專利名稱：利用離子交換樹脂分離高唾液酸含量酪蛋白糖巨肽的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及活性物質(zhì)分離技術(shù)領(lǐng)域，更具體的說，是涉及一種利用離子交換樹脂分離高唾液酸含量酪蛋白糖巨肽的方法。
背景技術(shù)：
乳清是工業(yè)中干酪和干酪素的副產(chǎn)品，乳糖和乳清蛋白均存在于其中，其營養(yǎng)物質(zhì)約占原料奶的55%。隨著干酪生產(chǎn)量的逐年上升，每年都會有大量等待利用和處理的乳清。一些工業(yè)發(fā)達(dá)的國家已經(jīng)具備了較強(qiáng)的乳清處理能力，但盡管如此，世界上仍有半數(shù)的乳清不能被再次利用。大量乳清的排放不僅僅是資源的浪費(fèi)，更是對環(huán)境造成了嚴(yán)重的污
^fe ο牛乳中的蛋白質(zhì)80%為酪蛋白。在干酪的制作過程中，用凝乳酶處理牛乳κ-酪蛋白(κ-CN)時，κ-CN被水解為不溶的副κ-CN和一種可溶性的多肽兩部分?？扇苄缘亩嚯碾S乳清被分離出去，由于它來源于酪蛋白并含有較多的糖鏈，被稱為酪蛋白糖巨肽 (Casein Glycomacropeptide,CGMP) 0 κ -酪蛋白是酪蛋白中唯一含糖的成分，包括半乳糖、 N-乙酰氨基半乳糖、N-乙酰神經(jīng)氨酸(唾液酸)等，這些糖大都存在于CGMP肽段上。至少含有一個唾液酸的三糖和四糖占CGMP結(jié)構(gòu)糖鏈的90%以上。CGMP是一種由64個氨基酸殘基組成的多肽片段，由于它富含唾液酸，研究證實該糖巨肽具有較多的生理功能。表面含有唾液酸的靶細(xì)胞能夠免受流感病毒的感染，CGMP對所有的流感病毒都表現(xiàn)出抑制流感病毒紅細(xì)胞凝集的作用，當(dāng)失去唾液酸時就使該作用喪失。脾臟淋巴細(xì)胞參與炎癥反應(yīng)，抑制脾細(xì)胞的增殖可以用來抑制過敏反應(yīng)。CGMP可以抑制被鼠傷寒桿菌有絲分裂原的脂多糖所誘導(dǎo)的老鼠脾細(xì)胞的增殖，如果將CGMP的唾液酸消化掉就不具有這樣的活性。由于唾液酸的存在，CGMP還有增強(qiáng)記憶力的保健作用等。因此CGMP可用于生產(chǎn)多種保健食品和醫(yī)藥品。目前純化CGMP的方法很多，比如沉淀法、超濾法、雙水相系統(tǒng)法、酶交聯(lián)法等，但這些方法中存在唾液酸含量低、生產(chǎn)成本高等缺點(diǎn)，因此目前CGMP特別是高唾液酸含量 CGMP的生產(chǎn)還未能實現(xiàn)工業(yè)化。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是為了克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足之處，提供一種制備過程簡單，成本較低，能獲得高唾液酸含量酪蛋白糖巨肽的方法。本發(fā)明通過下述技術(shù)方案實現(xiàn)一種利用離子交換樹脂分離高唾液酸含量酪蛋白糖巨肽的方法，其特征在于，包括下述步驟(1)將含酪蛋白糖巨肽的液態(tài)原料的ρΗ值調(diào)到5. 0-5. 4與陽離子交換樹脂混合， 吸出未吸附液；(2)將步驟(1)得到的未吸附液的ρΗ值調(diào)到5. 0-5. 4與陰離子交換樹脂混合，酪
