專利名稱：：用于治療脂代謝紊亂的與膽汁酸相連的丙醇胺類衍生物的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及取代丙醇胺類衍生物及其可藥用鹽和生理功能衍生物。業(yè)已公開了數(shù)類適用于治療肥胖和脂代謝紊亂的活性化合物-聚合物吸附劑，例如消膽胺，-苯并硫氮雜類化合物(WO93/16055)，-膽酸二聚體和偶聯(lián)物(EP0489423)-4-氨基-2-脲基-嘧啶-5-甲酰胺類化合物(EP0557879)本發(fā)明是基于提供其他具有促血清脂質(zhì)減少治療作用的化合物的目的。所以，本發(fā)明涉及式Ⅰ的化合物其中GS是下式的膽汁酸基團，R1是與X相連的鍵，OH；R2是與X相連的鍵，OH,O-(C1-C6)-烷基，NH-(C2-C6)烷基-SO3H,N(CH3)-CH2-CH2-SO3H,NH-(C1-C6)-烷基-COOH；N(CH3)-(C1-C6)-烷基-COOH；條件是R1和R2不同時具有以下含義R1與X相連的鍵，和R2與X相連的鍵；R3,R4彼此獨立地是H,OH；X是或化學鍵；l,m,n彼此獨立地是0或1；L是(C1-C6)-烷基，苯基；AA1,AA2彼此獨立地是氨基酸基團或被氨基酸保護基單取代或多取代的氨基酸基團；以及它們的可藥用鹽和生理功能衍生物。優(yōu)選的式Ⅰ化合物是其中一個或多個基團具有以下含義的那些GS是下式的膽汁酸基團，R1是與X相連的鍵，OH；R2是與X相連的鍵，OH,O-(C1-C6)-烷基，NH-(C2-C6)烷基-SO3H,N(CH3)-CH2-CH2-SO3H,NH-(C1-C6)-烷基-COOH；N(CH3)-(C1-C6)-烷基-COOH；條件是R1和R2不同時具有以下含義R1與X相連的鍵，和R2與X相連的鍵；X是或化學鍵；l,m,n彼此獨立地是0或1；L是(C1-C6)-烷基，苯基；AA1,AA2彼此獨立地是氨基酸基團或被氨基酸保護基單取代或多取代的氨基酸基團；以及它們的可藥用鹽和生理功能衍生物。優(yōu)選的式Ⅰ化合物是其中一個或多個基團具有以下含義的那些GS是下式的膽汁酸基團，R1是與X相連的鍵，OH；R2是與X相連的鍵，OH,O-(C1-C6)-烷基，NH-(C2-C6)烷基-SO3H,NH-(C1-C6)-烷基-COOH；條件是R1和R2不同時具有以下含義R1與X相連的鍵，和R2與X相連的鍵；X是或化學鍵；l,m,n彼此獨立地是0或1；L是(C1-C6)-烷基；AA1,AA2彼此獨立地是氨基酸基團或被氨基酸保護基單取代或多取代的氨基酸基團；和它們的可藥用鹽。術語“烷基”應理解為是指直鏈或支鏈烴鏈。術語“氨基酸”或“氨基酸基團”是指例如下列化合物的立體異構(gòu)形式，即D-或L-型丙氨酸甘氨酸脯氨酸半胱氨酸組氨酸谷酰胺天門冬氨酸異亮氨酸精氨酸谷氨酸賴氨酸絲氨酸苯丙氨酸亮氨酸蘇氨酸色氨酸甲硫氨酸纈氨酸酪氨酸天門冬酰胺2-氨基己二酸2-氨基異丁酸3-氨基己二酸3-氨基異丁酸β-丙氨酸2-氨基庚二酸2-氨基丁酸2,4-二氨基丁酸4-氨基丁酸鎖鏈素γ-氨基丁酸2,2-二氨基庚二酸6-氨基己酸2,3-二氨基丙酸2-氨基庚酸N-乙基甘氨酸2-(2-噻吩基)-甘氨酸3-(2-噻吩基)-丙氨酸青霉胺N-甲基甘氨酸N-乙基天門冬酰胺N-甲基異亮氨酸羥基賴氨酸6-N-甲基賴氨酸別羥基賴氨酸N-甲基纈氨酸3-羥基脯氨酸正纈氨酸4-羥基脯氨酸正亮氨酸異鎖鏈素鳥氨酸別-異亮氨酸11-氨基十一烷酸氨基酸是按照常規(guī)命名法縮寫(參見Schrder,Lübke，《肽》第1卷，紐約1965,ⅩⅫ-ⅩⅩⅢ頁；Houben-Weyl,《有機化學的方法》(MethoderderOrganischenChemie)第ⅩⅤ/1和2卷，Stuttgart1974)。氨基酸D-Asp是指D型的天門冬氨酸。肽從其化學性質(zhì)來說是酰胺類化合物并且在水解時可分解為氨基酸。