本發(fā)明一般涉及免疫學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。更具體地，本發(fā)明涉及單克隆抗體和其用途。
背景技術(shù)：
：：在全世界，癌癥是死亡的重要原因，其中肺癌、乳腺癌、結(jié)腸直腸癌、胃癌和前列腺癌引起大多數(shù)的死亡。前列腺癌是男性中最通常發(fā)生的腫瘤并且在死亡率方面僅次于肺癌。如果前列腺癌在早期被診斷，則利用外科手術(shù)和/或放射療法進行治療在許多患者中是成功的。但是，許多患有重病的患者和所有前列腺癌患者的相當(dāng)大比例在局部療法之后最終發(fā)展為轉(zhuǎn)移性疾病?？贵w(abs)在靶向療法和診斷的領(lǐng)域中是主要工具，這是由于在與其同族抗原相互作用之后它們的結(jié)合特異性/親和性以及潛在的效應(yīng)器性能。越來越多的abs已經(jīng)被批準(zhǔn)用于醫(yī)療用途并且許多正處于臨床評價中?？贵w對于鑒定個體中疾病比如前列腺癌的誘因和/或從而診斷這樣的疾病可以是有效的診斷工具(diagnostics)。另外，一些抗體的治療用途已經(jīng)被顯示為降低腫瘤大小并且延長受折磨患者的存活。walker等人的美國專利號5,622,836公開了命名為blca-38(blca-“膀胱癌”)的抗體。該文件教導(dǎo)了blca-38是對于由膀胱癌細胞表達的未知抗原特異的單克隆抗體。blca-38也被教導(dǎo)為對人卵巢和結(jié)腸癌細胞系，以及一些黑素瘤細胞系顯示特異性，但不對淋巴(t淋巴或b淋巴)和白血病細胞系顯示特異性。隨后，russell等人(2004)(russell等,“cytotoxicpropertiesofimmunoconjugatescontainingmelittin-likepeptide101againstprostatecancer:invitro&invivostudies”.cancerimmunolimmunother2004:53(5):411-421)公布了一項研究，在該研究中blca-38被用于靶向細胞毒性肽至前列腺癌細胞。作者指出blca-38是針對人膀胱癌細胞系ucru-bl-17cl提出的鼠科單克隆抗體。russell等人在2004年的進一步公布(russell等,“immunohistochemicalcharacterizationofthemonoclonalantibody,blca38,forthedetectionofprostatecancer”.cancerimmunolimmunother2004:53:995-1004)也教導(dǎo)了blca-38是針對人膀胱細胞系提出的鼠科單克隆抗體，其能夠結(jié)合至膀胱癌細胞、前列腺癌細胞和女陰表皮樣細胞，但是不結(jié)合至乳腺癌細胞。文章指出blca-38對于難以表征或鑒定的大小為大約30kda的抗原是特異性的。carter等人(2004)(carter等,“biodistributionsofintactmonoclonalantibodiesandfragmentsofblca38,anewprostatecancerdirectedantibody”.cancerimmunolimmunother2004:53:533-542)分析了使用blca-38將治療劑靶向至前列腺癌細胞的定時(timing)和劑量，還指出其是在細胞表面上和細胞質(zhì)中表達的大約30kda的抗原的鼠科單克隆抗體。作者陳述，抗原的性質(zhì)是難以捉摸的，并且指出其在膀胱和前列腺癌細胞上表達。khatri等人在2010年公布的文章(khatri等,“promiseofblca38asatargetingantibodyfortissue-specificgenedeliverytoprostatecancer”.austral-asianj.cancer2010:9(3):195-203)重申了blca-38是對前列腺癌細胞特異的鼠科單克隆抗體。作者揭示，雖然blca-38在結(jié)合至其抗原之后不被內(nèi)化，但是與病毒的綴合促進了抗體的內(nèi)化，導(dǎo)致報告基因的表達增加。盡管抗體作為診斷和治療劑提供了希望，但是對于診斷和/或治療各種形式的癌癥包括前列腺癌的更有效的藥劑的需要繼續(xù)存在。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明人已經(jīng)出人意料地鑒定，在前述現(xiàn)有技術(shù)中提及和使用的blca-38抗體不是如所示的離散型(discrete)單克隆抗體，而是混合群體(population)中兩種不同的單克隆抗體的組合。本發(fā)明人已經(jīng)確定，用于生成blca-38抗體的雜交瘤——在美國組織型培養(yǎng)物保藏所(americantissuetypeculturecollection)中在登錄號hb11785下保藏的代表性樣本——是雜交瘤細胞的混合群體，其產(chǎn)生至少兩種離散型抗體種類。這些抗體種類中僅一種能夠結(jié)合至在一些形式的癌細胞上存在的相關(guān)靶抗原，而第二種類不能。該意料之外的確定——在現(xiàn)有技術(shù)中被提及的blca-38代表混合的雜交瘤/抗體群體——促進了能夠產(chǎn)生單一群體的單克隆抗體的單克隆雜交瘤的生成，該單克隆抗體對于各種形式的癌細胞上的靶抗原具有結(jié)合特異性。除了規(guī)避無效抗體的不必要的產(chǎn)生和應(yīng)用，在本說明書的實施例中提供的數(shù)據(jù)表明，當(dāng)應(yīng)用相等量的抗體時，與現(xiàn)有技術(shù)的混合群體相比，根據(jù)本發(fā)明的單克隆雜交瘤/單克隆抗體的使用可以允許生成更強的信號。在第一實施方式中，本發(fā)明提供了包括重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中：(a)重鏈可變區(qū)包括：互補決定區(qū)1(cdr1)，其包括由seqidno:3的50-54位限定的氨基酸序列或由其組成；互補決定區(qū)2(cdr2)，其包括由seqidno:3的69-85位限定的氨基酸序列或由其組成；互補決定區(qū)3(cdr3)，其包括由seqidno:3的118-126位限定的氨基酸序列或由其組成；和(b)輕鏈可變區(qū)包括：互補決定區(qū)1(cdr1)，其包括由seqidno:4的44-54位限定的氨基酸序列或由其組成；互補決定區(qū)2(cdr2)，其包括由seqidno:4的70-76位限定的氨基酸序列或由其組成；互補決定區(qū)3(cdr3)，其包括由seqidno:4的109-117位限定的氨基酸序列或由其組成。分離的抗體或其抗原結(jié)合片段可以進一步包括：(a)由選自下列的任何一個或多個的序列限定的一個或多個重鏈可變區(qū)fr(構(gòu)架區(qū))：seqidno:3的殘基20-49、seqidno:3的殘基55-68、seqidno:3的殘基86-117和/或seqidno:3的殘基127-137；和/或(b)由選自下列的任何一個或多個的序列限定的一個或多個輕鏈可變區(qū)fr(構(gòu)架區(qū))：seqidno:4的殘基21-43、seqidno:4的殘基55-69、seqidno:4的殘基77-108和/或seqidno:4的殘基118-127。分離的抗體或其抗原結(jié)合片段可以進一步包括下列的任何一個或多個：(a)由seqidno:3的138-461位限定的重鏈恒定結(jié)構(gòu)域序列；(b)由seqidno:4的128-234位限定的輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域序列；(c)鉸鏈區(qū)。分離的抗體或其抗原結(jié)合片段對磷脂酰肌醇聚糖-1硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(gpc-1)中存在的表位可以具有結(jié)合特異性?？贵w可以是igg同種型抗體?？贵w可以是igg1同種型抗體。抗體或抗原結(jié)合片段可以包括可檢測的標(biāo)記。可檢測的標(biāo)記可以是熒光標(biāo)記、放射性標(biāo)記、生物素或抗生物素蛋白中的任何一種或多種?？贵w可以是單克隆抗體、人源化抗體、嵌合抗體、多聚體抗體(multimericantibody)和/或合成抗體中的任何一種或多種?？贵w可以是雙特異性抗體、avibody、雙抗體、三抗體(tribody)、四抗體(tetrabody)、納米抗體、單結(jié)構(gòu)域抗體、vhh結(jié)構(gòu)域、人抗體、完全人源化抗體、部分人源化抗體、anticalin、adnectin或affibody。抗體可以是包括重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)的嵌合抗體，其中：(a)重鏈可變區(qū)包括：互補決定區(qū)1(cdr1)，其包括由seqidno:9的50-54位限定的氨基酸序列或由其組成；互補決定區(qū)2(cdr2)，其包括由seqidno:9的69-85位限定的氨基酸序列或由其組成；互補決定區(qū)3(cdr3)，其包括由seqidno:9的118-126位限定的氨基酸序列或由其組成；和(b)輕鏈可變區(qū)包括：互補決定區(qū)1(cdr1)，其包括由seqidno:10的44-54位限定的氨基酸序列或由其組成；互補決定區(qū)2(cdr2)，其包括由seqidno:10的70-76位限定的氨基酸序列或由其組成；互補決定區(qū)3(cdr3)，其包括由seqidno:10的109-117位限定的氨基酸序列或由其組成?？贵w可以是包括重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)的嵌合抗體，其中：(a)重鏈可變區(qū)包括：互補決定區(qū)1(cdr1)，其包括與由seqidno:9的50-54位限定的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同源性的氨基酸序列或由其組成；互補決定區(qū)2(cdr2)，其包括與由seqidno:9的69-85位限定的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同源性的氨基酸序列或由其組成；互補決定區(qū)3(cdr3)，其包括與由seqidno:9的118-126位限定的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同源性的氨基酸序列或由其組成；和(b)輕鏈可變區(qū)包括：互補決定區(qū)1(cdr1)，其包括與由seqidno:10的44-54位限定的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同源性的氨基酸序列或由其組成；互補決定區(qū)2(cdr2)，其包括與由seqidno:10的70-76位限定的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同源性的氨基酸序列或由其組成；互補決定區(qū)3(cdr3)，其包括與由seqidno:10的109-117位限定的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同源性的氨基酸序列或由其組成?？贵w可以是嵌合抗體，其包括：(a)重鏈，其包括在seqidno:9的殘基20-467中限定的氨基酸序列或由其組成；和(b)輕鏈，其包括在seqidno:10的殘基21-234中限定的氨基酸序列或由其組成?？贵w可以是嵌合抗體，其包括：(a)重鏈，其包括與在seqidno:9的殘基20-467中限定的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同源性的氨基酸序列或由其組成；和(b)輕鏈，其包括與在seqidno:10的殘基21-234中限定的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同源性的氨基酸序列或由其組成。嵌合抗體可以包括可檢測的標(biāo)記?？蓹z測的標(biāo)記可以是熒光標(biāo)記、放射性標(biāo)記、生物素或抗生物素蛋白中的任何一種或多種?？乖Y(jié)合片段可以是下列的任何一種或多種：單鏈可變片段(scfv)、可變結(jié)構(gòu)域(fv)片段、片段抗原結(jié)合(fab)片段、f(ab)2片段、肽、或包含表位結(jié)合區(qū)的蛋白水解片段?？贵w可以包括由seqidno:3的20-461位限定的重鏈序列和由seqidno:4的21-234位限定的輕鏈序列或由二者組成。在第二實施方式中，本發(fā)明提供了在第一實施方式中限定的抗體的分離的抗原結(jié)合變體或衍生物，其中變體或衍生物和在第一實施方式中限定的抗體能夠特異性地結(jié)合至相同抗原。變體或衍生物的任何一個或多個重鏈cdr1、cdr2和/或cdr3氨基酸序列，和/或變體或衍生物的任何一個或多個輕鏈cdr1、cdr2和/或cdr3氨基酸序列與在第一實施方式中限定的抗體中存在的氨基酸的在其它方面對應(yīng)的cdr序列相比，可以包括一個、兩個、三個、四個或五個氨基酸缺失、插入和/或置換。分離的變體或衍生物可以包括重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，其中：(a)重鏈可變區(qū)包括：互補決定區(qū)1(cdr1)，其包括與由seqidno:3的50-54位限定的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同源性的氨基酸序列或由其組成；互補決定區(qū)2(cdr2)，其包括與由seqidno:3的69-85位限定的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同源性的氨基酸序列或由其組成；互補決定區(qū)3(cdr3)，其包括與由seqidno:3的118-126位限定的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同源性的氨基酸序列或由其組成；和(b)輕鏈可變區(qū)包括：互補決定區(qū)1(cdr1)，其包括與由seqidno:4的44-54位限定的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同源性的氨基酸序列或由其組成；互補決定區(qū)2(cdr2)，其包括與由seqidno:4的70-76位限定的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同源性的氨基酸序列或由其組成；互補決定區(qū)3(cdr3)，其包括與由seqidno:4的109-117位限定的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同源性的氨基酸序列或由其組成。變體或衍生物可以包括：(a)至少一個重鏈可變區(qū)fr(構(gòu)架區(qū))，其選自包括如下氨基酸序列或由如下氨基酸序列組成的重鏈可變區(qū)fr：其與seqidno:3的殘基20-49具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同源性，與seqidno:3的殘基55-68具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同源性，與seqidno:3的殘基86-117具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同源性，與seqidno:3的殘基127-137具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同源性；和/或(b)至少一個輕鏈可變區(qū)fr(構(gòu)架區(qū))，其選自包括如下氨基酸序列或由如下氨基酸序列組成的輕鏈可變區(qū)fr：其與seqidno:4的殘基21-43具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同源性，與seqidno:4的殘基55-69具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同源性，與seqidno:4的殘基77-108具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同源性，和/或與seqidno:4的殘基118-127具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同源性。