專(zhuān)利名稱(chēng)：：高含量硫酸軟骨素的生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種高含量硫酸軟骨素的生產(chǎn)方法。
背景技術(shù)：
：硫酸軟骨素是一種廣泛存在于動(dòng)物軟骨組織中的酸性粘多糖。硫酸軟骨素作為風(fēng)濕病、關(guān)節(jié)炎、肩周炎、腰痛、神經(jīng)痛、偏頭痛等的治療藥物具有良好的效果，同時(shí)，硫酸軟骨素具有防治動(dòng)脈硬化和血栓及保存角膜等多種功能。此外，硫酸軟骨素作為添加劑廣泛用于食品與化妝品等行業(yè)。多年來(lái)，我國(guó)該產(chǎn)品受到國(guó)外市場(chǎng)的歡迎，主要出口歐美等國(guó)家。工業(yè)生產(chǎn)硫酸軟骨素的方法通常包括中性鹽法、堿法、酶法、堿一酶法、堿鹽法等。這些方法生產(chǎn)出的硫酸軟骨素的含量一般很難超過(guò)90%,有專(zhuān)利直接用胰酶一步水解軟骨提取硫酸軟骨素的方法，雖然得率很高，但產(chǎn)品含量達(dá)不到95%,同時(shí)可能存在硫酸鹽等檢查項(xiàng)目不合格的問(wèn)題。目前精制的方法也有很多，如乙醇分級(jí)沉淀法、季胺鹽絡(luò)合法、區(qū)帶電泳分離法、離子交換層析法等，這些方法在實(shí)驗(yàn)室及小試范圍內(nèi)可以收到理想的效果，但在工業(yè)化大生產(chǎn)中，這些方法具有成本高、能耗大等缺點(diǎn)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明涉及一種生化藥物原料，特別是一種高含量硫酸軟骨素的生產(chǎn)工藝。本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的一種高含量硫酸軟骨素的生產(chǎn)方法，其組成包括強(qiáng)堿鹽煮骨、堿提取，其特征是首先用胰勻漿液酶解、然后進(jìn)行乙醇沉淀把硫酸軟骨素沉淀出來(lái)、然后再次進(jìn)行胰酶酶解，然后進(jìn)行脫色、膜濃縮、乙醇沉淀、脫水、干燥。上述的高含量硫酸軟骨素的生產(chǎn)方法，其特征是所述的用胰勻漿液酶解是調(diào)節(jié)溶液pH8.5-9.0，升溫至48'C-55°C，加入軟骨質(zhì)量8%-20%的胰勻漿液，反應(yīng)6-8小時(shí)，用40%三氯醋酸檢查水解物，如溶液不混濁或顯微混濁，證明水解完全，用鹽酸調(diào)節(jié)pH4.6-6，迅速升溫至70'C-80'C，停止加熱，過(guò)濾。上述的高含量硫酸軟骨素的生產(chǎn)方法，其特征是所述的再次進(jìn)行胰酶酶解是沉淀加3-10倍量水溶解，在pH8.5-9.0、48°C-55。C條件下加入O.0496-0.5%胰酶，反應(yīng)5-7小時(shí)。上述的高含量硫酸軟骨素的生產(chǎn)方法，其特征是所述的脫色為溶液pH9-10，升溫至70'C-80°C，加入O.1%-0.5%活性炭，吸附10分鐘，過(guò)濾，再在濾液中加入O.5%-2.5%活性炭，脫色l-2小時(shí)，過(guò)濾。上述的高含量硫酸軟骨素的生產(chǎn)方法，其特征是所述的濃縮的濾液用有機(jī)膜進(jìn)行超濾濃縮，其中超濾膜的截流分子量為10，000-20，OOO道爾頓，濃縮到原溶液體積的1/3-1/5，濃縮液中加入乙醇，使?jié)舛冗_(dá)70%，硫酸軟骨素沉淀析出。上述的高含量硫酸軟骨素的生產(chǎn)方法，其特征是第一次酶解用胰勻漿液作為復(fù)合酶載體，所述的胰勻漿液是將新鮮或冷凍的動(dòng)物胰臟用組織勻漿機(jī)破碎制成，第二次酶解用胰酶進(jìn)行酶解。