術語“氨基酸保護基”應理解是指可保護氨基酸側(cè)鏈的官能團的適當基團(參見，例如T.W.Greene,P.G.M.Wuts,《有機合成中的保護基》第2版，JohnWiley&Sons,NewYork1991)。優(yōu)選的氨基酸保護基是叔-丁氧基-羰基(BOC),9-芴基甲氧基-羰基(Fmoc)，芐氧基-羰基(Z),2-(3,5-二甲氧基苯基)丙-2-基氧基羰基(Ddz)，甲基，叔丁基，三苯甲基和S-叔丁基，叔丁基氨基-羰基。本發(fā)明還涉及式Ⅰ化合物的制備方法，該方法按照下列反應式(反應式1-4)進行方法A反應式1Ⅱ類的鄰位-、間位-或?qū)ξ?取代亞胺類化合物通過與酮Ⅲ反應可制得Ⅳ類化合物。該反應可以通過例如將兩種化合物以本體混合而不采用溶劑并且隨后加熱來進行，或者在適當溶劑如乙醇、四氫呋喃(THF)、甲苯、二甘醇二甲醚或十四烷中于20℃-150℃的溫度下進行。用NaBH4或其它適當?shù)倪€原劑在適宜的溶劑中于-30℃至+40℃的溫度下還原Ⅳ類酮化合物，得到Ⅴ類的羥基化合物，所述溶劑例如是甲醇、THF或THF/水。在該還原反應中獲得的主產(chǎn)物通常是兩種異構(gòu)體的混合物(外消旋體)。利用分級結(jié)晶法或硅膠色譜法可以分離不同消旋體使異構(gòu)體彼此分開。利用已知方法可以還原Ⅴ類化合物中的硝基，例如用Pd或炭載Pd以及H2于甲醇中催化氫化。由此獲得的Ⅵ類外消旋化合物可以進一步分離為對映異構(gòu)體。用手性色譜柱材料通過色譜法或通過文獻所述已知方法利用旋光性輔助試劑(參見《有機化學雜志》第44卷，1979,4891)對Ⅵ進行外消旋拆分，可得到Ⅶ類的對映異構(gòu)體。反應式2按照反應式2,Ⅵ或Ⅶ類的芳族胺(外消旋體或純的對映異構(gòu)體)可以與氨基酸通過已知標準肽偶聯(lián)法反應，得到衍生物Ⅷ。適用的方法例如是在DMF中用TOTU和三乙胺偶聯(lián)。(對于文獻可參見G.Breipohl,W.KnigEP0460446；W.Knig,G.Breipohl,P.Pokorny,M.Birkner.E.Giralt&D.Andreu(編著)《肽》1990,Escom,Leiden,1991,143-145)?；鶊FAA1和AA2具有式Ⅰ中給出的含義。氨基酸的氨基官能帶有保護基如Fmoc，并且羧基未經(jīng)保護。所以在側(cè)鏈中帶有官能團的氨基酸中，可以在合成過程中臨時保護或保留在本發(fā)明的化合物中。為了獲得衍生物Ⅷ，例如在Fmoc的情況下，于DMF和哌啶的混合物中可脫去氨基官能團的保護基。如果由Ⅶ類的化合物起始，可獲得二肽結(jié)合物Ⅸ。重復反應順序(a)偶聯(lián)氨基酸和(b)脫保護。反應式3由3-氨基-膽汁酸酯通過與烷基-或芳基二羧酸或其衍生物如琥珀酸酐相連利用已知方法(例如EP0614908,EP0489423)可以制得Ⅹ類的膽汁酸衍生物。通過標準肽偶聯(lián)方法使化合物(Ⅹ)與Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ或Ⅸ類的氨基化合物反應。偶聯(lián)反應后，通過水解膽汁酸部分的烷基酯官能團得到Ⅺ類的化合物。反應式4Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ或Ⅺ的氨基化合物可以與膽汁酸的羧酸官能團反應。此處可類似地采用已知的肽偶聯(lián)方法，例如在TOTU和三乙胺的存在下或用二環(huán)己基碳二亞胺、羥基苯并三唑和三乙胺在THF中偶聯(lián)。Ⅻ類的化合物可以通過這種方法獲得。由于在水中具有高于起始或基礎化合物的溶解度，可藥用鹽特別適合于醫(yī)藥用途。這些鹽必須具有可藥用陰離子或陽離子。適用于本發(fā)明化合物的可藥用酸加成鹽是無機酸的鹽，例如鹽酸或氫溴酸，磷酸，偏磷酸，硝酸，磺酸和硫酸的鹽；和有機酸的鹽，如乙酸或苯磺酸，苯甲酸，檸檬酸，乙磺酸，富馬酸，葡萄糖酸，乙醇酸，羥乙磺酸，乳酸，乳糖酸，馬來酸，蘋果酸、甲磺酸，琥珀酸，對-甲苯磺酸，酒石酸和三氟乙酸的鹽。