專利名稱：具有鎮(zhèn)痛活性的支鏈寡肽及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及支鏈寡肽，尤其涉及以酸性氨基和堿性氨基酸為連接臂的含色氨酸的 支鏈寡肽，本發(fā)明還涉及它們的制備方法，本發(fā)明進(jìn)一步涉及這些支鏈寡肽作為鎮(zhèn)痛劑的 用途，屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
疼痛不僅是許多疾病的并合癥，而且自身已經(jīng)被看作是一類疾病。從疾病層面上 講，由各種各樣的疼痛造成的生活質(zhì)量下降波及了最大量的人群。由于有效的鎮(zhèn)痛劑往往 與依賴性相聯(lián)系，所以發(fā)明新的無(wú)依賴性的鎮(zhèn)痛劑具有重要價(jià)值。發(fā)明人在多肽研究中偶 然發(fā)現(xiàn)，含色氨酸的寡肽通常具有鎮(zhèn)痛活性。按照這種線索，本發(fā)明披露一類以酸性氨基酸 和堿性氨基酸為連接臂的含色氨酸的支鏈寡肽鎮(zhèn)痛劑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的之一是提供一類具有鎮(zhèn)痛活性的含色氨酸的支鏈寡肽。本發(fā)明的目的之二是提供一種制備上述支鏈寡肽鎮(zhèn)痛劑的方法。本發(fā)明的上述目的是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的具有鎮(zhèn)痛活性的含色氨酸的支鏈寡肽，其結(jié)構(gòu)為通式I所示 其中，AA2-AA1-AA2共同為 O 時(shí) AA3 為 Asp 或 GIi^AA2-AA1-AA2 共同為 Asp 或 Glu 時(shí) AA3 為 Asp 或 GIujAA1 為 Asp 或 Glu 時(shí) AA2 為 Trp 及 AA3 為 Asp 或 Glu，AA2-AArAA2 共同為 O 時(shí) AA3 為 LysJA1 為 Lys 時(shí) AA2 為 Trp 及 AA3 為 LysJA1 為 Lys 時(shí) AA2 為 Trp 及 Trp-AA3-Trp 共同為T(mén)rp0一種制備上述支鏈寡肽的方法，包括以下步驟(1)將 Boc-Asp 或 Boc-Glu 與 Trp-OMe 偶聯(lián)得到 Boc-Asp (Trp-OMe) -Trp-OMe 或者 Boc-Glu(Trp-OMe)-Trp-OMe ； (2)將 Boc-Asp (Trp-OMe) -Trp-OMe 或者 Boc-Glu (Trp-OMe) -Trp-OMe 皂化得至Ij Boc-Asp (Trp) -Trp 或者 Boc-Glu (Trp) -Trp，將 Boc-Asp (Trp) -Trp 或者 Boc-Glu (Trp) -Trp 脫除 Boc 得到 Asp (Trp)-Trp(I)或者 Glu (Trp)-Trp (4)； (3)將 Boc-Asp(Trp-OMe)-Trp-OMe 或者 Boc-Glu(Trp-OMe)-Trp-OMe 脫除 Boc 得至丨J Asp (Trp-OMe)-Trp-OMe 或者 Glu(Trp-OMe)-Trp-OMe,將 Boc-Asp(Trp)-Trp 與Asp (Trp-OMe) -Trp-OMe 偶聯(lián)得到 Boc-Asp [Trp-Asp (Trp-OMe) -Trp-OMe] -Trp-Asp(Trp-OM e) -Trp-OMe，將 Boc-Glu (Trp) -Trp 與 Glu (Trp-OMe) -Trp-OMe 偶聯(lián)得到 Boc-Glu [Trp-Glu (Trp-OMe) -Trp-OMe] -Trp-Glu (Trp-OMe) -Trp-OMe,將 Boc-Asp [Trp-Asp (Trp-OMe) -Trp-OM e]-Trp-Asp(Trp-OMe)-Trp-OMe 或 Boc-Glu[Trp-Glu(Trp-OMe)-Trp-OMe]-Trp-Glu(Trp-0 Me) -Trp-OMe 皂化得至Ij Boc-Asp [Trp-Asp (Trp) -Trp] -Trp-Asp (Trp) -Trp 或 Boc—Glu [Trp-G Iu(Trp)-Trp]-Trp-Glu(Trp)-Trp,將 Boc-Asp[Trp-Asp(Trp)-Trp]-Trp-Asp(Trp)-Trp 或 Boc-Glu [Trp-Glu (Trp) -Trp] -Trp-Glu (Trp) -Trp 脫除 Boc 得到 Asp [Trp-Asp (Trp) -Trp] -T rp-Asp (Trp)-Trp (3)或 Glu[Trp-Glu(Trp)-Trp]-Trp-Glu(Trp)-Trp(6)；優(yōu)選的，步驟(2)在冰浴下用IN NaOH溶液將Boc-Asp (Trp-OMe) -Trp-OMe或者 Boc-Glu (Trp-OMe) -Trp-OMe 皂化；優(yōu)選的，步驟(3)在氯化氫/乙酸乙酯溶液中將Boc-Asp (Trp-OMe) -Trp-OMe 或者 Boc-Glu(Trp-OMe)-Trp-OMe 脫除 Boc 得至Ij Asp (Trp-OMe) -Trp-OMe 或者 Glu(Trp-OMe)-Trp-OMe ；另外一種制備上述支鏈寡肽的方法，包括以下步驟(1)將 Boc-Asp 或 Boc-Glu 分另Ij 與 Asp(Trp-OMe)-Trp-OMe 或者 Glu (Trp-OMe) -Trp-OMe 偶聯(lián)得至Ij Boc-Asp-[Asp (Trp-OMe) -Trp-OMe] -Asp (Trp-OMe) -Trp-OMe 或者 Boc-Glu- [Glu (Trp-OMe) -Trp-OMe] -Glu (Trp-OMe) -Trp-OMe ；(2)將 Boc-Asp- [Asp (Trp-OMe) -Trp-OMe] -Asp (Trp-OMe) -Trp-OMe 或 Boc-Glu- [G Iu (Trp-OMe) -Trp-OMe] -Glu (Trp-OMe) -Trp-OMe 皂化得到 Boc-Asp- [Asp (Trp) -Trp] -Asp ( Trp) -Trp 或 Boc-Glu- [Glu (Trp) -Trp] -Glu (Trp) -Trp ；(3)將 Boc-Asp- [Asp (Trp) -Trp] -Asp (Trp) -Trp 或 Boc-Glu- [Glu (Trp) -Trp] -Glu (Trp) -Trp 脫除 Boc 得到 Asp- [Asp (Trp) -Trp] -Asp (Trp) -Trp (2)或 Glu- [Glu (Trp) -Trp]-Glu(Trp)-Trp (5)；優(yōu)選的，步驟(2)在冰浴下用IN NaOH 溶液將 Boc-Asp-[Asp (Trp-OMe)-Trp-OMe] -Asp(Trp-OMe)-Trp-OMe 或 Boc-Glu-[Glu(Trp-OMe)-Trp-OMe]-Glu(Trp-OMe)-Trp-OMe 皂 化；優(yōu)選的，步驟(3)在氯化氫/乙酸乙酯溶液中將Boc-Asp-[Asp (Trp)-Trp]-Asp (T rp) -Trp 或 Boc-Glu- [Glu (Trp) -Trp] -Glu (Trp) -Trp 脫除 Boc 得到 Asp- [Asp (Trp) -Trp] -A sp(Trp)-Trp(2)或 Glu-[Glu(Trp)-Trp]-Glu(Trp)-Trp (5)；又一種制備上述支鏈寡肽的方法，包括以下步驟(1)將 Boc-Trp 與 Lys-OMe 偶聯(lián)得至Ij Boc-Trp-Lys (Boc-Trp) -OMe, 將 Boc-Trp-Lys (Boc-Trp)-OMe 皂化得 至Ij Boc-Trp-Lys (Boc-Trp), 將 Boc-Trp-Lys (Boc-Trp) -OMe 脫除 Boc 得至Ij Trp-Lys(Trp)-OMe 或者將 Boc-Trp-Lys (Boc-Trp)脫除 Boc 得到 Trp-Lys (Trp) (7)；(2)將 Boc-Trp 與 Trp-Lys (Trp) -OMe 偶聯(lián)得到 Boc-Trp-Trp-Lys (Boc-Trp-Trp) -OMe, Boc-Trp-Trp-Lys (Boc-Trp-Trp) -OMe 皂化得至Ij Boc-Trp-Trp-Lys (Boc-Trp-Trp)， 將 Boc-Trp-Trp-Lys (Boc-Trp-Trp)脫除 Boc 得至Ij Trp-Trp-Lys (Trp-Trp) (8)；(3)將 Boc-Trp-Lys (Boc-Trp)與 Trp-Lys (Trp) -OMe 偶聯(lián)得至Ij Boc-Trp-Lys (Boc -Trp)-Trp-Lys[Boc-Lys(Boc-Trp)-Trp-OMe],將 Boc-Trp-Lys(Boc-Trp)-Trp-Lys[Boc-Lys (Boc-Trp) -Trp-OMe]阜化得至丨J Boc-Trp-Lys (Boc-Trp) -Trp-Lys [Boc-Lys (Boc-Trp) -Tr ρ],將 Boc-Trp-Lys (Boc-Trp) -Trp-Lys [Boc-Lys (Boc-Trp) -Trp]脫除 Boc 得至Ij Trp-Lys (T rp)-Trp-Lys[Lys(Trp)-Trp](9)；其中，優(yōu)選的，步驟(1)在冰浴下用IN NaOH溶液將Boc-Trp-Lys (Boc-Trp)-OMe皂化得到 Boc-Trp-Lys (Boc-Trp)，在氯化氫 / 乙酸乙酯溶液中將 Boc-Trp-Lys (Boc-Trp) -OMe 脫除 Boc 得到 Trp-Lys (Trp) -OMe ；優(yōu)選的，步驟(2)在冰浴下用IN NaOH溶液將 Boc-Trp-Trp-Lys (Boc-Trp-Trp) -OMe 阜 化 得 至Ij Boc-Trp-Trp-Lys (Boc-Trp-Trp), 在氯化氫/乙酸乙酯溶液中將Boc-Trp-Trp-Lys (Boc-Trp-Trp)脫除Boc得到 Trp-Trp-Lys (Trp-Trp)；優(yōu)選的，步驟(3)在冰浴下用IN NaOH 溶液將 Boc-Trp-Lys (Boc-Trp) -Trp-Lys [B oc-Lys (Boc-Trp) -Trp-OMe]阜化得至丨J Boc-Trp-Lys (Boc-Trp) -Trp-Lys [Boc-Lys (Boc-Trp )-Trp]，在氯化氫 / 乙酸乙酯溶液中將 Boc-Trp-Lys (Boc-Trp) -Trp-Lys [Boc-Lys (Boc-Trp )-Trp]脫除 Boc 得到 Trp-Lys (Trp) -Trp-Lys [Lys (Trp) -Trp]。