本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及的是一種從香柚籽中提取檸檬苦素的工藝。

背景技術(shù)：

柚子，味道酸甜，略帶苦味，含有豐富的VC及大量其他營養(yǎng)素，是醫(yī)學(xué)界公認(rèn)的食療水果。江永香柚，明代引種，栽種面積大、產(chǎn)量高，國家農(nóng)業(yè)部更將永州江永縣命名為“中國香柚之鄉(xiāng)”。檸檬苦素是從蕓香科植物柑枝葉、柚子類果核中提取的結(jié)晶體物質(zhì)，其具有多種生理功能，除用作藥用外，檸檬苦素還可以作為保健品和食品添加劑廣泛應(yīng)用于保健品和食品加工工業(yè)，以及作為動(dòng)物飼料添加劑應(yīng)用于畜養(yǎng)行業(yè)。目前，國內(nèi)外對(duì)柚子的研究主要集中于柚子果肉和柚子皮的開發(fā)，對(duì)柚子籽中檸檬苦素的研究未見報(bào)道。大量柚子籽在工業(yè)生產(chǎn)中被丟棄，不但造成浪費(fèi)，而且污染環(huán)境。本文通過對(duì)永州江永縣香柚籽中檸檬苦素提取及分離純化工藝的研究，可提高柚子的綜合利用價(jià)值、增加柚子的附加值。

檸檬苦素類化合物(Limonoids)是一類高度氧化的四環(huán)三菇類次生代謝產(chǎn)物,主要存在于蕓香科(Rutaceae)和楝科(Meliaceae)的多種植物組織中,這些植物有蕓香科的臍橙、酸橘、香橙、八朔柑、柚、枸椽等, 楝科植物楝樹、大葉桃花心木、川楝等,迄今己從這些植物中分離大約300多種檸檬苦素類化合物。蕓香科柑橘屬植物是檸檬苦素類化合物的主要來源,以檸檬苦素(Lirnonin)和諾米林（Nomilin)含量為最多,它們也是引起柑橘汁苦味的主要原因之一。由于這類化合物具有抗癌、抑菌以及高效除蟲等諸多生物學(xué)活性,越來越受到學(xué)者們的重視。目前,檸檬苦素類化合物高效提取!分離純化和鑒定體系的建立,單體的藥理研究己經(jīng)成為研究的熱點(diǎn)。

檸檬苦素(limonin) 即黃柏內(nèi)酯，又稱吳茱萸苦素、白蘚內(nèi)酯，是一種三萜類植物次生代謝產(chǎn)物，主要存在于蕓香科和楝科植物中?？茖偈|香科的柚子果實(shí)中含有檸檬苦素，以柚籽中含量最大。檸檬苦素具有抗癌、鎮(zhèn)痛、除蟲和殺蟲、調(diào)節(jié)體內(nèi)膽固醇水平，防止動(dòng)脈粥樣化等功效。因此分離純化檸檬苦素引起了生化科研工作者的重視，文獻(xiàn)中已有相關(guān)分離純化檸檬苦素工藝的報(bào)道。

中國專利CN1279242A 中提供了一種從蕓香科果實(shí)中提取檸檬苦素的工藝。該工藝先將蕓香科果核烘干粉碎，再用石油醚徹底脫脂三次，然后用丙酮抽提檸檬苦素，提取液蒸發(fā)濃縮至干后，用二氯甲烷和異丙醇的混合液溶解濃縮物，過濾后，置于低溫下，進(jìn)行結(jié)晶，產(chǎn)品用二氯甲烷和異丙醇混合液重結(jié)晶兩次，得到檸檬苦素產(chǎn)品。該工藝在脫脂過程中，需消耗大量溶劑、電能，成本高，操作繁瑣且工藝不易放大。

施英等應(yīng)用大孔吸附樹脂對(duì)檸檬苦素類似物進(jìn)行了分離純化( 施英，徐玉娟，吳娛明等. 桔核中檸檬苦素類物質(zhì)純化工藝的研究[J]. 廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2006，11 ：70～72)。

該工藝用桔核提取的濃縮水溶液，經(jīng)大孔吸附樹脂吸附分離，用乙醇水溶液洗滌，收集洗滌液后，冷凍干燥，得到檸檬苦素類似物。該技術(shù)能夠?qū)幟士嗨仡愃莆锓蛛x出來，但含量不高，且不能分離出檸檬苦素單體。

綜上所述，現(xiàn)有技術(shù)工藝復(fù)雜，成本高，多為實(shí)驗(yàn)室采用，不能大規(guī)模生產(chǎn)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是：提供一種簡單實(shí)用、產(chǎn)品純度高，成本低，適于進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn)檸檬苦素制品的工藝。

