專利名稱：：含有新茅屋霉素衍生物的細(xì)胞毒素藥物和它們的治療用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及新的細(xì)胞毒素藥物和它們的治療用途。更具體地，本發(fā)明涉及含有茅屋霉素衍生物的新細(xì)胞毒素藥物和它們的治療用途。這些新細(xì)胞毒素藥物由于通過(guò)茅屋霉素衍生物化學(xué)連接到細(xì)胞結(jié)合藥物將茅屋霉素衍生物以耙向方式輸送到特定細(xì)胞群落而具有治療用途。
背景技術(shù)：
：對(duì)使用單克隆抗體藥物結(jié)合物嘗試胂瘤細(xì)胞的特定靶向發(fā)表了許多報(bào)道(Sela等，在Immuno-conjugates,189國(guó)216(CVogel,ed.1987);Ghose等，在TargetedDrugs1-22(E.Goldberg,ed.1983);Diener等，在AntibodyMediateddeliverysystems,1-23(J.Rodwell,ed.1988);Pietersz等，在AntibodyMediateddeliverysystems,25-53(J.Rodwell,ed.1988》Bumol等,在AntibodyMediateddeliverysystems,55-79(J.Rodwell,ed.1988);G.A.Pietersz&K.Krauer,2,J.DrugTargeting,183-215(1994);R.V,J.Chari,31Adv.DrugDeliveryRevs.,89-104(1998);W.A.Blattler&R.V.J.Chari,在AnticancerAgents,FrontiersinCancerChemotherapy,317-338,ACSSymposiumSeries796;和I.Ojima等eds,AmericanChemicalSociety2001)。本文所列的所有參考文獻(xiàn)和專利列為本文參考文獻(xiàn)。細(xì)胞毒素藥物，例如曱氨蝶呤、柔毛霉素、阿霉素、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春堿、美法侖、絲裂霉素C和苯丁酸氮芥已結(jié)合于各種鼠科單克隆抗體。在某些情況下，藥物分子通過(guò)中間載體分子，例如血清白蛋白(Garnett等，46,CancerRes.2407-2412(1986);Ohkawa等23,CancerImmunol.Immunother.81-86(1986);Endo等，47CancerRes.1076-1080(1980》，葡聚糖(Hurwitz等，2Appl.Biochem.25-35(1980);Manabi等，34Biochem.Pharmacol.289-291(1985);Dillman等,46CancerRes.,4886-4891(1986);Shoval等，85,Proc.Natl.Acad.Sci,8276-8280(1988)),或聚谷氨酸(Tsukada等，73,J.Natl.Cane.Inst,721-729(1984);Kato等27J.Med.Chem.,1602-1607(1984);Tsukada等，52,Br.J.Cancer,111-116(1985))連接到抗體分子。各類連接物技術(shù)已應(yīng)用于制備該免疫結(jié)合物，研究了可斷裂和不可斷裂的連接物，然而，在大多數(shù)情況下，僅可觀察到藥物的完全細(xì)胞毒素作用，即使藥物分子可在靶向位置以未改性形式由結(jié)合物釋放。已用于制備抗體藥物結(jié)合物的可斷裂連接物是基于順式烏頭酸的酸不穩(wěn)定連接物，它利用不同細(xì)胞內(nèi)腔室的酸性環(huán)境，例如在受體傳遞胞吞作用中遇到的內(nèi)涵體和溶酶體。Shen和Ryser介紹了用于制備柔毛霉素和大分子載體的結(jié)合物的此類方法(102Biochem.Biophys.Res.Commun.,1048-1054(1981))。Yang和Reisfeld將同樣的技術(shù)用于結(jié)合柔毛霉素與抗黑素瘤抗體(80J.Natl.Cane.Inst.1154-1159(1988》。Dillman等還以類似的方式將酸不穩(wěn)定連接物用于制備柔毛霉素與抗T細(xì)胞抗體的結(jié)合物(48CancerRes.6097-6102(1988》。另外一種由Trouet等探索的方法包括將柔毛霉素經(jīng)肽手臂連接于抗體(79Proc.Natl.Acad.Sci.626-629(1982))。這是基于游離藥物可通過(guò)溶酶體肽酶的作用由例如結(jié)合物釋放為前提。然而，體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)顯示抗體藥物結(jié)合物很少獲得與游離未連接的藥物的相同細(xì)胞毒素效力。這說(shuō)明藥物分子由抗體釋放的機(jī)理可能是非常無(wú)效的，在免疫毒素區(qū)域，在單克隆抗體和催化流行性的蛋白質(zhì)毒素之間經(jīng)二硫化物橋形成的結(jié)合物顯示比包含其它連接物的結(jié)合物是更力卩細(xì)胞毒性的。參見(jiàn)Lambert等，260J.Biol.Chem.12035-12041(1985);Lambert等，在Immunotoxins175國(guó)209(A.Frankel,ed.1988);Ghetie等，48,CancerRes.2610-2617(1988)。這歸結(jié)于谷胱甘肽的高細(xì)胞內(nèi)濃度，這有利于抗體分子和毒素之間的二硫化物鍵的有效斷裂。盡管如此，僅存在很少的將二硫化物橋用于制備藥物和大分子之間結(jié)合物的報(bào)導(dǎo)實(shí)例。Shen等(260,J.Biol.Chem.10905-10908(1985))描述了將甲氨蝶呤轉(zhuǎn)化為巰基乙基酰胺衍生物，隨后經(jīng)二硫化物鍵與聚-D-賴氨酸結(jié)合。另一報(bào)導(dǎo)描述了制備含有毒素藥物calicheamycin與抗體的三硫化物結(jié)合物(Hinman等，53CancerRes.3336-3342(1993))。沒(méi)有連接抗體藥物結(jié)合物的二硫化物的一個(gè)原因是帶有容易地經(jīng)二硫化物橋用于連接藥物與抗體的含硫基團(tuán)的細(xì)胞毒素藥物的不可獲得性，此外，現(xiàn)有藥物的化學(xué)改性而不減少其細(xì)胞毒素效力是困難的。現(xiàn)有抗體藥物結(jié)合物的另一主要缺點(diǎn)是無(wú)能力向靶位輸送足夠濃度的藥物，這是因?yàn)橄拗茢?shù)量的靶向抗原和cancerostatic藥物，如曱氨蝶呤、柔毛霉素和長(zhǎng)春新堿的相對(duì)緩和的細(xì)胞毒性。為達(dá)到明顯的細(xì)胞毒性，需要大量藥物分子的連接，無(wú)論是直接連接于抗體，還是通過(guò)聚合物載體分子連接。然而，如此沉重地改性的抗體通常顯示對(duì)目標(biāo)抗原削弱的結(jié)合能力，在體內(nèi)快速?gòu)难褐星宄?。盡管存在上述的困難，但已報(bào)道了稱為maytansinoids的有用的含有細(xì)胞結(jié)合部分和細(xì)胞毒素藥物部分的細(xì)胞毒素藥物(USP5,208,020,USP5,416,064,和R.V.J.Chari,31AdvancedDrugDeliveryReviews89-104(1998))。同樣，也報(bào)導(dǎo)了含有細(xì)胞結(jié)合部分和有效抗腫瘤抗體CC-1065的類似物和衍生物的有用細(xì)胞毒素藥物(USP5,475,092，USP5,585,499和USP6,756,397)。茅屋霉素衍生物是吡咯并[1,4]苯并二氮雜萆(PBD),通過(guò)共價(jià)結(jié)合于DNA的小溝中鳥(niǎo)噪呤的N2發(fā)揮其生物學(xué)性質(zhì)的已知種類的化合物。PBD包括許多小溝結(jié)合物，例如安曲霉素、neothramycin和DC-81，然而，由于其對(duì)正常細(xì)胞的非特異毒性，茅屋霉素抗癌活性是有限的。因此人們需要增加茅屋霉素化合物的治療活性，減小非特異毒性作用。本發(fā)明人顯示了通過(guò)將茅屋霉素化合物連接于細(xì)胞結(jié)合藥物靶向輸送該化合物而滿足該需要。此外，人們還需要開(kāi)發(fā)在水溶液中溶解和穩(wěn)定的茅屋霉素衍生物。另外，茅屋霉素用于細(xì)胞結(jié)合藥物的結(jié)合物不足夠有效。近年來(lái)，公開(kāi)了在潛伏期才莫型中的少量新PBD衍生物和其抗癌活性(WO00/12508和W02005/085260)。然而，最初的人體臨床試驗(yàn)顯示，基于可向人體給藥的非常低的劑量，這類化合物是劇毒的(I.Puzanov,Proc.AACR誦NCl-EORTCInternationalConference,Philadelphia,USA2005,Abstract#B117)。因此，需要提供更有效和/或可結(jié)合于細(xì)胞結(jié)合藥物的可供選擇的衍生物。因此，非常需要用茅屋霉素衍生物治療疾病的方法，其中其副作用被降低，而不影響其細(xì)胞毒性。發(fā)明概述如第一實(shí)施方案中所述，本發(fā)明的目的是提供茅屋霉素衍生物，它們是十分毒性的，但仍可有效地用于治療許多疾病。本發(fā)明的另一目的是提供新茅屋霉素，任選可連接于或已連接于細(xì)月包結(jié)合藥物。在第二實(shí)施方案中，本發(fā)明提供治療組合物，其含有(A)有效量的一種或多種任選可連接于或已連接于細(xì)胞結(jié)合藥物的茅屋霉素衍生物，和(B)可藥用的載體、稀釋劑或賦形劑。在第三實(shí)施方案中，本發(fā)明提供殺死選擇的細(xì)胞群落的方法，其包括使目標(biāo)細(xì)胞或包含目標(biāo)細(xì)胞的組織與細(xì)胞毒性量的包含一種或多種任選可連接于或已連接于細(xì)胞結(jié)合藥物的茅屋霉素衍生物的細(xì)胞毒素藥物接觸。發(fā)明詳述本發(fā)明基于新茅屋霉素衍生物的合成，其保持高細(xì)胞毒性，可有效連接于細(xì)胞結(jié)合藥物。現(xiàn)有技術(shù)已顯示用可斷裂的連接，例如二硫化物鍵連接高度細(xì)胞毒性藥物與抗體，確保完全活性藥物在細(xì)胞內(nèi)的釋放，該結(jié)合物以抗原特異方式是細(xì)胞毒性的(US6,340,701;US6,372,738;US6,436,931)。然而，現(xiàn)有4支術(shù)顯示改性現(xiàn)有藥物而不減小其細(xì)月包毒性作用是極其困難的，本發(fā)明通過(guò)用化學(xué)基團(tuán)改性公開(kāi)的茅屋霉素衍生物解決了此問(wèn)題。結(jié)果，公開(kāi)的新茅屋霉素衍生物保護(hù)，在某些情況下，甚至能夠提高茅屋霉素衍生物的細(xì)胞毒性效力。細(xì)胞結(jié)合藥物-茅屋霉素衍生物配合物使得茅屋霉素衍生物的細(xì)胞毒性作用完全以耙向方式僅作用于不需要的細(xì)胞，因而避免由于損害非目標(biāo)健康細(xì)胞引起的副作用。因此，本發(fā)明提供用于消除被殺死或細(xì)胞溶解的帶病或不正常細(xì)胞，例如腫瘤細(xì)胞(尤其是固體肺瘤細(xì)胞)的藥物。本發(fā)明的細(xì)胞毒素藥物包含一種或多種經(jīng)連接基團(tuán)任選可連接于或已連接于細(xì)胞結(jié)合藥物的茅屋霉素衍生物。連接基團(tuán)是部分化學(xué)基團(tuán)，其通過(guò)常規(guī)方法共價(jià)結(jié)合于茅屋霉素衍生物。在優(yōu)選實(shí)施方案中，化學(xué)基團(tuán)可經(jīng)二硫化物鍵共價(jià)結(jié)合于茅屋霉素衍生物。用于本發(fā)明的茅屋霉素衍生物具有如下所示的式(I):<formula>formulaseeoriginaldocumentpage20</formula>(I)其中—表示任選的單鍵；二表示單鍵或雙鍵；其前提是，當(dāng)二表示單鍵時(shí)，U和U，，相同或不同，分別表示H，W和W，，相同或不同，分別選自基團(tuán)OH、醚，例如-OR、酯(例如乙酸酯)，例如-OCOR、碳酸酯，例如-OCOOR、氨基甲酸酯，例如-OCONRR，、環(huán)氨基甲酸酯，N10和Cll是環(huán)的部分、脲，例如-NRCONRR，、硫代氨基甲酸酯，例如-OCSNHR、環(huán)硫代氨基甲酸酯，N10和Cll是環(huán)的部分、-SH、硫化物，例如-SR、亞砜，例如-SOR、砜，例如-SOOR、磺酸酯，例如-SCV、磺酰胺，例如-NRSOOR、胺，例如-NRR，、任選環(huán)化胺，N10和Cll是環(huán)的部分、輕胺衍生物，例如-NROR'、酰胺，例如-NRCOR、疊氮基，例如-N3、氰基、卣素、三烷基或三芳基錟、氨基酸衍生的基團(tuán)；優(yōu)選W和W，是相同或不同的是OH、OMe、OEt、NHCONH2、SMe;和當(dāng)二表示雙鍵時(shí)，U和U，不存在，W和W，表示H;Rl、R2、Rl'、R2，是相同或不同的，分別選自卣化物或任選被一個(gè)或多個(gè)Hal、CN、NRR'、CF3、OR、芳基,Het,S(O)qR取代的烷基，或Rl和R2和Rl，和R2，一起形成分別包含基團(tuán)二B和二B'的雙鍵。優(yōu)選Rl和R2和Rl，和R2，一起形成分別包含基團(tuán)=B和二B'的雙鍵。B和B，是相同或不同的，分別選自任選一皮一個(gè)或多個(gè)Hal、CN、NRR，、CF3、OR、芳基、Het、S(O)qR取代的烯基或B和B，表示氧原子。優(yōu)選B:B，。更優(yōu)選B=B，==CH2或二CH-CH3。X、X，是相同或不同的，分別選自一個(gè)或多個(gè)-O-、-NR-、-(C=0)-、畫S(O)q-。優(yōu)選x二x'。更優(yōu)選x=x'=o。A、A，是相同或不同的，分別選自任選含有一個(gè)O、N或S原子的烷基或烯基，其任選^皮一個(gè)或多個(gè)Hal、CN、NRR，、CF3、OR、S(O)qR、芳基、Het、烷基、烯基取代。優(yōu)選A=A'。更優(yōu)選八=六，=直鏈未取代烷基。Y、Y，是相同或不同的，分別選自H、OR;優(yōu)選Y=Y，。更優(yōu)選丫=丫'=0烷基，更優(yōu)選曱氧基。T是-NR-、-O-、-S(O)q-、或4-10元芳基、環(huán)烷基、雜環(huán)或雜芳基，每個(gè)4壬選^皮一個(gè)或多個(gè)Hal、CN、NRR，、CF3、R、OR、S(O)qR、和/或連接物取代、或支鏈烷基，任選,皮一個(gè)或多個(gè)Hal、CN、NRR，、CF3、OR、S(0)qR和/或連接物取代、或^皮一個(gè)或多個(gè)Hal、CN、NRR，、CF3、OR、S(0)qR和/或連接物取代的直鏈烷基。優(yōu)選T是4-10元芳基或雜芳基，更優(yōu)選苯基或吡啶基，任選被一個(gè)或多個(gè)連接物取代。所述連接物包括連接基團(tuán)，合適的連接基團(tuán)是現(xiàn)有技術(shù)中已知的，包括硫醇、硫化物、二硫化物基團(tuán)、硫醚基團(tuán)、酸不穩(wěn)定基團(tuán)、光照不穩(wěn)定基團(tuán)、肽酶不穩(wěn)定基團(tuán)和酯酶不穩(wěn)定基團(tuán)。優(yōu)選二硫化物基團(tuán)和硫醚基團(tuán)。當(dāng)連接基團(tuán)是含硫醇-、硫化物(或所謂硫醚-S-)或二硫化物(-S-S-)基團(tuán)時(shí)，帶有石危醇、硫化物或二硫化物基團(tuán)的側(cè)鏈可以是直鏈或支鏈，芳香或雜環(huán)基。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可容易地確定合適的側(cè)鏈。優(yōu)選所述連接物是如下通式-G-D-(Z)P畫S-Z，其中G是單或雙鍵、-O-、-S-或-NR-;D是單4建或-E隱、-E國(guó)NR-、-E-NR-F-、-E-O國(guó)、-E-O-F國(guó)、-E-NR陽(yáng)CO-、隱E-NR-CO-F-、畫E畫CO-、國(guó)CO-E-、-E畫CO-F、-E-S誦、國(guó)E隱S-F畫、-E畫NR-C陽(yáng)S-、-E-NR陽(yáng)CS-F-;其中E和F是相同或不同的，分別選自直鏈或支鏈-(OCH2CH2、烷基(OCH2CH2)j-、-烷基-(0(^120:112)1-烷基-、-(OCH2CH2)i畫、-(OCH2CH2)JT、烷基(OCH2CH2)j、-(OCH2CH2)i雜環(huán)基(OCH2CH2)j、-(OCH^H^芳基(OCH2CH2)j-、-(0012012乂雜芳基(0012012)廣、-烷基-(0(^12012)1烷基(OCH2CH2)j-、-:^^-(00^0^),、-烷基-(0012(:112)1環(huán)烷基(0(^2012)"-烷基-(OCH2CH2)i雜環(huán)基(OCH2CH2)j、-烷基-(OCHsCH^芳基(OCH2CH2)j、-烷基-(OCH2CH2》雜芳基(OCH2CH2)j-、-環(huán)烷基國(guó)烷基-、腸烷基-環(huán)烷基-、-雜環(huán)基-烷基-、-烷基-雜環(huán)基-、-烷基-芳基-、-芳基-烷基-、-烷基-雜芳基-、-雜芳基-烷基-;其中i和j，相同或不同，是整數(shù)，分別選自O(shè)、1-2000;Z是直鏈或支鏈-烷基-;p是O或1;Z，表示H、硫醇保護(hù)基團(tuán)，例如COR、R2。或SR20,其中R2。表示H、曱基、烷基、任選取代的環(huán)烷基、芳基、雜芳基或雜環(huán)，其前提是當(dāng)Z，是H時(shí)，所述化合物與通過(guò)分子內(nèi)環(huán)化由PBD之一的亞胺鍵-NEH上加成硫醇基團(tuán)-SH形成的相應(yīng)化合物平衡。n,n，，相同或不同，是0或1。q是0、1或2。R、R，是相同或不同的，分別選自H、烷基、芳基，每個(gè)任選被Hal、CN、NRR，、CF3、R、OR、S(O)qR、芳基、Het取代；或其可藥用的鹽、水合物或水合物鹽，或這些化合物的多形態(tài)晶體結(jié)構(gòu)或其旋光異構(gòu)體、外消旋體、非對(duì)映體或?qū)τ丑w。本發(fā)明涉及如下優(yōu)選實(shí)施方案或其任一的4壬何組合-G是單鍵或-O-或-NR-;-G是-O-;隱D是單鍵或隱E畫、-E-NR曙CO-、-ECO-、-CO國(guó)E國(guó)；畫D是-E-、-E-NR-CO-;-D是-E-NR-CO-;-E是直鏈或支鏈-烷基-、-(OCHbCH^-或烷基-雜環(huán)基；-E是直鏈或支鏈-烷基-;曙Z是-(CH2)2-C(CH3)2-;-p是O或1;Z，是H或SR2。，其中R2o表示烷基、芳基、雜環(huán)基或雜芳基；Z，是H或SR2Q,其中R2o表示烷基；含石克醇-、硫化物-或二碌u化物-連接物的具體實(shí)例包括-(CR13R14)t(CR15R16)u(OCH2CH2)ySZ，、-(CR13R14)t(CR17=CR18)(CR15R16)y(OCH2CH2)ySZ，、-(CR13R14)t(NR19CO)(CR15R16)u(OCH2CH2)ySZ，、-(CR13R14)t(OCO)(CRi5Ri6)u(OCH2CH2)ySZ，、-(CR13R14)t(CO)(CR15R16)u(OCH2CH2)ySZ，、-(CR13R14)t(CONR19)(CR15R16)u(OCH2CH2)ySZ，、-(01131114>-苯基隱(:0(01151116)^2，、-(01131114)1-呋喃基-(^0(01151116)1132，、國(guó)(CR^Ra4)t-嚅哇基-CO(CR45Ri6)uSZ，、誦(CR^R44)t國(guó)噻哇基國(guó)CO(CR45R^)uSZ，、畫(CR43RM)t-噻吩基國(guó)CO(CR45R46)uSZ，、國(guó)(CRi3RM)t-咪哇基隱CO(CRuRw)uSZ，、畫(CR43RM)t國(guó)嗎啉代國(guó)CO(CR^Ri6)uSZ，、-(01131114)1國(guó)哌嗪基-€:0(01151116)^2，、-(CR13R14)t-N-曱基哌。秦基-CO(CR45Ri6)uSZ，、畫(CR43R44)t國(guó)苯基-QSZ，、國(guó)(CR43Rw)r吹喃基-QSZ，、-(01131114)^惡峻基-(^2，、-(CR43RM)t-噻唑基-QSZ，、-(01131114)1-噻吩基-(^2，、-(0113尺14)1-咪唑基國(guó)QSZ，、國(guó)(CR43R44)t國(guó)嗎啉代誦QSZ，、國(guó)(CR43Ra4)t畫哌嗪基畫QSZ，、-(CR13R14)t-N-甲基哌嗪基-QSZ',或-0(CR13R14)t(CR15R16)u(〇CH2CH2)ySZ,、-0(CR13R14)t(NR19CO)(CR15R16)u(0CH2CH2)ySZ,、-0(CR13R14)t(CR17=CR18)(CR15R16)t(OCH2CH2)ySZ,、-O-苯基-QSZ，、-O-呋喃基-QSZ，、-OJ惡唑基-QSZ'、-O-噻唑基-QSZ，、-O國(guó)噻吩基-QSZ，、-O-咪唑基-QSZ，、-O-嗎啉代-QSZ，、-O-哌嗪基-QSZ，、-O-N-曱基哌嗪基-QSZ'、-OCO(CR13R14)t(NR19CO)(CR15R16)u(OCH2CH2)ySZ，、-OCO(CR13R14)t(CR17=CR18)(CR15R16)u(OCH2CH2)ySZ,、-OCONR12(CR13R14)t(CR15R16)u(OCH2CH2)ySZ，、-OCO-苯基-QSZ，、-OCO-呋喃基-QSZ，、-OCO-哺唑基-QSZ，、-OCO-p塞唑基-QSZ，、-OCO-噻吩基-QSZ，、-OCO-咪唑基-QSZ'、-OCO-嗎啉代-QSZ'、-OCO-哌漆基-QSZ'、-OCO-N-曱基哌溱基-QSZ，，或-CO(CR13R14)t(CR15R16)u(OCH2CH2)ySZ,、-CO(CR13R14)t(CR17=CR18)(CR15R16)u(OCH2CH2)ySZ，、-CONR12(CR13R14)t(CR15R16)u(OCH2CH2)ySZ，、-CO-苯基-QSZ，、-CO-呋喃基-QSZ，、-CO-哺.唑基-QSZ'、-CO-噻唑基國(guó)QSZ，、-CO-p塞吩基-QSZ，、-CO-咪唑基-QSZ'、-CO-嗎啉代-QSZ'、-CO-哌溱基-QSZ，、-CO-哌啶子基-QSZ'、-CO-N-甲基哌嗪基-QSZ'、-NR19(CR13R14)t(CR15R16)u(OCH2CH2)ySZ，、-NR19CO(CR13R14)t(CR15R16)u(OCH2CH2)ySZ,、-NR19(CR13R14)t(CR17=CR18)(CR15R16)t(OCH2CH2)ySZ，、-NR19CO(CR13R14)t(CR17=CR18)(CRi5Ri6)t(OCH2CH2)ySZ，、-NR19CONR12(CR13R14)t(CR15R16)u(OCH2CH2)ySZ，、-NR19CONR12(CR13R14)t(CR17=CR18)(CR15R16)t(OCH2CH2)ySZ，、畫NRwCO-苯基-QSZ，、-NRwCO-呋喃基-QSZ'、-NRwCO-嗝唑基-QSZ，、-NR49CO-p塞唑基-QSZ，、-NRwCO-噻吩基-QSZ，、^1119(^0-咪唑基-(^2，、誦NRwCO-嗎啉代-QSZ，、-忖1119。0-哌嗪基-(^2，、-NRwCO-旅咬子基國(guó)QSZ，、-NRwCO-N-甲基哌溱基-QSZ'、-NRw-苯基-QSZ，、-服19-呋喃基-(^2，、^1119-11惡唑基-(^2，、-服19-噻唑基國(guó)QSZ，、-服19-噻吩基-(^2'、^1119-咪唑基-(^2，、-NRw-嗎啉代-QSZ，、-NR!9-哌。秦基-QSZ，、-NRw-哌啶子基-QSZ，、-NRw-N-曱基哌嗪基-QSZ'、-服19(^0"^1112-苯基-(^2，、-NR19C-NR12-1!惡唑基-QSZ，、-NR19CO-NR12-p塞唑基-QSZ，、-NRwCO-NRu-噻吩基-QSZ'、~^1119(^0^1112-哌啶子基-QSZ，、-S(0)q(CR13R14)t(CR15R16)u(OCH2CH2)ySZ，、-S(0)q(CR13R14)t(CR17=CR18)(CR15R16)t(OCH2CH2)ySZ，、-SCONR12(CR13R14)t(CR15R16)u(OCH2CH2)ySZ，、-SCO-嗎啉代-QSZ，、-SCO-哌溱基-QSZ，、-SCO-哌啶子基-QSZ，和-SCO-N-甲基哌溱基-QSZ，，其中Z，是H、硫醇保護(hù)基團(tuán)，例如COR、R2o，或SR20，，其中R加，表示H、烷基、芳基、雜環(huán)或雜芳基；其中Q是直接連接或具有1-10個(gè)碳原子的線性烷基或支鏈烷基或帶有2-20重復(fù)乙烯氧單元的聚乙二醇間隔基；Ri9和R^是相同或不同的，是具有1-10個(gè)碳原子的直鏈烷基、支鏈烷基或環(huán)烷基，或簡(jiǎn)單的或取代的芳基或雜環(huán)，此外Ru可以是H;R13、R14、尺15和1116是相同或不同的，是H或具有l(wèi)-4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基；Rn和Ris是H或烷基；u是l-10的整數(shù)，還可以是O;t是l-10的整數(shù)，還可以是O;y是l-20的整數(shù)，還可以是O。當(dāng)式(I)化合物是離子形式(例如磺酸鹽)時(shí)，可以存在抗衡離子(例如Na+或K+)。根據(jù)優(yōu)選方面，本發(fā)明的化合物是式(I)化合物，其中T是任選被一個(gè)或多個(gè)Hal、CN、NRR，、CF3、R、0R、S(O)qR和/或連接物取代的芳基，A、A，、X、X，、U、U，、W、W，、m、m，、n、n，、國(guó)—、二是如上定義的。根據(jù)另一優(yōu)選實(shí)施方案，本發(fā)明的化合物選自如下8,8，-[l,3-苯二基二(亞甲氧基)]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-曱氧基-l,2,3,lla畫四氫-5&吡咯并[2,1<][1,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，-[5-曱氧基-l,3-苯二基二(亞曱氧基)]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基--曱氧基-1,2,3,1la-四氫-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，-[l,5-戊二基二(氧基)]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-甲氧基-l,2,3,lla-四氫-511-吡咯并[2,1-(;][1,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，-[l,4-丁二基二(氧基)]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-甲氧基-l,2,3,lla-四氫-5H-吡咯并[2,1《][1,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，-[3-曱基-1,5-戊二基二(氧基)]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-甲氧基-1,2,3,1la-四氫-5H國(guó)p比咯并[2,l國(guó)c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，-[2,6-吡啶二基(氧基)]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-甲氧基-l,2,3,lla-四氫-511-吡咯并[2,1-(:][1,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，_[4-(3-叔丁氧基羰基氨基丙氧基)-2,6-吡啶二基二-(亞甲氧基)]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-曱氧基-l,2,3,lla-四氫-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，-[5-(3-氨基丙氧基)-l,3-苯二基二(亞曱氧基)]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-曱氧基-l,2,3,lla-四氫-5H-吡咯并[2，l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，-[5-(N-甲基-3-叔丁氧基羰基氨基丙基)-l,3-苯二基二-(亞曱氧基)]-二[l,4]苯并二氮雜革-5-酮]8,8，-(5-[3-(4-曱基-4-甲基二硫基(sulfanyl)-戊酰基氨基)丙氧基]-l,3-苯二基二(亞甲氧基"-二[(S)-2-亞乙-(E)-基J-甲氧基-1,2,3,1la-四氫-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，-[5-乙酰基硫代曱基-l,3-苯二基二(亞曱氧基)]-二[(S)-2-亞甲基-7-甲氧基-l,2,3,lla-四氫-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]二-(2-[(S)-2-亞甲基-7-曱氧基-5-氧代-l,3,lla-四氫-5H-吡咯并[2,l-c][1,4]苯并二氮雜萆-S-基氧基]-乙基}-氨基甲酸叔丁基酯8,8，-[3-(2-乙?；虼一?-l,5-戊二基二(氧基)]-二[(S)-2-亞甲基-7-甲氧基-l,2,3,lla-四氫-5H-吡咯并[2，l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，-[5-(N-4-巰基-4,4-二甲基丁?；?氨基-l,3-苯二基二(亞曱氧基)]-二[7-甲氧基-2-亞曱基-l,2,3,lla-四氫-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，-[5-(N-4-曱基二硫代-4,4-二甲基丁?；?-氨基-l,3-苯二基二(亞甲氧基)]-二[7-曱氧基-2-亞曱基-l,2,3,lla-四氬-5H-吡咯并[2,l-c][l，4]苯并二氮雜萆_5_酮]8,8，-[5-(N-甲基-N-(2-巰基-2,2-二曱基乙基)氨基-l,3-苯二基(亞甲氧基))-二[7-曱氧基-2-亞甲基-l,2,3,lla-四氫-5H-吡咯并[2,1《][1,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，-[5-(N-曱基-N-(2-曱基二硫代-2,2-二曱基乙基)氨基-l,3-苯二基(亞甲氧基))-二[7-甲氧基-2-亞曱基-l,2,3,lla-四氫-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，-[(4-(2-(4-巰基-4-甲基)-戊酰氨基-乙氧基)-吡啶-2,6-二曱基)-二氧基]-二[(S)陽(yáng)2畫亞乙-(E)國(guó)基畫7-二甲氧基-l,2,3,lla-四氫-p比咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，-[(1-(2-(4-曱基-4-甲基二硫基)-戊酰氨基-乙氧基)-苯-3,5-二甲基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)隱基國(guó)7-二甲氧基-l，2,3，lla-四氳-p比咯并[2,l國(guó)c][1,4]苯并二氮雜革_5-酮]8,8，-[(4-(3-(4-曱基-4-甲基二硫基)-戊酰氨基-丙氧基)-吡啶-2,6-二曱基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二甲氧基-l,2,3,lla-四氫-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，-[(4-(4-(4-曱基-4-甲基二硫基)-戊酰氨基-丁氧基)-吡啶-2,6-二曱基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二曱氧基-l,2,3,lla-四氫-吡咯并[l，4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，-[(4-(3-[4-(4-曱基-4-甲基二硫基-戊?；?-哌嗪-1-基]-丙基)-吡啶-2，6國(guó)二甲基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二曱氧基-l，2,3,lla-四氫-吡咯并[2,1《][1,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，-[(1-(3-[4-(4-甲基-4-曱基二硫基-戊?；?-哌嗪-1-基]-丙基)-苯-3,5-二甲基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二曱氧基-l,2，3,lla-四氬-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，-[(4-(2-{2-[2-(4-曱基-4-甲基二硫基-戊?；被?-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-吡啶-2，6-二曱基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二曱氧基-1,2,3,1la-四氫-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，-[(1-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(4-曱基-4-甲基二硫基-戊酰基氨基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-苯-3,5-二甲基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)國(guó)基畫7-二曱氧基誦l,2,3,lla-四氬-p比咯并[2,l腸c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，-[(1-(2-{2-[2-(4-曱基-4-曱基二硫基-戊酰基氨基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-苯-3,5-二曱基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二甲氧基-1,2,3,1la-四氫-p比咯并[2,l誦c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，-[(4-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(4-甲基-4-甲基二硫基-戊?；被?-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基"比啶-2,6-二甲基)-二氧基]-二[(S)畫2國(guó)亞乙-(E)-基國(guó)7-二曱氧基-l,2,3,lla隱四氫國(guó)p比咯并[2,l國(guó)c][l,4]苯并二氮雜萆_5_酮]8,8，-[(1-(2-[曱基-(2-甲基-2-甲基二硫基-丙基)-氨基]-乙氧基)-苯-3,5-二甲基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二甲氧基-l,2,3,lla-四氫-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，-[(4-(3-[曱基-(4-甲基-4-曱基二疏基-戊酰基)-氨基]-丙基)-吡啶-2,6-二曱基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二甲氧基-l,2,3,lla-四氫-p比咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜革-5-酮]8,8，-[(4-(3-[曱基-(2-曱基-2-曱基二疏基-丙基)-氨基]-丙基)-吡啶-2,6-二甲基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二甲氧基-l,2,3,lla-四氬-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，_[(1_(4-曱基-4-甲基二硫基)-戊酰氨基)-苯-3,5-二曱基]-二氧基]-二[l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]以及相應(yīng)的巰基書于生物，或其可藥用的鹽、水合物或水合物鹽，或這些化合物的多形態(tài)晶體結(jié)構(gòu)或其旋光異構(gòu)體、外消旋體、非對(duì)映體或?qū)τ丑w。優(yōu)選的化合物是如下化合物X、X，、A、A，、Y、Y，、T、n、n，是如上定義的。在用于上文或下文時(shí)Alk表示烷基、烯基或炔基。"烷基"是指脂族烴基，它可以是直鏈或支鏈，在鏈中具有1-20個(gè)碳原子或具有3-10個(gè)碳原子的環(huán)，優(yōu)選的烷基在鏈中具有1-12個(gè)碳原子。"支鏈，，是指一個(gè)或多個(gè)低級(jí)烷基，例如曱基、乙基或丙基連接于線性烷基鏈。舉例性的烷基包括曱基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、叔丁基、正戊基、3-戊基、辛基、壬基、癸基、環(huán)戊基和環(huán)己基。"烯基"是指含有碳-碳雙鍵的脂族烴基，它可以是直鏈或支鏈的，在鏈中具有2-15個(gè)碳原子，優(yōu)選的烯基在鏈中具有2-12個(gè)碳原子，更優(yōu)選在鏈中具有約2-4個(gè)碳原子。舉例性的烯基包括乙烯基、丙烯基、正丁烯基、異丁烯基、3-甲基丁-2-烯基、正戊烯基、庚烯基、辛烯基、壬烯基、癸烯基。"炔基"是指含有碳-碳三鍵的脂族烴基，它可以是直鏈或支鏈的，在鏈中具有2-15個(gè)碳原子，優(yōu)選的炔基在鏈中具有2-12個(gè)碳原子；更優(yōu)選在鏈中具有約2-4個(gè)碳原子。舉例性的炔基包括乙炔基、丙炔基、正丁炔基、2-丁炔基、3-甲基丁炔基、正戊炔基、庚炔基、辛炔基和癸炔基。"鹵素原子"是指氟、氯、溴或碘原子；優(yōu)選氟和氯原子。"芳基"是指6-14個(gè)碳原子，優(yōu)選6-10個(gè)碳原子的芳香單環(huán)或多環(huán)烴環(huán)系，舉例性的芳香包括苯基或萘基。"Het"是指雜環(huán)或雜芳基。用于本文的術(shù)語(yǔ)"雜環(huán)"或"雜環(huán)基"是指飽和、部分不飽和或不飽和、非芳香穩(wěn)定的3-14，優(yōu)選5-10元單、二或多環(huán)，其中環(huán)的至少一個(gè)元是雜原子。通常雜原子包括，但不限于，氧、氮、硫、硒和磷原子，優(yōu)選的雜原子是氧、氮和-克。合適的雜環(huán)還在TheHandbookofChemistryandPhysics,76版，CRCPress,Inc.,1995-1996,2-25至2-26頁(yè)公開(kāi)，其內(nèi)容列為本文參考文獻(xiàn)。優(yōu)選的非芳香雜環(huán)基包括，但不限于，吡咯烷基、吡唑烷基、咪唑烷基、環(huán)氧乙烷基、四氫呋喃基、二氧戊環(huán)基、四氫吡喃基、二氧己環(huán)基、二氧戊環(huán)基、哌啶基、哌。秦基、嗎啉基、吡喃基、咪唑啉基、吡咯啉基、吡唑啉基、噻唑烷基、四氬噻喃基、二噻烷基、硫代嗎啉基、二氬吡喃基、四氬吡喃基、二氫吡喃基、四氫吡。定基、二氫吡"定基、四氫氮茚基(pyrinidinyl)、二氫噻喃基、氮雜環(huán)庚烷基以及與苯基稠合產(chǎn)生的稠環(huán)體系。用于本文的術(shù)語(yǔ)"雜芳基"或芳香雜環(huán)是指5-14元，優(yōu)選5-10元芳香雜單、二或多環(huán)。實(shí)例包括吡咯基、吡咬基、吡唑基、噻吩基、嘧啶基、吡溱基、四唑基、吲哚基、喹啉基、噪呤基、咪唑基、噻吩基、噻唑基、苯并噻唑基、呋喃基、苯并呋喃基、1,2,4-噻二唑基、異瘞唑基、三唑基、四唑基、異喹啉基、苯并噻吩基、異苯并呋喃基、吡唑基、咔唑基、苯并嘧啶基、異^惡唑基、吡啶基-N-氧化物以及與苯基稠合形成的稠合體系。"烷基、""環(huán)烷基"、"烯基"、"炔基"、"芳基"、"雜芳基"、"雜環(huán)"等還涉及相應(yīng)的"亞烷基、，，"亞環(huán)烷基"、"亞烯基"、"亞炔基"、"亞芳基"、"亞雜芳基"、"亞雜環(huán)基"等，它們通過(guò)除去兩個(gè)氬原子形成。用于本文的術(shù)語(yǔ)"可連接于細(xì)胞結(jié)合藥物"是指茅屋霉素衍生物包含至少一個(gè)連接基團(tuán)或其前體，它適合于將所述衍生物鍵合到細(xì)胞結(jié)合藥物；優(yōu)選的連接基團(tuán)是硫醇、硫化物或二硫化物或其前體。用于本文的術(shù)語(yǔ)"已連接于細(xì)胞結(jié)合藥物"是指結(jié)合物分子包含至少一個(gè)經(jīng)合適的連接基團(tuán)或其前體鍵合到細(xì)胞結(jié)合藥物的茅屋霉素衍生物，優(yōu)選的連接基團(tuán)是硫醇或二硫化物鍵或其前體。用于本文時(shí)，給定基團(tuán)的"前體"是指可通過(guò)任何脫保護(hù)、化學(xué)改性或偶合反應(yīng)產(chǎn)生該基團(tuán)的任何基團(tuán)。