專利名稱：葛藤多糖提取物的制備方法及用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種葛藤多糖提取物及其制備方法和用途，特指具有抗氧化作用的葛
藤多糖提取物，屬于保健食品技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
野葛為豆科多年生落葉藤本植物，兼具藥食兩用價(jià)值。中國(guó)藥典收載的葛根系野 葛的干燥根，在我國(guó)分布很廣，除西藏和新疆外，其余各省區(qū)均有分布，其藥用最早記載于 《神農(nóng)本草經(jīng)》。葛根含有多種活性成分，其中以葛根素、大豆苷和大豆苷元等異黃酮類成分
為主，葛根素可用于治療心血管疾病、心絞痛和心率失常等疾病，大豆苷和大豆苷元可用于 治療和預(yù)防婦女疾病。目前我國(guó)野葛的研究和開(kāi)發(fā)都集中在葛根與葛花部位，而對(duì)葛藤的 研究少，且對(duì)葛藤的研究主要針對(duì)異黃酮類成分，對(duì)多糖等其它活性成分及生物活性的研 究少。葛藤為葛藤莖和葛葉，為農(nóng)業(yè)廢棄物，目前還未得到開(kāi)發(fā)利用。葛藤含有多種活性成 分，主要包括黃酮類、多糖、揮發(fā)油、維生素和礦物質(zhì)等。關(guān)于葛藤異黃酮的研究已有專利報(bào) 道。中國(guó)專利CN1769278A于2006年5月10日公開(kāi)了"從葛藤中提取分離異黃酮的方法"， 從葛藤中分離的總黃酮提取物為葛根素和大豆苷元。中國(guó)專利CN1723989A于2006年1月 25日公開(kāi)了"葛藤提取物、制備方法及用途"，該提取物主要成分為葛藤總黃酮，用于治療婦 女更年期綜合癥藥物。中國(guó)專利CN1911923A于2007年8月23日公開(kāi)了"一種從葛藤中 提取、分離大豆苷元的方法"。本發(fā)明人采用反相高效液相法同時(shí)測(cè)定江蘇茅山地區(qū)野葛的 根、莖和葉中葛根素、大豆苷和大豆苷元的含量(RP-HPLC法同時(shí)測(cè)定野葛的根、莖和葉中 葛根素、大豆苷和大豆苷元的含量，食品科學(xué)，2009， 30 (14) :248-252)，結(jié)果表明，葛藤中葛 根素、大豆苷和大豆苷元含量均遠(yuǎn)低于葛根中的含量，可見(jiàn)葛藤中異黃酮的開(kāi)發(fā)利用價(jià)值 低。多糖是構(gòu)成生命的四大基本物質(zhì)之一，且有多種生物活性。但有關(guān)葛藤多糖及其制備 方法和用途至今未見(jiàn)國(guó)內(nèi)外報(bào)道，也未見(jiàn)相應(yīng)專利公開(kāi)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了克服以上背景技術(shù)的不足，提供一種葛藤多糖提取物及其制 備方法和用途。 用本發(fā)明制備的多糖提取物，多糖含量大于30%，收率在7. 0 10%之間。
制備本發(fā)明的多糖提取物包括下述步驟
A、葛藤粉碎；其中葛藤粉碎至60 150目。 B、多糖提??；以8 20倍量的水提取，在60 IO(TC的溫度下回流提取2 4h， 提取2 4次。C、提取液離心；離心速度為3000 4000r/min。 D、離心后液取上清液濃縮至一定濃度，濃縮的倍數(shù)為8 20倍；加入乙醇沉淀，使
得多糖的濃縮液中乙醇濃度為60 85%，再離心或過(guò)濾法去除不溶物； E、上清液進(jìn)行二次乙醇沉淀，條件同步驟D，再干燥，得葛藤多糖提取物。多糖提取物采用冷凍干燥法，干燥16 30h。 葛藤多糖含量以苯酚_硫酸法測(cè)定。 采用清除羥基自由基、超氧自由基試驗(yàn)考察葛藤多糖抗氧化活性。結(jié)果表明葛藤 多糖具有很好的抗氧化活性，因此本發(fā)明的多糖提取物可用于制備抗氧化的功能性食品。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)本發(fā)明的葛藤多糖提取物制備方法簡(jiǎn)便，可制備成抗氧化的功能 性食品；同時(shí)該發(fā)明可變廢為寶，提升葛根副產(chǎn)品的附加值，提高葛根資源的綜合利用率。