氯化物鹽特別適用于醫(yī)藥用途。適用的可藥用堿鹽是銨鹽、堿金屬鹽(例如鈉鹽和鉀鹽)和堿土金屬鹽(如鎂鹽和鈣鹽)。帶有陰離子的非藥學可接受的鹽也包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)，它們可作為制備或純化可藥用鹽的有益中間產(chǎn)物和/或用于非治療用途，例如體外用途。在此所用的術語“生理功能衍生物”是指任何本發(fā)明所述式Ⅰ化合物的生理可接受衍生物，例如酯。它們在對哺乳動物如人體給藥時能夠(直接或間接地)生成式Ⅰ的化合物或其活性代謝產(chǎn)物。所述生理功能衍生物還包括本發(fā)明化合物的前藥。此類前藥可以體內(nèi)代謝為本發(fā)明的化合物。這些前藥本身可能有活性，或可能沒有活性。本發(fā)明的化合物也可以是不同的多晶型物形式，例如無定形和結(jié)晶多晶型形式。本發(fā)明化合物的所有多晶型物形式屬于本發(fā)明的范圍并且成為本發(fā)明的另一方面。在下文中所有有關“式(Ⅰ)的化合物”涉及上述的式(Ⅰ)的化合物，和在本發(fā)明中描述的鹽、溶劑化物和生理功能衍生物。式(Ⅰ)化合物獲得預期生理作用所必需的量取決于多種因素，例如選定的具體化合物、用途、給藥方式和患者的臨床病癥。通常，日劑量范圍是0.3mg至100mg(一般為3mg至50mg)/天/kg體重，例如3-10mg/kg/天。靜脈內(nèi)的劑量可例如是0.3mg-1.0mg/kg，其適合作為10ng-100ng/kg/分鐘的輸注液給藥。符合此目的的適當輸注液含有例如0.1ng-10mg，一般是1ng-10mg/ml，單劑量可以含有例如1mg-10g的活性物質(zhì)。所以，注射劑安瓿可以含有例如1mg-100mg，并且單劑量的口服給藥制劑(如片劑或膠囊)可以含有例如1.0-1000mg，一般是10-600mg。在可藥用鹽的情況中，上述重量數(shù)據(jù)與由鹽衍生的苯并硫氮雜類離子的重量相關。為了預防或治療上述病癥，式(Ⅰ)的化合物本身可以作為化合物使用，但優(yōu)選它們與可接受賦形劑形成藥物組合物的形式。顯然，所述賦形劑是可接受的，也就是與組合物的其他組分相容并且對患者的健康無害。所述賦形劑可以是固體或液體或兩者兼有，并且適宜與所述化合物配制為單劑量，例如片劑，其中可以含有0.05％至95％(重量)的活性化合物。除了含有式(Ⅰ)的化合物以外，還可以存在其他藥物活性物質(zhì)?？梢酝ㄟ^已知制藥方法來制備本發(fā)明的藥物組合物，其主要包括將所述組分與可藥用賦形劑和/或輔劑混合。本發(fā)明的藥物組合物是那些適合口服、直腸、局部、經(jīng)口(例如舌下)和非腸胃(例如皮下、肌肉內(nèi)、真皮內(nèi)或靜脈內(nèi))給藥的組合物，雖然在各種單獨情況中的最適當給藥方式取決于被治療病癥的性質(zhì)和嚴重性以及所用的具體式(Ⅰ)化合物。包衣制劑和包衣緩釋制劑也屬于本發(fā)明的范圍內(nèi)。優(yōu)選耐受酸和胃液的制劑。耐胃液的適當包衣包括鄰苯二甲酸乙酸纖維素、鄰苯二甲酸聚乙酸乙烯基酯、鄰苯二甲酸羥丙基甲基纖維素和甲基丙烯酸與甲基丙烯酸甲酯的陰離子型聚合物。適合口服給藥的藥用化合物可以是不連續(xù)單位的形式，例如膠囊、扁囊劑、含片(suckingtablet)或片劑，其中分別含有一定量的式(Ⅰ)化合物；散劑或顆粒劑；存在于水或非水液體中的溶液或混懸液；或水包油或油包水乳液。上文已提到，利用任何適當制藥方法可以配制出這些組合物，所述方法包括的步驟是，在該步驟中將活性化合物與賦形劑(可以含有一種或多種其它組分)接觸。通常是通過將活性化合物與液體和/或微細固體賦形劑均勻且均質(zhì)地混合來制備上述組合物，此后如果必要可以使產(chǎn)物成形。所以，例如將化合物的粉末或顆粒任選地與一種或多種其它組分通過壓縮或成型來制得片劑。