用于本文的術(shù)語(yǔ)"患者"是指動(dòng)物，例如用于飼養(yǎng)、陪伴或保存用途的有價(jià)值動(dòng)物，或優(yōu)選人類或兒童，其患有或有可能會(huì)患有一種或多種本文4笛述的疾病和癥4犬。用于本文的"治療有效量"是指本發(fā)明化合物的數(shù)量，其有效用于預(yù)防、降低、消除、治療或控制本文描述的疾病和癥狀。術(shù)語(yǔ)"控制"是指所有過(guò)程，其中可以是減緩、中斷、制止或停止本文描述的疾病和癥狀的進(jìn)展，但不需要顯示完全消除所有疾病和癥狀綜合癥，是指包括預(yù)防治療。用于本文的術(shù)語(yǔ)"可藥用的"是指那些化合物、材料、賦形劑、組合物或劑量形式，它們?cè)诤侠淼呐R床判斷范圍內(nèi)，適用與人體和動(dòng)物組織接觸，沒(méi)有過(guò)度毒性、刺激、過(guò)敏響應(yīng)或其它與合理的效果/風(fēng)險(xiǎn)比率相當(dāng)?shù)膯?wèn)題并發(fā)癥。用于本文的"可藥用的鹽"是指所述化合物的衍生物，其中母體化合物通過(guò)制備其酸性或堿性鹽改性?？伤幱玫柠}包括母體化合物由例如無(wú)毒無(wú)機(jī)或有機(jī)酸形成的常規(guī)無(wú)毒鹽或季銨鹽。例如該常規(guī)無(wú)毒鹽包括由無(wú)機(jī)酸，例如鹽酸、氬溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等得到的鹽；和由有機(jī)酸，例如乙酸、丙酸、琥珀酸、酒石酸、檸檬酸、甲磺酸、苯磺酸、葡糖酸、谷氨酸、苯曱酸、水楊酸、甲苯磺酸、草酸、富馬酸、馬來(lái)酸、乳酸等制備的鹽。其它加合鹽包括銨鹽，例如氨丁三醇、甲葡胺、epolamine等，金屬鹽，例如鈉、鉀、鉤、鋅或鎂。本發(fā)明的可藥用的鹽可由含有堿性或酸性部分的母體化合物通過(guò)常規(guī)化學(xué)方法合成。通常，該類鹽可通過(guò)使這些化合物的游離酸或堿形式與化學(xué)計(jì)量的合適堿或酸在水或有機(jī)溶劑或兩者混合物中反應(yīng)制備。通常非水介質(zhì)，如醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或乙腈是優(yōu)選的。合適鹽的歹'J表在Remington'sPharmaceuticalSciences,17thed.,mackPublishingCompany,Easton,PA,1985,p.1418,其內(nèi)容歹'J為本文參考文獻(xiàn)。具有幾何和立體異構(gòu)體的通式(I)化合物也是發(fā)明的一部分。式(I)茅屋霉素衍生物的N-IO，C-ll雙鍵已知在水、醇、硫醇、伯或仲胺、脲和其它親核試劑存在下容易以可逆方式轉(zhuǎn)變?yōu)橄鄳?yīng)的亞胺加合物。該過(guò)程是可逆的，在脫水劑存在下，在非質(zhì)子有機(jī)溶劑中在真空或高溫下容易地再生為相應(yīng)的茅屋霉素衍生物(Z.Tozuka,36,J.Antibiotics,276(1983)。因此，本發(fā)明還提供通式(II)茅屋霉素衍生物的可逆衍生物其中A、X、Y、n、T、A，、X，、Y，、n，、Rl、R2、Rl'、R2，如式(I)中定義，W和W，，是相同或不同，分別選自基團(tuán)OH、醚，例如-OR、酯(例如乙酸酯)，例如國(guó)OCOR、國(guó)COOR、石友酸酯，例如國(guó)OCOOR、氨基甲酸酯，例如-OCONRR，、環(huán)氨基曱酸酯，N10和C11是環(huán)的部分、脲，例如-NRCONRR，、硫代氨基曱酸酯，例如-OCSNHR、環(huán)硫代氨基甲酸酯，N10和C11是環(huán)的部分、-SH、硫化物，例如-SR、亞砜，例如-SOR、砜，例如-SOOR、磺酸酯，例如-SCV、磺酰胺，例如-NRSOOR、胺，例如-NRR，、4壬選環(huán)化胺，N10和Cll是環(huán)的部分、羥胺衍生物，例如-NROR，、酰胺，例如-NRCOR、-NRCONRR，、疊氮基，例如-N3、氰基、卣素、三烷基或三芳基鐨、氨基酸衍生的基團(tuán)；優(yōu)選W和W，是相同或不同的，是OH、OMe、OEt、NHCONH2、SMe。因此，式(II)化合物可以被認(rèn)為是溶劑化物，在溶劑是水時(shí)，包括水；這些溶劑化物是尤其有用的。根據(jù)另一其它目的，本發(fā)明還涉及制備式(I)化合物的方法。本發(fā)明的化合物和方法可以本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的許多方法制備?；衔锟梢岳缤ㄟ^(guò)應(yīng)用或采用如下描述的方法或技術(shù)人員根據(jù)需要改進(jìn)的方法合成。合適的改進(jìn)和替代對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯然的和已知的或可以由科學(xué)文獻(xiàn)容易地得到。該方法尤其可以在R.C.Larock,ComprehensiveOrganicTransformations,Wiley-VCHPublishers,1999找到。顯然的是，本發(fā)明的化合物可含有一個(gè)或多個(gè)不對(duì)稱取代的碳原子，可分離成旋光或外消旋形式。因此，包含結(jié)構(gòu)的所有手性、非對(duì)映體、外消旋形式和所有幾何異構(gòu)體形式，除非特定的立體化學(xué)或異構(gòu)體形式被特定指出?，F(xiàn)有技術(shù)中人們已知如何制備和分離這些旋光形式。例如立體異構(gòu)體的混合物可通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)，包括，但不限于，外消旋形式的拆分、正相、逆相和手性色譜法、優(yōu)先鹽形成、重結(jié)晶等，或通過(guò)手性合成，由手性原料或通過(guò)目標(biāo)手性中心的預(yù)計(jì)合成分離。本發(fā)明的化合物可通過(guò)各種合成途徑制備，試劑和原料是商業(yè)獲得的或容易地由本領(lǐng)域技術(shù)人員的已知技術(shù)合成。所有取代基，除非另有說(shuō)明，如上文所定義。在下文描述的反應(yīng)中，需要保護(hù)反應(yīng)官能團(tuán)，例如在最終產(chǎn)物中需要的羥基、氨基、亞氨基、硫醇或羧基，以避免它們不需要地參與反應(yīng)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)實(shí)踐可使用常規(guī)保護(hù)基團(tuán)，例如參見(jiàn)T.W.greene和P.g.m.WutsinProtectivegroupsinOrganicChemistry,3rded.,JohnWiley和Sons,1999;J.F.W.mcOmieinProtectivegroupsinOrganicChemistry,PlenumPress,1973。某些反應(yīng)可在堿存在下進(jìn)行，對(duì)用于此反應(yīng)的堿的性質(zhì)沒(méi)有特殊限制，任何常規(guī)用于此類反應(yīng)的堿可同樣地使用，只要它對(duì)分子的其它部分沒(méi)有不利影響。合適的堿的實(shí)例包括氫氧化鈉、碳酸鉀、三乙胺、堿金屬氫化物，例如氫化鈉和氫化鉀；烷基鋰化合物，例如甲基鋰和丁基鋰；和石咸金屬醇鹽，例如甲醇鈉和乙醇鈉。通常反應(yīng)在合成溶劑中進(jìn)行，可使用各種溶劑，只要它對(duì)反應(yīng)或所包含的試劑沒(méi)有不利影響。合適的溶劑的實(shí)例包括烴，它可以是芳香、脂族或環(huán)脂族烴，例如己烷、環(huán)己烷、苯、曱苯和二甲苯；酰胺，例如二甲基甲酰胺；醇，例如乙醇和曱醇，和醚，例如乙醚和四氬吹喃。反應(yīng)可在寬泛的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行，通常我們發(fā)現(xiàn)，方便地在-20。C-150°(^更優(yōu)選約室溫-100°(^的溫度下進(jìn)行反應(yīng)。反應(yīng)所需的時(shí)間也可廣泛變化，取決于許多因素，主要是反應(yīng)溫度和試劑性質(zhì)。然而，如果反應(yīng)在上述優(yōu)選條件下進(jìn)行，3-20小時(shí)的時(shí)間通常是足夠的。所制備的化合物可用常規(guī)方法由反應(yīng)混合物中回收。例如，化合物可通過(guò)由反應(yīng)混合物蒸餾出溶劑回收，或如果需要，在從反應(yīng)混合物蒸餾出溶劑后，將殘余物傾入水中，用水不混溶的有機(jī)溶劑提取，和由提取液蒸餾出溶劑。此外，如果需要，產(chǎn)物可進(jìn)一步用各種已知方法，例如重結(jié)晶、再沉淀或各種色譜技術(shù)，主要是柱色譜法或制備薄層色譜法純化。本發(fā)明的式(I)化合物的制備方法是本發(fā)明的其它目的。根據(jù)第一方面，式(i)化合物的制備方法包括脫保護(hù)相應(yīng)式(ni)化合物的步驟其中Y、Y，、X、A、A，、X，、n、n，、W、W，、U、U，.....Rl、R2、Rl，、R2，、二如式(I)中定義，T，相應(yīng)于T,其中官能團(tuán)已#^呆護(hù)。優(yōu)選SH官能團(tuán)保護(hù)，優(yōu)選保護(hù)基團(tuán)是乙?；⒈郊柞；⒓谆酋；?、曱硫基、吡啶硫基、硝基吡啶硫基、三異丙基甲硅烷基(TIPS)。通常脫保護(hù)步驟用典型條件進(jìn)行，例如堿用于除去乙?；?、苯甲?；蜁趸酋；Ｗo(hù)基團(tuán)，還原劑，例如二硫蘇糖醇或三(2-羧基乙基)膦(TCEP)用于斷裂曱硫基保護(hù)基團(tuán)，或已知的通過(guò)使化合物與氟化銨反應(yīng)以除去TIPS。式(n)化合物可由偶合相應(yīng)的式(IV)、(IV，)和(V)化合物得到其中Y、Y，、A、A，、n、n，、T，、W、W，、U、U，、-—、二、Rl、R2、R1，、R2，如式(III)中定義，Lg是離去基團(tuán)，例如卣素、OMs、OTs、OPPh3+(在Mitsunobu反應(yīng)中形成的中間體)。式(IV)和(IV，)化合物通常是已知的，在例如專利申請(qǐng)WO00/12508,WWOO/12507,WO2005/040170,WO2005/085260中描述，或是商業(yè)獲得的，和/或總體合成獲得(M.mori等，42Tetrahedron,3793-3806，1986)或通過(guò)鏈霉菌種生產(chǎn)，尤其是根據(jù)法國(guó)專利Fr.1,516,743的方法，或通過(guò)應(yīng)用或適用實(shí)施例給出的舉例性的方法制備。式(V)化合物可由相應(yīng)的式(VI)化合物得到HO國(guó)An畫T，-A，n，國(guó)OH(VI)其中A、A，、n、n，、T，如式(III)中定義。反應(yīng)通常在PPh3和CHaU存在下進(jìn)行，或通過(guò)與氯石黃酸在;咸，例如三乙胺或氫氧化鉀，優(yōu)選三乙胺存在下反應(yīng)進(jìn)行。式(VI)化合物可由相應(yīng)的式(VII)化合物得到HO國(guó)An腸T"畫A，n，墨OH(Vn)其中A、A，、n、n，如式(III)中定義，T"是T的前體基團(tuán)。T的前體基團(tuán)是指可通過(guò)任何脫保護(hù)、化學(xué)改性或偶合產(chǎn)生T的任何基團(tuán)。優(yōu)選T通過(guò)偶合T，與補(bǔ)充部分得到，其中T，和補(bǔ)充部分包括彼此反應(yīng)的官能團(tuán)，例如T，包括胺官能團(tuán)，補(bǔ)充部分包括酸官能團(tuán)。此反應(yīng)的代表性例子是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage34</formula>通常反應(yīng)在N-羥基琥珀酰亞胺和HOBT存在下進(jìn)4亍。式(VII)化合物可以商業(yè)獲得的或通過(guò)適用和應(yīng)用已知方法或根據(jù)實(shí)施例制備。如下給出用于本發(fā)明方法的此實(shí)施方案的舉例非限制方案根據(jù)第二方面，式(i)化合物可由式(nr)的相應(yīng)化合物得到其中Y、Y，、X、A、A，、X，、n、n，、W、W，、U、U，.....二、Rl、R2、Rl'、R2，如式(I)中定義，T，，是T的任選保護(hù)的前體基團(tuán)。T的前體基團(tuán)是指可通過(guò)化學(xué)改性或偶合產(chǎn)生T的任何基團(tuán)。優(yōu)選T通過(guò)偶合T，與補(bǔ)充部分得到，其中T，和補(bǔ)充部分包括彼此反應(yīng)的官能團(tuán)，例如T，包括胺官能團(tuán)，補(bǔ)充部分包括酸官能團(tuán)。通常此反應(yīng)在N-羥基琥珀酰亞胺和HOBT存在下進(jìn)行。式(nr)化合物可由偶合相應(yīng)的式(IV)、(IV，)和(V，)化合物得到其中Y、Y，、A、A，、n、n，、W、W，、U、U，、--隱、-隱-、Rl、R2、Rl,、<formula>formulaseeoriginaldocumentpage35</formula>R2'如式(Iir)中定義，T"是T的任選保護(hù)的前體基團(tuán)，Lg是離去基團(tuán)，例如卣素或OMs、OTs或OPPh3+(在Mitsunobu反應(yīng)中形成的中間體)。式(IV)和(IV，)化合物通常是已知的，通過(guò)總體合成獲得(M.mori等，42Tetrahedron,3793-3806,1986)或通過(guò)鏈霉菌種生產(chǎn)，尤其是根據(jù)法國(guó)專利Fr.1,516,743的方法。式(V')化合物可由相應(yīng)的式(VII)化合物得到HO國(guó)An-T，，陽(yáng)A，n，畫OH(VI)其中A、A，、n、n，、T，如式(I)中定義，T"是T，的任選保護(hù)的前體基團(tuán)。反應(yīng)通常在PPh3和CHaU存在下進(jìn)行。式(VII)化合物可以商業(yè)獲得或通過(guò)適用或應(yīng)用已知方法或根據(jù)實(shí)施例制備。根據(jù)第三方面，式(i)化合物的制備方法包括環(huán)化相應(yīng)式(vm)化合物的步驟<formula>formulaseeoriginaldocumentpage36</formula>(v川)其中Y、Y，、X、A、A，、X，、n、n，、Rl、R2、Rl，、R2，、T如式(I)中定義。該反應(yīng)通常在試劑，例如次硫酸鈉(Na2S204)存在下，在合適的溶劑，例如THF和水的混合物中進(jìn)行，隨后加入曱醇和AcCl。式(vm)化合物可由相應(yīng)的式(IX)化合物得到<formula>formulaseeoriginaldocumentpage36</formula>(IX)其中Y、Y,、A、A，、n、n，、Rl、R2、Rl，、R2，、T如式(I)中定義。通常該反應(yīng)在試劑，例如DIBAL-H存在下，在合適溶劑，例如甲笨中進(jìn)式(IX)化合物可由偶合相應(yīng)的式(X)和(XI)化合物得到<formula>formulaseeoriginaldocumentpage37</formula>其中Y、Y，、A、A，、n、n，、Rl、R2、Rl，、R2，、T如式(I)中定義。通常該反應(yīng)通過(guò)在合適溶劑，例如DMF中向(X)添加試劑，例如草酰氯，，隨后在合適溶劑，例如THF中加入(XI)進(jìn)行。如下給出代表性的方案<formula>formulaseeoriginaldocumentpage37</formula>上述反應(yīng)通過(guò)利用或適用如下實(shí)施例中舉例說(shuō)明的方法由技術(shù)人員進(jìn)行。此外，本發(fā)明的方法還包括分離式(i)和(n)化合物的附加步驟，這可由技術(shù)人員通過(guò)任何已知的常規(guī)方法，例如如上所述的回收方法進(jìn)行。原料產(chǎn)物是商業(yè)獲得的或可通過(guò)利用或適用任何已知方法或?qū)嵤├忻枋龅姆椒ǖ玫?。合成還可以多組分反應(yīng)的一鍋法進(jìn)4亍。根據(jù)另一方面，本發(fā)明涉及結(jié)合物分子，其含有至少一個(gè)通過(guò)連接基團(tuán)共價(jià)鍵合于細(xì)胞結(jié)合藥物的茅屋霉素衍生物。所述結(jié)合物含有一個(gè)或多個(gè)本發(fā)明的茅屋霉素衍生物，其顯示含有連接基團(tuán)，例如-s-或-s-s-的連接物，所述連接基團(tuán)共價(jià)連接細(xì)胞結(jié)合藥物與本發(fā)明茅屋霉素衍生物的連接物。根據(jù)優(yōu)選方面，所述茅屋霉素衍生物是式(r):<formula>formulaseeoriginaldocumentpage38</formula>其中—表示任選的單鍵；二表示單4建或雙4建；其前提是，當(dāng)二表示單鍵時(shí)，U和U，，相同或不同，分別表示H,W和W，，相同或不同，分別選自基團(tuán)OH、醚，例如-OR、酉旨(例如乙酸酯)，例如畫OCOR、石友酸酯，例如-OCOOR、氨基甲酸酯，例如-OCONRR，、環(huán)氨基曱酸酯，N10和Cll是環(huán)的部分、脲，例如-NRCONRR，、硫代氨基曱酸酯，例如-OCSNHR、環(huán)硫代氨基甲酸酯，N10和Cll是環(huán)的部分、-SH、硫化物，例如-SR、亞砜，例如-SOR、砜，例如-SOOR、磺酸酯，例如-S(V、磺酰胺，例如-NRSOOR、胺，例如-NRR，、任選環(huán)化胺，N10和Cll是環(huán)的部分、羥胺書f生物，例如-NROR，、酰胺，例如-NRCOR、疊氮基，例如-Ns、氰基、鹵素、三烷基或三芳基鐨、氨基酸衍生的基團(tuán)；優(yōu)選W和W，是相同或不同的是OH、OMe、OEt、NHCONH2、SMe;和當(dāng)二表示雙鍵時(shí)，U和U，不存在，W和W，表示H;Rl、R2、Rl'、R2，是相同或不同的，分別選自卣化物或任選被一個(gè)或多個(gè)Hal、CN、NRR'、CF3、OR、芳基,Het,S(O)qR取代的烷基，或Rl和R2和Rl'和R2，一起形成分別包含基團(tuán)-B和二B'的雙鍵。優(yōu)選Rl和R2和Rl'和R2'—起形成分別包含基團(tuán)-B和-B'的雙鍵。B和B，是相同或不同的，分別選自任選被一個(gè)或多個(gè)Hal、CN、NRR'、CF3、OR、芳基、Het、S(O)qR取代的烯基或B和B，表示氧原子。優(yōu)選B二B'。更優(yōu)選B=B，==CH2或-CH-CH3。X、X，是相同或不同的，分別選自一個(gè)或多個(gè)-O-、-NR-、-(C=0)-、畫S(O)q-。優(yōu)選X:X，。更優(yōu)選x=x'=o。A、A，是相同或不同的，分別選自任選含有一個(gè)O、N或S原子的烷基或烯基，其任選被一個(gè)或多個(gè)Hal、CN、NRR，、CF3、OR、S(O)qR、芳基、Het、烷基、烯基取代。優(yōu)選A=A'。更優(yōu)選A-A，-直鏈未取代烷基。Y、Y，是相同或不同的，分別選自H、OR;優(yōu)選Y=Y'。更優(yōu)選丫=丫，=0烷基，更優(yōu)選曱氧基。T是-烷基-、-NR-、-O-、-S(O)q-、或4-10元芳基、環(huán)烷基、雜環(huán)或雜芳基，每個(gè)任選被一個(gè)或多個(gè)Hal、CN、NRR，、CF3、R、OR、S(O)qR取卄戈，和;波一個(gè)或多個(gè)連接物取孑戈。優(yōu)選T是被一個(gè)或多個(gè)連接物取代的4-10元芳基或雜芳基，更優(yōu)選苯基或吡啶基。所述連接物包括連接基團(tuán)，合適的連接基團(tuán)是現(xiàn)有技術(shù)中已知的，包括硫醇、硫化物、二硫化物基團(tuán)、硫醚基團(tuán)、酸不穩(wěn)定基團(tuán)、光照不穩(wěn)定基團(tuán)、肽酶不穩(wěn)定基團(tuán)和酯酶不穩(wěn)定基團(tuán)。優(yōu)選二硫化物基團(tuán)和硫醚基團(tuán)。當(dāng)連接基團(tuán)是含硫醇-、硫化物或二硫化物基團(tuán)時(shí)，帶有硫醇或二硫化物基團(tuán)的側(cè)鏈可以是直鏈或支鏈，芳香或雜環(huán)基。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可容易地確定合適的側(cè)鏈。優(yōu)選所述連接物是如下通式畫G誦D隱(Z)P漏S隱Z，其中G是單或雙鍵、-O陽(yáng)、國(guó)S顯或-NR國(guó)；D是單鍵或畫E-、-E國(guó)NR隱、-E-NR畫F畫、-E-O-、隱E-O國(guó)F-、-E-NR-CO國(guó)、-E國(guó)NR國(guó)CO-F國(guó)、陽(yáng)E國(guó)CO國(guó)、畫CO-E-、-E國(guó)CO國(guó)F、-E-S國(guó)、-E-S-F腸、-E國(guó)NR國(guó)C陽(yáng)S-、國(guó)E畫NR畫CS畫F畫；其中E和F是相同或不同的，分別選自直鏈或支鏈-(OCH2CH2、烷基(OCH2CH2)j-、-烷基國(guó)(0012012)1-烷基-、-(OCH2CH2)i-、-(OCH2CH2)JT、烷基(OCH2CH2)j、-(OCH2CH2)i雜環(huán)基(OCH2CH2)j、-(OCH2CH2)i芳基(OCH2CH2)j-、-(0(^12012)1雜芳基(0012(:112)廣、-烷基-(0012012)1烷基(OCH2CH2)j-、-^^^-(OCI^CHA,-烷基畫(0(^12012)1環(huán)烷基(0(^12012)」、-烷基-(OCHzCH^雜環(huán)基(OCH2CH2)j-、-烷基-(OCH^H^芳基(OCH2CH2)j、-烷基-(OCH2CH2》雜芳基(OCH2CH2)j-、-環(huán)烷基-烷基-、-烷基-環(huán)烷基-、-雜環(huán)基-烷基-、-烷基-雜環(huán)基-、-烷基-芳基-、-芳基-烷基-、-烷基-雜芳基-、-雜芳基-烷基-;其中i和j,相同或不同，是整數(shù)，分別選自0、1-2000;Z是直鏈或支鏈-烷基-;p是0或1;Z，表示H、硫醇保護(hù)基團(tuán)，例如COR、R2o或SR20,其中1120表示H、曱基、烷基、任選取代的環(huán)烷基、芳基、雜芳基或雜環(huán)，其前提是當(dāng)Z，是H時(shí)，所述化合物與通過(guò)分子內(nèi)環(huán)化由PBD之一的亞胺鍵-NH二上加成》危醇基團(tuán)-SH形成的相應(yīng)化合物平衡。n,n，，相同或不同，是O或l,m二m'和n二n，。q是0、1或2。R、R，是相同或不同的，分別選自H、烷基、芳基，每個(gè)任選被Hal、CN、NRR，、CF3、R、OR、S(O)qR、芳基、Het取代；或其可藥用的鹽、水合物或水合物鹽，或這些化合物的多形態(tài)晶體結(jié)構(gòu)或其旋光異構(gòu)體、外消旋體、非對(duì)映體或?qū)τ丑w，所述衍生物通過(guò)所述連接物共價(jià)鍵合到細(xì)胞結(jié)合藥物。連接物優(yōu)選經(jīng)對(duì)硫醇、發(fā)u化物或二硫化物鍵活性的官能團(tuán)連接細(xì)胞結(jié)合藥物。本發(fā)明涉及如下優(yōu)選實(shí)施方案或其任一的任何組合-G是單鍵或-O-或-NR-;-G是-O-;畫D是單鍵或-E-、-E-NR-、-E-NR-CO-、-E-CO-、-CO陽(yáng)E-;國(guó)D是-E-、-E-NR-CO-、-CO-E-、-E-CO國(guó)；-D是-E-NR-CO-;-E是直鏈或支鏈-烷基-、-(OCH2CH2)i-或烷基-雜環(huán)基；-E是直鏈或支鏈-烷基-;-Z是國(guó)(CH2)rC(CH3)2國(guó)；-p是O或1;Z，是H或SR20,其中R加表示烷基、芳基、雜環(huán)基或雜芳基；Z，是H或SR20,其中R加表示烷基；含硫醇-、硫化物-或二硫化物-連接物的具體實(shí)例包括-(CR13R14)t(CR15R16)u(OCH2CH2)ySZ，、-(CR13R14)t(CR17=CR18)(CR15R16)y(OCH2CH2)ySZ,、-(CR13R14)t(NR19CO)(CR15R16)u(OCH2CH2)ySZ，、-(CR13R14)t(OCO)(CR15R16)u(OCH2CH2)ySZ,、-(CR13R14)t(CO)(CR15R16)u(OCH2CH2)ySZ,、-(CR13R14)t(CONR19)(CR15R16)u(OCH2CH2)ySZ，、-(01131114)廣苯基國(guó)(:0(01151116)1^2，、-(01131^4>-呋喃基《0(01151116)1132，、-(CR43R44)r夢(mèng)惡哇基-CO(CRa5R46)uSZ，、-(0113尺14>噻唑基國(guó)(:0(051151116)1132，、國(guó)(CR43RM)t陽(yáng)噻吩基-CO(CRuRi6)uSZ，、-(01131114>誦咪唑基國(guó)。0(01151116)^2，、-(CR13R14),A#4<-CO(CR15R16)uSZ，、-(011131114、-哌溱基-(:0(01151116)^2，、-(CR13R14)t-N-曱基派。秦基誦CO(CR45Ri6)uSZ，、曙(CR43RmV笨基-QSZ，、-(CR43R44)t-呋喃基-QSZ，、畫(CR43R44),惡唑基國(guó)QSZ，、-(CRnRMV噻唑基-QSZ，、-(01131114)1-噻吩基-(^2，、-(0仗131114),米唑基-QSZ，、國(guó)(CR!3R44)t-嗎啉代國(guó)QSZ，、-(01131114)1誦哌嗪基畫(^2，、-(CR13R14)t-N-曱基哌溱基-QSZ，，或-0(CR13R14)t(CR15R16)u(OCH2CH2)ySZ,、-0(CR13R14)t(NR19CO)(CR15R16)u(0CH2CH2)ySZ，、-0(CR13R14)t(CR17=CR18)(CR15R16)t(OCH2CH2)ySZ，、國(guó)O-苯基-QSZ，、-O-吹喃基-QSZ'、-O-嗝唑基-QSZ，、-(V塞唑基-QSZ，、-O-噻吩基-QSZ'、-O-咪唑基-QSZ，、-O-嗎啉代-QSZ，、-O-哌,基-QSZ，、-O-N-甲基艱漆基-QSZ，、-OCO(CR13R14)t(NR19CO)(CR15R16)u(OCH2CH2)ySZ，、-OCO(CR13R14)t(CR17=CR18)(CR15R16)u(OCH2CH2)ySZ，、-OCONR12(CR13R14)t(CR15R16)u(OCH2CH2)ySZ，、-OCO-苯基-QSZ，、-OCCM夫喃基-QSZ'、-OCO-嗜唑基-QSZ，、-OCO國(guó)p塞唑基-QSZ，、-OCO-噻吩基-QSZ，、-OCO-咪唑基-QSZ，、-OCO-嗎啉代-QSZ'、-OCO-哌溱基-QSZ'、-OCO-N-甲基哌溱基-QSZ，，或-CO(CR13R14)t(CR15R16)u(OCH2CH2)ySZ,、-CO(CR13R14)t(CR17=CR18)(CR15R16)y(OCH2CH2)ySZ，、-CONR12(CR13R14)t(CR15R16)u(OCH2CH2)ySZ，、-CO-苯基-QSZ，、-CO-呋喃基-QSZ，、-CO-P惡唑基-QSZ，、-CO-噻唑基畫QSZ，、-CO-p塞吩基-QSZ'、-CO-咪唑基-QSZ，、-CO-嗎啉代-QSZ，、-CO-哌。秦基-QSZ，、-CO-哌啶子基-QSZ'、-CO-N-甲基哌溱基-QSZ'、-NR19(CR13R14)t(CR15R16)u(OCH2CH2)ySZ，、-NR19CO(CR13R14)t(CR15R16)u(OCH2CH2)ySZ，、-NR19(CR13R14)t(CR17=CR18)(CR15R16)t(OCH2CH2)ySZ,、-NR19CO(CR13R14)t(CR17=CR18)(CR15R16)t(OCH2CH2)ySZ，、-NR19CONR12(CR13R14)t(CR15R16)u(OCH2CH2)ySZ，、-NR19CONR12(CR13R14)t(CR17=CR18)(CR15R16)t(OCH2CH2)ySZ,、-NRwCO-苯基-QSZ，、^11190>呋喃基-(^2，、-NRwCO-伊惡唑基-QSZ'、國(guó)NRwCO-p塞唑基-QSZ，、-NRwCO-p塞吩基-QSZ，、-NR49CO-咪唑基-QSZ，、-NRwCO-嗎啉代-QSZ，、-NRwCO-哌溱基-QSZ，、~^尺190)-旅咬子基-qsz'、^1119(:0-:^-甲基哌嗪基-(^2，、-NRw-苯基-QSZ'、-NR!9-呋喃基-QSZ，、-服19-嚅唑基-(^2，、-NRwP塞唑基-QSZ，、-NR次噻吩基-QSZ，、-NR次咪唑基-QSZ，、-NRw-嗎啉代-QSZ，、-NR!9-哌嗪基-QSZ，、-NRw-派咬子基-QSZ'、-NRw-N-曱基哌溱基-QSZ'、畫NR^CO-NRu-苯基-QSZ，、-忖尺19。0^1112畫嚅唑基畫(^2，、-NR19CO-NR12-p塞唑基-QSZ，、^1119(:0^1112-噻吩基-(^2，、-NR19CO-NR12-哌咬子基-QSZ'、-S(0)q(CR13R14)t(CR15R16)u(OCH2CH2)ySZ,、-S(0)q(CR13R14)t(CR17=CR18)(CR15R16)t(OCH2CH2)ySZ，、-SCONR12(CR13R14)t(CR15R16)u(OCH2CH2)ySZ,、-SCO-嗎啉代-QSZ，、-SCO-哌。秦基-QSZ，、-SCO-哌啶子基-QSZ，和-SCO-N-曱基哌溱基-qsz，，其中Z，是H、硫醇保護(hù)基團(tuán)，例如COR、R2o，或SR20，，其中R加，表示H、烷基、芳基、雜環(huán)或雜芳基；其中Q是直接連接或具有1-10個(gè)碳原子的線性烷基或支鏈烷基或帶有2-20重復(fù)乙烯氧單元的聚乙二醇間隔基；Rw和Ru是相同或不同的，是具有1-10個(gè)碳原子的直鏈烷基、支鏈烷基或環(huán)烷基，或簡(jiǎn)單的或取代的芳基或雜環(huán)，此外Ru可以是H;R13、R14、1115和1116是相同或不同的，是H或具有l(wèi)-4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基；Rn和Ri8是H或烷基；u是l-10的整數(shù)，還可以是0;t是l-10的整數(shù)，還可以是0;y是l-20的整數(shù)，還可以是0。根據(jù)此目的，式(I，)的代表性化合物是8,8，-{5-[3-(4-曱基-4-甲基二硫基-戊酰基氨基)丙氧基]-1,3-苯二基二(亞曱氧基)}-二[(S)-2國(guó)亞乙-(E)-基-7-曱氧基-1,2,3,11a-四氫-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，-[5-乙?；虼鷷趸?l,3-苯二基二(亞曱氧基)]-二[(S)-2-亞甲基-7-甲氧基-l,2,人lla-四氫-SH-吡咯并p,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，-[3-(2-乙酰基硫代乙基)-l,5-戊二基二(氧基)]-二[(S)-2-亞甲基-7-甲氧基-l,2,3,lla-四氫-5H-吡咯并[2，l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，-[5-(N-4-巰基-4,4-二甲基丁?；?氨基-l,3-苯二基二(亞曱氧基)]-二[l,4]苯并二氮雜8,8，-[5-(N-4-甲基二硫代-4,4-二曱基丁酰基)-氨基-l,3-苯二基二(亞甲氧基)]-二[7-曱氧基-2-亞曱基-l,2,3,lla-四氫-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆_5_酮]8,8，-[5-(N-甲基-N-(2-巰基-2,2-二曱基乙基)氨基-1,3-苯二基(亞曱氧基))-二[7-甲氧基-2-亞甲基-l,2,3,lla-四氳-5H-吡咯并[2,1-0][1,4]苯并二氮雜革-5-酮]8,8，-[5-(N-曱基-N-(2-曱基二硫代-2，2-二曱基乙基)氨基-l,3-苯二基(亞曱氧基))-二[7-甲氧基-2-亞甲基-l,2，3,lla-四氫-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，_[(4-(2-(4-巰基-4-甲基)-戊酰氨基-乙氧基)-吡啶-2,6-二曱基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二甲氧基-l,2,3,lla-四氫-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，-[(1-(2-(4-甲基-4-甲基二硫基)-戊酰氨基-乙氧基)-苯-3,5-二曱基)-二氧基]隱二[(S)-2-亞乙畫(E)陽(yáng)基國(guó)7-二甲氧基-l,2,3,lla-四氳-p比咯并[2,l國(guó)c][1,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，-[(4-(3-(4-甲基-4-甲基二硫基)-戊酰氨基-丙氧基)-吡啶-2,6-二甲基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二甲氧基-l,2,3,lla-四氫-吡咯并[2，l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，_[(4-(4-(4-甲基-4-甲基二硫基)-戊酰氨基-丁氧基)-吡啶-2,6-二甲基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二甲氧基-l,2,3,lla-四氫-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，-[(4-(3-[4-(4-曱基-4-曱基二硫基-戊?；?-哌溱-1-基]-丙基)-吡啶-2，6國(guó)二甲基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二曱氧基-1,2,3,1la-四氫4匕咯并[2,1《][1,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，-[(1-(3-[4-(4-甲基-4-曱基二硫基-戊?；?-哌嗪-1-基]-丙基)-苯-3,5-二曱基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二甲氧基-l,2,3,lla-四氫-p比咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8'-[(4-(2-{2-[2-(4-甲基-4-曱基二硫基-戊酰基氨基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-吡啶-2,6-二甲基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二曱氧基-1,2,3,1la國(guó)四氫-p比咯并[2,l畫c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，-[(1-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(4-曱基-4-曱基二硫基-戊?；被?-乙氧基]國(guó)乙氧基}-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-苯-3,5-二曱基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二甲氧基-l,2,3,lla-四氫-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆_5_酮]8,8，-[(1-(2-{2-[2-(4-甲基-4-甲基二硫基-戊?；被?-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-苯-3,5-二曱基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二曱氧基-1,2,3,1la-四氬-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，-[(4-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(4-曱基-4-曱基二硫基-戊?；被?-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-吡啶-2,6-二曱基)-二氧基]-二[l,4]苯并二氮雜革-5-酮]8,8，-[(1-(2-[曱基-(2-曱基-2-曱基二硫基-丙基)-氨基]-乙氧基)-苯-3,5-二曱基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二甲氧基-1,2,3,11a-四氫-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，-[(4-(3-[甲基-(4-甲基-4-曱基二硫基-戊?；?-氨基]-丙基)-吡啶-2,6-二甲基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二曱氧基-l,2,3,lla-四氫-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，-[(4-(3-[曱基-(2-甲基-2-曱基二硫基-丙基)-氨基]-丙基)-吡啶-2，6-二甲基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二曱氧基-l,2,3,lla-四氫-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，-[(1-(4-曱基-4-曱基二硫基)-戊酰氨基)-苯-3,5-二曱基]-二氧基]-二[l,4]苯并二氮雜萆_5_酮]以及相應(yīng)的巰基纟汙生物，或其可藥用的鹽、水合物或水合物鹽，或這些化合物的多形態(tài)晶體結(jié)構(gòu)或其旋光異構(gòu)體、外消旋體、非對(duì)映體或?qū)τ丑w。細(xì)胞結(jié)合藥物可以是任何種類，包括肽類和非肽類。通常它們可以是抗體(尤其是單克隆抗體)或含有至少一個(gè)結(jié)合位的抗體片段、淋巴因子、激素、生長(zhǎng)因子、營(yíng)養(yǎng)傳遞分子(例如鐵傳遞蛋白)或任何其它細(xì)胞結(jié)合分子或基質(zhì)?？墒褂玫募?xì)胞結(jié)合藥物的更具體實(shí)例包括單克隆抗體；嵌合抗體；人體化抗體；全人體抗體；單鏈抗體；抗體片段，例如Fab、Fab，、F(ab，)2和Fv{Parham,131J.Immunol.2895-2902(1983);Spring等，113J.Immunol.470-478(1974);Nisonoff等，89Arch.Biochem.Biophys.230-244(1960)};干擾素；肽；淋巴因子,例如IL隱2、IL-3、IL-4、IL-6;激素，例如胰島素、TRH(促曱狀腺釋放素)、MSH(促黑素)、類固醇激素，例如雄激素和雌激素；生長(zhǎng)因子和集落刺激因子，例如EGF、TGFou胰島素類生長(zhǎng)因子(IGF-I、IGF-II)G-CSF、m陽(yáng)CSF和GM-CSF{Burgess,5ImmunologyToday155-158(1984)};維生素，例如葉酸和纟夾傳遞蛋白{O'Keefe等，260J.Biol.Chem.932-937(1985)}。本文中術(shù)語(yǔ)"細(xì)胞結(jié)合藥物"還包括改性的細(xì)胞結(jié)合藥物，其中所述細(xì)胞結(jié)合藥物通過(guò)改性劑改性以改善所述細(xì)胞結(jié)合藥物對(duì)茅屋霉素衍生物的連接物的連接基團(tuán)的反應(yīng)活性。所述改性劑包括N-磺基琥珀酰亞氛基-4-(5-硝基-2-吡啶二硫代-丁酸酯(SSNPB)、琥珀酰亞氨基4-[N-馬來(lái)酰亞氨基]環(huán)己烷-l-羧酸酯(SMCC)、4-(2-吡啶基二硫代)丁酸N-羥基琥珀酰亞胺酯(SPDB)和如下討論的那些。單克隆抗體技術(shù)能夠以特異單克隆抗體形式生產(chǎn)極其選擇性細(xì)胞結(jié)合藥物，在現(xiàn)有技術(shù)中尤其已知的是通過(guò)用感興趣抗原，例如完整目標(biāo)細(xì)胞、由目標(biāo)細(xì)胞分離的抗原、全病毒、削弱的全病毒和病毒蛋白質(zhì)，例如病毒殼體蛋白質(zhì)免疫小鼠、大鼠、倉(cāng)鼠或任何其它動(dòng)物產(chǎn)生單克隆抗體的技術(shù)。合適的細(xì)胞結(jié)合藥物的選擇是選擇數(shù)量問(wèn)題，其取決于所粑向的特定細(xì)胞菌落，但通常優(yōu)選單克隆抗體，如果一種合適的是可利用的。例如單克隆抗體MY9是鼠科IgGi抗體，它特異地結(jié)合CD33抗原{J.D,Griffin等8LeukemiaRes.，521(1984)},如果目標(biāo)細(xì)胞表達(dá)CD33作為急性骨髓性白血病(ALM)疾病時(shí)可以使用。同樣，單克隆抗體抗-B4是鼠科IgGn它結(jié)合于B細(xì)胞的CD19抗原{Nadler等，131J.Immunol.244-250(1983》，如果目標(biāo)細(xì)胞是B細(xì)月包或表達(dá)此抗原的疾病細(xì)月包時(shí)，例如在非霍奇金淋巴瘤或慢性成淋巴細(xì)胞白血病中，可以使用。如上所述，MY9和抗-B4抗體可以是鼠科、嵌合、人體化或全人體。此外，結(jié)合骨髓細(xì)胞的GM-CSF可用作細(xì)胞結(jié)合藥物用于急性骨髓性白血病的疾病細(xì)胞。結(jié)合于活化T-細(xì)胞的IL-2可用于預(yù)防移植排異，用于治療和預(yù)防移才直物抗宿主病，用于治療急性T細(xì)J包白血病。