變體或衍生物可以包括下列的任何一種或多種：(a)重鏈恒定結(jié)構(gòu)域序列，其包括與seqidno:3的138-461位限定的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％同源性的氨基酸序列或由其組成；(b)輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域序列，其包括與seqidno:4的128-234位限定的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％同源性的氨基酸序列或由其組成；(c)鉸鏈區(qū)。變體或衍生物對磷脂酰肌醇聚糖-1硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(gpc-1)中存在的表位可以具有結(jié)合特異性。變體或衍生物可以是同種型抗體。分離的抗體變體或衍生物可以是igg1同種型抗體。變體或衍生物可以包括可檢測的標(biāo)記?？蓹z測的標(biāo)記可以是熒光標(biāo)記、放射性標(biāo)記、生物素或抗生物素蛋白中的任何一種或多種。變體或衍生物可以是單克隆抗體、人源化抗體、嵌合抗體、多聚體抗體和/或合成抗體中的任何一種或多種。在第三實施方式中，本發(fā)明提供了雜交瘤細胞，其能夠產(chǎn)生在第一實施方式中限定的抗體或其抗原結(jié)合片段，或在第二實施方式中限定的抗原結(jié)合變體或衍生物。雜交瘤細胞可以是在2014年8月22日在cellbankaustralia保藏并分配登錄號cba20140026的那些。在第四實施方式中，本發(fā)明提供了包括單一種類的雜交瘤細胞的細胞培養(yǎng)物(cellculture)，該雜交瘤細胞能夠產(chǎn)生在第一實施方式中限定的單一種類的抗體或其抗原結(jié)合片段，或在第二實施方式中限定的單一種類的抗原結(jié)合變體或衍生物。雜交瘤細胞可以在cellbankaustralia中在登錄號cba20140026下保藏。在第五實施方式中，本發(fā)明提供了包括多個種類的雜交瘤細胞的細胞培養(yǎng)物，其中：(a)該細胞培養(yǎng)物包括在第三實施方式中限定的雜交瘤細胞；和(b)該細胞培養(yǎng)物不包括產(chǎn)生包括下述輕鏈可變區(qū)的抗體的雜交瘤細胞，該輕鏈可變區(qū)包括下列的任何一種或多種：互補決定區(qū)1(cdr1)，其包括由seqidno:6的48-58位限定的氨基酸或由其組成；互補決定區(qū)2(cdr2)，其包括由seqidno:6的74-80位限定的氨基酸或由其組成；互補決定區(qū)3(cdr3)，其包括由seqidno:6的113-121位限定的氨基酸或由其組成。細胞培養(yǎng)物可以不包括產(chǎn)生下述抗體的雜交瘤細胞，該抗體包括由選自下列的任何一個或多個的序列限定的一個或多個輕鏈可變區(qū)fr(構(gòu)架區(qū))：seqidno:6的殘基25-47、seqidno:6的殘基59-73、seqidno:6的殘基81-112、seqidno:6的殘基122-131。細胞培養(yǎng)物中的多個種類的雜交瘤細胞可以每個能夠產(chǎn)生在第一實施方式中限定的單一種類的抗體或其抗原結(jié)合片段，或在第二實施方式中限定的單一種類的抗原結(jié)合變體或衍生物。在第六實施方式中，本發(fā)明提供了如此組合物：其包括在第一實施方式中限定的單一種類的抗體或其抗原結(jié)合片段，或在第二實施方式中限定的單一種類的抗原結(jié)合變體或衍生物。在第七實施方式中，本發(fā)明提供了包括不同抗體種類或其抗原結(jié)合片段的混合物的組合物，其中：(a)該組合物包括在第一實施方式中限定的單一種類的抗體或其抗原結(jié)合片段，或在第二實施方式中限定的單一種類的抗原結(jié)合變體或衍生物；和(b)該組合物不包括含有下述輕鏈可變區(qū)的抗體，該輕鏈可變區(qū)包括下列的任何一種或多種：互補決定區(qū)1(cdr1)，其包括由seqidno:6的48-58位限定的氨基酸或由其組成；互補決定區(qū)2(cdr2)，其包括由seqidno:6的74-80位限定的氨基酸或由其組成；互補決定區(qū)3(cdr3)，其包括由seqidno:6的113-121位限定的氨基酸或由其組成。不同抗體種類或其抗原結(jié)合片段的混合物可以每種對磷脂酰肌醇聚糖-1硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(gpc-1)中存在的表位具有結(jié)合特異性。在第八實施方式中，本發(fā)明提供了核酸分子，其編碼在第一實施方式中限定的抗體或其抗原結(jié)合片段，或在第二實施方式中限定的抗原結(jié)合變體或衍生物。核酸分子可以包括在seqidno:1中限定的序列或由其組成。核酸分子可以包括在seqidno:2中限定的序列或由其組成?？贵w或其抗原結(jié)合片段，或抗原結(jié)合變體或衍生物可以每種對磷脂酰肌醇聚糖-1硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(gpc-1)中存在的表位具有結(jié)合特異性。在第九實施方式中，本發(fā)明提供了包括在第八實施方式中限定的核酸分子的載體。在第十實施方式中，本發(fā)明提供了包括在第九實施方式中限定的載體的宿主細胞。在第十一實施方式中，本發(fā)明提供了用于產(chǎn)生在第一實施方式中限定的抗體或其抗原結(jié)合片段，或在第二實施方式中限定的抗原結(jié)合變體或衍生物的方法(process)，其中該方法包括在培養(yǎng)基中在適合的條件下培養(yǎng)在第三實施方式中限定的交瘤細胞，或者在第十實施方式中限定的宿主細胞，從而產(chǎn)生抗體或其抗原結(jié)合片段，或抗原結(jié)合變體或衍生物。該方法可以進一步包括從培養(yǎng)基中分離抗體或其抗原結(jié)合片段，或抗原結(jié)合變體或衍生物?？贵w或其抗原結(jié)合片段，或抗原結(jié)合變體或衍生物可以每種對磷脂酰肌醇聚糖-1硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(gpc-1)中存在的表位具有結(jié)合特異性。在第十二實施方式中，本發(fā)明提供了用于產(chǎn)生在第一實施方式中限定的抗體或其抗原結(jié)合片段，或在第二實施方式中限定的抗原結(jié)合變體或衍生物的方法，其中該方法包括在適合的條件下培養(yǎng)在第四或第五實施方式中限定的細胞培養(yǎng)物，從而產(chǎn)生抗體或其抗原結(jié)合片段，或抗原結(jié)合變體或衍生物。該方法可以進一步包括從培養(yǎng)基中分離抗體或其抗原結(jié)合片段，或抗原結(jié)合變體或衍生物?？贵w或其抗原結(jié)合片段，或抗原結(jié)合變體或衍生物可以每種對磷脂酰肌醇聚糖-1硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(gpc-1)中存在的表位具有結(jié)合特異性。在第十三實施方式中，本發(fā)明提供了從在第十一或第十二實施方式中限定的方法獲得或可獲得的抗體或其抗原結(jié)合片段，或抗原結(jié)合變體或衍生物?？贵w或其抗原結(jié)合片段，或抗原結(jié)合變體或衍生物可以包括可檢測的標(biāo)記?？蓹z測的標(biāo)記可以是熒光標(biāo)記、放射性標(biāo)記、生物素或抗生物素蛋白中的任何一種或多種。在第十四實施方式中，本發(fā)明提供了用于從混合物的雜交瘤群體中獲得在第三實施方式中限定的雜交瘤細胞的方法，該方法包括從混合的雜交瘤群體中分離至少一部分雜交瘤細胞。分離可以包括克隆混合的雜交瘤群體的個別雜交瘤細胞，并確定克隆的后代能夠產(chǎn)生在第一實施方式中限定的抗體或其抗原結(jié)合片段，或在第二實施方式中限定的抗原結(jié)合變體或衍生物?；旌系脑陔s交瘤群體可以在美國組織型培養(yǎng)物保藏所(atcc)中在登錄號hb11785下保藏。在第十五實施方式中，本發(fā)明提供了包括根據(jù)本發(fā)明的如下任何一種或多種的試劑盒：抗體或其抗原結(jié)合片段、抗原結(jié)合變體或衍生物、嵌合抗體或雜交瘤細胞。雜交瘤細胞可以在cellbankaustralia中在登錄號cba20140026下保藏。試劑盒可以是分離型(fragmented)試劑盒或組合型試劑盒。該試劑盒可以進一步包括選自如下的一種或多種另外的成分：用于細胞培養(yǎng)的試劑、參考樣本、緩沖液、標(biāo)記和使用試劑盒的成分執(zhí)行分析的書面指示。在第十六實施方式中，本發(fā)明提供了包括根據(jù)本發(fā)明的如下任何一種或多種的組合物：抗體或其抗原結(jié)合片段、抗原結(jié)合變體或衍生物、嵌合抗體或雜交瘤細胞。組合物可以是藥物組合物。該藥物組合物可以進一步包括藥學(xué)上可接受的稀釋劑、賦形劑和/或運載體。在第十七實施方式中，本發(fā)明提供了用于檢測和/或定量對象中g(shù)pc-1的表達的方法，該方法包括(a)從對象中獲得細胞、組織樣本和/或體液樣本；(b)將細胞、組織樣本和/或體液樣本與根據(jù)本發(fā)明的抗體、抗體變體、抗體片段、抗體變體、抗體衍生物或嵌合抗體接觸，和(c)確定和/或定量所述抗體、抗體變體、抗體片段、抗體衍生物或嵌合抗體與對象的細胞、組織樣本和/或體液樣本的結(jié)合。在從對象獲得的細胞、組織和/或體液樣本中檢測的gpc-1表達的水平可以與對照細胞樣本或樣本群體參考的gpc-1表達水平進行比較。在一些實施方式中，與對照或參考相比對象中增加的gpc-1表達的確定可以是疾病的診斷，或者在對象中發(fā)展疾病的增加的可能性。該疾病可以是前列腺癌。用于檢測的gpc-1可以存在于細胞的表面上和/或在內(nèi)部表達。體液可以是尿、血液或其成分(例如，血清或血漿)。細胞或組織樣本可以是前列腺細胞或前列腺組織?？贵w、抗體變體、抗體片段、抗體衍生物或嵌合抗體可以通過根據(jù)本發(fā)明的雜交瘤細胞產(chǎn)生。雜交瘤細胞可以在cellbankaustralia中在登錄號cba20140026下保藏。在第十八實施方式中，本發(fā)明提供了包括單一種類的能夠特異性地結(jié)合至gpc-1的單克隆抗體、抗體變體、抗體片段、抗體衍生物或嵌合抗體的溶液，該溶液可以被應(yīng)用至可以潛在地包含gpc-1的細胞、組織樣本或體液樣本。單一種類可以通過在cellbankaustralia中在登錄號cba20140026下保藏的雜交瘤細胞產(chǎn)生。在第十九實施方式中，本發(fā)明提供了包括多個種類的抗體、抗體變體、抗體片段、抗體衍生物或嵌合抗體的溶液，該溶液可以被應(yīng)用至可以潛在地包含gpc-1的細胞、組織樣本或體液樣本，其中溶液中多個種類中的至少一個種類能夠特異性地結(jié)合至gpc-1。能夠特異性地結(jié)合至gpc-1的種類可以通過在cellbankaustralia中在登錄號cba20140026下保藏的雜交瘤細胞產(chǎn)生。包括多個種類的溶液可以不包括含有下述輕鏈可變區(qū)的抗體，該輕鏈可變區(qū)包括下列的任何一種或多種：互補決定區(qū)1(cdr1)，其包括由seqidno:6的48-58位限定的氨基酸或由其組成；互補決定區(qū)2(cdr2)，其包括由seqidno:6的74-80位限定的氨基酸或由其組成；互補決定區(qū)3(cdr3)，其包括由seqidno:6的113-121位限定的氨基酸或由其組成。本發(fā)明還涉及如下實施方式：實施方式1：分離的抗體群體，其包括：第一抗體和/或其抗原結(jié)合片段，其中該第一抗體包括：(a)重鏈可變區(qū)，其包括：互補決定區(qū)1(cdr1)，其包括由seqidno:3的50-54位限定的氨基酸序列或由其組成；互補決定區(qū)2(cdr2)，其包括由seqidno:3的69-85位限定的氨基酸序列或由其組成；互補決定區(qū)3(cdr3)，其包括由seqidno:3的118-126位限定的氨基酸序列或由其組成；和(b)輕鏈可變區(qū)，其包括：互補決定區(qū)1(cdr1)，其包括由seqidno:4的44-54位限定的氨基酸序列或由其組成；互補決定區(qū)2(cdr2)，其包括由seqidno:4的70-76位限定的氨基酸序列或由其組成；互補決定區(qū)3(cdr3)，其包括由seqidno:4的109-117位限定的氨基酸序列或由其組成；并且其中抗體群體不包括包含下述輕鏈可變區(qū)的第二抗體，該輕鏈可變區(qū)包括：互補決定區(qū)1(cdr1)，其包括由seqidno:6的48-58位限定的氨基酸序列或由其組成；互補決定區(qū)2(cdr2)，其包括由seqidno:6的74-80位限定的氨基酸序列或由其組成；互補決定區(qū)3(cdr3)，其包括由seqidno:6的113-121位限定的氨基酸序列或由其組成。實施方式2：根據(jù)實施方式1的抗體群體，其中該抗體群體不包含所述第二抗體的抗原結(jié)合片段。實施方式3：根據(jù)實施方式1或?qū)嵤┓绞?的抗體群體，其中第一抗體和/或其抗原結(jié)合片段對磷脂酰肌醇聚糖-1硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(gpc-1)中存在的表位具有結(jié)合特異性。實施方式4：根據(jù)實施方式1-3中任一個的抗體群體，其中第一抗體和/或其抗原結(jié)合片段是igg1同種型。實施方式5：根據(jù)實施方式1-4中任一個的抗體群體，其中第一抗體和/或其抗原結(jié)合片段是單克隆抗體、人源化抗體、嵌合抗體、多聚體抗體和/或合成抗體中的任何一種或多種。實施方式6：根據(jù)實施方式1-5中任一個的抗體群體，其中抗原結(jié)合片段是下列的任何一種或多種：單鏈可變片段(scfv)、可變結(jié)構(gòu)域(fv)片段、片段抗原結(jié)合(fab)片段、f(ab)2片段、肽、或包含表位結(jié)合區(qū)的蛋白水解片段。實施方式7：根據(jù)實施方式1-6中任一個的抗體群體，其中第一抗體和/或其抗原結(jié)合片段進一步包括：(a)由選自下列的任何一個或多個的序列限定的一個或多個重鏈可變區(qū)fr(構(gòu)架區(qū))：seqidno:3的殘基20-49、seqidno:3的殘基55-68、seqidno:3的殘基86-117、seqidno:3的殘基127-137；和/或(b)由選自下列的任何一個或多個的序列限定的一個或多個輕鏈可變區(qū)fr(構(gòu)架區(qū))：seqidno:4的殘基21-43、seqidno:4的殘基55-69、seqidno:4的殘基77-108、seqidno:4的殘基118-127。實施方式8：根據(jù)實施方式1-7中任一個的抗體群體，其中第一抗體和/或其抗原結(jié)合片段進一步包括下列的一個或多個：(a)由seqidno:3的138-461位限定的重鏈恒定結(jié)構(gòu)域序列；(b)由seqidno:4的128-234位限定的輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域序列；(c)鉸鏈區(qū)。實施方式9：根據(jù)實施方式1-8中任一個的抗體群體，其中第一抗體包括由seqidno:3的20-461位限定的重鏈序列和由seqidno:4的21-234位限定的輕鏈序列或由其二者組成。實施方式10：能夠產(chǎn)生根據(jù)實施方式1-9的任一個的抗體群體的雜交瘤細胞。實施方式11：一種細胞培養(yǎng)物，其包括單一種類的能夠產(chǎn)生根據(jù)實施方式1-9的任一個的抗體群體的雜交瘤細胞，其中該抗體群體包含僅一個種類的抗體和/或其抗原結(jié)合片段。