fā)酵以及無(wú)氧發(fā)酵兩種，發(fā)酵豆粕的制備包括厭氧發(fā)酵和好氧發(fā)酵，由于耗氧發(fā)酵耗能大產(chǎn)能低等缺點(diǎn)，將逐漸被淘汰。

通常的厭氧發(fā)酵，利用蛋白酶對(duì)豆粕的大分子蛋白進(jìn)行降解，而得到小 分子的肽，因?yàn)榘l(fā)酵豆粕的生產(chǎn)需要控制成本，所以蛋白酶的添加需控制在合理的范圍內(nèi)，這就需要延長(zhǎng)發(fā)酵時(shí)間以使酶有足夠的作用時(shí)間來(lái)降解大分子蛋白，故厭氧發(fā)酵生產(chǎn)發(fā)酵豆粕需要72h左右，或者時(shí)間更長(zhǎng)。

文獻(xiàn)[1]中公開(kāi)了一種利用微生物發(fā)酵生產(chǎn)高蛋白豆粕的方法，以豆粕為主要原料，輔以玉米和麥麩，粉碎混合后接入釀酒酵母和枯草芽孢桿菌進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵。該發(fā)酵過(guò)程使用混合菌類(lèi)之間的協(xié)同作用，但增加了不同菌液培養(yǎng)和混合工序。

文獻(xiàn)[2]公開(kāi)了一種發(fā)酵豆粕的生產(chǎn)工藝：經(jīng)過(guò)粉碎過(guò)35目篩的豆粕與經(jīng)過(guò)粉碎過(guò)30目篩的甘草、野菊花、銀杏葉和青皮混合后，與發(fā)酵菌液按照一定的比例混合，混合后于發(fā)酵罐中密封發(fā)酵66-72h。其發(fā)酵工藝的原料、菌液的組成和制備工藝復(fù)雜，且發(fā)酵時(shí)間長(zhǎng)。

文獻(xiàn)[3]公開(kāi)了菌酶協(xié)同作用發(fā)酵豆粕用于取代魚(yú)粉，其中發(fā)酵豆粕的生產(chǎn)工藝為：使用菌株和菠蘿蛋白酶菌酶協(xié)同作用進(jìn)行發(fā)酵豆粕的生產(chǎn)。

文獻(xiàn)[4]公開(kāi)了一種分解特定β-伴大豆球蛋白成分的方法，其使用正己烷為提取溶劑預(yù)先提取獲得低變性脫脂大豆。

文獻(xiàn)[5]公開(kāi)了一種水酶法提取花生四烯酸油脂的工藝，使用乙醇和正己烷進(jìn)行油脂萃取。

以上文獻(xiàn)[1]-[3]中豆粕發(fā)酵過(guò)程工藝較為復(fù)雜，或者對(duì)于發(fā)酵時(shí)間的縮短也不能說(shuō)是充分。對(duì)于文獻(xiàn)[4]和[5]，過(guò)程中使用了大量的正己烷作為有機(jī)溶劑提取相關(guān)組分，且正己烷并沒(méi)有參與發(fā)酵過(guò)程。

文獻(xiàn)[6]公開(kāi)了利用發(fā)酵性絲孢酵母制備脂肪酶，對(duì)脂肪酶的部分發(fā)酵條件和性質(zhì)，以及同源蛋白酶對(duì)脂肪酶合成的影響進(jìn)行研究，以提高脂肪酶的生成能力和催化活性，研究結(jié)果表明，正己烷對(duì)脂肪酶具有明顯的激活作用，但完全抑制蛋白酶。

參考文獻(xiàn)

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文獻(xiàn)[6]：大連工業(yè)大學(xué)碩士論文，2012，發(fā)酵性絲孢酵母脂肪酶與蛋白酶發(fā)酵及性質(zhì)的比較

可見(jiàn)，目前對(duì)于源自于豆類(lèi)植物原料的發(fā)酵，其工藝控制的節(jié)省，發(fā)酵時(shí)間的縮短并不能說(shuō)是充分的。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