4蛋白糖巨肽被吸附后用氯化鈉洗脫，收集氯化鈉洗脫液；或?qū)⒉襟E(1)得到的未吸附液的 PH值調(diào)到3. 5-4. 0再與陽離子交換樹脂混合，酪蛋白糖巨肽被吸附后用氯化鈉洗脫，收集氯化鈉洗脫液；(3)將收集的氯化鈉洗脫液用截留分子量8000-14000的透析袋透析進(jìn)行脫鹽，透析截留液冷凍干燥后得到高唾液酸含量的酪蛋白糖巨肽。另一種利用離子交換樹脂分離高唾液酸含量酪蛋白糖巨肽的方法，其特征在于， 包括下述步驟(1)將含酪蛋白糖巨肽的液態(tài)原料的pH值調(diào)到5. 0-5. 4與陰離子交換樹脂混合， 酪蛋白糖巨肽被吸附后用氯化鈉洗脫，收集氯化鈉洗脫液；(2)將步驟(1)得到的洗脫液用截留分子量8000-14000的透析袋透析進(jìn)行脫鹽， 收集截留液并將截留液的PH值調(diào)為5. 0-5. 4再與陽離子交換樹脂混合，吸出未吸附液；(3)將步驟(2)得到的未吸附液冷凍干燥后得到高唾液酸含量的酪蛋白糖巨肽。上述兩種方法中，制取含有酪蛋白糖巨肽的液態(tài)原料的固體原料為脫鹽乳清粉。所述陽離子交換樹脂和陰離子交換樹脂均為苯乙烯系離子交換樹脂。含有酪蛋白糖巨肽的液態(tài)原料的制備方法為用0.02mol/L醋酸鈉緩沖液配制 100mg/ml的乳清粉溶液，500 X g離心20min去除不溶物取上清液。上清液用冰醋酸調(diào)節(jié)pH 值為5. 0-5. 4得到含有酪蛋白糖巨肽的液態(tài)原料；乳清粉與陽離子交換樹脂或陰離子交換樹脂的質(zhì)量比為2 5。所述陽離子交換樹脂的處理方法為將陽離子交換樹脂充分溶脹后，用酸溶液和堿溶液交替淋洗進(jìn)行轉(zhuǎn)型活化，之后用稀鹽酸處理為氫型樹脂，最后用去離子水洗至中性所述陰離子交換樹脂的處理方法為將陰離子交換樹脂充分溶脹后，用酸溶液和堿溶液交替淋洗進(jìn)行轉(zhuǎn)型活化，之后用氫氧化鈉溶液處理為氫氧型樹脂，最后用去離子水洗至中性備用。本發(fā)明具有下述技術(shù)效果UCGMP的等電點(diǎn)在4-5之間，當(dāng)pH值高于等電點(diǎn)時能夠被陰離子交換樹脂吸附， 反之則被陽離子交換樹脂吸附。本發(fā)明中交替運(yùn)用了互補(bǔ)技術(shù)，將分離過程進(jìn)行了合理的銜接，減少了處理步驟，降低了樣品的損耗，從而能夠獲得高唾液酸含量的CGMP。本發(fā)明中每IOOg乳清粉可以制得0. 8-0. 9g純度大于85%的CGMP，其唾液酸含量在6. 0% (占蛋白質(zhì)，質(zhì)量分?jǐn)?shù))以上。2、本發(fā)明的方法中用到的原料和試劑都是對人體無害的，因此由該方法制得的 CGMP能夠用于食品和保健藥品，并且分離過程不會對環(huán)境產(chǎn)生破壞。3、本發(fā)明中采用的苯乙烯系離子交換樹脂價格低于常用的葡聚糖凝膠和瓊脂糖凝膠樹脂，并且經(jīng)再生后可以重復(fù)使用。分離過程中無需貴重的器械和苛刻的實驗條件，投資少、能耗小、適宜進(jìn)行工業(yè)化生產(chǎn)。4、本發(fā)明的方法在利用離子交換樹脂的過程中除了能夠得到目標(biāo)產(chǎn)物外，所選分離條件溫和且未使用易使乳清蛋白變性的有機(jī)溶劑，能保持乳清蛋白的活性，回收如
乳球蛋白、α-乳白蛋白等乳清蛋白，提高了乳清的綜合利用率，避免了原料的浪費(fèi)。
具體實施例方式以下結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。本發(fā)明中所使用的陽離子交換樹脂和陰離子交換樹脂為苯乙烯系離子交換樹脂。 陽離子交換樹脂為001X7或D061，陰離子交換樹脂為201X4。利用南京建成生物工程研究所唾液酸試劑盒測定CGMP的唾液酸含量，CGMP純度用(I-OD28tlA)D21tl)的百分比表示，蛋白質(zhì)含量測定采用凱氏定氮法。實施例1(1)含有酪蛋白糖巨肽的液態(tài)原料的制備取D90脫鹽乳清粉(蛋白質(zhì)含量14%、質(zhì)量分?jǐn)?shù)；唾液酸含量0. 74g/100g乳清粉) 溶于0.02mol/L的醋酸鈉溶液中，使終濃度為100mg/ml。