上述的高含量硫酸軟骨素的生產(chǎn)方法，其特征是所述的脫色是用活性炭處理兩次，第一次脫色活性炭的濃度為0.1%-0.5%，時(shí)間為10分鐘，第二次脫色活性炭的濃度為0.5%-2.5%，時(shí)間為l-2小時(shí)。這個(gè)技術(shù)方案有以下有益效果1.本發(fā)明堿的使用量少，為軟骨質(zhì)量的4%-6%。堿提取后用胰勻漿液酶解，胰勻漿液中含有多種活性酶，可以消化掉大部分與硫酸軟骨素結(jié)合的蛋白質(zhì)及其他物質(zhì)。胰勻漿液用量為原料重量的8-20%，生產(chǎn)成本可降低20%-10%2.本發(fā)明用不同濃度的活性炭處理濾液，分別達(dá)到吸附雜質(zhì)與脫色的作用。用截留分子量為10，000-20，OOO道爾頓的有機(jī)膜進(jìn)行超濾濃縮，能夠除去解離下來(lái)的小分子蛋白質(zhì)或多肽及無(wú)機(jī)鹽類(lèi)雜質(zhì)，同時(shí)起到富集硫酸軟骨素溶液的作用。用該方法生產(chǎn)出的硫酸軟骨素各項(xiàng)指標(biāo)均符合出口標(biāo)準(zhǔn)，含量高達(dá)95%以上。3.本發(fā)明耗能小、成本低，生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單。實(shí)施例1:將潔凈豬鼻骨500kg投入提取灌，煮骨，堿鹽提取。加入鹽酸(1:1)調(diào)pH8.7，升溫至49'C,加入100kg胰勻漿液，保持49'C水解6小時(shí)。取少量溶液用濾紙過(guò)濾，濾液置于10ml比色管中，加入5滴40%三氯乙酸溶液，溶液不產(chǎn)生渾濁，證明水解完全。加入鹽酸(l:l)測(cè)pH4.8，迅速升溫至75'C，停止攪拌，靜置1小時(shí)。用管道將上清液虹吸入馬尾槽過(guò)濾，濾液打入沉淀灌，攪拌加入乙醇，使?jié)舛冗_(dá)70%。攪拌30分鐘，停止攪拌，靜置分層。虹吸出上清醇液，沉淀物放入不銹鋼桶中，加4倍量水溶解，邊攪拌邊加入496氫氧化鈉溶液，測(cè)pH8.8，升溫到52'C，加入胰酶0.2kg，酶解7小時(shí)，調(diào)溶液pH10，升溫至80'C，加入2kg活性炭，吸附10分鐘，過(guò)濾，濾液中加入10kg脫色1.5小時(shí)，過(guò)濾。濾液用分離分子量為10,000-20,000道爾頓的有機(jī)膜濃縮3倍，濃縮液中加入乙醇，使?jié)舛冗_(dá)70%，得沉淀。沉淀用95%乙醇脫水兩次，50。C減壓干燥3小時(shí)，粉碎得硫酸軟骨素成品。實(shí)施例2:將潔凈牛小骨500kg投入提取灌，加入純化水至浸沒(méi)軟骨，煮骨，堿鹽提取。加入鹽酸(1:1)調(diào)pH8.8,升溫至50'C,加入85kg胰勻漿液，保持50。C水解8小時(shí)。取少量溶液用濾紙過(guò)濾，濾液置于10ml比色管中，加入5滴40%三氯乙酸溶液，溶液不產(chǎn)生渾濁，證明水解完全。加入鹽酸(1:1)測(cè)P服.O，迅速升溫至78'C，停止攪拌，靜置2小時(shí)。用管道將上清液虹吸入馬尾槽過(guò)濾，濾液打入沉淀灌，攪拌加入乙醇，使?jié)舛冗_(dá)66%。攪拌30分鐘，停止攪拌，靜置分層。虹吸出上清醇液，沉淀物放入不銹鋼桶中，加10倍量水溶解，邊攪拌邊加入4%氫氧化鈉溶液，測(cè)pH9.O，升溫到48X:,加入胰酶0.15kg，酶解6.5小時(shí)，調(diào)溶液pH9.8，升溫至78'C,加入0.75kg活性炭，吸附10分鐘，加入3.75kg活性炭，脫色1.5小時(shí)，過(guò)濾。濾液用分離分子量為10，000-20，000道爾頓的有機(jī)膜濃縮3.5倍，濃縮液中加入乙醇，使?jié)舛冗_(dá)709t,得沉淀。沉淀用95%乙醇脫水兩次，5(TC減壓干燥3小時(shí)，粉碎得硫酸軟骨素成品。實(shí)施例3:將潔凈豬喉軟骨500kg投入提取灌，加入純化水至浸沒(méi)軟骨，煮骨，堿鹽提取。