一種兩親性九肽及其作為藥物載體的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種兩親性九肽，其氨基酸序列為序列表中SEQ?ID?NO：1所述。本發(fā)明還提供了一種所述兩親性九肽在制備藥物載體中的應(yīng)用，實驗表明，本發(fā)明所述兩親性九肽能在水中進行自組裝，并且藥物分子能參與到所述兩親性九肽的自組裝過程中，被自組裝九肽包裹，形成藥物分子的兩親性九肽包埋體。
【專利說明】一種兩親性九肽及其作為藥物載體的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種兩親性九肽及其作為藥物載體的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]兩親性自組裝肽能在溶液中通過分子間的非共價鍵作用力進行自組裝，形成納米纖維，納米粒、納米管等，其良好的生物可降解性，無毒性及無免疫原性，使得其在藥物載體方面具有廣闊的應(yīng)用前景。但目前公開的能形成納米纖維、納米粒或者納米管的兩親性自組裝短肽主要為全程電荷匹配的肽，隨著制藥工程、生物工程、組織工程等領(lǐng)域?qū)哂辛己蒙锟山到庑砸约盁o毒無免疫性能的兩親性自組裝肽類藥物載體的需求的不斷增加，豐富半程匹配兩親性自組裝肽的種類是非常有必要的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種半程電荷匹配的兩親性九肽，以增加兩親性短肽的類型和藥物載體的類型。
[0004]本發(fā)明所述兩親性九肽，其氨基酸序列為序列表中SEQ ID NO:1所述，分子量為1142.5。
[0005]本發(fā)明所述兩親性九肽可以通過固相合成法合成，合成方法可參見胡春玲等，鱉甲抗肝纖維化活性多肽的固相合成，醫(yī)藥導(dǎo)報，2011年第05期。
[0006]圓二色性檢測、傅立葉紅外檢測以及剛果紅染色檢測表明，該兩親性九肽的主要二級結(jié)構(gòu)為β_折疊，同時存在β_轉(zhuǎn)角，這是該兩親性九肽能夠進行自組裝的基礎(chǔ)，形態(tài)檢測顯示所述兩親性九肽能在水中進行自組裝形成納米纖維，并且纖維的形態(tài)為網(wǎng)狀分枝結(jié)構(gòu)；熱穩(wěn)定性檢測表明該兩親性九肽具有良好的耐熱性及快速的自組裝能力，并且其自組裝特性也具有良好的熱穩(wěn)定性。
[0007]本發(fā)明還提供了一種所述兩親性九肽作為藥物載體的應(yīng)用，實驗表明，本發(fā)明所述兩親性九肽能在水中進行自組裝，并且藥物分子能參與到所述兩親性九肽的自組裝過程中，被自組裝九肽包裹，形成藥物的兩親性九肽包埋體。
[0008]利用本發(fā)明所述兩親性九肽作為藥物載體包埋藥物的方法如下:將濃度為
0.lmg/mL~8mg/mL的藥物溶液加入濃度為0.lmg/mL~6mg/mL的兩親性九肽水溶液中，然后在室溫攪拌24h~72h即可。
[0009]本發(fā)明所述兩親性九肽與鹽酸阿霉素的相互作用研究發(fā)現(xiàn):
[0010](1)兩親性九肽水溶液的熒光強度隨著其中鹽酸阿霉素濃度的逐漸增加而發(fā)生有規(guī)律的猝滅，說明鹽酸阿霉素與所述兩親性九肽發(fā)生了相互作用；
[0011](2)在溫度293K和310K，鹽酸阿霉素與兩親性九肽的表觀結(jié)合常數(shù)分別為IS-TXlO5M-1和1.SlXlO5M'說明鹽酸阿霉素與兩親性多肽之間的結(jié)合作用較強，鹽酸阿霉素能夠被本發(fā)明所述兩親性九肽包埋；
[0012](3)鹽酸阿霉素與兩親性九肽之間的主要作用力為范德華力和氫鍵相互作用，并且鹽酸阿霉素與兩親性九肽之間的結(jié)合反應(yīng)是自發(fā)進行的，因此可將所述兩親性九肽作為藥物載體用于載鹽酸阿霉素。
[0013]鹽酸阿霉素的兩親性九肽包埋體溶液的透射電子顯微鏡檢測表明鹽酸阿霉素的兩親性九肽的包埋體主要為納米級的球狀顆粒。
[0014]上述應(yīng)用中，所述藥物除了可以為鹽酸阿霉素外，還可以為阿霉素、紫杉醇、五氟尿嘧啶等藥物。
[0015]本發(fā)明具有以下有益效果:
[0016]1、本發(fā)明提供了一種新的兩親性九肽，該兩親性九肽能夠在水中進行自組裝，并且藥物分子能參與到該兩親性九肽的自組裝過程中，形成藥物的兩親性九肽包埋體，因此該兩親性九肽能作為藥物載體應(yīng)用。
[0017]2、將本發(fā)明所述兩親性九肽作為藥物載體應(yīng)用時，由于兩親性九肽是通過非共價鍵作用與藥物分子結(jié)合，因而不會破壞藥物分子本身的化學(xué)結(jié)構(gòu)，因而能夠保證藥物分子的生物活性。