500X g離心20min去除不溶物。 離心后的上清液用冰醋酸調(diào)節(jié)pH值為5. O備用。(2)D061離子交換樹脂的處理新購樹脂進(jìn)行活化后才能使用，充分溶脹后用酸堿溶液交替淋洗進(jìn)行轉(zhuǎn)型活化， 最后用稀鹽酸處理為氫型樹脂。具體方法如下。陽離子交換樹脂的處理取D061陽離子交換樹脂，置于去離子水中溶脹24h，用3 倍體積濃度為2%的鹽酸浸泡4h (間歇攪拌使轉(zhuǎn)型充分)后用去離子水洗至近中性，再用3 倍體積lmol/L的氫氧化鈉浸泡4h(間歇攪拌使轉(zhuǎn)型充分)后用去離子水洗至近中性，最后再用3倍體積2%鹽酸浸泡4h(間歇攪拌使轉(zhuǎn)型充分)后用去離子水洗至近中性轉(zhuǎn)為氫型樹脂。再用PH值為5. 0、濃度為0. 02mol/L的醋酸鈉緩沖溶液平衡三次，吸凈緩沖液備用。(3) 201X4陰離子交換樹脂的處理新購樹脂需要進(jìn)行活化后才能使用，充分溶脹后用酸堿溶液交替淋洗進(jìn)行轉(zhuǎn)型， 最后用稀堿液處理為氫氧型樹脂。具體方法如下。取201 X 4陰離子交換樹脂，置于濃度為0. 2mol/L的氯化鈉中溶脹5_8h再逐漸添加去離子水溶脹16-19h，以免樹脂吸水脹破。用去離子水洗凈氯化鈉后用3倍體積濃度為 lmol/L的氫氧化鈉浸泡4h，浸泡過程中間歇攪拌使轉(zhuǎn)型充分，用去離子水洗至近中性，再用3倍體積2%的鹽酸浸泡4h，浸泡過程中間歇攪拌使轉(zhuǎn)型充分。用去離子水洗至近中性， 加入3倍體積lmol/L的氫氧化鈉浸泡4h，浸泡過程中間歇攪拌使轉(zhuǎn)型充分。最后用去離子水洗至近中性轉(zhuǎn)為氫氧型樹脂，再用PH值為5. 2、濃度為0. 02mol/L的醋酸鈉緩沖溶液平衡三次，吸出緩沖液備用。(4)取200ml步驟⑴制備得到的含有酪蛋白糖巨肽的液態(tài)原料與50g經(jīng)過步驟 (2)處理得到的D061陽離子交換樹脂混合，置于20°C恒溫振蕩器中吸附1.5h后吸出未吸附液。PH值為5. 0時，CGMP帶有負(fù)電荷不被陽離子交換樹脂吸附，而β -乳球蛋白等因帶有正電荷吸附于樹脂上。此時洗脫D061樹脂可以回收部分β-乳球蛋白。未吸附液中CGMP 的含量基本不變。(5)用冰醋酸將未吸附液的PH值調(diào)為5. 2與經(jīng)過步驟(3)處理得到的201X4陰離子交換樹脂混合(混合比例為200ml未吸附液50g 201\4陰離子交換樹脂)，置于201 恒溫振蕩器中吸附1.5h后吸出未吸附液。帶負(fù)電的CGMP和少量的α-乳白蛋白被樹脂吸附，其它雜質(zhì)如乳糖等存在于未吸附液中。向吸附有CGMP的201X4陰離子交換樹脂中加入去離子水漂洗2-3次，每次50ml，吸出水后再加入濃度為lmol/L、pH值為4的氯化鈉溶
6液100ml，置于20°C恒溫振蕩器中洗脫2h后吸出上清液(即氯化鈉洗脫液)。(6)得到的氯化鈉洗脫液使用8000-14000的透析袋透析24h，透析截留液冷凍干燥后得純度為88%、唾液酸含量為6. 09% (占蛋白質(zhì)，質(zhì)量分?jǐn)?shù))的CGMP 0. Slgo實施例2(1)含有酪蛋白糖巨肽的液態(tài)原料的制備取D90脫鹽乳清粉(蛋白質(zhì)含量14%、質(zhì)量分?jǐn)?shù)；唾液酸含量0. 74g/100g乳清粉) 溶于0.02mol/L的醋酸鈉溶液中，使終濃度為100mg/ml。500X g離心20min去除不溶物。 離心后的上清液用冰醋酸調(diào)節(jié)PH值為5. 2備用。