加入鹽酸(1:1)調(diào)pH9.0，升溫至52。C,加入100kg胰勻漿液，保持52'C水解7.5小時(shí)。取少量溶液用濾紙過(guò)濾，濾液置于10ml比色管中，加入5滴40%三氯乙酸溶液，溶液不產(chǎn)生渾濁，證明水解完全。加入鹽酸(1:1)測(cè)pH4.6，迅速升溫至78°C,停止攪拌，靜置2小時(shí)。用管道將上清液虹吸入馬尾槽過(guò)濾，濾液打入沉淀灌，攪拌加入乙醇，使?jié)舛冗_(dá)68%。攪拌30分鐘，停止攪拌，靜置分層。虹吸出上清醇液，沉淀物放入不銹鋼桶中，加4倍量水溶解，邊攪拌邊加入4%氫氧化鈉溶液，測(cè)pH9.0，升溫到48°C，加入胰酶0.125kg，酶解6.5小時(shí)，調(diào)溶液pH9.6，升溫至78-C，加入1,25kg活性炭，吸附10分鐘，加入活性炭6.25kg，脫色1.5小時(shí)，過(guò)濾。濾液用分離分子量為10,000-20，OOO道爾頓的有機(jī)膜濃縮3.5倍，濃縮液中加入乙醇，使?jié)舛冗_(dá)70%，得沉淀。沉淀用95%乙醇脫水兩次，5(TC減壓干燥3小時(shí)，粉碎得硫酸軟骨素成品。實(shí)施例4-將潔凈羊鼻軟骨500kg投入提取灌，加入純化水至浸沒(méi)軟骨，煮骨，堿鹽提取。加入鹽酸(1:1)調(diào)pH8.6,升溫至54-C,加入100kg胰勻漿液，保持54'C水解7.5小時(shí)。取少量溶液用濾紙過(guò)濾，濾液置于10ml比色管中，加入5滴4096三氯乙酸溶液，溶液不產(chǎn)生渾濁，證明水解完全。加入鹽酸(1:1)測(cè)pH4.6，迅速升溫至76""C，停止攪拌，靜置2小時(shí)。用管道將上清液虹吸入馬尾槽過(guò)濾，濾液打入沉淀灌，攪拌加入乙醇，使?jié)舛冗_(dá)68%。攪拌30分鐘，停止攪拌，靜置分層。虹吸出上清醇液，沉淀物放入不銹鋼桶中，加4倍量水溶解，邊攪拌邊加入496氫氧化鈉溶液，測(cè)pH8.7，升溫到52。C，加入胰酶0.5kg，酶解7小時(shí)，調(diào)溶液pH9.5，升溫至77。C，加入lkg活性炭，吸附IO分鐘，加入活性炭5kg，脫色1.5小時(shí)，過(guò)濾。濾液用分離分子量為10，000-20，000道爾頓的有機(jī)膜濃縮3.5倍，濃縮液中加入乙醇，使?jié)舛冗_(dá)70%，得沉淀。沉淀用95%乙醇脫水兩次，5(TC減壓干燥3小時(shí)，粉碎得硫酸軟骨素成品。實(shí)施例5:將潔凈羊小骨500kg投入提取灌，加入純化水至浸沒(méi)軟骨，煮骨，堿鹽提取。加入鹽酸(1:1)調(diào)pH9.0，升溫至53'C,加入90kg胰勻漿液，保持53'C水解7小時(shí)。取少量溶液用濾紙過(guò)濾，濾液置于10ml比色管中，加入5滴40%三氯乙酸溶液，溶液不產(chǎn)生渾濁，證明水解完全。加入鹽酸(1:1)測(cè)pH4.6,迅速升溫至78"C，停止攪拌，靜置2小時(shí)。用管道將上清液虹吸入馬尾槽過(guò)濾，濾液打入沉淀灌，攪拌加入乙醇，使?jié)舛冗_(dá)66%。攪拌30分鐘，停止攪拌，靜置分層。虹吸出上清醇液，沉淀物放入不銹鋼桶中，加10倍量水溶解，邊攪拌邊加入496氫氧化鈉溶液，測(cè)PH8.5，升溫到48°C，加入胰酶0.5kg，酶解6.5小時(shí)，調(diào)溶液pH10，升溫至75。C，加入0.9kg活性炭，吸附IO分鐘，加入活性炭4.5kg，脫色1.5小時(shí)，過(guò)濾。濾液用分離分子量為10，000-20，000道爾頓的有機(jī)膜濃縮3.5倍，濃縮液中加入乙醇，使?jié)舛冗_(dá)70%,得沉淀。沉淀用9596乙醇脫水兩次，5(TC減壓干燥3小時(shí)，粉碎得硫酸軟骨素成品。實(shí)施例6:將潔凈雞胸骨500kg投入提取灌，加入純化水至浸沒(méi)軟骨，煮骨，堿鹽提取。