一種活性多糖的提取方法及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種活性多糖的提取方法，其包括如下步驟：(1)準(zhǔn)備紅豆杉原料；(2)回流脫脂、抽慮，將紅豆杉原料用6號(hào)溶劑油回流脫脂，抽慮，對(duì)濾渣進(jìn)行干燥處理，得到干燥的濾渣；(3)酶解，將所述干燥的濾渣在浸泡劑中攪拌浸泡，然后加入占濾渣重量0.5％～1％的纖維素酶，得到混合液A，調(diào)節(jié)混合液A的pH至5.0～5.5，第一次酶解；然后加入占濾渣重量0.3％～1.0％的中性蛋白酶，得到混合液B，調(diào)節(jié)混合液B的pH至6.8～7.0，第二次酶解，滅酶，得到漿液；(4)回流提?。?5)制備粗多糖。本活性多糖的提取方法可加速多糖的釋放速度、減少工藝步驟、縮短提取時(shí)間，并提高提取率。
【專利說明】一種活性多糖的提取方法及其應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種活性多糖的提取方法，本發(fā)明還涉及一種活性多糖的應(yīng)用，屬于 藥用植物開發(fā)領(lǐng)域。

【背景技術(shù)】
[0002] 多糖是由十個(gè)以上單糖由糖苷鍵連接而成的聚合物，廣泛存在于生物界中，其分 子量從數(shù)萬到數(shù)百萬，有的高達(dá)上千萬。多糖是構(gòu)成生命活動(dòng)的四大物質(zhì)之一，并與維持生 命所需的多種生理功能密切相關(guān)。其最突出的功能主要有增強(qiáng)機(jī)體免疫能力、抗腫瘤作用、 抗凝血作用，此外還具有抗病毒，降血糖、降血脂、促進(jìn)核酸和蛋白質(zhì)合成等生理功能。
[0003] 紅豆杉是一種珍貴的藥用植物，是紅豆杉科紅豆杉屬植物的總稱。紅豆杉的藥用 價(jià)值早在《本草綱目》中就有記載，主要用于治療霍亂、傷寒及用于排毒?，F(xiàn)代中醫(yī)亦將其 用于治療糖尿病、腎病及婦科疾病等。1993年，美國將其從紅豆杉中分離提取的紫杉醇類 藥物投入市場(chǎng)，用于治療多種惡性腫瘤，紅豆杉便成為研究的熱門藥用植物之一。目前已從 紅豆杉植物中分離出400多種化合物，主要成分為紫杉烷類和非紫杉烷類兩種。紫杉烷類 為紫杉烷二萜類化合物，非紫杉烷類化合物主要為三萜、留體、高萜、黃酮、苯丙素類和酚類 等。隨著人們對(duì)紅豆杉的深入研究，紅豆杉其他成分的藥用功能逐步得到開發(fā)，研究報(bào)道紅 豆杉多糖有抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)和預(yù)防控制心肌缺血再灌注損傷等功能。近年來，紅豆杉的人 工種植面積不斷擴(kuò)大，全面開發(fā)利用紅豆杉的生物活性成分，提高紅豆杉的綜合利用價(jià)值， 對(duì)紅豆杉資源的合理利用和可持續(xù)發(fā)展具有重大意義。
[0004] 多糖的提取方法很多，常用的主要有溶劑法、酸法、堿法、酶解法、超濾及二氧化碳 超臨界萃取等方法，主要步驟就是破壞細(xì)胞壁、提取多糖，但是這些提取方法提取速度及提 取率都有待提1?。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明所要解決的第一個(gè)技術(shù)問題是針對(duì)技術(shù)現(xiàn)狀提供一種提取率高、提取速度 快的活性多糖的提取方法。
[0006] 本發(fā)明所要解決的第二個(gè)技術(shù)問題是提供一種活性多糖的應(yīng)用。
[0007] 本發(fā)明解決上述第一個(gè)技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為：一種活性多糖的提取方 法，包括如下步驟：
[0008] (1)準(zhǔn)備紅豆杉原料；
[0009] (2)回流脫脂、抽慮，將紅豆杉原料用6號(hào)溶劑油回流脫脂，抽慮，對(duì)濾渣進(jìn)行干燥 處理，得到干燥的濾渣；
