專(zhuān)利名稱(chēng)：3,6’-二芥子酰基蔗糖在制備治療抑郁癥產(chǎn)品中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，主要涉及從天然植物中提取得到的和/或化學(xué)合成中獲 得的3， 6'-二芥子?；崽?3',6-disinapoyl sucrose, DISS)的藥物新用途，具 體涉及它們?cè)谥苽渲委熞钟舭Y產(chǎn)品中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
抑郁癥是情感性精神障礙的主要類(lèi)型，以顯著而持久的心境低落為主要特 征。1996年，世界衛(wèi)生組織(WHO)公布的一項(xiàng)關(guān)于"全球疾病負(fù)擔(dān)"的調(diào)査 顯示，1990年抑郁癥已成為世界第四大疾患，占全部疾病總負(fù)擔(dān)的3.7%;并預(yù) 測(cè)到2020年將僅次于缺血性心臟病成為第二大疾患，占全部疾病總負(fù)擔(dān)的 5.7%。抑郁癥將是21世紀(jì)人類(lèi)最嚴(yán)重的疾病之一?，F(xiàn)有的抗抑郁西藥主要是.-三環(huán)類(lèi)(TCAs)，選擇性5-HT重?cái)z取抑制劑(SSRIs)，單胺氧化酶抑制劑 (MAOIs)，它們均存在著不同程度的毒副作用，且價(jià)格昂貴。此外，目前仍有 約1/3的抑郁患者對(duì)臨床使用的這些抗抑郁藥效果欠佳。因而從傳統(tǒng)中藥中研發(fā) 新的抗抑郁藥具有重要的理論和實(shí)際意義。
3， 6'-二芥子酰基蔗糖是廣泛存在于寥科(Polygcmaceae)、遠(yuǎn)志科 (Polygalaceae)和十字花科(Brassicaceae)等科中的寡糖酯類(lèi)成分。近年來(lái)，遠(yuǎn)志科 中此類(lèi)化學(xué)成分的研究越來(lái)越多，其腦保護(hù)作用和抗老化作用越來(lái)越受到重視。 我們的研究表明3， 6'-二芥子?；崽窃谒幚韺W(xué)抑郁模型有顯著的抗抑郁活性。 并且其抗抑郁活性與增強(qiáng)5-羥色胺(5-HT)和去甲腎上腺素能(NE)神經(jīng)功能均 有關(guān)。DISS在抗抑郁有效劑量范圍內(nèi)無(wú)中樞興奮或抑制性作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明首次公開(kāi)3， 6， -二芥子酰基蔗糖(3' ， 6-disi卿oyl sucrose, DISS) 用于治療西醫(yī)范疇的以抑郁癥狀為主的精神疾病和中醫(yī)范疇的情志性疾病方面 的應(yīng)用。.
