一種三萜-多肽綴合物、其藥物組合物及用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及一種三萜-多肽綴合物、其藥物組合物及用途。具 體地，本發(fā)明涉及式I所示的綴合物、其衍生物、其立體異構(gòu)體、或其可藥用鹽。本發(fā)明還涉 及含有上述的式I綴合物、其衍生物、其立體異構(gòu)體、或其可藥用鹽的藥物組合物，以及式I 綴合物、其衍生物、其立體異構(gòu)體、或其可藥用鹽在治療或預防HIV感染所致相關(guān)疾病尤其 是獲得性免疫缺陷綜合征（AIDS，即艾滋病）的用途。
[0002] XArL1 - P - K (L2-XA2)式 I。
【背景技術(shù)】
[0003] 艾滋病主要是由于人免疫缺陷病毒I型（HIV-I)感染導致的致死性傳染疾病，在 全球范圍流行。目前臨床上應(yīng)用的抗HIV-I藥物，輔以高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒療法，可以在一定 程度上延長HIV感染者的生存時間和改善其生活質(zhì)量。但是，由于HIV疫苗研究進展緩慢以 及耐藥性問題日益明顯，研發(fā)新型抗HIV藥物仍是當務(wù)之急。HIV融合抑制劑（HIV fusion inhibitors)是干擾病毒進入靶細胞的新型抗HIV藥物，其在感染的初始環(huán)節(jié)切斷病毒的 傳播，這對于預防及控制HIV-I感染具有特殊意義，因而成為新機制抗HIV藥物研究的熱 點。
[0004] Gp41是介導HIV-I與靶細胞膜融合的特異性蛋白，是融合抑制劑的作用靶標。 Gp41的胞外區(qū)存在著兩個與膜融合密切相關(guān)的螺旋結(jié)構(gòu)功能區(qū)，即N末端重復序列（HR1) 和C末端重復序列（HR2)。在膜融合過程中，HR2與HRl相互作用，形成一個六螺旋體核心 結(jié)構(gòu)（6-HB)。T20是衍生于gp41HR2區(qū)域的具有36個氨基酸殘基的融合抑制多肽，于2003 年經(jīng)美國FDA批準上市，是目前唯一上市的HIV-I融合抑制劑。T20能競爭性的和HRl構(gòu) 成的螺旋三聚體結(jié)合，占據(jù)HR2的作用位點，進而抑制6-HB的形成，使得膜融合過程不能完 成。
[0005] T20的上市開辟了多肽類藥物控制HIV-I的新領(lǐng)域。但是，T20本身存在著一些缺 陷和不足。首先是耐藥性問題：由于T20完全衍生于天然HR2序列，對靶標突變的抵抗力 低，容易產(chǎn)生耐藥性。HRl第36-45位殘基（GIVQQQNNLL)是T20結(jié)合的主要部位，單個殘基 的突變導致T20敏感度下降5-10倍，兩個殘基突變則會導致敏感度下降100倍。其次，T20 體內(nèi)穩(wěn)定性差，易被蛋白酶降解，生物利用度低。再次，T20具有較高的合成成本。因此，在 保證生物活性的前提下如何解決耐藥性、提高酶解穩(wěn)定性以及降低多肽類HIV-I融合抑制 劑的合成成本是新型HIV-I融合抑制劑研究的主要方向。
[0006] 基于上述問題，目前主要的解決策略是避開T20的靶標結(jié)合部位，引入不同于T20 的新的功能序列來克服耐藥性；同時，加入螺旋形成及穩(wěn)定因子，提高序列的螺旋性及穩(wěn) 定性，提高酶解穩(wěn)定性及抑制活性。如第二代多肽類融合抑制劑T-1249,在其N端增加了 與N-trimer疏水性口袋結(jié)合序列（WQEWEQKI )，使其活性比T20提高了 一個數(shù)量級；又如 第三代融合抑制劑T-1144,和T20的靶標作用位點完全不同，主要為HRl的疏水性口袋區(qū) (WEAWERAI)。I期臨床研究結(jié)果表明，T-1144能夠顯著抑制T20耐藥性毒株，同時比T20顯 示了更高的活性及更好的藥代動力學性質(zhì)。此外，5HR系列多肽開創(chuàng)了基于靶標gp41HRl螺 旋三聚體的三維晶體結(jié)構(gòu)應(yīng)用計算機輔助設(shè)計完全非天然α螺旋肽的新思路。以5HR為 先導結(jié)構(gòu)，在其N端引入口袋結(jié)合區(qū)（WMEWDRE)，C端引入脂膜結(jié)合區(qū)（WASLWNWF)，使得抑 制融合活性得到了顯著提高。
