香青蘭抗腫瘤提取物及其組合物的醫(yī)藥用途和制備方法
【專利摘要】本發(fā)明屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種維吾爾藥香青蘭抗腫瘤提取物及其組合物的制備方法和其在乳腺癌、肺癌、胃癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、宮頸癌、腦膠質(zhì)瘤、肝癌等惡性腫瘤的預(yù)防及治療上的用途。所述的提取物通過如下方法獲得：先用100:0-100:8的石油醚：丙酮混合溶劑洗脫，繼用100:10的石油醚：丙酮混合溶劑洗脫，洗脫得到的石油醚-丙酮=100:10混合溶劑洗脫液經(jīng)回收有機溶劑，干燥，即為抗腫瘤活性提取物。
【專利說明】
香青蘭抗腫瘤提取物及其組合物的醫(yī)藥用途和制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種維吾爾藥香青蘭抗腫瘤提取物及其組合物 的制備方法或/和其在肝癌、肺癌、胃癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、乳腺癌、宮頸癌、腦膠質(zhì)瘤等惡性 腫瘤的預(yù)防及治療上的用途。 技術(shù)背景
[0002] 本品為唇形科植物香青蘭，學名Dracocephalum moldavica L.，為一年生草本，全 草入藥。耐干旱，苗期要求土壤濕潤，成株較耐早。我國黑龍江、吉林、遼寧、內(nèi)蒙古、河北、 山西、河南、陜西、肅及青海各地都有分布。香青蘭經(jīng)蒸餾得到的精油具有清爽的甜香氣，宜 調(diào)配食用和日用香精。工業(yè)上可用于制作香料的原料，可以制成香青蘭香煙、茶、保健飲料、 糖果和化妝品等。
[0003] 香青蘭功效清胃肝熱、止血、愈合傷口、燥協(xié)日烏素；主治胃肝熱、胃出血、食物中 毒、赫如虎、巴木病等?，F(xiàn)在藥理學研究證明香青蘭具有抗心肌缺血作用和抗冠心病作用。
[0004] 本發(fā)明在研究香青蘭抗腫瘤活性時意外地發(fā)現(xiàn)，香青蘭亦具有很好的腦膠質(zhì)瘤、 乳腺癌、宮頸癌、肝癌、肺癌、胃癌、結(jié)腸癌、胰腺癌等惡性腫瘤的預(yù)防及治療作用，可以應(yīng)用 癌癥的預(yù)防和治療。
[0005] 但是，對其抗腫瘤的有效成分一直不清楚，本發(fā)明通過系統(tǒng)地篩選研究，發(fā)現(xiàn)了香 青蘭的活性提取提取物，可以應(yīng)用于腫瘤的預(yù)防和治療。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明所解決的技術(shù)問題是提供一種香青蘭提取物，該提取物具有抗腦膠質(zhì)瘤、 乳腺癌、肺癌、胃癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、宮頸癌、肝癌等惡性腫瘤的作用。
[0007] 本發(fā)明還提供了以香青蘭提取物作為活性成分的藥物組合物及其制備方法。
[0008] 本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)的：
[0009] 維吾爾藥香青蘭經(jīng)甲醇超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱 用石油醚：丙酮混合溶劑=100:0-0:100梯度洗脫（石油醚：丙酮，洗脫梯度見表1)，各石 油醚：丙酮比例混合溶劑洗脫液經(jīng)濃縮、干燥后，利用體外抗腫瘤活性篩選體系測試其抗腫 瘤活性，意外地發(fā)現(xiàn)先用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:0-100:8,體積比）洗 脫，繼用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:10,體積比）洗脫，石油醚：丙酮100:10 洗脫液干燥后，具有顯著地抗腫瘤活性，而其他比例的洗脫部位，沒有抗腫瘤活性。優(yōu)選地， 先用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:8,體積比）洗脫，繼用石油醚：丙酮混合溶 劑（石油醚：丙酮，100:10,體積比）洗脫，石油醚：丙酮100:10洗脫液干燥即得。本發(fā)明的 抗腫瘤活性的化合物，可以通過以上方法，得到富集，從而與其他雜質(zhì)類成分分離開。該活 性提取物從未見文獻報道，其100:10洗脫液的TLC分析表征如圖I，TLC分析條件：GF 254娃 膠板，展開系統(tǒng)：石油醚-乙酸乙酯-丙酮（6:1:1)，顯色方法：香草醛-硫酸顯色。
[0010] 具體，發(fā)現(xiàn)過程如下： toon] I、香青蘭經(jīng)甲醇超聲提取物的制備
[0012] 取維吾爾藥香青蘭20g，經(jīng)100mL甲醇超聲提取15min，提取液濃縮后，得提取物 SN0238A0. 3421g，留樣 0· 0149g，剩余 0· 3272g。
[0013] 2、石油醚：丙酮混合溶劑梯度洗脫方法和結(jié)果