本發(fā)明的3， 6' -二芥子?；崽鞘且环N藥物活性成分，按照常規(guī)的制劑工 藝，可以以3， 6， -二芥子?；崽?3， ,6-disinapoyl sucrose, DISS)為主 活性組份，加入常規(guī)的賦性劑、調(diào)味劑、崩解劑、防腐劑、潤(rùn)滑劑、濕潤(rùn)劑、 粘合劑、溶劑、增稠劑、增溶劑等藥物輔料，制成任何一種適合于臨床上使用 的劑型，如片劑、膠囊劑、顆粒劑、口服液體制劑、注射劑等。
由于本發(fā)明首次公開(kāi)了3， 6' -二芥子?；崽侵委熞钟舭Y的藥用作用，因 此，將3， 6' -二芥子酰基蔗糖單獨(dú)或與其他活性組份或輔料配合制成藥劑，只 要是該藥劑用于治療抑郁癥，均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
本發(fā)明的3， 6' -二芥子?；崽窃谥瞥扇魏我环N劑型時(shí)，均具有治療抑郁
3癥的作用。任何藥劑，如果其組份中含有3， 6' -二芥子?；崽腔騼H以3， 6'
-二芥子?；崽菃为?dú)成分制備成藥，在其包裝或說(shuō)明書(shū)等標(biāo)識(shí)上或者在其他任 何宣傳品上只要注明或提示具有治療抑郁癥的作用，也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍 之內(nèi)。
本發(fā)明的3， 6' -二芥子?；崽鞘莵?lái)源于民間常用的天然中草藥物遠(yuǎn)志科 植物遠(yuǎn)志Polygala tenuifolia willd.的干燥根。因此，也可以將3， 6， -二 芥子酰基蔗糖制成保健食品或保健藥品。將3， 6' -二芥子酰基蔗糖制成的保健 食品或保健藥品，如果在其包裝或包裝或說(shuō)明書(shū)等標(biāo)識(shí)上注明或提示具有治療 抑郁癥的作用，也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
實(shí)施例遠(yuǎn)志3， 6， -二芥子?；崽窃谒幬镎T發(fā)抑郁模型上的藥效評(píng)價(jià)
1. 材料
1.1動(dòng)物KM小鼠，6，體重18-22g軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物中心提供，合格 i正號(hào):SCXK-(軍)2002-001。
1.2藥品與試劑地昔帕明(Desipramine， DMI)、阿撲嗎啡(Apomorphine， AP0)、育亨賓(Yohinbin， Y0H) 、 5-羥色氨酸(5-hydroxytryptophan ， 5-HTP)、 巾白吉林(pargyline)，均為sigma公司產(chǎn)品。
1.3儀器與材料Fab-Ms質(zhì)譜儀Micromass ZabSpec(美國(guó))，核磁共振儀 J麗-ECA-400超導(dǎo)儀(日本)，柱色譜硅膠(200 300目)和薄層色譜硅膠F254 (均 為青島海洋化工廠(chǎng))。J2298-CM動(dòng)物自主活動(dòng)監(jiān)測(cè)儀(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究 所研制)；遠(yuǎn)志為遠(yuǎn)志科植物遠(yuǎn)志Polygala tenuifolia willd.的干燥根，由中 國(guó)人民解放軍總醫(yī)院中藥房提供，解放軍總醫(yī)院劉萍主任鑒定。
2. 方法
2.1活性指導(dǎo)下分離3， 6' -二芥子?；崽?br> 取遠(yuǎn)志根(9.65g)粉碎后用50%的乙醇回流提取3次，12層紗布熱濾，合 并3次的提取液，濃縮液上大孔吸附樹(shù)脂(SP-825)，依次用水、30%乙醇、50 %乙醇、70%乙醇、95%乙醇洗脫，洗脫物濃縮后，用冷凍干燥機(jī)制成干粉。 取50%乙醇洗脫部分(86g)經(jīng)硅膠柱色譜，CHC13-MeOH-H20系統(tǒng)梯度洗脫，根據(jù)TLC 結(jié)果合并第14至20部分，取其中5g經(jīng)硅膠柱色譜，CHC13-MeOH-H20系統(tǒng)梯度 洗脫，反復(fù)純化、富集得化合物4 (133.4mg)等8個(gè)化合物。
2.2. 3， 6' -二芥子酰基蔗糖的結(jié)構(gòu)鑒定