發(fā)明要解決的問(wèn)題

鑒于以上的技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明的目的在于提供一種厭氧發(fā)酵的方法，對(duì)源自于植物粕類(lèi)，特別是豆粕的原料進(jìn)行發(fā)酵，簡(jiǎn)化目前的發(fā)酵工藝，并有效地縮短發(fā)酵工藝的時(shí)間，有效降低植物粕類(lèi)原料中的抗?fàn)I養(yǎng)因子，提高其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。

進(jìn)一步，本發(fā)明提供一種經(jīng)較短時(shí)間發(fā)酵后所得到的發(fā)酵植物粕類(lèi)產(chǎn)品，特別是通過(guò)本發(fā)明的發(fā)酵方法得到的發(fā)酵豆粕產(chǎn)品。

繼而，本發(fā)明也提供一種包含本發(fā)明發(fā)酵植物粕類(lèi)，特別是發(fā)酵豆粕的動(dòng)物飼料，特別是適用于幼小動(dòng)物的飼料產(chǎn)品。

用于解決問(wèn)題的方案

如前所述，本領(lǐng)域中一般認(rèn)為烴類(lèi)化合物，尤其是正己烷，如文獻(xiàn)[6]中所公開(kāi)的那樣，將會(huì)對(duì)蛋白酶的活性起到抑制作用。由于在植物粕類(lèi)發(fā)酵時(shí)使用蛋白酶，因此，對(duì)于烴類(lèi)化合物，特別是正己烷應(yīng)當(dāng)盡可能避免在發(fā)酵組分中出現(xiàn)或使用。

然而根據(jù)本發(fā)明的發(fā)明人研究，出人意料地發(fā)現(xiàn)了，如果在植物粕類(lèi)的發(fā)酵過(guò)程中添加微量的烴類(lèi)化合物，特別是正己烷，能夠促進(jìn)發(fā)酵的過(guò)程， 提高發(fā)酵的效率，從而節(jié)省發(fā)酵的時(shí)間，更加經(jīng)濟(jì)地獲得所需高營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的發(fā)酵產(chǎn)品。更直接的說(shuō)，經(jīng)過(guò)本發(fā)明人的研究，意外地發(fā)現(xiàn)原本認(rèn)為將阻礙發(fā)酵過(guò)程中蛋白酶活化的烴類(lèi)化合物，在特定的用量范圍以?xún)?nèi)，實(shí)際上能夠促進(jìn)發(fā)酵的進(jìn)行。

具體而言，本發(fā)明以源自植物粕類(lèi)作為發(fā)酵植物原料，尤其是以豆粕為發(fā)酵原料，通過(guò)將其與微量的烴類(lèi)化合物，特別是正己烷，進(jìn)行均勻混合，然后將得到的混合體系進(jìn)行發(fā)酵處理，能夠有效的縮短厭氧發(fā)酵的發(fā)酵時(shí)間。

更具體而言，本發(fā)明的技術(shù)方案為：

[1].一種厭氧發(fā)酵的方法，其特征在于，所述方法包括：a)形成包含發(fā)酵植物原料與烴類(lèi)化合物的混合物的步驟，以及b)將包含發(fā)酵植物原料與烴類(lèi)化合物的混合物的混合體系發(fā)酵的步驟，所述烴類(lèi)化合物為c4-c8的烷烴。

[2].根據(jù)[1]所述的方法，其特征在于，所述發(fā)酵植物原料源自于粕類(lèi)，優(yōu)選源自豆粕，和/或烴類(lèi)化合物為c5-c6的烷烴，特別優(yōu)選正己烷。

[3].根據(jù)[1]或[2]所述的方法，其特征在于，所述a)步驟中的混合物還包括酶，所述酶的用量為發(fā)酵植物原料的至少100u/g，優(yōu)選至少200u/g，特別優(yōu)選至少300u/g，最優(yōu)選至少400u/g。

[4].根據(jù)[3]所述的方法，其特征在于，所述a)步驟包括：(i)將發(fā)酵植物原料與酶進(jìn)行混合的步驟以及再加入烴類(lèi)化合物進(jìn)行混合的步驟；或者，(ii)將發(fā)酵植物原料與烴類(lèi)化合物進(jìn)行混合的步驟以及再加入酶進(jìn)行混合的步驟。