[0014] 取維吾爾藥香青蘭20g，經(jīng)100mL甲醇超聲提取15min，提取液濃縮后，得提取物 SN0238A0. 3421g，留樣0. 0149g，剩余0. 3272g。上柱，甲醇溶解，共用甲醇15ml。上硅膠柱 色譜，拌樣硅膠0. 42g，空白硅膠5g，玻璃柱內(nèi)徑I. 6cm，石油醚：丙酮系統(tǒng)梯度洗脫（石油 醚：丙酮，體積比，洗脫梯度見表1)，柱體積12. 5ml，每個梯度洗脫100mL，各個濃度提取洗 脫液的洗脫物，回收溶劑，即得，石油醚：丙酮梯度洗脫提取物，TLC分析結(jié)果見圖2、圖3， TLC分析條件：GF254硅膠板，展開系統(tǒng)：石油醚-乙酸乙酯-丙酮（6:1:1)，石油醚-乙酸乙 酯-丙酮（3:1:1)，顯色方法：香草醛-硫酸顯色。
[0015] 表 1
[0018] 3、抗腫瘤活性篩選方法和結(jié)果
[0019] 1)實驗條件
[0020] a)細胞株信息
[0021] 大鼠腦膠質(zhì)瘤細胞株C6購于中國典型培養(yǎng)物保藏中心細胞庫。
[0022] b)藥品及試劑
[0023] 樣品無菌條件下，DMSO溶解配置成母液濃度為100mg/mL，使用時用RPMI-1640培 養(yǎng)液稀釋至所需濃度（DMSO彡1%。）。
[0024] RPMI Medium 1640培養(yǎng)基干粉購于美國GIBCO公司。胎牛血清購于北京元亨圣馬 生物技術(shù)研究所。Trypsin 1:250、二甲基二苯基四氮唑溴鹽（MTT)。
[0025] c)儀器
[0026] CO2培養(yǎng)箱（SANYO,日本）
[0027] 垂直層流潔凈工作臺（上海上凈凈化設(shè)備有限公司）
[0028] 倒置生物顯微鏡（重慶光電儀器有限公司）
[0029] 低/高速臺式離心機（上海安亭科學儀器廠）
[0030] 電子天平（奧豪斯儀器有限公司）
[0031] 酶標儀（伯樂生命醫(yī)學產(chǎn)品有限公司）
[0032] 立式壓力蒸汽滅菌器（上海申安醫(yī)療器械廠）
[0033] 鼓風干燥箱（上海躍進醫(yī)療器械廠）
[0034] PH 計（SART0RIUS，德國）
[0035] 2)實驗方法和過程
[0036] 大鼠腦膠質(zhì)瘤細胞株C6以4000/孔的密度鋪于96孔板，每孔IOOul，12h后使用。 各組分以DMSO溶解為lOOmg/mL儲存液，保存于-20°C待用。鋪板后12h，觀察細胞匯合率 約為40%，加藥，濃度均為100 μ g/mL，每個組分3個復(fù)孔。每板細胞設(shè)立二個對照組（培 養(yǎng)基+細胞；含〇. 1 % DMSO培養(yǎng)基+細胞），3個空白孔（只有培養(yǎng)基）。加入藥物24小 時后，加入20 μ 1四甲基偶氮唑鹽化學名為3-(4, 5-二甲基噻唑）-2, 5-二苯基四氮唑溴鹽 (3_(4, 5-dimethyl_2thiazolyl)-2, 5-diphenyl-tetrazolium bromide，ΜΤΤ)，繼續(xù)培養(yǎng) 4 小時。完全棄去上清液，加入100 μ I DMS0,混勻使MTT完全溶解，去氣泡。490nm測定OD 值。
[0037]
[0038] 3)實驗結(jié)果表
[0039] 表 2

[0043] 結(jié)果發(fā)現(xiàn)：本發(fā)明優(yōu)選的技術(shù)方案為：維吾爾藥香青蘭經(jīng)甲醇超聲提取，提取 液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱，先用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮， 100:8,體積比）洗脫，繼用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:10,體積比）洗脫， 石油醚：丙酮=100:10洗脫液經(jīng)回收有機溶劑，干燥，得到高活性提取物，即為該抗腫瘤的 活性提取物。該活性提取物從未見文獻報道，其TLC分析表征如圖1所示。
[0044] 4、抗腫瘤有效提取物的提取方法研究
[0045] 1)提取溶劑的種類研究
[0046] 分別用甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶劑、乙醇水混合溶劑等有 機溶劑提取，并測試提取物對C6細胞的抗腫瘤活性，結(jié)果如下：
[0047]表 3
[0049] 研究結(jié)果表明：提取用有機溶劑可以為甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水 混合溶劑、乙醇水混合溶劑。
[0050] 2)提取溶劑的用量研究
[0051] 分別用1、2、5、10、20、30、40、50倍（重量/體積比）有機溶劑提取，并測試提取物 對C6細胞的抗腫瘤活性，結(jié)果如下：
[0052] 表 4
[0053]
[0056] 提取物提取用有機溶劑用量為藥材重量的2-50倍（重量/體積比）。
[0057] 3)干燥方法的研究
[0058] 分別用真空干燥法、冷凍干燥法、鼓風干燥、離心干燥、旋蒸干燥法等方法，對得到 的抗腫瘤活性提取物進行干燥，以含水量、TLC、活性測試為指標，發(fā)現(xiàn)真空干燥法、冷凍干 燥法、鼓風干燥、離心干燥、旋蒸干燥法適用于對C6細胞的抗腫瘤活性提取物進行干燥，其 中，最優(yōu)為真空干燥法、冷凍干燥法。
[0059] 表 5

[0061] 優(yōu)選地，香青蘭抗腫瘤提取物的制備方法為：