[0018]3、本發(fā)明所述兩親性九肽由氨基酸縮合而成，其降解產(chǎn)物不會對患者的病變部位帶來毒副作用且無免疫原性，克服了目前市面上高分子藥物載體在降解時引起的毒副作用及患者局部位置的二次傷害。
[0019]4、本發(fā)明所述兩親性九肽分子量小，易于進入組織深部，并具有蛋白的生物學(xué)功能，其自組裝形成的納米?；蚣{米管可以被用作靶向分子引導(dǎo)藥物進入病變部位，因此該兩親性九肽作為藥物載體具 有廣闊的應(yīng)用前景。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0020]圖1是本發(fā)明所述兩親性九肽的高效液相色譜圖。
[0021]圖2是本發(fā)明所述兩親性九肽的質(zhì)譜分析圖。
[0022]圖3是本發(fā)明所述兩親性九肽的水溶液進行剛果紅染色的照片。
[0023]圖4是本發(fā)明所述兩親性九肽在25°C的圓二色譜圖。
[0024]圖5是本發(fā)明所述兩親性九肽在不同溫度條件下的圓二色譜圖。
[0025]圖6是本發(fā)明所述兩親性九肽自組裝后的原子力顯微鏡圖，其中，圖(a)和圖(b)分別為不同放大倍數(shù)下的原子力顯微鏡圖。
[0026]圖7是本發(fā)明所述兩親性九肽自組裝后的透射電子顯微鏡圖，其中，圖(a)的放大倍數(shù)為50000倍，圖(b)的放大倍數(shù)為80000倍。
[0027]圖8是鹽酸阿霉素對兩親性九肽的熒光猝滅效應(yīng)圖。
[0028]圖9是鹽酸阿霉素對兩親性九肽在不同溫度條件下熒光猝滅的[Q]~FcZF關(guān)系曲線。
[0029]圖10是不同溫度條件下鹽酸阿霉素與兩親性九肽結(jié)合的Lg [Q]~Lg (Ftl-F)/F關(guān)系曲線。
[0030]圖11是鹽酸阿霉素的兩親性九肽包埋體的透射電子顯微鏡圖，其中，圖(a)的放大倍數(shù)為30000倍，圖(b)的放大倍數(shù)為50000倍。
【具體實施方式】[0031]以下通過實施例對本發(fā)明所述兩親性九肽及其作為藥物載體的應(yīng)用作進一步說明。下述各實施例中，所述純水是指用mill1-Q超純水系統(tǒng)制備的純水；所述鹽酸阿霉素購自北京奇松生物科技有限公司，純度為98%。
[0032]實施例1:兩親性九肽的制備
[0033]1、材料
[0034]Fmoc-Pro (荷甲氧羰?；彼?、Fmoc-Lys (Boc) -OH (荷甲氧羰酰基賴氨酸-ε -叔丁氧羰?；?、Fmoc-Phe (荷甲氧羰?；奖彼?、Fmoc-Glu (OtBu)-OH (荷甲氧羰?；劝彼?Y -叔丁酯)、Fmoc-Cys (Trt) -OH (芴甲氧羰?；腚装彼?S-三苯甲硫醚)、Fmoc-Ser (tBu)-OH(芴甲氧羰?；z氨酸叔丁醚)、HBTU (O-苯并三唑_1_基-N、N、N、N-四甲基尿六氟磷酸脂)和HOBT (1-羥基苯并三氮唑)均由四川盛鑫生物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)；NMM (N-甲基嗎啉)和DMF (N、N_ 二甲基甲酰胺)由成都傲飛生物化學(xué)品有限公司生產(chǎn)；三氟乙酸(TFA)裂解液購自成都傲飛生物化學(xué)品有限公司。
[0035]2、制備方法
[0036](I)稱取0.65mmol/g Fmoc-Pro樹脂Ig于肽合成器皿中，加入IOmL DMF溶漲樹脂30min，抽濾，然后用30mL DMF分三次洗滌樹脂，每次洗滌時間為2min，抽濾干洗滌液，向合成器皿中加入5mL20%哌啶/DMF (哌啶與DMF的混合液，其中哌啶的體積百分數(shù)為20%)震蕩反應(yīng)30min，反應(yīng)時間屆滿后，抽濾出反應(yīng)液，再用40mL DMF分四次洗滌樹脂，每次洗滌時間為2min，洗畢取少許樹脂做茚三酮檢測，樹脂呈陽性，向反應(yīng)器皿中加入以下原料:
【權(quán)利要求】
1.一種兩親性九肽，其特征在于其氨基酸序列為序列表中SEQ ID N0:1所述。
2.權(quán)利要求1所述兩親性九肽在制備藥物載體中的應(yīng)用。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于所載藥物為鹽酸阿霉素、阿霉素、紫杉醇或者五氟尿嘧 啶。
【文檔編號】C07K7/06GK103788177SQ201410037794
【公開日】2014年5月14日 申請日期:2014年1月27日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月27日
【發(fā)明者】阮麗萍, 于鴻昌 申請人:四川大學(xué)