結(jié)合于黑素細(xì)胞的MSH用于治療黑素瘤。本發(fā)明的結(jié)合物分子可用任何技術(shù)形成，本發(fā)明的茅屋霉素衍生物可經(jīng)酸不穩(wěn)定連接物或光不穩(wěn)定連接物連接抗體或其它細(xì)胞結(jié)合藥物。衍生物可與帶有合適序列的肽稠合，隨后連接于細(xì)胞結(jié)合藥物以產(chǎn)生肽酶不穩(wěn)定連接物。結(jié)合物可制備以包含伯羥基，它可琥珀?；缓筮B接于細(xì)胞結(jié)合藥物以產(chǎn)生結(jié)合物，它可通過(guò)細(xì)胞內(nèi)酯酶斷裂以釋放游離衍生物。優(yōu)選合成衍生物以包含游離或保護(hù)的硫醇基團(tuán)，隨后一個(gè)或多個(gè)含二硫化物或硫醇衍生物各自經(jīng)二硫化物鍵或硫醚鍵共價(jià)連接于細(xì)i包結(jié)合藥物。在USP5,416,064和USP5,475,092教導(dǎo)了許多結(jié)合方法。茅屋霉素衍生物可改性以產(chǎn)生游離氨基，隨后經(jīng)酸不穩(wěn)定連接物或光不穩(wěn)定連接物連接于抗體或其它細(xì)胞結(jié)合藥物。帶有游離氨基或羧基的茅屋霉素衍生物可與肽稠合，隨后連接于細(xì)胞結(jié)合藥物以產(chǎn)生肽酶不穩(wěn)定連接物。帶有連接物上的游離羥基的茅屋霉素衍生物可琥珀?；B接于細(xì)胞結(jié)合藥物以產(chǎn)生結(jié)合物，它可通過(guò)細(xì)胞內(nèi)酯酶斷裂以釋放游離藥物。最優(yōu)選茅屋霉素衍生物被處理以產(chǎn)生游離或保護(hù)的硫醇基團(tuán)，隨后含二硫化物或硫醇的茅屋霉素二聚物經(jīng)二硫化物鍵連接于細(xì)胞結(jié)合藥物。本發(fā)明的代表性結(jié)合物是抗體-茅屋霉素衍生物、抗體片段-茅屋霉素衍生物表皮生長(zhǎng)因子(EGF)-茅屋霉素衍生物、促黑素(MSH)-茅屋霉素衍生物、促曱狀腺素(TSH)-茅屋霉素衍生物、雌激素-茅屋霉素衍生物、雌激素類似物-茅屋霉素衍生物、雄激素茅屋霉素衍生物、雄激素類似物-茅屋霉素衍生物和葉酸-茅屋霉素衍生物?？贵w、抗體片段、蛋白質(zhì)或肽激素、蛋白質(zhì)或肽生長(zhǎng)因子和其它蛋白質(zhì)的茅屋霉素衍生物結(jié)合物通過(guò)已知方法以相同的方法制備。例如肽和抗體可用交聯(lián)劑，例如N-琥珀酰亞氨基3-(2-吡。定基二硫代)丙酸酯、N-琥珀酰亞氨基4-(2-吡啶基二硫代)戊酸酯(SPP)、4-琥珀酰亞氨基-氧基羰基-a-甲基-01-(2-吡啶基二硫代)-甲苯(SMPT)、N-琥珀酰亞氨基-3-(2-吡啶基二硫代)丁酸酯(SDPB)、琥珀酰亞氨基吡啶基二硫代丙酸酯(SPDP)、4-(2-吡咬基二硫代)丁酸N-羥基琥珀酰亞氨基酯(SPDB)、琥珀酰亞氨基4-[N-馬來(lái)酰氨基曱基]環(huán)己烷-1-羧酸酯(SMCC)、N-硫基琥珀酰亞氨基_3-{-2-(5-硝基-他啶二硫基)丁酸酯(SSNPB)、2-亞氨基硫烷或通過(guò)S-乙酰基琥珀酸酐通過(guò)已知方法改性。參見(jiàn)Carlsson等，173Biochem.J.723-737(1978);Blattler等,24Biochem.1517-1524(1985);Lambert等,22Biochem.3913-3920(1983);Klotz等，96Arch.Biochem.Biophys.605(1962);和Liu等，18Biochem.690(1979),Blakey和Thorpe,1Antibody:Immunoconjugates&Radiopharmaceuticals,1-16(1988),Worrell等1Anti-CancerDrugDesign179-184(1986)。由此衍生的含游離或保護(hù)的石充醇細(xì)胞結(jié)合藥物隨后與含二硫化物或硫醇的茅屋霉素衍生物反應(yīng)以生產(chǎn)結(jié)合物。結(jié)合物可用HPLC或凝:月交過(guò)濾法純化。優(yōu)選單克隆抗體-或細(xì)胞結(jié)合藥物-茅屋霉素衍生物結(jié)合物是經(jīng)如上討論二硫化物鍵連接的物質(zhì)，它們能夠釋放茅屋霉素衍生物。該細(xì)胞結(jié)合藥物通過(guò)已知方法制備，例如用琥珀酰亞氨基吡啶基-二硫基丙酸鹽(SPDP)改性的單克隆抗體(Carlsson等，173Biochem.J.723-737(1978))。生成的硫代吡啶基隨后通過(guò)用含硫醇的茅屋霉素衍生物替代以產(chǎn)生二硫化物連接的結(jié)合物?；蛘撸诜蓟蚧?茅屋霉素衍生物的情況下，細(xì)胞結(jié)合結(jié)合物的形成通過(guò)用預(yù)先引入抗體分子的巰基直接置換茅屋霉素衍生物的芳基硫醇實(shí)現(xiàn)。含有1-10個(gè)經(jīng)二硫化物橋連接的茅屋霉素衍生物的結(jié)合物容易用兩種方法的任何一種制備。更具體地，在含有2mMEDTA,pH7.5的0.05M磷酸鉀緩沖液中濃度為2.5mg/ml的二硫基-硝基吡啶基改性的抗體溶液用含硫醇茅屋霉素衍生物(1.3molareq/二硫基吡啶基)處理，硫基-硝基吡啶由改性抗體中的釋放在325nm用分光光度滴定法測(cè)量，在約16個(gè)小時(shí)內(nèi)完成。純化抗體隱茅屋霉素衍生物結(jié)合物通過(guò)Sephadexg陽(yáng)25或SephacrylS300柱的凝膠過(guò)濾除去未反應(yīng)藥物和其它低分子物質(zhì)。每個(gè)抗體分子結(jié)合的茅屋霉素書t生物的數(shù)量可通過(guò)測(cè)量在230nm和275nm的吸光率比率確定，通過(guò)此方法，平均l-10個(gè)茅屋霉素衍生物分子/抗體分子可經(jīng)二硫化物連接?？梢杂孟惹坝蒐iu等，93Proc.Natl.Acad.Sci8618-8623(1996)描述的方法測(cè)量基于結(jié)合親合力對(duì)抗原表達(dá)細(xì)胞的結(jié)合效果。茅屋霉素衍生物和其抗體結(jié)合物對(duì)細(xì)胞系的細(xì)胞毒性可通過(guò)如Goldmacher等，135J.Immunol.3648-3651(1985)中所述的細(xì)月包繁殖曲線的反外推法測(cè)量。這些化合物對(duì)粘附細(xì)月包系的細(xì)胞毒性可通過(guò)如Goldmacher等，102J.CellBiol.1312-1319(1986)中所述的clonogenic試驗(yàn)測(cè)定。本發(fā)明的代表性結(jié)合物是茅屋霉素衍生物與抗體、抗體片段、表皮生長(zhǎng)因子(EGF)、促黑素(MSH)、促曱狀腺素(TSH)、雌激素、雌激素類似物、雄激素、雄激素類似物的結(jié)合物。衍生物和細(xì)胞結(jié)合藥物的各種結(jié)合物制備方法的代表性實(shí)例描述如下。二硫化物連接物:例如單克隆抗體MY9是鼠科IgGi抗體，它特異地結(jié)合CD33抗原{J.D.Gnffin等8LeukemiaRes.,521(1984)},如果目標(biāo)細(xì)胞表達(dá)CD33作為急性骨髓性白血病(ALM)疾病時(shí)可以使用。同樣，單克隆抗體抗-B4是鼠科IgGp它結(jié)合于B細(xì)胞的CD19抗原(Nadler等，131J.Immunol.244-250(1983)},如果目標(biāo)細(xì)胞是B細(xì)胞或表達(dá)此抗原的疾病細(xì)胞時(shí)，例如在非霍奇金淋巴瘤或慢性成淋巴細(xì)胞白血病中，可以使用。此外，結(jié)合骨髓細(xì)胞的GM-CSF可用作細(xì)胞結(jié)合藥物用于急性骨髓頁(yè)性白血病的疾病細(xì)胞。結(jié)合于活化T-細(xì)胞的IL-2可用于預(yù)防移植排異，用于治療和預(yù)防移植物抗宿主病，用于治療急性T細(xì)胞白血病。結(jié)合于黑素細(xì)胞的MSH用于治療黑素瘤?？贵w或其它細(xì)胞結(jié)合藥物用如上所述的N-琥珀酰亞氨基-3-敗啶基二石?；猁}改性(J.Carlsson,H.Drevin&R.Axen,Biochem.J.,173:723(1978"以每個(gè)抗體分子平均引入4個(gè)吡啶基二硫基基團(tuán)，改性的分子與含硫醇衍生物反應(yīng)以產(chǎn)生二硫化物連接的結(jié)合物?；蛘?，結(jié)合物可采用和/或適用在WO2004/103272中7>開(kāi)的方法制備，所述專利中的教導(dǎo)列為本文參考文獻(xiàn)。石危醚連接物:本發(fā)明的含硫醇衍生物可如上所述(U.S.PatNo.5,208,020)經(jīng)硫醚鏈連接于抗體和其它細(xì)胞結(jié)合藥物。抗體或其它細(xì)胞結(jié)合藥物可用商業(yè)獲得的化合物，例如N-琥珀酰亞氨基4-(馬來(lái)亞酰氨基曱基)環(huán)己烷羧酸酯(SMCC)、^琥珀酰亞氨基-4-(]^-馬來(lái)亞酰氨基甲基)-環(huán)己烷-1-羧基-(6-酰氨基-己酸酯)(它是SMCC的"長(zhǎng)鏈"類似物)(LC-SMCC)改性。這些交聯(lián)劑形成由馬來(lái)亞酰氨基部分衍生的不可斷裂連接物。包含鹵代乙?；糠值慕宦?lián)劑包括N-琥珀酰亞氨基-4-(碘乙?；?-氨基苯甲酸酉旨(SIAB)、N-琥珀酰亞氨基碘乙酸酯(SIA)、N-琥珀酰亞氨基溴乙酸酯(SBA)和N-琥珀酰亞氨基3-(溴乙酰氨基)丙酸酯(SBPA)。這些酸不穩(wěn)定連接物:本發(fā)明的含氨基衍生物可如上所述(W.A.Blattler等，Biochemistry24,1517-1524(1985);U.S4,542,225,4,569,789,4,618,492,4,764,368}經(jīng)酸不穩(wěn)定連接物連接于抗體和其它細(xì)胞結(jié)合藥物。同樣，含hydrazido基團(tuán)的本發(fā)明衍生物可經(jīng)酸不穩(wěn)定腙連接物連接于抗體和其它細(xì)胞結(jié)合藥物的碳水化合物部分{腙連接物的實(shí)例參見(jiàn)B.C.Laguzza等,J.Med.Chem.,32,548-555(1989);R.S.greenfield等,CancerRes,,50,6600-6607(1990)}。光不穩(wěn)定連接物:本發(fā)明的含胺基團(tuán)衍生物可經(jīng)如上所述(P.Senter等，PhotochemistryandPhotobiology,42,231-237(1985);U.S.Pat.No.4,625,014}的光不穩(wěn)定連接物連接于抗體和其它細(xì)胞結(jié)合藥物。肽酶不穩(wěn)定連接物:本發(fā)明的含胺基團(tuán)衍生物還可經(jīng)肽間隔基連接于細(xì)胞結(jié)合藥物。如上所示，在藥物和大分子蛋白質(zhì)載體之間的短肽間隔基在血清中是穩(wěn)定的，4旦容易一皮細(xì)月包內(nèi)肽酶水解(A.Trouet等，Proc.Natl.Acad.Sci.,79，626-629(1982)}。含氨基衍生物可用縮合劑，例如1-乙基-3-(3-二曱基氨基-丙基)碳化二亞胺-HCl(EDC-HCl)與肽縮合得到肽衍生物，它可連接于細(xì)J包結(jié)合藥物。酯酶不穩(wěn)定連接物:帶有羥基的本發(fā)明的衍生物可用琥珀酸酐琥珀酰基化，隨后連接于細(xì)胞結(jié)合藥物以產(chǎn)生結(jié)合物，它可通過(guò)細(xì)胞內(nèi)酯酶斷裂以釋放游離藥物{例如參見(jiàn)E.Aboud-Pirak等，BiochemPharmacol.,38,641-648(1989)}。通過(guò)上述方法制備的結(jié)合物可用標(biāo)準(zhǔn)色譜技術(shù)，例如尺寸排除、吸附色譜法，包括，但不限于，離子交換、疏水相互作用色譜法、親合力色譜法、基于陶瓷羥磷灰石或Porapak的色語(yǔ)法或通過(guò)HPLC純化。也可采用通過(guò)透析或過(guò)濾純化。單克隆抗體或細(xì)胞結(jié)合藥物和本發(fā)明的衍生物的結(jié)合物優(yōu)選是經(jīng)如上所述的二硫化物鍵連接的物質(zhì)。該細(xì)胞結(jié)合藥物通過(guò)已知方法制備，例如用琥珀酰亞氨基吡啶基-二硫基丙酸鹽(SPDP)改性單克隆抗體(Carlsson等，173Biochem.J.723-737(1978)}。生成的石克代吡咬基隨后通過(guò)用含硫醇的衍生物替代以產(chǎn)生二石?；镞B接的結(jié)合物。含有1-10個(gè)經(jīng)二硫化物橋連接的衍生物的結(jié)合物容易用此方法制備。通過(guò)此方法的結(jié)合過(guò)程在US5,585,499中充分描述，其列為本文參考文獻(xiàn)。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選方面，細(xì)胞結(jié)合藥物是抗體，尤其是單克隆抗體。根據(jù)本發(fā)明的另一優(yōu)選方面，細(xì)胞結(jié)合藥物是抗原特異的抗體片段，例如FV、Fab、Fab，或F(ab，)2。根據(jù)其它目的，本發(fā)明還涉及藥物組合物，其含有如上定義的本發(fā)明的結(jié)合物分子或式(I)化合物與可藥用的載體。根據(jù)其它目的，本發(fā)明還涉及殺死或抑制細(xì)胞，優(yōu)選選擇的細(xì)胞群落生長(zhǎng)的方法，其包括使目標(biāo)細(xì)胞或含有目標(biāo)細(xì)胞的組織與有效量的本發(fā)明的藥物組合物接觸。選擇的細(xì)胞群落是癌和/或繁殖細(xì)胞。根據(jù)其它目的，本發(fā)明還涉及治療，優(yōu)選選擇性治療癌癥的方法，其包括向需要的患者給藥有效量的本發(fā)明的藥物組合物。根據(jù)本發(fā)明，"選擇性治療癌癥"是指殺死癌和/或繁殖細(xì)胞，基本上不殺死正常和/或非繁殖細(xì)胞。根據(jù)其它目的，本發(fā)明還涉及如上定義的本發(fā)明的結(jié)合物分子或式(I)化合物用于制備治療癌癥的藥物的用途。用于抑制選擇的細(xì)胞群落生長(zhǎng)的方法可體外、體內(nèi)或生物體外(exvivo)實(shí)行。需變體外的所有細(xì)胞或以殺死表達(dá)不需要抗原的變體。非臨床體外使用的條件容易地由熟練技術(shù)人員確定。生物體外使用的實(shí)例包括在移植入同一患者前處理自體同源骨髓以殺死疾病的或惡性的細(xì)胞在移植之前處理骨髓以殺死勝任的T細(xì)胞，防止移植物抗宿主病(GVHD)。臨床生物體外處理以在癌癥治療的自體同源移植前或治療自體免疫疾病中由骨髓除去腫瘤細(xì)胞或淋巴細(xì)胞，或在移植前為預(yù)防GVHD由異源骨髓或組織中除去T細(xì)胞和其它淋巴細(xì)胞可如下進(jìn)行。由患者或其它個(gè)體收集骨髓，隨后在含有加入本發(fā)明的細(xì)胞毒素藥物，濃度范圍為約10pM-lpM的血清的培養(yǎng)基中在約37。C培養(yǎng)約30分鐘至約48小時(shí)。濃度的確切時(shí)間和培養(yǎng)時(shí)間(=劑量)由本領(lǐng)域技術(shù)人員容易地確定。在培養(yǎng)后，骨髓細(xì)胞用含有血清的培養(yǎng)基洗滌，根據(jù)已知方法通過(guò)靜脈內(nèi)輸液返回患者。在患者接受其它治療，例如在抽取骨髓和重新輸液處理的細(xì)胞的時(shí)間內(nèi)單獨(dú)的化學(xué)療法或全身放射治療過(guò)程中處理的骨髓細(xì)胞用標(biāo)準(zhǔn)醫(yī)學(xué)i殳備貯存在液氮中冷凍。對(duì)于臨床體內(nèi)用途，本發(fā)明的細(xì)胞結(jié)合藥物將作為測(cè)試為無(wú)菌和測(cè)試內(nèi)毒素含量的溶液供給。合適的結(jié)合物給藥制度如下，結(jié)合物作為體內(nèi)塊造影劑團(tuán)每周給藥持續(xù)6周，所給的塊劑量為可加入的人體血清白蛋白正常鹽的50-400mL(例如0.5-lmL人血清白蛋白濃縮溶液，100mg/mL)。劑量將為每周體重的約50嗎-10mg/kg，i.v.(每次注射10(xg-100mg/kg)。在治療后6周，患者可接受第二次治療過(guò)程，具體臨床制度與給藥途徑、賦形劑、稀釋劑、劑量、時(shí)間等有關(guān)，可由熟練技術(shù)人員根據(jù)臨床狀況確定。可根據(jù)殺死選擇的細(xì)胞群落體內(nèi)或生物體外方法治療的醫(yī)學(xué)癥狀的實(shí)例包括所有類型的惡性腫瘤，包括例如肺、乳腺、結(jié)腸、前列腺、腎、胰腺、卵巢和淋巴器官癌；黑素瘤；自體免疫疾病，例如系統(tǒng)性狼癡、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和多發(fā)性硬化；移植排異，例如腎移植排異、肝移植排異、肺移植排異、心臟移植排異和骨髓移植排異；移植物抗宿主??；病毒感染，例如CMV感染、HIV感染、AIDS等；細(xì)菌感染；和寄生蟲(chóng)感染，例如賈第鞭毛蟲(chóng)病、阿米巴病、血吸蟲(chóng)病和其它由本領(lǐng)域技術(shù)人員確定的疾病。那些需要本文描述的疾病和癥狀治療的患者的確定在本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力和知識(shí)內(nèi)是已知的。本領(lǐng)域獸醫(yī)或臨床醫(yī)生可通過(guò)釆用臨床測(cè)試、身體檢查、醫(yī)學(xué)/家庭歷史或生物學(xué)和診斷試驗(yàn)容易地確定需要該治療的患者。治療有效量可容易地通過(guò)主治診斷醫(yī)生作為本領(lǐng)域技術(shù)人員通過(guò)使用常規(guī)技術(shù)和通過(guò)觀察類似環(huán)境下得到的結(jié)果確定。在確定治療有效量時(shí)，主治診斷醫(yī)生考慮許多因素，包括，但不限于，患者種類、體重、年齡和一般健康；所包含的特殊疾病；患病程度或疾病的嚴(yán)重程度；個(gè)體患者的響應(yīng)；給藥的具體化合物；給藥模式；給藥制劑的生物利用率特性；所選擇的劑量制度；伴隨藥物治療的使用；和其它相關(guān)環(huán)境。需要獲得所需生物學(xué)效果的式(I)化合物或結(jié)合物的數(shù)量將根據(jù)許多因素變化，包括所采用的化合物的化學(xué)特性(例如疏水性)、化合物效力、疾病類型、患者所屬的種類、患者疾病狀態(tài)、給藥途徑、通過(guò)選擇的途徑化合物的生物利用率，所有因素指示給藥的所需劑量、傳送和療法。"制藥的"或"可藥用的"是指分子實(shí)體和組合物在根據(jù)需要向動(dòng)物或人給藥時(shí)不產(chǎn)生不利、過(guò)敏或其它不幸的反應(yīng)。用于本文的"可藥用的賦形劑"包括任何載體、稀釋劑、輔料或賦形劑，例如防腐或抗氧化劑、填料、崩解劑、潤(rùn)濕劑、乳化劑、懸浮劑、溶劑、分散介質(zhì)、涂層、抗菌和抗真菌劑、等滲和吸收延遲劑等。藥物活性物質(zhì)的這些介質(zhì)和試劑的使用是本領(lǐng)域中已知的，除了與活性成分不相容的任何常規(guī)介質(zhì)或試劑外，凈皮預(yù)期在治療組合物中的用途。附助活性成分也可加入組合物中作為合適的治療組合。在
發(fā)明內(nèi)容中，用于本文的術(shù)語(yǔ)"治療"或"處理"是指逆轉(zhuǎn)、減緩、抑制該術(shù)語(yǔ)適用的疾病或狀況或一種或多種該疾病或狀況的癥狀的進(jìn)程或預(yù)防。根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語(yǔ)"患者"或"需要治療的患者"是指被本文提及的病理學(xué)癥狀侵襲或很可能被侵襲的動(dòng)物或人，患者優(yōu)選是人。在一般情況下，本發(fā)明的化合物可以用于腸胃外給藥的含有0.1-10%W/V化合物的含水生理學(xué)緩沖溶液提供，典型劑量范圍為每天ljxg/kg-0.1g/kg體重，優(yōu)選劑量范圍是每天0.01mg/kg-10mg/kg體重或在兒童中的相當(dāng)劑量。所給藥的優(yōu)選藥物劑量同樣取決于變量，諸如疾病或癥狀的類型和進(jìn)展程度、特定患者的整體健康狀態(tài)、所選擇的化合物的相對(duì)生物學(xué)效力、化合物的制劑、給藥途徑(靜脈內(nèi)、肌內(nèi)等)、經(jīng)選擇的輸送途徑的化合物藥物動(dòng)力學(xué)性質(zhì)，和給藥的速率(團(tuán)或連續(xù)輸液)和時(shí)間表(在一定時(shí)間周期內(nèi)重復(fù)的次數(shù))。本發(fā)明的化合物還能夠以單位劑量形式給藥，其中"單位劑量"是指能夠向患者給藥的單一劑量，它可容易地操作和包裝，保持為物理和化學(xué)穩(wěn)定的單位劑量，其含有活性化合物本身，或作為本文如下描述的可藥用的組合物。同樣，典型的總?cè)談┝糠秶鸀?.01-100mg/kg體重，作為一般指導(dǎo)，用于人體的單位劑量為每天lmg-3000mg。優(yōu)選單位劑量范圍為l-500mg，一天給藥1-6次，更優(yōu)選10mg-500mg,每天一次。本文提供的化合物可通過(guò)與一種或多種可藥用的賦形劑混合配制成藥物組合物。該單位劑量組合物可制備用于口服給藥，尤其是以片劑、簡(jiǎn)單膠嚢或軟凝膠膠嚢形式；或鼻內(nèi)給藥，尤其是以粉末、鼻滴劑或氣溶膠形式；或皮力夫給藥，例如局部軟膏、乳液、洗液、凝"交或噴霧劑，或經(jīng)皮下斑點(diǎn)。組合物可方便地以單位劑量形式給藥，可通過(guò)制藥領(lǐng)域已知的任何方法制備,例J;口Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy,20thed;gennaro,A.R.,Ed.;LippincottWilliams&Wilkins:Philadelphia,PA,2000中所述。優(yōu)選的制劑包括藥物組合物，其中本發(fā)明的化合物配制成用于口服或腸胃外給藥。用于口服給藥，片劑、丸劑、粉劑、膠嚢、錠劑等，可含有一種或多種任一如下成分或類似性質(zhì)的化合物粘合劑，例如微晶纖維素或黃蓍膠；稀釋劑，例如淀粉或乳糖；崩解劑，例如淀粉和纖維素衍生物；潤(rùn)滑劑，例如硬脂酸鎂；滑動(dòng)劑，例如膠體二氧化硅；增甜劑，例如蔗糖或糖精；或調(diào)味劑，例如薄荷油或曱基水楊酸酯。膠嚢可以是硬膠嚢或軟膠嚢形式，它們通常由凝膠珠任選與增塑劑混合制備，以及淀粉膠嚢。此外，劑量單位形式可含有各種改進(jìn)劑量單位物理形式的其它材料，例如糖、蟲(chóng)漆或腸溶劑的涂層。其它口服劑量形式糖漿或酏劑可含有增甜劑、防腐劑、染料、著色劑和香料。此外，活性化合物可加入快速溶解、改性釋放或延遲釋放制劑和配方中，其中該延遲釋放配方優(yōu)選是雙峰的。優(yōu)選的片劑含有任何組合的乳糖、玉米淀粉、硅酸鎂、交聯(lián)羧曱基纖維素鈉、聚維酮、硬脂酸鎂或滑石。用于腸胃外給藥的液體制劑包括無(wú)菌含水或非水溶液、懸浮液或乳液。液體組合物還可包括粘合劑、緩沖劑、防腐劑、螯合劑、增甜劑、香料和著色劑等。非水溶劑包括酒精、丙二醇、聚乙二醇、植物油，例如橄欖油、和有機(jī)酯，例如乙基油酸酯。含水載體包括酒精和水的混合物、緩沖介質(zhì)和鹽水。尤其是生物相容的、生物可降解的交酯聚合物、交酯/乙交酯共聚物或聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物可以是有用的賦形劑以控制活性化合物的釋放。靜脈內(nèi)賦形劑可包括液體和營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充物、電解質(zhì)補(bǔ)充物，例如基于Ringer's葡萄糖的物質(zhì)等。其它用于這些活性化合物的潛在有用的腸胃外輸送體系包括乙烯-乙烯基乙酸酯共聚物微粒、滲透泵、可才直入輸液體系和脂質(zhì)體。給藥的其它方式包括用于吸入的配方，其包括用于干粉、氣溶膠或液滴的手段。它們可以是含有例如聚氧乙烯-9-月桂基醚、甘膽酸酯和脫氧膽酸酯的含水溶液，或用于鼻滴液形式給藥的油質(zhì)溶液或作為鼻內(nèi)適用的凝膠。用于頰給藥的制劑包括，例如糖錠或錠劑，還可包括香料基質(zhì)，例如蔗糖或阿拉伯樹(shù)膠，和其它賦形劑，例如甘膽酸酯。適用于直腸給藥的配方優(yōu)選作為單位劑量栓劑存在，其含有固體基質(zhì)載體，例如可可脂，或包括水楊酸酯。用于皮膚局部適用的配方采取軟膏、乳液、洗液、漿、凝膠、噴霧劑、氣溶膠或油形式。可使用的載體包括凡士林油、羊毛脂、聚乙二醇、醇或其組合。適用于經(jīng)皮給藥的配方可作為離散斑片存在，可以是溶解和/或分散在聚合物或粘合劑中的親脂性乳液或緩沖的含水溶液。附圖附圖la表示huB4-SPDB-實(shí)施例16化合物對(duì)抗原陰性BJAB細(xì)胞和抗原陰性MOLT-4細(xì)胞的體外效力。附圖lb表示huB4-SMCC-實(shí)施例16化合物對(duì)抗原陰性BJAB細(xì)胞和抗原陰性MOLT-4細(xì)l包的體外歲丈力。附圖lc表示實(shí)施例16的游離化合物對(duì)BJAB和MOLT-4細(xì)胞的體夕卜效力。附圖2a表示huB4-SPDB-實(shí)施例17化合物對(duì)抗原陰性BJAB細(xì)胞和抗原陰性M0LT-4細(xì)月包的體外效力。附圖2b表示huB4-SMCC-實(shí)施例17化合物對(duì)抗原陰性BJAB細(xì)胞和抗原陰性MOLT-4細(xì)胞的體外效力。附圖2c表示實(shí)施例17的游離化合物對(duì)BJAB和MOLT-4細(xì)胞的體夕卜效力。附圖3a表示huMy9-6-SPDB-實(shí)施例16化合物對(duì)抗原陽(yáng)性HL60/GC細(xì)月包和抗原陰性Ramos細(xì)l包的體外效力。附圖3b表示實(shí)施例16的游離化合物對(duì)HL60/GC細(xì)胞和Ramos細(xì)胞的體外效力。發(fā)明進(jìn)一步通過(guò)如下實(shí)施例的描述說(shuō)明，但不受其限制。實(shí)驗(yàn)部方法A1:高壓液相色i普-質(zhì)i普(LCMS)使用MicromassMassLynx軟件，分析在帶有THERMOHypersilgoldC183pm柱(50x3mm)的Agilent1100系列HPLC中進(jìn)行，采用(A)乙腈和(B)水/0.P/Q曱酸的混合物以0.8mL/分鐘的流量進(jìn)行梯度洗脫(梯度5%A:95%B上升至95%A:5%B,超過(guò)5分鐘，95%A:5%B0.5分鐘,95%A:5%B下降至5%A:95%B超過(guò)1分鐘，5%A:95%B0.5分鐘)；帶有Electrospray(正和負(fù)離子化)的Waters-MicromassPlatformI、PlatformII或ZQ分光光度儀；串聯(lián)DiodeArray(190-490nm);輔助檢測(cè)器Sedere(France)modelSEDEX65EvaporativeLightScattering(ELS)才企測(cè)器。方法A2:高壓液相色鐠-質(zhì)譜(LCMS)使用MicromassMassLynx軟件，分析在帶有WATERSXBndgeC183,5柱(IOOx3mm)的WatersAllianceHPLC中進(jìn)行，采用(A)甲醇和(B)水/0.1%甲酸的混合物以1.1mL/分鐘的流量進(jìn)4亍梯度洗脫(梯度5%A:95%B上升至95%A:5%B,超過(guò)10分鐘，95%A:5%B下降至5%A:95%B超過(guò)1分鐘，5%A:95%B2分鐘)；帶有Electrospray(正和負(fù)離子化)的Waters-MicromassPlatformII分光光度儀；串聯(lián)DiodeArray(190陽(yáng)500nm);輔助才企測(cè)器Sedere(France)ModelSEDEX85EvaporativeLightScattering(ELS)沖全測(cè)器。方法A3:高壓液相色i普-質(zhì)i普(LCMS)使用MicromassMassLynx軟件，分析在帶有XBridgeC182.5pm柱(50x3mm)的Agilent1100系列HPLC中進(jìn)行，采用(A)乙腈和(B)水/O.P/0甲酸的混合物以1.1mL/分鐘的流量進(jìn)行梯度洗脫(梯度5%A:95%B上升至100%A,超過(guò)5分鐘，100%A0.5分鐘，100%A下降至5%A:95%B超過(guò)1分鐘，5%A:95%B0.5分鐘)；帶有Electrospray的Waters國(guó)MicromassZQ分光光度儀；串聯(lián)DiodeArray(210畫254nm)。方法B:高壓液相色譜(HPLC)純化HPLC純^tt:用MachereyNagelNucleodurC18gravity5jxM4主(21x100mm,目錄編號(hào)762101)進(jìn)行，用(A)乙腈和(B)水的混合物以15mL/分鐘流量(方法Bl)或20mL/分鐘(方法B2)洗脫(梯度5%A:95%B5分鐘，5%A:95。/。B上升至100%A超過(guò)20分鐘，100%A8分鐘，100%A至5%A:95%B超過(guò)1分鐘，5%A:95%B11分4中)。方法C:電子電離(EI)質(zhì)i普EI質(zhì)i普用FinniganSSQ7000質(zhì)譜儀(E1型70eV,離子源溫度=150°C,直接輸入)進(jìn)行。方法D:化學(xué)電離(CI)質(zhì)譜CI質(zhì)譜用FinniganSSQ7000質(zhì)i普儀(氨)記錄。方法E:力核磁共振(NMR)光譜1HNMR光i普用BmkerAvanceDrx國(guó)500、BrukerAvanceDrx-400或BmkerAvanceDRX-300記錄。方法F:高壓液相色鐠(HPLC)純化HPLC純化用MachereyNagelVP250/40mmNUCLEODURgRAVITY100-10C18(目錄編號(hào)762250)進(jìn)4亍，以70mL/分鐘的流量用(A)乙腈和(B)水/HCOONH40,01m/NH4OHpH9-10的混合物洗脫(梯度10%A:90%B3分鐘，10%A:90%B上升至95%A:5%B超過(guò)37分鐘，95%A:5%B8分鐘，95%A:5%B至10%A:90%B超過(guò)1分鐘，10%A:90%B1分鐘)。方法G1:高壓液相色譜-質(zhì)譜(LCMS)使用MicromassMassLynx軟件，分析在帶有AcquityUPLCBEHCI81,7]Lim柱(2.1xl00mm)AcquityUPLC進(jìn)行，以1.1mL/分鐘的流量用(A)乙腈和(B)水/O.P/。曱酸的混合物進(jìn)行梯度洗脫(梯度5%A:95%B上升至95%A:5%B超過(guò)4.7分鐘，95%A:5%B下降至5%A:95%B超過(guò)0.5.鐘，5%A:95%B0.8分鐘)；帶有Electrospray的QuattroPremier分光4義；串聯(lián)DiodeArray(210-400nm)。方法G2:高壓液相色譜-質(zhì)譜(LCMS)使用MicromassMassLynx軟件，分析在帶有AcquityUPLCBEHCI81,7柱(2.1xl00mm)的AcquityUPLC進(jìn)行，以0.6mL/分鐘的流量用(A)乙腈和(B)水/O.P/。曱酸的混合物進(jìn)行梯度洗脫(梯度5%A:95%B上升至95%A:5%B超過(guò)10分鐘，95%A:5%B下降至5%A:95%B超過(guò)1分鐘，5%A:95°/。B2分鐘)；帶有Electrospray的QuattroPremier分光4義；串聯(lián)DiodeArray(210-400nm)。方法H:高壓液相色譜(HPLC)純化方法HPLC純化用帶有Kromasil16pjnC18柱(250x21.2mm,PNA0490-250x212,Lot.No.DT0259,SN9772196)的VarianHPLC進(jìn)行，以20mL/分鐘的流量用(A)水和(B)乙腈的混合物洗脫。收集時(shí)間為80秒?；衔锏馁|(zhì)譜用BrukerEsquire3000裝置獲得，NMR譜用400MHz操作的BrukerAvance分光4義"i己錄。洗脫柱的梯度1.8,8，-[5-(N-4-曱基二硫基-4,4-二曱基丁?；?氨基-l,3-苯二基二(亞曱氧基)]-二[7-曱氧基-2-亞曱基-l,2,3,lla-四氫-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]純化55%A:45%B8分鐘，55%A:45%B至50%A:50%B超過(guò)14分鐘，50%A:50%B至10%A:卯％B超過(guò)4分鐘，10%A:90%B5分鐘，10%A:90%B至55%A:45%B超過(guò)1分鐘，55%A:45%B3分鐘。2.8,8，-[5-(N-4-巰基-4,4-二甲基丁?；?氨基-U-苯二基二(亞甲氧基)]-二[7-甲氧基-2-亞甲基-l,2,3,lla-四氫-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜革-5-酮]純化60%A:40%B4分鐘，60%A:40%B至55%A:45%B超過(guò)5分鐘，55%A:45%B4分鐘，55%A:45%B至50%A:50%B超過(guò)13分鐘，50%A:50%B至10%A:90%B超過(guò)10秒，10%A:90%B5分鐘，10%A:90%B至60%A:40%B超過(guò)10秒，60%A:40%Bfor3分鐘。3.8,8，-[5-(N-曱基-N-(2-曱基二硫基-212-二曱基乙基)氨基-l,3-苯二基(亞曱氧基)]-二[7-曱氧基-2-亞甲基-l,2,3，lla-四氳-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]純化60%A:40%B8分鐘，60%A:40%B至45%A:55%B超過(guò)16分鐘，45%A:55%B至10%A:90%B超過(guò)2分鐘，10%A:90%B5分鐘,10%A:90%B至60%A:40%B超過(guò)1分鐘，60%A:40%B3分鐘。4.8,8，-[5-(N-曱基-N-(2-巰基-2,2-二曱基乙基)氨基-l,3-苯二基(亞甲氧基)]-二[7-曱氧基-2-亞曱基-l,2,3,lla-四氫-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]純化65%A:35%B至60°/。A:40%B超過(guò)8分鐘，60%A:40%B至50%A:50%B超過(guò)19分鐘，50%A:50%B至10°/。A:90%B超過(guò)10秒，10%A:90%B5分鐘，10%A:90%B至65%A:35%B超過(guò)10秒，65%A:35%B3分鐘。實(shí)施例1:8，8，-[l,3-苯二基二(亞甲氧基)]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-曱氧基-1,2,3,11a-四氫-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]將碳酸鉀(22.8mg)、a,a，-二溴-m-二甲苯(7.3mg)和碘化鉀(9.1mg)加入pre-茅屋霉素(15mg)在二甲基甲酰胺(0.5mL)中的攪拌溶液中。反應(yīng)物在30。C攪拌20小時(shí)，過(guò)濾出固體，用二甲基甲酰胺(0.2mL)洗滌兩次，隨后丟棄。向混合的二甲基甲酰胺溶液中加入水(0.4mL),得到的溶液注射進(jìn)行方法Bl的HPLC純化。合并合適的餾分，在JouanModelRC10.10裝置中通過(guò)離心蒸發(fā)濃縮得到8,8，-[1,3-苯二基二(亞甲氧基)]-二[(8)-2-亞乙-(E)-基-7-甲氧基-l,2，3,11a-四氫-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]白色粉末(3.33mg):LC/MS(方法Al,PlatformII):ES:m/z=647MH+保留時(shí)間=3.53分鐘丄HN.M.R.(500MHz,CDCl3-dl,Sppm):l,75(d,J=7,0Hz，6H);2,96(m,4H);3，89(m,2H);3,96(s,6H);4,27(sb,4H);5,17(d,J=12,5Hz,2H);5,23(d,H2,5Hz,2H);5,60(m,2H);6,85(s,2H);7,36畫7,43(m，3H);7,51(sb,IH);7,53(s,2H);7，63(d,J=4，5Hz,2H)。實(shí)施例2:8,8，-[5-甲氧基-l,3-苯二基二(亞甲氧基)]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基誦7畫甲氧基-l,2,3,lla畫四氫-5H誦吡咯并[2,l國(guó)c][l,4〗苯并二氮雜萆國(guó);5-酮]根據(jù)制備8,8，-[l,3-苯二基二(亞甲氧基)]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-甲氧基-1,2,3,11a-四氫-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮](實(shí)施例1)的方法，以1,3-二-溴甲基-5-甲氧基-苯為原料可制備8,8，-[5-甲氧基-1,3-苯二基二(亞甲氧基)]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-曱氧基-l,2,3,lla-四氫-5H國(guó)吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]:LC/MS(方法Al,PlatformII):ES:m/z=677固+保留時(shí)間=4.17分鐘&N.M.R,(300固z,CDCl3-dl,5ppm):l,75(d,J=7,0Hz,6H);2,96(m,4H);3,81(s,3H);3,89(m,2H);3,96(s,6H);4,26(sb，4H);5,14(d,J=12，5Hz,2H);5,21(d,J=12,5Hz,2H);5,60(m,2H);6,82(s,2H);6,95(sb:2H);7,07(sb,1H);7,53(s,2H);7,63(d,J=4,5Hz,2H)。1,3-二-溴甲基-5-甲氧基-苯可如下制備在氬氣中，將四溴化碳(663mg)加入1-溴曱基-3-羥基甲基-5-甲氧基-苯(420mg)在無(wú)水二氯甲烷(10mL)中的攪拌溶液中，在Ot冷卻得到的溶液，滴加三苯基膦(500mg)在無(wú)水二氯曱烷(10mL)中的溶液。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌20小時(shí)，隨后真空濃縮至殘余物。殘余物用硅膠色譜法(MerckSuperVarioFlash30g柱，Si6015-40(im,用二氯甲烷/庚烷40:60洗脫)純化得到1,3-二-溴曱基-5-曱氧基-苯(170mg):El(方法C):m/z=292m+m/z=213[M-Br]+m/z=134[213-Br]+iHN.M.R.(400MHz,DMSO-d6,Sppm):3,77(s,3H);4,65(s,4H);6,98(sb2H);7,10(sb,IH)。l-溴甲基-3-羥基甲基-5-曱氧基-苯可如下制備<formula>formulaseeoriginaldocumentpage60</formula>在氬氣中，將四溴化碳(3.47g)加入1,3-二羥基甲基-5-甲氧基-苯(800mg)在無(wú)水二氯甲烷(16mL)中的攪拌溶液中，在Ot:冷卻得到的溶液，滴加三苯基膦(2.68g)在無(wú)水二氯曱烷(16mL)中的溶液。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌20小時(shí)，隨后真空濃縮至殘余物。殘余物用硅膠色譜法(MerckSuperVarioFlash90g柱，Si6015-40|nm,用甲醇/二氯曱烷4:96洗脫)純化得到l-溴甲基-3-羥基甲基-5-甲氧基-苯(420mg):EI(方法C):m/z=230m+m/z=151[M-Br]+丄HNM.R.(400MHz,DMSO-d6,5ppm):3,75(s,3H);4,46(db,J=5,5Hz,2H);4,65(s,2H);5,22(tb,J=5,5Hz，1H);6,83(sb,1H);6.88(sb,1H);6,97(sb,IH)。實(shí)施例3:8,8，-[l,5-戊二基二(氧基)]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-曱氧基-1,2,3,1la-四氳-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]<formula>formulaseeoriginaldocumentpage60</formula>將碳酸鉀(22.8mg)和1,5-二碘代戊烷(8.2pL)加入pre-茅屋霉素(15mg)在二曱基曱酰胺(0.5mL)中的攪拌溶液中，反應(yīng)物在室溫下攪拌20小時(shí)，加入附加部分的碳酸鉀(8mg)。反應(yīng)物再在室溫下攪拌20小時(shí)。過(guò)濾出固體，二曱基甲酰胺溶液根據(jù)方法B2注射進(jìn)行HPLC純化，合并合適餾分，用JouanModelRC10.10.裝置離心蒸發(fā)濃縮得到8,8，-[l,5-戊二基二(氧基)]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-甲氧基-l,2,3,lla-四氬-511-吡咯并[2,1《][1，4]苯并二氮雜萆-5-酮]白色粉末0mg):LC/MS(方法A2):ES:m/z=613MH+1呆留時(shí)間=9.04分鐘&N,M.R,(500MHz,CDCl3-dl,Sppm):l,66(m部分掩蔽，2H);l,75(db,J=7,0Hz,6H);1,96(m,4H);2,97(db,J=7,0Hz,4H);3.89(m,2H);3,94(s,6H);4,06(m,2H);4,13(m,2H);4,26(sb,4H);5,60(m,2H);6，80(s,2H);7,50(s,2H);7,66(d,J=4,5Hz,2H)。