通過在適當設備中將自由流動形式的化合物(如粉末或顆粒)壓片可以制得壓縮片劑，化合物可以任選地與粘合劑、潤滑劑、惰性稀釋劑和/或一種(或多種)表面活性劑/分散劑混合。通過在適當設備中成形粉狀化合物可制備成型片劑，所述粉狀化合物已經(jīng)用惰性液體稀釋劑濕潤。適合經(jīng)口腔(舌下)給藥的藥物組合物包括含片，其中含有式(Ⅰ)化合物和矯味物質(zhì)，通常是蔗糖，和阿拉伯膠或黃蓍膠；和錠劑，化合物含在惰性基質(zhì)中，如明膠和甘油，或蔗糖和阿拉伯膠。適合非腸胃給藥的藥物組合物優(yōu)選包括式(Ⅰ)化合物的滅菌含水制劑，該制劑優(yōu)選與接受者的血液等滲。雖然作為注射液還可以經(jīng)皮下、肌肉內(nèi)或真皮內(nèi)注射給藥，但優(yōu)選這些制劑經(jīng)靜脈內(nèi)給藥。例如，通過使所述化合物與水混合并且將所得溶液滅菌，令其與血液等滲可以制得上述制劑。本發(fā)明的可注射組合物一般含有0.1-5％(重量)的活性化合物。適合直腸給藥的藥物組合物適宜是單劑量栓劑的形式。通過使式(Ⅰ)的化合物與一種或多種常規(guī)固體賦形劑如可可脂混合并且將該混合物加入模具中可以制得上述制劑。適合局部涂敷在皮膚上的藥物組合物優(yōu)選是軟膏、霜劑、洗劑、糊劑、噴霧劑、氣溶膠或油?？墒褂玫馁x形劑是凡士林、羊毛脂、聚乙二醇、醇和兩種或多種這些物質(zhì)的聯(lián)合形式。所含活性化合物的濃度一般是該組合物的0.1-15％(重量)，例如0.5-2％(重量)。經(jīng)皮給藥也是可行的。適合經(jīng)皮應用的藥物組合物可以是單獨貼劑的形式，其適合于長時間接觸在患者表皮上。此類貼劑適宜在任選緩沖的水溶液中含有活性物質(zhì)，溶解和/或分散在粘合促進劑中，或分散在聚合物中。適當?shù)幕钚曰衔餄舛仁羌s1％-35％(重量)，優(yōu)選約3％-15％(重量)。特別是，可以通過電轉(zhuǎn)運法和離子電滲法釋放活性化合物，如《藥物研究》(PharmaceuticalResearch),2(6):318(1986)所述。本發(fā)明涉及式Ⅰ化合物的外消旋體、消旋混合物和純的對映異構(gòu)體形式，并且涉及它們的非對映異構(gòu)體及其混合物。式Ⅰ的化合物及其可藥用鹽和生理功能衍生物的杰出特征在于對脂質(zhì)代謝具有有益作用。所述化合物本身可以被應用，或與其他降脂活性化合物聯(lián)合使用。所述化合物適用于預防和特別是治療脂質(zhì)代謝紊亂，尤其是高脂血癥。式Ⅰ的化合物也能夠適當?shù)赜绊懷迥戠薮妓?，可用于預防和治療動脈硬化癥。下列發(fā)現(xiàn)證實了本發(fā)明化合物的藥理學活性。對本發(fā)明化合物進行生物試驗，測定對兔回腸的刷狀緣膜囊(brushbordermembranevesicles)中[3H]-?；悄懰猁}攝取的抑制作用。1．由兔回腸制備刷狀緣膜囊利用所謂的Mg2+沉淀法由小腸的腸細胞制備刷狀緣膜囊。通過靜脈內(nèi)注射0.5mlT61處死雄性新西蘭兔(體重2-2.5kg),T61是2.5mg鹽酸丁卡因、100m乙甲丁酰胺和25mg碘環(huán)三甲銨的水溶液。取出小腸并且用冰冷卻的生理鹽水溶液漂洗。取小腸末端7/10處(自口腔向直腸方向測量，即末端回腸，其含有活化Na+-依賴性膽酸轉(zhuǎn)運系統(tǒng))用來制備刷狀緣膜囊。將腸子置于塑料袋中在-80℃氮氣下冷凍。為了制備膜囊，在30℃的水浴中解凍冷凍的腸。將粘膜刮去并且懸浮于60ml冰冷的12mMTris/HCl緩沖液(pH7.1)/300mM甘露糖醇，5mMEGTA/10mg/L苯甲基磺酰氟/1mg/l的得自大豆的胰蛋白酶抑制劑(32U/mg)/0.5mg/l的得自牛肺的胰蛋白酶抑制劑(193U/mg)/5mg/l的桿菌肽。在用冰冷的蒸餾水稀釋至300ml后，用Ultraturrax(18桿，IKAWerkStaufen，德國)以最大值的75％將該混合物均化3分鐘，同時用冰冷卻。