專(zhuān)利名稱(chēng)：一種基因工程雙特異抗體及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明公開(kāi)了一種基因工程雙特異抗體及其應(yīng)用，特別涉及一種由抗紅細(xì)胞和抗乙肝表面抗原組成的基因工程雙特異抗體及其應(yīng)用。
目前，公知的雙特異抗體主要有1993年英國(guó)劍橋大學(xué)的Winter教授通過(guò)縮短單鏈抗體連接肽的方法制備的由抗腫瘤細(xì)胞和抗免疫細(xì)胞表面標(biāo)志CD3組成的雙特異抗體，稱(chēng)為雙特異Diabody，其在臨床上主要作用于抗腫瘤治療。由抗紅細(xì)胞和抗乙肝表面抗原組成的基因工程雙特異抗體及其應(yīng)用尚無(wú)記載與應(yīng)用。
本發(fā)明的目的在于提供一種由抗紅細(xì)胞和抗乙肝表面抗原組成的基因工程雙特異抗體及其應(yīng)用。
本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的A．雙特異抗體基因本發(fā)明利用基因工程重組技術(shù)通過(guò)縮短單鏈抗體連接肽的方法將抗紅細(xì)胞和抗乙肝表面抗原改造成雜合抗體基因，組裝于PCOMb3H表達(dá)載體中(載體PCOMb3H的參考文獻(xiàn)為CarlosF.BarbasⅢ andJurgen Wagner Synthetic Human Antibodies:Selecting andEvolving Functional Proteins METHODS:A Companion toMethods in Enzymology 1995；8:94-103)，構(gòu)成抗紅細(xì)胞和抗乙肝表面抗原雙特異抗體；雙特異抗體基因序列為GCCGAGCTCA CCCAGTCTCC ATCCTTCCTG TCTGCATCTATAGGAGACAG CGTCACCATC ACTTGCCGGA CCAGTCAGGACATTGATAAT TATTTAGCCT GGTATCAGCA AAAACCAGGAAAAGCCCCTA AGCTCCTGGT CTATTCTGCA TCCGCCTTGCAAGGTGGGGT CCCATCAAGG TTCAGCGGCA GTGGATCTAGGACAGATTTC ACTCTCACAA TCAACAGCCT GCAGCCTGAA
GATTCTGCAA CTTATTACTG TCAACAGCTT GGAAGTTACCCACTCACTTT CGGCGGAGGG ACCAAGGTGG AGATCAAACGATCTAGAGGT GGTGGATCCG AGGTGCAGCT GCTCGAGCTTGCGGAGTCTG GGGGAGGCTT AGTGAAGCCT GGAGGGTCCCTGAAACTCTC CTGTACAACC TCTGGATTCG CTTTCAGTAGTTATGACATG TCTTGGGTTC GCCAGACTCC GGAGAAGAGGCTGGAGTGGG TCGCATACAT TAGTAGTGCT GGTGGTAGTATTTATTATTC AGACACTGTG AAGGACCGCT TCACCATCTCCAGAGACAAT GTCAAAAACA CCCTGTACCT GCAAATGAACAGTCTGAATT CTGAGGACAC AGCCATATAT TACTGTACAAGACACGGGCT CGGCTCCTAC TATGTTATGG ACTACTGGGGTCAAGGAACC TCAGTCACCG TCTCCTCAAC TAGTGAACAAAAACTCATCT CAGAAGAAGA TCTGGCTAGC CATCACCATCACCATCACTA AGTCGACAGG AGGAATTTAA AATGAAAAAGACAGCTATCG CGATTGCAGT GGCACTGGCT GGTTTCGCTACCGTGGCCCA GGCGGCCGAG CTCCAGATGA CCCAGTCTCCAGCCTCCCTA TCTGCATCTG TGGGAGAAAC TGTCACCATCACATGTCGAG CAAGTGAGAA TATTTACAGT TATTTAGCATGGTATCAGCA GAAACAGGGA AAATCTCCTC AGCTCCTGGTCTATAATGCA AAAACCTTAG CAGAAGGTGT GCCATCAAGGTTCAGTGGCA GTGGATCAGG CACACAGTTT TCTCTGAAGATCAACAGCCT GCAGCCTGAA GATTTTGGGA GTTATTACTGTCAACATCAT TATGGTACTC GTCTCACGTT CGGTGCTGGGACCAAGCTGG AGCTGAAACG GTCTAGAGGT GGTGGATCCGAGGTGCAGGT GCTCGAGGAG TCTGGGGGAG GCTTGGTACAGGCTGGGGGG TCCCTGAGAC TCTCCTGTGC AATCTCTGGATTCACCTTTA GTGACTATGC CGTGAGTTGG GTCCGCCAGGCTCCTGGGAA GGGGCTGGAG TGGGTCTCAA CCATCAGTGG
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采用抗紅細(xì)胞和抗乙肝表面抗原雙特異基因制備而成的雙特異抗體，由于基因工程產(chǎn)品，可直接從細(xì)菌培養(yǎng)上清中獲取，降低了產(chǎn)品的制備成本；在檢測(cè)過(guò)程中不需要使用特殊設(shè)備，只需采集未梢血，在室溫放置1～2分鐘便可完成檢測(cè)，不受時(shí)間和地理位置的影響，具有操作簡(jiǎn)便、快捷的優(yōu)點(diǎn)。
使用雙特異抗體檢測(cè)血中乙肝表面抗原的方法是在玻片上滴加雙特異抗體試劑50ml，采集未梢血(指血或耳垂血)20ml與試劑混勻，在室溫放置1～2分鐘，將玻片搖動(dòng)觀察凝集情況，判定結(jié)果，血球凝集者為乙肝表面抗原陽(yáng)性。