實施方式12：根據(jù)實施方式9的雜交瘤細胞，或者根據(jù)實施方式10的細胞培養(yǎng)物，其中雜交瘤細胞在cellbankaustralia中在登錄號cba20140026下保藏。實施方式13：一種細胞培養(yǎng)物，其包括多個種類的雜交瘤細胞，其中：(a)該細胞培養(yǎng)物包括根據(jù)實施方式10或?qū)嵤┓绞?2的雜交瘤細胞；和(b)該細胞培養(yǎng)物不包括產(chǎn)生包括下述輕鏈可變區(qū)的抗體的雜交瘤細胞，該輕鏈可變區(qū)包括下列的任何一種或多種：互補決定區(qū)1(cdr1)，其包括由seqidno:6的48-58位限定的氨基酸或由其組成；互補決定區(qū)2(cdr2)，其包括由seqidno:6的74-80位限定的氨基酸或由其組成；互補決定區(qū)3(cdr3)，其包括由seqidno:6的113-121位限定的氨基酸或由其組成。實施方式14：根據(jù)實施方式13的細胞培養(yǎng)物，其中該細胞培養(yǎng)物不包括產(chǎn)生下述抗體的雜交瘤細胞，該抗體包括由選自下列的任何一個或多個的序列限定的一個或多個輕鏈可變區(qū)fr(構(gòu)架區(qū))：seqidno:6的殘基25-47、seqidno:6的殘基59-73、seqidno:6的殘基81-112、seqidno:6的殘基122-131。實施方式15：一種組合物，其包括根據(jù)實施方式1-9的任一個的抗體群體，其中該抗體群體僅包含一個種類的抗體和/或其抗原結(jié)合片段。實施方式16：一種組合物，其包括根據(jù)實施方式1-9的任一個的抗體群體，其中該抗體群體包含多個種類的抗體和/或其抗原結(jié)合片段。實施方式17：根據(jù)實施方式16的組合物，其中多個種類的抗體和/或其抗原結(jié)合片段每個對磷脂酰肌醇聚糖-1硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(gpc-1)中存在的表位具有結(jié)合特異性。實施方式18：一種核酸分子，其編碼根據(jù)實施方式1-9的任一個的第一抗體或其抗原結(jié)合片段的至少一個。實施方式19：根據(jù)實施方式18的核酸分子，其中該核酸分子包括在seqidno:1中限定的序列或由其組成。實施方式20：根據(jù)實施方式18或?qū)嵤┓绞?9的核酸分子，其中該核酸分子包括在seqidno:2中限定的序列或由其組成。實施方式21：一種載體，其包括根據(jù)實施方式18-20的任一個的核酸分子。實施方式22：一種宿主細胞，其包括根據(jù)實施方式21的載體。實施方式23：一種用于產(chǎn)生抗體或其抗原結(jié)合片段的方法，其中該方法包括在培養(yǎng)基中在適合的條件下培養(yǎng)根據(jù)實施方式10或?qū)嵤┓绞?2的交瘤細胞，或者根據(jù)實施方式22的宿主細胞，從而產(chǎn)生抗體或其抗原結(jié)合片段。實施方式24：一種用于產(chǎn)生抗體或其抗原結(jié)合片段的方法，其中該方法包括在適合的條件下培養(yǎng)根據(jù)實施方式11-14的任一個的細胞培養(yǎng)物，從而產(chǎn)生抗體或其抗原結(jié)合片段。實施方式25：根據(jù)實施方式23或?qū)嵤┓绞?4的方法，進一步包括從培養(yǎng)物中分離抗體或其抗原結(jié)合片段。實施方式26：從根據(jù)實施方式23-35的任一個的方法獲得或可獲得的抗體或其抗原結(jié)合片段。實施方式27：從混合的雜交瘤群體中獲得根據(jù)實施方式10或?qū)嵤┓绞?2的雜交瘤細胞的方法，該方法包括從混合的雜交瘤群體中分離雜交瘤細胞的至少一部分。實施方式28：根據(jù)實施方式27的方法，其中分離包括克隆混合的雜交瘤群體的個別雜交瘤細胞，并確定克隆的后代能夠產(chǎn)生根據(jù)實施方式1-9的任一個的抗體群體。實施方式29：根據(jù)實施方式27或?qū)嵤┓绞?8的方法，其中混合的雜交瘤群體在美國組織型培養(yǎng)物保藏所(atcc)中在登錄號hb11785下保藏。實施方式30：根據(jù)實施方式5的抗體群體，其中第一抗體和/或其抗原結(jié)合片段是嵌合的。實施方式31：根據(jù)實施方式5或?qū)嵤┓绞?0的抗體群體，其中第一抗體和/或其抗原結(jié)合片段是嵌合抗體，其包括：(a)重鏈恒定區(qū)，其包括在seqidno:9的殘基138-467中限定的氨基酸序列或由其組成；和(b)輕鏈恒定區(qū)，其包括在seqidno:10的殘基128-234中限定的氨基酸序列或由其組成。實施方式32：根據(jù)實施方式1-9的任一個的抗體群體，其中第一抗體和/或其片段包括可檢測的標(biāo)記。實施方式33：根據(jù)實施方式32的抗體群體，其中可檢測的標(biāo)記是熒光標(biāo)記、放射性標(biāo)記、生物素或抗生物素蛋白中的任何一種或多種。附圖說明現(xiàn)在將參照附圖僅通過實例的方式描述本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，其中：圖1顯示了使用來自不同來源的mil-38抗體對來自du-145、c3和ca-hpv-10細胞系的提取物的蛋白質(zhì)印跡分析的結(jié)果。三角形(arrowhead)表示不同抗體制劑與mil-38抗原的等價反應(yīng)性。箭頭表示三個制品(prep)的每個中重鏈和輕鏈的雙帶?？s寫詞：37a＝內(nèi)部mil-38抗體制劑；“原始的”(1-o)＝來自atcc雜交瘤細胞(hb11785)的mil-38抗體制劑；40a＝來自內(nèi)部雜交瘤細胞的mil-38抗體制劑；rubyproteingelstain。泳道：1(mw標(biāo)記物)；2(du145mpek16/7/12)；3(c3mpek20/4/12)；4(ca-hpv-10mpek28/3/12)；5(-)；6(mw標(biāo)記物)；7(du145mpek16/7/12)；8(c3mpek20/4/12)；9(ca-hpv-10mpek28/3/12)；10(mw標(biāo)記物)；11(du145mpek16/7/12)；12(c3mpek20/4/12)；13(ca-hpv-10mpek28/3/12)；14(-)；15(mil-38制品1“原始的”)；16(mil-38制品40a)；17(mil-38制品37a)；18(mw標(biāo)記物)；圖2示出了來源于內(nèi)部雜交瘤原種(stock)(ausmab雜交瘤細胞克隆1)或從來自atcc的原始的hb11785雜交瘤原種(ausma雜交瘤系3、4和5)再克隆的細胞的mil-38抗體制劑與內(nèi)部mil-38抗體制劑33a的那些的比較。圖2a示出了通過sds-page電泳來分凝(segregation)每種抗體制劑中的重鏈和輕鏈成分；泳道：1(magic標(biāo)記物)；2(ausmab1)；3(ausmab3)；4(ausmab4)；5(ausmab5)；6(mil-38制品33a)；7(seeblueplus2)；圖2b示出了使用來自不同制劑的mil-38抗體對來自du-145和c3細胞系的提取物的蛋白質(zhì)印跡分析的結(jié)果；圖3示出了內(nèi)部生成和儲存的不同mil-38抗體制劑的比較(16a、16b、16c、17b、23a-1、23a-2、24a、25a、25b、26b、30a、31a、31b、31c、31d、32b、32c、33a、33b、33c、33d、34a、34b、35a、35c、35d、40a、40b、am-3、am-4)。圖3a示出了通過sds-page電泳來分凝每種抗體制劑中的重鏈和輕鏈成分。圖3b示出了使用來自每種制劑的mil-38抗體對du-145細胞提取物的蛋白質(zhì)印跡分析的結(jié)果；圖4示出了mil-38抗體群體分析的結(jié)果。圖4a示出了使用原始的iia、alfioi、alfioii、36a和ausmab4(am-4)mil-38抗體制劑對來自du-145和c3細胞的蛋白質(zhì)印跡的結(jié)果。圖4b示出了減少syprogel證明通過sds-page電泳對mil-38抗體制劑(原始的iia、alfioi、alfioii、36a和ausmab4(am-4))的重和輕鏈成分的分凝。原始的iia＝衍生自atcc登錄號hb11785(鼠科雜交瘤blca-38)的原種的內(nèi)部制劑；alfioi＝衍生自atcc登錄號hb11785的混合的mil-38抗體群體；alfioii＝衍生自atcc登錄號hb11785的混合群體的單一抗體群體。圖5示出了來自使用mil-38抗體的不同制劑的免疫熒光試驗的圖像。具體地，圖5a示出了來自使用mil-38抗體的不同制劑對du-145細胞的免疫熒光試驗的圖像。部分a、d、g、j和m示出了染色細胞的明視野圖像；部分b(am-4)、e(alfioi)、h(alfioii)和k(原始的iia)示出了mil-38抗體制劑對du145細胞的結(jié)合；部分n示出了du-145細胞的二次抗體對照；部分c、f、i、l和o示出了細胞的dapi染色。圖5b示出了來自使用mil-38抗體的不同制劑對c3細胞的免疫熒光試驗的圖像。部分a、d、g、j和m示出了染色細胞的明視野圖像；部分b(am-4)、e(alfioi)、h(alfioii)和k(原始的iia)示出了mil-38抗體制劑與du145細胞的結(jié)合；部分n示出了c3細胞的二次抗體對照；部分c、f、i、l和o示出了細胞的dapi染色；圖6示出了使用不同抗體制劑作為捕捉抗體執(zhí)行的比較夾心elisa的結(jié)果。圖6a示出了使用am-3和am-4作為捕捉抗體的比較夾心elisa。圖6b示出了使用混合的制劑(34a)或克隆群體(am-41f5)作為捕捉抗體的比較夾心elisa。圖7示出了嵌合的mil-38抗體的sds-page(圖7a)和蛋白質(zhì)印跡(圖7b)分析。泳道m(xù)＝蛋白標(biāo)記物；泳道1＝還原條件；泳道2＝非還原條件；泳道p＝人igg1κ(sigma，目錄號15154)作為陽性對照。圖8示出了來自使用嵌合的mil-38抗體和對照對du-145細胞的免疫熒光試驗的圖像。圖8a-d示出了染色細胞的組合的明視野和dapi圖像。圖8e-h示出了對具有mil-38制品33a(8e，陽性對照)、嵌合的mil-38(8f)、西妥昔單抗(cetuximab)(8g，人igg1k的陽性對照)和陰性對照(8h，無1°抗體)的du-145細胞的染色；圖9示出了嵌合的mil-38抗體的蛋白質(zhì)印跡分析。圖9a示出了鼠科mil-38與du-145mpek提取物、c3mpek提取物和ns0產(chǎn)生的重組體gpc-1抗原的反應(yīng)性。圖9b示出了嵌合的mil-38與du-145mpek提取物、c3mpek提取物和ns0產(chǎn)生的重組體gpc-1抗原的反應(yīng)性。圖9c示出了在與圖9b等同的條件下鼠科mil-38與du-145mpek提取物、c3mpek提取物和ns0產(chǎn)生的重組體gpc-1抗原的反應(yīng)性。定義如在本申請中使用的，單數(shù)形式“一個(a,an)”和“該(the)”包括復(fù)數(shù)引用對象，除非上下文明確地指示其它方面。例如，短語“一種抗體”也包括多種抗體。如本文所使用，術(shù)語“包括(comprising)”意思是“包含(including)”。詞語“包括(comprising)”的變型比如“包括(comprise,comprises)”具有相應(yīng)地變化的含義。因此，例如，“包括”抗體a的樣本可以唯一地由抗體a組成或者可以包括一種或多種另外的成分(例如，抗體b)。如本文所使用，術(shù)語“多個”意思是多于一個。在某些具體的方面或?qū)嵤┓绞街?，多個的意思可以是2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51或更多，和其中可衍生的任何整數(shù)，以及其中可衍生的任何范圍。如本文所使用，術(shù)語“抗體(一種或多種)”包括igg(包括igg1、igg2、igg3和igg4)、iga(包括iga1和iga2)、igd、ige、igm、和igy、全抗體，該全抗體包括單鏈全抗體和其抗原結(jié)合片段。抗原結(jié)合抗體片段包括但不限于fv、fab、fab'和f(ab')2、fd、單鏈fv(scfv)、單鏈抗體、二硫化物連接的fv(sdfv)和包括vl或vh結(jié)構(gòu)域的片段。抗體可以來自任何動物器官或適合的生產(chǎn)宿主。包括單鏈抗體的抗原結(jié)合抗體片段可以包括單獨的可變區(qū)(一個或多個)或與鉸鏈區(qū)、ch1、ch2和ch3結(jié)構(gòu)域的全部或部分組合。還包括的是可變區(qū)(一個或多個)與鉸鏈區(qū)、ch1、ch2和ch3結(jié)構(gòu)域的任何組合?？贵w可以是單克隆、多克隆、嵌合、多特異性、人源化和特異性地結(jié)合生物分子的人單克隆和多克隆抗體?？贵w可以是雙特異性抗體、avibody、雙抗體、三抗體、四抗體、納米抗體、單結(jié)構(gòu)域抗體、vhh結(jié)構(gòu)域、人抗體、完全人源化抗體、部分人源化抗體、anticalin、adnectin或affibody。如本文所使用，術(shù)語“單克隆抗體”指的是如此抗體：其識別單一抗原表位，并從基本上均質(zhì)抗體的群體獲得，該均質(zhì)抗體特異性地結(jié)合至相同的抗原表位，并且除了可能以少量存在的天然發(fā)生的突變(一種或多種)之外在潛力方面是相同的。如本文所使用，術(shù)語“人源化抗體”指的是包含來自人抗體以及非人抗體(例如鼠科抗體)的序列的抗體形式。例如，人源化抗體可以包括基本上所有的至少一個和通常兩個可變結(jié)構(gòu)域，其中所有/基本上所有的高變環(huán)對應(yīng)于非人免疫球蛋白的那些，和所有/基本上所有的fr區(qū)來自人免疫球蛋白序列。人源化抗體也可以任選地包括免疫球蛋白恒定區(qū)(fc)的至少一部分，該免疫球蛋白恒定區(qū)(fc)可以通常地是人免疫球蛋白的免疫球蛋白恒定區(qū)(fc)。如本文所使用，術(shù)語“嵌合抗體”指的是展現(xiàn)期望的生物學(xué)活性的抗體，并且其中輕鏈和/或重鏈的一部分與衍生自給定/特定種類的抗體中的相應(yīng)序列相同或同源，同時剩余的鏈(一個或多個)與衍生自另外的不同種類的抗體中的相應(yīng)序列相同或同源。例如，嵌合抗體可以包括衍生自第一種類的可變區(qū)和包括衍生自第二種類的恒定區(qū)。嵌合抗體可以例如通過來自屬于不同種類的免疫球蛋白基因片段的基因工程構(gòu)建。如本文所使用，術(shù)語“雜交瘤”指的是通過融合無限增殖細胞(例如，多發(fā)性骨髓瘤細胞)和產(chǎn)生抗體的細胞(例如，b淋巴細胞)而產(chǎn)生的細胞，其能夠產(chǎn)生單一結(jié)合特異性的單克隆抗體。如本文所使用，當(dāng)提及抗體、抗體變體、抗體衍生物、抗原結(jié)合片段等時，術(shù)語“特異性地結(jié)合(bindingspecifically,specificallybinding)”指的是相對于其它非靶分子其優(yōu)先結(jié)合至給定靶分子的能力。例如，如果抗體、抗體變體、抗體衍生物、抗原結(jié)合片段(“分子a”)能夠“特異性地結(jié)合至”給定靶分子(“分子b”)，則分子a具有區(qū)分分子b與任何其它數(shù)目的潛在可選的結(jié)合伴侶的能力。因此，當(dāng)暴露于許多不同的但是同等地可接近的分子作為潛在的結(jié)合伴侶時，分子a將選擇性地結(jié)合至分子b并且其它可選的潛在結(jié)合伴侶將保持基本上不被分子a結(jié)合。一般而言，與其它潛在結(jié)合伴侶相比，分子a將至少10倍、優(yōu)選地50倍、更優(yōu)選地100倍和更優(yōu)選地多于100倍更頻繁地優(yōu)先結(jié)合至分子b。分子a可以能夠以微弱的、但是可檢測的水平結(jié)合至不是分子b的分子。這通常已知為背景結(jié)合并且例如通過使用適合的對照可以容易地與分子b特異性結(jié)合區(qū)分。如本文所使用，術(shù)語“對象”包括任何具有經(jīng)濟、社會或研究重要性的動物，包括牛、馬、羊、靈長類動物、鳥類和嚙齒動物種類。