[0062] 維吾爾藥香青蘭經(jīng)超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱，先 用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:8,體積比）洗脫2-50倍柱體積，繼用石油 醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:10,體積比）洗脫2-50倍柱體積，石油醚-丙酮 100:10洗脫液經(jīng)回收有機溶劑，干燥，即為該提取物。以上條件最優(yōu)為先用石油醚-丙酮混 合溶劑（石油醚：丙酮，100:8,體積比）洗脫10倍柱體積，繼用石油醚-丙酮混合溶劑（石 油醚：丙酮，100:10,體積比）洗脫15倍柱體積。其中，
[0063] 1)提取物提取用有機溶劑可以為甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶 劑、乙醇水混合溶劑，最優(yōu)條件為甲醇和95%乙醇。提取物提取用有機溶劑用量為藥材重量 的2-50倍（重量/體積比）。
[0064] 2)提取物干燥方法可以為真空干燥法、冷凍干燥法、鼓風干燥、離心干燥、旋蒸干 燥法等，最優(yōu)為真空干燥法、冷凍干燥法。
[0065] 5、香青蘭抗腫瘤有效提取物（洗脫液為100:10時干燥獲得的提取物）的抗腫瘤 活性研究
[0066] 利用各種腫瘤細胞，如腦膠質(zhì)瘤、乳腺癌、肺癌、胃癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、宮頸癌、肝 癌等惡性腫瘤細胞株，分別測試香青蘭抗腫瘤提取物的抗腫瘤活性，IC 5。結(jié)果如下：
[0067] 表 6
[0070] 因此，我們發(fā)現(xiàn)，香青蘭抗腫瘤提取物具備抗腫瘤活性，可望用于各種腫瘤如乳腺 癌、肺癌、胃癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、宮頸癌、腦膠質(zhì)瘤、肝癌等惡性腫瘤的預(yù)防及治療。
[0071] 6、香青蘭抗腫瘤活性提取物的組合物及其制備方法研究
[0072] 1)固體分散體
[0073] 處方
[0075] 制備方法：
[0076] 稱取香青蘭活性提取物和載體聚乙烯吡咯烷酮（PVP)按比例、1:2、1:4、1:6的質(zhì) 量比分別放入燒杯中，加入無水乙醇，磁力攪拌器攪拌至香青蘭活性提取物和載體完全溶 解，轉(zhuǎn)入旋蒸儀中除去有機溶劑，干燥，粉碎過80目篩，即得香青蘭活性提取物PVP包合物。
[0077] 2)環(huán)糊精包合物
[0078] 處方
[0080] 制備方法：
[0081] 將β -環(huán)糊精與1-5倍水研勻，加香青蘭活性提取物（水難溶性的應(yīng)先溶于少量 有機溶劑中）充分研磨至成糊狀物，低溫干燥即得。
[0082] 3)分散片處方：
[0083] 香青蘭提取物 100
[0085] 制備方法：
[0086] 1.香青蘭活性提取物淀粉分散體的制備，精密稱取香青蘭活性提取物，加入適量 的十二烷基硫酸鈉，用70%的乙醇溶解加入等比例的可溶性淀粉混合均勻后，在70°C的溫 度下蒸干，粉碎，過100目篩；
[0087] 2.稱取處方量，香青蘭活性提取物淀粉分散體，交聯(lián)聚維酮，預(yù)膠化淀粉，用70% 乙醇做濕潤劑，邊加入邊攪拌，制成濕顆粒過14目篩，室溫下放置15min后，60°C烘箱烘干 45min，16目篩整粒，加入滑石粉和微分硅膠，混合均勻后，壓片。
[0088] 7、香青蘭抗腫瘤活性提取物的檢測方法研究
[0089] 我們發(fā)現(xiàn)，可以用薄層色譜的方法，很好地檢測和標示香青蘭抗腫瘤活性提取物 的特征。見圖1。
[0090] 具體條件如下：色譜條件：硅膠板，展開系統(tǒng)：石油醚-乙酸乙酯-丙酮（6:1:1)， 顯色方法：香草醛-硫酸顯色。
【附圖說明】：
[0091] 圖1香青蘭活性提取物的TLC色譜圖；
[0092] 圖2香青蘭得到的化學組分的TLC色譜圖；
[0093] 圖3香青蘭得到的化學組分的TLC色譜圖。
【具體實施方式】
[0094] 以下實施例表示本發(fā)明的實用性，本發(fā)明不受此限制。
[0095] 實施例1 :
[0096] 取維吾爾藥香青蘭20g，經(jīng)100mL甲醇超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分 離，上樣后的硅膠柱（I. 6cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:8， 體積比）洗脫10倍柱體積，繼用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:10,體積比）洗 脫15倍柱體積，石油醚：丙酮100 :10洗脫液經(jīng)回收有機溶劑，真空干燥，即為該提取物，收 率 0· 12%〇
[0097] 實施例2 :