[0010] (3)酶解，將所述干燥的濾渣在浸泡劑中攪拌浸泡，然后加入占濾渣重量0. 5%? 1 %的纖維素酶，得到混合液A，調(diào)節(jié)混合液A的pH至5. 0?5. 5,例如5. 2、5. 3、5. 4,第一次 酶解；然后加入占濾渣重量〇.3%?1.0%(例如0.5%、0.7%、0.8%)的中性蛋白酶，得 到混合液B，調(diào)節(jié)混合液B的pH至6. 8?7. 0,第二次酶解，滅酶，得到漿液；
[0011] (4)回流提取，對(duì)所述漿液進(jìn)行回流提取處理，得到提取液，第一次離心分離，得到 的上清液濃縮，獲得濃縮液，所述濃縮液醇沉，第二次離心分離，獲得沉淀物；
[0012] (5)由沉淀物獲得粗多糖。
[0013] 其中，步驟（1)的操作過程為，紅豆杉枝和/或葉烘干、粉碎，過80?100目（例 如85目、90目、95目、98目）篩，篩下物即為紅豆杉原料。其中，紅豆杉優(yōu)選為人工栽培南 方紅豆杉。
[0014] 其中，步驟（2)中，所述回流脫脂的操作過程為，將紅豆杉原料置于回流提取罐 中，加入紅豆杉原料重量3?5倍的6號(hào)溶劑油，回流脫脂5?7h (例如5. 5h、6h、6. 5h)。
[0015] 其中，步驟（2)中，抽慮后回收6號(hào)溶劑油，所得的粗油脂精制得到紅豆杉精油；
[0016] 優(yōu)選的，步驟（2)中，對(duì)所述濾渣進(jìn)行干燥處理的操作過程為，將所述濾渣置于干 燥室內(nèi)風(fēng)干，得到干燥的濾渣。
[0017] 其中，步驟（3)中，所述攪拌浸泡的操作過程為，將干燥后的濾渣置于加熱攪拌罐 中，加入濾渣重量10?20倍（例如13倍、15倍、18倍）的浸泡劑，于45°C?55°C (例如 48°C、50°C、52°C )下攪拌浸泡 10 ?30min(例如 15min、20min、25min);
[0018] 優(yōu)選浸泡劑為水。
[0019] 其中，步驟（3)中，所述第一次酶解的時(shí)間為1.5?2. 5h，第一次酶解的溫度為 50?60°C;所述第二次酶解的時(shí)間為50?70min，例如55111；[11、60111；[11、65111；[11，第二次酶解后 升溫至沸，滅酶5?20min，例如8min、lOmin、15min，得到楽液。
[0020] 其中，步驟（4)中，所述回流提取處理的操作過程為，將所述漿液轉(zhuǎn)至回流提取罐 中，于85?95°C下回流提取2?4h ;
[0021] 優(yōu)選的，步驟（4)中，所述濃縮液的濃度為20%?40%，例如25%、30%、35% ;
[0022] 優(yōu)選的，步驟（4)中，所述醇沉所用醇為95%的乙醇，其中95%是指純乙醇所占的 體積份數(shù)，所述乙醇的重量為濃縮液重量的3?5倍；
[0023] 優(yōu)選的，步驟（4)中，醇沉?xí)r間為8?12h、例如9h、10h、llh。
[0024] 其中，步驟（5)的操作過程為，所述的沉淀物冷凍干燥，獲得粗多糖。
[0025] 或者，步驟（5)的操作過程為，所述的沉淀物用稀釋劑稀釋，得到稀釋液，所述稀 釋液噴霧干燥，獲得粗多糖；
[0026] 優(yōu)選的，所述稀釋液的濃度為12%?20% ;
[0027] 優(yōu)選稀釋劑為水。
[0028] 本發(fā)明解決上述第二個(gè)技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為：依照上述制備方法制備出 的紅豆杉提取物在制備抗腫瘤、糖尿病、提高免疫力、調(diào)節(jié)血脂水平、降壓、降低血液中膽固 醇含量、預(yù)防冠心病藥物中的應(yīng)用。
[0029] 優(yōu)選的，所述藥物的形式為片劑、膠囊劑或顆粒劑。