權(quán)利要求
1．一種基因工程雙特異抗體及其應(yīng)用，利用基因工程重組技術(shù)通過(guò)縮短單鏈抗體連接肽的方法將抗紅細(xì)胞和抗乙肝表面抗原改造成雜合抗體基因，組裝于PCOMb3H表達(dá)載體中，構(gòu)成抗紅細(xì)胞和抗乙肝表面抗原雙特異抗體基因；其特征在于雙特異抗體基因序列為GCCGAGCTCA CCCAGTCTCC ATCCTTCCTG TCTGCATCTATAGGAGACAG CGTCACCATC ACTTGCCGGA CCAGTCAGGACATTGATAAT TATTTAGCCT GGTATCAGCA AAAACCAGGAAAAGCCCCTA AGCTCCTGGT CTATTCTGCA TCCGCCTTGCAAGGTGGGGT CCCATCAAGG TTCAGCGGCA GTGGATCTAGGACAGATTTC ACTCTCACAA TCAACAGCCT GCAGCCTGAAGATTCTGCAA CTTATTACTG TCAACAGCTT GGAAGTTACCCACTCACTTT CGGCGGAGGG ACCAAGGTGG AGATCAAACGATCTAGAGGT GGTGGATCCG AGGTGCAGCT GCTCGAGCTTGCGGAGTCTG GGGGAGGCTT AGTGAAGCCT GGAGGGTCCCTGAAACTCTC CTGTACAACC TCTGGATTCG CTTTCAGTAGTTATGACATG TCTTGGGTTC GCCAGACTCC GGAGAAGAGGCTGGAGTGGG TCGCATACAT TAGTAGTGCT GGTGGTAGTATTTATTATTC AGACACTGTG AAGGACCGCT TCACCATCTCCAGAGACAAT GTCAAAAACA CCCTGTACCT GCAAATGAACAGTCTGAATT CTGAGGACAC AGCCATATAT TACTGTACAAGACACGGGCT CGGCTCCTAC TATGTTATGG ACTACTGGGGTCAAGGAACC TCAGTCACCG TCTCCTCAAC TAGTGAACAAAAACTCATCT CAGAAGAAGA TCTGGCTAGC CATCACCATCACCATCACTA AGTCGACAGG AGGAATTTAA AATGAAAAAGACAGCTATCG CGATTGCAGT GGCACTGGCT GGTTTCGCTACCGTGGCCCA GGCGGCCGAG CTCCAGATGA CCCAGTCTCCAGCCTCCCTA TCTGCATCTG TGGGAGAAAC TGTCACCATCACATGTCGAG CAAGTGAGAA TATTTACAGT TATTTAGCATGGTATCAGCA GAAACAGGGA AAATCTCCTC AGCTCCTGGTCTATAATGCA AAAACCTTAG CAGAAGGTGT GCCATCAAGGTTCAGTGGCA GTGGATCAGG CACACAGTTT TCTCTGAAGATCAACAGCCT GCAGCCTGAA GATTTTGGGA GTTATTACTGTCAACATCAT TATGGTACTC GTCTCACGTT CGGTGCTGGGACCAAGCTGG AGCTGAAACG GTCTAGAGGT GGTGGATCCGAGGTGCAGCT GCTCGAGGAG TCTGGGGGAG GCTTGGTACAGCCTGGGGGG TCCCTGAGAC TCTCCTGTGC AATCTCTGGATTCACCTTTA GTGACTATGC CGTGAGTTGG GTCCGCCAGGCTCCTGGGAA GGGGCTGGAG TGGGTCTCAA CCATCAGTGGCAGTGCTGGA AACACATACT ACGCAGACTC CGTGAAGGGCCGATTGATCA TCTCCAGAGA CACTTCCAGG AACATGCTATTTCTGCAAAT GAACAGCCTG AGAGCCGAGG ACACGGCCGTATATTACTGT GCGAAAGTCA AGATGGTTCG GGGTGGCTACTGGTTCTACG GTATGGACGT CTGGGGCCAA GGGACCGCGGTCAGAGTCTC CTCA；
2．一種基因工程雙特異抗體及其應(yīng)用，其特征在于雙特異抗體可做為乙肝表面抗原檢測(cè)試劑，檢測(cè)血中乙肝表面抗原。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種由抗紅細(xì)胞和抗乙肝表面抗原組成的基因工程雙特異抗體及其應(yīng)用,是利用基因工程重組技術(shù)通過(guò)縮短單鏈抗體連接肽的方法將抗紅細(xì)胞和抗乙肝表面抗原改造成雜合抗體基因,組裝于同一表達(dá)載體中,構(gòu)成抗紅細(xì)胞和抗乙肝表面抗原雙特異抗體;可做為乙肝表面抗原檢測(cè)試劑,檢測(cè)血中乙肝表面抗原。由抗紅細(xì)胞和抗乙肝表面抗原組成的雙特異抗體,由于基因工程產(chǎn)品,可直接從細(xì)菌培養(yǎng)上清中獲取,降低了產(chǎn)品的制備成本;在檢測(cè)過(guò)程中不需要使用特殊設(shè)備,不受時(shí)間和地理位置的影響,具有操作簡(jiǎn)便、快捷的優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)C07K16/18GK1232039SQ9910351
公開(kāi)日1999年10月20日 申請(qǐng)日期1999年4月2日 優(yōu)先權(quán)日1999年4月2日
發(fā)明者陳宇萍, 王琰 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍海軍總醫(yī)院