[0007] 萜類化合物是指分子式為異戊二烯單位倍數(shù)的烴類及其含氧衍生物。萜類化合物 可以單獨存在，也可以以苷元的形式存在于皂苷分子當中。萜類化合物廣泛存在于自然界 中，具有多種生理活性。近年研究發(fā)現(xiàn)，某些萜類化合物具有一定的抗HIV活性。樺木酸 (betulinicacid, BA)屬于五環(huán)三廠類化合物。1994年Fujioka等首先發(fā)現(xiàn)了 BA的抗HIV 活性，可抑制HI V在H9細胞中復制。隨后的研究表明，一些BA的類似物，如熊果酸（Ur so I i c acid, UA)和齊墩果酸（Oleanicacid，0A)同樣具有抗HIV活性。在樺木酸的3位羥基上引 入一個3, 3-二甲基琥珀?；鶊F可顯著提高其抗HIV活性。實驗表明該類化合物是通過結(jié) 合于Gag蛋白，干擾其裂解過程，抑制病毒蛋白的組裝。在樺木酸的28位羧基上修飾同樣 具有較好的抗HIV活性。有實驗表明它的這種抗HIV活性是通過抑制膜融合過程的后融合 階段實現(xiàn)的。
[0008] 萜類化合物可以單獨存在，也可以以苷元的形式存在于皂苷分子當中。皂苷是由 苷元和糖兩部分組成的，它在自然界的分布極為廣泛。苷元主要包括萜類、留體和留體生 物堿等結(jié)構(gòu)；糖鏈的結(jié)構(gòu)很多，但是糖基組成比較簡單。長期以來，皂苷一直是天然有機化 學和藥物化學的重要研究對象，但多數(shù)研究僅僅局限在苷元上面，而忽略了糖的作用。近年 來，隨著分離技術(shù)和結(jié)構(gòu)研究方法的進展，皂苷的構(gòu)效關(guān)系得到了進一步的闡明。初步研究 表明，皂苷中的糖鏈與其生物活性有著密切的關(guān)系。另外，許多皂苷化合物都具有廣譜的抗 病毒活性，但是活性都較弱。這主要和皂苷與病毒中特異性靶標的結(jié)合能力不強有關(guān)。
[0009] 目前尚需要新的思路來開發(fā)新的HIV融合抑制劑。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0010] 本發(fā)明人經(jīng)過深入的研究和創(chuàng)造性的勞動，將衍生于gp41HR2的肽類藥效團與三 萜類藥效團綴合，設(shè)計全新結(jié)構(gòu)HIV融合抑制劑，探索抑制耐藥性，得到了一種化合物(如 式I所示）即三萜-多肽綴合物。本發(fā)明人驚奇地發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的化合物具有良好的抑制 HIV融合活性。由此提供了下述發(fā)明：
[0011] 本發(fā)明的一個方面涉及式I所示的化合物、其衍生物、其立體異構(gòu)體、或其可藥用 鹽，
[0012] XAfL1_ P-K (L2_XA2)式 I
[0013] 其中，
[0014] XA1和XA2為相互獨立的三萜類化合物，并且XA1和XA2至少存在其中一個；
[0015] L1為連接多肽P與XA1間的連接臂，或者L1缺失，并且L1缺失時XA 1也同時缺失；
[0016] P 是氨基酸序列為 NNYTSLIHSLIEESQNQQEKNEQELL (SEQID NO :1)或者 INNYTSLIHSLIEESQNQQEKNEQELL (SEQ ID NO :2)的多肽；
[0017] K為賴氨酸，其側(cè)鏈與L2-XA2連接，或者K缺失，并且K缺失時L2-XA 2也同時缺失；
[0018] L2為連接賴氨酸K與XA2分子間的連接臂；
[0019] L2與L1相同或不同。
[0020] 所述IA1和XA2為相互獨立的"表示XA1和XA 2可以相同或不同。
[0021] 所述"XAi和XA2至少存在其中一個"包括如下情況：僅存在XA1，僅存在XA 2，或者 XA1和XA2同時存在。
[0022] 不拘于理論的限制，L1或L2為使得小分子能夠保持空間靈活性而與靶標結(jié)合的連 接臂。
[0023] 不拘于理論的限制，在多肽P的羧基端引入K的目的是為了引入（L2-XA 2X
[0024] 根據(jù)權(quán)利要求1本發(fā)明任一項所述的式I所示的化合物、其衍生物、其立體異構(gòu) 體、或其可藥用鹽，其中，L 1的一端與多肽P通過酰胺鍵連接，另一端通過1，2, 3-三氮唑基 團與XA1連接；具體地，所述1，2, 3-三氮唑基團為L1上的疊氮基與XA1上的炔基通過"click 反應(yīng)"形成；和/或
[0025] L2的一端與賴氨酸K的側(cè)鏈氨基通過酰胺鍵連接，另一端通過1，2, 3-三氮唑基團 與XA2連接；具體地，所述1，2, 3-三氮唑基團為L2上的疊氮基與XA2上的炔基通過"click 反應(yīng)"形成。