[0098] 取維吾爾藥香青蘭20g，經(jīng)100mL乙醇超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分 離，上樣后的硅膠柱（I. 6cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:8， 體積比）洗脫10倍柱體積，繼用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:10,體積比）洗 脫15倍柱體積，石油醚：丙酮100 :10洗脫液經(jīng)回收有機溶劑，冷凍干燥，即為該提取物，收 率 0· 088%〇
[0099] 實施例3 :
[0100] 取維吾爾藥香青蘭20g，經(jīng)100mL丙酮超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分 離，上樣后的硅膠柱（I. 6cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:8， 體積比）洗脫10倍柱體積，繼用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:10,體積比）洗 脫15倍柱體積，石油醚：丙酮100 :10洗脫液經(jīng)回收有機溶劑，鼓風干燥，即為該提取物，收 率 0· 064%。
[0101] 實施例4:
[0102] 取維吾爾藥香青蘭20g，經(jīng)100mL氯仿超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分 離，上樣后的硅膠柱（I. 6cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:8， 體積比）洗脫10倍柱體積，繼用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:10,體積比）洗 脫15倍柱體積，石油醚：丙酮100 :10洗脫液經(jīng)回收有機溶劑，離心干燥，即為該提取物，收 率 0· 055%〇
[0103] 實施例5 :
[0104] 取維吾爾藥香青蘭20g，經(jīng)100mL乙酸乙酯超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠 柱分離，上樣后的硅膠柱（I. 6cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮， 100:8,體積比）洗脫10倍柱體積，繼用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:10,體積 比）洗脫15倍柱體積，石油醚：丙酮100 :10洗脫液經(jīng)回收有機溶劑，旋蒸干燥，即為該提取 物，收率〇. 067%。
[0105] 實施例6 :
[0106] 取維吾爾藥香青蘭20g，經(jīng)100mL甲醇水混合溶劑（甲醇：水=1:1)超聲提取 15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（I. 6cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：丙 酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:8,體積比）洗脫10倍柱體積，繼用石油醚：丙酮混合溶劑 (石油醚：丙酮，100:10,體積比）洗脫15倍柱體積，石油醚：丙酮100 :10洗脫液經(jīng)回收有 機溶劑，冷凍干燥，即為該提取物，收率〇. 098%。
[0107] 實施例7 :
[0108] 取維吾爾藥香青蘭20g，經(jīng)100mL乙醇水混合溶劑（乙醇：水=1:1)超聲提取 15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（I. 6cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：丙 酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:8,體積比）洗脫10倍柱體積，繼用石油醚：丙酮混合溶劑 (石油醚：丙酮，100:10,體積比）洗脫15倍柱體積，石油醚：丙酮100 :10洗脫液經(jīng)回收有 機溶劑，真空干燥，即為該提取物，收率〇. 102%。
[0109] 實施例8 :
[0110] 取維吾爾藥香青蘭20g，經(jīng)100mL乙醇水混合溶劑（乙醇：水=90:10)超聲提取 15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（I. 6cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：丙 酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:8,體積比）洗脫10倍柱體積，繼用石油醚：丙酮混合溶劑 (石油醚：丙酮，100:10,體積比）洗脫15倍柱體積，石油醚：丙酮100 :10洗脫液經(jīng)回收有 機溶劑，冷凍干燥，即為該提取物，收率〇. 113%。
[0111] 實施例9:
[0112] 取維吾爾藥香青蘭20g，經(jīng)100mL甲醇超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分 離，上樣后的硅膠柱（I. 6cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:8， 體積比）洗脫20倍柱體積，繼用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:10,體積比）洗 脫25倍柱體積，石油醚：丙酮100 :10洗脫液經(jīng)回收有機溶劑，真空干燥，即為該提取物，收 率 0· 13%。
[0113] 實施例10 :
[0114] 取維吾爾藥香青蘭20g，經(jīng)100mL乙醇超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分 離，上樣后的硅膠柱（I. 6cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:8， 體積比）洗脫20倍柱體積，繼用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:10,體積比）洗 脫25倍柱體積，石油醚：丙酮100 :10洗脫液經(jīng)回收有機溶劑，冷凍干燥，即為該提取物，收 率 0· 115%〇
[0115] 實施例11 :
[0116] 取維吾爾藥香青蘭20g，經(jīng)100mL丙酮超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分 離，上樣后的硅膠柱（I. 6cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:8， 體積比）洗脫20倍柱體積，繼用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:10,體積比）洗 脫25倍柱體積，石油醚：丙酮100 :10洗脫液經(jīng)回收有機溶劑，鼓風干燥，即為該提取物，收 率 0· 101%。
[0117] 實施例12 :
[0118] 取維吾爾藥香青蘭20g，經(jīng)100mL氯仿超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分 離，上樣后的硅膠柱（I. 6cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:8， 體積比）洗脫20倍柱體積，繼用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:10,體積比）洗 脫25倍柱體積，石油醚：丙酮100 :10洗脫液經(jīng)回收有機溶劑，離心干燥，即為該提取物，收 率 0· 087%〇
[0119] 實施例13 :
[0120] 取維吾爾藥香青蘭20g，經(jīng)100mL乙酸乙酯超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠 柱分離，上樣后的硅膠柱（I. 6cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮， 100:8，體積比）洗脫20倍柱體積，繼用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:10，體積 比）洗脫25倍柱體積，石油醚：丙酮100 :10洗脫液經(jīng)回收有機溶劑，旋蒸干燥，即為該提取 物，收率〇. 096%。
[0121] 實施例14:
[0122] 取維吾爾藥香青蘭20g，經(jīng)100mL甲醇水混合溶劑（甲醇：水=1:1)超聲提取 15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（I. 6cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：丙 酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:8,體積比）洗脫20倍柱體積，繼用石油醚：丙酮混合溶劑 (石油醚：丙酮，100:10,體積比）洗脫25倍柱體積，石油醚：丙酮100 :10洗脫液經(jīng)回收有 機溶劑，冷凍干燥，即為該提取物，收率〇. 119%。
[0123] 實施例15 :
[0124] 取維吾爾藥香青蘭20g，經(jīng)100mL乙醇水混合溶劑（乙醇：水=1:1)超聲提取 15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（I. 6cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：丙 酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:8,體積比）洗脫20倍柱體積，繼用石油醚：丙酮混合溶劑 (石油醚：丙酮，100:10,體積比）洗脫25倍柱體積，石油醚：丙酮100 :10洗脫液經(jīng)回收有 機溶劑，真空干燥，即為該提取物，收率〇. 122%。
[0125] 實施例16 :
[0126] 取維吾爾藥香青蘭20g，經(jīng)100mL乙醇水混合溶劑（乙醇：水=90:10)超聲提取 15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（I. 6cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：丙 酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:8,體積比）洗脫20倍柱體積，繼用石油醚：丙酮混合溶劑 (石油醚：丙酮，100:10,體積比）洗脫25倍柱體積，石油醚：丙酮100 :10洗脫液經(jīng)回收有 機溶劑，冷凍干燥，即為該提取物，收率〇. 125%。