[5].根據(jù)[4]所述的方法，其特征在于，在所述(ii)步驟中，將發(fā)酵植物原料與烴類(lèi)化合物進(jìn)行混合后，進(jìn)行加熱處理，然后再加入酶，所述加熱溫度為40℃-65℃，優(yōu)選為50℃-65℃，更優(yōu)選為55℃-65℃，所述加熱時(shí)間為5-20min，優(yōu)選為10-15min。

[6].根據(jù)[1]-[5]任意一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述烴類(lèi)化合物的 用量為發(fā)酵植物原料的0.1-0.8重量‰，優(yōu)選0.1-0.4重量‰，更優(yōu)選0.2-0.3重量‰。

[7].根據(jù)[1]-[6]任意一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述b)步驟之前還包括向a)步驟所得到的混合物加入水的步驟，所述水的用量為發(fā)酵植物原料的至少10重量％，優(yōu)選為25重量％，特別優(yōu)選為至少30重量％。

[8].根據(jù)[1]-[7]任意一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述b)步驟中所述發(fā)酵的溫度為20℃-60℃，優(yōu)選為30℃-55℃，和/或所述發(fā)酵的時(shí)間為18-72h，優(yōu)選為24-60h，更優(yōu)選為40-50h。

[9].根據(jù)[1]-[8]中任意一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，還包括c)烘干的步驟以得到最終產(chǎn)物，所述烘干步驟在烘箱中進(jìn)行，烘干溫度為40℃-80℃，優(yōu)選為45℃-75℃，烘干時(shí)間為2-10h，優(yōu)選為3-8h。

此外，本發(fā)明通過(guò)以上厭氧發(fā)酵的方法，得到了發(fā)酵植物粕類(lèi)產(chǎn)品，特別是發(fā)酵豆粕產(chǎn)品，以及以該產(chǎn)品為成分的動(dòng)物飼料。

具體而言：

一種發(fā)酵豆粕，其特征在于使用根據(jù)[1]-[9]中任意一項(xiàng)所述的厭氧發(fā)酵的方法制備。

以及：

一種動(dòng)物飼料，其特征在于包括以上所述的發(fā)酵豆粕。

附圖說(shuō)明

圖1：正己烷含量與發(fā)酵產(chǎn)物中小肽含量的關(guān)系

具體實(shí)施方式

本發(fā)明所采用的為厭氧發(fā)酵的方式。對(duì)于厭氧發(fā)酵的設(shè)備沒(méi)有限制，可以采用本領(lǐng)域通常使用的發(fā)酵罐進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵方式可以采用間歇發(fā)酵、半連續(xù)發(fā)酵、分隔半連續(xù)發(fā)酵或連續(xù)發(fā)酵等。

對(duì)于本發(fā)明所使用的植物粕類(lèi)原料，沒(méi)有特殊的限制。植物粕類(lèi)的品種很多，可以為豆粕、菜粕、棉籽粕、米糠粕、花生粕、葵粕等。出于對(duì)營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的要求，一般優(yōu)選為蛋白質(zhì)含量較高的植物粕類(lèi)，如大豆等。同時(shí)，從有利于蛋白質(zhì)的分離角度來(lái)說(shuō)，本發(fā)明的發(fā)酵原料優(yōu)選豆粕，特別優(yōu)選粉碎的豆粕。

對(duì)于豆粕的粉碎方式，可以采用本領(lǐng)域中通常的粉碎方法，例如，可以為機(jī)械粉碎或者超聲波粉碎。對(duì)于粉粹程度，沒(méi)有特別的限定，可以使塊狀，也可以是顆粒狀，或者是粉末狀。此外，出于提高發(fā)酵效率的考慮，優(yōu)選顆粒狀或粉末狀的粉碎的豆粕。