在加入3ml的1MMgCl2溶液(終濃度為(10mM)后，令混合物在0℃下準確放置1分鐘。通過加入Mg2+，使細胞膜聚集，并且除了刷狀緣膜以外發(fā)生沉淀。在3000xg(5000rpm,SS-34轉(zhuǎn)鼓)下離心15分鐘后，棄去沉淀，含有刷狀緣膜的上清液在48000xg(20000rpm,SS-34轉(zhuǎn)鼓)下離心30分鐘。棄去上清液，并且用PotterElvejhem均化器(Braun,Melsungen,900rpm,10沖程)將沉淀在60ml的12mMTris/HCl緩沖液(pH7.1)/60mM甘露糖醇、5mMEGTA中再次均化。加入0.1ml1MMgCl2溶液并且在0℃下保溫15分鐘，將該混合物再在3000xg下離心15分鐘。隨后上清液在48000xg(20000rpm,SS-34轉(zhuǎn)鼓)下離心30分鐘。將沉淀加入30ml的10mMTris/Hepes緩沖液(pH7.4)/300mM甘露糖醇中并且用PotterElvejhem均化器在1000rpm下重新均勻懸浮。在48000xg(20000rpm,SS-34轉(zhuǎn)鼓)下離心30分鐘后，將沉淀加入0.5-2ml的Tris/Hepes緩沖液(pH7.4)/280mM甘露糖醇(終濃度20mg/ml)中并且借助于結(jié)核菌素注射器用27規(guī)格針頭重新懸浮。制得后或在液氮中在-196℃下以4mg份保藏后膜囊可直接用于轉(zhuǎn)運研究。2．對回腸的刷狀緣膜囊中Na+依賴性[3H]-牛磺膽酸鹽攝取的抑制利用所謂的膜過濾法測定上述刷狀緣膜囊中底物的攝取。將10μl的囊混懸液(100μg蛋白)吸量滴加在聚苯乙烯培養(yǎng)管(11×70mm)的側(cè)壁上，管中含有具有相應配體(90μl)的培養(yǎng)基。所述培養(yǎng)基含有0.75μl=0.75μCi[3H(G)]-?；悄懰猁}(比放射性2.1Ci/mmol)/0.5μl的10mM牛磺膽酸鹽/8.75μl的鈉轉(zhuǎn)運緩沖液(10mMTris/Hepes(pH7.4)/100mM甘露糖醇/100mMNaCl)(Na-T-B)或8.75μl鉀轉(zhuǎn)運緩沖液(10mMTris/Hepes(pH7.4)/100mM甘露糖醇/100mMKCl)(K-T-B)和80μl所述抑制劑溶液，抑制劑溶解在Na-T緩沖液或K-T緩沖液中，這取決于該試驗。經(jīng)聚偏二氟乙烯濾膜(SYHVLO4NS,0.45μm,4mmφ,Millipore,Eschborn，德國)過濾該培養(yǎng)基。通過使該囊與培養(yǎng)基混合開始轉(zhuǎn)運的測定。培養(yǎng)批次中的牛磺膽酸鹽濃度為50μM。經(jīng)過預定培養(yǎng)時間(通常為1分鐘)后，加入1ml的冰冷終止液(10mMTris/Hepes(pH7.4)/150mMKCl)來終止轉(zhuǎn)運。生成的混合物立刻通過抽濾在25-35mBar的真空下用硝酸纖維素濾膜(ME25,0.45μm,25mm直徑，Schleicher&Schuell,Dassell，德國)過濾。用5ml的冰冷終止液漂洗該濾膜。為了測定放射性標記?；悄懰猁}的攝取，將濾膜溶解在4ml閃爍劑Quickszint361(ZinsserAnalytikGmbH，法蘭克福，德國)中，并且利用液體閃爍計數(shù)測量法在TriCarb2500測量儀(CanberraPackardGmbH，法蘭克福，德國)中測定放射性。借助于標準樣本，在校準儀器和矯正任何存在的化學發(fā)光后得到測量值，表示為dpm(每分鐘衰變數(shù))。在各種情況中測定Na-T-B和K-T-B中的空白對照值。攝取在Na-T-B和K-T-B中的差異給出Na+依賴性轉(zhuǎn)運量。基于空白對照計，抑制50％Na+依賴性轉(zhuǎn)運量的抑制劑濃度為IC50Na+。藥理學數(shù)據(jù)包括一系列試驗，其中研究了本發(fā)明的化合物與小腸末端的腸道膽汁酸轉(zhuǎn)運系統(tǒng)的相互作用。