專(zhuān)利名稱(chēng)：利用雪蓮果制備蔗果三糖、蔗果四糖方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及雪蓮果中低聚糖，同時(shí)，本發(fā)明還涉及雪蓮果中低聚糖的定性、定量分析及其低聚果糖中蔗果三糖、蔗果四糖的制備。
背景技術(shù)：
低聚果糖是雪蓮果中含量較高的活性物質(zhì)。低聚果糖是由蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖等組成，并且具有特殊的保健功能。目前的研究大多集中于制備高純度的低聚果糖， 但對(duì)低聚果糖中蔗果三糖、蔗果四糖等各單組分制備的研究較少，尚缺乏成熟的技術(shù)

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種雪蓮果低聚糖，其提取方法簡(jiǎn)便易行，可大批量生產(chǎn)。本發(fā)明的另一目的在于提供雪蓮果低聚糖的成分分析方法，此方法準(zhǔn)確可靠。本發(fā)明的目的還在于提供該雪蓮果低聚果糖中蔗果三糖、蔗果四糖的制備方法。 該方法制備的蔗果三糖、蔗果四糖純度較高。本發(fā)明提供的雪蓮果低聚糖，其采用水提醇沉的方法，取其上清液，然后濃縮、冷凍干燥，得到的雪蓮果低聚糖為淡黃色的粉末。本發(fā)明提供的雪蓮果低聚糖的成分分析方法，采用高壓液相色譜法進(jìn)行分析。色譜條件色譜柱:APS-2HYPERSIL ；柱溫:30°C ；流動(dòng)相乙腈_水(75 25，V/V)；流速 0. 8ml/min ；進(jìn)樣量20μ 1 ；檢測(cè)器示差檢測(cè)器。雪蓮果低聚糖中含有果糖、葡萄糖、蔗糖、蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖，其含量分別為38. 30%,16. 44%,14. 58%,12. 29%, 12. 17^^6.20 ^低聚糖樣品中的低聚果糖含量為30.66%。本發(fā)明采用硅膠柱層析，制備出低聚果糖中蔗果三糖、蔗果四糖單組分。將低聚糖樣品進(jìn)行干法上柱，用展開(kāi)劑冰乙酸氯仿無(wú)水乙醇水=3 11 11 1進(jìn)行洗脫， 經(jīng)飛行時(shí)間質(zhì)譜分析，洗脫出的物質(zhì)為蔗果三糖和蔗果四糖，高壓液相色譜法分析其純度分別為95.9%,92.6%,純度較高。
具體實(shí)施例方式實(shí)施案例1雪蓮果中低聚糖的制備原料雪蓮果產(chǎn)自云南，成熟度95%，4°C下貯藏半個(gè)月。將雪蓮果切片，50°C烘干，用高速粉碎機(jī)粉碎，制成雪蓮果粉末。雪蓮果粉末一80°C熱水浸提一離心、抽濾一保留清液，殘?jiān)磸?fù)提取一合并提取液一濃縮一80%乙醇(ν/ν)沉淀一保留上清液一濃縮一冷凍干燥一雪蓮果低聚糖實(shí)施案例2雪蓮果中低聚糖的定性、定量試驗(yàn)高壓液相色譜樣品處理將雪蓮果低聚糖樣品用流動(dòng)相配成5mg/ml的溶液，經(jīng)0. 22 μ m微孔濾膜過(guò)濾，超聲脫氣，取20 μ 1濾液進(jìn)行分析。
標(biāo)準(zhǔn)液配制用流動(dòng)相分別配制5mg/ml的果糖、葡萄糖、蔗糖、蔗果三糖、蔗果四糖對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液，過(guò)0. 22 μ m濾膜，超聲脫氣備用。。色譜條件色譜柱APS_2HYPERSIL；柱溫30°C;流動(dòng)相乙腈-水(75 25，V/V)，混勻，使用前超聲脫氣;流速0. 8ml/min ；進(jìn)樣量20μ 1。檢測(cè)器示差檢測(cè)器根據(jù)高壓液相色譜圖譜可知，樣品中各成分的出峰時(shí)間(即保留時(shí)間)與標(biāo)準(zhǔn)液中標(biāo)準(zhǔn)物的出峰時(shí)間基本一樣，所以可以得知從雪蓮果制備的低聚糖樣品中含有果糖， 葡萄糖，蔗糖，蔗果三糖，蔗果四糖。同時(shí)在49. 315min時(shí)還有一個(gè)小峰，推測(cè)其為蔗果五糖。由于條件限制沒(méi)有買(mǎi)到蔗果五糖的標(biāo)準(zhǔn)品，所以無(wú)法驗(yàn)證。經(jīng)HPLC面積歸一化法定量分析，果糖、葡萄糖、蔗糖、蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖的含量分別為38. 30%,16. 44%, 14. 58 %、12. 29 %、12. 