對(duì)于本發(fā)明所使用的烴類(lèi)化合物，優(yōu)選為烷烴類(lèi)化合物，更優(yōu)選為c4-c8的烷烴，特別優(yōu)選為c5-c6的烷烴，最優(yōu)選為正己烷。對(duì)于其用量，相對(duì)于發(fā)酵植物原料或發(fā)酵粕類(lèi)植物原料的量為微量，優(yōu)選為0.1-0.8‰，更優(yōu)選為0.1-0.4‰，特別優(yōu)選為0.2-0.3‰。當(dāng)正己烷的用量少于0.1‰時(shí)，其對(duì)于發(fā)酵的促進(jìn)作用并不明顯，如在48h小時(shí)內(nèi)其對(duì)于抗原蛋白的分解并不能說(shuō)是十分充分的。當(dāng)正己烷的用量大于0.8‰時(shí)，一方面在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)其對(duì)于抗原蛋白的分解產(chǎn)生邊界效應(yīng)，即，單位正己烷對(duì)于小肽含量的增加量出現(xiàn)降低的趨勢(shì)，另一方面，如果過(guò)度增加正己烷用量，可能會(huì)導(dǎo)致抑制蛋白酶的活性的情況的出現(xiàn)，同時(shí)由于過(guò)量正己烷的使用，也將無(wú)謂地增加生產(chǎn)成本，且不利于環(huán)境保護(hù)。

對(duì)于本發(fā)明所使用的酶，只要是催化蛋白質(zhì)水解的酶類(lèi)，就沒(méi)有特別的限制，主要使用各種蛋白酶，蛋白酶是最重要的一種工業(yè)酶制劑，能催化蛋白質(zhì)和多肽水解，廣泛存在于動(dòng)物內(nèi)臟、植物莖葉、果實(shí)和微生物中。豆粕中含有胰蛋白酶抑制因子、低聚糖、凝集素、植酸、脲酶等抗?fàn)I養(yǎng)因子，發(fā)酵過(guò)程中通過(guò)微生物、酶及發(fā)酵產(chǎn)生的有機(jī)酸的作用，使得抗?fàn)I養(yǎng)因子被降解或者鈍化，從而得到破壞。豆粕發(fā)酵，無(wú)機(jī)氮的生物轉(zhuǎn)化，蛋白質(zhì)含量提高，且大部分蛋白已被降解為小肽，吸收速度快，消化率高，能提高飼料營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。

本發(fā)明使用的酶的量，以發(fā)酵植物原料或植物粕類(lèi)原料計(jì)，為至少100u/g，優(yōu)選為至少200u/g、至少300u/g、至少400u/g，特別優(yōu)選為500u/g。對(duì)于本發(fā)明所使用的酶，可以為堿性蛋白酶、中性蛋白酶以及酸性蛋白酶。

對(duì)于本發(fā)明的發(fā)酵植物原料或者植物粕類(lèi)與烴類(lèi)化合物、酶的混合方法，只要是能夠充分混合本發(fā)明各組分，對(duì)于具體方法并沒(méi)有特殊限制。但出于使得本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠更容易的獲得本發(fā)明的發(fā)明效果的考慮。本發(fā)明優(yōu)選采用分步混合的方式，即(i)先將植物粕類(lèi)原料與酶進(jìn)行混合均勻，然后再加入烴類(lèi)化合物進(jìn)行混合，或者(ii)先將植物粕類(lèi)原料與烴類(lèi)化合物進(jìn)行混合均勻，然后再加入酶進(jìn)行混合。對(duì)于混合的手段沒(méi)有限制，可以使用本領(lǐng)域常規(guī)的共混設(shè)備，比如攪拌機(jī)等。以上優(yōu)選的兩種混合的方法的目的在于，使三種物質(zhì)更加易于充分的混合。特別是，有效的避免了酶與正己烷過(guò)早的接觸所引起的可能由于局部的濃度不均或者濃度梯度的產(chǎn)生，可能會(huì)導(dǎo)致在局部產(chǎn)生短時(shí)間內(nèi)過(guò)量正己烷與酶的接觸，使得酶活性得到抑制。進(jìn)一步，發(fā)明人認(rèn)為使用酶先與植物粕類(lèi)原料接觸是更為有利的，即，(i)中的混合方式是最為優(yōu)選的方式，其原因可能是，(i)中酶直接與植物粕類(lèi)原料接觸，而(ii)中首先加入的烴類(lèi)化合物可能存在于部分植物粕類(lèi)的表面，從而使得酶與原料的接觸需要一定時(shí)間。