因此，“對象”可以是哺乳動物，比如人或非人哺乳動物。如本文所使用，當(dāng)提及生物學(xué)分子(例如抗體)時，術(shù)語“分離的”是如此生物學(xué)分子：其不含該生物學(xué)分子天然存在的成分中的至少一些。如本文所使用，術(shù)語“蛋白質(zhì)”和“多肽”每個指的是由通過肽鍵連接在一起的氨基酸組成的聚合物并且可互換地使用。出于本發(fā)明的目的，“多肽”可以組成全長蛋白質(zhì)或全長蛋白質(zhì)的一部分。如本文所使用，術(shù)語“多核苷酸”指的是脫氧核苷酸堿基、核糖核苷酸堿基、已知類似物或天然核苷酸、或其混合物的單鏈或雙鏈聚合物。如本文所使用，術(shù)語“試劑盒”指的是用于遞送材料的任何遞送系統(tǒng)。這樣的遞送系統(tǒng)包括允許從一個位置到另一個位置儲存、運輸或遞送反應(yīng)試劑(例如，在適合容器中的標(biāo)記、參考樣本、支持材料等)和/或支持材料(例如，緩沖液、用于執(zhí)行試驗的書面指示等)的系統(tǒng)。例如，試劑盒可以包括一個或多個附件，比如盒子，其包含相關(guān)反應(yīng)試劑和/或支持材料。術(shù)語“試劑盒”包括分離型和組合型試劑盒二者?！胺蛛x型試劑盒”指的是包括兩個或多個分開的容器的遞送系統(tǒng)，這些分開的容器中的每個包含總試劑盒成分的子部分。容器可以同時或者分開地被遞送至預(yù)期的接受者。任何包括兩個或多個分開的容器——其每個包含總試劑盒成分的子部分——的遞送系統(tǒng)都包含在術(shù)語“分離型試劑盒”的含義內(nèi)?！敖M合型試劑盒”指的是在單一容器中(例如在容納每種期望的成分的單一盒子中)包含反應(yīng)試驗的所有成分的遞送系統(tǒng)。將理解，當(dāng)提及數(shù)值的范圍時，在本文中術(shù)語“在……之間”的使用包含在該范圍的每個端點處的數(shù)值。例如，在長度為10個殘基和20個殘基之間的多肽包括長度為10個殘基的多肽和長度為20個殘基的多肽。在本文中的現(xiàn)有技術(shù)文件的任何描述，或者在本文中衍生自或基于這些文件的陳述不是對文件或衍生的陳述是相關(guān)領(lǐng)域的一般公知常識的一部分的承認(rèn)。出于描述的目的，本文中提及的所有文件在此通過引用以其全部被并入，除非另有說明。具體實施方式對于診斷和/或治療各種形式的癌癥比如前列腺癌的更有效的方法和藥劑的需要繼續(xù)存在。抗體對于癌癥而言是有用的診斷和治療藥劑，其在用于診斷和治療患有血液惡性腫瘤和實體瘤的患者方面已經(jīng)成為成功的和重要的工具。靶向腫瘤特異性抗原的新的相關(guān)抗體的鑒定提供了一種改善癌癥患者的診斷和/或治療結(jié)果的潛在手段。這些結(jié)果通過其可以被增強的另一種手段是通過改善現(xiàn)有的基于抗體的診斷和/或療法?！癰lca-38抗體”在診斷和/或治療癌癥包括膀胱癌和前列腺癌中已經(jīng)是先前研究的主題。在現(xiàn)有技術(shù)中，“blca-38抗體”被持續(xù)地提及作為靶向大小大約為30kda的未知抗原的鼠科單克隆抗體1-5。本發(fā)明人已經(jīng)出人意料地鑒定，在現(xiàn)有技術(shù)中公開和使用的blca-38抗體不是先前指出的單一單克隆抗體群體，而是混合群體中兩種有區(qū)別的單克隆抗體的組合。這來源于本發(fā)明人的如下確定：用于生成blca-38抗體的雜交瘤——在美國組織型培養(yǎng)物保藏所中在登錄號hb11785下保藏的代表性樣本——是雜交瘤細胞的雙克隆(而不是單克隆)群體，其產(chǎn)生兩種離散型抗體種類的混合物。這些抗體種類中僅一種能夠結(jié)合至在前列腺癌細胞上的相關(guān)抗原，而第二種類不能。而且，被該抗體結(jié)合的抗原顯著地大于在現(xiàn)有技術(shù)中指出的30kda3-4。這些出乎意料的發(fā)現(xiàn)已經(jīng)促進了單克隆雜交瘤的生成，其能夠產(chǎn)生僅對靶抗原具有結(jié)合特異性的抗體的單一群體。除了規(guī)避無效抗體(即，在現(xiàn)有技術(shù)的混合群體中存在的第二單克隆抗體群體)的不必要的產(chǎn)生和應(yīng)用，當(dāng)利用相等量的抗體時，與現(xiàn)有技術(shù)的混合群體相比，根據(jù)本發(fā)明使用單克隆雜交瘤/單一抗體提供了更強的信號。因此，本發(fā)明的某些實施方式涉及提供衍生自克隆雜交瘤細胞的單克隆抗體群體，抗體群體的每個成員能夠特異性地結(jié)合至某些癌細胞(例如，膀胱和前列腺癌細胞)上存在的抗原。本發(fā)明還提供了這些抗體的抗原結(jié)合片段，以及保持相同結(jié)合特異性的抗體的衍生物和變體。還提供了能夠產(chǎn)生本發(fā)明的抗體的雜交瘤。這樣的雜交瘤的一個實例根據(jù)布達佩斯條約的條款在2014年8月22日被保藏在214hawkesburyroad，westmead，nsw2145，澳大利亞的cellbankaustralia中，登錄號為cba20140026。進一步提供了用于產(chǎn)生和/或分離本發(fā)明的抗體的方法，和利用該抗體進行檢測/診斷的方法。單克隆抗體本發(fā)明提供了單克隆抗體、這樣的抗體的衍生物和其抗原結(jié)合片段。單克隆抗體、變體、衍生物和抗原結(jié)合片段能夠特異性地結(jié)合至在磷脂酰肌醇聚糖-1硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(gpc-1)中存在的抗原表位。gpc-1蛋白可以是人磷脂酰肌醇聚糖-1蛋白(例如，由下列的任何一種中陳述的序列限定的：ncbi參考序列登錄號np_002072.2、genbank登錄號aah51279.1、genbank登錄號aaa98132.1、genbank登錄號eaw71184.1或uniprotkb/swiss-prot登錄號p35052.2)。在一些實施方式中，gpc-1蛋白可以不包括信號肽和/或前肽。另外地或可選地，單克隆抗體、衍生物和抗原結(jié)合片段可以能夠特異性地結(jié)合至在gpc-1變體(例如，gpc-1同種型、剪接變體或同種異型)中存在的抗原表位。通過非限制性實例的方式，單克隆抗體、變體、衍生物和抗原結(jié)合片段可以包括重鏈和/或輕鏈、其組合、或其成分(一種或多種)。重鏈或其成分(一種或多種)可以包括重鏈可變區(qū)，其包括一個、兩個、或三個互補決定區(qū)(cdr1、cdr2和/或cdr3)，其在本領(lǐng)域中也已知為重鏈高變(hv)區(qū)。重鏈cdr1可以包括由seqidno:3的殘基50-54限定的氨基酸序列或由其組成。重鏈cdr2可以包括由seqidno:3的殘基69-85限定的氨基酸序列或由其組成。重鏈cdr3可以包括由seqidno:3的殘基118-126限定的氨基酸序列或由其組成。另外地或可選地，重鏈可變區(qū)可以包括一個、兩個、三個或四個構(gòu)架區(qū)(fr1、fr2、fr3和/或fr4)。重鏈fr1可以包括由seqidno:3的殘基20-49限定的氨基酸序列或由其組成。重鏈fr2可以包括由seqidno:3的殘基55-68限定的氨基酸序列或由其組成。重鏈fr3可以包括由seqidno:3的殘基86-117限定的氨基酸序列或由其組成。重鏈fr4可以包括由seqidno:3的殘基127-137限定的氨基酸序列或由其組成。另外地或可選地，重鏈可變區(qū)可以包括前導(dǎo)序列。重鏈前導(dǎo)序列可以包括由seqidno:3的殘基1-19限定的氨基酸序列或由其組成。本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識到，前導(dǎo)序列是促進新合成的重鏈運輸進入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的信號序列，并且其通常不存在于單克隆抗體的最終裝配形式的重鏈中。另外地或可選地，輕鏈或其成分(一種或多種)可以包括輕鏈可變區(qū)，其包括一個、兩個、或三個互補決定區(qū)(cdr1、cdr2和/或cdr3)，其在本領(lǐng)域中也已知為輕鏈高變(hv)區(qū)。輕鏈cdr1可以包括由seqidno:4的殘基44-54限定的氨基酸序列或由其組成。輕鏈cdr2可以包括由seqidno:4的殘基70-76限定的氨基酸序列或由其組成。輕鏈cdr3可以包括由seqidno:4的殘基109-117限定的氨基酸序列或由其組成。另外地或可選地，輕鏈可變區(qū)可以包括一個、兩個、三個或四個構(gòu)架區(qū)(fr1、fr2、fr3和/或fr4)。輕鏈fr1可以包括由seqidno:4的殘基21-43限定的氨基酸序列或由其組成。輕鏈fr2可以包括由seqidno:4的殘基55-69限定的氨基酸序列或由其組成。輕鏈fr3可以包括由seqidno:4的殘基77-108限定的氨基酸序列或由其組成。輕鏈fr4可以包括由seqidno:4的殘基118-127限定的氨基酸序列或由其組成。另外地或可選地，輕鏈可變區(qū)可以包括前導(dǎo)序列。輕鏈前導(dǎo)序列可以包括由seqidno:4的殘基1-20限定的氨基酸序列或由其組成。本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識到，前導(dǎo)序列是促進新合成的輕鏈運輸進入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的信號序列，并且其通常不存在于單克隆抗體的最終裝配形式的輕鏈中。另外地或可選地，重鏈可以包括一個、兩個或三個重鏈恒定區(qū)。重鏈恒定區(qū)可以包括由seqidno:3的殘基138-461限定的氨基酸序列或由其組成。另外地或可選地，輕鏈可以包括輕鏈恒定區(qū)。輕鏈恒定區(qū)可以包括由seqidno:4的殘基128-234限定的氨基酸序列或由其組成。在一些實施方式中，根據(jù)本發(fā)明的單克隆抗體、變體、衍生物和抗原結(jié)合片段可以包括這樣的重鏈可變區(qū)，其包括由seqidno:3的殘基20-137限定的氨基酸序列或由其組成。單克隆抗體、變體、衍生物和抗原結(jié)合片段可以包括重鏈可變區(qū)中的一個或兩個。在一些實施方式中，根據(jù)本發(fā)明的單克隆抗體、變體、衍生物和抗原結(jié)合片段可以包括這樣的輕鏈可變區(qū)，其包括由seqidno:4的殘基21-127限定的氨基酸序列或由其組成。單克隆抗體、變體、衍生物和抗原結(jié)合片段可以包括輕鏈可變區(qū)中的一個或兩個。在一些實施方式中，根據(jù)本發(fā)明的單克隆抗體、變體、衍生物和抗原結(jié)合片段可以包括重鏈可變區(qū)——其包括由seqidno:3的殘基20-137限定的氨基酸序列或由其組成，和輕鏈可變區(qū)——其包括由seqidno:4的殘基21-127限定的氨基酸序列或由其組成。單克隆抗體、變體、衍生物和抗原結(jié)合片段可以包括重鏈可變區(qū)中的兩個和輕鏈可變區(qū)中的兩個的組合。在一些實施方式中，根據(jù)本發(fā)明的單克隆抗體、變體、衍生物和抗原結(jié)合片段可以包括重鏈，其包括由seqidno:3的殘基20-461限定的氨基酸序列或由其組成。單克隆抗體、變體、衍生物和抗原結(jié)合片段可以包括重鏈中的一個或兩個。在一些實施方式中，根據(jù)本發(fā)明的單克隆抗體、變體、衍生物和抗原結(jié)合片段可以包括輕鏈，其包括由seqidno:4的殘基21-234限定的氨基酸序列或由其組成。單克隆抗體、變體、衍生物和抗原結(jié)合片段可以包括輕鏈中的一個或兩個。在一些實施方式中，根據(jù)本發(fā)明的單克隆抗體、變體、衍生物和抗原結(jié)合片段可以包括重鏈——其包括由seqidno:3的殘基20-461限定的氨基酸序列或由其組成，和輕鏈——其包括由seqidno:4的殘基21-234限定的氨基酸序列或由其組成。單克隆抗體、變體、衍生物和抗原結(jié)合片段可以包括重鏈中的兩個和輕鏈中的兩個的組合。根據(jù)本發(fā)明的單克隆抗體、這樣的抗體的變體和衍生物、和其抗原結(jié)合片段不被限制為任何具體的同種型，并且因而可以是iga(iga1或iga2)、igd、ige、igg(igg1、igg2、igg3、igg4)、或igm同種型。在一些實施方式中，它們是igg1同種型。包含在本發(fā)明的范圍內(nèi)的是由雜交瘤細胞產(chǎn)生的單克隆抗體，該雜交瘤細胞根據(jù)布達佩斯條約的條款在2014年8月22日被提交在214hawkesburyroad，westmeadnsw2145，澳大利亞的cellbankaustralia中，登錄號為cba20140026。雜交瘤是產(chǎn)生單一抗體種類的克隆群體，該單一抗體種類對在磷脂酰肌醇聚糖-1硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(gpc-1)中存在的表位具有結(jié)合特異性?？贵w片段、衍生物和變體包含在本發(fā)明的范圍內(nèi)的是在本文中描述的抗體的“片段”。一般而言，片段是“抗體結(jié)合片段”，在該意義上來說它們能夠特異性地結(jié)合至與它們衍生自的或者它們基于的親代抗體相同的抗原/表位(例如gpc-1)。通常地，抗原結(jié)合片段保留親代抗體的至少10％的抗原/表位結(jié)合能力，或者親代抗體的至少25％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％或100％(或更多)的抗原/表位結(jié)合能力。也可以考慮，本文描述的抗體的抗原結(jié)合片段可以包括保守氨基酸置換，其基本上不改變其抗原/表位結(jié)合特異性/能力(例如，其抗原/表位結(jié)合特異性/能力的至少70％、80％、90％、95％、99％或100％(或更多)可以被保留)?？乖Y(jié)合片段的非限制性實例包括全長抗體、肽和其衍生物的部分，包括例如fab、fab'、f(ab)2、f(ab′)2、f(ab)3、fv、單鏈fv(scfv)、dsfv、fd片段、dab片段fse、vh、vl、vhh和v-nar結(jié)構(gòu)域、互補位、cdr區(qū)、單鏈抗體分子(例如sc-fv)、微抗體(minibody)、雙抗體、三抗體、四抗體、κ抗體、線性抗體、多特異性抗體、由抗體片段形成的結(jié)構(gòu)域抗體、由抗體片段形成的多特異性抗體片段、和能夠特異性地結(jié)合至相關(guān)抗原/表位(例如gpc-1)的抗體的任何部分或肽序列。也包含在本發(fā)明的范圍內(nèi)的是本文描述的抗體的“衍生物”。本發(fā)明的抗體的“衍生物”指的是如此的本文描述的抗體：其被修飾以參入另外的成分或者使現(xiàn)有成分(一種或多種)改變，但是仍然能夠特異性地結(jié)合至與其衍生自的親代抗體相同的抗原/表位(例如gpc-1)。通常地，本文考慮的抗體衍生物保留親代抗體的至少10％的抗原/表位結(jié)合能力，或者親代抗體的至少25％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％或100％(或更多)的抗原/表位結(jié)合能力。適合于形成抗體衍生物的修飾的非限制性實例包括酰胺化、糖基化、磷酸化、聚乙二醇化、連接至細胞配體或其它蛋白、通過已知的保護/封閉基團的衍生化、乙?；?。另外地或可選地，衍生物可以包含一種或多種非典型氨基酸?？贵w衍生物可以包括標(biāo)記的抗體，比如，例如標(biāo)記有放射性碘、銦、硫、碳、氚等的單克隆抗體；綴合有抗生物素蛋白或生物素的單克隆抗體；綴合有酶(例如，辣根、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶、葡萄糖氧化酶、β-d-半乳糖苷酶、堿性磷酸酶、葡糖淀粉酶、乙酰膽堿酯酶、羧酸脫水酶、蘋果酸脫氫酶、溶菌酶或過氧化物酶)的單克隆抗體；和綴合有化學(xué)發(fā)光劑(例如吖啶酯)、生物發(fā)光劑(例如熒光素酶)或熒光劑(例如藻膽蛋白)的單克隆抗體。抗體衍生物的進一步的實例包括雙功能抗體，比如雙特異性抗體，其通過將識別兩個不同的抗原基團的兩個單獨的抗體的部分進行組合而生成(例如通過重組技術(shù)或交聯(lián))。抗體衍生物可以由本文描述的抗體的共價修飾而形成，例如通過將抗體的靶向的氨基酸殘基與能夠與選擇的側(cè)鏈或末端殘基反應(yīng)的試劑進行反應(yīng)。