嬰幼兒食品中低聚果糖含量的檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及食品檢測(cè)領(lǐng)域，具體而言，涉及嬰幼兒食品中低聚果糖含量的檢測(cè)方 法。
【背景技術(shù)】
[0002] 低聚果糖(fructo_oligosacchrides，F(xiàn)OS)又名鹿果低聚糖、寡果糖，是低聚糖的 一種。它是由蔗糖和1~4個(gè)果糖基通過β-l，2糖苷鍵與蔗糖中的D-果糖基結(jié)合而成的蔗果 三糖(GF2)，蔗果四糖(GF3)、蔗果五糖(GF4)和蔗果六糖(GF5)及其混合物的總稱。
[0003] 低聚果糖是一種天然活性物質(zhì)，甜度為蔗糖的0.3~0.6倍。近年研究發(fā)現(xiàn)，低聚果 糖具有良好的生理功能，如調(diào)節(jié)腸道菌群、增殖雙歧桿菌、促進(jìn)鈣吸收、抗齲齒、調(diào)血脂等。 低聚果糖在中國(guó)已經(jīng)被國(guó)家食品藥品監(jiān)督局批準(zhǔn)為保健食品，添加在乳制品、乳酸菌飲料、 固體飲料、糖果、餅干、面包、果凍、冷飲等多種食品中。
[0004] 將低聚果糖添加到嬰幼兒食品中是提升嬰幼兒食品功能的有效方法之一，添加的 低聚果糖可以促進(jìn)嬰幼兒腸蠕動(dòng)，促進(jìn)腸道中有益菌生長(zhǎng)，加速腸內(nèi)廢物和有害菌排出，防 止腹瀉，減少便秘等?，F(xiàn)在國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上銷售的嬰幼兒食品大多標(biāo)注添加低聚果糖，而添加 "益生元"（低聚果糖)的廣告也成為各大生產(chǎn)企業(yè)的主要宣傳內(nèi)容。
[0005] 廠家在生產(chǎn)嬰幼兒食品的過程中，將低聚果糖原料按照一定的比例添加至原料中 制得嬰幼兒食品成品。在出廠檢驗(yàn)時(shí)，為了確保成品中低聚果糖的含量符合添加要求，需要 對(duì)其含量進(jìn)行檢測(cè)，符合低聚果糖添加標(biāo)準(zhǔn)的成品方可進(jìn)行銷售。因此，嬰幼兒食品中低聚 果糖含量的檢測(cè)結(jié)果是否準(zhǔn)確至關(guān)重要。
[0006] 公布號(hào)為CN103823006A的專利公開了一種乳粉中低聚果糖含量的高效液相色譜 串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法，包括以下步驟：（1)稱取各種低聚果糖標(biāo)準(zhǔn)品并將其配成混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備 液，再將混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液用蒸餾水逐級(jí)稀釋，分別配成至少5種不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液， 將不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)并得到標(biāo)準(zhǔn)譜圖，標(biāo)準(zhǔn)譜圖中 保留時(shí)間確定低聚果糖品種，色譜峰面積與對(duì)應(yīng)的低聚果糖濃度成函數(shù)關(guān)系；（2)將步驟 (1)獲得的標(biāo)準(zhǔn)譜圖按低聚果糖品種分別制作濃度與色譜峰面積關(guān)系曲線圖；（3)稱取一定 量的乳粉樣品，依次加入蒸餾水和乙醇，渦旋振蕩后，超聲溶解，離心，取上清液稀釋后過濾 膜過濾，取濾液進(jìn)行高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)，得樣品譜圖；（4)將步驟(3)中獲得的樣品 譜圖的保留時(shí)間確定低聚果糖品種并將其色譜峰面積與步驟(2)對(duì)應(yīng)的低聚果糖品種的標(biāo) 準(zhǔn)曲線進(jìn)行比對(duì)，用插入法確定樣品中的各低聚果糖的含量。
