專利名稱：從赤霉素A₄與A₇的混合物中分離赤霉素A₄的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種赤霉素A4的分離方法，尤其是一種從赤霉素A4 與A7的混合物中分離赤霉素A4的方法。
(二)
背景技術(shù)：
赤霉素(gibberellins， CAs)是植物生長發(fā)育過程中一類重要的調(diào) 節(jié)激素，對種子萌發(fā)、莖葉生長、抽苔座果和塊莖形成等有明顯的調(diào) 節(jié)作用。被廣泛用于多種糧食作物，在蔬菜上應(yīng)用更為廣泛，對作物、 蔬菜的產(chǎn)量和品質(zhì)都有明顯的促進(jìn)作用。
赤霉素是一類化學(xué)結(jié)構(gòu)獨特、官能團(tuán)密集、化學(xué)性質(zhì)復(fù)雜的二萜 類化合物，至2000底在植物和真菌中已有127種不同結(jié)構(gòu)的赤霉素 得以鑒定。各種赤霉素之間的差別僅在于官能團(tuán)的多少以及排列位置 的差異，通常以A,，A2，A3......Aw來表示。
赤霉素A"GA3)是目前應(yīng)用最廣的植物生長激素之一。隨著研究
的深入，對該族的其它同系物，特別是赤霉素A4與A7越來越受到重 視，這是由于赤霉素A4與A7對植物具有特殊作用所致，具有提高某
些植物的座果率，打破休眠，促進(jìn)蘋果單性結(jié)實等功能。GA"7(赤霉 素A4與A7的混合物)有改變某種松樹花的性別的能力；0八4+7還可增 加蘋果的表皮角質(zhì)層以提高韌性，因而可減少果銹和破裂，目前0八4+7最廣的應(yīng)用是在蘋果上，它可使蘋果果實的高度對直徑的比值增加。 下面是赤霉素A4與八7的分子結(jié)構(gòu)
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赤霉素A4與A7的生理作用除了相同點外，尚有明顯的差異，例 如，使用赤霉素A7可強(qiáng)烈抑制花芽的形成，而赤霉素A4不僅不會抑
制反而起促進(jìn)作用。在防止蘋果褐變和開裂上，GA4的活性高于GA7。 由于在促進(jìn)莖伸長方面GA3>GA7> GA4，因此為防果銹等使用赤霉素 時，GA4最優(yōu)。它沒有諸如花芽分化受抑、種子數(shù)減少和細(xì)長枝增多
等副作用。因此，研究赤霉素A4與A7的分離具有重要的實際意義。
目前,赤霉素八4與A7的分離方法主要有以下幾種高效液相色譜 法、硅膠柱層析法、旋轉(zhuǎn)薄層層析法、萃取法等。以上分離方法存在 分離速度不好控制，分離純度低，儀器較貴重等缺陷，應(yīng)當(dāng)進(jìn)行改造。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是針對上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，提出一種 分子識別的方法從赤霉素A4與A7的混合物GA4+7中分離赤霉素A4， 其工藝路線合理，操作簡便，分離得到產(chǎn)物收率高，純度好。本發(fā)明所采用的技術(shù)方案如下
一種從赤霉素A4與A7的混合物中分離赤霉素A4的方法，所述
的分離方法是將原料赤霉素A4與A7的混合物GA4+7與四甲基二胺按
照l: 1 2的物質(zhì)的量比混合，加入有機(jī)溶劑，加熱使原料完全溶解，
在-10 3(TC放置足夠長時間直至有無色、透明的晶體析出，所得晶體 為赤霉素A4 (GA4)、四甲基二胺與水分子的配合物，而赤霉素A7 (GA7)則留在原溶液中。
本發(fā)明可以通過NMR, UV， MS等手段確認(rèn)所得到的復(fù)合物。 進(jìn)一步，所述的四甲基二胺類化合物為下列一種或兩種以上任意 比例的混合四甲基乙二胺、四甲基丙二胺、四甲基丁二胺、四甲基 戊二胺、四甲基己二胺。優(yōu)選四甲基乙二胺。
所述的有機(jī)溶劑為下列一種或兩種以上任意比例的混合甲醇、 乙醇、乙醚、丙酮、乙酸乙酯、二甲基亞砜。優(yōu)選下列之一乙醇、
