1.一種高質(zhì)量咖啡葉片基因組DNA的高效提取方法，其特征在于，包括以下步驟：
①取咖啡樹枝尖新鮮嫩葉2～3片(約0.2～0.3g)，放入2mL尖底離心管中，蓋上蓋子，將離心管浸入液氮1～3min后取出用鐵絲搗碎。立即加入0.1g PVP粉、0.5mL氯仿(AR)和1mL改良Extraction buffer溶液的混合液，再添加20μL β-巰基乙醇(2％)后于渦旋振蕩儀上搖勻；如果不溶，65℃水浴1h充分溶解。Extraction buffer溶液配方：350mM山梨醇，100mM Tris-HCl，100mM EDTA pH8.0，0.5％Na2S2O3；
②將溶化后的糊狀物在離心機(jī)上4℃、5000rpm離心10min，吸棄上層液相和下層氯仿。在每管沉淀物中加入600μL Lysis buffer溶液和12μL β-巰基乙醇(2％)，混勻后放置65℃水浴鍋中溫浴30min。Lysis buffer溶液配方：0.2M Tris-HCl pH8，0.05M EDTA，2M NaCl，CTAB 2％；
③添加300μL酚及300μL的氯仿：異戊醇混合液，氯仿：異戊醇體積比(v/v)是24∶1，輕輕上下顛倒混勻，形成乳狀液后放入離心機(jī)4℃、12 000rpm離心15min；
④回收上層液相，重復(fù)第③步再抽提一次；
⑤將上層液相移至一個新的1.5mL尖底離心管，加入60μL 3M NaAc、600μL預(yù)冷的無水乙醇(使用前-20℃冰箱保存)，輕輕上下顛倒混勻后放入離心機(jī)4℃、12 000rpm離心15min；
⑥吸棄液相，用1mL預(yù)冷的無水乙醇洗滌沉淀物2次，棄乙醇；將管倒扣于濾紙上，使乙醇流盡，風(fēng)干或自然涼干。加入50μL TE緩沖液或ddH2O溶解沉淀物。TE緩沖液配方：10mMTris-HCl pH8.0，1mM EDTA pH8.0；
⑦電泳檢測DNA的完整性，A260/280測定DNA濃度和純度。