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雞蛋清溶菌酶的分離純化方法與流程

文檔序號:12056365閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種雞蛋清溶菌酶的分離純化方法,其特征在于包括以下步驟:

(1)收集新鮮雞蛋清,按蛋清與緩沖液體積比為1∶2的比例加入PH4.6的檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液,均勻攪拌,冷處靜置過夜;

(2)8000rpm離心去除沉淀,收集上清液A,用0.5M氫氧化鈉溶液將pH調(diào)到6;

(3)將CM-瓊脂糖離子交換介質(zhì)裝柱,預(yù)處理成鈉型后用pH 6的檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液平衡;

(4)按照上樣液和介質(zhì)體積比為3∶1的比例上柱,用去離子水清洗未交換蛋白,最后用1M氯化鈉溶液洗脫2個柱體積,收集洗脫液;

(5)用1M鹽酸將洗脫液調(diào)至pH 5.5,均勻攪拌1小時,8000rpm離心去除沉淀,收集上清液B;

(6)向所得上清液B中加入聚乙二醇2000,至聚乙二醇的質(zhì)量濃度達(dá)20~25%,再攪拌1小時,8000rpm離心,收集上清液C;

(7)向所得上清液C中加入飽和硫酸鈉溶液,至硫酸鈉的質(zhì)量濃度達(dá)到15~20%,混勻后于6000rpm離心,收集上清液D;

(8)對所得上清液D,以膜截留分子量為3000~5000Da的超濾膜進(jìn)行超濾,對超濾所得溶液進(jìn)行真空冷凍干燥,得到白色粉末,即為溶菌酶。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雞蛋清溶菌酶的分離純化方法,其特征在于:所述步驟(6)中的聚乙二醇的質(zhì)量濃度達(dá)25%,步驟(7)中的硫酸鈉的質(zhì)量濃度達(dá)到15%。

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