化合物4為黃色無(wú)定型粉末，F(xiàn)AB-MSm/z:755[M+H]+。 'H-麗R中給出了組特征 性的芥子酰基信號(hào):7. 69 (1H， d， /=16. 0Hz) ， 6. 49 (1H, d， /=16. 0Hz) ， 6. 93 (2H， s)， 3.90(6H， s; OMe) ， 7.61(1H， d， /=16.0Hz) ， 6.47(1H， d， /=16.0Hz)， 6.88(2H，s)， 3.85(6H,s， 0MeX2)及1組蔗糖H信號(hào)，對(duì)照文獻(xiàn)，鑒定該化合 物為3， 6， -二芥子?；崽?3， ，6-disi卿oyl sucrose, DISS)。其13C-麗R 數(shù)據(jù)見(jiàn)表l。化合物4和文獻(xiàn)4的't-NMR譜數(shù)據(jù)比較*
<formula>formula see original document page 5</formula>*測(cè)定溶劑為CD30D， 400MHZ
3， 6，-二芥子?；崽?3，,6-disinapoyl sucrose, DISS) 2.3. 5-HTP誘發(fā)小鼠甩頭實(shí)驗(yàn)
小鼠隨機(jī)分為NS組(20ml'kg—1 ) 、 DMI組(20mg'kg—1 ) 、 DISS高、中、 低劑量組(高、中、低劑量分別為4mg'kg: 2mg'kg"、 lmg'kg-'，lmg相當(dāng)于生 藥2. 3g ),每組10只，ip帕吉林lOmg'kg-1后lh, ip NS、 DMI、 DISS各劑量 30min后，ip5-HTP20mg'kg",立即放入24cmxl5cmxl5cm的箱內(nèi)，觀察記錄小鼠 每5min的甩頭次數(shù)，共記錄50min。觀察者不知小鼠的用藥和劑量情況。2.4. 阿樸嗎啡誘導(dǎo)小鼠體溫下降實(shí)驗(yàn)
小鼠隨機(jī)分為NS纟卩I. (20ml.kg-1 ) 、 。MI纟li (20mg.kg" ) 、 DISS高、中、 低劑量組(高、中、低劑量分別為4mg'kg—人2mg'kg '、 1mg'kg—'),每組10只， 連續(xù)給藥3d，環(huán)境溫度保持20-22t:。末次給藥前測(cè)量肛溫2次，其均數(shù)作為基 礎(chǔ)體溫，ipNS、 DMI、 DISS各劑量30min后,sc注射16mg'kg—'的Apo， 30min 后再次測(cè)量肛溫，觀察藥物是否能夠拮抗Apo的降低體溫作用。
2.5. 育亨賓毒性增強(qiáng)小鼠試驗(yàn)
小鼠隨機(jī)分為NS組(20mH(g」)、DMI組.(20mg.kg" ) 、 DISS高、中、 低劑量組(高、中、低劑量分別為4mglg 、 2mg'kg—1、 1mg'kg—')，每組10只， ipNS、 DMI、 DISS各劑量30min后，sc注射30mg.kg- 11 6mg.kg- 1的YOH， 記錄給予YOH 18h后各組小鼠的死亡率^
2.6. DISS對(duì)自發(fā)活動(dòng)小鼠的影響
小鼠隨機(jī)分為NS組(20mH(g—' ) ,DISS高、中、低劑量組(高、屮、低劑 量分別為4mg.kg '、 2mg.kg」、lmg'kg-1 )，每組10只。ip NS、 DISS各劑量 40min后，分別放入動(dòng)物自主活動(dòng)監(jiān)測(cè)儀，記錄5min內(nèi)各組小鼠的自生活動(dòng)次 數(shù)，每次同時(shí)記錄5只小鼠的活動(dòng)情況。
2.7統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用CHISS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)以iiS表示， 量反應(yīng)資料組間比較用方差分析(ANAVO)，質(zhì)反應(yīng)資料組間比較用x2檢驗(yàn)。 3.結(jié)果
3.1 3， 6， -二芥子酰基蔗糖對(duì)5-HTP誘發(fā)小鼠甩頭行為的影響
與NS組比較，小鼠ig給予DISS高、中、低三個(gè)劑量，對(duì)5-HTP誘導(dǎo)的小鼠 甩頭行為均有不同程度的增強(qiáng)作用，與DMI作用相似。(見(jiàn)表l)
表l. 3， 6， -二芥子酰基蔗糖對(duì)S-HTP誘發(fā)小鼠甩頭行為的影響(.x ±s)