結(jié)果概括在表1中。表1表示對兔回腸刷狀緣膜囊中[3H]-牛磺膽酸鹽攝取的抑制作用的測量值。給出了參比物?；蛆Z去氧膽酸(TCDC)和特定試驗物質(zhì)的IC50Na的商數(shù)。表1下列實施例的作用是更詳細地舉例說明本發(fā)明，本發(fā)明決不僅限于實施例的產(chǎn)物和實施方案。將得自實施例1d/1的2.5g(5.86mmol)非極性消旋體溶解在300ml甲醇中，加入約20mg的Pd/C10％并且在H2氣氛中于室溫下進行氫化。濾除催化劑并且蒸發(fā)該溶液。殘余物經(jīng)硅膠層析(正庚烷/乙酸乙酯7∶13)。收率1.9g(82％)產(chǎn)物C25H24N4O(396.22)MS(FAB)397M+H+f．(+)-對映異構(gòu)體(實施例1f/2)利用制備HPLC將100mg的實施例1e的外消旋化合物拆分為對映異構(gòu)體。拆分在CSO-Chiralpak柱(Daicel,Düsseldorf)上用正己烷/乙醇4∶1進行。得到40mg的(-)-對映異構(gòu)體(實施例1f/1)作為第一級份，并且得到40mg的(+)-對映異構(gòu)體(實施例1f/2)作為第二級份。g．將4.0g(10.1mmol)實施例1e的氨基化合物(非極性外消旋體)、4.85g(10.3mmol)的N-Fmoc-D-Lys(BOC)OH、4.0g(12.2mmol)的TOTU和2.7ml的三乙胺溶于300ml二甲基甲酰胺中，并且在室溫下將該溶液攪拌2小時。將該反應混合物傾入水中并且用乙酸乙酯提取(2X)。干燥有機相(MgSO4)并且蒸發(fā)。將殘余物溶于150ml二甲基甲酰胺/哌啶2∶1中以脫除Fmoc基，室溫下將該溶液攪拌1小時。將其傾入水中并且用乙酸乙酯提取(3X)。干燥有機相(MgSO4)并且蒸發(fā)。用硅膠層析(二氯甲烷/甲醇9∶1)得到4.0g(63.5％)的產(chǎn)物。C36H44N6O4(624.3)MS(FAB)625M+H+h．將5.0g(11.86mmol)的3β-氨基膽汁酸甲酯(歐洲專利申請EP0614908)、1.3g(13mmol)琥珀酸酐和16.5ml三乙胺溶于75ml四氫呋喃中并且將該溶液在室溫下攪拌1小時。蒸發(fā)該溶液。將殘余物溶于水中并且用鹽酸酸化該溶液，用乙酸乙酯提取(3X)。干燥有機相(MgSO4)并且蒸發(fā)。收率5.8g(94％)產(chǎn)物C29H47NO7(521.3)MS(FAB)528M+LI+l．將4.0g(6.4mmol)實施例1g的化合物、3.45g(6.6mmol)的實施例1h的膽酸衍生物、1.2ml的三乙胺、2.16g(16mmol)羥基苯并三唑和2.56g的二環(huán)己基碳二亞胺(12.4mmol)溶于250ml的四氫呋喃中并且在室溫下將該溶液攪拌5小時。蒸發(fā)該混合物，將殘余物溶解在乙酸乙酯中并且用NaHCO3溶液洗滌該溶液。干燥有機相(MgSO4)并且蒸發(fā)。在硅膠上層析(二氯甲烷/甲醇19∶1，隨后9∶1)得到3.1g(43％)產(chǎn)物。C65H89N7O10(1127.7)MS(FAB)1134.7M+Li+j．將3.1g(2.75mmol)的實施例1i的甲酯溶于200ml的乙醇中，加入31ml的1NNaOH溶液并且將該混合物在室溫下攪拌5小時。蒸發(fā)該混合物，將殘余物溶于水中，加入飽和NaH2PO4溶液。用乙酸乙酯提取該混合物(2X)并且干燥有機相(MgSO4)和蒸發(fā)。將粗產(chǎn)物在硅膠上層析(二氯甲烷/甲醇4∶1)。收率2.25g(73％)產(chǎn)物C64H87N7O10(1113.7)MS(FAB)1120.7M+Li+k．0℃下，將0.48ml的氯甲酸乙酯加入1.5g(1.35mmol)實施例1j的化合物和0.81ml的三乙胺中并且將該混合物攪拌10分鐘。