[0030] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：本提取方法采用生物酶降解與回流提取相 結(jié)合的方法提取活性多糖，其利用生物酶在溫和的條件下分解植物組織，去除蛋白等成分， 加速了多糖的釋放速度，減少了工藝步驟，并縮短提取時(shí)間、提高了提取率。另外，本提取方 法可降低能耗，并不會(huì)破壞多糖的生理活性。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0031] 圖1為實(shí)施例1制備活性多糖的工藝流程圖。

【具體實(shí)施方式】
[0032] 以下結(jié)合附圖實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)描述。
[0033] 實(shí)施例1
[0034] 一種活性多糖的提取方法，包括如下步驟：
[0035] (1)準(zhǔn)備紅豆杉原料，將紅豆杉枝剪枝切碎、干燥、粉碎，過100目篩，篩下物即為 紅豆杉原料,備用。
[0036] (2)回流脫脂、抽慮，稱取篩下物10kg，置于回流提取罐中，加入紅豆杉原料重量3 倍的6號(hào)溶劑油，回流脫脂6h ;抽慮，回收6號(hào)溶劑油，所得的副產(chǎn)物--粗油脂精制可得 到紅豆杉精油；而將濾渣置于干燥室內(nèi)風(fēng)干，得到干燥的濾渣。
[0037] (3)酶解，將干燥的濾渣置于加熱攪拌罐內(nèi)，加入濾渣重量10倍的浸泡劑--水， 于50°C下低速攪拌浸泡20min ;然后向加熱攪拌罐中加入占濾渣重量0. 8%的纖維素酶，得 到混合液A，調(diào)節(jié)混合液A的pH至5. 5,在50°C下低速攪拌第一次酶解2小時(shí)；再加入占濾 渣重量0. 6%的中性蛋白酶，得到混合液B，調(diào)節(jié)混合液B的pH至7. 0,第二次酶解1小時(shí)， 升溫至90°C，然后滅酶lOmin，得到漿液。
[0038] (4)回流提取，將漿液轉(zhuǎn)入回流提取罐中，于90°C下回流提取2小時(shí)，得到提取液， 第一次離心分離，得到的上清液置于減壓濃縮罐中，減壓濃縮獲得濃度為30%的濃縮液， 濾渣另作它用；向濃縮液中加入占濃縮液重量的4倍的95%的乙醇，低溫沉淀10小時(shí)，該 階段即為醇沉過程，第二次離心分離，的到的上清液泵入回收罐回收乙醇，獲得的沉淀物備 用；
[0039] (5)沉淀物冷凍干燥，得到含量為88. 72%的粗多糖0· 92kg。
[0040] 當(dāng)然在步驟（5)中，也可以先將沉淀物用水稀釋成濃度為12 %?20% (例如 12%)的稀釋液，稀釋液噴霧干燥，也能獲得粗多糖。
[0041] 本實(shí)施例具體的流程圖見圖1。
[0042] 用本實(shí)施例制備的活性多糖可以用來制備抗腫瘤、糖尿病、提高免疫力、調(diào)節(jié)血脂 水平、降壓、降低血液中膽固醇含量、預(yù)防冠心病的藥物，如藥品、保健藥品或保健食品，藥 物的形式為片劑、膠囊劑或顆粒劑。
[0043] 實(shí)施例2
[0044] 一種活性多糖的提取方法，包括如下步驟：
[0045] (1)準(zhǔn)備紅豆杉原料，將紅豆杉枝剪枝切碎、干燥、粉碎，過100目篩，篩下物即為 紅豆杉原料,備用。
[0046] (2)回流脫脂、抽慮，稱取篩下物10kg，置于回流提取罐中，加入紅豆杉原料重量3 倍的6號(hào)溶劑油，回流脫脂6h ;抽慮，回收6號(hào)溶劑油，所得的副產(chǎn)物--粗油脂精制可得 到紅豆杉精油；而將濾渣置于干燥室內(nèi)風(fēng)干，得到干燥的濾渣。
[0047] (3)酶解，將干燥的濾渣置于加熱攪拌罐內(nèi)，加入濾渣重量20倍的浸泡劑--水， 于50°C下低速攪拌浸泡20min ;然后向加熱攪拌罐中加入占濾渣重量1. 0%的纖維素酶，得 到混合液A，調(diào)節(jié)混合液A的pH至5. 5,在50°C下低速攪拌第一次酶解2小時(shí)；再加入占濾 渣重量0. 8%的中性蛋白酶，得到混合液B，調(diào)節(jié)混合液B的pH至7. 0,第二次酶解1小時(shí)， 升溫至90°C，然后滅酶lOmin，得到漿液。