Tab I.Effects of DISS on 5- [-ITP induced head-twitch response in mice(x ±s)
GroupDose (mg.kg—)nNumber of times of head-i witch
NS101。.2± 7.6
DM[20mg'kg_ i1029.1土9.52'
DISSlmg.l(g-126.5士U.3 11
2nig.kg-11056.2士10.02)
4mg.kg一 i1042.5± 8.22'
注與生理鹽水組相比1V" ^ , 2' P<0. 01 Note: Note:vs NS g腿p 1' P<0.05 ， 2)P<0.01
3.2 3， 6' -二芥子?；崽菍?duì)高劑量阿撲嗎啡引起小鼠體溫降低的影響:DISS各.劑量組均能顯著拮抗高劑量APO所致的小鼠體溫下降，結(jié)果見(jiàn)表2。 表2 DISS對(duì)高劑量阿樸嗎啡所致小鼠體溫下降的影響(5±S n= 10) Tab.2 Effects of DISS on antagonism of high dose of apomorphine in mice (x ±S, n= 10)
GroupDose (mg.kg-')TO (°C)T30 (°C)△T (°C)
NS—36.93±1.0233.26±0.513.66± 1.26
DMI20mg-kg-137.26±1.1135.49±1.222)1.78±0.82)
DISSlmg.kg-138.03±0.6936.58±1.482)1.45±0.752)
2mg'kg-137.59±0.6235.64±0.782)1.95±0.882)
4mg.kg-137.55±0.4834.48士L22"2.82±0.98
注與生理鹽水組相比"P〈0.05， 2)P〈0.01 Note:vs NS group)P0.05, 2)P<0.01
3.3給予各劑量的3， 6' -二芥子?；崽呛髮?duì)育亨賓致死作用的影響
實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3， DISS高劑量能顯著增加皮下注射YOH小鼠的死亡率，提 示DISS可通過(guò)影響NE能神經(jīng)傳遞，產(chǎn)生抗抑郁作用。
表3小鼠給予3， 6， -二芥子?；崽菍?duì)YOH毒性的影響(n = 10) Tab.3 Effect of administration DISS on the YOH toxicity in mice (n = 10)
GroupD0S6nNumber ofdeath rate
NS—10.-。. 0
DMI20mg.kg-11091)90
DISSlmg.kg"10440
2mg-kgf110660
4mg.kg-1107n70
注與生理鹽水組相比"P〈0. 01 Note:vs NS group ')PO.Ol
3.4 3， 6' -二芥子?；崽呛髮?duì)小鼠自主活動(dòng)次數(shù)的影響(n-lO)，
給予各劑量的DISS對(duì)小鼠自主活動(dòng)次數(shù)均沒(méi)有顯著的影響，結(jié)果見(jiàn)表4。
表43， 6' -二芥子?；崽菍?duì)小鼠自主活動(dòng)次數(shù)的影響(n = 10) Tab.4 Effect of treatment with DISS on the autonomic activities in mice (n = 10)
GroupDossnfrequency of autonomic
NS—_10856±214
DISSlmg.kg"10882±205
2mg.kg-110827±167
4mg-kg-110843±186
74.結(jié)論
在國(guó)家自然科學(xué)基金的資助下，我們通過(guò)體內(nèi)外研究，發(fā)現(xiàn)遠(yuǎn)志中的寡糖