例如，用雙功能劑的衍生化對于將抗體或其片段交聯(lián)至大分子運載體比如水不溶性支持基質(zhì)是有用的手段。本文考慮的抗體衍生物可以具有附著至能夠增加其體內(nèi)半衰期(例如，在從血流清除之前延長時間長度)的基礎(chǔ)抗體(baseantibody)或其片段的藥劑。這樣的技術(shù)的非限制性的實例包括增加peg部分。在某些實施方式中，抗體衍生物可以是多聚體，比如例如，二聚體，其包括一個或多個單體，其中每個單體包括(i)本文描述的抗gpc-1抗體的抗原結(jié)合區(qū)，或由其衍生的多肽區(qū)(比如，例如通過一個或多個氨基酸的保守置換)，和(ii)多聚(例如二聚)多肽區(qū)，使得抗體衍生物形成特異性地結(jié)合至gpc-1的多聚體(例如同源二聚體)。例如，本文描述的抗gpc-1抗體的抗原結(jié)合區(qū)，或由其衍生的多肽區(qū)可以重組地或化學(xué)地與異源蛋白融合，其中異源蛋白包括二聚或多聚結(jié)構(gòu)域。衍生物可以經(jīng)歷允許同源二聚體或異源二聚體形成的條件。異源二聚體可以包括相同的二聚結(jié)構(gòu)域但是不同的抗gpc-1抗原結(jié)合區(qū)，相同的抗gpc-1抗原結(jié)合區(qū)但是不同的二聚結(jié)構(gòu)域，或者不同的抗gpc-1抗原結(jié)合區(qū)和不同的二聚結(jié)構(gòu)域。適合的二聚結(jié)構(gòu)域包括源于轉(zhuǎn)錄因子(例如堿性區(qū)亮氨酸拉鏈)、堿性區(qū)螺旋-環(huán)-螺旋蛋白和免疫球蛋白恒定區(qū)(例如重鏈恒定區(qū)或其結(jié)構(gòu)域，比如ch1結(jié)構(gòu)域、ch2結(jié)構(gòu)域或ch3結(jié)構(gòu)域)的那些。在其它實施方式中，抗體衍生物可以是本文描述的綴合至第二抗體(“抗體異型綴合物(antibodyheteroconjugate)”)的抗gpc1抗體。本文還考慮的是本文描述的抗體的人源化衍生物。本文考慮的“人源化”抗體是人/非人嵌合抗體，其包含衍生自非人免疫球蛋白的最小序列。例如，人源化抗體可以是人免疫球蛋白(受體抗體)，其中來自受體的cdr區(qū)(一個或多個)的殘基被來自非人種類(供體抗體)(例如小鼠、大鼠、兔或?qū)τ趃pc-1抗原/表位具有期望的特異性和親和性的非人靈長類)的cdr區(qū)的殘基替換。人免疫球蛋白的構(gòu)架區(qū)(fr)殘基也可以(任選地)被相應(yīng)的非人殘基替換，并且在一些情況下，人源化抗體可以包括在受體抗體或者供體抗體中不存在的殘基以增強抗體性能。本文進一步考慮的是“嵌合”抗體衍生物，其中重和/或輕鏈的一部分與本文描述的衍生自具體種類或者屬于具體抗體種類或亞類的抗體的相應(yīng)序列相同或者同源，同時鏈(一個或多個)的剩余部分與衍生自另一種不同種類或?qū)儆诹硪环N不同抗體種類或亞類的抗體中的相應(yīng)的序列相同或同源。例如，本文考慮的嵌合抗體可以包括衍生自本文描述的抗gpc-1單克隆抗體的可變區(qū)，和衍生自第二種類的恒定區(qū)。嵌合抗體可以例如通過屬于不同種類的免疫球蛋白基因片段的基因工程來生成。僅通過非限制性實例的方式，根據(jù)本發(fā)明的嵌合抗體可以包括嵌合的小鼠人ch1-ch3鏈序列小鼠vh-人ch1-ch3鏈(重鏈)和/或小鼠人κ鏈序列小鼠vk-人ck序列mil-38小鼠vk(輕鏈)。嵌合抗體的重鏈可以包括在seqidno:9的殘基20-467中列出的氨基酸序列或由其組成。嵌合抗體的輕鏈可以包括在seqidno:10的殘基21-234中列出的氨基酸序列或由其組成。重鏈可變區(qū)可以包括：互補決定區(qū)1(cdr1)，其包括由seqidno:9的50-54位限定的氨基酸序列或由其組成；和/或互補決定區(qū)2(cdr2)，其包括由seqidno:9的69-85位限定的氨基酸序列或由其組成；和/或互補決定區(qū)3(cdr3)，其包括由seqidno:9的118-126位限定的氨基酸序列或由其組成。另外地或可選地，輕鏈可變區(qū)可以包括：互補決定區(qū)1(cdr1)，其包括由seqidno:10的44-54位限定的氨基酸序列或由其組成；和/或互補決定區(qū)2(cdr2)，其包括由seqidno:10的70-76位限定的氨基酸序列或由其組成；和/或互補決定區(qū)3(cdr3)，其包括由seqidno:10的109-117位限定的氨基酸序列或由其組成。根據(jù)本發(fā)明的嵌合抗體可以是該嵌合抗體的“變體”。包含在本發(fā)明的范圍內(nèi)的是本文描述的抗體的“變體”。抗體的“變體”指的是憑借親代抗體序列中一個或多個氨基酸殘基的添加、缺失和/或置換使得氨基酸序列與“親代”抗gpc-1抗體氨基酸序列不同的抗體。例如，變體抗體可以包括親代抗體的一個或多個cdr和/或構(gòu)架區(qū)中的一個或多個氨基酸置換(例如，親代抗體的一個或多個重和/或輕鏈cdr和/或構(gòu)架區(qū)中1到10個之間，2到5個之間，或者1、2、3、4、或5個置換)?？贵w變體可以包括重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列和/或輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列氨基酸序列，其與親代抗體的相應(yīng)的可變結(jié)構(gòu)域具有至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％氨基酸序列同源性(即序列同一性)。兩個序列之間的序列同源性或同一性在本文中被限定為在對齊序列和引入缺口，如果必要，以實現(xiàn)最大百分比序列同一性之后，候選序列中與親代抗體殘基相同的氨基酸殘基的百分比。如果相互比較的兩個序列在長度上不同，則序列同一性指的是與較長序列的氨基酸殘基相同的較短序列的氨基酸殘基的百分比。序列同一性可以利用計算機程序比如最佳擬合(bsetfit)程序(wisconsinsequenceanalysispackage，unix的版本8，geneticscomputergroup，universityresearchpark，575sciencedrivemadison，wis.53711)和/或程序“fasta20u66”(版本2.0u66，1998年9月，williamr.pearson和theuniversityofvirginia；還參見w.r.pearson(1990)，methodsinenzymology183,63-98)常規(guī)地測定。在一些實施方式中，本文描述的變體抗體經(jīng)由可變抗體的序列中保守氨基酸改變(一個或多個)可以與親代抗體不同。“保守改變”指的是基本上抗原或構(gòu)象中性的變更，其產(chǎn)生變體抗體的三級結(jié)構(gòu)的最小改變，或者產(chǎn)生抗體變體的抗原決定簇的最小改變——與親代抗體相比，并且其為不致使衍生物不能夠結(jié)合至gpc-1中與親代抗體相同的表位的一種。保守氨基酸改變的非限制性實例包括疏水氨基酸的置換和物理化學(xué)上類似氨基酸的置換。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以常規(guī)地并毫不費力地評估在維持構(gòu)象和抗原中性的同時是否可以進行給定氨基酸置換(參見例如，berzofsky，(1985)science229:932-940；bowie等(1990)science247:1306-1310)。蛋白構(gòu)象的變更可以使用公知試驗——其包括但不限于微量補體結(jié)合方法(參見wasserman等(1961)j.immunol.87:290-295；levine等(1967)meth.enzymol.11:928-936)——和通過結(jié)合研究使用構(gòu)象依賴性單克隆抗體(參見lewis等(1983)biochem.22:948-954)實現(xiàn)。保守氨基酸改變(一個或多個)可以發(fā)生在親代抗體的一個或多個cdr和/或構(gòu)架區(qū)(例如，親代抗體的一個或多個cdr和/或構(gòu)架區(qū)中1到10個之間，2到5個之間，或者1、2、3、4、或5個保守置換)。一般而言，本文考慮的人源化、嵌合的衍生物、片段和變體抗體仍然能夠特異性地結(jié)合至與它們衍生自其的或它們包含其成分的親代抗體相同的抗原/表位(例如gpc-1)。通常地，它們可以保留親代抗體的至少10％的抗原/表位結(jié)合能力，或者親代抗體的至少25％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％或100％(或更多)的抗原/表位結(jié)合能力。例如，與親代抗體相比，它們可以具有更強的結(jié)合親和力和/或結(jié)合特異性?？贵w片段、衍生物或變體特異性地結(jié)合至由親代抗體(即gpc-1抗原/表位)靶向的抗原/表位的能力可以使用本領(lǐng)域中已知的方法測試，包括例如使用如下技術(shù)的競爭性和非競爭性試驗系統(tǒng)：比如蛋白質(zhì)印跡、放射免疫測定、酶聯(lián)免疫吸附測定(elisa)、免疫沉淀試驗、“夾心”免疫試驗、免疫擴散試驗、沉淀素反應(yīng)、蛋白a免疫試驗、熒光免疫試驗、凝膠擴散沉淀素反應(yīng)、補體結(jié)合試驗、免疫放射試驗、凝集試驗等(參見例如，ausubel等編輯，shortprotocolsinmolecularbiology(johnwiley&sons,inc.，紐約，第4版，1999)；harlow&lane，usingantibodies:alaboratorymanual(coldspringharborlaboratorypress，coldspringharbor，紐約，1999))。具體地包含在本發(fā)明的范圍內(nèi)的是本文描述的任何抗體或其抗原結(jié)合片段的變體，包括但不限于由本文中特定序列限定的抗體(包括嵌合抗體)和抗原結(jié)合片段，和由本文描述的雜交瘤產(chǎn)生的抗體，該雜交瘤包括如此雜交瘤：其根據(jù)布達佩斯條約的條款在2014年8月22日被提交在214hawkesburyroad，westmeadnsw2145，澳大利亞的cellbankaustralia中，登錄號為cba20140026。雜交瘤本發(fā)明提供了能夠產(chǎn)生單克隆抗體、這樣的抗體的衍生物和變體、和其抗原結(jié)合片段的雜交瘤細胞。在一些實施方式中，雜交瘤可以產(chǎn)生在上面的標(biāo)題為“單克隆抗體”的部分中列出的單克隆抗體和/或其抗原結(jié)合片段。在一些實施方式中，雜交瘤可以產(chǎn)生在上面的標(biāo)題為“抗體片段、衍生物和變體”的部分中列出的本文描述的單克隆抗體的片段、衍生物和/或變體。用于產(chǎn)生能夠產(chǎn)生單克隆抗體的雜交瘤細胞的技術(shù)在本領(lǐng)域中是公知的。非限制性的實例包括雜交瘤方法(參見kohler和milstein，(1975)nature，256:495-497；coligan等methodsinmolecularbiology的2.5.1-2.6.7部分(humanapress1992)；和harlowandlaneantibodies:alaboratorymanual，726頁(coldspringharborpub.1988))，用于產(chǎn)生人單克隆抗體的ebv雜交瘤方法(參見cole等1985，inmonoclonalantibodiesandcancertherapy，alanr.liss,inc.，77-96頁)，人b細胞雜交瘤技術(shù)(參見kozbor等1983，immunologytoday4:72)，和三源雜交瘤(trioma)技術(shù)。簡言之，本發(fā)明的單克隆抗體可以例如通過腹膜內(nèi)注射將感興趣的免疫原(抗原)(即gpc-1)施用至近交或野生型小鼠(例如balb/c或c57bl/6小鼠)、兔、大鼠或其它動物種類，或能夠產(chǎn)生天然或人抗體的轉(zhuǎn)基因小鼠來制備。為了誘導(dǎo)免疫反應(yīng)，免疫原例如可以與佐劑混合，單獨被施用，通過載體表達，作為dna被施用，或者作為融合蛋白被施用。動物可以被加強(boost)例如至少兩次，并且然后可以從免疫動物收獲脾細胞。雜交瘤可以通過將致敏的脾細胞與骨髓瘤細胞系(例如，鼠科sp2/o骨髓瘤細胞，使用例如在kohler和milstein和harlow和lane中列出的方法)融合而生成。根據(jù)本發(fā)明的gpc-1抗原構(gòu)建體(例如疫苗組合物，其包括藥學(xué)上可接受形式的gpc-1抗原構(gòu)建體)可以以重復(fù)劑量(例如，1-15次劑量之間、2-10次劑量之間、3-7次劑量之間、4-6次劑量之間)被施用至適合的動物，持續(xù)適合的時間間隔(例如，1-10周之間、1-6周之間、1-4周之間、2-3周之間)。動物的免疫反應(yīng)可以通過在加強之后的適合時間處(例如，加強之后的3-10天之間、加強之后的4-8天之間、加強之后的5-6天之間)采集血清樣本，然后使用已知的技術(shù)(例如通過elisa)測定抗原構(gòu)建體的免疫原性來監(jiān)測。以這種方式的免疫作用可以導(dǎo)致動物中的免疫反應(yīng)。具有治療效價的動物通常是以適合的稀釋(例如，在1:4000和1:6000之間、在1:4500和1:5500或1:5000之間)通過elisa提供陽性結(jié)果的那些。具有治療效價的那些可以被選擇用于融合它們的產(chǎn)生抗體的細胞(b淋巴細胞)與連續(xù)不斷地復(fù)制/無限增殖細胞系(例如，骨髓瘤細胞系)。細胞可以使用適合的藥劑比如聚乙二醇被誘導(dǎo)融合。所得到的雜交瘤細胞然后可以以常規(guī)的方式克隆(例如，使用有限稀釋法)，并且測試生成的克隆體在培養(yǎng)中產(chǎn)生期望的抗gpc-1單克隆抗體的能力。雜交瘤可以通過在包含次黃嘌呤、氨蝶呤和胸苷(hat)的選擇培養(yǎng)基中平板培養(yǎng)細胞化學(xué)地選擇。可以篩選雜交瘤的產(chǎn)生單克隆抗體的能力并且陽性雜交瘤然后可以被克隆、擴展和儲存。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方式中，雜交瘤是能夠產(chǎn)生單一抗體種類的單克隆細胞群體，該單一抗體種類能夠特異性地結(jié)合至gpc-1。這樣的單克隆抗體的非限制性實例在上面的標(biāo)題為“單克隆抗體”和“抗體片段、衍生物和變體”的部分中列出。在一些實施方式中，根據(jù)本發(fā)明的雜交瘤可以是根據(jù)布達佩斯條約的條款在2014年8月22日被提交在214hawkesburyroad，westmeadnsw2145，澳大利亞的cellbankaustralia中，登錄號為cba20140026的雜交瘤。培養(yǎng)和繁殖這些雜交瘤細胞以產(chǎn)生根據(jù)本發(fā)明的單克隆抗體的方法對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言是公知的。在本文中也考慮的是包括本發(fā)明的雜交瘤細胞的細胞培養(yǎng)物。在一些實施方式中，細胞培養(yǎng)物包括單一(單克隆)種類的雜交瘤細胞，其能夠產(chǎn)生單一種類的特異性地結(jié)合至gpc-1的抗體或其抗原結(jié)合片段。這樣的單克隆抗體的非限制性的實例在上面的標(biāo)題為“單克隆抗體”和“抗體片段、衍生物和變體”的部分中列出。單一(單克隆)種類的雜交瘤細胞可以根據(jù)布達佩斯條約的條款在cellbankaustralia中在登錄號cba20140026下被保藏。在一些實施方式中，細胞培養(yǎng)物包括多個種類的雜交瘤細胞(即混合的雜交瘤細胞群體)。該混合的雜交瘤細胞群體可以包括單一(單克隆)種類的雜交瘤細胞，其能夠產(chǎn)生特異性地結(jié)合至gcp-1的單一種類的抗體。這樣的單克隆抗體的非限制性的實例在上面的標(biāo)題為“單克隆抗體”和“抗體片段、衍生物和變體”的部分中列出。單一(單克隆)種類的雜交瘤細胞可以根據(jù)布達佩斯條約的條款在cellbankaustralia中在登錄號cba20140026下被保藏。