[0026] 根據(jù)本發(fā)明任一項所述的式I所示的化合物、其衍生物、其立體異構(gòu)體、或其可藥 用鹽，其中，所述三萜類化合物為五環(huán)三萜類化合物或四環(huán)三萜類化合物，優(yōu)選為五環(huán)三萜 類化合物。
[0027] 根據(jù)本發(fā)明任一項所述的式I所示的化合物、其衍生物、其立體異構(gòu)體、或其可藥 用鹽，其中：
[0028] XA1和XA2獨立地選自如下的12個結(jié)構(gòu)式中的任意一個：
[0029]
【主權(quán)項】
1. 式I所示的化合物、其衍生物、其立體異構(gòu)體、或其可藥用鹽， XA1-L1_ P-K (L2-XA2)式 I 其中， XA1和XA2為相互獨立的三萜類化合物，并且XA1和XA2至少存在其中一個； L1為連接多肽P與XA1間的連接臂，或者L1缺失，并且L1缺失時XA 1也同時缺失； P是氨基酸序列為NNYTSLIHSLIEESQNQQEKNEQELL(SEQID N0:1)或者 INNYTSLIHSLIEESQNQQEKNEQELL (SEQ ID NO :2)的多肽； K為賴氨酸，其側(cè)鏈與L2-XA2連接，或者K缺失，并且K缺失時L2-XA 2也同時缺失； L2為連接賴氨酸K與XA2分子間的連接臂； L2與L1相同或不同。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的式I所示的化合物、其衍生物、其立體異構(gòu)體、或其可藥用 鹽，其中，L1的一端與多肽P通過酰胺鍵連接，另一端通過1，2, 3-三氮唑基團與XA1連接； 具體地，所述1，2, 3-三氮唑基團為L1上的疊氮基與XA1上的炔基通過"click反應(yīng)"形成； 和/或 L2的一端與賴氨酸K的側(cè)鏈氨基通過酰胺鍵連接，另一端通過1，2, 3-三氮唑基團與 XA2連接；具體地，所述1，2, 3-三氮唑基團為L2上的疊氮基與XA2上的炔基通過"click反 應(yīng)"形成。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的式I所示的化合物、其衍生物、其立體異構(gòu)體、或其可藥用 鹽，其中： XA1和XA2獨立地選自五環(huán)三萜類化合物； 具體地， XA1和XA2獨立地選自如下的12個結(jié)構(gòu)式中的任意一個：
4. 根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項所述的式I所示的化合物、其衍生物、其立體異構(gòu)體、 或其可藥用鹽，其中： L1與L2獨立地為疊氮乙酸與天然或非天然氨基酸縮合形成的化合物，或者疊氮乙酸與 一端為氨基，一端為羧基的聚乙二醇縮合形成的化合物。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的式I所示的化合物、其衍生物、其立體異構(gòu)體、或其可藥用 鹽，其中， 所述天然或非天然氨基酸選自： L型或D型的甘氨酸（Gly)，丙氨酸（Ala)，亮氨酸（Leu),異亮氨酸（lie),谷氨酸 (Glu)，谷酰胺（Gln)，天冬氨酸(Asp)，天冬酰胺（Asn)，纈氨酸（Val)，賴氨酸（Lys)，絲 氨酸（Ser)，蘇氨酸（Thr)，精氨酸(Arg)，組氨酸（His)，色氨酸（Trp)，苯丙氨酸（Phe)， 酪氨酸（Tyr)，半胱氨酸（Cys)，甲硫氨酸（Met); β _丙氨酸（β Ala); Y-氨基丁酸（GABA); 6-氨基己酸（Aca); 乙二酸，丙二酸，丁二酸，戊二酸，己二酸； 乙二胺，丙二胺，丁二胺，戊二胺，己二胺； 乙二醇，丙二醇，丁二醇，戊二醇，己二醇； Nh2-Ch2Ch2-O-Ch2Ch2-COoh(PEG 1)； NH2-CH2CH2-0-CH2CH2-0-CH 2CH2_C00H (PEG2);和 NH2-CH2CH2-0-CH2CH2-0-CH 2CH2-0-CH2CH2-C00H (PEG3)。
6.根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項所述的式I化合物、其衍生物、其立體異構(gòu)體、或其可 藥用鹽，其選自如下的化合物： (1) BAc-β Ala-NNYTSLIHSLIEESQNQQEKNEQELL ； (2) UAc-β Ala-NNYTSLIHSLIEESQNQQEKNEQELL ； (3) OAc-β Ala-NNYTSLIH