乙酸乙酯，更優(yōu)選乙酸乙酯。
所述的有機(jī)溶劑質(zhì)量用量與赤霉素A4與A7的混合物質(zhì)量的比值
為1 3: 1。
所述原料溶解后推薦在-10 3(TC放置5~10天，優(yōu)選在室溫下放 置6 7天。
具體推薦所述分離方法按照如下步驟進(jìn)行將赤霉素A4與A7
的混合物GA4+7與四甲基胺類化合物按物質(zhì)的量比1: 1 2混合；加
入質(zhì)量為赤霉素A4與A7的混合物質(zhì)量1~3倍的有機(jī)溶劑，加熱使原 料完全溶解，在室溫下放置6 7天，有無色、透明的晶體析出，所得晶體為赤霉素A4、四甲基二胺與水分子的配合物，而赤霉素A7則留 在原溶液中，從而實現(xiàn)赤霉素A4與A7的分離。
本發(fā)明所采用的分離GA4+7的方法與以前的分離方法相比較有
以下優(yōu)點
a) 從GA4+7混合物中分離得到的赤霉素A4足夠純，分離后可直接 使用，而不需要再重結(jié)晶來提高純度；
b) 用GA4+7與四甲基胺類進(jìn)行分子識別的方法分離GA4+7混合物 的產(chǎn)率比其他分離方法所得產(chǎn)率要高。
c) 本發(fā)明工藝路線合理，操作簡便。
具體實施例方式
下面以具體實施例來進(jìn)一步說明本發(fā)明的技術(shù)方案，但本發(fā)明的 保護(hù)范圍不限于此。
實施例h
在500ml燒杯中加入60gGA4+7原料，原料中GA4與GA7的含 量分別為40%和60%，然后加入10g四甲基乙二胺，在燒杯中加入 120 g乙醇，加熱后使之溶解呈透明液體，室溫下放置七天，有無色、 透明的晶體析出，通過NMR， UV, MS等手段，得出該晶體結(jié)構(gòu)為 GA4、四甲基乙二胺與水分子的配合物，而GA7則留在原溶液中，從 而實現(xiàn)了 GA4與GA7的分離，分離的純度91.2%，產(chǎn)物收率92.7%。
實施例2:在500ml燒杯中加入90gGA4+7原料，原料中GA4與GA7的含 量分別為40%和60%，然后加入17g四甲基丙二胺，在燒杯中加入 180g丙酮，加熱后使之溶解呈透明液體，室溫下放置七天，有無色、 透明的晶體析出，通過NMR, UV, MS等手段，得出該晶體結(jié)構(gòu)為 GA4、四甲基丙二胺與水分子的配合物，而GA7則留在原溶液中，從 而實現(xiàn)了 GA4與GA7的分離，分離的純度94.7%，產(chǎn)物收率96.5%。
實施例3:
在500ml燒杯中加入120g GA"7原料，原料中GA4與GA7的 含量分別為40%和60%，然后加入26g四甲基丁二胺，在燒杯中加 入120g乙酸乙酯，加熱后使之溶解呈透明液體，室溫下放置七天， 有無色、透明的晶體析出，通過NMR，UV,MS等手段，得出該晶體 結(jié)構(gòu)為GA4、四甲基丁二胺與水分子的配合物，而GA7則留在原溶 液中，從而實現(xiàn)了GA4與GA7的分離，分離的純度93.5%，產(chǎn)物收 率94.3%。
實施例4:
在500ml燒杯中加入120g GA4+7原料，原料中GA4與GA7的 含量分別為40%和60%，然后加入28g四甲基戊二胺，在燒杯中加 入180g甲醇，加熱后使之溶解呈透明液體，室溫下放置七天，有無 色、透明的晶體析出，通過NMR,UV,MS等手段，得出該晶體結(jié)構(gòu) 為GA^四甲基戊二胺與水分子的配合物，而GA7則留在原溶液中，從而實現(xiàn)了 GA4與GA7的分離，分離的純度95.5%,產(chǎn)物收率 96.3%。
實施例5:
在500ml燒杯中加入120gGA4+7原料，原料中GA4與GA7的 含量分別為40%和60%，然后加入31g四甲基己二胺，在燒杯中加 入200g乙醚，加熱后使之溶解呈透明液體，室溫下放置七天，有無 色、透明的晶體析出，通過NMR,UV,MS等手段，得出該晶體結(jié)構(gòu) 為GA4，四甲基己二胺與水分子的配合物，而GA7則留在原溶液中， 從而實現(xiàn)了 GA4與GA7的分離，分離的純度92.3%，產(chǎn)物收率 93.6%。