此后，加入溶于30ml0.1NNaOH溶液中的0.6g?；撬岵⑶沂覝叵聦⒃摶旌衔飻嚢?4小時。蒸發(fā)該混合物，將殘余物溶于少量水中，將該溶液傾入飽和NaH2PO4溶液中。用乙酸乙酯提取該混合物(3X)并且干燥有機相(MgSO4)和蒸發(fā)。在硅膠上層析(二氯甲烷/甲醇4∶1，隨后甲醇)，得到0.98g(60％)?；撬崤悸?lián)物。C66H92N8O12S(1270.7)MS(FAB)1243.6M+Na+實施例2a．將2.5g(6.31mmol)實施例1e的氨基化合物(非極性外消旋體)、2.2g(6.52mmol)的Fmoc-L-脯氨酸、2.5g(7.62mmol)的TOTU和1.7ml的三乙胺溶于100ml二甲基甲酰胺中，并且在室溫下將該溶液攪拌3小時。使該反應混合物蒸發(fā)至一半，加入水并且用乙酸乙酯提取(3X)。用MgSO4干燥有機相并且蒸發(fā)。用硅膠層析(乙酸乙酯/庚烷7∶3)后得到3.85g(85％)的產(chǎn)物。將這種Fmoc保護的中間產(chǎn)物(3.6g)溶解在110ml哌啶/DMF1∶10中，室溫下將該溶液攪拌1小時。蒸發(fā)該混合物，殘余物用硅膠層析(二氯甲烷/甲醇19∶1，隨后9∶1)收率1.8g(72.5％)C30H31N5O2(493.2)MS(FAB)494M+H+b．室溫下將1.7g(3.44mmol)實施例2a的化合物與1.4g(3.61mmol)的Fmoc-L-苯丙氨酸、1.9g(5.80mmol)的TOTU和1.0ml三乙胺在150mlDMF中一起攪拌4小時。蒸發(fā)該反應混合物并且殘余物用硅膠層析(乙酸乙酯/正庚烷4∶1)。得到兩種級份第一級份1.28g(43％)非極性非對映異構(gòu)體(實施例2b/1)C54H50N6O5(862.4)MS(FAB)863.4M+H+第二級份0.82g(28％)極性非對映異構(gòu)體(實施例2b/1)C54H50N6O5(862.4)MS(FAB)863.4M+H+c．將0.8g(0.93mmol)實施例2b/2的化合物溶于33mlDMF/哌啶10∶1中并且室溫下將該混合物攪拌1小時。蒸發(fā)后，殘余物用硅膠層析(二氯甲烷/甲醇19∶1，隨后9∶1)。收率0.35g(59％)C39H40N6O3(640.3)MS(FAB)641.3M+H+d．通過實施例1i所述方法，使0.5g(0.78mmol)實施例2c的化合物和0.45g(0.86mmol)實施例1h的膽汁酸衍生物反應，得到0.38g(43％)產(chǎn)物。C68H85N7O9(1143.6)MS(FAB)1144.6M+H+將0.31g(0.27mmol)實施例1d的甲酯溶于30ml乙醇中，加入3.0ml的1NNaOH溶液并且室溫下將該混合物攪拌12小時。蒸發(fā)該反應混合物，殘余物用硅膠層析(二氯甲烷/甲醇4∶1)。收率220mg(72％)C67H83N7O9(1129.6)MS(FAB)1130.6M+H+實施例4C49H62N4O5(787.1)MS(FAB)788.1M+H+實施例5(非極性非對映異構(gòu)體)C53H67N5O7(888.2)MS(FAB)887.2M+H+實施例6C54H69N5O7(900.2)MS(FAB)901.2M+H+實施例7(極性非對映異構(gòu)體)C53H67N5O7(886.2)MS(FAB)887.2M+H+實施例8C53H67N5O7(886.2)MS(FAB)887.2M+H+實施例9C60H81N7O8(1028.4)MS(FAB)1029.4M+H+實施例10C59H79N7O8(1014.3)MS(FAB)1015.3M+H+實施例11C67H83N7O9(1130.5)MS(FAB)1031.5M+H+實施例12C64H87N7O10(1114.4)MS(FAB)1115.4M+H+實施例13C68H85N7O9(1144.5)MS(FAB)1145.5M+H+實施例14C66H90N8O11(1171.5)MS(FAB)1172.5M+H+權(quán)利要求1．