實(shí)施例4:8,8，-[l,4-丁二基二(氧基)]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-甲氧基-1,2,3,1la-四氫-SH-吡咯并P,l-c][l,引苯并二氮雜萆-S-酮]根據(jù)制備8,8，-[l,5-戊二基二(氧基)]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-甲氧基-1,2,3,11a-四氫-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-S-酮](實(shí)施例3)的方法，以1,4-二碘代丁烷為原料，可制備8，8，-[l,4-丁二基二(氧基)]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-曱氧基-l,2,3,lla-四氫-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]:LC/MS(方法Al,PlatformII):ES:m/z=599固+m/z=318,5(M+H+K)2+/2保留時(shí)間=3.23分鐘!HN.M.R.(500MHz,CDCl3-dl,Sppm):l,75(db,J=7,0Hz,6H);2,10(m,4H);2,98(db,J=7，0Hz,4H);3,90(m,2H);3,93(s，6H);4,ll(m,2H);4,20(m,2H);4,27(sb,4H);5,60(m,2H);6,82(s,2H);7,50(s,2H);7,66(dJ=4,5Hz,2H)。實(shí)施例5:8,8，-[3-甲基-l,5-戊二基二(氧基)]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-曱氧基-1,2,3,11a-四氬-5H-吡咯并[2,1<][1,4]苯并二氮雜萆-5-酮]<formula>formulaseeoriginaldocumentpage62</formula>根據(jù)制備8,8，-[l,3-苯二基二(亞曱氧基)]-二[(S)2-亞乙-(E)-基-7-甲氧基-l,2,3,lla-四氳-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮](實(shí)施例1)的方法，以1,5-二溴-3-甲基戊烷為原料，可制備8,8，-[3-甲基-l,5-戊二基二(氧基)]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-甲氧基-l,2,3,11a-四氪-5H-吡咯并[2,1《〗[1,4]苯并二氮雜萆-5-酮]:LC/MS(方法Al,PlatformII):ES:m/z=627固+保留時(shí)間=3.92分鐘實(shí)施例6:8,8，-[2,6-吡啶二基二(氧基)]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-曱氧基-1,2,3,11a-四氫-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜革-5-酮]根據(jù)制備8,8，-[l,3-苯二基二(亞甲氧基)]-二[(S)2-亞乙-(E)-基-7-曱氧基-l,2,3,lla-四氫-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮](實(shí)施例1)的方法，以2,6-二-溴甲基-處啶為原料可制備8,8，-[2,6-吡啶二基二(氧基)]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-甲氧基-l,2,3,11a-四氫-5H-吡咯并[2,l-c][1,4]苯并二氮雜萆-5-酮]:LC/MS(方法Al,ZQ):ES:m/z=648MH+保留時(shí)間=3.21分鐘^N.M.R,(400固z,CDCl3-dl,5ppm):1，75(db,J=6,5Hz,6H);2,94-2，99(m,4H);3,90(m,2H);3,99(s,6H);4,27(sb,4H);5,32(s,4H);5,60(m,2H);6,86(s,2H);7,48(d,J=8,0Hz,2H);7,56(s,2H);7,64(d,J=4,5Hz,2H);7,74(t,J=8,0Hz,1H)。實(shí)施例7:8,8，-[4-(3-叔丁氧基羰基氨基丙氧基)-2,6-吡啶二基二(亞曱氧基)]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-甲氧基-l,2,3,lla-四氫-5H-吡咯并[2,l-c][1,4]苯并二氮雜萆-5-酮]可如下制備:<table>tableseeoriginaldocumentpage63</column></row><table>向pre-茅屋霉素(30mg)在二曱基曱酰胺(0.5mL)中的攪拌溶液中加入碳酸鉀(45.7mg)、4-(3-叔丁氧基羰基氨基丙氧基)-2,6-二(曱苯磺酰氧基甲基)-吡啶(41mg)在二曱基曱酰胺(0.5mL)中的溶液和碘化鉀(18.3mg)。反應(yīng)物在30。C攪拌20小時(shí)，過(guò)濾出固體，用二甲基曱酰胺(0.2mL)洗滌。向合并的二曱基曱酰胺溶液中加入水(0.5mL),加入甲酸直至沉淀完全消失。得到的溶液根據(jù)方法Bl注射進(jìn)行HPLC純化，合并合適的餾分，用JouanmodelRC10.10.裝置通過(guò)離心蒸發(fā)濃縮得到8,8，-[4-(3-叔丁氧基羰基氨基丙氧基)-2,6-吡啶二基二(亞甲氧基)]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-甲氧基-l,2,3,lla-四氫-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-S同](8.3mg)。LC/MS(方法Al,PlatformI):ES:m/z=857MH++2H20m/z=839MH++H20m/z=821MH+m/z=721[M-C502H8]+H+保留時(shí)間=3.67分鐘1HN.M.R.(500MHz,CD3C02D國(guó)d4,Sppm):l,41(s,9H);l,71(d,J=6,5Hz,6H);2,08(m,2H);2,95(m,4H);3,34(m,2H);3,卯(s,6H);4,06(m,2H);4,18(m,2H);4,24國(guó)4,36(m,4H);4,43(t,J=6,0Hz,2H);5,50(sb,4H);5,61(m,2H);6,80-7,70(mveryb,2H);6,95(sb,2H);7,48國(guó)7,58(m,4H)。4-(3-叔丁氧基羰基氨基丙氧基)-2,6-二(曱苯磺酰氧基甲基)-p比啶可如下制備<formula>formulaseeoriginaldocumentpage63</formula>向4-(3-叔丁氧基羰基氨基丙氧基)-2,6-二(羥基曱基)-吡啶(76mg)在二氯曱烷(0.7mL)中的預(yù)冷卻(0。C)溶液中加入氳氧化鉀(30mg)在水(0.3mL)中的溶液。加入曱苯磺酰氯(93.7mg),得到的多相混合物劇烈振蕩1小時(shí)，隨后用二氯甲烷和水洗滌入分液漏斗中。分層，水層用二氯曱烷提取三次，合并的有機(jī)溶液用硫酸鎂干燥，真空濃縮至殘余物。殘余物用硅膠色鐠法(InterchromPuriflash10g柱，SiOH15-35pm)純化，用庚烷(A)和乙酸乙酯(B)的混合物梯度洗脫(梯度90%A:10%B上升至50%A:50%B)得到4-(3-叔丁氧基羰基氨基丙氧基)-2,6-二(甲苯磺酰氧基甲基)-吡啶(56mg):LC/MS(方法Al,PlatformI):ES:m/z=621MH+保留時(shí)間=4.卯分鐘4-(3-叔丁氧基羰基氨基丙氧基)-2,6-二(羥基曱基)-吡啶可如下制備向4-(3-叔丁氧基羰基氨基丙氧基)-吡啶-2,6-二羧酸二乙基酯(150mg)在無(wú)水乙醇(5mL)中的溶液中加入硼氫化鈉(43mg)和氯化鈣(128mg)。在攪拌4小時(shí)后，氫氣逸出停止，反應(yīng)用水停止。減壓蒸發(fā)溶劑，殘余物用二氯曱烷和水洗滌入分液漏斗中。分層，水層用二氯曱烷提取三次，合并的有機(jī)溶液用硫酸鎂干燥，真空濃縮得到4-(3-叔丁氧基羰基氨基丙氧基)-2,6-二(羥基曱基)-吡啶(80mg):LC/MS(方法Al,ZQ):ESm/z=313MH+保留時(shí)間=1.90分鐘!HN.M.R,(400MHz,DMSO-d6,Sppm):1,37(s,9H);1,84(m,2H);3,08(q,J=6，5Hz,2H);4,05(t,J=6,5Hzl2H);4,45(d,J=6,0Hz,4H);5,32(t,J=6，0Hz,2H);6,84(s,2H);6,90(tb,J=6,5Hz,1H)。4-(3-叔丁氧基羰基氨基丙氧基)-吡啶-2,6-二羧酸二乙基酯可如下制備<formula>formulaseeoriginaldocumentpage65</formula>將白屈氨酸二乙基酯(Scrimin,P.;Tecilla,P.;Tonellato,U.;Vendrame,T.J.Org.Chem.1989,54,5988)(150mg)溶解無(wú)水二曱基曱酰胺(2mL)中，加入3-(叔丁氧基羰基-氨基)-丙基溴(164mg)和碳酸鉀(130mg)。得到的混合物在70。C攪拌15小時(shí)，用飽和氯化銨水溶液停止反應(yīng)，隨后用乙酸乙酯洗滌入分液漏斗中。分層，水層用乙酸乙酯提取3次，合并的有才幾溶液用石克酸4美干燥，真空濃縮至殘余物。殘余物用硅膠色譜法(MerckSuperVarioFlash30g柱，Si6015-40pm)純化，用庚烷(A)和乙酸乙S旨(B)的混合物梯度洗脫(梯度60%A:40%B上升至50%A:50%B)，得到4-(3-叔丁氧基羰基氨基丙氧基)-吡啶-2,6-二羧酸二乙基酯(150mg):Cl(方法D):m/z=397MH+工HN.M.R.(400MHz,DMSO-d6,5ppm):l,34(t,J=7,0Hz,6H);1,36(s,9H);1,86(m,2H);3,10(q,J=6,5Hz,2H);4,21(t,J=6,5Hz,2H);4,37(q,J=7,0Hz,4H);6,89(mb,1H);7,71(s,2H)。實(shí)施例8:8,8，-「5-(3-氨基丙氧基)-l,3-苯二基二(亞甲氧基)l-二r(S)-2-亞乙-(￡)-基-7-甲氧基-1,2,3,11&-四氫-5!1-吡咯并[2,1^][1,4]苯并二氮雜萆畫5-酮]可如下制備向pre-茅屋霉素(21mg)在二甲基甲酰胺(0.7mL)中的攪拌溶液中加入碳酸鉀(32mg)、l-(3-烯丙基氧基羰基氨基-丙氧基)-3,5-二-(溴甲基)-苯(16.2mg)和碘化鉀(12.8mg)。反應(yīng)物在3(TC攪拌20小時(shí)，過(guò)濾出固體，用二甲基甲酰胺(0.2mL)洗滌兩次，隨后丟棄。向合并的二曱基曱酰胺溶液中加入水(0.5mL),過(guò)濾出生成的沉淀，用水洗滌，用JouanModelRC10.10離心蒸發(fā)干燥。向溶解在二甲基甲酰胺(0.8mL)中的粗化合物(27mg)中加入四(三苯基膦)釔(2mg)、三苯基膦(0.9mg)和吡咯烷(S.6^iL),在30。C攪拌15小時(shí)后，加入四(三苯基膦)4巴(2mg)、三苯基膦(lmg)和吡咯烷(2.8nL)，反應(yīng)混合物在室溫下再攪拌15小時(shí)。向二曱基曱酰胺溶液中加入水(0.4mL),加入甲酸直至沉淀完全消失。得到的溶液根據(jù)方法Bl注射進(jìn)行HPLC純化，收集合適的餾分，用JouanModelRC10.10.裝置離心蒸發(fā)濃縮得到8,8,-[5-(3-氨基丙氧基)-l,3-苯二基二(亞甲氧基)]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-甲氧基-1,2,3,1la-四氫-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮](0.2mg)。LC/MS(方法Al,PlatformII)ES:m/z=800MH+保留時(shí)間=2.84分鐘l-(3-烯丙基氧基羰基氨基-丙氧基)-3,5-二-(溴曱基)-苯可如下制備向l-(3-烯丙基氧基羰基氨基-丙氧基)-3,5-二-(羥基甲基)-苯(70mg)在二氯曱烷(3mL)中的懸浮液中加入四溴化碳(248mg)和三苯基膦(199mg)在二氯曱烷(2mL)中的溶液?；亓?小時(shí)后，反應(yīng)混合物用石圭月交色譜法(MerckSuperVarioFlash25g柱，Si6015-40pm)純化，用二氯曱烷洗脫，得到l-(3-烯丙基氧基羰基氨基-丙氧基)-3,5-二-(溴曱基)-苯(52mg):LC/MS(方法Al,PlatformII):ESm/z=420MH+保留時(shí)間=4.50分鐘!HN.M.R,(400固z，DMSO-d6,Sppm):1,85(m,2H);3,15(q,J=6,5Hz,2H);3,99(t,J=6,5Hz,2H);4,46(db,J=5,5Hz，2H);4,65(s,4H);5,16(db,J=ll,OHz,1H);5,26(db,J=17,5Hz,1H);5,90(m,IH);6,96(d,J=l,5Hz,2H);7,09(t,J=l,5Hz,1H);7,29(tb,J=6,5Hz,IH)。l-(3-烯丙基氧基羰基氨基-丙氧基)-3,5-二-(羥基曱基)-苯可如下制備將5-(3-鄰苯二曱酰亞氨基-丙氧基)-l,3-(羥基曱基)-苯(1.45g)溶解在二氯曱烷和乙醇的混合物(25mL,2575)中。加入肼水合物(0.62mL),反應(yīng)混合物回流l小時(shí)，真空除去溶劑，殘余物溶解在二氯曱烷中。過(guò)濾出不溶解殘余物，用硅膠色譜法(MerckSuperVarioPrep70g柱，Si6015-40pm)純化，用曱醇/二氯曱烷，20:80,隨后用氫氧化銨/曱醇/二氯曱烷，0.5:25:75洗脫，得到適用于進(jìn)一步轉(zhuǎn)化的l-(3-氨基-丙氧基)-3，5-二-(羥基曱基)-苯(lg)。將1-(3-氨基-丙氧基)-3,5-二-(羥基甲基)-苯(1OOmg)樣品溶解在曱醇(5mL)中，向冷卻的溶液(0。C)力。入碳酸鈉(120mg)在水(5mL)中的溶液和烯丙基氯曱酸酯(42pL)。在0。C攪拌30分鐘后，反應(yīng)混合物在室溫下再攪拌15小時(shí)。真空除去溶劑，殘余物用乙酸乙酯和水洗滌入分液漏斗中，分層，水層用乙酸乙酯提取兩次，真空濃縮得到5-(3-烯丙基氧基羰基氨基-丙氧基)-2,6-二-(羥基甲基)苯(75mg):El(方法C):m/z=295m+m/z=142(M-C8H9〇3)+m/z=41C3H5+&N.M.R.(300MHz,DMSO-d6,Sppm):l,85(m,2H);3,14(q,J=6,5Hz,2H);3,96(t,J=6,5Hz,2H);4,41陽(yáng)4,48(m,6H);5，ll(t部分掩蔽，J=5,5Hz,2H);5,16(qd,J=l,5et10,5Hz,IH);5,26(qd,J=l,5et17,0Hz,1H);5,卯(m,IH);6,72(sb,2H);6,83(sb,IH);7,26(tb,J=6,5Hz,IH)。5-(3-鄰苯二曱酰亞氨基-丙氧基)-l,3-(羥基甲基)-苯可如下制備頁(yè)將3，5-二-羥基曱基苯酚(Felder,D.;GutierrezNava,m.;delPilarCarreon,M.;Eckert,J.F.;Luccisano,M.;Schall,C;Masson,P.;Gallani,J.L.;Heinrich,B.;Guillon,D.;Nierengarten,J.F.Helv.ChimicaActa2002,85,288)(2.35g)、N-(3-溴丙基)-鄰苯二甲酰亞胺(4.49g)和碳酸鉀(10.53g)在乙腈(25mL)中混合，回流12小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻到室溫，減壓除去溶劑，殘余物重新溶解在二氯甲烷中，過(guò)濾出不溶解殘余物。濾液用水洗滌，用硫酸鎂干燥，真空濃縮得到殘余物。殘余物用硅膠色譜法(MerckSuperVarioPrep90g柱，Si6015-40pm)純化，用曱醇/二氯甲烷4:96洗脫，得到5-(3-鄰苯二曱酰亞氨基-丙氧基)-l,3-(羥基甲基)-苯(l,45g):LC/MS(方法Al,PlatformII):ESm/z=342固+m/z=324(MH+-H20)保留時(shí)間=2.90分鐘!HN.M.R.(300MHz,DMSO-d6,5ppm):2,05(m,2H);3,76(t,J=6,5Hz,2H);3,99(t,J=6,5Hz,2H);4,40(d,J=5,5Hz,4H);5,09(t，J=5,5Hz,2H);6,59(sb,2H);6,82(sb,1H);7,80-7,90(m,4H)。實(shí)施例9:8,8，-[5-(N-曱基-3-叔丁氧基羰基氨基丙基)-l,3-苯二基二(亞甲氧基)]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-甲氧基-1,2,3,1la-四氫-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]可如下制備向5-(N-甲基-3-叔丁氧基羰基氨基丙基)-l,3-二-(羥基甲基)-苯(50mg)和三乙胺(113pL)在二氯曱烷(2mL)中的冷卻(0。C)溶液中加入曱磺酰氯(26pL)。30分鐘后，反應(yīng)混合物用水洗滌兩次，得到的二氯曱烷溶液用硫酸鎂干燥，真空濃縮得到粘稠油(50.3mg)。將pre-茅屋霉素(15mg)在二甲基甲酰胺(0.5mL)中的溶液加入粗化合物(13mg)、碳酸鉀(23mg)和石典化鉀(9mg),反應(yīng)混合物在30。C攪拌20小時(shí)。加入另外的粗化合物樣品(6mg),反應(yīng)混合物在3CTC再攪拌20小時(shí)。過(guò)濾出固體，用二曱基曱酰胺(0.2mL)洗滌，隨后丟棄。向合并的二曱基甲酰胺溶液中加入水(0.4mL)、一滴甲酸和另外的水(1.5mL)。過(guò)濾得到的懸浮液(2mL)樣品，得到的固體真空干燥得到8,8，-[5-(N-曱基-3-叔丁氧基羰基氨基丙基)-l,3-苯二基二(亞曱氧基)]-二[(S)-2-亞乙-@)-基-7-曱氧基-1,2,3,1la-四氫-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮](3.1mg):LC/MS(方法Al,PlatformII):ES:m/z=818MH+保留時(shí)間=4.11分鐘5-(N-甲基-3-叔丁氧基羰基氨基丙基)-l,3-二-(羥基甲基)-苯可如下制備向5-(N-曱基-3-叔丁氧基羰基氨基丙基)-l,3-二羧酸二乙基酯(100mg)在四氫吹喃(2mL)中的冷卻溶液(-5。C)中i爰'隄加入氫化鋰鋁在乙醚中的1M溶液(0.55mL)。在加完后，加入v5克酸鈉十水合物直到氣體逸出停止。過(guò)濾出固體，用乙酸乙酯洗滌兩次，合適的有機(jī)溶液真空濃縮得到5-(N-甲基-3-叔丁氧基羰基氨基丙基)-l,3-二-(羥基曱基)-苯(66.8mg)粘稠油Cl(方法D):m/z=327mNH4+m/z=310MH+m/z=271(MNH4+-C4H8)!HN.M.R.(300MHz,DMSO-d6,5ppm):l,37(sb,9H);l,75(m,2H);2,45畫2,54(m掩蔽，2H);2,77(s,3H);3,18(t,J=7,0Hz，2H);4,45(d，J=5,5Hz,4H);5,08(t,J=5,5Hz,2H);7,00(sb,2H);7,08(sb,IH)。5-(N-曱基-3-叔丁氧基羰基氨基丙基)-苯-l,3-二羧酸二基酸酯可如下制備向5-(N-曱基-3-叔丁氧基羰基氨基丙炔-l-基)-苯-l,3-二羧酸二乙基酯(890mg)在甲醇(10mL)中的溶液中加入鈀10。/0/碳(89mg),溶液在氫氣氣氛(lbar)下在室溫下攪拌18小時(shí)。過(guò)濾出固體，真空除去溶劑得到5-(N-甲基-3-叔丁氧基羰基氨基丙基)-苯-l,3-二羧酸二乙基酯(767mg)黃色油EI(方法C):m/z=365M+m/z=309(M-C4H8)+m/z=265(m/z=309-C02)+m/z=57C4H9+m/z=44C2H6N+iHN,M.R.(400MHz,DMSO-d6,5ppm):l,32(sb,9H);l,79(m,2H);2,70(tJ=7,0Hz,2H);2,76(s,3H);3,16(m,2H);3,87(s,6H);8,06(d,J=2,0Hz,2H);8,32(t,J=2,0Hz,IH)。5-(N-甲基-3-叔丁氧基羰基氨基丙炔-l-基)-苯-l,3-二羧酸二乙基酯可如下制備-.將5-三氟曱基磺酰氧基-間苯二酸二甲基酯(Bodwell,g.J.;Fleming,J.J.;Mannion，M.R.;Miller,D.O.J.Org.Chem.2000,65(17),5360)(lg)溶解在2mL乙腈中，加入N-曱基-N-叔丁氧基羰基-丙炔胺(Bradbury,B.J.;Baumgold,J.;Jacobsen,K.A.J.Med.Chem.1990,33(2),741)(643mg)、雙(三苯基膦)氯化鈀(205mg)、碘化銅(56mg)和三乙胺(591mg)。得到的混合物在室溫下攪拌15小時(shí)，減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物隨后用乙酸乙酯和水洗滌入分液漏斗。分層，水層用乙酸乙酯提取。合并的有機(jī)溶液用飽和氯化鈉水溶液洗滌，用硫酸鎂干燥，真空濃縮得到殘余物。殘余物用硅膠色譜法(BiotageFLASH40+M100g柱，SiOH32-63pm,用乙酸乙酯/庚烷，20:80洗脫)得到5-(N-甲基-3-叔丁氧基羰基氨基丙炔-l-基)-苯-l,3-二羧酸二乙基酯(896mg):N.M.R,(300MHz,DMSO-d6,5ppm):1,43(s,9H);2,90(s,3H);3,卯(s,6H);4,30(s,2H);8,16(d,J=l,5Hz,2H);8,42(t,J=l,5Hz,1H)。實(shí)施例10:8,8，-{5-[3-(4-曱基-4-甲基二硫基-戊?；被?-丙氧基]-1,3-苯二基二(亞甲氧基))-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-曱氧基-l,2,3,11a-四氫-5H-吡咯并[2,1《][1,4]苯并二氮雜萆-5-酮]可如下制備向l-[3-(4-甲基-4-甲基二硫基-戊酰基氨基)-丙氧基]-3,5-二-(羥基甲基)-苯(45mg)和三乙胺(49[mu]L)在二氯曱烷(1.5mL)中的冷卻(0。C)溶液中加入甲石黃酰氯(19^L)。30分鐘后，反應(yīng)混合物用水洗滌兩次，得到的二氯甲烷溶液用硫酸鎂干燥，真空濃縮得到粘稠油(39mg)。向pre-茅屋霉素(26mg)在二甲基甲酰胺(0.9mL)中的溶液中加入碳酸鉀(40mg)、碘化鐘(16mg)和粗化合物樣品(31mg),反應(yīng)混合物在30。C攪拌20小時(shí)。加入另外的粗化合物樣品(6mg)，反應(yīng)混合物在3(TC再攪拌20小時(shí)。過(guò)濾出固體，用二甲基曱酰胺(0.3mL)洗滌，隨后丟棄。將水(1.6mL)加入合并的二甲基曱酰胺溶液中，過(guò)濾得到的固體，用水洗滌，真空干燥得到殘余物。殘余物用硅膠色譜法(InterchromPuriflash2g柱,SiOH15-35pm,用二氯甲烷/曱醇洗脫，95:5),隨后再次用硅膠色譜法(ChromabondOH2g柱，45|im洗脫)得到8,8，-{5-[3-(4-曱基-4-曱基二硫基-戊?；被?-丙氧基]-1,3-苯二基二(亞甲氧基》-二[(S)-2-亞乙-^)-基-7-甲氧基-l,2,3,lla-四氬-5H-吡咯并[2,1-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮](0.2mg):LC/MS(方法Al,PlatformI):ES:m/z=896MH+保留時(shí)間=4.09分鐘&N.M.R.(500畫z,CDCl3-dl，5ppm):1,29(s,6H);l,75(d,J=6,5Hz,6H);1,92國(guó)2,03(m,4H);2,28(m,2H);2,39(s,3H);2,97(m，4H);3,45(q,J=6,0Hz,2H);3,89(q,J=5,5Hz,2H);3,96(s,6H);4,04(t,J=5,0Hz,2H);4,27(sb,4H);5,14(d,J=12,5Hz,2H);5,20(d,J=12,5Hz,2H);5,60(m,2H);5,84(tb,J=6,0Hz,1H);6,83(s,2H);6,94(s,2H);7,09(s,1H);7,53(s,2H);7,64(d,J=5,0Hz,2H)。1-[3_(4_曱基-4-甲基二硫基-戊酰基氨基)-丙氧基]-3,5-二-(羥基甲基)-苯向1-(3-氨基-丙氧基)-3,5-二-(羥基曱基)-苯(50mg)在二甲基曱酰胺(lmL)中的溶液中加入4-甲基-4-甲基二硫基-戊酸(44mg),N,N，-二異丙基碳化二亞胺(35mL)和l-羥基苯并三唑水合物(5.8mg)。在室溫下15小時(shí)后，將水加入反應(yīng)混合物中，水溶液用乙酸乙酯提取兩次。合并的有枳』溶液用飽和氯化鈉水溶液洗滌，用硫酸鎂干燥，真空濃縮得到殘余物。殘余物用硅膠色譜法(InterchromPuriflash5g柱，SiOH15-35nm)純化，用曱醇/二氯曱烷，5:95洗脫，得到l-[3-(4-甲基-4-曱基二硫基-戊?；被?-丙氧基]-3,5-二-(羥基曱基)-苯(48mg):LC/MS(方法Al,ZQ):ESm/z=388MH+保留時(shí)間=3.03分鐘HN.M.R.(300MHz,DMSO-d6,5ppm):1,24(s,6H);1,76-1,87(m,4H);2,16(m,2H);2,40(s,3H);3,19(q,J=6,5Hz,2H);3,95(t,J=6,5Hz,2H);4,44(db,J=5,5Hz,4H);5,12(d,J=5,5Hz,2H);6,73(sb,2H);6,83(sb,1H);7，92(tb,J=5,5Hz,1H)。實(shí)施例:，J11:原料產(chǎn)物和/或中間體的制備<formula>formulaseeoriginaldocumentpage73</formula>向4-芐氧基-5-甲氧基-2-硝基苯甲酸(4.8g,16mmol)在無(wú)水二氯甲烷(80mL)和THF(5mL)中的溶液中在室溫下加入草酰氯(2.8mL,32mmol)和DMF(30jiL,0.38mmol)。在加入DMF后形成大量氣泡，混合物攪拌過(guò)j復(fù)，隨后通過(guò)真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑。殘余物通過(guò)加入無(wú)水二氯甲烷共同蒸發(fā)一次以下，得到乙酰氯黃色固體。向4-亞甲基-L-脯氨酸甲酯，化合物A(3.95g,15.5mmol)在無(wú)水THF(80mL)中的溶液中在(TC加入三乙胺(6.7mL,48mmo1),2分鐘后，在10分鐘內(nèi)經(jīng)導(dǎo)管在相同溫度快速加入在無(wú)水THF(80mL)中的上述乙酰氯。得到的黃色混濁溶液在0-5。C攪拌30分鐘，隨后在室溫下攪拌4小時(shí)。反應(yīng)溶液用乙酸乙酯和水稀釋，水層用乙酸乙酯提取兩次，合并的有才幾層用2%鹽酸溶液和鹽水洗滌，用無(wú)水石危酸4美干燥。過(guò)濾并除去溶劑，殘余物用快速色譜法(己烷/AcOEt,1:1,1:1.5)純化得到Q^)-4-(亞曱基)-1-[5-曱氧基-2-硝基-4-(苯基曱氧基)-苯甲?；鵠-2-吡咯烷羧酸甲基酯黃色固體(5.6g,y=85%)。^NMR(400Hz,CDCl3):化合物顯示一對(duì)明顯的旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體(rotomers)。S7.76(s,0.7H),7.73(s,0.3H)，7.43畫7.29(m,5H),6.83(s,0.7H),6.80(s,0.3H)，5.17(s,1.4H),5.16(s,0.6H),5.10畫4.89(m,2.7H),4.57(d,J=16Hz,0.3H),4.19-4.12(m,0.7H),3.95陽(yáng)3.77(m,6.3H),3.57(s,1H),3.06-2.96(m,1H),2.73國(guó)2.62(m,1H);13CNMR(400Hz,CDC13):171.8,171.7,166.5,166.2,154.9,154.4,148.25,148.18,141.7,141.3,137.19,137.13,135.3,135.2,128.7,128.43,128.41,127.5,127.3,109.5,109.1,109.0,108.9,71.3,60.6,58.1,56.7,56.5,52.39,52.37,52.0,50.2,37.1,35.5;MS(ESI):m/z449.3(M+Na)+。在-78。C30分鐘內(nèi)經(jīng)注射泵向酯(3.15g,7.39mmol)在無(wú)水二氯甲烷(9mL)和甲苯(27mL)中的溶液中滴加dibal-H(l5mL,1.0m甲苯溶液)，混合物在-78。C持續(xù)攪拌2小時(shí)，TLC(己烷/AcOEt，1:1.5)顯示所述原料消耗。反應(yīng)在-78。C用曱醇(0.3mL,7.4mmol)停止，加入5。/。鹽酸(20mL),隨后加入AcOEt(50mL)。移去干冰/丙酮浴，混合物溫?zé)岬?°C,攪拌15分鐘。水層用AcOEt提取兩次，合并的有機(jī)層用冷5%鹽酸和鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥。通過(guò)C鹽過(guò)濾，除去溶劑，殘余物用快速色譜法(己烷/AcOEt,1:1,1:1.5,1:2,1:3,1:5,100%AcOEt)純化得到Q^)-4-(亞曱基)-1-[5-曱氧基-2-硝基-4-(苯基曱氧基)苯甲?；鵠-2-他咯烷曱醛蓬松黃色固體(2.69g,y二920/。)。力NMR(400Hz,CDC13):化合物顯示一對(duì)明顯的旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體。59.75(s,0.7H),9.32(s,0.3H),7.76(s,0.7H),7.69(s,0.3H),7.45-7.31(m,5H),6.85(s,0.7H),6.80(s,0.3H),5.19-4.82(m,4.7H),4.56(d,J=16Hz,0.3H),4.14-3.79(m,5H),2.99國(guó)2.68(m,2H);13CNMR(400Hz,CDC13):198.3,197.1,167.1,155.0,154.6,148.4,141.3,140.4,137.2,135.2,128.7,128.5,128.4,127.5,126.9,126.6,109.8,109,4,109.3,109.2,109.1.71.3,66.6,64.3,56.7,56.6,52,2,50.6,33.2,31.9;MS(ESI):m/z419.2(M+Na)+。MS:429.0(M-H)-方法1:向Q^)-4-(亞曱基)-1-[5-曱氧基-2-硝基-4-(苯基曱氧基)苯甲?；鵠-2-吡咯烷曱醛(1.0當(dāng)量)在THF/H20(v/v,1.7:1，0.03m)中的溶液中在室溫下在2分鐘內(nèi)分批加入次硫酸鈉(5-8當(dāng)量)，混合物再攪拌6-20小時(shí)，用TLC(己烷/AcOEt1:2和CH2Cl2/MeOH5:1)監(jiān)測(cè)。在醛幾乎消耗后，反應(yīng)用曱醇停止(與所使用THF大致相同的體積)。通過(guò)真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)(溫度<40°。)除去溶劑，殘余物固體放置在高真空中使其完全干燥。將固體懸浮在無(wú)水甲醇(0.03m)中，在室溫下滴加AcCl(8-10當(dāng)量)。在攪拌15分鐘后，過(guò)濾混濁的溶液，固體用無(wú)水曱醇洗滌。透明黃色濾液在室溫下攪拌l-2小時(shí)，用飽和碳酸氫鈉驟冷。在經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去大多數(shù)甲醇后，殘余物用二氯甲烷和水稀釋。水層用AcOEt提取，合并的有機(jī)層用無(wú)水硫酸鈉干燥并過(guò)濾，除去溶劑，殘余物用快速色譜法(己烷/AcOEt，1:3,1:5)純化得到(llaS)-7-曱氧基-2-亞甲基-8-(苯基甲氧基)-l,2,3,lla-四氬-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮，70-85%收率。NMR光i普與文獻(xiàn)4艮導(dǎo)的一致。MS(ESI):m/z371.2(M+Na)+。MS(ESI,用CH3OH):m/z403.3(M+CH3OH+Na)+。MS(ESI,用H20):m/z389.2(M+H20+Na)+。方法2:向Q^)-4-(亞曱基)-l-[5-曱氧基-2-硝基-4-(苯基曱氧基)苯曱酰基]-2-吡咯烷甲醛(1.0當(dāng)量)在THF/H20(v/v,3.2:1,0.03m)中的溶液中在室溫下在2分鐘內(nèi)分批加入次石危酸鈉(6-8當(dāng)量)，隨后加入碌u酸氫鈉(0.5-1.0當(dāng)量)?；旌衔镌贁嚢?2-20小時(shí)，用TLC(己烷/AcOEt1:2和CH2Cl2/MeOH5:1)監(jiān)測(cè)。在中間體[MS(ESI):459.0(M-H)—]幾乎消耗后，反應(yīng)用飽和碳酸氫鈉驟冷至PH5-6。通過(guò)真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)(溫度〈40。C)除去溶劑，殘余物固體放置在高真空中使其完全干燥。將固體懸浮在無(wú)水甲醇(0.(Bm)中，在室溫下滴加AcCl(8-10當(dāng)量)。在4覺(jué)拌15分鐘后，過(guò)濾混濁的溶液，固體用無(wú)水甲醇洗滌。透明黃色濾液在室溫下攪拌1-2小時(shí)，用飽和碳酸氫鈉驟冷。在經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去大多數(shù)甲醇后，殘余物用二氯甲烷和水稀釋。水層用AcOEt提取，合并的有機(jī)層用無(wú)水硫酸鈉干燥并過(guò)濾，除去溶劑，殘余物用快速色譜法(己烷/AcOEt,1:3,1:5)純化得到(1laS)-7-曱氧基-2-亞曱基-8-(苯基曱氧基)-1,2,3,1la-四氫-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮，65-80%收率。CH3S03H在室溫下向原料(98mg,0.28mmol)在無(wú)水二氯甲烷(2mL)中的溶液中加入新鮮混合的曱磺酸(2mL)在無(wú)水二氯曱烷(4mL)中的溶液?；旌衔?lt;formula>formulaseeoriginaldocumentpage75</formula>在室溫下攪拌1.5小時(shí)，傾倒在冰(30g)上，用飽和NaHC03停止，用二氯甲烷稀釋。水層用二氯甲烷提取，合并的有機(jī)層用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾和除去溶劑。殘余物用快速色譜法(CH2Cl2/MeOH,15:1)純化得到產(chǎn)物黃色固體(29mg)。上述水層在室溫下攪拌過(guò)夜，用依次二氯曱烷和AcOEt提取，合并的二氯曱烷和AcOEt用無(wú)水石危酸鈉干燥，過(guò)濾和除去溶劑得到(11&5)-8-羥基-7-甲氧基-2-亞曱基-1,2，3,1la-四氫-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮(25mg)?？偸章适?4%。&NMR(400Hz,CDC13):57.65(d，J=4.8Hz,1H),7.48(s,IH)I6.87(s,1H),6.35(bs,1H),5.17(t,J=1.6Hz,1H),5.14(7,J=1.6Hz,1H)，4.26(s,2H),3.93(s,3H),3.87漏3.83(m,1H),3,12-3.05(m,1H)，2.91(d,J=16Hz,lH);MS(ESI):m/z281.0(M+Na)+。MS(ESI,用水):m/z258.9(M+H)+,m/z299.l(M+H20+Na)+。實(shí)施例12:8,8，-[5-乙?；蚧谆?1,3-苯二基二(亞曱氧基)]-二[(3)-2-亞曱基_7-曱氧基-1,2,3,11a-四氫-5H-吡咯并[2,1<][1,4]苯并二氮雜萆-5-酮]在0。C向三苯基膦(577mg,2.2mmol)在無(wú)水THF(5mL)中的溶液中滴加偶氮二羧酸二乙酯(2.2m曱苯溶液，791pL,1.7mmo1)，在0。C攪拌50分鐘后，滴力。1,3，5-三(羥基曱基)苯(269mg,1.6mmol,使用前通過(guò)將三曱基1，3,5-苯三羧酸與在THF中的氫化鋰鋁反應(yīng)，用無(wú)水苯共同蒸發(fā)，高真空干燥幾小時(shí)制備)和硫代乙酸(108pL,1.45mmol)在無(wú)水THF(4mL)中的溶液。l小時(shí)后，移去冰水浴，反應(yīng)物在室溫下攪拌15小時(shí)。通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)真空除去溶劑，殘余物用快速色譜法純化得到5-乙酰基硫基甲基-l,3-二(羥基甲基)-苯無(wú)水固體(110mg)。JHNMR(400Hz,CDC13):57.13-6.99(m,3H)14.45(apt,J=20.4Hz,4H),3.98(apt,J=20.4Hz,4H),3.73(bs,2H),2.24(apt,J=20.4Hz,3H);MS(ESI):m/z249.0(M+Na)+。DEADPh3PTHF在0。C向三苯基膦(28mg，O.lmmol)在無(wú)水THF(0.3mL)中的溶液中滴加偶氮二羧酸二異丙基酯(19pL,0.09mmo1),在0。C攪拌35分鐘后，加入(11&3)-8-羥基-7-曱氧基-2-亞甲基-l,2,3,lla-四氬-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮,化合物5,(18mg,0.07mmol,在使用前用無(wú)水苯共同蒸發(fā)，高真空干燥幾小時(shí))在無(wú)水THF(0.2mL)中的溶液?；旌衔锍掷m(xù)攪拌10分鐘，隨后加入在無(wú)水THF(0.2mL)中的5-乙?；蚧谆?l,3-二(羥基曱基)-苯，化合物6,(6.6mg,0.03mmol,在使用前用無(wú)水苯共同蒸發(fā)，高真空干燥幾小時(shí))。反應(yīng)混合物在0。C攪拌35分鐘，移去水水浴，溶液在室溫下攪拌21小時(shí)。通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)真空除去溶劑，殘余物用快速色譜法純化以得到粗產(chǎn)物，它進(jìn)一步用制備HPLC(C18柱,CH3CN/H20)純化得到0.7mg8,8，-[5-乙酰基硫基甲基-1,3-苯二基二(亞曱氧基)]-二[(S)-2-亞曱基-7-甲氧基-l,2,3,lla-四氫-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜革-5-酮],化合物7。MS(ESI,用H20):m/z765.3(M+2H20+Na)+,747.3(M+H20+Na)+,729.2(M+Na)+,707.3(M+H)+,663.2(M-Ac)-。實(shí)施例13二-(2-[(S)-2-亞甲基-7-曱氧基-5-氧代-l，2,3,11a-四氫-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-8-基氧基]-乙基)-氨基甲酸叔丁基酯<formula>formulaseeoriginaldocumentpage78</formula>化合物1.在-20。C將亞硫酰氯(5.6mL,76.3mmol)滴加到無(wú)水甲醇C76mL)中，隨后加入反-4-羥基-L-脯氨酸(S.0g,38.1mmol)。使得到的混合物溫?zé)岬绞覝?，攪?0小時(shí)。減壓除去溶劑，殘余物進(jìn)一步在高真空下干燥得到反-4-羥基-L-脯氨酸曱酯1白色固體工HNMR(300MHz,DMSO-d6)52.18畫2.23(m,2H),3.06(m，IH)I3.32-3.36(m,2H),3.76(s,3H),4.42(br.s,1H),4.48(dd,J=5.4,8.1Hz,1H),5.56(br.s,1H);EIMSm/z146([M]++1)?；衔?.在0。C氬氣下向反-4-羥基-L-脯氨酸曱酯l(4.48g,30.9mmol)和碳酸氫鈉(1.56g,18.5mmol)在無(wú)水DMF(42mL)中的溶液中加入(BOC)20在DMF(20mL)中的溶液。在室溫下攪拌過(guò)夜后，通過(guò)在0。C加入100mL水停止反應(yīng)，用EtOAc(4x80mL)提取。合并的有機(jī)層用鹽水(100mL)洗滌，干燥(石危酸鎂)，過(guò)濾和旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮。殘余物用快速色譜法(硅膠，1:1己烷/EtOAc)純化得到N-BOC保護(hù)的4-羥基-L-脯氨酸甲酯2無(wú)色油iHNMR(300固z,CDC13,旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)51.38和1.43(2xs,9H),2.04-2.07(m,1H),2.23國(guó)2.27(m,2H),3,54國(guó)3.63(m,2H),3,70(s,3H),4.34-4.38(m,1H),4.46(br.s,1H)?