本發(fā)明的又一目的是提供一種具有鎮(zhèn)痛活性的藥用組合物，該藥用組合物由治療 上有效劑量的本發(fā)明支鏈寡肽化合物與藥學(xué)上可接受的賦型劑或者輔加劑組成；即將有 效量的本發(fā)明支鏈寡肽化合物與藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑配合后，按本領(lǐng)域常規(guī)的制 劑方法將其制備成任意一種適宜的藥物組合物。通常該組合物適合于口服給藥和注射給 藥，也適合其他的給藥方法。該組合物可以是片劑、膠囊劑、粉劑、顆粒劑、錠劑、栓劑，或口 服液等液體制劑形式。根據(jù)不同的給藥方法，本發(fā)明藥物組合物可以含有0. 1% -99%重 量，優(yōu)選10-60%重量的本發(fā)明支鏈寡肽化合物。在小鼠甩尾模型上評(píng)價(jià)本發(fā)明支鏈寡肽化合物的鎮(zhèn)痛活性，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā) 明支鏈寡肽化合物具有優(yōu)秀的鎮(zhèn)痛活性，臨床上可作為鎮(zhèn)痛劑應(yīng)用。


圖1本發(fā)明支鏈寡肽化合物的以Asp為連接臂的含色氨酸支鏈寡肽合成路線圖； 士)00、!1( 1 1和11冊(cè)溶液；^)甲醇、THF和NaOH水溶液iii)氯化氫/乙酸乙酯溶液。圖2本發(fā)明支鏈寡肽化合物的以Glu為連接臂的含色氨酸支鏈寡肽合成路線圖； i)DCC、HOBt、NMM和THF溶液；ii)甲醇、THF和NaOH水溶液iii)氯化氫/乙酸乙酯溶液。圖3本發(fā)明支鏈寡肽化合物的以Lys為連接臂的含色氨酸支鏈寡肽合成路線圖； 士)00、!1( 1 1和11冊(cè)溶液；^)甲醇、THF和NaOH水溶液iii)氯化氫/乙酸乙酯溶液。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步描述本發(fā)明，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和特點(diǎn)將會(huì)隨著描述而 更為清楚。但這些實(shí)施例僅是范例性的，并不對(duì)本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何限制。本領(lǐng)域技術(shù) 人員應(yīng)該理解的是，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可以對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案的細(xì)節(jié)和形式 進(jìn)行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。實(shí)施例 1 制備 Boc-Asp (Trp-OMe) -Trp-OMe往2. 7g TrpOMe與IOml無(wú)水THF的溶液中先加入Iml NMM,再加入1. Og Boc-Asp和1.2g HOBt，然后O°C下加入2. Og DCC0反應(yīng)混合物0°C攪拌2小時(shí)，室溫?cái)嚢?小時(shí)。同 時(shí)補(bǔ)加NMM保持pH 9。TLC (CHCl3/MeOH，10/1)顯示反應(yīng)物消失。反應(yīng)混合物過(guò)濾，濾液減 壓濃縮至干，殘留物用柱層析進(jìn)行純化，得2. 5g(92%)目標(biāo)化合物。MS:634[M+H] +。實(shí)施例2 制備 Boc-Asp (Trp) -Trp將2g BocAsp (Trp-OMe)-Trp-OMe 用 IOOml 甲醇溶解，冰浴下緩慢滴加 15ml NaOH 水溶液(IN)。反應(yīng)混合物0°C攪拌1. 5小時(shí)TLC(CHCl3/MeOH，10/1)顯示反應(yīng)物消失。反應(yīng) 混合物用飽和KHSO4調(diào)節(jié)pH 7，減壓濃縮除去甲醇，殘留液先用稀鹽酸調(diào)pH為2-3，再用乙 酸乙酯萃取5次。合并的乙酸乙酯層用飽和NaCl水溶液洗4次后，用無(wú)水硫酸鈉干燥。過(guò) 濾，濾液減壓濃縮得1.72g(90% )目標(biāo)化合物，為無(wú)色固體。MS:606[M+H]+。