(2)D061陽離子交換樹脂和001X7陽離子交換樹脂的處理取D061陽離子交換樹脂，置于去離子水中溶脹24h，用3倍體積濃度為2%的鹽酸浸泡4h (間歇攪拌使轉(zhuǎn)型充分)后用去離子水洗至近中性，再用3倍體積lmol/L的氫氧化鈉浸泡4h (間歇攪拌使轉(zhuǎn)型充分)后用去離子水洗至近中性，最后再用3倍體積2%鹽酸浸泡4h (間歇攪拌使轉(zhuǎn)型充分)后用去離子水洗至近中性轉(zhuǎn)為氫型樹脂。再用PH值為5. 2、 濃度為0. 02mol/L的醋酸鈉緩沖溶液平衡三次，吸凈緩沖液備用。。將001X7陽離子交換樹脂先用濃度為0. 2mol/L的氯化鈉溶脹5_8小時，再逐漸添加去離子水溶脹16-19小時，以免樹脂吸水脹破。用3倍體積濃度為2%的鹽酸浸泡 4h(間歇攪拌使轉(zhuǎn)型充分)后用去離子水洗至近中性，再用3倍體積lmol/L的氫氧化鈉浸泡4h(間歇攪拌使轉(zhuǎn)型充分)后用去離子水洗至近中性，最后再用3倍體積2%鹽酸浸泡 4h(間歇攪拌使轉(zhuǎn)型充分)后用去離子水洗至近中性轉(zhuǎn)為氫型樹脂。再用PH值為3. 8的 0. 02mol/L的醋酸鈉緩沖溶液平衡三次，吸凈緩沖液備用。(3)取步驟(1)得到的200ml含有酪蛋白糖巨肽的液態(tài)原料與50g經(jīng)過步驟⑵ 處理得到的D061陽離子交換樹脂混合，置于20°C恒溫振蕩器中吸附1. 5h后吸出未吸附液。 pH值為5.2時，CGMP帶有負(fù)電荷不被陽離子交換樹脂吸附，而β-乳球蛋白因帶有正電荷吸附于樹脂上。此時洗脫D061樹脂可以回收部分β-乳球蛋白。(4)用冰醋酸將未吸附液的PH值調(diào)為3. 8與經(jīng)過步驟(2)處理得到的001X7陽離子交換樹脂混合，置于20°C恒溫振蕩器中吸附1.5h后吸出未吸附液。pH值為3. 8時， 帶正電的CGMP被樹脂吸附。向吸附有CGMP的001X7陽離子交換樹脂中加入去離子水漂洗2-3次，每次50ml，吸出水后再加入濃度為lmol/L、pH值為4的氯化鈉溶液100ml，置于 20°C恒溫振蕩器中洗脫2h后吸出上清液(即氯化鈉洗脫液)。(5)得到的氯化鈉洗脫液使用8000-14000的透析袋透析24h，透析的截留液冷凍干燥后得純度為86%、唾液酸含量為6. 10% (占蛋白質(zhì)，質(zhì)量分?jǐn)?shù))的CGMP0. 80go實施例3(1)含有酪蛋白糖巨肽的液態(tài)原料的制備取D90脫鹽乳清粉(蛋白質(zhì)含量14%、質(zhì)量分?jǐn)?shù)；唾液酸含量0. 74g/100g乳清粉) 溶于0.02mol/L的醋酸鈉溶液中，使終濃度為100mg/ml。500X g離心20min去除不溶物。 離心后的上清液用冰醋酸調(diào)節(jié)pH值為5. 4備用。(2)001X7陽離子交換樹脂的處理將001X7陽離子交換樹脂先用濃度為0. 2mol/L的氯化鈉溶脹5_8小時，再逐漸添加去離子水溶脹16-19小時，以免樹脂吸水脹破。用3倍體積濃度為2%的鹽酸浸泡
74h(間歇攪拌使轉(zhuǎn)型充分)后用去離子水洗至近中性，再用3倍體積lmol/L的氫氧化鈉溶液浸泡4h (間歇攪拌使轉(zhuǎn)型充分)后用去離子水洗至近中性，最后再用3倍體積2%鹽酸浸泡4h (間歇攪拌使轉(zhuǎn)型充分)后用去離子水洗至近中性轉(zhuǎn)為氫型樹脂。再用PH值為5. 4、 濃度為0. 02mol/L的醋酸鈉緩沖溶液平衡三次，吸凈緩沖液備用。(3) 201X4陰離子交換樹脂的處理取201 X 4陰離子交換樹脂，置于濃度為0. 2mol/L的氯化鈉中溶脹5_8h再逐漸添加去離子水溶脹16-19h，以免樹脂吸水脹破。用去離子水洗凈氯化鈉后用3倍體積濃度為 lmol/L的氫氧化鈉浸泡4h，浸泡過程中間歇攪拌使轉(zhuǎn)型充分，用去離子水洗至近中性，再用3倍體積2%的鹽酸浸泡4h，浸泡過程中間歇攪拌使轉(zhuǎn)型充分。