混合的雜交瘤細胞群體可以不包括在atcc中在登錄號hb11785下保藏的雜交瘤細胞和/或能夠產(chǎn)生下述抗體的雜交瘤細胞，該抗體包括：輕鏈可變區(qū)，其包括下列的任何一種或多種：互補決定區(qū)1(cdr1)，其包括由seqidno:6的48-58位限定的氨基酸序列或由其組成；互補決定區(qū)2(cdr2)，其包括由seqidno:6的74-80位限定的氨基酸序列或由其組成；互補決定區(qū)3(cdr3)，其包括由seqidno:6的113-121位限定的氨基酸序列或由其組成；和/或由選自下列的任何一個或多個的序列限定的一個或多個輕鏈可變區(qū)fr(構(gòu)架區(qū))：seqidno:6的殘基25-47、seqidno:6的殘基59-73、seqidno:6的殘基81-112、seqidno:6的殘基122-131。抗體生產(chǎn)工藝用于制備單克隆抗體、其衍生物和變體、和其抗原結(jié)合片段的工藝是容易獲得的，并且能夠由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員容易地執(zhí)行。除了kohler等(1975)的雜交瘤方法和上面在標(biāo)題為“雜交瘤”的部分中描述的之外，可以被利用的另外的非限制性工藝是重組dna技術(shù)(參見例如，美國專利號4816567)。例如，單克隆抗體、其衍生物和變體、和其抗原結(jié)合片段可以在任何完善的表達系統(tǒng)中重組地產(chǎn)生，該表達系統(tǒng)包括但不限于桿狀病毒、酵母(例如畢赤酵母屬、酵母屬)、大腸桿菌、哺乳動物細胞、植物、或轉(zhuǎn)基因動物(參見breitling和dubel，1999，recombinantantibodies，johnwiley&sons,inc.，紐約，119-132頁)。在一些實施方式中，編碼根據(jù)本發(fā)明的單克隆抗體、其衍生物和變體、和其抗原結(jié)合片段的核酸序列可以在基于重組dna技術(shù)的生產(chǎn)工藝中使用。非限制性實例包括在seqidno:1中限定的重鏈多核苷酸序列或在seqidno:2中限定的輕鏈多核苷酸序列或其變體或片段。“變體”多核苷酸在本文中指的是在序列方面與親代或參比多核苷酸不同的多核苷酸。多核苷酸序列趨異可以起因于突變改變，比如一個或多個核苷酸的缺失、置換或添加。這些改變中的每個可以在給定序列中單獨或組合，一次或多次發(fā)生?！白凅w”多核苷酸指的是與親代或參比多核苷酸具有基本上相似序列的多核苷酸。一般而言，如果兩個序列具有相同的指定的核苷酸百分比(序列“同源性”或序列“同一性”的百分比)，則兩個序列是“基本上相似的”。兩個多核苷酸序列之間的序列同源性或同一性在本文中被限定為在對齊序列和引入缺口，如果必要，以實現(xiàn)最大百分比序列同一性之后，候選(“變體”)序列中與親代/參比多核苷酸序列的那些相同的核苷酸的百分比。如果相互比較的兩個序列在長度上不同，則序列同一性指的是與較長序列的核苷酸相同的較短序列的核苷酸的百分比。序列同一性可以利用計算機程序比如最佳擬合程序(wisconsinsequenceanalysispackage，unix的版本8，geneticscomputergroup，universityresearchpark，575sciencedrivemadison，wis.53711)和/或程序“fasta20u66”(版本2.0u66，1998年9月，williamr.pearson和theuniversityofvirginia；還參見w.r.pearson(1990)，methodsinenzymology183,63-98)常規(guī)地測定。變體多核苷酸與親代/參比多核苷酸之間的序列同源性/同一性的程度可以例如是至少75％、80％、83％、85％、88％、90％、93％、95％、96％、97％、98％或99％。多核苷酸“片段”是編碼大的親代/參比多核苷酸的組成或者是其組成的多核苷酸分子。一般而言，片段將編碼本發(fā)明的抗體的片段，片段能夠特異性地結(jié)合至gpc-1。根據(jù)本發(fā)明產(chǎn)生的單克隆抗體、其衍生物和變體、和其抗原結(jié)合片段可以使用適合的方法與各種來源分離，該適合的方法包括但不限于免疫球蛋白結(jié)合分子(例如，蛋白a、l、g或h)、可操作地連接至抗體或抗體片段的標(biāo)志(例如，his標(biāo)志、c-myc標(biāo)志)、親和色譜法等。本文描述的單克隆抗體、其衍生物和變體、和其抗原結(jié)合片段可以通過雜交瘤和/或細胞培養(yǎng)物——其包括單一或混合的雜交瘤群體，該雜交瘤群體包括例如上面標(biāo)題為“雜交瘤”的部分中表述的那些——產(chǎn)生，然后使用已知的技術(shù)分離。在一些實施方式中，單克隆抗體可以通過培養(yǎng)單一(單克隆)種類的雜交瘤細胞——其根據(jù)布達佩斯條約的條款在cellbankaustralia中在登錄號cba20140026下保藏——并從培養(yǎng)物中分離而產(chǎn)生。用于制備和培養(yǎng)雜交瘤細胞系和分離產(chǎn)生的抗體的工藝對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員而言是公知的并且是標(biāo)準(zhǔn)的程序。組合物和試劑盒根據(jù)本發(fā)明的單克隆抗體、其衍生物和變體、和其抗原結(jié)合片段——包括上面標(biāo)題為“單克隆抗體”和“抗體片段、衍生物和變體”的部分中描述的那些——可以作為試劑盒和/或組合物(例如藥物組合物)的成分被包括。通過非限制性實例的方式，本發(fā)明的試劑盒可以包括根據(jù)本發(fā)明的抗體、抗體變體、抗體片段、抗體衍生物、嵌合抗體、或雜交瘤細胞中的任何一種或多種，或任何組合。雜交瘤細胞可以在登錄號cba20140026下保藏于cellbankaustralia。試劑盒可以另外地包括任何數(shù)目的另外的成分，包括例如，用于細胞培養(yǎng)的試劑、參考樣本、緩沖液、標(biāo)記和使用試劑盒的成分執(zhí)行檢測分析的書面指示。試劑盒可以是分離型或組合型試劑盒。本發(fā)明還提供了包括根據(jù)本發(fā)明的抗體、抗體變體、抗體片段、抗體衍生物、嵌合抗體、或雜交瘤細胞中的任何一種或多種的組合物。通過非限制性實例的方式，根據(jù)本發(fā)明的組合物可以包括根據(jù)本發(fā)明的抗體、抗體變體、抗體片段、抗體衍生物、嵌合抗體、或雜交瘤細胞中的任何一種或多種，或任何組合。雜交瘤細胞可以在cellbankaustralia中在登錄號cba20140026下保藏。組合物可以是藥物組合物。該藥物組合物可以包括藥學(xué)上可接受的稀釋劑、賦形劑和/或運載體，如本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的。為了制備該藥物組合物，包含的成分(一種或多種)可以與藥學(xué)上可接受的稀釋劑、運載體和/或賦形劑(參見例如，remington’spharmaceuticalsciencesandu.s.pharmacopeia:nationalformulary,mackpublishingcompany,easton,pa.(1984))混合。治療和診斷劑的制劑(formulation)可以通過與生理學(xué)上可接受的運載體、賦形劑或穩(wěn)定劑混合而制備，該運載體、賦形劑或穩(wěn)定劑是例如水溶液或懸浮液、凍干粉末、漿液的形式(參見，gennaro(2000)remington:thescienceandpracticeofpharmacy，lippincott，williams和wilkins，紐約，n.y.；weiner和kotkoskie(2000)excipienttoxicityandsafety，marceldekker,inc.，紐約，n.y.；avis等(eds.)(1993)pharmaceuticaldosageforms:parenteralmedications，marceldekker，ny；lieberman等(eds.)(1990)pharmaceuticaldosageforms:tablets，marceldekker，ny；hardman等(2001)goodmanandgilman’sthepharmacologicalbasisoftherapeutics，mcgraw-hill，紐約，n.y.；lieberman等(eds.)(1990)pharmaceuticaldosageforms:dispersesystems，marceldekker，ny)。檢測方法本發(fā)明提供了用于檢測和/或定量對象(例如對象的細胞)中g(shù)pc-1蛋白的表達的方法。該方法包括從對象獲得細胞、組織樣本和/或體液樣本，將細胞、組織和/或體液樣本與根據(jù)本發(fā)明的抗體、抗體變體、抗體片段、抗體衍生物或嵌合抗體(例如，在上面標(biāo)題為“單克隆抗體”和“抗體片段、衍生物和變體”的部分中描述的那些)接觸，并確定和/或定量所述抗體、抗體變體、抗體片段、抗體衍生物或嵌合抗體與對象的細胞、組織樣本或體液樣本的結(jié)合。用于檢測的gpc-1可以存在于細胞的表面上和/或內(nèi)部地表達。體液可以是尿。細胞或組織樣本可以是前列腺細胞或前列腺組織。檢測和/或定量gpc-1表達可以使用本領(lǐng)域中任何已知的手段進行，包括例如流式細胞術(shù)和/或elisa。在一些實施方式中，在方法中使用的抗體、抗體變體、抗體片段、抗體衍生物或嵌合抗體通過根據(jù)本發(fā)明的雜交瘤(例如在上面標(biāo)題為“雜交瘤”的部分中描述的雜交瘤)產(chǎn)生。在一些實施方式中，抗體是由雜交瘤細胞產(chǎn)生的單克隆抗體，該雜交瘤細胞在cellbankaustralia中在登錄號cba20140026下保藏。在一些實施方式中，包括單一種類的抗體、抗體變體、抗體片段、抗體衍生物或嵌合抗體的溶液——其能夠檢測gpc-1——被應(yīng)用至可能潛在地包含gpc-1的細胞、組織和/或體液樣本。單一種類可以通過雜交瘤細胞產(chǎn)生，該雜交瘤細胞在cellbankaustralia中在登錄號cba20140026下保藏。另外地，包括多個種類的抗體、抗體變體、抗體片段、抗體衍生物和/或嵌合抗體的溶液可以被應(yīng)用至可以包含gpc-1的細胞、組織和/或體液樣本，其中溶液中的至少一個種類能夠檢測gpc-1。能夠檢測gpc-1的種類可以通過雜交瘤細胞產(chǎn)生，該雜交瘤細胞在cellbankaustralia中在登錄號cba20140026下保藏。在這樣的實施方式中，包括多個種類的溶液不包括這樣的抗體，其由在美國組織型培養(yǎng)物保藏所(atcc)中在登錄號hb11785下保藏的雜交瘤細胞和/或能夠產(chǎn)生包括下述的抗體的雜交瘤細胞產(chǎn)生，輕鏈可變區(qū)，其包括如下的任何一種或多種：互補決定區(qū)1(cdr1)，其包括由seqidno:6的48-58位限定的氨基酸序列或由其組成；互補決定區(qū)2(cdr2)，其包括由seqidno:6的74-80位限定的氨基酸序列或由其組成；互補決定區(qū)3(cdr3)，其包括由seqidno:6的113-121位限定的氨基酸序列或由其組成和/或由選自下列的任何一個或多個的序列限定的一個或多個輕鏈可變區(qū)fr(構(gòu)架區(qū))：seqidno:6的殘基25-47、seqidno:6的殘基59-73、seqidno:6的殘基81-112、seqidno:6的殘基122-131。在一些實施方式中，在從對象獲得的細胞、組織和/或體液樣本中檢測的gpc-1表達的水平可以與對照細胞樣本或者樣本群體參比的gpc-1表達水平進行比較。在一些實施方式中，與對照或參比相比在對象中增加的gpc-1表達的確定可以是對象中疾病的診斷，或?qū)ο笾谢技膊〉脑黾拥目赡苄?。疾病可以是前列腺癌。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將理解，可以如具體實施方式中公開的對本發(fā)明進行許多變化和/或修飾，而不背離寬泛描述的本發(fā)明的精神或范圍。因此，本發(fā)明的實施方式在所有方面被視為是說明性的而不是限制性的。實施例現(xiàn)在將參照具體實施例來描述本發(fā)明，這些實施例不應(yīng)當(dāng)被解釋為在任何方面是限制性的。實施例1：來自mil-38雜交瘤群體的抗體的分析1.1材料和方法-mil-38抗體制劑制劑mil-38抗體雜交瘤從下列來源獲得：(i)blca-38雜交瘤的內(nèi)部細胞原種被用于生成一系列mil-38抗體制劑，命名為16a、16b、16c、17b、23a-1、23a-2、24a、25a、25b、26b、30a、31a、31b、31c、31d、32b、32c、33a、33b、33c、33d、34a、34b、35a、35c、35d、40a、40b。(ii)來自內(nèi)部原種的一批細胞被用于生成mil-38雜交瘤制劑ausmab1和2(am-1和am-2)。(iii)blca-38雜交瘤的原始保藏的小瓶從atcc重新得到(登錄號hb11785：鼠科雜交瘤blca-38)。其被培養(yǎng)并且內(nèi)部細胞原種被制備。來自該原始原種的抗體制劑被命名為“原始的”(1-o)和“原始的iia”；(iv)“原始的”細胞的小瓶被用于生成抗體制劑ausmab3(am-3)和隨后生成抗體制劑ausmab4和5(am-4、am-5)。細胞被用于生成ausmab3和被用于生成ausmab4和5的細胞在兩批中分別地被冷凍。(v)從這些冷凍的細胞，被稱為“alfioi”的制劑從被用于制備am-4和am-5的細胞原種生成，和被稱為“alfioii”的制劑從被用于生成am-3的細胞原種生成。(vi)來自blca-38雜交瘤(hb11785)的原始保藏的細胞的早期傳代(<6)冷凍被用于執(zhí)行單一細胞克隆并提供許多克隆體以表征。mil-381f5克隆體被選擇并且在cellbankaustralia中在登錄號cba20140026下保藏。被用作生成上面(i)-(vi)中描述的制劑的基礎(chǔ)的雜交瘤原種如在walker等的美國專利號5,622,8361中描述的制備，該專利的全部內(nèi)容通過交叉引用被并入本文。對于mil-38抗體的純化，冷凍的細胞原種被快速地解凍，然后在rpmi1640培養(yǎng)基中再懸浮并且使其在37℃下利用5％co2生長24h。以順序過程擴展、分裂并按比例增加細胞。在每個步驟中，將細胞再懸浮在新鮮培養(yǎng)基中并在37℃下利用5％co2孵育。在按比例增加之后，將細胞轉(zhuǎn)移至無血清培養(yǎng)基并且生長直到開始死亡期。收獲上清液以收集mil-38抗體并且過濾殺菌?？贵w上清液在-80℃下儲存直到達到要求。使用pierce蛋白g根據(jù)制造商的推薦純化抗體。用于生成ausmab克隆體am-1-am-5的細胞如下制備。細胞在dmem+10％fcs中復(fù)活。一旦生長良好，將它們克隆(參見下文)、擴展并冷凍。然后使細胞脫離fcs并轉(zhuǎn)移至gibcohsfm無血清培養(yǎng)基(通常脫離持續(xù)5天)。在將細胞接種入生物反應(yīng)器中之前，改變的連續(xù)稀釋被執(zhí)行以獲得在96孔板中獲得單細胞/孔。條件培養(yǎng)基被用于促進單一細胞生長。在平板培養(yǎng)后3天觀察個別孔，并且計數(shù)每個孔的4-8個細胞克隆體的數(shù)目。僅獲得單菌落的孔被選擇用于擴展。抗體的表達在擴展之前被確認(rèn)。在擴展之后，將細胞的一部分轉(zhuǎn)移至integra兩隔室生物反應(yīng)器，同時剩余的細胞被冷凍。根據(jù)制造商的指示在生物反應(yīng)器中生長細胞。在收獲之后，使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)純化抗體。-蛋白質(zhì)印跡和sypro凝膠分析蛋白提取物：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)組織培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)du-145(mil-38抗原陽性)或c3(mil-38抗原陰性)細胞。使用merckmilliporeproteoextract天然膜蛋白提取試劑盒(membraneproteinextractionkit)(mpek)根據(jù)制造商的指示富集細胞膜蛋白。