此外，出于更好地提高發(fā)酵效率的考慮，在(ii)的混合方式中，先將豆類(lèi)植物原料與正己烷進(jìn)行混合后，對(duì)該體系進(jìn)行加熱處理。所述加熱處理的方式?jīng)]有限制，例如可以使用烘箱，加熱溫度優(yōu)選為40℃-65℃，更優(yōu)選為50℃-65℃，特別優(yōu)選為55℃-65℃，最優(yōu)選為60℃，加熱時(shí)間為5-20min，優(yōu)選為10-15min，更優(yōu)選為10min。

對(duì)于本發(fā)明以上所得到的植物粕類(lèi)原料與烴類(lèi)化合物、酶的混合物，在發(fā)酵之前，優(yōu)選加入一定量的水，水對(duì)于植物粕類(lèi)原料中抗原蛋白的酶解起到促進(jìn)作用。本發(fā)明中水的用量，為至少10％，優(yōu)選至少25％，特別優(yōu)選為至少30％，最優(yōu)選為40％，基于發(fā)酵植物原料或植物粕類(lèi)原料的重量。

對(duì)于本發(fā)明的發(fā)酵過(guò)程，優(yōu)選在一定溫度下進(jìn)行，例如20℃-60℃，優(yōu) 選為25℃-60℃，更優(yōu)選為30℃-55℃，特別優(yōu)選為40℃。所述發(fā)酵的時(shí)間，如前所述，就現(xiàn)有技術(shù)中的發(fā)酵時(shí)間而言，其基本上在72h以上才能較好的得到抗原蛋白充分降解的產(chǎn)品，而本發(fā)明技術(shù)方案能夠促進(jìn)發(fā)酵的過(guò)程，提高發(fā)酵的效率，從而節(jié)省發(fā)酵的時(shí)間。因此，本發(fā)明的發(fā)酵時(shí)間一般為18-72h即可，優(yōu)選24-60h，更優(yōu)選40-50h，出于綜合考慮生產(chǎn)效率以及產(chǎn)品質(zhì)量(營(yíng)養(yǎng)價(jià)值)的考慮特別優(yōu)選48小時(shí)。經(jīng)本發(fā)明發(fā)明人的發(fā)現(xiàn)，當(dāng)微量烴類(lèi)化合物存在的情況下，低于18h，抗氧蛋白的降解程度，或者小肽的獲得量不能說(shuō)是充分的，同時(shí)，當(dāng)發(fā)酵時(shí)間超過(guò)72h時(shí)，再繼續(xù)延長(zhǎng)發(fā)酵時(shí)間也不能明顯的提高產(chǎn)品中小肽的含量，從經(jīng)濟(jì)以及效率上考慮也是不優(yōu)選的。特別說(shuō)明的而是，本發(fā)明的發(fā)酵過(guò)程在微量烴類(lèi)化合物的存在下，其40-50h或48h的發(fā)酵產(chǎn)品的發(fā)酵程度實(shí)際上已經(jīng)達(dá)到或超過(guò)傳統(tǒng)發(fā)酵手段發(fā)酵72小時(shí)的程度。

對(duì)于發(fā)酵產(chǎn)品，優(yōu)選進(jìn)行烘干處理，并粉碎過(guò)篩。所述烘干處理優(yōu)選在烘箱中進(jìn)行，烘干溫度為40℃-80℃，優(yōu)選為45℃-75℃，更優(yōu)選為50℃-70℃，特別優(yōu)選為55℃-65℃。所述烘干的時(shí)間為2-10h,優(yōu)選為3-8h，更優(yōu)選為4-7h。對(duì)于粉碎過(guò)篩處理，可以使用40-80目篩，優(yōu)選為50-70目篩，更優(yōu)選為55-65目篩。