實(shí)施例3 制備 Asp (Trp) -Trp (1) 冰浴下將Ig Boc-Asp (Trp) -Trp與IOml氯化氫/乙酸乙酯溶液(4N)混合并攪拌 2h。TLC(CHCl3/MeOH, 10/1)顯示反應(yīng)物消失。反應(yīng)混合物減壓濃縮之后反復(fù)用無(wú)水乙醚 溶解并減壓濃縮，徹底除去氯化氫。得0.79g(95%)目標(biāo)化合物。Mp 200-202°C。[a]2°D =-21.3° (c = 1· 1，MeOH)。MS :506[M+H] +。實(shí)施例4 制備 Asp (Trp-OMe) -Trp-OMe按照實(shí)施例3 的操作，從0. 64g Boc-Asp (Trp-OMe)-Trp-OMe 得 0. 51g(95% )目標(biāo) 化合物。MS :534[M+H] +。實(shí)施例 5 制備 Boc-Asp [Asp (Trp-OMe) -Trp-OMe] -Asp (Trp-OMe) -Trp-OMe按照實(shí)施例1 的操作，從 0. Ig Boc-Asp 和 0. 56g Asp (TrpOMe) -Trp-OMe 制得 0. 49g(90% )目標(biāo)化合物。MS :1287[M+Na] + 0實(shí)施例 6 制備 Boc-Asp [Asp (Trp) -Trp] -Asp (Trp) -Trp按照實(shí)施例 2 的操作，從 0. 4g Boc-Asp [Asp (Trp-OMe) -Trp-OMe] -Asp (Trp-OMe)-Trp-OMe 制得 0. 34g(88% )目標(biāo)化合物。0.34g，收率 88%。MS :1230[M+Na] +。實(shí)施例7 制備 Asp [Asp (Trp) -Trp] -Asp (Trp) -Trp (2)按照實(shí)施例3 的操作，從 0. 2g Boc-Asp [Asp (Trp)-Trp]-Asp (Trp)-Trp 制 得 0.16g(90%)目標(biāo)化合物。Mp 209-210 "C。[ α ]2CID = -12. O (c = 1. 2，MeOH)。MS 1131[M+Na]+。實(shí)施例 8 制備 Boc-Asp [Trp-Asp (Trp-OMe) -Trp-OMe] -Trp-Asp (Trp-OMe) -Trp-OM
e按照實(shí)施例1 的操作，從 0.2g Boc-Asp (Trp)-Trp 和 0. 43g Asp (Trp-OMe) -Trp-OMe 制得 0. 4g(85% )目標(biāo)化合物。MS :1659[M+Na] +。實(shí)施例 9 制備 Boc-Asp [Trp-Asp (Trp) -Trp] -Trp-Asp (Trp) -Trp按照實(shí)施例 2 的操作，從 0. 3g Boc-Asp [Trp-Asp (Trp-OMe)-Trp-OMe]-Trp-Asp (Τ rp-OMe) -Trp-OMe 制得 0. 26g(90% )目標(biāo)化合物。MS :1602 [M+Na] +。實(shí)施例 10 制備 Asp [Trp-Asp (Trp) -Trp] -Trp-Asp (Trp) -Trp (3)按照實(shí)施例3 的操作，從 0. 15g Boc-Asp [Trp-Asp (Trp)-Trp]-Trp-Asp (Trp)-Tr ρ 制得 0. llg(80% )目標(biāo)化合物。Mp 276. 8-278. 1°C。[ α ]2°D =-10. 4(c = 1· 1，MeOH)。 MS :1480[M+1] +。實(shí)施例11 制備 Boc-Glu (Trp-OMe) -Trp-OMe
按照實(shí)施例1的操作，從2. 58g TrpOMe和Ig Boc-Glu制得2. 23g(85% )目標(biāo)化 合物。MS :648[M+H] +。實(shí)施例12 制備 Boc-Glu (Trp) -Trp按照實(shí)施例2 的操作，從 Ig Boc-Glu (Trp-OMe) -Trp-OMe 制得 0. 86g(90% )目標(biāo)化合物，為無(wú)色固體。MS :642[M+Na] +。實(shí)施例13 制備 Glu (Trp) -Trp (4)按照實(shí)施例3的操作，從0. 6g Boc-Glu (Trp)-Trp制得0. 47g(93% )目標(biāo)化合物。 Mp. 192-194°C。[ α ]2CID =-2. 6 (c = 1. 2，MeOH)。MS :520 [M+l] +。實(shí)施例14 制備 Glu (Trp-OMe) -Trp-OMe按照實(shí)施例3 的操作，從 0. 65g Boc-Glu (Trp-OMe)-Trp-OMe 得 0. 53g(96% )目標(biāo) 化合物。MS :547[M+H] +。實(shí)施例15 制備 Boc-Glu [Glu (Trp-OMe) -Trp-OMe] -Glu (Trp-OMe) -Trp-OMe按照實(shí)施例1 的操作，從 0. 