17 %、6. 20 %。低聚糖樣品中的低聚果糖含量為30. 66 %。實(shí)施例3 低聚果糖中蔗果三糖、蔗果四糖的制備經(jīng)過(guò)反復(fù)的薄層層析試驗(yàn)，確定以展開(kāi)劑冰乙酸氯仿無(wú)水乙醇水= 3 11 11 1為硅膠柱層析的洗脫劑。取適量硅膠，加入洗脫劑，混勻，轉(zhuǎn)入玻璃層析柱(1.6CmX50Cm)。取Ig低聚糖樣品，采用干法上柱，然后用洗脫劑進(jìn)行洗脫，洗脫速度為 ImVmin0用試管收集洗脫液，濃縮，冷凍干燥。然后進(jìn)行薄層層析。顯色劑為2. 5g 二苯胺， 加5mL苯胺、25mL 85%磷酸混合溶解后，加丙酮稀釋至250mL，冷藏備用(冷藏可在2 3 周內(nèi)使用)。從薄層層析圖片中可知，第81-107管主要以蔗果三糖為主，第131-159管主要以蔗果四糖為主，分別收集并命名為樣品1、樣品2。然后做飛行時(shí)間質(zhì)譜進(jìn)行分析。樣品 1的圖譜有一個(gè)質(zhì)荷比(m/z)為527的準(zhǔn)分子[GF2+Na]+離子峰，減去一個(gè)Na+的質(zhì)量23， 與蔗果三糖GF2分子量504相符。樣品2的圖譜有一個(gè)質(zhì)荷比(m/z)為689. 27的準(zhǔn)分子 [GF3+Na]+離子峰，減去一個(gè)Na+的質(zhì)量23，與蔗果四糖GF3分子量666相符。還有一個(gè)質(zhì)荷比(m/z)為705.四的準(zhǔn)分子[GF3+K]+離子峰，減去一個(gè)K+的質(zhì)量39，也與蔗果四糖GF3* 子量666相符。然后對(duì)樣品1和樣品2進(jìn)行高壓液相色譜分析，方法同實(shí)施例2。經(jīng)過(guò)HPLC面積歸一化法定量分析，樣品1的純度為95. 9%，樣品2的純度為92. 6%，純度較高。


圖1是雪蓮果低聚糖高壓液相色譜圖譜圖； 圖2是樣品1飛行時(shí)間質(zhì)譜圖譜圖； 圖3是樣品2飛行時(shí)間質(zhì)譜圖譜圖。
權(quán)利要求
1.雪蓮果低聚糖，由下法制得采用水提醇沉的方法，取上清液，然后濃縮、冷凍干燥， 得到淡黃色的雪蓮果低聚糖粉末。
2.權(quán)利要求1所述的雪蓮果低聚糖，利用高壓液相色譜對(duì)其進(jìn)行成分分析，色譜條件為色譜柱:APS-2HYPERSIL ；柱溫:30°C ；流動(dòng)相乙腈_水(75 25，ν/ν)；流速0. 8ml/ min ；進(jìn)樣量20μ 1 ；檢測(cè)器示差檢測(cè)器；雪蓮果低聚糖中含有果糖、葡萄糖、蔗糖、蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖，其含量分別為38. 30%,16. 44%,14. 58%,12. 29%,12. 17%, 6. 20%。
3.權(quán)利要求1所述的雪蓮果低聚糖，以冰乙酸氯仿無(wú)水乙醇水= 3 11 11 1為洗脫劑，利用硅膠柱層析制備高純度蔗果三糖和蔗果四糖的方法。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了雪蓮果低聚果糖分析方法及蔗果三糖、蔗果四糖制備方法。采用水提醇沉的方法，取其上清液，進(jìn)行濃縮、冷凍干燥，得到淡黃色的雪蓮果低聚糖。雪蓮果低聚糖經(jīng)高壓液相色譜分析，色譜條件色譜柱APS-2HYPERSIL；柱溫30℃；流動(dòng)相乙腈-水(75∶25，V/V)；流速0.8ml/min；進(jìn)樣量20μl；示差檢測(cè)器。雪蓮果低聚糖中含有果糖、葡萄糖、蔗糖、蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖，其含量分別為38.30％、16.44％、14.58％、12.29％、12.17％、6.20％。將制得的低聚糖樣品進(jìn)行硅膠柱層析，用冰乙酸∶氯仿∶無(wú)水乙醇∶水＝3∶11∶11∶1為洗脫劑進(jìn)行洗脫，依次收集洗脫液，然后濃縮、凍干。得到蔗果三糖和蔗果四糖。經(jīng)高壓液相色譜法分析，制備的蔗果三糖、蔗果四糖純度可達(dá)90％以上。
文檔編號(hào)C07H1/08GK102408457SQ201110184208
公開(kāi)日2012年4月11日 申請(qǐng)日期2011年7月1日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月1日
發(fā)明者司傳領(lǐng), 朱振元, 連紅玉 申請(qǐng)人:天津科技大學(xué)