更加具體而言，本發(fā)明的技術(shù)方案可以為：

①發(fā)酵原料的預(yù)混合的步驟；

②按照一定的比例加水在①混合好的混合物中，再次混合均勻；

③將②中混合好的樣品，放于恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行發(fā)酵；

④取出③中培養(yǎng)好的樣品，烘箱中烘焙；

⑤將④中烘干后樣品粉碎過(guò)篩，待檢測(cè)。

所述①的步驟包括；

(ⅰ)稱(chēng)取一定量的商品豆粕；

(ⅱ)將酶按一定的酶活單位與豆粕進(jìn)行混合；

(ⅲ)取適量正己烷加入到(ⅱ)中混合好的樣品中，再次混合均勻。

或者

(ⅰ’)稱(chēng)取一定量的商品豆粕，按照一定的比例添加正己烷，在烘箱中烘干若干分鐘后，按照一定的酶活單位添加酶，并混合均勻。

本發(fā)明通過(guò)以上方法得到植物粕類(lèi)為原料的發(fā)酵產(chǎn)物，這些產(chǎn)品由于其中的抗原蛋白被快速、充分的降解為小分子肽，其口感和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值均較好。適合作為動(dòng)物飼料，特別是幼小動(dòng)物養(yǎng)殖用飼料。

發(fā)明的效果

如前所述，厭氧發(fā)酵中蛋白酶的添加需控制在合理的范圍內(nèi)，在一定條件下，這需延長(zhǎng)發(fā)酵時(shí)間以便酶有足夠的時(shí)間降解大分子蛋白，故厭氧發(fā)酵生產(chǎn)發(fā)酵粕類(lèi)植物一般需要72h或者更長(zhǎng)時(shí)間，本發(fā)明在厭氧發(fā)酵過(guò)程中添加一定量的烴類(lèi)化合物，尤其是正己烷，可有效縮短發(fā)酵時(shí)間。發(fā)酵豆粕品質(zhì)的優(yōu)劣、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的高低，除粗蛋白指標(biāo)外，小肽含量也是業(yè)內(nèi)人士普遍關(guān)注的重要指標(biāo)，肽含量與酸溶蛋白質(zhì)含量是正相關(guān)，所以在發(fā)酵豆粕中可使用酸溶蛋白質(zhì)含量評(píng)價(jià)發(fā)酵豆粕品質(zhì)，既可以反映豆粕中抗原蛋白和其它抗?fàn)I養(yǎng)因子蛋白被水解的程度，同時(shí)又可一定程度上反映肽含量。

具體的說(shuō)本發(fā)明的技術(shù)方案相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)具有如下優(yōu)異的效果：

發(fā)酵工藝簡(jiǎn)單、有效的縮短了厭氧發(fā)酵的時(shí)間，從而更加經(jīng)濟(jì)、高效的獲得了發(fā)酵產(chǎn)品。此外，通過(guò)本發(fā)明發(fā)酵方法的到的動(dòng)物飼料也具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，特別適用于幼小動(dòng)物的飼養(yǎng)。

實(shí)施例

以下本發(fā)明具體的實(shí)施例，能夠?qū)Ρ景l(fā)明進(jìn)行更為詳細(xì)的說(shuō)明，但本發(fā)明不應(yīng)受到以下具體實(shí)施例的限制。

發(fā)酵豆粕品質(zhì)的優(yōu)劣、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的高低，除粗蛋白指標(biāo)外，小肽含量也是業(yè)內(nèi)人士普遍關(guān)注的重要指標(biāo)，肽含量與酸溶蛋白質(zhì)含量是正相關(guān)，所以 在發(fā)酵豆粕中可使用酸溶蛋白質(zhì)含量評(píng)價(jià)發(fā)酵豆粕品質(zhì)，既可以反映豆粕中抗原蛋白和其它抗?fàn)I養(yǎng)因子蛋白被水解的程度，同時(shí)又可一定程度上反映肽含量。實(shí)施例中用到的方法和試劑，除非另有說(shuō)明，否則為本領(lǐng)域常規(guī)的方法和試劑。

實(shí)施例1

不同添加量的正己烷對(duì)發(fā)酵豆粕的影響

取50g商品豆粕放于自封袋中，按照500u/g豆粕添加蛋白酶，混合均勻，加入一定量的正己烷，混合均勻后加水23g，再次混合均勻，將混合好的樣品放于40℃恒溫培養(yǎng)中培養(yǎng)48h后，于65℃烘箱中烘6h后，粉碎過(guò)60目篩，進(jìn)行酸溶蛋白的檢測(cè)。其中酸溶蛋白含量檢測(cè)采用三氯乙酸(tca)法(gb/t22492-2008)。