[0048] (4)回流提取，將漿液轉(zhuǎn)入回流提取罐中，于90°C下回流提取2小時(shí)，得到提取液， 第一次離心分離，得到的上清液置于減壓濃縮罐中，減壓濃縮獲得濃度為30%的濃縮液， 濾渣另作它用；向濃縮液中加入占濃縮液重量的5倍的95%的乙醇，低溫沉淀10小時(shí)，該 階段即為醇沉過程，第二次離心分離，的到的上清液泵入回收罐回收乙醇，獲得的沉淀物備 用；
[0049] (5)沉淀物冷凍干燥，得到含量為89. 16%的粗多糖1. 05kg。
[0050] 當(dāng)然在步驟（5)中，也可以先將沉淀物用水稀釋成濃度為12 %?20% (例如 18%)的稀釋液，稀釋液噴霧干燥，也能獲得粗多糖。
[0051] 用本實(shí)施例制備的活性多糖可以用來制備抗腫瘤、糖尿病、提高免疫力、調(diào)節(jié)血脂 水平、降壓、降低血液中膽固醇含量、預(yù)防冠心病的藥物，如藥品、保健藥品或保健食品，藥 物的形式為片劑、膠囊劑或顆粒劑。
[0052] 實(shí)施例3
[0053] -種活性多糖的提取方法，包括如下步驟：
[0054] (1)準(zhǔn)備紅豆杉原料，將紅豆杉枝剪枝切碎、干燥、粉碎，過100目篩，篩下物即為 紅豆杉原料,備用。
[0055] (2)回流脫脂、抽慮，稱取篩下物10kg，置于回流提取罐中，加入紅豆杉原料重量3 倍的6號(hào)溶劑油，回流脫脂6h ;抽慮，回收6號(hào)溶劑油，所得的副產(chǎn)物--粗油脂精制可得 到紅豆杉精油；而將濾渣置于干燥室內(nèi)風(fēng)干，得到干燥的濾渣。
[0056] (3)酶解，將干燥的濾渣置于加熱攪拌罐內(nèi)，加入濾渣重量12倍的浸泡劑--水， 于50°C下低速攪拌浸泡20min ;然后向加熱攪拌罐中加入占濾渣重量0. 6%的纖維素酶，得 到混合液A，調(diào)節(jié)混合液A的pH至5. 5,在50°C下低速攪拌第一次酶解2小時(shí)；再加入占濾 渣重量0. 4%的中性蛋白酶，得到混合液B，調(diào)節(jié)混合液B的pH至7. 0,第二次酶解1小時(shí)， 升溫至90°C，然后滅酶lOmin，得到漿液。
[0057] (4)回流提取，將漿液轉(zhuǎn)入回流提取罐中，于90°C下回流提取2小時(shí)，得到提取液， 第一次離心分離，得到的上清液置于減壓濃縮罐中，減壓濃縮獲得濃度為30%的濃縮液， 濾渣另作它用；向濃縮液中加入占濃縮液重量的3倍的95%的乙醇，低溫沉淀10小時(shí)，該 階段即為醇沉過程，第二次離心分離，的到的上清液泵入回收罐回收乙醇，獲得的沉淀物備 用；
[0058] (5)沉淀物冷凍干燥，得到含量為88. 64%的粗多糖0· 88kg。
[0059] 用本實(shí)施例制備的活性多糖可以用來制備抗腫瘤、糖尿病、提高免疫力、調(diào)節(jié)血脂 水平、降壓、降低血液中膽固醇含量、預(yù)防冠心病的藥物，如藥品、保健藥品或保健食品，藥 物的形式為片劑、膠囊劑或顆粒劑。
[0060] 采用苯酚-硫酸法測(cè)定實(shí)施例1?3制備的粗多糖中活性多糖的含量，檢測(cè)結(jié)果 如下表所示：
[0061]

【權(quán)利要求】
1. 一種活性多糖的提取方法，其特征在于，包括如下步驟： (1) 準(zhǔn)備紅豆杉原料； (2) 回流脫脂、抽慮，將紅豆杉原料用6號(hào)溶劑油回流脫脂，抽慮，對(duì)濾渣進(jìn)行干燥處 理，得到干燥的濾渣； (3) 酶解，將所述干燥的濾渣在浸泡劑中攪拌浸泡，然后加入占濾渣重量0.5%?1% 的纖維素酶，得到混合液A，調(diào)節(jié)混合液A的pH至5. 0?5. 5,第一次酶解；然后加入占濾渣 重量0. 3%?1. 0%的中性蛋白酶，得到混合液B，調(diào)節(jié)混合液B的pH至6. 8?7. 0,第二次 酶解，滅酶，得到漿液； (4) 回流提取，對(duì)所述漿液進(jìn)行回流提取處理，得到提取液，第一次離心分離，得到的上 清液濃縮，獲得濃縮液，所述濃縮液醇沉，第二次離心分離，獲得沉淀物； (5) 由沉淀物獲得粗多糖。