專(zhuān)利名稱：熒光素內(nèi)酰胺一氧化氮熒光探針的制備和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及微量一氧化氮的測(cè)定技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)是一種基于熒光素內(nèi)酰胺衍生物的一氧化氮分子熒光探針的制備和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
一氧化氮(NO)作為一種重要的生物信息分子，在生命過(guò)程中發(fā)揮著重要的生理作用。目前，NO被認(rèn)為是生命必需的調(diào)節(jié)分子，它在心血管系統(tǒng)，中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)及免疫系統(tǒng)中起關(guān)鍵的作用。而且NO是植物體中普遍存在的關(guān)鍵信號(hào)分子，參與植物的生長(zhǎng)、發(fā)育和抗病防御等多種生理過(guò)程。要研究闡明NO的生理功能和病理機(jī)制，就必需快速靈敏檢測(cè)體內(nèi)或體外產(chǎn)生的NO的濃度及其時(shí)空分布。因此建立高靈敏度、高選擇性檢測(cè)組織和細(xì)胞內(nèi)NO的分析方法具有重要意義(文獻(xiàn)I =Koshland D E.The Moleculeofthe Year, Science, 1992, 258:1861-1861 ;文獻(xiàn) 2:張燈青，趙圣印，劉海雄，一氧化氮熒光分子探針，化學(xué)進(jìn)展，2008，20 (9) =1396-1405 ;文獻(xiàn)3:張麗麗，周杰，植物體中一氧化氮的檢測(cè)方法及其應(yīng)用，植物生理學(xué)通訊，2007，43(5) =921-927) ο目前NO的檢測(cè)方法主要有熒光法、電化學(xué)法、化學(xué)發(fā)光法、電子自旋共振波譜法和紫外-可見(jiàn)光譜法等，其中熒光法靈敏度高、選擇性好、操作簡(jiǎn)單的特點(diǎn)，熒光檢測(cè)若和顯微鏡連用能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外NO的成像，達(dá)到高的時(shí)空分辨 率，因此是目前最為理想的檢測(cè)方法之一(文獻(xiàn)2;文獻(xiàn)4:張嫻，王紅，梁淑彩，張華山，檢測(cè)生理內(nèi)源性一氧化氮分子探針的研究及應(yīng)用進(jìn)展，分析科學(xué)學(xué)報(bào)，2002，18 ￠):513-517)?；跓晒夥ǖ腘O熒光分子探針主要有兩種機(jī)理，一種是基于過(guò)渡金屬的NO傳感器，另一種是基于光誘導(dǎo)電子轉(zhuǎn)移(PET)機(jī)理的NO傳感器(文獻(xiàn) 5:Gunnlaugsson T, Ali H D P, GlynnMetal Fluoreseent Photoindueedeleetrontransfer(PET)sensors for anions:From design to Potential applieation,Journal of Fluoreseenee，2005，15 (3):287-299)。但這類(lèi)熒光探針的主要缺點(diǎn)是:探針合成過(guò)程復(fù)雜、產(chǎn)率低；探針本身的空白信號(hào)會(huì)降低NO檢測(cè)的靈敏度，或者干擾成像；探針對(duì)目標(biāo)分子缺乏明顯的發(fā)色行為。因此，在選擇性、靈敏性及基于新的發(fā)光機(jī)理等方面還需要改進(jìn)和發(fā)展。Zheng Hong和XU Jin-Gou等人報(bào)道了一種基于羅丹明螺旋內(nèi)酰胺的NO分子熒光探針，它是通過(guò)NO與羅丹明B螺旋內(nèi)酰胺進(jìn)行開(kāi)環(huán)反應(yīng)，所生成的產(chǎn)物再水解成有熒光的羅丹明B，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)NO的探測(cè)，該探針合成方法簡(jiǎn)單，本身無(wú)熒光，有利于提高 NO 檢測(cè)的靈敏度和生物成像(文獻(xiàn) 6:H.Zheng, G.Q.Shang，S.Y.Yang, X.Gao，J.G.Xu.Fluorogenic and chromogenic rhodamine spirolactam based probe for nitric oxideby spiro ring opening reaction, Organic Letters,2008,10(12):2357-2360)。本發(fā)明合成了二氯代或二氟代熒光素，然后與鄰苯二胺反應(yīng)制備熒光素內(nèi)酰胺衍生物，用作一氧化氮分子熒光探針，檢測(cè)體外微量一氧化氮，并用于大鼠巨噬細(xì)胞中一氧化氮的檢測(cè)
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種基于熒光素內(nèi)酰胺衍生物的一氧化氮分子熒光探針的
制備和應(yīng)用。所發(fā)明熒光素內(nèi)酰胺衍生物結(jié)構(gòu)如下式所示:
權(quán)利要求
1.一種基于熒光素內(nèi)酰胺衍生物的一氧化氮分子熒光探針，其特征在于其結(jié)構(gòu)式為:
2.如權(quán)利要求1所述的熒光素內(nèi)酰胺衍生物的制備方法包括以下主要步驟: 步驟一:以氯化鋅為催化劑，由4-氯(或氟)間苯二酚與鄰苯二甲酸酐熔融反應(yīng)生成二氯(或二氟)代熒光素； 步驟二:二氯(或二氟)代熒光素與二氯亞砜反應(yīng)生成二氯(或二氟)代熒光素?；龋? 步驟三:以DCC/DMAP (N，N' - 二環(huán)己基碳二亞胺/4- 二甲氨基吡啶)為催化劑，二氯(或二氟)代熒光素?；扰c鄰苯二胺在乙腈中反應(yīng)生成熒光素內(nèi)酰胺衍生物。
3.如權(quán)利要求1所述的熒光素內(nèi)酰胺衍生物作為一氧化氮分子熒光探針用于弱酸性、中性、弱堿性緩沖溶液中檢測(cè)水溶液和細(xì)胞組織中微量一氧化氮。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種基于熒光素內(nèi)酰胺衍生物的一氧化氮分子熒光探針的制備方法及其用途。以4-氯(或氟)間苯二酚和鄰苯二甲酸酐在氯化鋅催化下熔融反應(yīng)生成二氯(或氟)代熒光素衍生物，經(jīng)酰氯化后與鄰苯二胺反應(yīng)合成熒光素內(nèi)酰胺衍生物，產(chǎn)物用柱層析進(jìn)行分離提純。此熒光素內(nèi)酰胺在水溶液中無(wú)熒光，當(dāng)與一氧化氮反應(yīng)開(kāi)環(huán)水解生成有熒光的熒光素衍生物，熒光強(qiáng)度隨著一氧化氮濃度的增大而增強(qiáng)。探針的激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)在可見(jiàn)光區(qū)，對(duì)一氧化氮檢測(cè)具有高的專(zhuān)一性和靈敏度，適用pH范圍寬，可用于水溶液中和組織細(xì)胞中微量一氧化氮的檢測(cè)。
文檔編號(hào)C07D491/107GK103159772SQ201310021200
公開(kāi)日2013年6月19日 申請(qǐng)日期2013年1月6日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月6日
發(fā)明者王明慧, 陳云龍, 呂東澤 申請(qǐng)人:青島科技大學(xué)