05g Boc-Glu 和 0. 24g Glu(TrpOMe)-Trp-OMe 制得 0. 23g(88% )目標(biāo)化合物。MS :1329[M+Na] + 0實(shí)施例16 制備 Boc-Glu [Glu (Trp) -Trp] -Glu (Trp) -Trp按照實(shí)施例2 的操作，從 0. 2g Boc-Glu [Glu (Trp-OMe) -Trp-OMe] -Glu (Trp-OMe)-Trp-OMe 制得 0. 17g(89% )目標(biāo)化合物。MS :1273_a] +。實(shí)施例17 制備 Glu [Glu (Trp) -Trp] -Glu (Trp) -Trp (5)按照實(shí)施例2 的操作，從 0. 15g Boc-Glu [Glu (Trp)-Trp]-Glu (Trp)-Trp 制得 0. 12g(85 % )目標(biāo)化合物。Μρ· 212-214 °C。[ α ]2CID = -27. 4(c = 1· 1，MeOH)。MS 1150[M+H]+。實(shí)施例18 制備 Boc-Glu [Trp-Glu (Trp-OMe) -Trp-OMe] -Trp-Glu (Trp-OMe) -Trp-O Me按照實(shí)施例1 的操作，從 0.2g Boc-Glu(Trp)-Trp 和 0. 43g Glu (Trp-OMe) -Trp-OMe 制得 0. 44g(82% )目標(biāo)化合物。MS :1700[M+Na] +。實(shí)施例 19 制備 Boc-Glu [Trp-Glu (Trp) -Trp] -Trp-Glu (Trp) -Trp按照實(shí)施例2 的操作，從 0. 3g Boc-Glu [Trp-Glu (Trp-OMe) -Trp-OMe] -Trp-Glu (Τ rp-OMe) -Trp-OMe 制得 0. 23g(80% )目標(biāo)化合物。MS :1644[M+Na] +。實(shí)施例20 制備 Glu [Trp-Glu (Trp) -Trp] -Trp-Glu (Trp) -Trp (6)按照實(shí)施例3 的操作，從 0. 15g Boc-Glu [Trp-Glu (Trp)-Trp]-Trp-Glu (Trp)-Tr ρ 制得 0. 12g(86% )目標(biāo)化合物。Mp :214-216°C。[α ]2CID = -12. 5 (c = 1. 0，MeOH)。MS 1522[M+H]+。實(shí)施例 21 制備 Boc-Trp-Lys (Boc-Trp) -OMe按照實(shí)施例1的操作，從0. 5g LysOMe和3. 86g Boc-Trp制得1.4g(75%)目標(biāo)化 合物。MS :734[M+H] +。實(shí)施例22 制備 Boc-Trp-Lys (Boc-Trp)按照實(shí)施例2 的操作，從 Ig Boc-Trp-Lys (Boc-Trp) -OMe 制得 0. 88g(90% )目標(biāo) 化合物，為無(wú)色固體。MS :719[M+H] +。實(shí)施例23 制備 Trp-Lys (Trp) (7)
按照實(shí)施例3的操作，從Ig Boc-Trp-Lys (Boc-Trp)制得0. 63g(88% )目標(biāo)化合 物。Mpl89-191°C。[a]2CID =-15.3(c = 1.2，Me0H)。MS :519[M+H] +。
實(shí)施例 24 制備 Trp-Lys (Boc-Trp) -OMe按照實(shí)施例3 的操作，從 Ig Boc-Trp-Lys (Boc-Trp) -OMe 制得 0. 77g(95% )目標(biāo) 化合物。MS :533[M+H] +。實(shí)施例 25 制備 Boc-Trp-Trp-Lys (Boc-Trp-Trp) -OMe按照實(shí)施例1 的操作，從 0. 22g Boc-Trp 和 0. 2g Trp-Lys (Boc-Trp) -OMe 制得 0. 34g(94% )目標(biāo)化合物。MS :1128[M+Na] +。實(shí)施例 26 制備 Boc-Trp-Trp-Lys (Boc-Trp-Trp) 按照實(shí)施例2 的操作，從 0. 3g Boc-Trp-Trp-Lys(Boc-Trp-Trp)-OMe 制得 0. 27g(90% )目標(biāo)化合物。MS :1113[M+Na] +。實(shí)施例27 制備 Trp-Trp-Lys (Trp-Trp) (8)按照實(shí)施例3 的操作，從 0. 2g Boc-Trp-Trp-Lys(Boc-Trp-Trp)制得 0. 15g(93%) 目標(biāo)化合物。MS :1113[M+Na] +。制得 0.27g(90%)目標(biāo)化合物。Mpl79-181°C。[a]20D =-17. 3 (c = 1. 3，MeOH)。MS :891[M+H] +。實(shí)施例 28 制備 Boc-Trp-Lys (Boc-Trp) -Trp-Lys [Boc-Trp-Lys (Boc-Trp) -Trp] _0 Me按照實(shí)施例1 的操作，從 0. 