[0127] 實施例17 :
[0128] 取維吾爾藥香青蘭20g，經(jīng)100mL甲醇超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分 離，上樣后的硅膠柱（I. 6cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:8， 體積比）洗脫25倍柱體積，繼用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:10,體積比）洗 脫30倍柱體積，石油醚：丙酮100:10洗脫液經(jīng)回收有機溶劑，真空干燥，即為該提取物，收 率 0· 11%〇
[0129] 實施例18 :
[0130] 取維吾爾藥香青蘭20g，經(jīng)100mL乙醇超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分 離，上樣后的硅膠柱（I. 6cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:8， 體積比）洗脫25倍柱體積，繼用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:10,體積比）洗 脫30倍柱體積，石油醚：丙酮100:10洗脫液經(jīng)回收有機溶劑，冷凍干燥，即為該提取物，收 率 0· 105%〇
[0131] 實施例19 :
[0132] 取維吾爾藥香青蘭20g，經(jīng)100mL丙酮超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分 離，上樣后的硅膠柱（I. 6cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:8， 體積比）洗脫25倍柱體積，繼用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:10,體積比）洗 脫30倍柱體積，石油醚：丙酮100:10洗脫液經(jīng)回收有機溶劑，鼓風干燥，即為該提取物，收 率 0· 086%〇
[0133] 實施例20:
[0134] 取維吾爾藥香青蘭20g，經(jīng)100mL氯仿超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分 離，上樣后的硅膠柱（I. 6cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:8， 體積比）洗脫25倍柱體積，繼用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:10,體積比）洗 脫30倍柱體積，石油醚：丙酮100:10洗脫液經(jīng)回收有機溶劑，離心干燥，即為該提取物，收 率 0· 064%。
[0135] 實施例21:
[0136] 取維吾爾藥香青蘭20g，經(jīng)100mL乙酸乙酯超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠 柱分離，上樣后的硅膠柱（I. 6cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮， 100:8，體積比）洗脫25倍柱體積，繼用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:10，體積 比）洗脫30倍柱體積，石油醚：丙酮100:10洗脫液經(jīng)回收有機溶劑，旋蒸干燥，即為該提取 物，收率〇. 078%。
[0137] 實施例22:
[0138] 取維吾爾藥香青蘭20g，經(jīng)100mL甲醇水混合溶劑（甲醇：水=1:1)超聲提取 15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（I. 6cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：丙 酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:8,體積比）洗脫25倍柱體積，繼用石油醚：丙酮混合溶劑 (石油醚：丙酮，100:10,體積比）洗脫30倍柱體積，石油醚：丙酮100:10洗脫液經(jīng)回收有 機溶劑，冷凍干燥，即為該提取物，收率〇. 101 %。
[0139] 實施例23:
[0140] 取維吾爾藥香青蘭20g，經(jīng)100mL乙醇水混合溶劑（乙醇：水=1:1)超聲提取 15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（I. 6cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：丙 酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:8,體積比）洗脫25倍柱體積，繼用石油醚：丙酮混合溶劑 (石油醚：丙酮，100:10,體積比）洗脫30倍柱體積，石油醚：丙酮100:10洗脫液經(jīng)回收有 機溶劑，真空干燥，即為該提取物，收率〇. 097%。