；衔?.(Francomanfre,Jean-MarcKern,andJean-FrancoisBiellmannJ.Org.Chem.1992,57,2060-2065)。N-BOC保護(hù)的4-羥基-L-脯氨酸曱酯化合物2(3.24g,13.2mmol)溶解在CH2Cl2(132mL)中，冷卻到0°C。加入吡啶和Dess-Martinperiodinane,持續(xù)攪拌直至TLC顯示沒(méi)有SM遺留。反應(yīng)混合物用CH2Cl2稀釋，用10%含水Na2S2〇3(3x50mL)、1N含水HCl(50mL)、飽和含水NaHCO3(50mL)和鹽水(50mL)洗滌，用硫酸鎂干燥，過(guò)濾和濃縮。殘余物用快速色譜法(硅膠，7:3己烷/EtOAc)純化，得到N-BOC保護(hù)的4-氧代-L-脯氨酸曱酯3淺黃色油工HNMR(300MHz,CDC13,旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)S1.44(s,9H),2.53畫2.57(m,1H),2.85國(guó)2.96(m,1H),3.72和3.74(2xs,3H),3.85-3.87(m,2H),4.67-4.77(m,1H)?；衔?.(Kuei-YingLin,MarkmatteucciUS5414077)在(TC將叔丁醇鉀(2.51g,22.3mmol)在無(wú)水THF(40mL)中的溶液加入甲基三苯基溴化銹(7.99g,22.3mmol)在THF(40mL)中的懸浮液中。得到的黃色內(nèi)纖鹽懸浮液在0。C攪拌2小時(shí)，隨后加入N-BOC保護(hù)的4-氧代-L-脯氨酸曱酯3(2.72g,11.2mmol)在THF(32mL)中的溶液。在室溫?cái)嚢?小時(shí)后，反應(yīng)混合物用EtOAc(100mL)稀釋，用水(80mL)、鹽水(80mL)洗滌，干燥(硫酸鎂)，濃縮。殘余物用快速色譜法(硅膠，9:1己烷/EtOAc)得到N-BQC保護(hù)的4-亞曱基-L-脯氨酸甲基酯，化合物4,無(wú)色油1HNMR(300MHz,CDC13,旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)S1.40和1.45(2xs,9H),2.58國(guó)2.62(m,1H),2.88陽(yáng)2.98(m,1H),3.69和3.70(2xs,3H),4.03-4.06(m,2H),4.36畫4.49(m,1H),4.97畫4.99(m,2H);EIMSm/z264([M]++Na)?；衔?.將N-BOC保護(hù)的4-亞甲基-L-脯氨酸甲基酯，化合物4,(0.8g,3.31mmol)溶解在CH2C12(6.5mL)中，冷卻到0。C。滴加三氟乙酸(6.5mL)在CH2Cl2(6.5mL)中的溶液，得到的混合物在室溫?cái)嚢?.5小時(shí)。在用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去揮發(fā)性溶劑后，棕色殘余物溶解在10mL水中，用Et20(3x5mL)洗滌。濃縮水溶液，它進(jìn)一步高真空干燥得到4-亞曱基丄-脯氨酸甲基酯5TFA鹽iHNMR(300MHz,CDC13,旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)S2.83國(guó)2.87(m,1H),3.05-3.1l(m,1H),3.80和3.81(2xs,3H),4.00-4.10(m,2H),4.55(dd,J=5.7,5.7Hz,1H),5.17畫5.21(m，2H);13CNMR(534.0,49.1,53.8,59.3,111.7,137.6,169.8;EIMSm/z142詞++1)?；衔?.(Kamal,A.;etalJ.med.Chem.2002,45,4679-4688)將二乙醇胺(3.57g,34mmol)溶解在甲醇(20mL)中，在室溫用Et3N(4.7mL,34mmol)和三氟乙酸乙酯(4.90g,34mmol)處理20小時(shí)，隨后加入另外lmLCF3COOEt。再經(jīng)20小時(shí)后，高真空除去揮發(fā)性溶劑得到N-三氟乙酰基-二乙醇胺6淺黃色油，使用時(shí)無(wú)需進(jìn)一步純化?；衔?.在0。C將偶氮二羧酸二乙酯(7.66g,44mmol)滴加入香草酸曱酯(7.30g,40.1mmol)和三苯基膦(15.67g,59.7mmol)在無(wú)水THF(57mL)中的攪拌溶液中，得到的混合物在此溫度下攪拌1小時(shí)，隨后加入N-三氟乙?；?二乙醇胺6(7.30g,40.1mmol)在無(wú)水THF(20mL)中的溶液。在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜后，反應(yīng)用水(100mL)停止，用Et20(3x80mL)提取，合并的Et20層用鹽水(100mL)洗滌，干燥(石克酸鎂)和濃縮。殘余物用快速色譜法(硅膠，8:2to7:3己烷/EtOAc)純化得到N-三氟乙?；?N,N-二[2_(4-曱氧基羰基-2-曱氧基-苯氧基)乙基]胺，化合物7,白色固體:輸MR(300MHz,CDC13)53.81(s,3H),3.84(s,3H),3.87(s,3H),3.88(s,3H),4.04隱4.08(m,4H),4.28隱4.32(m,4H),6.84禾口6.85(2xd,J=6.3Hz,2H),7.50和7.51(2xd，J=1.5Hz,2H),7.61(dd,J=1.5,6.3Hz,2H)?；衔?.在0。C將固體Cu(N03)2.xH20(2.33g,12.41mmol)加入N國(guó)三氟乙?；?^^[-二[2-(4-甲氧基羰基-2-甲氧基-苯氧基)乙基]胺7(2.62g,4.96mmol)在乙酐(50mL)中的攪拌溶液中。反應(yīng)混合物在0。C攪拌1小時(shí)，在室溫?cái)嚢?小時(shí)，隨后傾倒入200mL水水中。再持續(xù)攪拌l小時(shí)。得到的黃色沉淀通過(guò)過(guò)濾收集，用快速色譜法(硅膠，6:4己烷/EtOAc)純化得到N-三氟乙酰基-^>^二[2-(4-曱氧基羰基-2-曱氧基-5-硝基-苯氧基)乙基]胺，化合物8淺黃色固體1HNMR(300MHz,CDC13)S3.86(s,3H),3.88(s,3H),3.886(s,3H),3.890(s,3H),4.04國(guó)4.09(m,4H),4.30-4.35(m,4H),6.98和6.99(2xs,2H),7.37和7.40(2xs,2H)?；衔?.仆三氟乙?；?^,^二[2-(4-曱氧基羰基-2-甲氧基-5-硝基-苯氧基)乙基]胺8(2.58g,4.16mmol)在THF-MeOH(l:2,48mL)中的溶液在室溫用10%含水K2C03(16mL)處理12小時(shí)。在用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去揮發(fā)物質(zhì)后，殘余物用100mL水稀釋，用EtOAc(3x100mL)提取。合并的EtOAc層用鹽水(100mL)洗滌，干燥(硫酸鎂)，濃縮得到N,N-二[2-(4-曱氧基羰基-2-甲氧基-5-硝基-苯氧基)乙基]胺，化合物9黃色固體，它無(wú)需進(jìn)一步純化而4吏用！HNMR(300固z,CDC13)53.17(t,J=3.9Hz,4H),3.89(s,6H),3,93(s,6H),4,19(t,J=3.9Hz,4H),7.05(s,2H),7.47(s,2H)?；衔?0.將N,N-二[2-(4-曱氧基羰基-2-甲氧基-5-硝基-苯氧基)乙基]胺9(粗，4.16mmol)和NaHCO3(210mg,2.50mmol)懸浮在THF中，在0。C用(BOC)20(999mg,4.58mmol)處理，在室溫持續(xù)攪拌3小時(shí)。在除去THF后，殘余物在水和EtOAc(100/100mL)之間分配，水層進(jìn)一步用EtOAc(2x50mL)提取。合并的層用鹽水(80mL)洗滌，干燥(硫酸鎂)，濃縮。殘余物用快速色譜法(硅膠，6:4己烷/EtOAc)純化得到N-叔丁氧基羰基-N,N-二[2-(4-曱氧基羰基-2-曱氧基-5-硝基-苯氧基)乙基]胺，化合物10淺黃色固體iHNMR(300固z,CDC13)S1.44(s,9H),3.77(m,4H),3.83,3.86和3.87(3xs,12H),4.20和4.26(2xt,J=3.9Hz,4H),6.97和6.99(2xs,2H),7.36和7.40(2xs,2H);EIMSm/z646([M]++Na)。化合物11.將N-叔丁氧基要g-N,N-二[2-(4-曱氧基羰基-2-曱氧基-5-硝基-苯氧基)乙基]胺，化合物10(2.11g,3.39mmo1)懸浮在THF-MeOH-H20(3:l:1,65mL)中，在室溫用lm含水LiOH(14mL)處理3小時(shí)。在除去揮發(fā)性溶劑后，殘余物用水(25mL)稀釋。得到的水溶液用濃HC1酸化至pH約1。過(guò)濾收集沉淀的1^-叔丁氧基羰基-風(fēng)^二[2-(4-羧基-2-曱氧基_5-硝基-苯氧基)乙基]胺，化合物11,用水洗滌，在高真空下進(jìn)一步干燥工HNMR(300MHz,CDC13,旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)51.39(s,9H),3.70(m,4H),3.88和3.89(2xs,6H),4.29(m,4H),7.29和7.31(2xs,2H),7.63(s,2H),13.60(br.s,2H);13CNMRS27.8,46.2和46.6,56.3和56.4,67.2，79.2,107.9和108.0,111.3,141.4和141.5,149.1，151.7,154.5,165.9;HRMSm/zC25H29N3014Na計(jì)算值618.1547,實(shí)驗(yàn)值618.1552([M]++Na)。化合物12.將催化量的DMF(2滴)加入N4又丁氧基羰基-N,N-二胺11(194mg,0.33mmol)和草酰氯(72.7口L,0.81mmol)在無(wú)水THF(6.5mL)中的溶液中，得到的混合物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去過(guò)量THF和草酰氯，乙酰氯重新懸浮在新鮮THF(4mL)中，在0。C和氬氣氣氛中，滴加到4-亞甲基-L-脯氨酸甲基酯5(206.7mg,0.81mmol)、Et3N(0.19mL,1.39mmol)和H2O(0.4mL)在THF(lmL)中的溶液中。反應(yīng)混合物溫?zé)岬绞覝兀掷m(xù)^;拌2小時(shí)。在除去THF后，殘余物在水和EtOAc(10/10mL)間分配，水層進(jìn)一步用EtOAc(2x8mL)提取。合并的有機(jī)層用鹽水(10mL)洗滌，干燥(石危酸鎂)和濃縮。殘余物用快速色譜法(硅膠，2:8己烷/EtOAc)純化得到二(2-[5-甲氧基-2-硝基-4-[(3)-4-亞甲基-2-甲氧基羰基-1-他咯烷基羰基]-苯氧基]-乙基}-氨基甲酸叔丁基酯12淺黃色油(旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)1HNMR(300MHz,CDC13,旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)S1.46(s,9H),2.68畫2.75(m,2H),2.99-3.10(m,2H)，3.60-4.28(m,24H),4.56畫5.12(m,6H),6.78國(guó)6.83(m,2H),7.63國(guó)7.71(m，2H);EIMSm/z864([M]++Na)?；衔?3.在-78。C和氬氣氣氛中，向二{2-[5-曱氧基-2-硝基_4_[(3)-4-亞曱基-2-甲氧基羰基-1-吡咯烷基羰基]苯氧基]-乙基}-氨基甲酸殺又丁基酯12(100mg,0.12mmol)在無(wú)水甲苯(2.4mL)中的劇烈攪拌的溶液中滴加DIBAL-H(480pL1M曱苯溶液)。在混合物再攪拌45分鐘后，通過(guò)加入5滴甲醇，隨后加入5。/QHCl(4mL)分解過(guò)量試劑。得到的混合物溫?zé)岬?。C,分層，水層進(jìn)一步用CH2Cl2(3x3mL)提取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，干燥(硫酸鎂)和濃縮。殘余物用快速色譜法(硅膠，95:5CHCl3/MeOH)純化得到二{2-[5-曱氧基-2-硝基-4-[(S)-4-亞甲基-2-甲?；?l-吡咯烷基羰基]苯氧基]-乙基卜氨基曱酸叔丁基酯13淺黃色油(84mg,91%)?；衔?4.在室溫下將二(2-[5-曱氧基-2-硝基-4-[(S)-4-亞甲基-2-曱酰基-l-吡咯烷基羰基]苯氧基]-乙基卜氨基曱酸叔丁基酯13(180mg,0.23mmol)、Na2S2〇4(1.84mmol,8當(dāng)量)、3.5mLTHF和2.2mLH2〇攪拌20小時(shí)。高真空除去溶劑，殘余物重新懸浮在MeOH(30mL)中，滴加AcCl直到pH約2。得到的混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)，反應(yīng)物通過(guò)除去大多數(shù)MeOH,隨后用EtOAc(25mL)稀釋處理。EtOAc溶液用飽和含水NaHC〇3、鹽水洗滌，干燥(硫酸鎂)和濃縮。殘余物用快速色譜法(硅膠,97:3CHCl3/MeOH)純化得到二-口-[(S)-2-亞甲基-7-曱氧基-5-氧代-l，2,3,11a-四氫-5H-吡咯并[2,1《][1,4]苯并二氮雜萆-8-基]-乙基}-氨基甲酸，僅丁基酯14白色固體(86mg,50%)。實(shí)施例!4l(llaS)-7-(5-溴戊氧基)-2-亞曱基-l,2,3,11a-四氫-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮方案2<formula>formulaseeoriginaldocumentpage83</formula>化合物15.向香草酸甲酯(9.109g,50mmol)在丙酮(200mL)中的溶液中加入K2C03(27.64g，200mmol)和1,5國(guó)二溴戊烷(20.4mL,150mmo1),將得到的混合物回流加熱。6小時(shí)后，TLC顯示沒(méi)有原料殘留。將混合物冷卻到室溫，過(guò)濾除去固體。濾液濃縮，用快速色譜法純化(硅膠，8:2己烷/EtOAc)得到4-(5-溴戊氧基)-3-甲氧基-苯曱酸曱基酯15白色固體(13.65g,82%):iHNMR(300MHz,CDC13)51.60-1.66(m,2H),1.85-1.97(m4H),3.42(t,J=5.0Hz,2H),3.87(s,3H),3.89(s,3H),4.06(t,J=5.0Hz,2H)，6.85(d,J=6.3Hz，1H),7.52(d,J=1.5Hz,1H),7.63(dd,J=6.3,1.5Hz,1H);EIMSm/z353和355([M]++Na)?；衔?6.在0。C將固體Cu(N03)2.xH20(3.64g,19.42mmol)加入4-(5-溴戊氧基)-3-曱氧基-苯曱酸曱基酯15(5.36g,16.18mmol)在乙酐(81mL)中的攪拌溶液中。反應(yīng)混合物在0。C攪拌1小時(shí)，在室溫?cái)嚢?小時(shí)，隨后傾倒入200mL冰水中。過(guò)濾收集生成的黃色沉淀，用水洗滌。在高真空下進(jìn)一步干燥得到4-(5-溴戊氧基)-5-曱氧基-2-硝基-苯曱酸甲基酯化合物16淺黃色固體(5.98g),它直接用于下一步驟丄HNMR(300固z,CDC13)51.59-1.70(m,2H),1.85國(guó)1.98(m,4H)13.43(t,J=5.1Hz,2H),3.89(s,3H),3.94(s,3H)，4.08(t,J=4.8Hz,2H),7.05(s,1H),7.42(s,1H)。EIMSm/z398和400([M]++Na)?；衔?7.將4-(5-溴戊氧基)-5-曱氧基-2-硝基-苯甲酸曱基酯16(5.98g,15.9mmol)懸浮在THF誦MeOH國(guó)H20(3:l:1,157mL)中，在室溫用1M含水LiOH(31mL)處理5小時(shí)。在除去揮發(fā)溶劑后，殘余物用水(70mL)稀釋。得到的含水溶液用濃鹽酸酸化至pH2，過(guò)濾收集沉淀的4-(5-溴戊氧基)-5-曱氧基-2-硝基-苯甲酸17,用水洗滌，在高真空下進(jìn)一步干燥(5.47g):HNMR(300畫z,CDC13)51.64-l,68(m,2H),1.87-1.98(m,4H),3.43(t,J=4.8Hz,2H),4.08(s,3H),4.10(t,J=5.1Hz,2H),7.21(s,1H),7.35(s,1H),B.60(br.s,1H);EIMSm/z384和386([M]++Na)?；衔?8.將催化量的DMF(2滴)加入4-(5-溴戊氧基)-5-曱氧基-2-硝基-苯曱酸17(270mg,0.74mmol)和草酰氯(80pL,0.89mmol)在無(wú)水THF(7.5mL)中的溶液中，得到的混合物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去過(guò)量THF和草酰氯，乙酰氯重新懸浮在新鮮THF(6mL)中，在0°C氬氣氣氛下，滴加到4-亞曱基-L-脯氨酸曱基酯5(228mg,0.89mmo1)、Et3N(0.32mL,2.31mmol)和H2O(0.15mL)在THF(1.5mL)中的溶液中。使反應(yīng)混合物溫?zé)岬绞覝兀掷m(xù)攪拌4小時(shí)，在除去THF后，殘余物在水和EtOAc(20/20mL)之間分配。水層進(jìn)一步用EtOAc(3x10mL)提取，合并的有機(jī)層用鹽水(20mL)洗滌，干燥(硫酸鎂)和濃縮。殘余物用快速色鐠法(硅膠，6:4己烷/EtOAc)純化得到l-[4-(5-溴戊氧基)-5-甲氧基-2-硝基-苯曱酰基]-4-亞甲基-L-脯氨酸曱基酯18淺黃色油(旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)iHNMR(300MHz,CDC13,旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)S1.62-1.68(m,2H),1.86-1.98(m,4H),2.64國(guó)2.75(m,1H),2.99-3.08(m,1H),3.43(t,J=5.1Hz,2H),3.59-3.96(m,7H),4.05國(guó)4.21(m,3H),4.57-4.61和4.90-5.12(m,3H),6.80和6.83(2s,1H),7.64和7.67(2s,1H);EIMSm/z507和509([M]++Na)。化合物19.向l-[4-(5-溴戊氧基)-5-甲氧基-2-硝基-苯甲?；鵠-4-亞曱基-L-脯氨酸甲基酯18(61mg,0.12mmo1)在無(wú)水曱苯-CH2C12(3:1,2.5mL)中的劇烈攪拌溶液中在-78°C氬氣氣氛下滴力口DIBAL-H(l88pL1M曱苯溶液)。在混合物再攪拌45分鐘后，通過(guò)加入5滴甲醇，隨后加入5。/oHCl(2mL)分解過(guò)量試劑。得到的混合物溫?zé)岬?°C,分層，水層進(jìn)一步用CH2C12(3x3mL)^是取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，干燥(石克酸鎂)和濃縮。殘余物用快速色譜法(硅膠，1:1己烷/EtOAc)純化得到(S)-l-[4-(5-溴戊氧基)-5-曱氧基-2-硝基-苯甲?；鵠-4-亞甲基-2-p比咯烷甲醛19淺黃色油(44mg,80%)?；衔?0.在室溫將(S)-l-[4-(5-溴戊氧基)-5-甲氧基-2-硝基-苯曱?；鵠_4-亞甲基-2-吡咯烷曱醛19(43.7mg,0.096mmo1)、Na2S204(0.58mmol,6equiv)、1.5mLTHF和0.9mLH2O的混合物攪拌18小時(shí)。高真空除去溶劑，殘余物重新懸浮在MeOH(6mL)中，滴加AcCl直到pH~2。得到的混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)，反應(yīng)物通過(guò)除去大多數(shù)MeOH,隨后用稀釋EtOAc(20mL)處理。EtOAc溶液用飽和含水NaHC03、鹽水洗滌，干燥(硫酸鎂)和濃縮。殘余物用快速色譜法(硅膠，98:2CHCl3/MeOH)純化得到(llaS)-7-(5-溴戊氧基)-2-亞甲基-l,2,3,11a-四氫-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮20淺黃色油(31mg,74%):!HN匿(300MHz,CDC13)Sl.58-1.66(m,2H),1.84國(guó)1.99(m,4H),2.91-2.95(m,1H),3.08-3.14(m,1H),3.42(t,J=5.1Hz,2H),3.93(s,3H),3.87-4.27(m,5H),5.15(brs,1H),5.18(brs,1H),6.84(s,1H),7.49(s,1H),7.71(d:J=4.0Hz,1H);EIMSm/z429和431([M]++Na)。化合物20可隨后與如實(shí)施例11中制備的PBD部分偶合形成本發(fā)明的化合物。實(shí)施例15:8,8，-[3-(2-乙酰基硫基甲基)-l,5-戊二基二(氧基)]-二[(S)-2-亞甲基-7-甲氧基-1,2,3,11a-四氫-5H-吡咯并[2，1《][1,4]苯并二氮雜萆-5-酮]在CTC向三苯基膦(1.77g,6.8mmol)在無(wú)水THF(15mL)中的溶液中滴力口偶氮二羧酸二乙酯(2.2M曱苯溶液，2.4mL,5.4mmo1),在0。C攪拌55分鐘后，滴力。3-(2-羥基乙基)戊烷-l,5-二醇(740mg,5mmol)和硫代乙酸(335nL，4.5mmol)在無(wú)水THF(7mL)中的溶液。l小時(shí)后移去水水浴，反應(yīng)物在室溫下攪拌16小時(shí)，通過(guò)真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑。殘余物用快速色譜法(CHCl3/MeOH,20:1,15:1,10:1,4:1)純化得到3-(2-乙?；蚧一?戊烷-l,5-二醇白色固體(350mg)，回收原料三醇(406mg)。&畫R(400Hz,CDC13):S3.65-3,63(m,4H),3.45(bs,2H),2.84-2.80(m,2H),2,28(s,3H),1.73-1.67(m,1H),1.55陽(yáng)1.49(m,6H)。MS(ESI):m/z229.0(M+Na)+。在0°C,向三苯基膦(53mg,0.2mmol)在無(wú)水THF(0.4mL)中的溶液中滴加偶氮二羧酸二異丙基酯(36iiiL,0.17mmo1)。在0。C攪拌25分鐘后，加入(llaS)-8-羥基-7-甲氧基-2-亞甲基-1,2,3,11a-四氫-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮,PBD單體,(38mg,0.14mmo1,使用前用無(wú)水苯共蒸發(fā)，在高真空下干燥幾小時(shí))在無(wú)水THF(0.2mL)中的溶液。混合物持續(xù)攪拌IO分鐘，隨后加入在無(wú)水THF(0.2mL)中的硫代乙酸酯化合物(12mg,0.058mmo1,4吏用前用無(wú)水苯共蒸發(fā)，在高真空下千燥幾小時(shí))溶液。反應(yīng)混合物在0。C攪拌35分鐘，移去水水浴，溶液在室溫下攪拌12小時(shí)。通過(guò)真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用快速色譜法(CHCl3/MeOH,100:1,50:1,25:1,20:1)純化得到8,8，-[3-(2-乙?；蚧谆?-l,5-戊二基二(氧基)]-二[(S)-2-亞甲基-7-甲氧基-l,2,3,11a-四氫巧H-吡咯并[2,1-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮](19mg,y=47%)。^NMR(400Hz,CDC13):S7.66(d,J=4.4Hz,2H),7.46(s,2H),6.78(s,2H),5.17(s,2H),5.14(s2H),4.26(s,4H),4.17-4.09(m,4H),3.88(s,6H)，3.87國(guó)3.83(m,2H),3.13-3.06(m,2H),2.94-2.90(m,4H),2.29(s,3H)11.95(bs,3H),1.68(bs,4H)。MS(ESI,用水):m/z745.3(M+2H20+Na)+,727.3(M+H20+Na)+,709.2(M+Na)+。實(shí)施例16:8,8，-[5-(N-4-巰基-4,4-二甲基丁?；?氨基-l,3-苯二基二(亞曱氧基)]-二[7-甲氧基-2-亞曱基-l,2,3,lla-四氳-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]可如下制備向三(2-羧基乙基)膦鹽酸鹽(TCEP,52mg,0.18mmol)在水(0.3mL)中的懸浮液中滴加飽和碳酸氬鈉(0.6mL)以調(diào)節(jié)pH至67,隨后向其中加入磷酸鹽緩沖液(pH7.0,10mM,Na2HP04/H3P04,0.5mL)。將如此得到的TCEP溶液加入8,8，-[5-(N-4-甲基二硫基-4,4-二甲基丁?；?-氨基-l,3-苯二基二(亞甲氧基)]-二[7-曱氧基-2-亞甲基-l,2,3,lla-四氬-5H-吡咯并[2，l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮](29mg,0.036mmol)在甲醇(2.2mL)中的混合物中，在室溫下攪拌3小時(shí)。反應(yīng)用磷酸鹽緩沖液(pH6.5)停止，用二氯甲烷提取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾和減壓除去溶劑得到白色固體。將固體溶解在二氯甲烷/MeOH(2:l)中，再次蒸發(fā)。加入二氯曱烷并蒸發(fā)，殘余物高真空干燥，用逆相C18柱{CH3CN/H20,在裝柱前將固體溶解在CH3CN/H20(3:l,2mL)中，攪拌30分鐘}純化得到8,8，-[5-(N-4-巰基-4,4-二曱基丁?；?氨基-l,3-苯二基二(亞曱氧基)]-二[7-甲氧基-2-亞甲基-l,2,3,lla-四氫-5H-吡咯并[2,l-c][1,4]苯并二氮雜萆-5-酮](llmg)白色固體(方法H)。MS(ESI):m/z=786.3MNa+m/z=804.2MNa++H20。8,8，-[5-(N-4-甲基二硫基-4,4-二曱基丁?；?氨基-l,3-苯二基二(亞甲氧基)]-二[7-曱氧基-2-亞曱基-1,2,3,11a-四氫-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]可如下制備向5-(N-4-曱基二硫基-4,4-二曱基丁酰基)-氨基-l,3-二-(曱磺酰氧基曱基)-苯(89mg,0.18mmol)溶解在無(wú)水DMF(2mL)中的溶液中在室溫下加入8-鞋基-7-曱氧基-2-亞曱基-l,2,3,lla-四氫-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜革-5-酮(93mg,0.36mmol)、碳酸鉀粉末(100mg,0.72mmol)、碘化鉀粉末(15mg,0.09mmol)和四丁基碘化銨(13mg,0.036mmol)。在混合物攪拌1小時(shí)后，加入第二部分的8-羥基-7-曱氧基-2-亞甲基-1,2,3,11a-四氬-5H-吡咯并[2,1《][1,4]苯并二氮雜萆-5-酮(2211^,0.085mmo1)。在室溫下溶液持續(xù)攪拌3小時(shí)，反應(yīng)用水停止，用二氯甲烷稀釋。分離有機(jī)層，水層用二氯曱烷提取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥。過(guò)濾和減壓蒸發(fā)濾液，隨后高真空蒸發(fā)以除去殘留DMF。殘余物隨后用逆相C18柱(CH3CN/H20)純化得到8,8，-[5-(N-4-曱基二硫基-4,4-二曱基丁酰基)氨基-1,3-苯二基二(亞曱氧基)]-二[7-甲氧基-2-亞甲基-1,2,3,11a-四氬-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮](29mg)白色固體(方法H)。MS(ESI):m/z=832.2MNa+m/z=850.2MNa++H20HNMR(柳Hz,CDCl3-dlSppm):7.67(bs,2H),7.58誦7.26(m,5H),6.82(s,2H),5.21畫5.14(m,8H),4.30(s,4H)14.02-3.88(m,9H),3.16-3.10(m,2H),2.97-2.93(m,2H),2.45-2.40(m,5H),2.09隱2.03(m,2H),1.34(s,6H)。5—(N-4-曱基二硫基-4,4-二曱基丁酰基)氨基-l,3-二-(甲磺酰氧基曱基)-苯可如下制備在-2。C,在10分鐘，向5-(N-4-甲基二硫基-4,4-二甲基丁?；?-氨基-1,3-二-(幾基曱基)-苯(32911^，1.0mmol)在無(wú)水二氯甲烷(7mL)中的懸浮液中滴加三乙胺(348^L,2.5mmo1),隨后滴力。曱磺酰氯(193|iL,2.5mmol)。溶液在0。C再攪拌10分鐘，用水水混合物驟冷，混合物用冷二氯曱烷提取，合并的二氯曱烷層用冷水洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥。過(guò)濾，濾液通過(guò)真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，殘余物用短硅膠柱(二氯甲烷/己烷/乙酸乙酯，l:2:4)快速純化得到5-(N-4-甲基二硫基-4,4-二曱基丁?；?氨基-l,3-二-(曱磺酰氧基甲基)-苯無(wú)色油(41Omg)。MS(ESI):m/z=508.0顧a十m/z=483.9M-Hm/z=519.9M-H+2H205-(N-4-甲基二硫基-4,4-二甲基丁酰基)-氨基-l,3-二-(羥基甲基)-苯可如下制備<formula>formulaseeoriginaldocumentpage89</formula>向5國(guó)硝基-m陽(yáng)二曱苯畫a,a，國(guó)二醇(8卯mg，5.4mmol)在甲醇(50mL)中的溶液中加入Pd/C(100/。，287mg)。輸入氬氣，混合物在壓力(112,5-8psi)下在室溫下氬化5小時(shí)。溶液通過(guò)C鹽過(guò)濾，濾液通過(guò)真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)過(guò)程蒸發(fā)得到5-氨基-m-二甲苯-a,a，-二醇，將其溶解在THF(10mL)/DMF(15ml)中。在室溫下加入溶解在THF(5ml)中的4-曱基二硫基-4,4-二曱基丁酸(1.05g,5.4mmo1),隨后加入l-(3-二曱基氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(2.1g,10.8mmol)和4-二甲基氨基吡啶(66mg,0.54mmo1)。得到的混合物在室溫下攪拌過(guò)夜，用10%氯化銨停止，用乙酸乙酯提取，洗滌和干燥。經(jīng)過(guò)濾，真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用快速色譜法(CH2CVMeOH,15:1,10:1,7:1)純化得到5-(N-4-曱基二硫基_4,4-二甲基丁酰基)-氨基-1,3-二-(羥基甲基)-苯白色固體(729mg)。MS(ESI):m/z=352.1顧a十NMR(400Hz,CDCl3-dl,5ppm):7.47(s,2H),7.10(s,1H),4.58(s,4H),2.52國(guó)2.47(m,2H),2.42(s,3H),2.02-1.98(m,2H),1.34(s,6H)。實(shí)施例17:8,8，-[5-(N-曱基-N-(2-巰基-2,2-二甲基乙基)氨基-l,3-苯二基(亞曱氧基)]-二[7-甲氧基-2-亞曱基-l,2,3,lla-四氳-5H-吡咯并[2,l-c][1,4]苯并二氮雜革-5-酮]可如下制備向三(2-羧基乙基)膦鹽酸鹽(TCEP，64mg,0.22mmol)在水(0.05mL)中的懸浮液中滴加飽和碳酸氫鈉(0.7mL)以調(diào)節(jié)pH至67,隨后向其中加入磷酸鹽緩沖液(pH7.0,10mM,Na2HPO4/H3PO4,0.8mL)。將如此得到的TCEP溶液加入8,8，-[5-(N-甲基-N-(2-甲基二硫基-2,2-二曱基乙基)氨基-1,3-苯二基(亞曱氧基))-二[7-曱氧基-2-亞甲基-1,2,3,11&-四氫-511-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮](35mg,0.045mmol)在甲醇(5mL)中的混合物中，在室溫下攪拌4.5小時(shí)。反應(yīng)用磷酸鹽緩沖液(pH6.5)停止，用二氯甲烷提取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾和減壓除去溶劑得到白色固體。將固體溶解在二氯甲烷/MeOH(2:l)中，再次蒸發(fā)。加入二氯甲烷并蒸發(fā)，殘余物高真空干燥，用逆相C18柱{CH3CN/H20,在裝柱前將固體溶解在CH3CN/H20(3:l,2mL)中，攪拌30分鐘}純化得到8,8，-[5-(N-曱基-N-(2-巰基-2,2-二曱基乙基)氨基-l,3-苯二基(亞曱氧基)]-二[7-曱氧基-2-亞曱基-1,2,3,1la-四氫-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮](10.5mg,丫=32%)白色固體(方法H)。MS(ESI):m/z=758.2MNa+m/z=776.2畫a十+H20m/z=794.3MNa++2H208，8，-[5-(N-曱基-N-(2-曱基二硫基-2,2-二曱基乙基)氨基-l,3-苯二基(亞甲氧基)]-二[7-甲氧基-2-亞甲基-1,2,3,11a-四氫-5H-吡咯并[2,l-c][1,4]苯并二氮雜革刁-S同]可如下制備<formula>formulaseeoriginaldocumentpage90</formula>向5-(N-甲基-N-(2-甲基二硫基-2,2-二甲基乙基)氨基-l,3-二-(甲磺酰氧基曱基)-苯(105mg,0.23mmol)溶解在無(wú)水DMF(2.5mL)中的溶液中在室溫下加入8-羥基-7-甲氧基-2-亞甲基-l,2,3,lla-四氳-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜革-5-酮(119mg,0.46mmo1)、碳酸鉀粉末(127mg,0.92mmo1)、碘化鉀粉末(20mg,0.12mmo1)和四丁基碘化銨(17mg,0.046mmo1)。在混合物攪拌1.5小時(shí)后，加入第二部分的8-羥基-7-曱氧基-2-亞曱基-1,2,3,11a-四氫-5H-吡咯并[2,1《][1,4]苯并二氮雜萆-5-酉同(23mg,0.089mmo1)。在室溫下溶液持續(xù)攪拌4.5小時(shí)，反應(yīng)用水停止，用二氯曱烷稀釋。分離有機(jī)層，水層用二氯甲烷提取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用無(wú)水^琉酸鈉干燥。過(guò)濾溶液和減壓蒸發(fā)濾液，隨后高真空蒸發(fā)以除去殘留DMF。殘余物重新懸浮CH3CN/H2O(10:l)中，并過(guò)濾。蒸發(fā)濾液，粗產(chǎn)物用逆相C18柱(CH3CN/H20)純化得到8,8，-[5-(N-甲基-^(2-曱基二硫基-2,2-二甲基乙基)氨基-l,3-苯二基(亞甲氧基))-二[7-甲氧基-2-亞甲基-1,2,3,11a-四氬-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮](39mg)白色固體(方法H)。MS(ESI):m/z=804.2MNa+m/z=822.2顧a十+H20m/z=840.2畫a十+2H20iHNMR(400Hz,CDCl3-dl,5ppm):7.64(bs,2H),7.50(s,2H),6.83-6.76(m，5H),5.18-5,10(m,8H),4.27(s,4H),3.95(s,6H),3.90-3.84(m,3H),3.51(s，2H),3.13-3.07(m,2H),3.01(s,3H),2.94國(guó)2.90(m,2H)12.41(s,3H),1.30(s,6H)。5-(N-甲基-N-(2-曱基二硫基-2,2-二曱基乙基)氨基-l,3-二-(曱磺酰氧基甲基)-苯可如下制備在-2。C，在IO分鐘，向5-(N-曱基-N-(2-甲基二硫基-2,2-二甲基乙基)氨基-l,3-二-(羥基甲基)-苯(135mg,0.45mmol)在無(wú)水二氯甲烷(3mL)中的溶液中滴加三乙胺(153l.lmmol),隨后滴加甲磺酰氯(87pL,l.lmmol)。溶液在0。C再攪拌30分鐘，用水/水驟冷，混合物用冷二氯曱烷提取，合并的二氯曱烷層用冷水洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥。過(guò)濾，濾液通過(guò)真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，殘余物制備TLC板(己烷/乙酸乙酯，1:1.5)純化得到5-(N-甲基-N-(2-曱基二硫基-2,2-二曱基乙基)氨基-l,3-二-(曱磺酰氧基曱基)-苯無(wú)色油(105mg)。MS(ESI):m/z=480.0顧a十5畫(N-甲基-N-(2-曱基二硫基-2,2-二甲基乙基)氨基-l,3-二-(羥基甲基)-苯可如下制備CH2C120。C,30分鐘MsO.MsCITEA<formula>formulaseeoriginaldocumentpage92</formula>向5-(N-(2-曱基二硫基-2,2-二甲基乙基)氨基-l,3-二-(羥基甲基)-苯(226mg,0.78mmol)在DMF(4mL)中的溶液中加入》典甲烷(149pL,2.4mmol)，隨后加入碳酸鉀粉末。在室溫下攪拌4天后，混合物用飽和氯化銨驟冷，用二氯甲烷稀釋。分離有機(jī)層，水層用二氯曱烷提取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥。殘余物用快速色語(yǔ)法純化(己烷/乙酸乙酯，1:2)得到5-(N-甲基-N-(2-甲基二硫基-2,2-二甲基乙基)氨基-1,3-二-(羥基曱基)-苯無(wú)色泡沫(152mg)。MS(ESI):m/z=324.1MNa+工HNMR(400Hz,CDCl3-dl,5ppm):6.70(s,2H),6.66(s,1H),4.06(s,4H),3.54(s,2H),3.04(s，3H),2.46(s,3H),1.37(s,6H)。5-(N-(2-甲基二硫基-2,2-二甲基乙基)氨基-l,3-二-(羥基曱基)-苯可如下制備<formula>formulaseeoriginaldocumentpage92</formula>然后NaBH4,01h向5-氨基-l,3-二-羥基曱基-苯(765mg,5mmol)在無(wú)水乙醇(25mL)中的溶液中加入2-(甲基二硫基)-異丁醛(751mg,5mmo1)。在室溫下攪拌4小時(shí)后，將溶液用冰/水浴冷卻到0°C,加入硼氫化鈉(220mg,5.8mmol)?；旌衔镌?。C持續(xù)攪拌1小時(shí)，隨后用冷5%鹽酸停止，用二氯曱烷稀釋。加入飽和碳酸氳鈉，使溶液微堿性。分離有機(jī)層，水層用二氯曱烷提取，合并的有才幾層用鹽水洗滌，用無(wú)水辟u酸鈉干燥。過(guò)濾溶液，濾液減壓蒸發(fā)。殘余物用快速色譜法(CH2Cl2/MeOH,15:1,10:1)純化得到5-(N-(2-曱基二硫基-2,2-二曱基乙基)氨基-l,3-二-(羥基曱基)-苯無(wú)色油(832mg)。MS(ESI):m/z=310.0MNa+實(shí)施例18:8,8，-[(4-(2-(4-疏基-4-甲基)-戊酰氨基-乙氧基)-吡啶-2,6-二曱基)-二氧基]-二[(S)曙2國(guó)亞乙誦(E)國(guó)基國(guó)7國(guó)二曱氧基國(guó)l,2,3,lla陽(yáng)四氫國(guó)p比咯并[2,l-c][1,4]苯并二氮雜萆-5-酮]可如下制備向8,8，-[(4-(2-(4-曱基-4-曱基二硫基)-戊酰氨基-乙氧基)-吡啶-2,6-二曱基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二甲氧基-l,2,3,11a-四氫-他咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜萆-5-酮](60mg)在曱醇(1.6mL)中的溶液中加入DMF(0.2mL)和三(2-羧基乙基)膦鹽酸鹽(48mg)在水0.2mL中的溶液。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌18小時(shí)，真空除去溶劑得到殘余物，其用硅膠色譜法(MerckSuperVarioFlash10g柱，Si6015-40口m)純4匕，用曱醇(A)/二氯甲烷/乙腈9:l(B)梯度洗脫，(梯度100。/。