轉(zhuǎn)移：在2.5a和25v最大值下使用transblotturbo系統(tǒng)(biorad)將凝膠轉(zhuǎn)移至硝酸纖維膜上持續(xù)10min。蛋白質(zhì)印跡：簡言之，在轉(zhuǎn)移之后，在室溫下利用在pbs吐溫(0.1％)中的5％脫脂牛奶封閉膜持續(xù)2h。第一抗體(1μg/ml，在5％脫脂牛奶-pbs吐溫(0.1％)中)被應(yīng)用并且在4℃下孵育過夜。在清洗之后(3x10minpbs吐溫(0.1％))，利用第二抗體(1:2000綿羊-抗-小鼠hrp標(biāo)記的，在5％脫脂牛奶-pbs吐溫(0.1％)中)孵育膜。在清洗之后(3x10minpbs吐溫(0.1％))，通過使用ecl檢測試劑盒(biorad)并利用las4000mini(gelifescience)成像來檢測抗原。sypro凝膠：將凝膠在固定液(10％乙醇，7％乙酸)中固定2h，然后被轉(zhuǎn)移至ruby染色劑中并在黑暗中在室溫下孵育過夜。在成像之前，沖洗凝膠并用脫色液(10％乙醇，7％乙酸)洗滌持續(xù)最大2h。用pharosx掃描儀進行成像。-免疫熒光試驗(ifa)ifa：將細胞在蓋玻片上生長直到75％匯合，并放置在6孔板中。用pbs洗滌細胞，然后用丙酮固定。再次用pbs洗滌細胞，然后用tbs孵育，然后用包含5％脫脂牛奶的pbs封閉。細胞然后在黑暗中用mil-38、嵌合的mil-38或西妥昔單抗孵育，然后用標(biāo)記有fitc或alexa488的山羊抗-小鼠或山羊抗-人抗體孵育。兩種抗體在包含1％脫脂牛奶的pbs中制備。在第一抗體和第二抗體孵育之間進行利用pbs的洗滌。在第二孵育之后，用包含dapi的pbs洗滌細胞，并且可視化用于綠色熒光(mil-38陽性)。-sds-page電泳sds-page：將樣本與包含非還原sds的樣本緩沖液混合并加載至4-15％預(yù)制聚丙烯酰胺凝膠上(criteriontgx；biorad)。在tris甘氨酸中在80v下運行10min，并在200v下運行另外的50min。1.2結(jié)果-蛋白質(zhì)印跡源自下列來源的mil-38抗體的制劑一起被比較：(i)來自atcc的雜交瘤細胞(制劑1-o，“原始的”)；(ii)從由申請人公司保持的雜交瘤細胞產(chǎn)生的抗體的兩個單獨的制劑(制劑37a和40a)；觀察到所有三種制劑的等價蛋白質(zhì)印跡反應(yīng)性(圖1)。所有三種制劑提供了重鏈和輕鏈二者的雙帶，這表明非克隆群體。-免疫熒光試驗(ifa)在多種細胞系上使用的不同抗體制劑(“1-原始的”(1-o)、40a和37a)提供了等價ifa反應(yīng)性(圖1)。表1：各個細胞系上的不同抗體mil-38制劑的ifa反應(yīng)性nb：-來自制品1-o(“1-原始的”)、40a和37a的抗體在一系列細胞系上用于ifa-觀察到所有三種制品的可比較的ifa反應(yīng)性-不同mil-38抗體制劑的分析源自制劑am-1-am-5(由ausmabptyltd生成)的mil-38抗體制劑和內(nèi)部mil-38抗體制劑33a的大小和反應(yīng)性通過sds-page(圖2a)和蛋白質(zhì)印跡(圖2b)比較?？贵w的內(nèi)部mil-38制劑展示了重鏈和輕鏈二者的雙帶，這表明非克隆群體(參見圖2a)。ausmabmil-38抗體制劑(ausmab1、ausmab3、ausmab4、ausmab5)顯示了重鏈和輕鏈二者的單帶。mil-38抗體制劑33a顯示了重鏈和輕鏈二者的雙帶，這表明非克隆群體。顯著地，ausmab3帶與ausmab1、ausmab4、ausmab5和33a相比展示了較高的mw，這表明在來源1-o原種中存在兩個不同的克隆群體。ausmab3(am-3)抗體也不與mil-38抗原反應(yīng)，而ausmab1、ausmab4、ausmab5和制劑33a與其反應(yīng)(圖2b)。-另外的內(nèi)部mil-38制劑的分析sds-page電泳被用于分析從blca-38雜交瘤原種生成的各種其它mil-38抗體制劑的和儲存在內(nèi)部的重鏈和輕鏈mw。重鏈和輕鏈的雙帶在所有制劑中被觀察到(圖3a)。相反，ausmab4(am-4)抗體制劑顯示了重鏈和輕鏈二者的單帶。各種內(nèi)部mil-38抗體制劑與du-145mpek提取物的蛋白質(zhì)印跡反應(yīng)性在制劑之間是一致的。ausmab4(am-4)與du-145mpek提取物反應(yīng)，而ausmab3(am-3)不與du-145mpek提取物反應(yīng)(圖3b)。1.2討論從這些結(jié)果，明顯的是來自內(nèi)部和atcc原種二者的mil-38雜交瘤原種包含細胞的混合群體?？寺蓚€可辨認(rèn)的群體(ausmab群體)給出不同分子量的兩種抗體。這兩種抗體種類中的一種不與mil-38抗原反應(yīng)，而另一種對從混合群體產(chǎn)生的mil-38顯示了等價反應(yīng)性。實施例2：另外的mil-38抗體制劑的分析2.1材料和方法-mil-38抗體的制備使用源自ausmab3(am-3)或ausmab4(am-4)和ausmab5(am-5)的冷凍的雜交瘤細胞群體的制劑。在am-3的衍生中使用的細胞被稱為“alfioii”。篩選之后，表明am-3不與du-145mpek提取物反應(yīng)，較早的傳代原種被研究以鑒定陽性克隆體。這些早期的傳代細胞被用于衍生am-4并被稱為“alfioi”。兩個細胞原種被保持儲存并且使得mil-38抗體的內(nèi)部產(chǎn)生。對于原始的iia、alfioi和alfioii的mil-38分批產(chǎn)生，原種被快速解凍，然后在rpmi1640培養(yǎng)基中再懸浮并且使其在37℃下利用5％co2生長24h。以順序過程擴展、分裂并按比例增加細胞。在每個步驟中，將細胞再懸浮在新鮮培養(yǎng)基中并在37℃下利用5％co2孵育。在按比例增加之后，將細胞轉(zhuǎn)移至無血清培養(yǎng)基并且生長直到開始死亡期。收獲上清液以收集mil-38抗體并且過濾殺菌?？贵w上清液在-80℃下儲存直到達到要求。使用pierce蛋白g根據(jù)制造商的推薦純化抗體。-蛋白質(zhì)印跡和sypro凝膠蛋白質(zhì)印跡和sypro凝膠的制備基本上根據(jù)在上面的實施例1(參見部分1.1)中列出的方法進行。蛋白質(zhì)印跡在下面的條件下進行：4-12％bis-tris凝膠封閉：過夜蛋白質(zhì)印跡方案：第一抗體1hr，10μg/膜片，洗滌3x10min，第二抗體1hr，第二抗體1/2000山羊-小鼠hrp細胞：針對du-145和c3mpek提取物測試的-免疫熒光試驗免疫熒光試驗基本上根據(jù)在上面的實施例1(參見部分1.1)中列出的方法進行。2.2結(jié)果-蛋白質(zhì)印跡alfioi、alfioii、36a、ausmab和“原始的iia”(從atcchb11785的雜交瘤細胞制備的mil-38制劑)對du-145和c3mpek細胞提取物的蛋白質(zhì)印跡反應(yīng)性被測試。alfioii的蛋白質(zhì)印跡反應(yīng)性類似于制劑am-3的蛋白質(zhì)印跡反應(yīng)性(圖4a)。原始的iia和alfioi類似于制劑36a(內(nèi)部雙克隆)(圖4a)。-sypro凝膠分析在單獨的重鏈部分中的雙帶沒有先前觀察到的清晰，而在單獨的輕鏈部分中的雙帶可以清晰地被區(qū)分。原始的iia、alfioi和36amil-38抗體制劑的單獨的輕鏈部分都包含兩個帶。相比之下，alfioii的單獨的輕鏈部分包含單一輕鏈種類，其具有較高的mw(即，類似am-3mil-38抗體制劑)。注意到，與導(dǎo)致輕鏈種類的較寬帶的其它抗體相比，更多的alfioii抗體被加載至凝膠上。來自am-4mil-38抗體的單獨的重鏈和輕鏈部分與雙克隆或am-3樣形式清楚地區(qū)分(圖4b)。-免疫熒光試驗與蛋白質(zhì)印跡結(jié)果一致，du-145細胞的ifa分析顯示了am-4、alfioi和原始的iia給出了良好的ifa反應(yīng)性，而alfioii(在蛋白質(zhì)印跡中與am-3等價)顯示了在ifa中無反應(yīng)性(圖5a)。任何制劑的無反應(yīng)性利用陰性對照細胞系c3觀察(圖5b)。2.3討論這些分析表明，alfioi是雙克隆mil-38抗體群體，而alfioii是am-3樣(單克隆)抗體群體，并進一步確認(rèn)了mil-38抗體制劑am-4是單克隆抗體群體。因此，明顯的是雙克隆mil-38抗體群體比如alfioi包含有區(qū)別的am-3和am-4單克隆抗體的混合物。實施例3：mil-38抗體群體的elisa試驗的比較3.1材料和方法將96孔板涂覆有在碳酸鹽緩沖液ph9.5中的mil-38制品am-3或am-4(1μg/孔)，過夜。用包含5％脫脂牛奶的pbs吐溫(0.1％)封閉板并洗滌?？乖?從ns0細胞產(chǎn)生的重組人gpc-1)在添加有150mmnacl的bufferii(20mmhepesph7.5，0.5mmedta，0.5％tritonx-100)中稀釋，并在37℃下孵育過夜。利用生物素化的am-4進行檢測，然后利用抗生物素蛋白hrp(1μg/ml)檢測。tmb(sigma目錄號t0440)被加入并且利用停止液(sigmas5814)停止。讀取450nm的吸光度。結(jié)果在圖6a中示出。在第二實驗中，將96孔板涂覆有在pbsph7.2中的mil-38制品34a或am-4(2.5μg/孔)，在室溫下持續(xù)1h。板用在pbs吐溫(0.05％)中的封閉劑酪氨酸(thermo)在37℃下封閉1h。在洗滌之后，抗原(gpc-1ns0)在包含50mm兩性離子緩沖劑和150mmnacl的tbsph7.2中稀釋，并在37℃下孵育1h。利用生物素化的am-4克隆體1f5進行檢測，然后用抗生物素蛋白hrp(1μg/ml)檢測。加入tmb(sigma目錄號t0440)并用tmb停止液(sigmas5814)停止。讀取450nm的吸光度。結(jié)果在圖6b中示出。3.2.1結(jié)果上面描述的第一elisa使用mil-38進行以捕捉重組ns0產(chǎn)生的gpc-1(即mil-38抗原)。該實驗比較用于捕捉的單克隆am-3mil-38和單克隆am-4mil-38。am-3在夾心elisa試驗中不起捕捉劑的功能(圖6a)。當(dāng)將mil-38(34a)的混合群體與從單克隆am-4-1f5克隆體獲得的群體比較時，上比描述的elisa比較獲得的elisa信號。使用am-41f5作為捕捉劑提供了與使用混合的34a抗體群體相比更高的elisa信號(圖6b)。3.2.2討論夾心elisa結(jié)果表明，僅am-4樣形式的單克隆mil-38抗體在檢測抗原作為捕捉試劑中具有實用性，并且包含單克隆群體的捕捉試劑與由混合群體組成的捕捉試劑相比提供了優(yōu)越的elisa信號。實施例4：mil-38抗體群體的序列分析4.1材料和方法-重和輕鏈測序(dna)進行三個不同的測序?qū)嶒?。第一個實驗(編號224945)利用1-o制劑的雙克隆雜交瘤細胞。第二個實驗(編號449295-1)利用來自用于生成am-4的alfioi雜交瘤原種的細胞。第三個實驗(編號449295-5)利用自用于生成am-3的alfioii雜交瘤原種的細胞。對于測序?qū)嶒?24945(1-o)和449295-1(alfioi)，總rna從冷凍的雜交瘤細胞提取，并且cdna由rna合成。然后進行pcr以擴增抗體的可變區(qū)(重鏈和輕鏈)和恒定區(qū)，其然后分別被克隆入標(biāo)準(zhǔn)克隆載體并被測序。按照plusrnapurificationsystem的技術(shù)手冊，從雜交瘤細胞分離總rna?？俽na通過瓊脂糖凝膠電泳分析。按照superscripttmiiifirst-strandsynthesissystem的技術(shù)手冊，使用同種型特異性反義引物或通用引物將總rna轉(zhuǎn)錄入cdna。vh、vl、ch和cl的抗體片段根據(jù)genscript的race的標(biāo)準(zhǔn)操作程序進行擴增。使用標(biāo)準(zhǔn)分子克隆程序?qū)U增的抗體片段分別地克隆入標(biāo)準(zhǔn)克隆載體。進行菌落pcr篩選以鑒定具有正確大小的插入片段的克隆體。具有正確大小的插入片段的不少于五個單一菌落的每個抗體片段被測序。vh和vl質(zhì)粒編碼抗體的全長可變區(qū)與ch1和cl的一部分。ch質(zhì)粒編碼ch1的一部分與ch2和ch3的全長。cl質(zhì)粒編碼cl的一部分。為了得到全長恒定區(qū)或重/輕鏈，由vh和vl質(zhì)粒編碼的恒定區(qū)的部分和由ch和cl編碼的恒定區(qū)的部分分別地通過pcr擴增，并且然后進行重疊延伸pcr以獲得全長dna。具有正確的vh、vl、ch和cl插入片段大小的五個單一菌落被發(fā)送用于測序。測序?qū)嶒?49295-5(alfioii)遭遇獲得與預(yù)期的igg1重鏈序列對應(yīng)的序列的困難。獲得兩種rna制劑。對于第一批細胞，寡脫氧胸苷酸引物和cdsiii引物被用于反轉(zhuǎn)錄(rt)。使用igg1和特異性引物通過pcr擴增vh/ch和部分小鼠β-肌動蛋白基因被擴增為陽性對照。正常的輕鏈帶被容易地獲得，同時在凝膠上僅可以觀察的弱的vh。具有正確的和插入片段大小的五個個別菌落被發(fā)送用于篩選。五個不同克隆體的和基因被發(fā)現(xiàn)為幾乎相同。來自alfioii雜交瘤的共有輕鏈序列在下面列舉。一個非生產(chǎn)性的重鏈序列從八個隨機測序的vh陽性克隆體獲得，如下面所顯示。三種重鏈恒定區(qū)序列從十個隨機測序的ch陽性克隆體(一個igg1ch，一個igg2ach和八個igg2bch)獲得。為了避免潛在的類別轉(zhuǎn)換的影響，進行使用igm特異性引物的ch的擴增，但是沒有獲得目標(biāo)pcr產(chǎn)物。當(dāng)使用重鏈fr1簡并引物擴增全長重鏈(vh-ch)時，也不存在目標(biāo)pcr產(chǎn)物。在幾次常識之后可以獲得沒有生產(chǎn)性的重鏈時，嘗試從第二小瓶的alfioii細胞分離重鏈序列。對于第二小的瓶細胞，寡脫氧胸苷酸引物被被最初地用于反轉(zhuǎn)錄。分別使用igg1、igg2b、igm、iga特異性引物和igg簡并引物擴增vh，并且使用特異性引物擴增獲得生產(chǎn)性的重鏈和非生產(chǎn)性的重鏈，其與前述結(jié)果相同。使用隨機的6核苷酸引物(random6mersprimer)的反轉(zhuǎn)錄也被嘗試，但是沒有成功?？傊呀?jīng)進行了分離輕鏈和重鏈序列的多次嘗試。在對兩批細胞進行不同的嘗試之后，一致地獲得一種重排的輕鏈序列。但是，僅弱的vh目標(biāo)pcr產(chǎn)物被觀察到并且促需不導(dǎo)致任何一致的重鏈序列。結(jié)果-序列總結(jié)表下面的表2提供了研究的抗體的重鏈和輕鏈核苷酸序列與蛋白序列的概述，指示各個內(nèi)部區(qū)的位置。-測序(dna)樣本的分離的總rna與dna標(biāo)記物(標(biāo)記物iii–tiangen，目錄號：md103)一起在1.5％瓊脂糖/gelredtm凝膠上運行。每個樣本的4微升的pcr產(chǎn)物與dna標(biāo)記物(標(biāo)記物iii)一起在1.5％瓊脂糖/gelredtm凝膠上運行。pcr產(chǎn)物被純化并在–20℃下儲存直到進一步使用。五個不同克隆體的vh、vl、ch和cl基因幾乎相同。下面列出的共有序列被確定是由單克隆雜交瘤群體(am-4)產(chǎn)生的抗體的序列。am-4mil-38小鼠igg1重鏈dna共有序列(seqidno:1)小鼠重鏈編碼的序列的個別區(qū)用交替的陰影/非陰影文本突出顯示。位置：1-57＝前導(dǎo)序列；58-147＝構(gòu)架區(qū)(hfr1)；148-162＝互補決定區(qū)(hcdr1)；163-204＝hfr2；205-255＝hcdr2；256-351＝hfr3；352-378＝hcdr3；379-411＝hfr4；412-1383＝恒定區(qū)(ch1-ch3)；703-741＝鉸鏈區(qū)(下劃線的)；1384-1386＝終止密碼子。am-4mil-38小鼠κ輕鏈dna共有序列(seqidno:2)小鼠輕鏈編碼的序列的個別區(qū)用交替的陰影/非陰影文本突出顯示。