實施例6:
在六個編號分別為1、 2、 3、 4、 5、 6的100ml燒杯中各加入30 g GA4+7 原料，原料中GA4與GA7的含量分別為40%和60%，然后各加入 5g四甲基丁二胺，分別在l號到6號燒杯中各加入30g甲醇、乙醇、 乙醚、丙酮、乙酸乙酯、二甲基亞砜，加熱使原料完全溶解，室溫下 放置，5天后5號燒杯中析出晶體，6天后2號燒杯中析出晶體，7 到IO天后其余四個燒杯析出晶體，通過NMR,UV，MS等手段，得出 一系列的晶體結(jié)構(gòu)為GA4、四甲基乙二胺與水分子的配合物，其中， 5號燒杯中產(chǎn)物收率96.5%， 2號燒杯中產(chǎn)物收率95.4%， 1、 3、 4、 6號燒杯中產(chǎn)物收率分別為:90.4%、 90.8%、 91.3%、 91.6%。
權(quán)利要求
1. 一種從赤霉素A4與A7的混合物中分離赤霉素A4的方法，其特征在于所述的分離方法為將原料赤霉素A4與A7的混合物與四甲基二胺按照1∶1～2的物質(zhì)的量比混合，加入有機(jī)溶劑，加熱使原料完全溶解，在-10～30℃放置足夠長時間后直至有無色、透明的晶體析出，所得晶體即為赤霉素A4、四甲基二胺與水分子的配合物。
2、 如權(quán)利要求1所述的分離赤霉素A4的方法，其特征在于所述的有 機(jī)溶劑為下列一種或兩種以上任意比例的混合甲醇、乙醇、乙醚、 丙酮、乙酸乙酯、二甲基亞砜。
3、 如權(quán)利要求1所述的分離赤霉素A4的方法，其特征在于所述的有 機(jī)溶劑為下列之一乙醇、乙酸乙酯。
4、 如權(quán)利要求1所述的分離赤霉素A4的方法，其特征在于所述的四甲基二胺類化合物為下列一種或兩種以上任意比例的混合四甲基乙二胺、四甲基丙二胺、四甲基丁二胺、四甲基戊二胺、四甲基己二胺。
5、 如權(quán)利要求4所述的分離赤霉素A4的方法，其特征在于所述的四 甲基二胺類化合物為四甲基乙二胺。
6、 如權(quán)利要求1所述的分離赤霉素A4的方法，其特征在于所述的有 機(jī)溶劑質(zhì)量用量與A4與A7的混合物質(zhì)量的比值為1 3: 1 。
7、 如權(quán)利要求1所述的分離赤霉素A4的方法，其特征在于所述原料 溶解后在-10 3(TC放置5 10天。
8、 如權(quán)利要求7所述的分離赤霉素A4的方法，其特征在于所述原料 溶解后在室溫放置6 7天。5332SP9、如權(quán)利要求1所述的分離赤霉素A4的方法，其特征在于所述分離 方法按照如下步驟進(jìn)行將赤霉素A4與A7的混合物與四甲基胺類化 合物按物質(zhì)的量比l: 1 2混合；加入質(zhì)量為赤霉素八4與A7的混合物質(zhì)量1 3倍的有機(jī)溶劑，加熱使原料完全溶解，在室溫下放置6 7 天，有無色、透明的晶體析出，所得晶體即為赤霉素A4、四甲基二 胺與水分子的配合物，所述的有機(jī)溶劑為下列之一乙醇、乙酸乙酯。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種從赤霉素A₄與A₇的混合物中分離赤霉素A₄的方法，所述的分離方法為將原料赤霉素A₄與A₇的混合物與四甲基二胺按照1∶1～2的物質(zhì)的量比混合，加入有機(jī)溶劑，加熱使原料完全溶解，在-10～30℃放置足夠長時間后直至有無色、透明的晶體析出，所得晶體為赤霉素A₄、四甲基二胺與水分子的配合物。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明工藝路線合理，操作簡便，分離得到產(chǎn)物收率高，純度好，具有社會推廣價值。
文檔編號C07D307/00GK101289437SQ200810061778
公開日2008年10月22日 申請日期2008年5月22日 優(yōu)先權(quán)日2008年5月22日
發(fā)明者金志敏, 馬林林 申請人:浙江工業(yè)大學(xué)