B下降至10%A:90%B)得到8,8，-[(4-(2-(4-巰基-4-甲基)-戊酰氨基-乙氧基)-吡啶-2,6-二曱基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二曱氧基-1,2,3,11a-四氫-吡咯并[2，l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酉同](17mg):LC/MS(方法Al,ZQ):ES:m/z=855MH++H20m/z=837MH+保留時(shí)間=3.70分鐘8,8，-[(4-(2-(4-甲基-4-甲基二硫基)-戊酰氨基-乙氧基)-吡啶-2,6-二曱基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二曱氧基-l,2,3,lla-四氫-吡咯并[2，1<][1,4]苯并二氮雜萆-5-酮]可如下制備<formula>formulaseeoriginaldocumentpage93</formula>向4-(2-(4-曱基-4-甲基二硫基)-戊酰氨基-乙氧基)-2,6-二-(羥基曱基)-吡啶(360mg)和三乙胺(810iuL)在二氯曱烷(4mL)中的冷卻(0。C)溶液中加入甲磺酰氯(298pL)在二氯曱烷(4mL)中的溶液。2小時(shí)后，加入水，分層，水層用二氯甲烷提取兩次。合并有機(jī)溶液用硫酸鈉干燥，真空濃縮得到殘余物。殘余物用硅膠色譜法(InterchromPuriflash20g柱，SiOH15-35口m)純化，使用甲醇(A)/二氯甲烷(B)的混合物進(jìn)行梯度洗脫，(梯度:100%B下降至3%A:97。/oB)得到280mg曱磺酸酯化合物。向pre-茅屋霉素(120mg)在二曱基曱酰胺(4mL)中的溶液中加入碳酸鉀(244mg)、碘化鉀(147mg)和曱磺酸酯化合物(137mg)樣品。反應(yīng)混合物在30。C攪拌20小時(shí)，加入水(20mL)，過(guò)濾出生成的固體，用水洗滌，真空干燥得到殘余物。殘余物用珪膠色譜法(InterchromPuriflash20g柱，SiOH15-35口m)純化，使用曱醇(A)/二氯甲烷(B)的混合物進(jìn)行梯度洗脫，(梯度100%B下降至6%A:94。/。B)得到粗化合物，它溶解在水/乙腈1:1中，隨后真空濃縮得到8,8，-[(4-(2-(4-甲基-4-甲基二硫基)-戊酰氨基-乙氧基)-吡啶-2,6-二甲基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-@)-基-7-二甲氧基-1,2,3,1la-四氫-p比咯并[2,l國(guó)c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮](120mg):LC/MS(方法Al,ZQ):ES:m/z=919MH++2H20m/z=901MH++H2Om/z=883MH+保留時(shí)間=3.82分鐘&N.M.R,(500固z,CDCl3-dl,3ppm):S=l,28(s,6H);l,75(d,J=6,5Hz,6H);l,94(m,2H);2,29(m,2H);2,39(s,3H);2，97(m,4H);3,50-4,20(m,6H);4,00(s,6H);4,27(s,4H);5,27(m,4H);5,61(m,2H);5,87(tb,J=5,5Hz,1H);6,83(s,2H);6,97(s,2H);7,55(s,2H);7,64(d,J=4,5Hz,2H)。4_(2_(4-曱基-4-曱基二硫基)-戊酰氨基-乙氧基)-2,6-二-(羥基曱基)-他啶可如下制備向4-(2-叔丁氧基羰基氨基-乙氧基)-2,6-二-(羥基曱基)-吡啶(656mg)在二-惡烷(3.5mL)中的溶液中加入鹽酸4N二喝烷(5.5mL)溶液。在室溫下4小時(shí)后，反應(yīng)混合物真空濃縮得到殘余物(603mg)。向上述殘余物(150mg)在二曱基曱酰胺(3.5mL)中的溶液中加入三乙胺(267pL)、4-甲基-4-曱基二硫基-戊酸(149mg)、N,N，-二異丙基碳化二亞胺(119pL)和l-羥基苯并三唑水合物(49mg)。在室溫下15小時(shí)后，向反應(yīng)混合物中加入水，水溶液用乙酸乙酯提取三次。合并的有機(jī)溶液用飽和氯化鈉水溶液洗滌，用硫酸鎂干燥，真空濃縮得到殘余物。殘余物用硅膠色譜法(InterchromPuriflash20g柱，SiOH15-35pm)純化，使用曱醇(A)/二氯曱烷(B)的混合物進(jìn)行梯度洗脫，(梯度100%B下降至10%A:90Q/oB)得到4-(2-(4-曱基-4-曱基二硫基)-戊酰氨基-乙氧基)-2,6-二-(羥基甲基)-吡啶(81mg):LC/MS(方法A3):ESm/z=375MH+丄HN.M.R.(400MHz，DMSO-d6,5ppm):S=l,22(s,6H);1,79(m,2H);2,19(m,2H);2,39(s,3H);3,43(q,J=5,5Hz,2H);4,06(t,J=5,5Hz,2H);4,45(db,J=6,0Hz,4H);5,33(d,J=6,0Hz,2H);6,84(s,2H);8,13(tb,J=5，5Hz,1H)。4-(2-叔丁氧基羰基氨基-乙氧基)-2,6-二-(羥基甲基)-吡啶根據(jù)制備4-(3-叔丁氧基羰基氨基-丙氧基)-2,6-二-(羥基曱基)吡啶的方法，用4-(2-叔丁氧基羰基氨基-乙氧基)-吡啶-2,6-二羧酸二乙酯為原料，可制備4-(2-叔丁氧基羰基氨基-乙氧基)-2,6-二-(羥基甲基)-吡啶。LC/MS(方法A3):ESm/z=299MH+m/z=156C7H10NO保留時(shí)間=2.2分鐘m/z=156C7H10NO3保留時(shí)間=1.7分鐘1HN.M.R.(300MHz,DMSO-d6,5ppm):S=l，39(s,9H);3,32(m部分掩蔽,2H);4,03(t,J=6,0Hz，2H);4，46(d,J=6,0Hz,4H);5，30(t,J=6,0Hz,2H);6,83(s,2H);7,00(tb,J=6,0Hz,IH)。4-(2-叔丁氧基羰基氨基-乙氧基)-吡啶-2,6-二羧酸二乙酯O0根據(jù)4-(2-叔丁氧基羰基氨基-丙氧基)-吡啶-2,6-二羧酸二乙酯的制備方法，以2-叔丁氧基羰基氨基-乙基溴為原料，可制備4-(2-叔丁氧基羰基氨基-乙氧基)-吡啶-2,6-二羧酸二乙酯。LC/MS(方法A3):ESm/z=383MH+m/z=240CuHmNO/保留時(shí)間=3.6分鐘力N.MR.(300MHz,DMSO-d6,Sppm):S=l,23(t,J=7,0Hz,6H);l,37(s,9H);3,33(m部分掩蔽，2H);4,22(t,J=5,5Hz,2H);4,38(q,J=7,0Hz,4H);7,01(tb，J=5,5Hz,1H);7,71(s,2H)。實(shí)施例19:8,8，-[(1-(2-(4-曱基-4-曱基二硫基)-戊酰氨基-乙氧基)-苯-3,5-二甲基)-二氧基]-二[(S)-2畫亞乙-(E)-基-7-二甲氧基畫1,2,3,11a-四氫畫p比咯并[2,l-c][1,4]苯并二氮雜萆-5-酮]根據(jù)8,8，-[(4-(2-(4-曱基-4-甲基二硫基)-戊酰氨基-乙氧基)-吡啶-2,6-二曱基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二甲氧基-l,2,3,lla-四氫-p比咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]的制備方法，用l-(2-(4-甲基-4-甲基二硫基)-戊酰氨基-乙氧基)-3,5-二-(羥基曱基)-苯為原料，可制備8,8，-[(1-(2-(4-甲基-4-曱基二疏基)-戊酰氨基-乙氧基)-苯-3,5-二曱基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二曱氧基-l,2,3,lla-四氫-吡咯并[2,l-c][1,4]苯并二氮雜萆-5-酮]:LC/MS(方法Al,PlatformI):ES:m/z=882MH+保留時(shí)間=4.13分鐘^N.M.R,(500畫z,CDCl3-dl,Sppm):1,30(s,6H);l,75(d,J=6,5Hz,6H);1,96(m，2H);2,31(m,2H);2,40(s,3H);2,97(m,4H);3,66(m,2H);3,89(m,2H);3,97(s,6H);4,04(t,J=5,5Hz,2H);4,27(sb,4H);5,14(d,J=12,5Hz,2H);5,19(d,J=12,5Hz,2H);5,61(m,2H);5，93(t,J=6,0Hz，1H);6,82(s,2H);6,94(sb,2H);7,09(sb,1H);7,53(s,2H);7,64(d,J=4,5Hz,2H)。1-(2_(4-甲基-4-曱基二硫基)-戊酰氨基-乙氧基)-3,5-二-(羥基甲基)-苯根據(jù)4-(2-(4-甲基-4-曱基二硫基)-戊酰氨基-乙氧基)-2,6-二-(羥基甲基)-吡啶的制備方法，用l-(2-叔丁氧基羰基氨基-乙氧基)-3,5-二-(羥基曱基)-苯可制備l-(2-(4-甲基-4-曱基二硫基)-戊酰氨基-乙氧基)-3，5-二-(羥基曱基)-苯}HN.M.R,(400MHz,CDCl3-dl,Sppm):S=l,22(s,6H);1,80(m,2H);2,20(m,2H);2,39(s,3H);3,40(q,J=6,0Hz,2H);3,95(t,J=6,0Hz,2H);4,44(d,J=6,0Hz,4H);5,1l(tb,J=6,0Hz,2H);6,73(sb,2H);6,84(sb,1H);8,09(tb,1H)。l-(2-叔丁氧基羰基氨基-乙氧基)-3,5-二-(羥基曱基)-苯根據(jù)5-(3-鄰苯二甲酰亞氨基-丙氧基)-l,3-二-(羥基甲基)-苯的制備方法，用2-叔丁氧基羰基氨基-乙基溴可制備1-(2-叔丁氧基羰基氨基-乙氧基)-3,5-二-(羥基曱基)-苯LC/MS(方法A3):ESm/z=298MH+m/z=242(M+2H-tBu)+m/z=224(m/z=242-H20)+m/z=206(m/z=224-H20)+m/z=162(m/z=206-C02)+保留時(shí)間=2.7分鐘!HN.M.R.(500固z,DMSO-d6,5ppm):5=l,39(s,9H);3,28(q,J=6,0Hz,2H);3,91(t,J=6,0Hz,2H);4,44(d,J=6,0Hz,4H);5,14(t,J=6,0Hz,2H);6,72([epsilon]b,2H);6,83(sb,1H);7,01(tb,J=7,0Hz,IH)。實(shí)施例20:8,8，-[(4-(3-(4-曱基-4-甲基二硫基)-戊酰氨基-丙氧基)-吡啶-2,6-二甲基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二曱氧基-l,2,3,11a-四氫-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜革-5-酮]可如下制備向4-(3-(4-曱基-4-曱基二硫基)-戊酰氨基-丙氧基)-2,6-二-(羥基曱基)-吡啶(55mg)和三乙胺(99(iL)在二氯曱烷(2mL)中的冷卻(0。C)溶液中加入曱磺酰氯(36pL)。30分鐘后，加入水，分層，水層用二氯甲烷提取兩次。合并有沖幾溶液用石危酸4美干燥，真空濃縮得到殘余物(95mg)。向pre-茅屋霉素(50mg)在二甲基甲酰胺(0.75mL)中的溶液中加入碳酸鉀(114mg)、上述殘余物(55mg)在二甲基甲酰胺(lmL)中的溶液和碘化鉀(46mg)。反應(yīng)物在3(TC攪拌20小時(shí)，過(guò)濾出固體，用二甲基曱酰胺洗滌。在合并的二曱基曱酰胺溶液中加入水，加入甲酸直到沉淀完全消失。得到的溶液根據(jù)方法B注射進(jìn)行HPLC純化。合并合適的餾分，用JouanModelRC10.10.裝置離心蒸發(fā)濃縮得到8,8，-[(4-(3-(4-曱基-4-曱基二硫基)-戊酰氨基-丙氧基)-吡啶-2,6-二甲基)-二氧基]-二[(3)-2-亞乙-(￡)-基一7-二曱氧基-l,2，3,lla-四氫-吡咯并[2,l-c][1,4]苯并二氮雜革-5-酮](13.5mg)。LC/MS(方法A3):ESm/z=897MH+m/z=664(M-C10H20NOS2+2H)+m/z=234C10H20NOS2+保留時(shí)間=3.7分鐘JHN.M.R,(500固z,CD3COOD-d4,5ppm):5=l,25(s，6H);1,60國(guó)2,20(m部分掩蔽，10H);2,35(m,5H);2,80-4,44(m,14H);3,91(s,6H);5,40(s,4H);5,62(m,2H);6,83-7,95(m,8H)。4-(3-(4-甲基-4-甲基二硫基)-戊酰氨基-丙氧基)-2,6-二-(羥基甲基)-吡啶根據(jù)4-(2-(4-曱基-4-甲基二硫基)-戊酰氨基-乙氧基)-2,6-二-(羥基甲基)-吡啶的制備方法，用4-(3-叔丁氧基羰基氨基-丙氧基)-2,6-二-(羥基甲基)-吡啶可制備4-(3-(4-甲基-4-甲基二硫基)-戊酰氨基-丙氧基)-2,6-二-(羥基曱基)-吡啶LC/MS(方法A3):ESm/z=389MH+m/z=234(M-C7H8N03)+m/z=156C7H10NO3+保留時(shí)間=2.3分鐘由實(shí)施例20化合物衍生的硫醇(SH)衍生物與下式化合物保護(hù)平衡:實(shí)施例21:8,8，-[(4-(4-(4-甲基-4-甲基二硫基)-戊酰氨基-丁氧基)-吡啶-2,6-二曱基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二曱氧基-1,2,3,11a-四氫-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]根據(jù)8,8，-[(4-(3-(4-曱基-4-甲基二硫基)-戊酰氨基-丙氧基)-吡啶-2,6-二甲基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二甲氧基-l,2,3,11a-四氫-p比咯并[2,l-c][1,4]苯并二氮雜萆-5_酮]的制備方法，用4-(4-(4-甲基-4-甲基二硫基)-戊酰氨基-丁氧基)-2,6-二-(羥基甲基)-吡啶可制備8,8，-[(4-(4-(4-甲基-4-曱基二硫基)-戊酰氨基-丁氧基)-吡啶-2,6-二曱基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二甲氧基-l,2，3,11a-四氫-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜革誦5-酮]:LC/MS(方法Al,PlatformII):ES:m/z=947MH++2H20m/z=929MH++H2〇m/z=911MH+1保留時(shí)間=3.74分鐘N.M.R,(500顧z,CD3COOD-d4,5ppm):5=l,26(s，6H);1,59畫l,76(m,8H);1,81-l,94(m,4H);2,35(m,5H);2，80-4,40(m,14H);3,92(s,6H);5,39(m,4H);5,50(m,2H);6,72-7,95(m,8H)。4-(4-(4-甲基-4-曱基二硫基)-戊酰氨基-丁氧基)-2,6-二-(羥基甲基)-吡啶<formula>formulaseeoriginaldocumentpage101</formula>根據(jù)4-(2-(4-曱基-4-曱基二疏基)-戊酰氨基-乙氧基)-2,6-二-(羥基甲基)-吡啶的制備方法，用4-(4-叔丁氧基羰基氨基-丁氧基)-2,6-二-(羥基甲基)-吡啶可制備4-(4-(4-甲基-4-曱基二硫基)-戊酰氨基-丁氧基)-2,6-二-(羥基甲基)-吡啶LC/MS(方法A3):ESm/z=403MH+m/z=248(M-C7H8N03)+m/z=156C7H10NO3+保留時(shí)間=2.3分鐘4-(4-叔丁氧基羰基氨基-丁氧基)-2,6-二-(羥基甲基)-吡啶<formula>formulaseeoriginaldocumentpage101</formula>根據(jù)4-(3-叔丁氧基羰基氨基-丙氧基)-2,6-二-(羥基曱基)吡啶的制備方法，用4-(4-叔丁氧基羰基氨基-丁氧基)-吡啶-2,6-二羧酸二乙酯可制備4-(4-叔丁氧基羰基氨基-丁氧基)-2,6-二-(羥基甲基)-吡啶LC/MS(方法A3):ESm/z=411MH+m/z=355(M+2H-tBu)+m/z=240CuHmN。5十保留時(shí)間=3.9分鐘4-(4-叔丁氧基羰基氨基-丁氧基)-吡啶-2,6-二羧酸二乙酯<formula>formulaseeoriginaldocumentpage102</formula>根據(jù)4-(3-叔丁氧基羰基氨基-丙氧基)-吡啶-2，6-二羧酸二乙酯的制備方法，用曱磺酸4-叔丁氧基羰基氨基-丁基酯(CazenaveGassiot,A.;Charton,J.;Girault-Mizzi,S.;Gilleron,P.;Debreu-Fontaine,M國(guó)A.;Sergheraert,C;Melnyk,P.Bioorg.Med,Chem.Lett.2005,15(21),4828)可制備4-(4-叔丁氧基羰基氨基-丁氧基)-吡啶-2,6-二羧酸二乙酯LC/MS(方法A3):ESm/z=327MH+m/z=271(M+2H-tBu)+m/z=156C7H10NO3+保留時(shí)間=2.0分鐘實(shí)施例22:8,8，-[(4-(3-[4-(4-曱基-4-甲基二硫基-戊?；?-哌。秦-1-基]-丙基)-吡啶陽(yáng)2,6-二甲基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二甲氧基-l,2,3,lla-四氫-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜革-5-酮]根據(jù)8,8，-[(4-(3-(4-甲基-4-曱基二硫基)-戊酰氨基-丙氧基)-吡啶-2,6-二甲基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二曱氧基-l,2,3,11a-四氫-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]的制備方法，用4-(3-[4-(4-曱基-4-甲基二硫基-戊?；?-哌"秦-l-基]-丙基)-2,6-二-(羥基曱基)-吡啶可制備8,8，-[(4-(3-[4-(4-曱基-4-甲基二硫基-戊酰基)-哌嗪-1-基]-丙基)-吡啶-2,6-二甲基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二甲氧基-l,2,3,lla-四氳-p比咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]:LC/MS(方法Al,PlatformII):ES:m/z=950固+保留時(shí)間=3.32分鐘&N.M.R,(500MHz,CDC13,5ppm):S=l,32(s,6H);l,76(d,J=6,5Hz,6H);1,80(m,2H);1,94(m,2H);2,27-2,46(m,11H);2,67(m,2H);2,97(m,4H);3,40-3,70(m,4H);3,90(m,2H);4,00(s,6H);4,27(sb,4H);5,29(sb,4H);5,60(qb,J=6,5Hz,2H);6,86(s,2H);7,30(s,2H);7,56(s,2H);7，65(d,J=4,5Hz,2H)。4-(3-[4-(4-曱基-4-曱基二硫基-戊?；?-哌嗪-l-基]-丙基)-2,6-二-(羥基甲基)-吡啶可如下制備向4-(3-(4-叔丁氧基羰基-哌嗪-1-基)-丙基)-2,6-二-(羥基甲基)-吡啶(610mg)在二噹烷(10mL)中的溶液中加入鹽酸4N二哺烷(2.5mL)溶液。在室溫下4小時(shí)后，反應(yīng)混合物真空濃縮得到殘余物(650mg)。向上述殘余物(160mg)樣品在二曱基曱酰胺(2.5mL)中的溶液中加入N,N-二異丙基乙胺(181pL)、4-甲基-4-甲基二硫基-戊酸(158mg)、N,N，-二異丙基碳化二亞胺(88nL)和l-羥基苯并三唑水合物(15mg)。在室溫下15小時(shí)后，過(guò)濾出固體，二曱基甲酰胺溶液根據(jù)方法F進(jìn)行注射HPLC。合并合適的餾分，凍千濃縮得到4-(3-[4-(4-曱基-4-曱基二硫基-戊酰基>哌嗪-1-基]-丙基)-2,6-二-(羥基曱基)-吡啶(105mg):LC/MS(方法A3):ESm/z=442MH+m/z=266(M+2H-C7H13OS2y保留時(shí)間=2.3分鐘!HN.M.R.(400固z,DMSO-d6,3ppm):5=l,27(s,6H);1,70國(guó)l,83(m,4H);2,25-2,39(m,8H);2,40(s,3H);2,63(m,2H);3,43(m,4H);4,49(s,4H);5,28(mb,2H);7,18(s,2H)。4-(3-(4-叔丁氧基羰基-哌溱-l-基)-丙基)-2,6-二-(羥基曱基)-吡啶<formula>formulaseeoriginaldocumentpage104</formula>根據(jù)4-(3-叔丁氧基羰基氨基-丙氧基)-2,6-二-(羥基曱基)吡啶的制備方法，用4-[3-(4-叔丁氧基羰基-哌。秦-l-基)-丙基]-吡啶-2,6-二羧酸二乙酯可制備4-(3-(4-叔丁氧基羰基-哌嗪-1-基)-丙基)-2,6-二-(羥基曱基)-吡啶LC/MS(方法A3):ESm/z=366MH+m/z=310(M+2H-tBu)+m/z=266(M+2H-C02tBu)+保留時(shí)間=0.5分鐘!HN.M.R.(400MHz,DMSO-d6,Sppm):5=l,39(s,9H);l,73(m,2H);2,29(m,6H);2,61(m,2H);3,30(m部分掩蔽，4H);4,49(d,J=6,0Hz,4H);5,30(tb，J=6,0Hz,2H);7,18(s,2H)。4_[3_(4_叔丁氧基羰基_哌。秦小基)_丙基]_吡啶_2,6-二羧酸二乙酯<formula>formulaseeoriginaldocumentpage104</formula>根據(jù)5-(3-叔丁氧基羰基-N-曱基-氨基-丙基)-苯-l,3-二羧酸二乙酯的制備方法，用4-[3-(4-叔丁氧基羰基-哌"秦-l-基)-丙-l-炔基]-吡啶-2,6-二羧酸二乙酯可制備4-[3-(4-叔丁氧基羰基-哌。秦-l-基)-丙基]-吡啶-2,6-二羧酸二乙酯LC/MS(方法A3):ESm/z=450MH+m/z=394(M+2H-tBu)+m/z=350(M+2H-C02tBu)+保留時(shí)間=2.4分鐘力N.M.R.(400MHz,DMSO-d6,5ppm):S=l,35(t,J=7，0Hz,6H);l,39(s,9H);1,79(m,2H);2,27(m,6H);2,80(m,2H);3,29(m,4H);4,39(q,J=7,0Hz,4H);8,12(s,2H)。4-[3_(4_叔丁氧基羰基_哌溱_1_基)_丙_1-炔基]_吡啶_2,6-二羧酸二乙酯根據(jù)5-(3-叔丁氧基羰基-N-甲基-氨基-丙炔-l-基)-苯-l,3-二羧酸二乙酯的制備方法，用4-三氟曱基磺酰氧基-吡啶-2,6-二羧酸二乙酯和叔丁基-4-炔丙基畫哌療誦1畫羧酸酯(21^1^,11;Weiner,L.M.;Bar-Am,O.;Epsztejn,S.;Cabantchik,Z,I.;Warshawsky,A.;Youdim,M.B.H.;和Fridkin,M.Bioorg.Med.Chem.2005,3,773)可制備4-[3-(4-叔丁氧基羰基-哌漆-1-基)_丙_1-炔基]-吡啶-2,6-二羧酸二乙酯。El(方法C)m/z=445M+m/z=388(M-C4H9)+m/z=344(m/z=388-C〇2)+m/z=57C4H9+N.M.R.(400固z,CDCl3-dl,Sppm):S=l,46(t,J=7,0Hz,6H);l,48(s,9H);2,60(mb,4H);3,52(mb,4H);3'62(sb,2H);4,49(q,J=7,0Hz,4H);8,23(s,2H)。4-三氟曱基磺酰氧基-吡啶-2,6-二羧酸二乙酯可如下制備:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage106</formula>向白屈氨酸二乙酉旨(Chaubet,F.;Nguyenvanduong,M.;Gref,A.;Courtieu,J.;Crumbliss，A丄.；Gaudemer,A.TetrahedronLett.1990，31(40),5729-5732)(3.5g)在吡啶(35mL)中的冷卻(0。C)溶液中滴加三氟甲基磺酰氯(2.6mL)。反應(yīng)物隨后在室溫下攪拌3小時(shí)，加入水和乙酸乙酯。分層，水層用乙酸乙酯提取兩次。合并的有機(jī)溶液用硫酸鎂干燥，真空濃縮成殘余物。殘余物用硅膠色譜法(MerckSuperVarioPrep90g柱，Si6015-40pm)純化，用二氯曱烷洗脫，得到4-三氟甲基磺酰氧基』比啶-2,6-二羧酸二乙酯(4.2g)。LC/MS(方法Al,PlatformI):ESm/z=372MH+保留時(shí)間=4.38分鐘實(shí)施例23:8,8，-[(1-(3-[4-(4-甲基-4-曱基二硫基-戊酰基)-哌嗪-1-基]-丙基)-苯-3,5-二曱基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二曱氧基-l,2,3,lla-四氫-p比咯并[2,l-c][1,4]苯并二氮雜萆-5-酮]根據(jù)8,8，-[(4-(3-(4-曱基-4-甲基二硫基)-戊酰氨基-丙氧基)-吡啶-2,6-二甲基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二甲氧基-l,2,3,lla-四氫-p比咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]的制備方法，用l-(3-[4-(4-曱基-4-曱基二硫基-戊?；?-哌。秦-l-基]-丙基)-3,5-二-(羥基曱基)-苯可以使用8,8，-[(卜(3-[4-(4-甲基-4-甲基二硫基-戊?；?-哌嗪-1-基]-丙基)-苯-3，5-二甲基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二曱氧基-l,2,3,lla-四氫-吡咯并[2,l-c][1,4]苯并二氮雜萆-5-酮]:LC/MS(方法A3):ESm/z=949MH+m/z=475,3(M+2H)2+/2保留時(shí)間=3.3分鐘1_(3-[4-(4-曱基-4-甲基二硫基-戊?；?-哌嗪-1-基]-丙基)-3,5-二-(羥基曱基)-苯根據(jù)4-(3-[4-(4-曱基-4-曱基二硫基-戊酰基)-哌。秦-l-基]-丙基)-2,6-二-(羥基甲基)-吡啶的制備方法，以1-(3-(4-叔丁氧基羰基-哌嗪-1-基)-丙基)-3,5-二-(羥基曱基)-苯為原料，可制備1-(3-[4-(4-甲基-4-甲基二硫基-戊?；?-哌嗪-l-基]-丙基)-3,5-二-(羥基曱基)-苯LC/MS(方法A3):ESm/z=441MH+保留時(shí)間=2.4分鐘^N.MR.(權(quán)MHzDMSO-d6,Sppm):5=l,26(s,6H);1,71(m,2H);1,79(m,2H);2,22-2,40(m,8H);2，39(s,3H);2,58(m,2H);3,44(m,4H);4,45(d,J=6,0Hz,4H);5,09(t,J=6,0Hz,2H);7,00(sb,2H);7,08(sb,1H)。1_(3_(4-叔丁氧基羰基-哌嗪-1-基)-丙基)-3,5-二-(羥基曱基)-苯根據(jù)5-(3-叔丁氧基羰基-N-曱基-氨基-丙基)-1,3-二-(羥基曱基)-苯的制備方法，以5-[3-(4-叔丁氧基羰基-哌嗪-l-基)-丙基]-鄰苯二甲酸二甲基酯為原料可制備l-(3-(4-叔丁氧基羰基-哌嗪-l-基)-丙基)-3,5-二-(羥基曱基)-苯LC/MS(方法A3):ESm/z=365MH+m/z=309(M+2H-tBu)+保留時(shí)間=2.0分鐘&N.M.R.(300固z,DMSO-d6,5ppm):5=l,39(s,9H);1,71(m,2H);2,28(m,6H);2,57(m,2H);3,29(m部分掩蔽，4H);4,44(d，J=6，0Hz,4H);5,08(t,J=6,0Hz,2H);7,00(sb,2H);7,08(sb,1H)。5-[3-(4-叔丁氧基羰基-哌嗪-l-基)-丙基]-鄰苯二曱酸二甲基酯根據(jù)5-(3-叔丁氧基羰基-N-甲基-氨基-丙基)-苯-l,3-二羧酸二乙基酯的制備方法，以5-[3-(4-叔丁氧基羰基-哌。秦-l-基)-丙-l-炔基]-鄰苯二甲酸二甲基酯為原料可制備5-[3-(4-叔丁氧基羰基-哌嗪-l-基)-丙基]-鄰苯二甲酸二甲基酯LC/MS(方法A3):ESm/z=421MH+m/z=365(M+2H-tBu)+m/z=321(M+2H-C02tBu)+保留時(shí)間=2.7分鐘&N.M.R.(400MHz,DMSO-d6,Sppm):3=l,39(s,9H);l,74(m,2H);2,28(m,6H);2,75(m,2H);3,30(m部分掩蔽，4H);3,89(s,6H);8,08(d,J=2,0Hz,2H);8,32(t,J=2,0Hz,IH)。5-[3-(4-叔丁氧基羰基-哌。秦-1-基)-丙-1-炔基]-鄰苯二曱酸二曱基酯根據(jù)5-(3-叔丁氧基羰基-N-甲基-氨基-丙-l-炔基)-苯-l,3-二羧酸二乙酯的制備方法，用叔丁基-4-炔丙基-哌嗪-l-羧酸酯為原料，可制備5-[3-(4-叔丁氧基羰基-哌嗪-l-基)-丙-l-炔基]-鄰苯二甲酸二甲基酯LC/MS(方法A3):ESm/z=417MH+m/z=361(M+2H-tBu)+m/z=317(M+2H-C02tBu)+保留時(shí)間=3.1分鐘丄HN.M.R,(400MHz,DMSO-d6,Sppm):5=l,40(s,9H);2,50(m掩蔽，4H);3,35(m,4H);3,61(s,2H);3,90(s,6H);8,14(sb,2H);8,40(sb,1H)。實(shí)施例24:8,8，-[(4-(2-{2-[2-(4-甲基-4-甲基二硫基-戊酰基氨基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-吡啶-2,6-二甲基)-二氧基]-二[(S>2-亞乙-(E)-基-7-二曱氧基-1,2,3,11a-四氫-吡咯并[2,1-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]根據(jù)8,8，-[(4-(3-(4-曱基-4-甲基二硫基)-戊酰氨基-丙氧基)-吡啶-2,6-二甲基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二甲氧基-l,2,3,11a-四氫-他咯并[2,1畫c][1,4]苯并二氮雜萆-5-酮]的制備方法，用4-(2-{2-[2-(4-甲基陽(yáng)4-甲基二硫基-戊?；被?-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-2,6-二-(羥基甲基)-吡啶可制備8,8，-[(4-(2-{2-[2-(4-曱基-4-曱基二硫基-戊酰基氨基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-吡啶-2,6-二甲基)-二氧基]-二[(3)-2-亞乙-(￡)-基-7-二甲氧基-1,2,3,11a-四氫-吡咯并[2,1《][1,4]苯并二氮雜萆-5-酮]:LC/MS(方法A3):ESm/z=971MH+m/z=486,3(M+2H)2+/2保留時(shí)間=3.60分鐘&N.M.R.(500MHz,CDCl3-dl,8ppm):S=l,28(s,6H);l,76(d,J=6,5Hz,6H);1,94(m,2H);2,26(m,2H);2,40(s,3H);2,98(m,4H);3,36-3,95(m,12H);4,00(s，6H);4,18(m,2H);4,28(sb,4H);5,27(m,4H);5,61(m,2H);5，97(mb,1H);6,84(s，2H);7,01(sb,2H);7,56(s,2H);7,64(d,J=4,5Hz,2H)。4-(2-{2-[2-(4-甲基-4-曱基二硫基-戊?；被?-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-2,6-二-(羥基甲基)』比啶根據(jù)4-(3-[4-(4-曱基-4-甲基二硫基-戊酰基)-哌嗪-l-基]-丙基)-2,6-二-(羥基甲基)-吡啶的制備方法，用4-(2-{2-[2-叔丁氧基羰基氨基-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-2,6-二-(羥基甲基)-吡啶為原料，制備4-(2-{2-[2-(4-甲基-4-甲基二硫基-戊?；被?-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-2,6-二-(羥基甲基)-吡啶LC/MS(方法A3):ESm/z=463MH+保留時(shí)間=2.3分鐘&N.M.R.(400MHz,DMSO-d6,Sppm):S=l,22(s,6H);1,79(m,2H);2,15(m,2H);2,39(s,3H);3,18(q,J=6,0Hz,2H);3,40(t,J=6,0Hz,2H);3,52(m,2H);3,60(m,2H);3,76(m,2H);4,18(m,2H);4,45(s,4H);5,32(mb,2H);6,85(s,2H);7,90(tb,J=6,0Hz,IH)。4-(2-{2-[2-叔丁氧基羰基氨基-乙氧基]-乙氧基卜乙氧基)-2,6-二-(羥基甲基)-吡啶根據(jù)4-(3-叔丁氧基羰基氨基-丙氧基-)-2,6-二-(羥基曱基)吡啶，用4-(2-{2-[2-叔丁氧基羰基氨基-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-吡啶-2,6-二羧酸二乙酯為原料，可制備4-(2-{2-[2-叔丁氧基羰基氨基-乙氧基]-乙氧基}國(guó)乙氧基)-2,6-二-(羥基甲基)-吡啶LC/MS(方法A3):ESm/z=387MH+m/z=331(M+2H-tBu)+保留時(shí)間=2.0分鐘&N.M,R.(400MHz,DMSO-d6,5ppm):5=l,37(s,9H);3,07(q,J=6,0Hz,2H);3,39(t,J=6,0Hz,2H);3,51(m,2H);3,59(m,2H);3,73(m,2H);4,18(m,2H);4,45(d,J=6,0Hz,4H);5,31(t，J=6,0Hz,2H);6,73(tb,J=6,0Hz,1H);6,85(s,2H)。4-(2-{2-[2-叔丁氧基羰基氨基-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-吡啶-2,6-二羧酸二乙酯可如下制備向4-(2-{2-[2-疊氮基-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-吡啶-2,6-二羧酸二乙酉旨(Roy,B.C.;Santos,M.;Mallik，S.;D.Campiglia,A.D.J.Org.Chem.2003,68(10),3999)(卯0mg)在乙酸乙酯(18mL)中的溶液加入二叔丁基焦碳酸酯(545mg)和10。/o把/碳(73mg)。溶液在室溫下在氫氣氣氛(2bar)下攪拌18小時(shí)，過(guò)濾出固體，真空除去溶劑得到殘余物。殘余物用硅膠色譜法(AnalogixSuperFlashSi02SF25-34g)純化，用二氯曱烷(A)和曱醇(B)的混合物梯度洗脫(梯度100%A下降至97.5%A:2.5%B)得到4-(2-{2-[2-叔丁氧基羰基氨基-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-吡啶-2,6-二羧酸二乙酯(760mg):LC/MS(方法A3):ESm/z=471MH+m/z=415(M+2H-tBu)+m/z=371(M+2H-C02tBu)+保留時(shí)間=3.6分鐘N.MR,(300固zlDMSO-d6,5ppm):S=l,32(t,J=7,0Hz,6H);l,36(s,9H);3,04(q,J=6,0Hz,2H);3,38(t,J=6,0Hz,2H);3,51(m,2H);3,59(m,2H);3,79(m,2H);4,25(m掩蔽，2H);4,29(q,J=7,0Hz,4H);6,70(tb,J=6,0Hz,1H);7,73(s,2H)。實(shí)施例25:8,8，-[(1-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(4-曱基-4-甲基二硫基-戊?；被?-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-苯-3,5-二曱基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙誦(E)-基-7國(guó)二甲氧基-1,2,3,1la-四氫誦p比咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]根據(jù)8,8，-[(4-(3-(4-甲基-4-曱基二硫基)-戊酰氨基-丙氧基-)-吡啶-2,6-二曱基)-二氧基]-二[(8)-2-亞乙-@)-基-7-二甲氧基-1,2,3,11a-四氫-吡咯并[2,l-c][1,4]苯并二氮雜萆-5-酮]的制備方法，用1-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(4-甲基-4-甲基二硫基-戊酰基氨基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-3,5-二-(羥基曱基)-苯，可制備8,8，-[(1-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(4-甲基-4-曱基二硫基-戊?；被?-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-苯-3,5-二曱基)-二氧基]-二[(S)-2國(guó)亞乙-(E)-基-7-二甲氧基-l,2,3,lla誦四氫-p比咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜革-5-酮]:LC/MS(方法Al,PlatformII):ES:m/z=l102MH+保留時(shí)間=4.49分鐘^N.M.R.(500固z,CDCl3-dl,5ppm):S=l,30(s,6H);l,75(d,J=6,5Hz,6H);1,95(m,2H);2,28(m,2H);2,41(s,3H);2,97(m,4H);3，33畫3,96(m,24H);3,96(s,6H);4,12(m,2H);4,27(sb,4H);5，07-5,24(m,4H);5,60(m2H);6,21(mb,1H);6,81(s,2H);6,96(s，2H);7,07(s,1H);7,51(s,2H);7,65(d,J=4,5Hz,2H)。1-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(4-甲基-4-甲基二硫基-戊?；被?-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-3,5-二-(羥基甲基)-苯根據(jù)l-(3-(4-曱基-4-曱基二硫基)-戊酰氨基-丙氧基-)-3,5-二-(羥基曱基)-苯的制備方法，用1-(2-{2-[2-(2-{2-[2-氨基-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-3,5-二-(羥基曱基)-苯為原料，可制備1-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(4-甲基-4-甲基二硫基-戊?；被?-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基卜乙氧基)-3,5-二-(羥基甲基)-苯LC/MS(方法Gl):ESm/z=594MH+4呆留時(shí)間=1.9分鐘。1-(2-{2-[2-(2-{2-[2-氨基-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-3,5-二-(羥基曱基)-苯可如下制備<formula>formulaseeoriginaldocumentpage113</formula>向1-(2-{2-[2-(2-{2-[2-疊氮基-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基)-乙氧基)-3,5-二-(羥基曱基)-苯(540mg)在THF(5.5mL)中的溶液中加入三苯基膦(320mg)和水(22OL),溶液在室溫下攪拌18小時(shí)，真空除去溶劑成殘余物。殘余物用硅膠色譜法(MerckSuperVarioFlash!30g柱,Si6015-40口m)純化，用二氯曱烷/甲醇95:5,隨后用二氯曱烷/甲醇/NH4OH75:25:2.5洗脫，得到1-(2-{2-[2-(2-{2-[2-氨基-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基卜乙氧基)-3,5-二-(羥基曱基)-苯(430mg):LC/MS(方法A3):ES:m/z=418MH+保留時(shí)間=1.3and1.7分鐘1-(2-{2-[2-(2-{2-[2-疊氮基-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-3,5-二-(羥基曱基)-苯可如下制備向2-[2-(2-{2-[2-(2-疊氮基-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-乙氧基]-乙醇(1.6g)和三乙胺(1.45mL)在二氯甲烷(40mL)中的冷卻(0。C)溶液中加入曱磺酰氯(617口L),l小時(shí)后，加入水。分層，有機(jī)層用硫酸鎂干燥，真空濃縮得到殘余物(1.83g)。將殘余物樣品(1.4g)、3,5-二羥基甲基苯酚(510mg)和碳酸鉀(686mg)在二甲基曱酰胺(8mL)中混合，加熱到70。C15小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻到室溫，加入水，水溶液用乙酸乙酯提取三次。合并的有才幾溶液用飽和氯化鈉水溶液洗滌，用石危酸4美干燥，真空濃縮成殘余物。