[0007] 上述檢測(cè)方法中只能對(duì)含有低聚果糖樣品中的各種低聚果糖成分進(jìn)行分離和含 量檢測(cè)，步驟繁瑣，而不能直接對(duì)總低聚果糖含量進(jìn)行檢測(cè)。而且，在檢測(cè)過程中需要使用 質(zhì)譜檢測(cè)，對(duì)檢測(cè)設(shè)備儀器要求較高。
[0008] 有鑒于此，特提出本發(fā)明。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明的目的在于提供一種直接對(duì)嬰幼兒食品中的低聚果糖含量進(jìn)行檢測(cè)的方 法。該方法針對(duì)現(xiàn)有檢測(cè)方法中存在的步驟繁瑣，無(wú)法直接檢測(cè)低聚果糖含量且對(duì)儀器設(shè) 備要求較高的缺陷，選擇與嬰幼兒食品加的低聚果糖的品牌號(hào)相同的低聚果糖作為標(biāo)準(zhǔn)物 添加至樣品中配成定標(biāo)液，與樣品液經(jīng)過相同的處理后得到色譜峰，將兩者的色譜峰進(jìn)行 對(duì)比篩選出用于定量計(jì)算的特異峰，以此計(jì)算得到食品中低聚果糖的含量。由于本發(fā)明提 供的檢測(cè)方法是直接通過確定低聚果糖的色譜峰而進(jìn)行定量計(jì)算，無(wú)需對(duì)低聚果糖中的成 分進(jìn)行分離和含量檢測(cè)，因此，本發(fā)明的檢測(cè)方法簡(jiǎn)便快捷。而且，本發(fā)明提供的檢測(cè)方法 只需借助離子色譜儀進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)設(shè)備的要求較低。
[0010] 為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，特采用以下技術(shù)方案：
[0011] -種嬰幼兒食品中低聚果糖含量的檢測(cè)方法，包括如下步驟：
[0012] (1)采用與樣品中添加的低聚果糖的品牌號(hào)相同的低聚果糖作為標(biāo)準(zhǔn)物，配制成 不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液；
[0013] (2)稱取兩份相同質(zhì)量的樣品，一份加入所述標(biāo)準(zhǔn)物，加水溶解后配成加標(biāo)液，另 一份直接加水配成相同體積的樣品液，將所述加標(biāo)液和所述樣品液經(jīng)預(yù)處理后連同所述工 作液依次加至離子色譜儀中進(jìn)行梯度洗脫，并分別得到色譜圖；
[0014] (3)將所述加標(biāo)液和所述樣品液的色譜圖進(jìn)行對(duì)比后篩選出用于定量的特異峰， 擬合得到所述工作液的標(biāo)準(zhǔn)曲線，再根據(jù)樣品液色譜圖中特異峰的峰面積找出所述標(biāo)準(zhǔn)曲 線上對(duì)應(yīng)的濃度，得到嬰幼兒食品中低聚果糖含量。
[0015] 本發(fā)明提供的檢測(cè)方法的檢測(cè)原理如下：
[0016] 選擇與嬰幼兒食品中添加的低聚果糖的品牌號(hào)相同的低聚果糖作為標(biāo)準(zhǔn)物，配制 成不同濃度的工作液。由于所用的標(biāo)準(zhǔn)物與嬰幼兒食品中的低聚果糖出自同一生產(chǎn)廠家， 確保標(biāo)準(zhǔn)物在色譜檢測(cè)過程中和嬰幼兒食品中的低聚果糖具有相同的色譜行為和響應(yīng)特 性。