加入鹽酸(1:1)調(diào)pH8.9，升溫至5(TC，加入40kg胰勻漿液，保持5(TC水解7.5小時(shí)。取少量溶液用濾紙過(guò)濾，濾液置于10ml比色管中，加入5滴40%三氯乙酸溶液，溶液不產(chǎn)生渾濁，證明水解完全。加入鹽酸(1:1)測(cè)pH4.6，迅速升溫至77'C，停止攪拌，靜置2小時(shí)。用管道將上清液虹吸入馬尾槽過(guò)濾，濾液打入沉淀灌，攪拌加入乙醇，使?jié)舛冗_(dá)60%。攪拌30分鐘，停止攪拌，靜置分層。虹吸出上清醇液，沉淀物放入不銹鋼桶中，加3倍量水溶解，邊攪拌邊加入4%氫氧化鈉溶液，測(cè)pH8.8，升溫到55'C，加入胰酶0.5kg，酶解7小時(shí)，調(diào)溶液pH9.6，升溫至70'C，加入1.5kg活性炭，吸附IO分鐘，加入活性炭7.5kg,脫色1小時(shí)，過(guò)濾。濾液用分離分子量為10，000-20，000道爾頓的有機(jī)膜濃縮3.5倍，濃縮液中加入乙醇，使?jié)舛冗_(dá)67%,得沉淀。沉淀用95%乙醇脫水兩次，5(TC減壓干燥3小時(shí)，粉碎得硫酸軟骨素成品。實(shí)施例7:將潔凈鴨胸骨500kg投入提取灌，加入純化水至浸沒(méi)軟骨，煮骨，堿鹽提取。加入鹽酸(1:1)調(diào)pH8.5，升溫至55'C,加入40kg胰勻漿液，保持55t:水解6.5小時(shí)。取少量溶液用濾紙過(guò)濾，濾液置于10ml比色管中，加入5滴40%三氯乙酸溶液，溶液不產(chǎn)生渾濁，證明水解完全。加入鹽酸(1:1)測(cè)pH6，迅速升溫至80。C，停止攪拌，靜置2小時(shí)。用管道將上清液虹吸入馬尾槽過(guò)濾，濾液打入沉淀灌，攪拌加入乙醇，使?jié)舛冗_(dá)70%。攪拌30分鐘，停止攪拌，靜置分層。虹吸出上清醇液，沉淀物放入不銹鋼桶中，加5倍量水溶解，邊攪拌邊加入4%氫氧化鈉溶液，測(cè)pH9.0，升溫到48'C，加入胰酶0.5kg，酶解5小時(shí)，調(diào)溶液pH9,升溫至70'C，加入lkg活性炭，吸附10分鐘，加入活性炭5kg，脫色2小時(shí)，過(guò)濾。濾液用分離分子量為10，000-20，000道爾頓的有機(jī)膜濃縮3.5倍，濃縮液中加入乙醇，使?jié)舛冗_(dá)70%，得沉淀。沉淀用9596乙醇脫水兩次，5(TC減壓干燥3小時(shí)，粉碎得硫酸軟骨素成品。實(shí)施例8:將潔凈牛鼻骨500kg投入提取灌，加入純化水至浸沒(méi)軟骨，煮骨，堿鹽提取。加入鹽酸(1:1)調(diào)pH8.5,升溫至48'C，加入100kg胰勻漿液，保持5(TC水解8小時(shí)。取少量溶液用濾紙過(guò)濾，濾液置于10ml比色管中，加入5滴40%三氯乙酸溶液，溶液不產(chǎn)生渾濁，證明水解完全，加入鹽酸(1:1)測(cè)pH4.6，迅速升溫至70'C，停止攪拌，靜置2小時(shí)。用管道將上清液虹吸入馬尾槽過(guò)濾，濾液打入沉淀灌，攪拌加入乙醇，使?jié)舛冗_(dá)68%。攪拌30分鐘，停止攪拌，靜置分層。虹吸出上清醇液，沉淀物放入不銹鋼桶中，加4倍量水溶解，邊攪拌邊加入496氫氧化鈉溶液，測(cè)pH8.5,升溫到5(TC,調(diào)溶液pH8.5加入胰酶0.6kg,酶解6小時(shí)，調(diào)PH值9.3，加入lkg活性炭，吸附脫色十分鐘過(guò)濾。濾液調(diào)PH6.8升溫至80。C,加入6kg活性炭，過(guò)濾，濾液用分離分子量為10，000-20,000道爾頓的有機(jī)膜濃縮4倍，濃縮液中加入乙醇，使?jié)舛冗_(dá)65%，得沉淀。沉淀用95%乙醇脫水兩次，60'C減壓干燥5小時(shí)，粉碎得硫酸軟骨素成品。檢驗(yàn)結(jié)果如下:<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>權(quán)利要求1.