[0141] 實施例24:
[0142] 取維吾爾藥香青蘭20g，經(jīng)100mL乙醇水混合溶劑（乙醇：水=90:10)超聲提取 15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（I. 6cm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：丙 酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:8,體積比）洗脫25倍柱體積，繼用石油醚：丙酮混合溶劑 (石油醚：丙酮，100:10,體積比）洗脫30倍柱體積，石油醚：丙酮100:10洗脫液經(jīng)回收有 機溶劑，冷凍干燥，即為該提取物，收率〇. 106%。
[0143] 實施例25:固體分散體
[0144] 稱取香青蘭提取物和載體聚乙烯吡咯烷酮（PVP)按比例、1:2、1:4、1:6的質(zhì)量比 分別放入燒杯中，加入無水乙醇，磁力攪拌器攪拌至香青蘭提取物和載體完全溶解，轉(zhuǎn)入旋 蒸儀中出去有機溶劑，干燥，粉碎過80目篩，即得香青蘭提取物PVP包合物。
[0145] 實施例26 :環(huán)糊精包合物
[0146] 將β -環(huán)糊精與1-5倍水研勻，加香青蘭提取物（水難溶性的應(yīng)先溶于少量有機 溶劑中）充分研磨至成糊狀物，低溫干燥即得。
[0147] 實施例27 :分散片
[0148] 1.稱取干燥的香青蘭提取物，加入適量的十二烷基硫酸鈉，使用70的乙醇充分溶 解，加入水溶性淀粉與香青蘭提取物（1 :1)，攪拌混合均勻，在70°C下干燥，粉碎，過100目 篩，得香青蘭提取物分散體。
[0149] 2.精密稱取處方量，香青蘭提取物分散體，交聯(lián)聚維酮，可壓性淀粉，用70乙醇做 濕潤劑，邊加入邊攪拌，14目篩制成濕顆粒，室溫下放置15min后，70°C烘箱烘干45min，16 目篩整粒，加入滑石粉和微分硅膠，混合均勻后，壓片。
【主權(quán)項】
1. 一種維吾爾藥香青蘭提取物，其特征為，維吾爾藥香青蘭經(jīng)溶劑超聲提取，提取液濃 縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱，先用體積比為100:0-100:8的石油醚-丙酮混合溶 劑洗脫，繼用體積比為100:10的石油醚-丙酮混合溶劑洗脫，用體積比為100:10的石油 醚-丙酮混合溶劑洗脫的洗脫液經(jīng)回收溶劑，干燥即為該活性提取物。2. 如權(quán)利要求1所述的維吾爾藥香青蘭提取物，其特征為，提取用溶劑為甲醇、乙醇、 丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶劑或乙醇水混合溶劑，優(yōu)選甲醇或95%乙醇。3. 如權(quán)利要求1所述的維吾爾藥香青蘭提取物，其特征為，先用石油醚-丙酮混合溶劑 (石油醚：丙酮，100:8,體積比）洗脫，繼用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚：丙酮，100:10,體 積比）洗脫，用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚：丙酮，100:10,體積比）洗脫的洗脫液經(jīng)回收 溶劑，干燥即為該提取物。4. 如權(quán)利要求1述維吾爾藥香青蘭提取物，其特征為，先用體積比100:8石油醚-丙 酮混合溶劑洗脫2-50倍柱體積，繼用體積比100:10石油醚-丙酮混合溶劑洗脫2-50倍柱 體積，優(yōu)選先用體積比100:8石油醚-丙酮混合溶劑洗脫10倍柱體積，繼用體積比100:10 石油醚-丙酮混合溶劑洗脫15倍柱體積。5. -種藥物組合物，其特征在于，包含權(quán)利要求1-4何一項所述的提取物和藥學上可 接受的載體。6. -種藥物制劑，其特征在于，包含權(quán)利要求1-4何一項所述的提取物或權(quán)利要求5述 的藥物組合物。7. 權(quán)利要求1-4任何一項所述的香青蘭提取物或權(quán)利要求5所述的組合物或權(quán)利要求 6所述的藥物制劑在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。8. 如權(quán)利要求7所述維吾爾藥香青蘭提取物，其特征為，所述腫瘤為腦膠質(zhì)瘤、乳腺 癌、肺癌、胃癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、宮頸癌或肝癌。9. 權(quán)利要求1-4任何一項所述的一種維吾爾藥香青蘭提取物，其特征在于，檢測方法 用TLC法，其色譜條件為：GF254硅膠板，展開系統(tǒng)：石油醚-乙酸乙酯-丙酮（6:1:1 )，顯色 方法：香草醛-硫酸顯色。
【文檔編號】G01N30/90GK105982955SQ201510080740
【公開日】2016年10月5日
【申請日】2015年2月15日
【發(fā)明人】王金輝, 黃健, 吳文熙
【申請人】沈陽藥科大學