位置：1-60＝前導(dǎo)序列；61-129＝構(gòu)架區(qū)(lfr1)；130-162＝互補決定區(qū)(lcdr1)；163-207＝lfr2；208-228＝lcdr2；229-324＝lfr3；325-351＝lcdr3；352-381lfr4；382-702＝恒定區(qū)(ck)；703-705＝終止密碼子。上面的重和輕鏈am-4mil-38共有dna序列翻譯為下面的重鏈和輕鏈氨基酸序列：am-4mil-38小鼠igg1重鏈氨基酸共有序列(seqidno:3)小鼠igg1重鏈序列的個別區(qū)在上面的氨基酸序列中指出。位置1-19＝前導(dǎo)序列；20-49＝構(gòu)架區(qū)(hfr1)；50-54＝互補決定區(qū)1(hcd1)；55-68＝hfr2；69-85＝hcdr2；86-117＝hfr3；118-126＝hcdr3；127-137＝hfr4(也被稱為連接區(qū)或j區(qū))；138-461＝igg1鏈恒定區(qū)(ch1–ch3)&終止密碼子(*)。在上面的序列中，鉸鏈區(qū)被加下劃線。am-4共有mil-38輕鏈氨基酸共有序列(seqidno:4)輕鏈氨基酸序列的個別區(qū)如標(biāo)記的指示：位置1-20＝前導(dǎo)序列；21-43＝構(gòu)架區(qū)(lfr1)；44-54＝互補決定區(qū)1(lcdr1)；55-69＝lfr2；70-76＝lcdr2；77-108＝lfr3；109-117＝lcdr3；118-127＝lfr4；128-234＝κ恒定區(qū)(ck)&終止密碼子(*)測序?qū)嶒?24945(1-o)和449295-1(alfioi)之間的共有序列的比較表明輕鏈和重鏈的序列是相同的(參見下面序列比對)。由于這些序列在雙克隆群體(1-o)和am-4-樣alfioi群體之間是一致的，它們?nèi)缟厦嫠霰环Q為“am-4共有序列”。am-3共有序列從am-3樣alfioii細胞不能獲得一致的重鏈序列。從測序?qū)嶒?49295-5(alfioii)獲得的輕鏈序列被一致地獲得，并且與在上面的比對(參見上面的“1.輕鏈比對”)中顯示的其它兩個測序?qū)嶒灥男蛄邢啾龋跇?gòu)架區(qū)和互補決定區(qū)二者中顯示了明顯的區(qū)別。am-3mil-38κ輕鏈dna共有序列(seqidno:5)*輕鏈編碼的序列的個別區(qū)用交替的陰影/非陰影文本突出顯示。位置：1-72＝前導(dǎo)序列；73-141＝構(gòu)架區(qū)(lfr1)；142-174＝互補決定區(qū)(lcdr1)；175-219＝lfr2；220-240＝lcdr2；241-336＝lfr3；337-363＝lcdr3；364-393＝lfr4；394-714＝恒定區(qū)(ck)；715-717＝終止密碼子am-3mil-38輕鏈氨基酸共有序列(seqidno:6)輕鏈氨基酸序列的個別區(qū)如標(biāo)記的指示：位置1-24＝前導(dǎo)序列；25-47＝構(gòu)架區(qū)(lfr1)；48-58＝互補決定區(qū)1(lcdr1)；59-73＝lfr2；74-80＝lcdr2；81-112＝lfr3；113-121＝lcdr3；122-131＝lfr4；132-238＝κ恒定區(qū)(ck)&終止密碼子(*)實施例5：嵌合的mil-38抗體的制備和測試5.1材料和方法-嵌合抗體的制備兩個優(yōu)化的cdna序列被開發(fā)用于克隆目的。這些基于上面在實施例4中鑒定的am-4重鏈和輕鏈共有序列。第一優(yōu)化的cdna序列被用于生成小鼠-人嵌合的重鏈序列：cho密碼子優(yōu)化的cdna序列#1–小鼠-人嵌合的重鏈1404bp(seqidno:7)小鼠-人嵌合的重鏈編碼的序列的個別區(qū)用交替的陰影/非陰影文本突出顯示。位置：1-57＝前導(dǎo)序列；58-147＝構(gòu)架區(qū)(fr1)；148-162＝互補決定區(qū)(cdr1)；163-204＝fr2；205-255＝cdr2；256-351＝fr3；352-378＝cdr3；379-411＝fr4；412-1401＝人恒定區(qū)(ch1-ch3)；706-750＝鉸鏈區(qū)(加下劃線的)；1402-1405＝中止密碼子。生成的第二優(yōu)化的cdna序列被用于生成小鼠-人嵌合抗體輕鏈序列：cho密碼子優(yōu)化的cdna序列#2–小鼠-人嵌合的輕鏈705bp(seqidno:8)小鼠-人嵌合的輕鏈編碼的序列的個別區(qū)用交替的陰影/非陰影文本突出顯示。位置：1-60＝前導(dǎo)序列；61-129＝構(gòu)架區(qū)(lfr1)；130-162＝互補決定區(qū)(lcdr1)；163-207＝lfr2；208-228＝lcdr2；229-324＝lfr3；325-351＝lcdr3；352-381＝lfr4；382-702＝人恒定區(qū)(ck)；703-705＝終止密碼子。嵌合的mil-38小鼠人ch1-ch3鏈?zhǔn)褂脽o血清培養(yǎng)基在懸浮液cho-3e7細胞中瞬時地表達，然后一步純化。cho-3e7細胞在無血清freestyletmcho表達培養(yǎng)基(lifetechnologies,carlsbad,ca,usa)中生長。細胞在錐形瓶(corninginc.,acton,ma)中在37℃下利用5％co2在定軌搖床(vwrscientific,chester,pa)上維持。在轉(zhuǎn)染的那天，dna和pei(polysciences,eppelheim,germany)以最佳比率混合，然后被加入至具有準(zhǔn)備好轉(zhuǎn)染的細胞的燒瓶中。在第6天時收集到的上清液被用于進一步純化。細胞培養(yǎng)肉湯被離心，接著過濾。將過濾的上清液以3.0ml/min加載至5ml蛋白acip柱(genscript，目錄號l00433)上。在洗滌并用適合的緩沖液稀釋之后，收集餾分并用1mtris-hcl，ph9.0中和。純化的蛋白通過sds-page、蛋白質(zhì)印跡，通過使用分子量、產(chǎn)量和純化措施的標(biāo)準(zhǔn)方案進行分析。-嵌合的mil-38抗體試驗(載玻片免疫熒光)mil-38嵌合抗體與du-145細胞一起被用于免疫熒光試驗中。鼠科mil-38制品33a被用作gpc-1抗原染色的陽性對照，而西妥昔單抗(靶向egfr的嵌合抗體)被用作人igg恒定區(qū)的染色的陽性對照。具有第一抗體的載玻片被用作陰性對照。除了第二抗體用alexafluor488標(biāo)記和抗人抗體被用于染色嵌合的和西妥昔單抗樣本之外，染色基本上如部分1.1中描述的進行。-嵌合的mil-38蛋白質(zhì)印跡嵌合的mil-38和鼠科mil-38針對du-145和c3mpek提取物以及對重組體ns0產(chǎn)生的gpc-1抗原的反應(yīng)性通過蛋白質(zhì)印跡測試。蛋白質(zhì)印跡通過鼠科mil-38或嵌合的mil-38探測。嵌合的mil-38通過山羊抗人第二抗體，接著綿羊-抗-山羊hrp抗體檢測。作為對照，鼠科mil-38通過山羊抗小鼠第二抗體，接著綿羊-抗-山羊hrp抗體檢測。當(dāng)在等價條件下檢測時，對于嵌合的mil-38和鼠科mil-38觀察到等價反應(yīng)性。圖9a示出了用鼠科mil-38，接著抗小鼠hrp第二抗體探測的蛋白質(zhì)印跡。圖9b示出了用嵌合的mil-38，接著山羊抗人hrp第二抗體探測的蛋白質(zhì)印跡。使用綿羊-抗-山羊hrp抗體檢測復(fù)合物。圖9c示出了用鼠科mil-38，接著山羊抗人小鼠抗體探測的蛋白質(zhì)印跡。使用綿羊-抗-小鼠hrp抗體檢測復(fù)合物。5.2結(jié)果-嵌合抗體序列的表達編碼嵌合的mil-38小鼠人ch1-ch3鏈的重鏈和輕鏈的重組質(zhì)粒瞬時地被轉(zhuǎn)染入懸浮液cho-3e7細胞培養(yǎng)物中。通過蛋白acip5ml柱接著緩沖液交換從細胞培養(yǎng)物上清液捕捉目標(biāo)蛋白。純化的蛋白通過在圖7a和7b中顯示的sds-page和蛋白質(zhì)印跡進行分析。將3g樣本加載至sds-page上并且將0.3g總蛋白質(zhì)加載在蛋白質(zhì)印跡上。用于蛋白質(zhì)印跡的第一抗體是山羊抗-人igg–hrp(genscript，目錄號a00166)。-嵌合抗體序列優(yōu)化的cdna序列#1(seqidno:7)被用于生成具有下列氨基酸序列的嵌合的mil-38抗體重鏈：嵌合的mil-38小鼠人ch1-ch3鏈序列小鼠vh-人ch1-ch3鏈(重鏈)(seqidno:9)小鼠-人嵌合的重鏈序列的個別區(qū)域在上面的氨基酸序列中指出：位置1-19＝前導(dǎo)序列；20-49＝構(gòu)架區(qū)(hfr1)；50-54＝互補決定區(qū)1(hcd1)；55-68＝hfr2；69-85＝hcdr2；86-117＝hfr3；118-126＝hcdr3；127-137＝hfr4(也被稱為連接區(qū)或j區(qū))；138-467＝igg1鏈恒定區(qū)(ch1-ch3)，&終止密碼子(*)。鉸鏈序列-人igg1重鏈鉸鏈序列在上面加下劃線。優(yōu)化的cdna序列#2(seqidno:8)被用于生成具有下列氨基酸序列的嵌合的mil-38抗體輕鏈：嵌合的mil-38小鼠-人κ輕鏈序列：小鼠vk-人ck序列(seqidno:10)小鼠-人嵌合的輕鏈氨基酸序列的個別區(qū)如標(biāo)記的指出：位置1-20＝前導(dǎo)序列；21-43＝構(gòu)架區(qū)(lfr1)；44-54＝互補決定區(qū)1(lcdr1)；55-69＝lfr2；70-76＝lcdr2；77-108＝lfr3；109-117＝lcdr3；118-127＝lfr4；128-234＝κ恒定區(qū)(ck)&終止密碼子(*)-嵌合的mil-38抗體試驗(載玻片免疫熒光)圖8a-d示出了細胞的明視野圖像。圖8e示出了33a陽性對照的染色。圖8f示出了嵌合的mil-38抗體的染色。圖8g示出了使用商業(yè)嵌合的(小鼠/人)單克隆抗體(西妥昔單抗)陽性對照的染色，和圖8h示出了無第一抗體陰性對照染色。在圖8e、f和g中觀察到強染色并且在圖8h中沒有觀察到染色。這些結(jié)果證明嵌合的mil-38抗體在ifa中成功地結(jié)合du-145細胞，這表明親代鼠科mil-38抗體的結(jié)合特異性已經(jīng)被維持。-嵌合的mil-38抗體試驗(蛋白質(zhì)印跡)圖9a示出了利用鼠科mil-38，接著抗小鼠hrp第二抗體探測的蛋白質(zhì)印跡。圖9a中示出的蛋白質(zhì)印跡的曝光時間是30秒。圖9b示出了利用嵌合的mil-38，接著山羊抗人第二抗體探測的蛋白質(zhì)印跡。使用綿羊-抗-山羊hrp抗體檢測復(fù)合物。圖9b中示出的蛋白質(zhì)印跡的曝光時間是30秒。圖9c示出了利用鼠科mil-38，接著山羊抗小鼠抗體探測的蛋白質(zhì)印跡。使用綿羊-抗-山羊hrp抗體檢測復(fù)合物。圖9c中示出的蛋白質(zhì)印跡的曝光時間是30分鐘。鼠科mil-38抗小鼠識別du-145溶菌產(chǎn)物和重組體gpc-1ns0中的抗原。在c3溶菌產(chǎn)物中沒有觀察到期望的反應(yīng)性(圖9a)。三抗體檢測方法(three-antibodydetectionmethod)被要求來測試具有du-145和c3提取物以及重組體ns0gpc-1的嵌合的mil-38的反應(yīng)性(圖9b)。使用三抗體檢測方法的對照蛋白質(zhì)印跡也利用鼠科mil-38進行(圖9c)。當(dāng)使用三抗體檢測方法時，與使用標(biāo)準(zhǔn)二抗體方法(standardtwoantibodymethod)相比，檢測的靈敏度是遠遠不及的(對于圖9a和圖9c中示出的蛋白質(zhì)印跡，用于圖9a的曝光時間是30秒，而用于圖9c的是30分鐘)。如圖9b中所示，當(dāng)使用該方法檢測時，嵌合的mil-38識別重組體gpc-1ns0抗原，并且顯示了與鼠科mil-38的比得上的反應(yīng)性(比較圖9b和圖9c)。5.3討論嵌合的mil-38抗體在懸浮液cho-3e7細胞中成功地表達并且純化?；趕ds-page和蛋白質(zhì)印跡分析，目標(biāo)抗體的h和l鏈被檢測為具有估計的分子量～55kda(計算分子量～52kda)和28kda(計算分子量～26kda)。嵌合的mil-38和鼠科親代之間的等價反應(yīng)性在ifa和蛋白質(zhì)印跡中被觀察到，這表明結(jié)合特異性已經(jīng)在嵌合抗體的構(gòu)建中被維持。序列表<110>美儂米克國際有限公司<120>單克隆抗gpc-1抗體和其用途<130>p107105c<160>10<170>patentinversion3.5<210>1<211>1386<212>dna<213>小家鼠<400>1atggcttgggtgtggaccttgctattcctgatggctgctgcccaaagtatccaagcacag60atccagttggtgcagtctggacctgagctgaagaagcctggagagacagtcaagatctcc120tgcaaggcttctggttatgccttcacagactattcaatgaactgggtgaagcaggctcca180ggaaagggtttaaggtggatgggctggataaacactgagactggtgagccaacatataca240gatgacttcaagggacggtttgccttctctttggaaacctctgccagcactgcctttttg300cagatcaacaacctcagaaatgaagacacggctacatatttctgtgctagacactatgat360tacggggggtttccttactggggccaagggactctggtcactgtctctgcagccaaaacg420acacccccatctgtctatccactggcccctggatctgctgcccaaactaactccatggtg480accctgggatgcctggtcaagggctatttccctgagccagtgacagtgacctggaactct540ggatccctgtccagcggtgtgcacaccttcccagctgtcctgcagtctgacctctacact600ctgagcagctcagtgactgtcccctccagcacctggcccagcgagaccgtcacctgcaac660gttgcccacccggccagcagcaccaaggtggacaagaaaattgtgcccagggattgtggt720tgtaagccttgcatatgtacagtcccagaagtatcatctgtcttcatcttccccccaaag780cccaaggatgtgctcaccattactctgactcctaaggtcacgtgtgttgtggtagacatc840agcaaggatgatcccgaggtccagttcagctggtttgtagatgatgtggaggtgcacaca900gctcagacgcaaccccgggaggagcagttcaacagcactttccgctcagtcagtgaactt960cccatcatgcaccaggactggctcaatggcaaggagttcaaatgcagggtcaacagtgca1020gctttccctgcccccatcgagaaaaccatctccaaaaccaaaggcagaccgaaggctcca1080caggtgtacaccattccacctcccaaggagcagatggccaaggataaagtcagtctgacc1140tgcatgataacagacttcttccctgaagacattactgtggagtggcagtggaatgggcag1200ccagcggagaactacaagaacactcagcccatcatggacacagatggctcttacttcgtc1260tacagcaagctcaatgtgcagaagagcaactgggaggcaggaaatactttcacctgctct1320gtgttacatgagggcctgcacaaccaccatactgagaagagcctctcccactctcctggt1380aaatga1386<210>2<211>705<212>dna<213>小家鼠<400>2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