[0017] 其次，在樣品液中添加一定量的標(biāo)準(zhǔn)物作為加標(biāo)液，將加標(biāo)液和樣品液經(jīng)過相同 的處理后進(jìn)樣至離子色譜儀中進(jìn)行檢測(cè)。由于加標(biāo)液中的樣品質(zhì)量和樣品液中的樣品質(zhì)量 相同，且加標(biāo)液和樣品液均經(jīng)過相同的處理，從而使得兩者的色譜圖在相同保留時(shí)間處具 有峰形相同的色譜峰，這一色譜峰既包含低聚果糖的色譜峰也包含嬰幼兒食品中其它組分 的色譜峰，但由于加標(biāo)液中低聚果糖的含量大于樣品液，而其他組分的含量均相同，因此， 加標(biāo)液中低聚果糖生成的色譜峰雖然和樣品液中的低聚果糖生成的色譜峰具有相同的保 留時(shí)間和峰形，但前者的峰高一定大于后者，即前者的峰面積一定大于后者。因此，通過這 一對(duì)比，篩選出嬰幼兒食品中低聚果糖生成的特異峰，將其用作含量測(cè)定。根據(jù)不同濃度工 作液的特異峰的峰面積得到標(biāo)準(zhǔn)曲線，后根據(jù)所述樣品液中特異峰的峰面積，找出所述標(biāo) 準(zhǔn)曲線上對(duì)應(yīng)的濃度，得到所述樣品液中低聚果糖的濃度，計(jì)算得到嬰幼兒食品中低聚果 糖含量。
[0018] 由上述內(nèi)容可以看出，本發(fā)明提供的檢測(cè)方法是直接通過確定低聚果糖的色譜峰 而進(jìn)行定量計(jì)算的，由于不通過對(duì)各種低聚果糖成分進(jìn)行分離和含量檢測(cè)，使得檢測(cè)方法 簡(jiǎn)便快捷。
[0019] 而且，本發(fā)明提供的檢測(cè)方法只需借助離子色譜儀進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)設(shè)備的要求較低。
[0020] 本發(fā)明提供的檢測(cè)方法步驟簡(jiǎn)單，無(wú)需復(fù)雜的操作，最大程度地減少了檢測(cè)過程 中的不確定因素帶來(lái)的誤差，使得檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性大幅度提高。并且，本發(fā)明的檢測(cè)方法 中利用的離子色譜儀直接得到峰面積、擬合出標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到樣品待測(cè)液中低聚果糖的濃 度，不但方便快捷，而且計(jì)算機(jī)操作也進(jìn)一步保證了結(jié)果的準(zhǔn)確性。
[0021]利用離子色譜儀進(jìn)行檢測(cè)過程中，多種因素均會(huì)對(duì)色譜圖產(chǎn)生影響。為了保證加 標(biāo)液和樣品液中的低聚果糖產(chǎn)生的色譜峰峰形好，不拖尾，優(yōu)選地，步驟(2)中，所述梯度洗 脫的步驟中，所用的流動(dòng)相包括超純水、500-520mmol/L NaOH溶液和980-1000mmol/L CH3C00Na 溶液。
[0022] 進(jìn)一步優(yōu)選地，步驟(2)中，所述梯度洗脫的步驟中，洗脫時(shí)間為60~65min，流動(dòng) 相的流速為〇 . 40~0.45mL/min，且所述超純水的體積分?jǐn)?shù)為0-79.8 %，所述NaOH溶液的體 積分?jǐn)?shù)為0-80%，所述〇13〇)(^&溶液的體積分?jǐn)?shù)為0-100%。
[0023] 其梯度洗脫的具體條件如下表所示，在離子色譜檢測(cè)過程中，可根據(jù)下表設(shè)置離 子色譜儀流動(dòng)相的各個(gè)參數(shù)。
[0024] 表1離子色譜儀流動(dòng)相的參數(shù)設(shè)置表
[0025]
[0026]基于同樣的考慮，優(yōu)選地，步驟（2)中，所述離子色譜儀的分析柱為3mmX 150mm Dionex CarboPac PA20,保護(hù)柱為3mmX30mm Dionex CarboPac PA20。
[0027]進(jìn)一步優(yōu)選地，所述分析柱的柱溫為30_35°C。
[0028] 優(yōu)選地，步驟(2)中，所述預(yù)處理的步驟具體包括：
[0029]將所述加標(biāo)液和所述樣品液在45_50°C下水浴，完成水浴后冷卻至室溫，再加入相 同體積的乙腈，混勻后經(jīng)高速離心獲得上清液，依次取相同體積的所述加標(biāo)液和所述樣品 液的上清液，加入等量水稀釋后再過濾，收集濾液。