一種高含量硫酸軟骨素的生產(chǎn)方法，其組成包括強(qiáng)堿鹽煮骨、堿提取，其特征是首先用胰勻漿液酶解、然后進(jìn)行乙醇沉淀把硫酸軟骨素沉淀出來(lái)、然后再次進(jìn)行胰酶酶解，然后進(jìn)行脫色、膜濃縮、乙醇沉淀、脫水、干燥。2.根據(jù)權(quán)利要求l所述的高含量硫酸軟骨素的生產(chǎn)方法，其特征是所述的用胰勻漿液酶解是調(diào)節(jié)溶液pH8.5-9.0，升溫至48'C-55°C,加入軟骨質(zhì)量8%-20%的胰勻漿液，反應(yīng)6-8小時(shí)，用40%三氯醋酸檢査水解物，如溶液不混濁或顯微混濁，證明水解完全，用鹽酸調(diào)節(jié)pH4.6-6，迅速升溫至70'C-80'C，停止加熱，過(guò)濾。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的高含量硫酸軟骨素的生產(chǎn)方法，其特征是所述的再次進(jìn)行胰酶酶解是沉淀加3-10倍量水溶解，在PH8.5-9.0、48。C-55'C條件下加入0.04%-0.5%胰酶,反應(yīng)5-7小時(shí)。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高含量硫酸軟骨素的生產(chǎn)方法，其特征是所述的脫色為溶液pH9-10，升溫至70'C-80'C，加入0.1%-0.5%活性炭，吸附10分鐘，過(guò)濾，再在濾液中加入0.5%-2.5%活性炭，脫色1-2小時(shí)，過(guò)濾。5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的高含量硫酸軟骨素的生產(chǎn)方法，其特征是所述的濃縮的濾液用有機(jī)膜進(jìn)行超濾濃縮，其中超濾膜的截流分子量為10，000-20，OOO道爾頓，濃縮到原溶液體積的1/3-1/5，濃縮液中加入乙醇，使?jié)舛冗_(dá)70%，硫酸軟骨素沉淀析出。6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的高含量硫酸軟骨素的生產(chǎn)方法，其特征是第一次酶解用胰勻漿液作為復(fù)合酶載體，所述的胰勻漿液是將新鮮或冷凍的動(dòng)物胰臟用組織勾漿機(jī)破碎制成，第二次酶解用胰酶進(jìn)行酶7.根據(jù)權(quán)利要求1或4所述的高含量硫酸軟骨素的生產(chǎn)方法，其特征是所述的脫色是用活性炭處理兩次，第一次脫色活性炭的濃度為0.l%-0.5%,時(shí)間為10分鐘，第二次脫色活性炭的濃度為0.5%-2.596，時(shí)間為1-2小時(shí)。全文摘要高含量硫酸軟骨素的生產(chǎn)方法。本發(fā)明涉及一種高含量硫酸軟骨素的生產(chǎn)方法。目前精制硫酸軟骨素的生產(chǎn)方法有很多，如乙醇分級(jí)沉淀法、季胺鹽絡(luò)合法、區(qū)帶電泳分離法、離子交換層析法等，這些方法在實(shí)驗(yàn)室及小試范圍內(nèi)可以收到理想的效果，但在工業(yè)化大生產(chǎn)中，這些方法具有成本高、能耗大等缺點(diǎn)。其組成包括煮骨、堿提取，首先用胰勻漿液酶解、然后進(jìn)行乙醇沉淀把硫酸軟骨素沉淀出來(lái)、然后再次進(jìn)行胰酶酶解，然后進(jìn)行脫色、膜濃縮、乙醇沉淀、脫水、干燥。本發(fā)明用于生產(chǎn)高含量的硫酸軟骨素。文檔編號(hào)C08B37/08GK101392035SQ20071014434公開(kāi)日2009年3月25日申請(qǐng)日期2007年9月21日優(yōu)先權(quán)日2007年9月21日發(fā)明者趙世祥申請(qǐng)人:哈爾濱奧霖藥業(yè)有限公司