表1實(shí)施例1試驗(yàn)結(jié)果

通過(guò)表1，可以看出，使用微量的正己烷參與發(fā)酵過(guò)程，能夠在更短的時(shí)間內(nèi)，即48小時(shí)，使得發(fā)酵產(chǎn)品中小肽含量超過(guò)與傳統(tǒng)方法(即正己烷用量為0‰的情況)經(jīng)48小時(shí)發(fā)酵后小肽含量的水平。印證了微量的正己烷的使用提高了厭氧發(fā)酵的效率。

此外，隨著正己烷在一定范圍內(nèi)用量的增加，在48小時(shí)內(nèi)，其小肽含量出現(xiàn)峰值，如正己烷含量為豆粕的0.2‰時(shí)，經(jīng)48小時(shí)發(fā)酵，小肽含量出現(xiàn)峰 值為8.69％。

實(shí)施例2

發(fā)酵時(shí)間對(duì)發(fā)酵豆粕品質(zhì)的影響

取50g商品豆粕放于自封袋中，按照500u/g豆粕添加蛋白酶，混合均勻，加入豆粕重量0‰或0.2‰的正己烷，混合均勻后加水23g，再次混合均勻，將混合好的樣品放于40℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h、72h后，于65℃烘箱中烘6h后，粉碎過(guò)60目篩，進(jìn)行酸溶蛋白的檢測(cè)。其中酸溶蛋白含量檢測(cè)采用三氯乙酸(tca)法(gb/t22492-2008)。

表2實(shí)施例2試驗(yàn)結(jié)果

根據(jù)表2所得到的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，可以看出，當(dāng)采用0.2‰的正己烷參與發(fā)酵反應(yīng)時(shí)，除了在發(fā)酵時(shí)間48h時(shí)發(fā)酵效果已經(jīng)超過(guò)傳統(tǒng)發(fā)酵方式48h的發(fā)酵效果外，其48h小時(shí)的發(fā)酵效果亦接近于傳統(tǒng)發(fā)酵方式72h的發(fā)酵效果；且72h的發(fā)酵效果已經(jīng)明顯超過(guò)傳統(tǒng)發(fā)酵方式72h的發(fā)酵效果。

實(shí)施例3

不同處理方式對(duì)發(fā)酵豆粕品質(zhì)的影響

取50g商品豆粕于自封袋中，按照500u/g豆粕添加蛋白酶混合均勻后，加水23g，第二次混合均勻后封口，此樣品為空白樣；或取50g商品豆粕于自封袋中，按照重量比加入0.2‰的正己烷，混合均勻，混合物后放于60℃烘箱烘10min或不進(jìn)行此步驟(對(duì)應(yīng)下表3中的“不烘”)，而后按照500u/g豆粕添加蛋白酶混合均勻，加水23g混合均勻，將混合好的樣品放于40℃恒溫培養(yǎng) 中培養(yǎng)24h后于65℃烘箱中烘6h后，粉碎過(guò)60目篩，進(jìn)行酸溶蛋白的檢測(cè)。其中酸溶蛋白含量檢測(cè)采用三氯乙酸(tca)法(gb/t22492-2008)。

表3實(shí)施例3試驗(yàn)結(jié)果

通過(guò)表3中數(shù)據(jù)可以看出，總體上，在分步混合發(fā)酵原料時(shí)，實(shí)施例3中使用正己烷時(shí)的發(fā)酵效果好于不使用正己烷時(shí)的發(fā)酵效果。

此外，將實(shí)施例3與實(shí)施例1和2進(jìn)行比較，可以看出，實(shí)施例3中(先混合豆粕和正己烷，再加入酶)的混合方式與實(shí)施例1和2中(先混合豆粕和酶，再加入正己烷)的混合方式相比，在48h的發(fā)酵時(shí)間內(nèi)，實(shí)施例1和2的發(fā)酵效果更優(yōu)良。

產(chǎn)業(yè)上的可利用性

本發(fā)明的厭氧發(fā)酵方法，可以在工業(yè)生產(chǎn)中進(jìn)行實(shí)施，具有工業(yè)實(shí)用性。