殘余物用硅膠色譜法(MerckSuperVarioPrep70g柱,Si6015-40口m),用甲醇(A)/二氯曱烷(B)的混合物洗脫,(梯度2%A:98。/oB至10%A:90。/。B)得到1-(2-{2-[2-(2-{2-[2-疊氮基-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-3,5-二-(羥基甲基)-苯(540mg):Cl(方法D):m/z=461MNH4+2-[2-(2-{2-[2-(2-疊氮基-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-乙氧基]-乙醇可如下制備-*<formula>formulaseeoriginaldocumentpage115</formula>H00《、00JHOV、0向2-[2-(2-{2-[2-(2-甲苯磺酰氧基-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-乙氧基]畫乙醇(Loiseau,F.A.;Hii，K.K.;Hill,A.M.J.Org.Chem.2004,69,639)(4.5g)在二氯甲烷(30mL)中的溶液中加入疊氮化鈉(0.89g)。溶液在70。C攪拌18小時(shí)，隨后真空除去溶劑得到殘余物。加入二氯曱烷，過(guò)濾出生成的沉淀。將有機(jī)層真空濃縮得到2-[2-(2-{2-[2-(2-疊氮基-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-乙氧基]-乙醇(3.1g):Cl(方法D):m/z=325MNH4+實(shí)施例26:8,8，-[(1-(2-{2-[2-(4-甲基-4-甲基二硫基-戊?；被?-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-苯-3,5-二曱基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二甲氧基-1,2,3,1la-四氫-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]根據(jù)8,8，-[(4-(3-(4-曱基-4-甲基二硫基)-戊酰氨基-丙氧基-)-p比啶-2,6畫二甲基)-二氧基]-二[(S)畫2-亞乙-(E)-基-7-二曱氧基-l,2,3,lla-四氫-p比咯并[2,l畫c][1,4]苯并二氮雜萆-5-酮],用1-(2-{2-[2-(4-甲基-4-甲基二硫基-戊?；被?-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-3,5-二-(羥基曱基)-苯，可制備8,8，-[(1-(2-{2-[2-(4-曱基-4-甲基二硫基-戊?；被?-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-苯-3,5-二甲基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二甲氧基-1,2,3,1la-四氳-p比咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]:LC/MS(方法Al,PlatformII):ES:m/z=970MH+保留時(shí)間=3.89分鐘&N.M.R.(500固z,CDCl3-dl,5ppm):5=1,27(s,6H);l,75(d,J=6,5Hz,6H);1,94(m,2H);2,26(m，2H);2,40(s,3H);2,98(m,4H);3,35-3,92(m,12H);3,96(s,6H);4,15(m,2H);4,28(sb,4H);5,10國(guó)5,23(m,4H);5,60(qb,J=6,5Hz，2H);6,05(tb,J=6,0Hz,1H);6,81(s,2H);6,98(s,2H);7，09(s,1H);7,53(s,2H);7,64(d,J=4,5Hz,2H)。1-(2-{2-[2-(4-曱基-4-甲基二硫基-戊酰基氨基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-3,5-二-(羥基甲基)-苯根據(jù)l-(3-(4-甲基-4-曱基二硫基)-戊酰氨基-丙氧基-)-3,5-二-(羥基甲基)-苯的制備方法，用1-(2-{2-[2-氨基-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-3,5-二-(羥基曱基)-苯為原料，可制備1-(2-{2-[2-(4-曱基-4-甲基二硫基-戊?；被?-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-3,5-二-(羥基曱基)-苯LC/MS(方法A3):ES:m/z=462MH+m/z=444(M+H-H20)+保留時(shí)間=3.0分鐘1-(2-{2-[2-氨基-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-3,5-二-(羥基甲基)-苯根據(jù)1-(2-{2-[2-(2-{2-[2-氨基-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-3,5-二-(羥基曱基)-苯的制備方法，用1-(2-{2-[2-疊氮基-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-3,5-二-(羥基曱基)-苯為原料，可制備1-(2-{2-[2-氨基-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-3,5-二-(羥基甲基)-苯LC/MS(方法A3):ES:m/z=286MH+m/z=268(M+H-H20)+保留時(shí)間=0.8分鐘1-(2-{2-[2-疊氮基-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-3,5-二-(羥基甲基)-苯<formula>formulaseeoriginaldocumentpage117</formula>根據(jù)1-(2-{2-[2-(2-{2-[2-疊氮基-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-3,5-二-(羥基曱基)-苯的制備方法，用2-[2-(2-疊氮基-乙氧基)-乙氧基]陽(yáng)乙醇(Roy,B.C;Santos,M.;Mallik,S.;Campiglia,A.D.J.Org.Chem.2003，68(10),3999)為原料，可制備1-(2-{2-[2-疊氮基-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-3,5-二-(羥基甲基)-苯Cl(方法D)m/z=329MNH4+。實(shí)施例27:8,8，-[(4-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(4-甲基-4-甲基二硫基-戊?；被?-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-吡啶-2,6-二曱基)-二氧基]-二[(S)國(guó)2-亞乙誦(E)國(guó)基陽(yáng)7-二曱氧基腸l,2,3,lla國(guó)四氫-p比咯并[2,l-c〗[l,4]苯并二氮雜革-5-酮]根據(jù)8,8，-[(4-(3-(4-甲基-4-曱基二硫基)-戊酰氨基-丙氧基-)-吡啶-2,6-二甲基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二甲氧基-l,2,3,lla-四氫-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]的制備方法，用4-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(4-甲基-4-甲基二硫基-戊酰基氨基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-2,6-二-(羥基甲基)-吡啶，可制備8,8，-[(4-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(4-甲基-4-曱基二硫基-戊?；z)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-乙氧基]-乙錄}-乙氧基)-吡啶-2,6-二甲基)-二絲]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二曱総-1,2,3,1la國(guó)四氫-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]:LC/MS(方法A3):ES:m/z=1103MH+m/z=552(M+2H)2+/2保留時(shí)間=3.7分鐘&N.M.R.(500MHz,CDCl3-dl,5ppm):5=l,29(s,6H);l,75(d,J=6,5Hz，6H);l,94(m,2H);2,28(m,2H);2,40(s,3H);2,97(m,4H);3,33陽(yáng)3,95(m,24H);3,99(s,6H);4,18(m,2H);4,28(sb,4H);5,27(m,4H);5,60(m,2H);6,19(mb,1H);6,82(s,2H);7,00(sb,2H);7,55(s,2H);7,64(d,J=4,5Hz,2H)。4-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(4-甲基-4-甲基二硫基-戊?；被?-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-2,6-二-(羥基甲基)-吡啶根據(jù)4-(3-[4-(4-甲基-4-甲基二硫基-戊?；?-哌。秦-l-基]-丙基)-2,6-二-(羥基曱基)-吡啶的制備方法，用4-(2-{2-[2-(2-{2-[2-叔丁氧基羰基氨基-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-2,6-二-(羥基甲基)-吡啶為原料，可制備4-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(4-甲基-4-甲基二硫基-戊?；被?-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-2,6-二-(羥基甲基)-吡啶LC/MS(方法A3):ES:m/z=596MH+保留時(shí)間=2.4分鐘4-(2-{2-[2-(2-{2-[2-叔丁氧基羰基氨基-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-2,6-二-(羥基甲基)-他啶根據(jù)4-(3-叔丁氧基羰基氨基-丙氧基-)-2,6-二-(羥基曱基)吡啶的制備方法，用4-{2-[2-(2-{2-[2-(2-叔丁氧基羰基氨基-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-吡啶-2,6-二羧酸二乙酯為原料，可制備4-(2-{2-[2-(2-{2-[2-叔丁氧基羰基氨基-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-2,6-二-(羥基甲基)-吡啶LC/MS(方法A3):ES:m/z=519MH+保留時(shí)間=2.2分鐘4-{2-[2-(2-{2-[2-(2-叔丁氧基羰基氨基-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-吡啶-2,6-二羧酸二乙酯根據(jù)4-(2-{2-[2-叔丁氧基羰基氨基-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-吡"定-2，6-二羧酸二乙酯的制備方法，用4-{2-[2-(2-{2-[2-(2-疊氮基-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-吡啶-2,6-二羧酸二乙酯為原料，可制備4-{2-[2-(2-{2-[2-(2-叔丁氧基羰基氨基-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-吡啶-2,6-二羧酸二乙酯LC/MS(方法A3):ES:m/z=603MH+m/z=271(M+2H-C02tBu)+保留時(shí)間=3.6分鐘4-{2-[2-(2-{2-[2-(2-疊氮基-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-吡啶-2,6-二羧酸二乙酯可如下制備<formula>formulaseeoriginaldocumentpage119</formula>向白屈氨酸二乙基酯(1.03g)在二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液中，加入甲磺酸2-[2-(2-{2-[2-(2-疊氮基-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-乙氧基]-乙酯(1.82g)和碳酸鉀(893mg)。得到的混合物在70。C加熱15小時(shí)，隨后冷卻到室溫。加入水，水溶液用乙酸乙酯提取3次。合并的有機(jī)溶液用飽和氯化鈉水溶液洗涂，用無(wú)水石危酸鎂干燥，真空濃縮成殘余物。殘余物用珪膠色譜法(MerckSuperVarioPrep70g柱，Si6015-40pm)純化，用曱醇(A)/二氯曱烷(B)的混合物洗脫(梯度3%A:97%B至5%A:95%B),得到4-{2-[2-(2-{2-[2-(2-疊氮基-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-吡啶-2，6-二羧酸二乙酯(2.19g):LC/MS(方法A3):ES:m/z=529MH+保留時(shí)間=3.4分鐘實(shí)施例28:8,8，-[(1-(2-[甲基-(2-甲基-2-曱基二硫基-丙基)-氨基]-乙氧基)-苯-3,5-二曱基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二曱氧基-l,2,3,lla-四氫-p比咯并[2,1-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]根據(jù)8,8，-[(4-(3-(4-甲基-4-曱基二硫基)-戊酰氨基-丙氧基-)-吡啶隱2,6-二曱基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二甲氧基-l,2,3,11a-四氪畫p比咯并[2,l畫c][1,4]苯并二氮雜萆-5-酮]的制備方法,用l-(2-[曱基-(2-曱基-2-曱基二硫基-丙基)-氨基]-乙氧基)-3,5-二-(羥基曱基)-苯，可制備8,8，-[(1-(2-[甲基-(2-曱基-2-曱基二硫基-丙基)-氨基]-乙氧基)-苯-3,5-二曱基)垂二氧基]國(guó)二[(S)國(guó)2畫亞乙陽(yáng)(E)畫基畫7畫二甲氧基-l,2,3,lla誦四氫畫p比咯并[2,1-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]:LC/MS(方法Al,PlatformI):ES:m/z=872MH++H20m/z=854顧+保留時(shí)間=3.40分鐘&N.MR,(500固z,CDCl3-dl,5ppm):5=l,31(s,6H);l,75(d,J=6,5Hz,6H);2,39(s,3H);2,45(s，3H);2,62(s,2H);2,92(t,J=6,5Hz,2H);2,97(m,4H);3,89(m,2H);3,96(s,6H);4,06(t,J=6,5Hz,2H);4,26(sb,4H);5,12(d,J=12,5Hz,2H);5,19(d,J=12,5Hz,2H);5,60(qb,J=6,5Hz,2H);6,82(s,2H);6,95(sb,2H);7,06(sb,1H);7,52(s,2H);7,64(d,J=4,5Hz,2H)。l-(2-[曱基-(2-曱基-2-甲基二硫基-丙基)-氨基]-乙氧基)-3,5-二-(羥基甲基)-苯可如下制備向1-(2-(2-曱基-2-甲基二硫基-丙基)-氨基-乙氧基)-3,5-二-(羥基曱基)-苯(280mg)在曱醛(228口L)中的冷卻(5。C)懸浮液中加入曱酸(319iiL)，得到的混合物在IO(TC加熱1小時(shí)15分鐘，隨后冷卻到室溫。加入水和水，隨后加入氫氧化鈉水溶液直到pH=12。得到的水溶液用乙酸乙酯提取3次，合并的有機(jī)溶液用硫酸鎂干燥，真空濃縮成殘余物。殘余物經(jīng)硅膠色譜法(MerckSuperVarioFlash25g柱，Si6015-40口m),用甲醇(A)/二氯甲烷(B)混合物洗脫，(梯度2%A:98%B至5%A:95。/。B)得到l-(2-[甲基-(2-曱基-2-甲基二硫基-丙基)-氨基]-乙氧基)-3,5-二-(羥基曱基)-苯(210mg):LC/MS(方法A3):ES:m/z=346MH+m/z=212(M+2H-CsHnS^1m/z=135C5HS2+保留時(shí)間=2.1分鐘N.M.R.(400固z,DMSO-d6,5ppm):8=l,27(s,6H);2，39(s，3H);2,40(s:3H);2,60(s，2H);2,85(t,J=6,0Hz,2H);4,02(t,J=6,0Hz,2H);4,44(d,J=6，0Hz,4H);5,10(t,J=6,0Hz,2H);6,72(sb,2H);6,82(sb,1H)。1-(2-(2-曱基-2-曱基二硫基-丙基)-氨基-乙氧基)-3,5-二-(羥基甲基)-苯可如下制備向l-(2-氨基-乙氧基)-3,5-二-(羥基甲基)-苯鹽酸鹽(900mg)在四氫呋喃(4.5mL)中的懸浮液中加入三乙胺(1.07mL)。在攪拌15分鐘后，加入2-(甲基二硫基)異丁醛(530口L)和異丙醇鈦(1.42mg),生成的混合物在室溫下攪拌2小時(shí)。加入乙醇(9mL)和氰基硼氫化鈉(242mg),新混合物在室溫下攪拌18小時(shí)。過(guò)濾出固體，濾液真空濃縮成殘余物。殘余物用乙酸乙酯稀釋，過(guò)濾出生成的固體。有機(jī)溶液隨后用水和飽和氯化鈉水溶液洗滌，用硫酸鎂干燥，真空濃縮成新殘余物，它經(jīng)硅膠色鐠法(MerckSuperVarioFlash30g柱，Si6015-40pm)純化，用曱醇(A)/二氯曱烷(B)混合物洗脫，(梯度4%A:96%B至10%A:90。/。B)得到l-(2-(2-甲基-2-甲基二硫基-丙基)-氨基-乙氧基)-3,5-二-(羥基曱基)-苯(290mg):^N.M.R.(400固z,DMSO-d6,5ppm):5=1,27(s,6H);1,82(mb,1H);2,39(s,3H);2,67(s,2H);2,91(t,J=6,0Hz,2H);4,00(t,J=6，0Hz,2H);4,43(d,J=6,0Hz,4H);5,10(t,J=6,0Hz,2H);6,73(sb,2H);6,83(sb,1H)。實(shí)施例29:8,8，-[(4-(3-[甲基-(4-甲基-4-曱基二硫基-戊?；?-氨基]-丙基)-吡啶-2,6-二曱基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二甲氧基-l,2,3,lla-四氫-p比咯并[2,1-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮〗根據(jù)8,8，-[(4-(3-(4-曱基-4-曱基二硫基)-戊酰氨基-丙氧基-)-吡啶國(guó)2,6國(guó)二甲基)陽(yáng)二氧基]畫二[(S)國(guó)2腸亞乙國(guó)(E)畫基畫7畫二曱氧基-1,2,3,11a國(guó)四氫國(guó)吡咯并[2,1國(guó)c][1,4]苯并二氮雜萆-5-酮]的制備方法,用4-(3-[甲基-(4-曱基_4-曱基二硫基-戊?；?-氨基]-丙基)-2,6-二-(羥基曱基)-吡啶，可制備8,8，-[(4-(3-[曱基-(4-甲基-4-甲基二硫基-戊酰基)-氨基]-丙基)-吡啶-2,6-二曱基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二甲氧基-l,2,3,lla-四氫-p比咯并[2:1《][1,4]苯并二氮雜萆-5-酮]:力N.M.R,(500固z,CDCl3-dl,5ppm):5=l，32(s，6H);l,75(d,J=6,5Hz,6H);1,94(m,4H);2,20國(guó)4,30(m,18H);4，00(s,6H);4,27(sb,4H);5,21-5,68(m,6H);6,80畫7,70(m,8H)。4-(3-[甲基-(4-甲基-4-曱基二硫基-戊酰基)-氨基]-丙基)-2,6-二-(羥基曱基)-吡啶根據(jù)4-(2-(4-甲基-4-甲基二硫基)-戊酰氨基-乙氧基)-2,6-二-(羥基曱基)-吡啶的制備方法，用4-(3-(叔丁氧基羰基-甲基-氨基)-丙基)-2,6-二-(羥基甲基)-吡啶，可制備4-(3-[甲基-(4-曱基-4-甲基二硫基-戊?；?-氨基]-丙基)-2,6-二-(羥基曱基)-吡啶LC/MS(方法A3):ES:m/z=387MH+保留時(shí)間=2.5分鐘4-(3-(叔丁氧基羰基-甲基-氨基)-丙基)-2,6-二-(羥基曱基)-吡啶<formula>formulaseeoriginaldocumentpage124</formula>根據(jù)4-(3-叔丁氧基羰基氨基-丙氧基-)-2,6-二-(羥基甲基)吡啶的制備方法，用4-(3-(叔丁氧基羰基-甲基-氨基)-丙基)-吡啶-2,6-二-二羧酸二乙酯，可制備4-(3-(叔丁氧基羰基-曱基-氨基)-丙基)-2,6-二-(羥基甲基)-吡咬Cl(方法D)m/z=311MH+4-(3-(叔丁氧基羰基-甲基-氨基)-丙基)-吡啶-2,6-二-二羧酸二乙酯丫根據(jù)5-(3-叔丁氧基羰基-N-甲基-氨基-丙基)-苯-1,3-二羧酸二乙酯的制備方法，用4-[3-(叔丁氧基羰基-曱基-氨基)-丙-l-炔基]-吡啶-2,6-二羧酸二乙酯，可制備4-(3-(叔丁氧基羰基-曱基-氨基)-丙基)-吡啶-2,6-二-二羧酸二乙酯LC/MS(方法G2):ES:m/z=395MH+m/z=339(M+2H-tBu)+保留時(shí)間=7.5分鐘4-[3-(叔丁氧基羰基-曱基-氨基)-丙-l-炔基]-吡啶-2,6-二羧酸二乙酯<formula>formulaseeoriginaldocumentpage125</formula>"0根據(jù)5-(3-叔丁氧基羰基-N-甲基-氨基-丙炔-1-基)-苯-1,3-二羧酸二乙酯的制備方法，用叔丁氧基羰基-N-甲基-炔丙基胺，可制備4-[3-(叔丁氧基羰基-曱基-氨基)-丙-1-炔基]-吡啶-2,6-二羧酸二乙酯。Cl(方法D)m/z=391MH+。實(shí)施例30:8,8，-[(4-(3-[甲基-(2-曱基-2-甲基二硫基-丙基)-氨基]-丙基)-吡啶-2,6-二甲基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二甲氧基-l,2,3,lla-四氫-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]根據(jù)8,8，-[(4-(3-(4-曱基-4-甲基二硫基)-戊酰氨基-丙氧基)-吡啶-2,6-二甲基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二曱氧基-l,2,3,lla-四氫-p比咯并[2,l-c][1,4]苯并二氮雜萆-5-酮]的制備方法,用4-{3-[曱基-(2-甲基-2-曱基二硫基-丙基)-氨基]-丙基}-2,6-二-(羥基曱基)-吡啶，可制備8,8，-[(4-(3-[曱基-(2-甲基-2-曱基二硫基-丙基)-氨基]-丙基)-吡啶-2,6-二曱基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二甲氧基-l,2,3,lla-四氫-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]:!HN.M.R.(500MHz,CDCl3-dl,5ppm):5=l,28(s,6H);1,65(m部分掩蔽,2H);l,75(d,J=6,5Hz,6H);2,29(s,3H);2,38(s,3H);2，46(m,4H);2,65(m,2H);2,97(m,4H);3,89(m,2H);4,00(s,6H);4,27(sb,4H);5,29(s,4H);5,60(qb,J=6,5Hz,2H);6,86(s,2H);7,30(s,2H);7，55(s,2H);7,64(d,J=4,5Hz,2H)。4-{3-[曱基-(2-曱基-2-甲基二硫基-丙基)-氨基]-丙基}-2,6-二-(羥基甲基)-p比咬P一34409-034-3根據(jù)l-(2-(2-曱基-2-甲基二硫基-丙基)-氨基-乙氧基)-3,5-二-(羥基曱基)-苯的制備方法，用4-{3-[曱基-氨基]-丙基}-2,6-二-(羥基曱基)-吡啶，可制備4-{3-[甲基-(2-曱基-2-甲基二硫基-丙基)-氨基]-丙基}-2,6-二-(羥基曱基)-p比啶LC/MS(方法Al,PlatformII):ESm/z=345MH+4呆留時(shí)間=1.15分鐘實(shí)施例31:8,8，_[(1_(4-甲基-4-曱基二硫基)-戊酰氨基)-苯-3,5-二甲基]-二氧基]-二[(S)-2畫亞乙國(guó)(E)-基陽(yáng)7-二甲氧基-l,2,3，lla國(guó)四氫隱p比咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]可如下制備根據(jù)8,8，-[(4-(2-(4-甲基-4-曱基二硫基)-戊酰氨基-乙氧基)-吡啶-2,6-二曱基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二甲氧基-l,2,3,lla-四氬-口比咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]的制備方法，用(l-(4-曱基-4-曱基二硫基)-戊酰氨基)-3,5-二-(羥基甲基)-苯為原料，可制備8,8，-[(1-(4-甲基-4-甲基二硫基)-戊酰氨基)-苯-3，5-二曱基]-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二甲氧基-l,2,3,lla-四氬-p比咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]:LC/MS(方法Al,PlatformI):ES:m/z=838MH+保留時(shí)間=4.11分鐘&N.M.R,(500固z,CDCl3-dl,Sppm):S=l,33(s,6H);l,76(d,J=6,5Hz,6H);2,03(m,2H);2,43(s,3H);2,46(m,2H);2,97(m,4H);3,89(m,2H);3,95(s,6H);4,27(sb,4H);5,14(d,J=12，5Hz,2H);5,19(d,J=12,5Hz,2H);5,60(q,J=6,5Hz,2H);6,81(s,2H);from7,20to7,60(m,6H);7,64(d,J=4,5Hz,2H)。實(shí)施例19-31化合物的相應(yīng)巰基衍生物可采用實(shí)施例18中描述的方法制備。實(shí)施例A:結(jié)合物制備的一般方法選擇結(jié)合于優(yōu)先在人淋巴瘤細(xì)胞表面表達(dá)的CD19抗原的抗-B4抗體用于結(jié)合茅屋霉素衍生物。在第一步中，抗體與改性劑N-磺基琥珀酰亞氨基5-硝基-2-他啶基二石危代丁酸酯(SSNPB)反應(yīng)以引入硝基吡啶基二石克基基團(tuán)，在含有0.05M磷酸鉀、0.05M氯化鈉和2mM乙二胺四乙酸(EDTA)的含水緩沖液(pH6.5)中的濃度為8mg/mL的huC242抗體溶液(65.6mL)用8倍摩爾過(guò)量的SSNPB在二甲基乙酰胺(DMA)中的溶液處理。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌90分鐘，隨后裝在SephadexG25凝月交過(guò)濾柱(50mmx35.5mm,柱)中，柱預(yù)先在含有0.05M》舞酸鉀、0.05M氯^ft鈉和2mMEDTA的含水緩沖液(pH7.5)中平衡。收集改性的含抗體餾分，匯集得到產(chǎn)物。改性抗體的少量等分樣品用二硫蘇糖醇處理以斷裂硝基吡啶基二硫化物，釋放的硝基吡啶-2-硫酮用分光光度法分析(對(duì)于化合物S323nn^4,299M"cm-1,￡280nm=565MT1cm—1,對(duì)抗體s280nm=217,560M-1cm")。每個(gè)抗體分子通常連接于平均4-6個(gè)硝基-吡啶基二硫化物分子。將改性的抗體在上述緩沖液pH7.5中稀釋至2.5mg/mL,用茅屋霉素衍生物在DMA的溶液處理，使得在緩沖液中DMA的最終濃度為20%。結(jié)合物混合物在室溫下攪拌16小時(shí)，將反應(yīng)混合物通過(guò)SephacrylS300凝膠過(guò)濾柱(50mmx42cm,柱)純化，柱預(yù)先在磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)中平衡在pH6.5。匯集含有單體抗體-茅屋霉素衍生物結(jié)合物的餾分，在PBS緩沖液中透析。最終的結(jié)合物通過(guò)分光光度法用消光系數(shù)分析，對(duì)于每個(gè)茅屋霉素衍生物，單獨(dú)測(cè)量消光系數(shù)。本發(fā)明化合物的SPDB-PBD和SMCC-PBD結(jié)合物huB4-SPDB-實(shí)施例16化合物實(shí)施例Al:選擇結(jié)合于優(yōu)先在人淋巴瘤細(xì)胞表面表達(dá)的CD19抗原的抗-B4抗體用于結(jié)合茅屋霉素衍生物?？贵w首先用4-(2-吡啶基二硫基)丁酸N-羥基琥珀酰亞胺酯(SPDB)改性以引入吡啶基二硫基基團(tuán)。將在二曱基乙酰胺(DMA)(50jxL)中的4.5倍摩爾過(guò)量的SPDB(0.25pmo1,81.1嗎)加入在含有50mM磷酸鐘、50mM氯化鈉和2mM乙二胺四乙酸(EDTA)的含水緩沖液(pH6.5)(0.95mL)中的huB4溶液(8mg,0.055pmo1)中，最終蛋白質(zhì)濃度為8mg/mL，含有在緩沖液中的5%DMA。改性過(guò)程在室溫下旋轉(zhuǎn)90分鐘，用SephadexG25凝膠過(guò)濾柱純化，柱在含有50mM磷酸鉀、50mM氯化鈉和2mMEDTA的含水緩沖液(pH7.5)中平衡。改性抗體的少量等分樣品用二硫蘇糖醇(DTT)處理以斷裂吡啶基二At化物基團(tuán)，改性抗體和釋放的吡啶硫醇用分光光度法分析(對(duì)于釋放的吡啶石危醇S343nn^8,080NT1cm",對(duì)改性吡啶二硫基s28onm=5100M"cm",對(duì)抗體s28Qnm=222,960NT1cm—1)。每個(gè)抗體分子通常連接于平均3.36個(gè)吡啶基二硫化物分子。將改性抗體(2.29mg,0.016[imol)在上述pH7.5緩沖液(732.8pL)和DMA(91.6pL,10。/ov/v)中稀釋，隨后用8,8，-[5-(N-4-巰基-4,4-二甲基丁酰基)氨基-l,3-苯二基二(亞曱氧基)]-二[7-曱氧基-2-亞甲基-1,2,3,11a-四氫-511-吡咯并[2,1-(;][1,4]苯并二氮雜萆-5-酮](實(shí)施例16化合物)(0.157pmo1,0.12mg)在DMA(91.610%v/v)中的溶液處理。最終蛋白質(zhì)濃度為2.5mg/mL，含有20%在緩沖液中的DMA。結(jié)合過(guò)程在室溫下旋轉(zhuǎn)過(guò)夜，隨后經(jīng)沉降(13,200RPM4分鐘)澄清。上清液隨后用在pH6.5的磷酸鹽水(PBS)緩沖液中平tf的SephadexG25凝膠過(guò)濾柱純化。純化的結(jié)合物用4次緩沖液交換透析入PBSpH6.5緩沖液中(約1:650稀釋度)。結(jié)合物通過(guò)0.22pm注射過(guò)濾器澄清，進(jìn)行分光光度法分析(對(duì)于PBD^sonn^VTASM-1cm.1,￡3i8nm=9137M.1cm.1,對(duì)抗體￡28。nm=222,960M.1cm-^每個(gè)抗體分子連接平均1.76PBD分子(實(shí)施例16化合物)。huB4-SMCC-實(shí)施例16化合物實(shí)施例A2:選擇結(jié)合于優(yōu)先在人淋巴瘤細(xì)胞表面表達(dá)的CD19抗原的抗-B4抗體用于結(jié)合茅屋霉素衍生物。在第一步中，抗體與改性劑琥珀酰亞氨基4-[馬來(lái)酰亞氨基甲基]環(huán)己烷-l-羧酸酯(SMCC)反應(yīng)以引入馬來(lái)酰亞胺基團(tuán)。在含有0.05M磷酸鉀、0.05M氯化鈉和2mM乙二胺四乙酸(EDTA)的含水緩沖液(pH6.7)中的濃度為6mg/mL的huB4抗體溶液(lmL)用6.5倍摩爾過(guò)量的SMCC在二曱基乙酰胺(DMA)中的溶液處理。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌90分鐘，隨后裝在SephadexG25凝膠過(guò)濾柱(NAPIO)中，柱預(yù)先在含有0.10MN-(2-羥基乙基)-哌溱-N，-2-乙磺酸(HEPES)pH8.0的含水緩沖液中平tf。收集改性的含抗體鎦分，匯集得到產(chǎn)物。改性抗體的少量等分樣品用口-巰基乙醇處理10分鐘，隨后加入5,5，-二硫代二-2-硝基苯曱酸(DTNB)以檢測(cè)殘余的硫醇(對(duì)于5-硫基-2-硝基苯曱酸(TNB)，s4i2nm=14,1501Vr1cm",對(duì)抗體￡28()nm=222,960M"cm-1^在抗體與馬來(lái)酰亞胺的反應(yīng)中消耗的硫醇的數(shù)量(與沒(méi)有抗體的對(duì)照組相比)等于連接于抗體的馬來(lái)酰亞胺摩爾量(減法Ellman，s試驗(yàn))。每個(gè)抗體連接約3.2活性馬來(lái)酰亞胺基團(tuán)。將改性抗體(3mg,0.021pmol)在pH8.0HEPES緩沖液中稀釋至3.0mg/mL,隨后用實(shí)施例16的化合物在DMA中的溶液(5mM)處理，使得在緩沖液中DMA的最終濃度為15%。每個(gè)連接物加入了3摩爾當(dāng)量的8,8，-[5-(]^-4-巰基-4,4-二甲基丁?；?氨基-1,3-苯二基二(亞甲氧基)]-二[7-曱氧基-2-亞甲基-1，2,3,11a-四氫-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜革一5-酮](實(shí)施例16化合物)(9.6eq./抗體,0.202拜o1,149嗎)。結(jié)合混合物在室溫下攪拌20小時(shí)，反應(yīng)混合物通過(guò)G25柱(NAP5)純化，柱預(yù)先在0.05磷酸鉀(KPi)、0.05MNaCl、0.002MEDTA緩沖液(pH6.7)中平衡。匯集含有huB4-實(shí)施例16化合物結(jié)合物的餾分，用3次交換(24小時(shí))透析入Kpi緩沖液中。最終結(jié)合物(2.2mg,2.3mg/ml)用分光光度法用消光系數(shù)分析，測(cè)定實(shí)施例16化合物(s^nn^^nTM-1cm—、s28()nm=7,734NT1cm")和B4抗體(S280nn^222,960M"cm")。每個(gè)分子抗體連接平均2.8PBD分子(實(shí)施例16化合物)。huB4-SPDB-實(shí)施例17化合物實(shí)施例A3:選擇結(jié)合于優(yōu)先在人淋巴瘤細(xì)胞表面表達(dá)的CD19抗原的抗-B4抗體用于結(jié)合茅屋霉素衍生物?？贵w首先用4-(2-吡啶基二硫基)丁酸N-羥基琥珀酰亞胺酯(SPDB)改性以引入吡啶基二硫基基團(tuán)。將在DMA(25^L)中的4.5倍摩爾過(guò)量的SPDB(0.124nmol,40.6jxg,)加入在含有50mM磷酸鉀、50mM氯化鈉和2mMEDTA的含水緩沖液(pH6.5)(0.475mL)中的huB4溶液(4mg,0.028pmol)中，最終蛋白質(zhì)濃度為8mg/mL,含有在緩沖液中的5%DMA。改性過(guò)程在室溫下旋轉(zhuǎn)卯分鐘，用SephadexG25凝月交過(guò)濾柱純化，柱在含有50mM磷酸鉀、50mM氯化鈉和2mMEDTA的含水緩沖液(pH7.5)中平衡。改性抗體的少量等分樣品用DTT處理以斷裂吡啶基二硫化物基團(tuán)，改性抗體和釋放的吡啶硫醇用分光光度法分析(對(duì)于釋放的吡啶硫醇s343nm=8,080M-1cm",對(duì)改性吡"定二石?；鶊F(tuán)s280nm=5100NT1cm"，對(duì)抗體s28()nm=222,960M"cm-1^每個(gè)抗體分子連接平均3.31個(gè)吡"定基二硫化物分子。將改性抗體(3.06mg,0.021nmol)在上述pH7.5緩沖液(0.976mL)和DMA(122^iL,10%v/v)中稀釋，隨后用8,8，-[5-(N-曱基-N-(2-巰基-2,2-二曱基乙基)氨基-1,3-苯二基(亞曱氧基))-二[7-曱氧基-2-亞曱基-1,2,3,1^-四氬_5!1-吡咯并[2,1-01[1,4]苯并二氮雜萆-5-酮](實(shí)施例17化合物)(0.209^imo1,0.154mg)在DMA(122|il,10%v/v)中的溶液處理。最終蛋白質(zhì)濃度為2.5mg/mL,含有20%在緩沖液中的DMA。結(jié)合過(guò)程在室溫下旋轉(zhuǎn)過(guò)夜，隨后經(jīng)沉降(13,200RPM4分鐘)澄清。上清液隨后用在pH6.5的PBS緩沖液中平衡的SephadexG25凝月交過(guò)濾柱純化。純化的結(jié)合物用3次緩沖液交換透析入PBSpH6.5緩沖液中(約1:1200稀釋度)。結(jié)合物通過(guò)0.22]im注射過(guò)濾器澄清，進(jìn)行分光光度法分析(對(duì)于PBDS280nm=10736M"cm",￡318nm=12053MT1cm-1,對(duì)抗體￡28。nm=222,960M隱1cm-1^每個(gè)抗體分子連接平均3.0SPBD分子(實(shí)施例H化合物)。huB4-SMCC-實(shí)施例17化合物實(shí)施例A4:選擇結(jié)合于優(yōu)先在人淋巴瘤細(xì)胞表面表達(dá)的CD19抗原的抗-B4抗體用于結(jié)合茅屋霉素衍生物。在第一步中，抗體與改性劑琥珀酰亞氨基4-[馬來(lái)酰亞氨基曱基]環(huán)己烷-l-羧酸酯(SMCC)反應(yīng)以引入馬來(lái)酰亞胺基團(tuán)。在含有0.05M磷酸鉀、0.05M氯化鈉和2mM乙二胺四乙酸(EDTA)的含水緩沖液(pH6.7)中的濃度為6mg/mL的huB4抗體溶液(lmL)用7倍摩爾過(guò)量的SMCC在二甲基乙酰胺(DMA)中的溶液處理。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌90分鐘，隨后裝在SephadexG25凝膠過(guò)濾柱(NAPIO)中，柱預(yù)先在含有0.10MN-(2-羥基乙基)-哌溱-N，-2-乙磺酸(HEPES)pH8.0的含水緩沖液中平衡。收集改性的含抗體餾分，匯集得到產(chǎn)物。改性抗體的少量等分樣品用卩-巰基乙醇處理10分鐘，隨后加入5,5，-二硫代二-2-硝基苯甲酸(DTNB)以檢測(cè)殘余的硫醇(對(duì)于5-硫基-2-硝基苯曱酸(TNB)，s412nm=14,1501Vr1cnT1,對(duì)抗體S280nn^222,960M"cnT1)。在抗體與馬來(lái)酰亞胺的反應(yīng)中消耗的硫醇的數(shù)量(與沒(méi)有抗體的對(duì)照組相比)等于連接于抗體的馬來(lái)酰亞胺摩爾量(減法Ellman，s試驗(yàn))。每個(gè)抗體連接約3.7活性馬來(lái)酰亞胺基團(tuán)。將改性抗體(4.4mg,0.03pmol)在pH8.0HEPES緩沖液中稀釋至8.7mg/mL，隨后用實(shí)施例17的化合物在DMA中的溶液(5.4mM)處理，使得在緩沖液中DMA的最終濃度為20%。每個(gè)連接物加入了2摩爾當(dāng)量的8,8，-[5-(N-甲基-N-(2-巰基-2,2-二曱基乙基)氨基-l,3-苯二基(亞曱氧基))-二[7-曱氧基-2-亞曱基-l,2,3,lla-四氬-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮](實(shí)施例17化合物)(7.4eq./抗體,0.222,1,164pg)。結(jié)合混合物在室溫下攪拌20小時(shí)，反應(yīng)混合物通過(guò)G25柱(NAP5)純化，柱預(yù)先在0.05磷酸鉀(KPi)、0.05MNaCl、0.002MEDTA緩沖液(pH6.7)中平衡。匯集含有huB4-實(shí)施例17化合物結(jié)合物的鎦分，用3次交換(24小時(shí))透析入Kpi緩沖液中。最終結(jié)合物(2.25mg,2.25mg/ml)用分光光度法用消光系數(shù)分析，測(cè)定實(shí)施例17化合物(^8^^12,053]Vr1cm—1,￡280腦=10,736NT1cm")和B4抗體(￡28。腿=222,960M"cm")。每個(gè)分子抗體連接平均2.8PBD分子(實(shí)施例17化合物)。huMy9畫6畫SPDB國(guó)實(shí)施例16化合物實(shí)施例A5:抗體首先用4-(2-吡啶基二硫基)丁酸N-羥基琥珀酰亞胺酯(SPDB)改性以引入吡啶基二硫基基團(tuán)。將在DMA(50pL)中的4.5倍摩爾過(guò)量的SPDB(0.246pmol,80.1嗎,)加入在含有50mM磷酸鉀、50mM氯化鈉和2mMEDTA的含水緩沖液(pH6.5)(0.950mL)中的huMy9-6溶液(8mg,0.055pmol)中，最終蛋白質(zhì)濃度為8mg/mL,含有在緩沖液中的5%DMA。