具體實(shí)施例方式
為了更清楚地說(shuō)明本發(fā)明內(nèi)容，用具體實(shí)施例說(shuō)明如下，具體實(shí)施例不限定本發(fā) 明內(nèi)容范圍。 葛藤多糖的制備
實(shí)施例1 取葛藤樣品100g，葛藤粉碎至60目，以8倍量的水于6(TC回流提取2次，每次 2小時(shí)，以3000r/min離心，水提液濃縮至100mL，濃縮液用100mL60 %乙醇醇沉，靜置過(guò) 夜，抽濾，上清液進(jìn)行二次醇沉，冷凍干燥16h得到葛藤多糖提取物7. 23g，其多糖含量為 30. 29%，收率為7. 23%。
實(shí)施例2 取葛藤樣品100g，葛藤粉碎至100目，以15倍量的水于8(TC回流提取3次，每次 3小時(shí)，以3600r/min離心，水提液濃縮至100mL，濃縮液用100mL75%乙醇醇沉，靜置過(guò)夜， 以3600r/min離心，上清液進(jìn)行二次醇沉，冷凍干燥24h得到葛藤多糖提取物8. 39g，其多糖 含量為30. 27%，質(zhì)量收率為8. 39%。
實(shí)施例3 取葛藤樣品100g，葛藤粉碎至150目，以20倍量的沸水回流提取4次，每次4小 時(shí)，4000r/min離心，水提液濃縮至100mL，濃縮液用100mL85 %乙醇醇沉，靜置過(guò)夜，抽濾， 上清液進(jìn)行二次醇沉，冷凍干燥30h得到葛滕多糖提取物9. 4/g，其多糖含量為30. 31 % ，收 率為9. 47%。 葛藤多糖抗氧活性試驗(yàn) 葛藤多糖提取物清除羥基自由基作用 通過(guò)清除羥基自由基試驗(yàn)考察受試樣品的抗氧化活性。 1、實(shí)驗(yàn)材料 1. 1藥品與試劑 葛藤多糖提取物批號(hào)081021，配制成生藥濃度為0. 5mg/mL的水溶液備用； 鄰二氮菲溶液配制成0. 75mmol/L的無(wú)水乙醇溶液； 磷酸鹽緩沖溶液配制成0. 2mol/L pH7. 40的緩沖溶液； 硫酸亞鐵溶液配制成0. 75mmol/L的無(wú)水乙醇溶液； 雙氧水配制成0. 01%的雙氧水。 1. 2儀器 UV2450紫外分光光度計(jì)日本島津公司；
電子天平北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司；
旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀RE-52C :鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司；
冷凍干燥機(jī)FD-1C-50 :北京博醫(yī)康實(shí)驗(yàn)儀器有限公司。
2、實(shí)驗(yàn)方法 取lmL鄰二氮菲溶液于試管中，依次加入2mL磷酸鹽緩沖溶液和lmL蒸餾水，充分 混勻后，加入lmL硫酸亞鐵溶液混勻，再加入lmL雙氧水，于37。C水浴60min，在536nm測(cè)其 吸光值，所測(cè)得的數(shù)據(jù)為損傷管的吸光值(A(損))；以lmL樣品液代替lmL蒸餾水則測(cè)得樣 品的吸光值(A(樣))；用lmL蒸餾水代替lmL雙氧水測(cè)得的吸光值為A(未)。重復(fù)三次。 清除率按下式計(jì)算 清除率S(X) = (A(樣)-A(損))/(A(未)-A(損))X100X
3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

圖1為葛藤多糖提取物和Vc對(duì)羥基自由基的清除效果，可見(jiàn)，多糖提取物的清除 效果好，當(dāng)濃度為lmg/mL時(shí)，清除率為74. 85%，其IC叨值為0. 7511mg/mL，葛藤多糖提取物 清除 OH的能力與Vc(IC5。為0. 3477mg/mL)相近。
4、結(jié)論 葛藤多糖提取物具有很好的清除羥基自由基作用，其清除效果與Vc相近。
實(shí)施例5、葛藤多糖提取物的清除超氧自由基作用
通過(guò)清除超氧自由基試驗(yàn)考察受試樣品的抗氧化活性。
1、實(shí)驗(yàn)材料