式Ⅰ的化合物其中GS是下式的膽汁酸基團，R1是與X相連的鍵，OH；R2是與X相連的鍵，OH,O-(C1-C6)-烷基，NH-(C2-C6)烷基-SO3H,N(CH3)-CH2-CH2-SO3H,NH-(C1-C6)-烷基-COOH；N(CH3)-(C1-C6)-烷基-COOH；條件是R1和R2不同時具有以下含義R1與X相連的鍵，和R2與X相連的鍵；R3,R4彼此獨立地是H,OH；X是或化學鍵；l,m,n彼此獨立地是0或1；L(C1-C6)-烷基，苯基；AA1,AA2彼此獨立地是氨基酸基團或被氨基酸保護基單取代或多取代的氨基酸基團；以及它們的可藥用鹽和生理功能衍生物。2．權(quán)利要求1所述的式Ⅰ化合物，其中GS是下式的膽汁酸基團，R1是與X相連的鍵，OH；R2是與X相連的鍵，OH,O-(C1-C6)-烷基，NH-(C2-C6)烷基-SO3H,N(CH3)-CH2-CH2-SO3H,NH-(C1-C6)烷基-COOH；N(CH3)-(C1-C6)-烷基-COOH；條件是R1和R2不同時具有以下含義R1與X相連的鍵，和R2與X相連的鍵；X是或化學鍵；1,m,n彼此獨立地是0或1；L是(C1-C6)-烷基，苯基；AA1,AA2彼此獨立地是氨基酸基團或被氨基酸保護基單取代或多取代的氨基酸基團；以及它們的可藥用鹽和生理功能衍生物。3．權(quán)利要求1或2所述的式Ⅰ化合物，其中GS是下式的膽汁酸基團，R1是與X相連的鍵，OH；R2是與X相連的鍵，OH,O-(C1-C6)-烷基，NH-(C2-C6)烷基-SO3H,NH-(C1-C6)-烷基-COOH；條件是R1和R2不同時具有以下含義R1與X相連的鍵，和R2與X相連的鍵；X是或化學鍵；l,m,n彼此獨立地是0或1；L是(C1-C6)-烷基；AA1,AA2彼此獨立地是氨基酸基團或被氨基酸保護基單取代或多取代的氨基酸基團；和它們的可藥用鹽。4．含有權(quán)利要求1-3一項或多項中所述的一種或多種化合物的藥物。5．含有權(quán)利要求1-3一項或多項中所述的一種或多種化合物和一種或多種降脂活性化合物的藥物6．權(quán)利要求1-3一項或多項中所述的化合物用作預防或治療脂代謝紊亂的藥物。7．權(quán)利要求1-3一項或多項中所述的化合物用作治療高脂血癥的藥物。8．權(quán)利要求1-3一項或多項中所述的化合物用作預防或治療動脈硬化癥的藥物。9．權(quán)利要求1-3一項或多項中所述的化合物與至少一種其他降脂活性化合物聯(lián)合用作預防或治療脂代謝紊亂的藥物。10．權(quán)利要求1-3一項或多項中所述的化合物與至少一種其他降脂活性化合物聯(lián)合作為治療高脂血癥的藥物。11．權(quán)利要求1-3一項或多項中所述的化合物與至少一種其他降脂活性化合物聯(lián)合用作預防或治療動脈硬化癥的藥物。12．制備含有一種或多種權(quán)利要求1-3一項或多項中所述化合物的藥物的方法，其中包括將所述活性化合物與適合藥用的賦形劑混合并且使該混合物成為適于給藥的形式。13．權(quán)利要求1-3一項或多項中所述的化合物在制備用于預防或治療脂代謝紊亂的藥物中的應用。14．權(quán)利要求1-3一項或多項中所述的化合物在制備用于治療高脂血癥的藥物中的應用。全文摘要本發(fā)明涉及取代丙醇胺衍生物及其可藥用鹽和生理功能的衍生物。本發(fā)明涉及式(Ⅰ)的化合物及其生理可接受鹽、生理可接受衍生物,其中基團具有所定義的含義,和它們的制備方法。該化合物適合例如作為促血清脂質(zhì)減少劑。文檔編號C07J43/00GK1321166SQ99811634公開日2001年11月7日申請日期1999年9月18日優(yōu)先權(quán)日1998年10月2日發(fā)明者S·斯坦格林,A·恩森,H·格羅姆畢克,W·卡拉默,E·法爾克申請人:阿文蒂斯藥物德國有限公司