從寡糖酯部位中分離得到了8個(gè)單體化合物。本研究在前期丁作的基礎(chǔ)上，運(yùn)ffl 藥理學(xué)抑郁模型探討單體化合物3， 6'-二芥子?；崽堑目挂钟糇饔眉翱赡艿淖?br> 經(jīng)典單胺理論認(rèn)為，抑郁癥的發(fā)生與腦內(nèi)單胺遞質(zhì)功能不足有關(guān)，尤其以 NE和5-HT系統(tǒng)功能關(guān)系密切；藥物對(duì)高劑量阿撲嗎啡引起小鼠休溫下降的拮抗 是通過(guò)中樞NE能機(jī)制，該實(shí)驗(yàn)反映了藥物對(duì)NE重?cái)z取/或NE傳遞的作用。育亨 賓作為(x2受體拮抗劑，可阻斷中樞和外周交感神經(jīng)突出前膜的a2受體促進(jìn)NE釋 放，使突觸間隙NE濃度升高產(chǎn)生中樞神經(jīng)系統(tǒng)毒性，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)動(dòng)物死亡。5-HT 通過(guò)激動(dòng)腦內(nèi)5-HT:受體，引起小鼠甩頭行為，給予5-HT的前體5-HTP后，使轉(zhuǎn) 運(yùn)到腦內(nèi)增加外源性5-HT，在小鼠可看到特征性反應(yīng)一甩頭行為，三環(huán)類(lèi)抗抑 郁藥和選擇性5-經(jīng)色胺重吸收抑制劑(SSRl)均可通過(guò)增強(qiáng)腦內(nèi)5-HT神經(jīng)系統(tǒng)功 能，加強(qiáng)這種甩頭行為。
本研究結(jié)果表明，給予DISS可使育亨賓所致動(dòng)物死亡率明顯增力I:I,提示DISS 增強(qiáng)了育亨賓對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的毒性作用。而D:[SS對(duì)高劑量阿撲嗎啡所引起的 小鼠體溫下降的拮抗作用，也反映了其對(duì)屮樞去甲腎上腺素重?cái)z取及/或?qū)θュ?腎上腺素傳遞的影響；遠(yuǎn)志中的3， 6'-二芥子?；崽悄茉鰪?qiáng)5-HTP誘導(dǎo)的小鼠 甩頭行為，并有劑量依賴(lài)性；在本實(shí)驗(yàn)中的劑量范圍內(nèi)，DISS無(wú)中樞興奮或抑
權(quán)利要求
1.3，6’-二芥子?；崽窃谥苽渲委熞钟舭Y產(chǎn)品中的應(yīng)用。
2. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的應(yīng)用，其中的3， 6' -二芥子酰基蔗糖是指從天 然植物中提取得到的和/或化學(xué)合成中獲得的3， 6' -二芥子?；崽?3， ，6-disinapoyl sucrose, DISS)。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，是指加入常規(guī)的賦形劑、調(diào)味劑、崩解劑、 防腐劑、潤(rùn)滑劑、濕潤(rùn)劑、粘合劑、溶劑、增稠劑、增溶劑藥物輔料，制成任 何一種適合于臨床上使用的劑型，包括片劑、膠囊劑、顆粒劑、口服液體制劑、 注射劑。
4. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的應(yīng)用，其中所指的抑郁癥狀是指由于各種原因引 起的抑郁。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中所說(shuō)的產(chǎn)品是指治療抑郁癥的藥品、 保健藥品、保健食品和其他保健品。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了3，6’-二芥子?；崽?3’，6-disinapoyl sucrose，DISS)的藥物新用途，具體涉及它們?cè)谥苽渲委熞钟舭Y產(chǎn)品中的應(yīng)用。3，6’-二芥子?；崽?3’，6-disinapoyl sucrose，DISS)對(duì)于治療各種原因引起的抑郁癥具有較好的治療作用，3，6’-二芥子?；崽窃谒幚韺W(xué)抑郁模型有顯著的抗抑郁活性。并且其抗抑郁活性與增強(qiáng)5-羥色胺(5-HT)和去甲腎上腺素能(NE)神經(jīng)功能均有關(guān)。DISS在抗抑郁有效劑量范圍內(nèi)無(wú)中樞興奮或抑制性作用。
文檔編號(hào)A61P25/00GK101579348SQ20081009791
公開(kāi)日2009年11月18日 申請(qǐng)日期2008年5月16日 優(yōu)先權(quán)日2008年5月16日
發(fā)明者屏 劉, 廖紅波, 王東曉, 穆麗華, 園 胡, 郭代紅 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍總醫(yī)院