15g Trp-Lys (Trp) -OMe 和 0. 41gBoc-Trp) Lys (Boc-Trp)制得 0. 43g(90%)目標(biāo)化合物。MS :1956 [M+Na] +。 實(shí)施例 29 制備 Boc-Trp-Lys (Boc-Trp) -Trp-Lys [Boc-Trp-Lys (Boc-Trp) -Trp]按照實(shí)施例 2 的操作，從 0. 35g Boc-Trp-Lys (Boc-Trp) -Trp-Lys [Boc-Trp-Lys (B oc-Trp)-Trp]-OMe 制得 0. 32g(91% )目標(biāo)化合物。MS 1941 [M+Na]+ D實(shí)施例 30 制備 Trp-Lys (Trp) -Trp-Lys [Trp-Lys (Trp) -Trp] (9)按照實(shí)施例 3 的操作，從 0. 30g Boc-Trp-Lys (Boc-Trp) -Trp-Lys [Boc-Trp-Lys (B oc-Trp) -Trp]制得 0. 22g(92% )目標(biāo)化合物。Mp 206-207°C。[ α ]2CID = -5. O (c = 1. 2， MeOH)。MS : 1519[M+H] +。實(shí)驗(yàn)例1本發(fā)明支鏈寡肽化合物的鎮(zhèn)痛作用評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)雄性昆明小鼠體重在(22士2g)，每日光照12小時(shí)，室內(nèi)溫度為20_24°C，濕度保持 在45-65%，充足的食物和水。實(shí)驗(yàn)前一天開(kāi)始禁食飼養(yǎng)，并將老鼠放入實(shí)驗(yàn)操作間適應(yīng)環(huán) 境，每只老鼠只參與一次實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)時(shí)將小鼠裝入特制的固定筒內(nèi)，尾部暴露于外，75%酒精進(jìn)行消毒，測(cè)痛閾時(shí) 以特制聚光燈產(chǎn)生的光束照射鼠尾下三分之一處，用秒表計(jì)時(shí)，從照射開(kāi)始到甩尾反應(yīng)的 潛伏期(tail flick latency, TFL)作為痛閾。調(diào)節(jié)聚光燈與鼠尾距離使刺激強(qiáng)度較為靈 敏TFL為2-6s。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)先測(cè)3次，每次間隔5min，取均值作為基礎(chǔ)痛閾。將本發(fā)明實(shí) 施例所制備的化合物(編號(hào)為1-9)分別懸浮于0. 5%羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)水溶液中， 灌胃，按每次灌胃劑量為0.2ml以及0. 13mmol/kg劑量調(diào)節(jié)懸浮濃度。每次試驗(yàn)設(shè)0.5% CMC-Na組作平行對(duì)照。為防止皮膚燙傷，光照截止時(shí)間10s，間隔30min復(fù)測(cè)TFL以觀察藥 物鎮(zhèn)痛時(shí)效關(guān)系。以痛閾提高率評(píng)定藥物鎮(zhèn)痛強(qiáng)度PTV = AAPT/BPT (PTV=痛閾提高率， BPT =基礎(chǔ)痛閾值，AAPT =給藥后痛閾值-基礎(chǔ)痛閾值)。得到的結(jié)果列入表1，結(jié)果表明本發(fā)明的化合物具有明確的鎮(zhèn)痛作用。表1本發(fā)明支鏈寡肽化合物(1-9)的鎮(zhèn)痛活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果 _____ a) η = 12，劑量=1. 3mmol/kg ；b)與對(duì)應(yīng)的 CMC-Na 組比較，ρ < 0. 01.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明支鏈寡肽化合物具有優(yōu)秀的鎮(zhèn)痛活性，可用于制備成 鎮(zhèn)痛劑。
權(quán)利要求
具有鎮(zhèn)痛活性的含色氨酸的支鏈寡肽，其結(jié)構(gòu)為通式I所示其中，AA2-AA1-AA2共同為0時(shí)，AA3為Asp或Glu；AA2-AA1-AA2共同為Asp或Glu時(shí)，AA3為Asp或Glu；AA1為Asp或Glu時(shí)，AA2為T(mén)rp，AA3為Asp或Glu；AA2-AA1-AA2共同為0時(shí)，AA3為L(zhǎng)ys；AA1為L(zhǎng)ys時(shí)，AA2為T(mén)rp，AA3為L(zhǎng)ys；AA1為L(zhǎng)ys時(shí)，AA2為T(mén)rp，Trp-AA3-Trp共同為T(mén)rp。F2009100835151C00011.tif