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的活性多糖的提取方法，其特征在于：步驟（1)的操作過程為， 紅豆杉枝和/或葉烘干、粉碎，過80?100目篩，篩下物即為紅豆杉原料。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的活性多糖的提取方法，其特征在于：步驟（2)中，所述回流脫 脂的操作過程為，將紅豆杉原料置于回流提取罐中，加入紅豆杉原料重量3?5倍的6號(hào)溶 劑油，回流脫脂5?7h。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的活性多糖的提取方法，其特征在于：步驟（2)中，抽慮后回收 6號(hào)溶劑油，所得的粗油脂精制得到紅豆杉精油； 優(yōu)選的，步驟（2)中，對(duì)所述濾渣進(jìn)行干燥處理的操作過程為，將所述濾渣置于干燥室 內(nèi)風(fēng)干，得到干燥的濾渣。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的活性多糖的提取方法，其特征在于：步驟（3)中，所述攪拌浸 泡的操作過程為，將干燥后的濾渣置于加熱攪拌罐中，加入濾渣重量10?20倍的浸泡劑， 于45°C?55°C下攪拌浸泡10?30min ; 優(yōu)選浸泡劑為水。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的活性多糖的提取方法，其特征在于：步驟（3)中， 所述第一次酶解的時(shí)間為1. 5?2. 5h，第一次酶解的溫度為50°C?60°C ;所述第二次 酶解的時(shí)間為50?70min，第二次酶解后升溫至沸，滅酶5?20min，得到楽液。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的活性多糖的提取方法，其特征在于：步驟（4)中，所述回流提 取處理的操作過程為，將所述漿液轉(zhuǎn)至回流提取罐中，于85?95°C下回流提取2?4h ; 優(yōu)選的，步驟（4)中，所述濃縮液的濃度為20%?40% ; 優(yōu)選的，步驟（4)中，所述醇沉所用醇為95%的乙醇，所述乙醇的重量為濃縮液重量的 3?5倍； 優(yōu)選的，步驟（4)中，醇沉?xí)r間為8?12h。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的活性多糖的提取方法，其特征在于：步驟（5)的操作過程為， 所述的沉淀物冷凍干燥，獲得粗多糖。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的活性多糖的提取方法，其特征在于：步驟（5)的操作過程為， 所述的沉淀物用稀釋劑稀釋，得到稀釋液，所述稀釋液噴霧干燥，獲得粗多糖； 優(yōu)選的，所述稀釋液的濃度為12%?20% ; 優(yōu)選稀釋劑為水。
10.根據(jù)權(quán)利要求1至9任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的制備方法制備出的紅豆杉提取物在制 備抗腫瘤、糖尿病、提高免疫力、調(diào)節(jié)血脂水平、降壓、降低血液中膽固醇含量、預(yù)防冠心病 藥物中的應(yīng)用； 優(yōu)選的，所述藥物的形式為片劑、膠囊劑或顆粒劑。
【文檔編號(hào)】C08B37/00GK104250308SQ201410495710
【公開日】2014年12月31日 申請(qǐng)日期:2014年9月24日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月24日
【發(fā)明者】田連忠, 劉雷, 葛月蘭 申請(qǐng)人:江蘇紅豆杉藥業(yè)有限公司