[0030] 上述預(yù)處理步驟中，通過水浴使得加標(biāo)液和樣品液充分溶解，再通過加入乙腈去 除加標(biāo)液和樣品液中的蛋白質(zhì)和脂肪等大分子物質(zhì)，避免對(duì)色譜圖的峰形和峰位置產(chǎn)生影 響;通過高速離心和過濾進(jìn)一步將大分子物質(zhì)沉淀。
[0031] 為了保證離心效果，優(yōu)選地，所述高速離心的步驟中，離心溫度為15-18°c，轉(zhuǎn)速為 12000-13000rpm，且離心時(shí)間為10-15分鐘。
[0032]為了保證過濾效果，優(yōu)選地，所述過濾的步驟具體包括：
[0033]將稀釋后的上清液依次通過0.22μπι的PES濾膜。
[0034] 優(yōu)選地，步驟(3)中，當(dāng)存在1個(gè)以上的特異峰時(shí)，分別測(cè)得所述工作液在每個(gè)特異 峰處的標(biāo)準(zhǔn)曲線，后根據(jù)所述樣品待測(cè)液中相應(yīng)特異峰的峰面積，一一找出相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線 上對(duì)應(yīng)的濃度，取所有濃度的平均值作為所述樣品液中低聚果糖的濃度。
[0035] 優(yōu)選地，步驟(3)中，所述將所述加標(biāo)液和所述樣品液的色譜圖進(jìn)行對(duì)比后篩選出 用于定量的特異峰的步驟具體包括：
[0036] 所述加標(biāo)液和所述樣品液的色譜圖進(jìn)行對(duì)比，選擇保留時(shí)間和峰形相同且所述加 標(biāo)液的峰面積大于所述樣品液的峰面積的色譜峰作為定量的特異峰。
[0037] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：
[0038] (1)本發(fā)明提供的檢測(cè)方法針對(duì)現(xiàn)有檢測(cè)方法中存在的步驟繁瑣，無(wú)法直接檢測(cè) 低聚果糖含量且對(duì)儀器設(shè)備要求較高的缺陷，選擇與嬰幼兒食品加的低聚果糖的品牌號(hào)相 同的低聚果糖作為標(biāo)準(zhǔn)物添加至樣品中配成定標(biāo)液，與樣品液經(jīng)過相同的處理后得到色譜 峰，將兩者的色譜峰進(jìn)行對(duì)比，選擇保留時(shí)間和峰形相同且加標(biāo)液峰面積大于樣品液峰面 積的色譜峰為特異峰進(jìn)行相應(yīng)的計(jì)算。由于本發(fā)明提供的檢測(cè)方法是直接通過確定低聚果 糖的色譜峰而進(jìn)行定量計(jì)算，無(wú)需對(duì)低聚果糖中的成分進(jìn)行分離和含量檢測(cè)，因此，本發(fā)明 的檢測(cè)方法簡(jiǎn)便快捷。而且，本發(fā)明提供的檢測(cè)方法只需借助離子色譜儀進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)設(shè)備 的要求較低。
[0039] (2)本發(fā)明提供的檢測(cè)方法中通過對(duì)離子色譜檢測(cè)過程中的梯度洗脫條件、色譜 柱條件進(jìn)行優(yōu)選，保證加標(biāo)液和樣品液中的低聚果糖產(chǎn)生的色譜峰峰形好，不拖尾。
[0040] (3)本發(fā)明提供的檢測(cè)方法中在預(yù)處理過程中，通過水浴使得加標(biāo)液和樣品液充 分溶解，再通過加入乙腈去除加標(biāo)液和樣品液中的蛋白質(zhì)和脂肪等大分子物質(zhì)，避免對(duì)色 譜圖的峰形和峰位置產(chǎn)生影響;通過高速離心和過濾進(jìn)一步將大分子物質(zhì)沉淀。
【附圖說明】
[0041] 為了更清楚地說明本發(fā)明實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，以下將對(duì)實(shí)施例或現(xiàn) 有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹。
[004