再用去離子水洗至近中性，用3倍體積lmol/L的氫氧化鈉溶液浸泡4h，浸泡過程中間歇攪拌使轉(zhuǎn)型充分。最后用去離子水洗至近中性轉(zhuǎn)為氫氧型樹脂，再用PH值為5. 4、濃度為0. 02mol/L的醋酸鈉緩沖溶液平衡三次，吸出緩沖液備用。(4)取200ml步驟(1)制備得到的含有酪蛋白糖巨肽的液態(tài)原料與50g步驟(3) 處理得到的201X4陰離子交換樹脂混合，置于20°C恒溫振蕩器中吸附1. 5h后吸出未吸附液。未吸附液中為帶正電或不帶電的β-乳球蛋白以及乳糖、脂肪等。帶負(fù)電的CGMP和少量的α _乳白蛋白、牛血清白蛋白等被201 X 4陰離子交換樹脂吸附。(5)向吸附有CGMP的201X4陰離子交換樹脂中加入去離子水漂洗2_3次，每次 50ml，吸出水后再加入濃度為lmol/L、pH值為4的氯化鈉溶液100ml，置于20°C恒溫振蕩器中洗脫2h后吸出上清液(即氯化鈉洗脫液)。(6)氯化鈉洗脫液使用8000-14000的透析袋透析24h。用冰醋酸將透析截留液的 PH值調(diào)為5. 4與步驟⑵處理得到的001 X 7陽離子交換樹脂混合，置于20°C恒溫振蕩器中吸附2h后吸出未吸附液，將未吸附液冷凍干燥后得純度為85%、唾液酸含量為6. 05% (占蛋白質(zhì)，質(zhì)量分?jǐn)?shù))的CGMP0.85g。
權(quán)利要求
1.一種利用離子交換樹脂分離高唾液酸含量酪蛋白糖巨肽的方法，其特征在于，包括下述步驟(1)將含酪蛋白糖巨肽的液態(tài)原料的PH值調(diào)到5.0-5. 4與陽離子交換樹脂混合，吸出未吸附液；(2)將步驟(1)得到的未吸附液的pH值調(diào)到5.0-5. 4與陰離子交換樹脂混合，酪蛋白糖巨肽被吸附后用氯化鈉洗脫，收集氯化鈉洗脫液；或?qū)⒉襟E(1)得到的未吸附液的PH值調(diào)到3. 5-4. 0再與陽離子交換樹脂混合，酪蛋白糖巨肽被吸附后用氯化鈉洗脫，收集氯化鈉洗脫液；(3)將收集的氯化鈉洗脫液用截留分子量8000-14000的透析袋透析進(jìn)行脫鹽，透析截留液冷凍干燥后得到高唾液酸含量的酪蛋白糖巨肽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用離子交換樹脂分離高唾液酸含量酪蛋白糖巨肽的方法， 其特征在于，制取含有酪蛋白糖巨肽的液態(tài)原料的固體原料為脫鹽乳清粉。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用離子交換樹脂分離高唾液酸含量酪蛋白糖巨肽的方法， 其特征在于，所述陽離子交換樹脂和陰離子交換樹脂均為苯乙烯系離子交換樹脂。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用離子交換樹脂分離高唾液酸含量酪蛋白糖巨肽的方法， 其特征在于，含酪蛋白糖巨肽的液態(tài)原料的制備方法為用0. 02mol/L醋酸鈉緩沖液配制 100mg/ml的脫鹽乳清粉溶液，500 X g離心20min去除不溶物取上清液；上清液用冰醋酸調(diào)節(jié)PH值為5. 0-5. 4得到含有酪蛋白糖巨肽的液態(tài)原料；脫鹽乳清粉與陽離子交換樹脂或陰離子交換樹脂的質(zhì)量比為2 5。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用離子交換樹脂分離高唾液酸含量酪蛋白糖巨肽的方法， 其特征在于，所述陽離子交換樹脂的處理方法為將陽離子交換樹脂充分溶脹后，用酸溶液和堿溶液交替淋洗進(jìn)行轉(zhuǎn)型活化，之后用鹽酸處理為氫型樹脂，最后用去離子水洗至中性所述陰離子交換樹脂的處理方法為將陰離子交換樹脂充分溶脹后，用酸溶液和堿溶液交替淋洗進(jìn)行轉(zhuǎn)型活化，之后用氫氧化鈉溶液處理為氫氧型樹脂，最后用去離子水洗至中性備用。