改性過(guò)程在室溫下旋轉(zhuǎn)90分鐘，用SephadexG25凝月交過(guò)濾柱純化，柱在含有50mM磷酸鉀、50mM氯化鈉和2mMEDTA的含水緩沖液(pH8.5)中平衡。改性抗體的少量等分樣品用DTT處理以斷裂吡啶基二硫化物基團(tuán)，改性抗體和釋放的吡啶石克醇用分光光度法分析(對(duì)于釋放的吡。定硫醇S343nn^8,080M"cm"，對(duì)改性吡p定二硫基基團(tuán)s280mn=5100M"cm",對(duì)抗體￡28()11111=206,460M"cm")。每個(gè)抗體分子連接平均3.32個(gè)吡啶基二硫化物分子。將改性抗體(3.05mg,0.0208^imol)在上述pH8.5緩沖液(976jxL)和DMA(122pL,10%v/v)中稀釋，隨后用8,8，-[5-(N-4-巰基-4,4-二曱基丁?；?氨基-1,3-苯二基二(亞曱氧基)]-二[7-甲氧基-2-亞甲基-1,2,3,11a-四氳-511-吡咯并[2,1-(:][1，4]苯并二氮雜萆-5-酮](實(shí)施例16化合物)(0.20、mo10.158mg)在DMA(122pl，10%v/v)中的溶液處理。最終蛋白質(zhì)濃度為2.5mg/mL,含有20%在緩沖液中的DMA。結(jié)合過(guò)程在室溫下旋轉(zhuǎn)過(guò)夜，隨后經(jīng)沉降(13,200RPM4分鐘)澄清。上清液隨后用在pH6.5的PBS緩沖液中平衡的SephadexG25凝膠過(guò)濾柱純化。純化的結(jié)合物用3次緩沖液交換透析入PBSpH6.5緩沖液中(約1:600稀釋度)。結(jié)合物通過(guò)0.22pm注射過(guò)濾器澄清，進(jìn)行分光光度法分析(對(duì)于PBDs28。nm=7743M"cm-1，s"8腿-9137]Vr1cm",對(duì)抗體￡28。證=206,460NT1cm-1^每個(gè)抗體分子連接平均2.58PBD分子(實(shí)施例16化合物)。實(shí)施例B:結(jié)合試-驗(yàn)抗-B4抗體和其茅屋霉素結(jié)合物在表達(dá)Ramos細(xì)胞的抗原上的相對(duì)結(jié)合親合力用基于熒光性的試驗(yàn)測(cè)定。抗體-茅屋霉素結(jié)合物和單純的抗體以l(T7M的濃度加入96孔圓底板中，用3倍的系列稀釋液滴定從而對(duì)每個(gè)濃度存在重復(fù)試驗(yàn)。Ramos細(xì)胞以每孔50000細(xì)胞加入每個(gè)含有不同抗體或結(jié)合物濃度的孔和對(duì)照孔中，玲反在水上培養(yǎng)3小時(shí)。在培養(yǎng)時(shí)期后，洗滌板中的細(xì)胞，加入結(jié)合于人體IgG,如抗-B4的熒光素標(biāo)記的仲抗體，板在水上培養(yǎng)l小時(shí)。在培養(yǎng)時(shí)期后，板再次洗滌，細(xì)胞用1。/o甲醛/PBS溶液固定。板的每個(gè)孔中的熒光性用BectonDickinsonFACSCalibur焚光性分析器讀出。數(shù)據(jù)作為在最高濃度抗體或結(jié)合物下得到的最大熒光性的百分?jǐn)?shù)畫出曲線。實(shí)施例C:茅屋霉素衍生物或茅屋霉素衍生物結(jié)合物的體外效力和特異性。所使用的一般實(shí)驗(yàn)考法將茅屋霉素衍生物或茅屋霉素衍生物結(jié)合物樣品加入96孔平底組織培養(yǎng)板中，用1x1(T12M至3x1(T7M的系列稀釋溶液滴定?？乖?yáng)性肺瘤細(xì)胞和抗原陰性胂瘤細(xì)胞加入孔中使得對(duì)于每個(gè)細(xì)胞系的每個(gè)藥物濃度存在三個(gè)重復(fù)樣品，板在5%。02氣氛中在37。C培養(yǎng)4天。在培養(yǎng)時(shí)期結(jié)束時(shí)，向每個(gè)孔中加入20[mu]l四唑鏡試劑WST-8(2-(2-曱氧基-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二硫代苯基)-2-四唑镥單鈉鹽)，板回收培養(yǎng)器中2小時(shí)。隨后用MolecularDevices板閱讀器在450nm測(cè)量^反每個(gè)孔中的吸光率。畫出在每個(gè)茅屋霉素書f生物或結(jié)合物濃度下細(xì)胞的存活比例的曲線。<table>tableseeoriginaldocumentpage133</column></row><table>測(cè)試本發(fā)明的化合物與結(jié)合物對(duì)MOLT-4和BJAB或HL60/GC和Ramos細(xì)胞系的特異細(xì)胞毒性，結(jié)果在附圖la-c、2a-c和3a-b中說(shuō)明。附圖la表示huB4-SPDB-實(shí)施例16化合物對(duì)抗原陽(yáng)性BJAB細(xì)胞和抗原陰性MOLT-4細(xì)J包的體外-丈力。附圖lb表示huB4-SMCC-實(shí)施例16化合物對(duì)抗原陽(yáng)性BJAB細(xì)胞和抗原陰性MOLT-4細(xì)J包的體外效力。附圖lc表示實(shí)施例16游離化合物對(duì)BJAB和MOLT-4細(xì)胞的體外效力。附圖2a表示huB4-SPDB-實(shí)施例17化合物對(duì)抗原陽(yáng)性BJAB細(xì)胞和抗原陰性MOLT-4細(xì)月包的體外效力。附圖2b表示huB4-SMCC-實(shí)施例17化合物對(duì)抗原陽(yáng)性BJAB細(xì)胞和抗原陰性MOLT-4細(xì)胞的體外效力。附圖2c表示實(shí)施例17游離化合物對(duì)BJAB和MOLT-4細(xì)胞的體外效力。附圖3a表示huMy9-6-SPDB-實(shí)施例16化合物對(duì)抗原陽(yáng)性HL60/GC細(xì)胞和抗原陰性Ramos細(xì)胞的體外效力。附圖3b表示實(shí)施例16游離4^合物對(duì)HL60/GC和Ramos細(xì)月包的體外效力。實(shí)施例D:茅屋霉素衍生物或茅屋霉素衍生物結(jié)合物的體內(nèi)效力試-驗(yàn)可通過(guò)應(yīng)用和/或適用在WO2004/103272中描述的實(shí)"驗(yàn)方法，用huB4作為抗體和適用的抗原陽(yáng)性細(xì)胞系，例如Ramos和RajiiBurkitt，s'淋巴瘤細(xì)月包系進(jìn)4亍。權(quán)利要求1.式(I)化合物:其中---表示任選的單鍵；表示單鍵或雙鍵；其前提是，當(dāng)表示單鍵時(shí)，U和U’，相同或不同，分別表示H，W和W’，相同或不同，分別選自基團(tuán)OH、醚，例如-OR、酯(例如乙酸酯)，例如-OCOR、碳酸酯，例如-OCOOR、氨基甲酸酯，例如-OCONRR’、環(huán)氨基甲酸酯，N10和C11是環(huán)的部分、脲，例如-NRCONRR’、硫代氨基甲酸酯，例如-OCSNHR、環(huán)硫代氨基甲酸酯，N10和C11是環(huán)的部分、-SH、硫化物，例如-SR、亞砜，例如-SOR、砜，例如-SOOR、磺酸酯，例如-SO3-、磺酰胺，例如-NRSOOR、胺，例如-NRR’、任選環(huán)化胺，N10和C11是環(huán)的部分、羥胺衍生物，例如-NROR’、酰胺，例如-NRCOR、疊氮基，例如-N3、氰基、鹵素、三烷基或三芳基鏻、氨基酸衍生的基團(tuán)；和當(dāng)表示雙鍵時(shí)，U和U’不存在，W和W’表示H；R1、R2、R1’、R2’是相同或不同的，分別選自鹵化物或任選被一個(gè)或多個(gè)Hal、CN、NRR′、CF3、OR、芳基、Het、S(O)qR取代的烷基，或R1和R2和R1’和R2’一起形成分別包含基團(tuán)＝B和＝B’的雙鍵。B和B’是相同或不同的，分別選自任選被一個(gè)或多個(gè)Hal、CN、NRR’、CF3、OR、芳基、Het、S(O)qR取代的烯基或B和B’表示氧原子。X、X’是相同或不同的，分別選自一個(gè)或多個(gè)-O-、-NR-、-(C＝O)-、-S(O)q-。A、A’是相同或不同的，分別選自任選含有一個(gè)O、N或S原子的烷基或烯基，其任選被一個(gè)或多個(gè)Hal、CN、NRR’、CF3、OR、S(O)qR、芳基、Het、烷基、烯基取代。Y、Y’是相同或不同的，分別選自H、OR；T是-NR-、-O-、-S(O)q-、或4-10元芳基、環(huán)烷基、雜環(huán)或雜芳基，每個(gè)任選被一個(gè)或多個(gè)Hal、CN、NRR’、CF3、R、OR、S(O)qR、和/或連接物取代、或支鏈烷基，任選被一個(gè)或多個(gè)Hal、CN、NRR’、CF3、OR、S(O)qR和/或連接物取代、或被一個(gè)或多個(gè)Hal、CN、NRR’、CF3、OR、S(O)qR和/或連接物取代的直鏈烷基；n，n’，相同或不同，是0或1；q是0、1或2；R、R’是相同或不同的，分別選自H、烷基、芳基，每個(gè)任選被Hal、CN、NRR’、CF3、R、OR、S(O)qR、芳基、Het取代；或其可藥用的鹽、水合物或水合物鹽，或這些化合物的多形態(tài)晶體結(jié)構(gòu)或其旋光異構(gòu)體、外消旋體、非對(duì)映體或?qū)τ丑w。2、根據(jù)權(quán)利要求l的衍生物，具有如下式(II):<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>Y、Y，、X、X，、n、n，、Rl、R2、Rl，、R2，、R、R，、T如4又利要求l所述，W和W，，相同或不同，分別選自基團(tuán)OH、醚，例如-OR、酯(例如乙酸酯)，例如-OCOR、岡COOR、碳酸酯，例如國(guó)OCOOR、氨基曱酸酯，例如-OCONRR，、環(huán)氨基甲酸酯，N10和C11是環(huán)的部分、脲，例如-NRCONRR，、硫代氨基曱酸酯，例如-OCSNHR、環(huán)硫代氨基曱酸酯，N10和Cll是環(huán)的部分、-SH、硫化物，例如-SR、亞砜，例如-SOR、砜，例如-SOOR、石黃酸酯，例如-S(V、石黃酰胺，例如-NRSOOR、胺，例如-NRR，、任選環(huán)化胺，N10和Cll是環(huán)的部分、羥胺衍生物，例如畫NROR，、酰胺，例如隱NRCOR、國(guó)NRCONRR，、疊氮基，例如畫N3、氰基、卣素、三烷基或三芳基鎮(zhèn)、氨基酸衍生的基團(tuán)。3、權(quán)利要求1或2的下式化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>其中X、X，、A、A，、Y、Y，、T、n、n，如權(quán)利要求1所述。4、權(quán)利要求1或2的下式化合物4權(quán)利要求1或2的下式化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>其中X、X，、A、A，、Y、Y，、T、n、n，如權(quán)利要求1所述。5、根據(jù)上述任一權(quán)利要求的化合物，其中X二X'。6、根據(jù)上述任一權(quán)利要求的化合物，其中乂=乂，=0。7、根據(jù)上述任一權(quán)利要求的化合物，其中A二A'。8、根據(jù)上述任一權(quán)利要求的化合物，其中A-A，-直鏈未取代烷基。9、根據(jù)上述任一權(quán)利要求的化合物，其中Y二Y，。10、根據(jù)上述任一權(quán)利要求的化合物，其中Y二Y'K)烷基。11、根據(jù)上述任一權(quán)利要求的化合物，其中T是4-10元芳基、雜環(huán)或雜芳基，每個(gè)任選一皮一個(gè)或多個(gè)Hal、CN、NRR，、CF3、R、OR、S(O)qR、烷基和/或連接物取代。12、根據(jù)上述任一權(quán)利要求的化合物，其中T是苯基或吡啶基，每個(gè)任選-皮一個(gè)或多個(gè)Hal、CN、NRR，、CF3、R、OR、S(O)qR和/或連接物取代。13、根據(jù)上述任一權(quán)利要求的化合物，其中所述連接物選自二硫化物基團(tuán)、硫醚基團(tuán)、酸不穩(wěn)定基團(tuán)、光不穩(wěn)定基團(tuán)、肽酶不穩(wěn)定基團(tuán)和酯酶不穩(wěn)定基團(tuán)。14、根據(jù)上述任一權(quán)利要求的化合物，其中所述連接物包括含硫醇-、石?；锘蚨賣化物-基團(tuán)。15、根據(jù)權(quán)利要求14的化合物，其中所述連接物是下式-G-D-(Z)P-S-Z，其中G是單或雙鍵、-O-、-S-或-NR-;D是單4定或-E畫、-E畫NR-、-E國(guó)NR陽(yáng)F誦、-E-O國(guó)、-E-O國(guó)F國(guó)、隱E-NR-CO國(guó)、-E畫NR-CO-F-、畫E-CO-、陽(yáng)CO-E-、曙E-CO-F、-E國(guó)S-、-E-S-F誦、-E國(guó)NR-C畫S國(guó)、國(guó)E-NR-CS-F誦；其中E和F是相同或不同的，分別選自直鏈或支鏈-(OCH2CH^烷基(OCH2CH2)j-、國(guó)烷基國(guó)(OCH2CH2)i畫烷基畫、-(OCH2CH2)i-、-(OCH^H^環(huán)烷基(OCH2CH2)j、-(0012(^12)1雜環(huán)基(0012012)」、-(OCHzCH^芳基(OCH2CH2V、-(OCH2CH力i雜芳基(0(^12(^12)廣、-烷基-(0(^12(:112)1烷基(OCH2CH2)j-、-烷基陽(yáng)(0012CH2)i、-烷基國(guó)(0(^12012)1環(huán)烷基(0(:112012)』、-烷基-(OCHzCH^雜環(huán)基(OCH2CH2)j、-烷基-(OCH2CH2)i芳基(OCH2CH2)j、-烷基國(guó)(0(^12012、雜芳基(OCH2CH2)r、-環(huán)烷基-烷基-、國(guó)烷基-環(huán)烷基-、-雜環(huán)基-烷基-、-烷基-雜環(huán)基-、-烷基-芳基-、-芳基-烷基-、-烷基-雜芳基-、-雜芳基-烷基-;其中i和j，相同或不同，是整數(shù)，分別選自0、1-2000;Z是直鏈或支鏈-烷基-;p是0或1;Z，表示H、硫醇保護(hù)基團(tuán)，例如COR、R2?；騍R20,其中R2。表示H、曱基、烷基、任選取代的環(huán)烷基、芳基、雜芳基或雜環(huán)，其前提是當(dāng)Z，是H時(shí)，所述化合物與通過(guò)分子內(nèi)環(huán)化由PBD之一的亞胺鍵-NH二上加成硫醇基團(tuán)-SH形成的相應(yīng)化合物平衡。16、權(quán)利要求15的化合物，其中G是單鍵或-O-或-NR-。17、根據(jù)權(quán)利要求15或16的化合物，其中G是-O-。18、根據(jù)權(quán)利要求15、16或17的化合物，其中D是單鍵或-E-、-E-NR曙、-E國(guó)CO-、-CO-E誦、-E-NR誦CO-。19、根據(jù)權(quán)利要求15-18的任一化合物，其中D是-E-NR-CO-。20、根據(jù)權(quán)利要求15-19的任一化合物，其中E是直鏈或支鏈-烷基-、-(0(:112。112)1-或烷基-雜環(huán)基。21、根據(jù)權(quán)利要求15-20的任一化合物，其中Z是-(CH2)2-C(CH3)2-。22、根據(jù)權(quán)利要求15-21的任一化合物，其中p是l。23、根據(jù)權(quán)利要求15-22的任一化合物，其中Z，是H或SR20，其中R加表示烷基、芳基、雜環(huán)基或雜芳基。24、根據(jù)權(quán)利要求14或15的化合物，其中所述連接物選自-(CR13R14)t(CR15R16)u(OCH2CH2)ySZ，、-(CR13R14)t(CR17=CR18)(CR15R16)y(OCH2CH2)ySZ,、-(CR13R14)t(NR19CO)(CR15R16)u(OCH2CH2)ySZ，、-(CR13R14)t(OCO)(CR15R16)u(OCH2CH2)ySZ，、-(CR13R14)t(CO)(CR15R16)u(OCH2CH2)ySZ，、-(CR13R14)t(CONR19)(CR15R16)u(OCH2CH2)ySZ，、國(guó)(CRBR44)t-苯基-CO(CR^R46)uSZ，、國(guó)(01131114>呋喃基-。0(01151116)^2，、國(guó)(CR43R44),惡峻基-CO(CR^R6)uSZ，、-(CR13R14),J>A^-CO(CR15R16)uSZ，、-(CR13R14),J^\J^CO(CR15R16)uSZ，、國(guó)(CRi3RM)t曙咪唑基國(guó)CO(CRuR^)uSZ，、陽(yáng)(CR3RM)t-嗎啉代-CO(CR!5Rw)uSZ，、-(01131114>國(guó)哌溱基國(guó)0)(011151116)1132，、-(CR13R14)t-N-曱基哌溱基國(guó)CO(CRuR16)USZ，、隱(CR43R44)r苯基-QSZ，、-(CRuRwV呋喃基-QSZ，、-(0尺131114>-嗝唑基-QSZ'、-(01131114>噻唑基-(^2，、-(01131114>誦噻吩基-(^2，、-(CR13R14)t-咪唑基-QSZ，、-(01131114>-嗎啉代-(^2，、-(CRDRM)t-哌嗪基-QSZ，、-(01131114)1-:^-甲基哌嗪基-(^2，，或-0(CR13R14)t(CR15R16)u(OCH2CH2)ySZ，、-0(CR13R14)t(NR19CO)(CR15R16)u(0CH2CH2)ySZ,、-0(CR13R14)t(CR17=CR18)(CR15R16)t(OCH2CH2)ySZ,、國(guó)0-苯基國(guó)QSZ，、-O-呋喃基-QSZ，、-0-哺唑基國(guó)(^2，、-O畫噻唑基畫QSZ，、國(guó)O國(guó)噻吩基-QSZ，、-O-咪唑基-QSZ'、-O-嗎啉代-QSZ'、-O-哌嗪基-QSZ'、-O-N-曱基哌嗪基-QSZ'、-OCO(CR13R14)t(NR19CO)(CR15R16)u(OCH2CH2)ySZ，、-OCO(CR13R14)t(CR17=CR18)(CR15R16)u(OCH2CH2)ySZ,、-OCONR12(CR13R14)t(CR15R16)u(OCH2CH2)ySZ，、-OCO-苯基-QSZ，、-OCO-呋喃基-QSZ，、-OCO-伊惡唑基-QSZ，、-OCO畫p塞唑基-QSZ，、-OCO-噻吩基-QSZ'、-OCO-咪哇基-QSZ，、-OCO-嗎啉代-QSZ，、-OCO-哌溱基-QSZ'、-OCO-N-曱基哌溱基-QSZ，，或-CO(CR13R14)t(CR15R16)u(OCH2CH2)ySZ，、-CO(CR13R14)t(CR17=CR18)(CR15R16)u(OCH2CH2)ySZ，、-CONR12(CR13R14)t(CR15R16)u(OCH2CH2)ySZ,、-CO-苯基-QSZ'、-CO-呋喃基-QSZ'、-CO-嗜唑基-QSZ'、-CO-瘞唑基-QSZ'、-CO-噻吩基-QSZ'、-CO-咪唑基-QSZ，、-CO-嗎啉代-QSZ，、-CO-哌嗪基-QSZ，、-CO-哌啶子基-QSZ'、-CO-N-曱基哌嗪基-QSZ'、-NR19(CR13R14)t(CR15R16)u(OCH2CH2)ySZ，、-NR19CO(CR13R14)t(CR15R16)u(OCH2CH2)ySZ,、-NR19(CR13R14)t(CR17=CR18)(CR15R16)t(OCH2CH2)ySZ,、-NR19CO(CR13R14)t(CR17=CR18)(CR15R16)t(OCH2CH2)ySZ，、-NR19CONR12(CR13R14)t(CRi5R16)u(OCH2CH2)ySZ，、-NR19CONR12(CR13R14)t(CR17=CR18)(CR15R16)t(OCH2CH2)ySZ，、誦NR^CO-苯基-QSZ，、^11190>呋喃基-(^2，、-服19(:0-1!惡唑基-(^2，、曙NRwCO-p塞唑基-QSZ，、-NRwCO-噻吩基-QSZ，、-NRwCO-咪唑基-QSZ'、-NRwCO-嗎啉代-QSZ，、-服190>哌。秦基-(^2，、-NRwCO-哌啶子基-QSZ，、-服190>^甲基哌溱基-(^2，、-NRw-苯基-QSZ，、-NR次呋喃基-QSZ，、-NRwJ惡唑基-QSZ，、-NR次噻唑基畫QSZ，、-NR次噻吩基-QSZ，、-NRw-咪唑基-QSZ，、-NR"-嗎啉代-QSZ，、-NRw-哌溱基-QSZ'、-NRw-哌啶子基-QSZ'、"NR49-N-甲基哌嗪基-QSZ，、^1119(:0-忖1112-苯基-(^2，、-NR49CO-NR42J惡唑基-QSZ，、-NR19CO-NR12-噻唑基-QSZ，、^1119(:0-服12-噻吩基-(^2，、-NRwCO-NRu-哌啶子基-QSZ'、-S(0)q(CR13R14)t(CR15R16)u(OCH2CH2)ySZ，、-S(0)q(CR13R14)t(CR17=CR18)(CR15R16)t(OCH2CH2)ySZ,、-SCONR12(CR13R14)t(CR15R16)u(OCH2CH2)ySZ，、-SCO-嗎啉代-QSZ，、-SCO-哌溱基-QSZ，、-SCO-哌啶子基-QSZ，和-SCO-N-曱基哌嗪基-QSZ',其中Z，是H、硫醇保護(hù)基團(tuán)，例如COR、R2o，或SR20，，其中1120，表示烷基、芳基、雜環(huán)或雜芳基；其中Q是直接連接或具有1-10個(gè)碳原子的線性烷基或支鏈烷基或帶有2-20重復(fù)乙烯氧單元的聚乙二醇間隔基；Rw和Ri2是相同或不同的，是具有1-10個(gè)碳原子的直鏈烷基、支鏈烷基或環(huán)烷基，或簡(jiǎn)單的或取代的芳基或雜環(huán)，此外Ru可以是H;R13、R14、1115和1116是相同或不同的，是H或具有l(wèi)-4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基；Rn和R^是H或烷基；u是l-10的整數(shù)，還可以是0;t是l-10的整數(shù)，還可以是0;y是l-20的整數(shù)，還可以是O。25、根據(jù)上述任一權(quán)利要求的化合物，其選自選自如下8,8，-[1,3-苯二基二(亞曱氧基)]-二[(3)-2-亞乙-(￡)-基-7-曱氧基-1,2,3,11&-四氬-SH-吡咯并口,l-c][M]苯并二氮雜萆-:5-酮]8,8，-[5-甲氧基-l,3-苯二基二(亞曱氧基)]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-曱氧基-1,2,3,1la-四氬-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，-[l,5-戊二基二(氧基)]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-甲氧基-l,2,3,lla-四氫_511-吡咯并[2,1《][1,4]苯并二氮雜革-5-酮〗8,8，-[l,4-丁二基二(氧基)]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-曱氧基-l,2,3,lla-四氫-5H-吡咯并[2,1-c][M]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，-[3-甲基-1，5-戊二基二(氧基)]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-甲氧基-1,2,3,1la-四氫-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，-[2,6-吡啶二基(氧基)]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-甲氧基-l,2,3，lla-四氫-511-吡咯并[2,1-(;][1,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，_[4-(3-叔丁氧基羰基氨基丙氧基)-2,6-吡啶二基二-(亞甲氧基)]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-曱氧基-l,2,3,lla-四氫-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，-[5-(3-氨基丙氧基)-l,3-苯二基二(亞曱氧基)]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-甲氧基-l,2,3,lla-四氫-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，-[5-(N-甲基-3-叔丁氧基羰基氨基丙基)-l，3-苯二基二-(亞甲氧基)]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-曱氧基-l,2，3，lla-四氳-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，-{5-[3-(4-甲基-4-甲基二硫基-戊?；被?丙氧基]-1,3-苯二基二(亞甲氧基)}-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-甲氧基-1,2,3,11a-四氫-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，-[5-乙?；虼谆?l,3-苯二基二(亞甲氧基)]-二[(S)-2-亞甲基-7-甲氧基-l,2，3,lla-四氬-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]二-(2-[(S)-2-亞甲基-7-甲氧基-5-氧代-l,3,lla-四氫-5H-吡咯并[2,l-c][1,4]苯并二氮雜萆-8-基氧基]-乙基}-氨基甲酸叔丁基酯8,8，-[3-(2-乙酰基硫代乙基)-l,5-戊二基二(氧基)]-二[(S)-2-亞甲基-7-甲氧基-l,2,3,lla-四氫-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，-[5-(N-4-巰基-4,4-二曱基丁?；?氨基-l,3-苯二基二(亞曱氧基)]-二[7-甲氧基-2-亞曱基-l，2,3,lla-四氫-5H-吡咯并[2，l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，-[5-(N-4-曱基二硫代-4,4-二甲基丁?；?-氨基-l,3-苯二基二(亞甲氧基)]-二[7-曱氧基-2-亞甲基-l,2,3,lla-四氫-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，-[5-(]^-甲基-^(2-巰基-2,2-二甲基乙基)氨基-1,3-苯二基(亞甲氧基))-二[7-曱氧基-2-亞曱基-l,2,3,lla-四氳-5H-吡咯并[2,1-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，-[5-(N-曱基-N-(2-甲基二硫代-2,2-二甲基乙基)氨基-l,3-苯二基(亞甲氧基))-二[7-甲氧基-2-亞甲基-l,2,3,lla-四氫-5H-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，-[(4-(2-(4-巰基-4-甲基)-戊酰氨基-乙氧基)-吡啶-2,6-二曱基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二甲氧基-l,2,3,lla-四氫-吡咯并[2,l-c][l，4]苯并二氮雜革-5-酮]8,8，-[(1-(2-(4-甲基-4-曱基二硫基)-戊酰氨基-乙氧基)-苯-3,5-二甲基)-二氧基]-二[(S)畫2-亞乙隱(E)-基-7-二曱氧基誦l,2,3,lla陽(yáng)四氫陽(yáng)"比咯并[2,l-c][1,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，-[(4-(3-(4-甲基-4-曱基二硫基)-戊酰氨基-丙氧基)-口比啶-2,6-二甲基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二甲氧基-l,2,3,lla-四氳-吡咯并[2,1-(:][1,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，-[(4-(4-(4-曱基-4-甲基二硫基)-戊酰氨基-丁氧基)-吡啶-2,6-二甲基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二甲氧基-l,2,3,lla-四氳-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，-[(4-(3-[4-(4-甲基-4-曱基二硫基-戊?；?-哌溱-1-基]-丙基)-吡啶-2,6-二曱基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二甲氧基-l,2,3,lla-四氫-p比咯并[2,1《][1,4]苯并二氮雜萆-5-酮〗8,8，-[(1-(3-[4-(4-甲基-4-甲基二硫基-戊?；?-哌。秦-1-基]-丙基)-苯-3,5-二曱基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二曱氧基-l,2,3,lla-四氳-p比咯并[2，1-c][1,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，-[(4-(2-{2-[2-(4-曱基-4-甲基二硫基-戊?；被?-乙氧基]-乙氧基卜乙氧基)-吡啶-2,6-二甲基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二曱氧基-1,2,3，11&-四氫-吡咯并[2，1《][1,4]苯并二氮雜革-5-酮]8,8，-[(1-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(4-甲基-4-曱基二硫基-戊?；被?-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-苯-3，5-二甲基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙曙(E)國(guó)基曙7誦二曱氧基-l,2,3,lla國(guó)四氬-p比咯并[2,l畫c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，-[(1-(2-{2-[2-(4-甲基-4-甲基二硫基-戊酰基氨基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-苯-3,5-二曱基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二甲氧基-1,2,3,11a-四氫國(guó)p比咯并[2,l畫c][l，4]苯并二氮雜革陽(yáng)5-酮]8,8，_[(4-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(4-甲基-4-曱基二硫基-戊?；被?-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基p比啶-2,6-二甲基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)畫基畫7誦二甲氧基-l,2,3,lla-四氫-p比咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜革-5-酮]8,8，-[(1-(2-[曱基-(2-曱基-2-甲基二硫基-丙基)-氨基]-乙氧基)-苯-3,5-二甲基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二曱氧基-l，2,3,lla-四氫-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，-[(4-(3-[曱基-(4-甲基-4-甲基二硫基-戊酰基)-氨基]-丙基)-吡啶-2,6-二曱基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二曱氧基-l,2,3，lla-四氫-p比咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜革-5-酮]8,8，-[(4-(3-[甲基-(2-甲基-2-曱基二疏基-丙基)-氨基]-丙基)-吡啶-2,6-二甲基)-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二曱氧基-l,2,3,lla-四氳-吡咯并[2,l-c][l,4]苯并二氮雜萆-5-酮]8,8，-[(1-(4-曱基-4-曱基二硫基)-戊酰氨基)-苯-3,5-二曱基]-二氧基]-二[(S)-2-亞乙-(E)-基-7-二甲氧基-l,2,3,lla-四氬-吡咯并[2,l-c][l，4]苯并二氮雜萆酮]以及相應(yīng)的巰基書f生物，或其可藥用的鹽、水合物或水合物鹽，或這些化合物的多形態(tài)晶體結(jié)構(gòu)或其旋光異構(gòu)體、外消旋體、非對(duì)映體或?qū)τ丑w。26、結(jié)合物，其含有一種或多種通過(guò)含有連接基團(tuán)的連接物化學(xué)連接于細(xì)胞結(jié)合藥物的茅屋霉素衍生物。27、根據(jù)權(quán)利要求26的結(jié)合物，其中茅屋霉素衍生物是式(I，)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>其中—表示任選的單鍵；二表示單鍵或雙鍵；其前提是，當(dāng)二表示單鍵時(shí)，U和U，，相同或不同，分別表示H,W和W，，相同或不同，分別選自基團(tuán)OH、醚，例如-OR、酉旨(例如乙酸酯)，例如-OCOR、碳酸酯，例如-OCOOR、氨基曱酸酯，例如-OCONRR，、環(huán)氨基曱酸酯，N10和Cll是環(huán)的部分、脲，例如-NRCONRR，、硫代氨基曱酸酯，例如-OCSNHR、環(huán)硫代氨基甲酸酯，N10和Cll是環(huán)的部分、-SH、硫化物，例如-SR、亞砜，例如-SOR、砜，例如-SOOR、石黃酸酯，例如-SCV、磺酰胺，例如-NRSOOR、胺，例如-NRR，、任選環(huán)化胺，N10和Cll是環(huán)的部分、羥胺衍生物，例如-NROR，、酰胺，例如-NRCOR、疊氮基，例如-Ng、氰基、鹵素、三烷基或三芳基銹、氨基酸衍生的基團(tuán)；和當(dāng)二表示雙4建時(shí)，U和U，不存在，W和W，表示H;Rl、R2、Rl，、R2，是相同或不同的，分別選自卣化物或任選被一個(gè)或多個(gè)Hal、CN、NRR，、CF3、OR、芳基、Het、S(O)qR取代的烷基，或Rl和R2和Rl'和R2，一起形成分別包含基團(tuán)二B和二B'的雙鍵。B和B，是相同或不同的，分別選自任選^^一個(gè)或多個(gè)Hal、CN、NRR，、CF3、OR、芳基、Het、S(O)qR取代的烯基或B和B，表示氧原子。X、X，是相同或不同的，分別選自一個(gè)或多個(gè)-O-、-NR-、-(C=0)-、畫S(O)q-。A、A，是相同或不同的，分別選自任選含有一個(gè)O、N或S原子的烷基或烯基，其任選^皮一個(gè)或多個(gè)Hal、CN、NRR，、CF3、OR、S(O)qR、芳基、Het、烷基、烯基取代。Y、Y，是相同或不同的，分別選自H、OR;T是-烷基-、-NR-、-O-、-S(O)q-、或4-10元芳基、環(huán)烷基、雜環(huán)或雜芳基，每個(gè)任選被一個(gè)或多個(gè)Hal、CN、NRR，、CF3、R、OR、S(O)qR、和4皮一個(gè)或多個(gè)所述連接物取代；n,n，，相同或不同，是0或1;q是0、1或2;R、R，是相同或不同的，分別選自H、烷基、芳基，每個(gè)任選被Hal、CN、NRR，、CF3、R、OR、S(O)qR、芳基、Het取代；或其可藥用的鹽、水合物或水合物鹽，或這些化合物的多形態(tài)晶體結(jié)構(gòu)或其旋光異構(gòu)體、外消旋體、非對(duì)映體或?qū)τ丑w，所述衍生物通過(guò)含有所述連接物的所述連接基團(tuán)共價(jià)鍵合于細(xì)胞結(jié)合藥物。28、權(quán)利要求26或27的結(jié)合物，其中所述細(xì)胞結(jié)合藥物選自抗體或抗體片段，其含有至少一個(gè)結(jié)合位、淋巴因子、激素、生長(zhǎng)因子、營(yíng)養(yǎng)傳遞分子或任何其它細(xì)胞結(jié)合分子或基質(zhì)。29、根據(jù)權(quán)利要求26、27或28的結(jié)合物，其中所述細(xì)胞結(jié)合藥物選自單克隆抗體；嵌合抗體；人體化抗體；全人體抗體；單鏈抗體；抗體片段，例如Fab、Fab，、F(ab，)2和Fv;干擾素；肽；淋巴因子，例如IL-2、IL-3、IL-4、IL-6;激素，例如胰島素、TRH(促曱狀腺釋放素)、MSH(促黑素)、類固醇激素，例如雄激素和雌激素；生長(zhǎng)因子和集落刺激因子，例如EGF、TGFou胰島素類生長(zhǎng)因子(IGF-I、IGF-II)G-CSF、M-CSF和GM-CSF;維生素，例如葉酸和4失傳遞蛋白。30、根據(jù)權(quán)利要求26-29任一的結(jié)合物，其中U、U，、W、W，、Rl、R2、Rl'、R2'、Y、Y，、X、A、A，、X，、n、n，.....二、T和所述連接物如權(quán)利要求2-25的任一中所定義。31、根據(jù)權(quán)利要求26-30的任一的結(jié)合物，其中所述連接基團(tuán)是含石危醇、石?；锘蚨?化物基團(tuán)。32、制備權(quán)利要求1-25的任一化合物的方法，其包括脫保護(hù)相應(yīng)式(III)化合物的步驟<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>其中Y、Y，、X、X，、A、A，、X，、U、U，、W、W，、一、二、Rl、R2、Rl，、R2，如式(I)中定義，T，相應(yīng)于其中官能團(tuán)已被保護(hù)的T,和任選分離所需的式①化合物。33、權(quán)利要求32的方法，其中式(m)化合物由偶合相應(yīng)的式(IV)、(IV')和(V)化合物得到<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>其中U、U，、W、W'、Y、Y，、A、A,、X，、n、n，、T，.....二、Rl、R2、Rl，、R2，如式(III)中定義，Lg是離去基團(tuán)。34、由相應(yīng)式(in')化合物制備權(quán)利要求1-25的任一化合物的方法，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>其中Y、Y，、X、X，、A、A，、X，、U、U，、W、W，.....二、Rl、R2、Rl，、R2，、n、n，如式(I)中定義，T"是T的任選保護(hù)的前體基團(tuán)，和任選分離所需的式(I)化合物。35、根據(jù)權(quán)利要求34的方法，其中式(Iir)化合物可,由偶合相應(yīng)的式(IV)、(IV，)和(V，)化合物得到<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>)其中U、Q、W、W，、Y、Y，、A、A，、n、n，、-—、二、Rl、R2、Rl，、R2，如式(I)中定義，T"是T的任選保護(hù)的前體基團(tuán)和Lg是離去基團(tuán)。36、制備權(quán)利要求1-25的任一化合物的方法，其包括環(huán)化相應(yīng)式(VIII)化合物的步驟<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>其中Y、Y，、X、A、A，、X，、n、n，、T、Rl、R2、Rl，、R2，如式(I)中定義。37、根據(jù)權(quán)利要求36的方法，其中式(VIII)化合物可由相應(yīng)的式(IX)化合物得到<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>其中Y、Y，、A、A，、n、n，、Rl、R2、Rl，、R2，、T如式(I)中定義。38、制備權(quán)利要求27-31的任何之一的結(jié)合物的方法，其包括其中T含有硫化物、二硫化物或硫醇基團(tuán)或其前體的權(quán)利要求1中定義的式(I)化合物與含有對(duì)二硫化物或硫醇活性的官能團(tuán)的細(xì)胞結(jié)合藥物反應(yīng)，從而化合物和細(xì)胞結(jié)合藥物經(jīng)硫化物或二硫化物鍵連接在一起。39、藥物組合物，其含有如權(quán)利要求26-31的任何之一定義的結(jié)合物分子或權(quán)利要求1-25的任何之一定義的式(I)化合物和可藥用的載體。40、有效量的如權(quán)利要求26-31的任何之一定義的結(jié)合物分子或權(quán)利要求1-25的任何之一定義的式(I)化合物用于制備用于殺死或抑制細(xì)胞生長(zhǎng)的藥物的用途，其包括接觸目標(biāo)細(xì)胞或含有目標(biāo)細(xì)胞的組織。41、如權(quán)利要求26-31的任何之一定義的結(jié)合物分子或權(quán)利要求1-25的任何之一定義的式(I)化合物用于制備用于治療癌癥的藥物的用途。全文摘要本發(fā)明涉及新的式(I)茅屋霉素衍生物，它們的制備方法和它們的治療用途。文檔編號(hào)C07D487/04GK101374846SQ200780003379公開(kāi)日2009年2月25日申請(qǐng)日期2007年1月22日優(yōu)先權(quán)日2006年1月25日發(fā)明者A·科默康,H·鮑查德,L·高茲,R·V·J·查里,R·趙,W·李,Y·鄧申請(qǐng)人:賽諾菲-安萬(wàn)特