2.一種制備權(quán)利要求1所述的支鏈寡肽的方法，包括(1)將Boc-Asp 或 Boc-Glu 與 Trp-OMe 偶聯(lián)，得到 Boc-Asp (Trp-OMe) -Trp-OMe 或者 Boc-Glu(Trp-OMe)-Trp-OMe ；(2)將Boc-Asp (Trp-OMe) -Trp-OMe 或者 Boc-Glu (Trp-OMe) -Trp-OMe 皂化，得到 Boc-Asp (Trp) -Trp 或者 Boc-Glu (Trp) -Trp，將 Boc-Asp (Trp) -Trp、Boc-Glu (Trp) -Trp 脫除 Boc 分別得到 Asp (Trp) -Trp、Glu (Trp) -Trp ；(3)將Boc-Asp (Trp-OMe) -Trp-OMe 或者 Boc-Glu (Trp-OMe) -Trp-OMe 脫除 Boc 得 至Ij Asp (Trp-OMe) -Trp-OMe 或者 Glu(Trp-OMe)-Trp-OMe ；將 Boc-Asp (Trp) -Trp 與 Asp (Trp-OMe) -Trp-OMe 偶聯(lián)得至Ij Boc-Asp [Trp-Asp (Trp-OMe) -Trp-OMe] -Trp-Asp (Trp-OM e) -Trp-OMe，將 Boc-Glu (Trp) -Trp 與 Glu (Trp-OMe) -Trp-OMe 偶聯(lián)得到 Boc-Glu [Trp-Glu ( Trp-OMe)-Trp-OMe]-Trp-Glu(Trp-OMe)-Trp-Ome ；將 Boc-Asp[Trp-Asp(Trp-OMe)-Trp-OMe]-Trp-Asp(Trp-OMe)-Trp-OMe 或 Boc-Glu[Tr p-Glu (Trp-OMe) -Trp-OMe] -Trp-Glu (Trp-OMe) -Trp-OMe 皂化，得到 Boc-Asp [Trp-Asp (Trp )-Trp]-Trp-Asp (Trp)-Trp 或 Boc-Glu[Trp-Glu(Trp)-Trp]-Trp-Glu(Trp)-Trp ；將 Boc-As ρ[Trp-Asp (Trp)-Trp]-Trp-Asp(Trp)-Trp 或 Boc-Glu[Trp-Glu(Trp)-Trp]-Trp-Glu(Trp) -Trp 脫除 Boc 得到 Asp [Trp-Asp (Trp) -Trp] -Trp-Asp (Trp) -Trp 或 Glu [Trp-Glu (Trp)-Trp] -Trp-Glu (Trp) -Trp。
3.按照權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于步驟(2)在冰浴下用INNaOH溶液將 Boc-Asp (Trp-OMe) -Trp-OMe 或者 Boc-Glu (Trp-OMe) -Trp-OMe 皂化；步驟(3)在氯化氫 / 乙 酸乙酯溶液中將 Boc-Asp (Trp-OMe) -Trp-OMe 或者 Boc-Glu (Trp-OMe) -Trp-OMe 脫除 Boc 得 至Ij Asp (Trp-OMe) -Trp-OMe 或者 Glu (Trp-OMe) -Trp-OMe。
4.一種制備權(quán)利要求1所述的支鏈寡肽的方法，包括(1)將Boc-Asp 和 Boc-Glu 分別與 Asp (Trp-OMe) -Trp-OMe,Glu (Trp-OMe) -Trp-OMe 偶 聯(lián)得至Ij Boc-Asp- [Asp (Trp-OMe) -Trp-OMe] -Asp (Trp-OMe) -Trp-OMe 禾口 Boc—Glu— [Glu (Trp-OMe) -Trp-OMe]-Glu(Trp-OMe)-Trp-OMe ；(2)將Boc-Asp- [Asp (Trp-OMe) -Trp-OMe] -Asp (Trp-OMe) -Trp-OMe 禾口 Boc-Glu- [Glu (Trp-OMe) -Trp-OMe] -Glu (Trp-OMe) -Trp-OMe 分別皂化，得到 Boc-Asp- [Asp (Trp) -Trp] -Asp (Trp)-Trp 禾口 Boc-Glu-[Glu(Trp)-Trp]-Glu(Trp)-Trp ；(3)將 Boc-Asp-[Asp(Trp)-Trp]-Asp (Trp)-Trp 禾口 Boc-Glu-[Glu(Trp)-Trp]-Glu (Trp )-Trp 分別脫除 Boc 分別得到 Asp- [Asp (Trp) -Trp] -Asp (Trp) -Trp 和 Glu- [Glu (Trp) -Trp] -Glu (Trp)-Trp。
5.按照權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于步驟(2)在冰浴下用INNaOH溶液分別將 Boc-Asp-[Asp (Trp-OMe)-Trp-OMe]-Asp (Trp-OMe)-Trp-OMe 禾口 Boc-Glu-[Glu(Trp-OMe)-T rp-OMe]-Glu(Trp-OMe)-Trp-OMe皂化；步驟(3)中在氯化氫/乙酸乙酯溶液中分別將Boc -Asp- [Asp (Trp) -Trp] -Asp (Trp) -Trp 和 Boc-Glu- [Glu (Trp) -Trp] -Glu (Trp) -Trp 脫除 Boc 分別得到 Asp- [Asp (Trp) -Trp] -Asp (Trp) -Trp 和 Glu- [Glu (Trp) -Trp] -Glu (Trp) -Trp。