為達(dá)到上述目的，采用的技術(shù)方案是：

一種從香柚籽中提取檸檬苦素的工藝，其特征在于，包括下述步驟：

(1) 柚籽預(yù)處理：柚籽經(jīng)水洗滌、干燥后，粉碎至20～40 目；

(2) 抽提：所述步驟(1) 制得的柚籽粉末料，以60％～ 80％乙醇水溶液作為溶劑， 65℃～75℃熱回流抽提1.5h～2.5h，收集抽提液；

(3) 純化：所述步驟(2) 抽提液稀釋至乙醇濃度為40％～ 60％，pH 為3.0～5.0，以非極性大孔吸附樹脂吸附14-20h，以30％～ 50％乙醇水溶液洗滌，洗滌液棄去；再以60％～80％乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液；

(4) 濃縮、溶解：所述步驟(3)洗脫液減壓濃縮至干，用二氯甲烷溶解后過濾；

(5) 結(jié)晶：所述步驟(4) 得到的二氯甲烷過濾液中，加入2 倍體積異丙醇，冷卻至4℃，緩慢攪拌結(jié)晶；

(6) 過濾和干操：所述步驟(5) 得到晶體物過濾，50℃～ 70℃真空干燥。

步驟(2) 中所述柚籽粉與乙醇溶液的料液比（g /ml） 為1 ∶25-30，連續(xù)抽提2～3 次。

步驟(3)中所述非極性大孔吸附樹脂為AB-8 型。

本發(fā)明的有益效果是：利用熱回流提取、吸附樹脂分離雜質(zhì)等過程，從柚籽中提出了純度大于90％的檸檬苦素。工藝簡單，洗滌劑可回收循環(huán)利用，成本低，適合大規(guī)模生產(chǎn)應(yīng)用。

具體實(shí)施方式

以下通過對(duì)本發(fā)明具體實(shí)施方式的描述說明但不限制本發(fā)明。

實(shí)施例1

將經(jīng)水洗滌后的柚籽，置于烘干箱中65℃烘干，粉碎至20 目得粉料；稱量柚籽粉料60 克，用濾紙包裹后，置于索氏提取儀中，用60％乙醇水溶液1800ml 在65℃溫度下，連續(xù)抽提3 次，收集抽提液；將抽提液稀釋至乙醇濃度為40％，提取液pH ＝ 3.0，加入50ml AB-8樹脂慢速攪拌吸附20h；先用30％乙醇水溶液200ml 洗滌，洗滌液棄去，再用60％乙醇水溶液300ml 洗脫，收集洗脫液；洗脫液減壓蒸餾(0.8bar，80℃ )，濃縮至干，用20ml 的二氯甲烷溶解，過濾后，加入40ml 的異丙醇，置于冰箱4℃中，緩慢攪拌結(jié)晶；將結(jié)晶液過濾，得到無色晶體，60℃真空干燥，得純度92.6％的檸檬苦素成品。

實(shí)施例2

將經(jīng)水洗滌后的柚籽，置于烘干箱中65℃烘干，粉碎至40 目得粉料；稱量柚籽粉料60 克，用濾紙包裹后，置于索氏提取儀中，用80％乙醇水溶液1500ml 在75℃溫度下，連續(xù)抽提2 次，收集抽提液；將抽提液稀釋至乙醇濃度為60％，提取液pH ＝5.0，加入50ml AB-8樹脂慢速攪拌吸附14h；先用50％乙醇水溶液200ml 洗滌，洗滌液棄去，再用80％乙醇水溶液300ml 洗脫，收集洗脫液；洗脫液減壓蒸餾(0.8bar，80℃ )，濃縮至干，用20ml 的二氯甲烷溶解，過濾后，加入40ml 的異丙醇，置于冰箱4℃中，緩慢攪拌結(jié)晶；將結(jié)晶液過濾，得到無色晶體，60℃真空干燥，得純度92.8％的檸檬苦素成品。

實(shí)施例3

將經(jīng)水洗滌后的柚籽，置于烘干箱中65℃烘干，粉碎至30 目得粉料；稱量柚籽粉料60 克，用濾紙包裹后，置于索氏提取儀中，用70％乙醇水溶液1650ml 在70℃溫度下，連續(xù)抽提2 次，收集抽提液；將抽提液稀釋至乙醇濃度為40％，提取液pH ＝4.0，加入50ml AB-8樹脂慢速攪拌吸附17h；先用40％乙醇水溶液200ml 洗滌，洗滌液棄去，再用70％乙醇水溶液300ml 洗脫，收集洗脫液；洗脫液減壓蒸餾(0.8bar，80℃ )，濃縮至干，用20ml 的二氯甲烷溶解，過濾后，加入40ml 的異丙醇，置于冰箱4℃中，緩慢攪拌結(jié)晶；將結(jié)晶液過濾，得到無色晶體，60℃真空干燥，得純度95.6％的檸檬苦素成品。