6.一種利用離子交換樹脂分離高唾液酸含量酪蛋白糖巨肽的方法，其特征在于，包括下述步驟(1)將含酪蛋白糖巨肽的液態(tài)原料的PH值調(diào)到5.0-5. 4與陰離子交換樹脂混合，酪蛋白糖巨肽被吸附后用氯化鈉洗脫，收集氯化鈉洗脫液；(2)將步驟(1)得到的洗脫液用截留分子量8000-14000的透析袋透析進(jìn)行脫鹽，收集截留液并將截留液的PH值調(diào)為5. 0-5. 4再與陽離子交換樹脂混合，吸出未吸附液；(3)將步驟(2)得到的未吸附液冷凍干燥后得到高唾液酸含量的酪蛋白糖巨肽。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的利用離子交換樹脂分離高唾液酸含量酪蛋白糖巨肽的方法， 其特征在于，制取含有酪蛋白糖巨肽的液態(tài)原料的固體原料為脫鹽乳清粉。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的利用離子交換樹脂分離高唾液酸含量酪蛋白糖巨肽的方法， 其特征在于，所述陽離子交換樹脂和陰離子交換樹脂均為苯乙烯系離子交換樹脂。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的利用離子交換樹脂分離高唾液酸含量酪蛋白糖巨肽的方法， 其特征在于，含有酪蛋白糖巨肽的液態(tài)原料的制備方法為用0. 02mol/L醋酸鈉緩沖液配制100mg/ml的乳清粉溶液，500 X g離心20min去除不溶物取上清液。上清液用冰醋酸調(diào)節(jié) PH值為5. 0-5. 4得到含有酪蛋白糖巨肽的液態(tài)原料；乳清粉與陽離子交換樹脂或陰離子交換樹脂的質(zhì)量比為2 5。
10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的利用離子交換樹脂分離高唾液酸含量酪蛋白糖巨肽的方法，其特征在于，所述陽離子交換樹脂的處理方法為將陽離子交換樹脂充分溶脹后，用酸溶液和堿溶液交替淋洗進(jìn)行轉(zhuǎn)型活化，之后用稀鹽酸處理為氫型樹脂，最后用去離子水洗至中性備用；所述陰離子交換樹脂的處理方法為將陰離子交換樹脂充分溶脹后，用酸溶液和堿溶液交替淋洗進(jìn)行轉(zhuǎn)型活化，之后用氫氧化鈉溶液處理為氫氧型樹脂，最后用去離子水洗至中性備用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種利用離子交換樹脂分離高唾液酸含量酪蛋白糖巨肽的方法，旨在提供一種制備過程簡單，成本較低，能獲得高唾液酸含量酪蛋白糖巨肽的方法。將含酪蛋白糖巨肽的液態(tài)原料的pH值調(diào)到5.0-5.4與陽離子交換樹脂混合，吸出未吸附液；將未吸附液的pH值調(diào)到5.0-5.4與陰離子交換樹脂混合，酪蛋白糖巨肽被吸附后用氯化鈉洗脫；或?qū)⑽次揭旱膒H值調(diào)到3.5-4.0再與陽離子交換樹脂混合，酪蛋白糖巨肽被吸附后用氯化鈉洗脫；將氯化鈉洗脫液透析脫鹽，透析截留液冷凍干燥后得到高唾液酸含量的酪蛋白糖巨肽。本發(fā)明中交替運(yùn)用了互補(bǔ)技術(shù)，將分離過程合理銜接，減少了處理步驟，降低了樣品的損耗，能夠獲得高唾液酸含量的CGMP。
文檔編號C07K14/47GK102219846SQ20111009903
公開日2011年10月19日 申請日期2011年4月20日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月20日
發(fā)明者刁瑞麗, 閆亞麗, 陳慶森 申請人:天津商業(yè)大學(xué)