6.一種制備權(quán)利要求1所述的支鏈寡肽的方法，包括(1)將Boc-Trp 與 Lys-OMe 偶聯(lián)，得至Ij Boc-Trp-Lys (Boc-Trp) -OMe, 將 Boc-Trp-Lys (Boc-Trp)-OMe 皂化得至Ij Boc-Trp-Lys (Boc-Trp)， 將 Boc-Trp-Lys (Boc-Trp) -OMe 脫除 Boc 得至Ij Trp-Lys(Trp)-OMe,或者將 Boc-Trp-Lys (Boc-Trp)脫除 Boc 得至Ij Trp-Lys (Trp)；(2)將Boc-Trp 與 Trp-Lys (Trp) -OMe 偶聯(lián)得到 Boc-Trp-Trp-Lys (Boc-Trp-Trp) -OM e,將 Boc-Trp-Trp-Lys (Boc-Trp-Trp) -OMe 皂化得至Ij Boc-Trp-Trp-Lys (Boc-Trp-Trp)，將 Boc-Trp-Trp-Lys (Boc-Trp-Trp)脫除 Boc 得至丨J Trp-Trp-Lys (Trp-Trp)；(3)將Boc-Trp-Lys (Boc-Trp)與 Trp-Lys (Trp) -OMe 偶聯(lián)得至Ij Boc-Trp-Lys (Boc-Tr p) -Trp-Lys [Boc-Lys (Boc-Trp) -Trp-OMe],將 Boc-Trp-Lys- (Boc-Trp) -Trp-Lys [Boc-Lys ( Boc-Trp) -Trp-OMe]阜化得至丨J Boc-Trp-Lys (Boc-Trp) -Trp-Lys [Boc-Lys (Boc-Trp) -Trp], 將 Boc-Trp-Lys (Boc-Trp) -Trp-Lys [Boc-Lys (Boc-Trp) -Trp]脫除 Boc 得至Ij Trp-Lys (Trp) -Trp-Lys [Lys (Trp) -Trp]。
7.按照權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于步驟(1)在冰浴下用INNaOH溶液將 Boc-Trp-Lys (Boc-Trp) -OMe 皂化得到 Boc-Trp-Lys (Boc-Trp)，在氯化氫 / 乙酸乙酯溶液中 將 Boc-Trp-Lys (Boc-Trp) -OMe 脫除 Boc 得到 Trp-Lys (Trp) -OMe。
8.按照權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于步驟⑵在冰浴條件下用INNaOH溶 液將 Boc-Trp-Trp-Lys (Boc-Trp-Trp) -OMe 皂化得至Ij Boc-Trp-Trp-Lys (Boc-Trp-Trp) 及在氯化氫/乙酸乙酯溶液中將Boc-Trp-Trp-Lys (Boc-Trp-Trp)脫除Boc得到 Trp-Trp-Lys (Trp-Trp)；步驟(3)在冰浴下用 IN NaOH 溶液將 Boc-Trp-Lys (Boc-Trp)-Trp -Lys [Boc-Lys (Boc-Trp) -Trp-OMe]皂化得至Ij Boc-Trp-Lys (Boc-Trp) -Trp-Lys [Boc-Lys (B oc-Trp) -Trp]及在氯化氫 / 乙酸乙酯溶液中將 Boc-Trp-Lys (Boc-Trp) -Trp-Lys [Boc-Lys ( Boc-Trp) -Trp]脫除 Boc 得至Ij Trp-Lys (Trp) -Trp-Lys [Lys (Trp) -Trp]。
9.一種治療疼痛的藥物組合物，由有效量的權(quán)利要求1所述的支鏈寡肽和藥學(xué)上可接 受的載體或輔料組成。
10.權(quán)利要求1所述的支鏈寡肽在制備鎮(zhèn)痛藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了具有鎮(zhèn)痛活性的支鏈寡肽及其制備方法和用途。本發(fā)明以酸性氨基酸或堿性氨基酸為連接臂制備得到了含色氨酸的支鏈寡肽，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，本發(fā)明支鏈寡肽具有優(yōu)秀的鎮(zhèn)痛活性，是臨床潛在的鎮(zhèn)痛劑。
文檔編號(hào)C07K1/06GK101880315SQ20091008351
公開(kāi)日2010年11月10日 申請(qǐng)日期2009年5月8日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月8日
發(fā)明者彭師奇, 王俊, 趙明 申請(qǐng)人:北京大學(xué)