1. 1藥品與試劑 葛藤多糖提取物批號(hào)081021，配制成生藥濃度為0. 5mg/mL的水溶液備用； 鄰二氮菲溶液配制成0. 75mmol/L的無(wú)水乙醇溶液； 磷酸鹽緩沖溶液配制成0. 01M pH8. 2的緩沖溶液； 鄰苯三酚溶液配制成45mM的水溶液； 鹽酸配制成10M的鹽酸溶液。 1. 2儀器 UV2450紫外分光光度計(jì)日本島津公司； 電子天平北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司； 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀RE-52C :鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司； 冷凍干燥機(jī)FD-1C-50 :北京博醫(yī)康實(shí)驗(yàn)儀器有限公司。 2、實(shí)驗(yàn)方法 取9mL磷酸鹽緩沖液與lmL樣品液混合，25。C恒溫水浴15min。取3mL混合液于 比色皿中，加入0. lmL鄰苯三酚，搖勻，在第4分鐘加入鹽酸1滴終止反應(yīng)，于325nm處測(cè)定 樣品吸光值(A》，同時(shí)分別測(cè)定不加鄰苯三酚的樣品液和磷酸鹽混合液的吸光值(A2)和以 lmL溶劑代替樣品液的磷酸鹽和鄰苯三酚混合液的吸光值(A》，重復(fù)三次。02—*清除率按 下式計(jì)算 清除率S(X) = [l-(A「A》/A3] X100%
3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果 圖2為葛藤多糖提取物和Vc對(duì)超氧自由基的清除效果，可見(jiàn)，多糖提取物在lmg/ mL時(shí)其清除率達(dá)63. 95%，其IC50值為0. 9229mg/mL(Vc的IC50為0. 2299mg/mL)?？梢?jiàn)多糖提取物清除超氧自由基活性好。
4、結(jié)論 葛藤多糖提取物清除超氧自由基活性好。
權(quán)利要求
葛藤多糖提取物的制備方法，其特征在于包括下述步驟A、葛藤粉碎將葛藤粉碎至60～150目；B、多糖提取以重量計(jì)8～20倍量的水提取，在60～100℃的溫度下回流提取2～4h，提取2～4次；C、提取液離心其中離心速度為3000～4000r/min；D、離心后液取上清液濃縮至一定濃度，濃縮的倍數(shù)為8～20倍；加入乙醇沉淀，使得多糖的濃縮液中乙醇濃度為60～85％，再離心或過(guò)濾法去除不溶物；E、上清液進(jìn)行二次乙醇沉淀，條件同步驟D，再采用冷凍干燥法干燥，干燥16～30h，得葛藤多糖提取物。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法制備的葛藤多糖提取物在制備抗氧化的功能性食品中 的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種葛藤多糖提取物及其制備方法和用途。包括下述步驟A、葛藤粉碎將葛藤粉碎至60～150目；B、多糖提取以重量計(jì)8～20倍量的水提取，在60～100℃的溫度下回流提取2～4h，提取2～4次；C、提取液離心其中離心速度為3000～4000r/min；D、離心后液取上清液濃縮至一定濃度，濃縮的倍數(shù)為8～20倍；加入乙醇沉淀，使得多糖的濃縮液中乙醇濃度為60～85％，再離心或過(guò)濾法去除不溶物；E、上清液進(jìn)行二次乙醇沉淀，條件同步驟D，再干燥，得葛藤多糖提取物。多糖提取物采用冷凍干燥法，干燥16～30h。本發(fā)明的葛藤多糖提取物制備方法簡(jiǎn)便，可制備成抗氧化的功能性食品；同時(shí)該發(fā)明可變廢為寶，提升葛根副產(chǎn)品的附加值，提高葛根資源的綜合利用率。
文檔編號(hào)C08B37/00GK101704904SQ200910235078
公開(kāi)日2010年5月12日 申請(qǐng)日期2009年11月13日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月13日
發(fā)明者仰榴青, 仰玲玲, 吳向陽(yáng), 張敏, 李芳 , 趙婷, 閆舒 申請(qǐng)人:江蘇大學(xué)