專利名稱：具有多種生物活性的取代吲哚－3－基草酰胺衍生物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于吲哚衍生物，特別是涉及一種具有多種生物活性的取代吲哚-3-基草酰胺衍生物背景技術吲哚-3-基草酰胺具有多種生物活性，已被相當多的文獻和公開的專利記載所證明。例如，在荷蘭專利申請6502481中，吲哚-3-草酰胺衍生物具有抗炎、解熱和鎮(zhèn)痛活性的此類化合物。在英國專利申請GB-B1028 812中，記載了作為鎮(zhèn)痛、抗驚厥和β-腎上腺素能化合物的吲哚-3-基草酰胺衍生物。G.Domschke等(Ber.94，2353(1961))記載了具有某些藥效特征的吲哚-3-基草酰胺衍生物。E.Walson在J.Med.Chem.，11，1252(1968)中記載了對甘油磷酸脫氫酶和乳酸脫氫酶具有抑制作用的吲哚-3-基草酰胺衍生物。
在歐洲專利說明書EP 675110中記載了吲哚-3-基草酰胺衍生物能夠作為sPLA2抑制劑，并且能夠用于治療胰腺炎中的濃毒性休克和用于治療變應性關節(jié)炎和類風濕關節(jié)炎。在德國的專利申請19814838.0中已經提出將已有專利DE-A19636150 A1中的化合物用作抗腫瘤。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于得到一種新的具有良好抗腫瘤、抗病毒及抗炎活性的取代吲哚-3-基草酰胺衍生物。
本發(fā)明的另一個目的在于提供取代吲哚-3-基草酰胺衍生物在制備抗腫瘤、抗病毒及抗炎藥物的應用。
本發(fā)明的另一個目的在于提供取代吲哚-3-基草酰胺衍生物在治療腫瘤、病毒感染及炎癥的應用。
本發(fā)明的取代吲哚-3-基草酰胺衍生物是一種具有通式1結構特征的化合物， 通式1
其中M＝0或1；N＝0或1；P＝0、1、2或3；其中基團數目m、n和p以及基團R1、R2、R4、R5、R6、R7、R8、R9、W、X和Y具有下列意義當m＝1，n＝p＝0時和當n＝0，m＝1，p≠0時以及當m＝0，n＝1，p≠0時，W為O或S，R1可以是如下通式2所示的取代苯環(huán) 通式2通式2中所述的取代苯環(huán)結構中，q為1或2，苯環(huán)的其他取代位置可以被相同或不同的取代基所取代，它們是(C1-C6)-烷基和(C3-C7)-環(huán)烷基，(C1-C6)-烷氧基、(C1-C6)-烷磺酰氨基、硝基、氨基、羥基、氰基、鹵素和三氟甲基，還可以是乙氧基羰基、氨基和其中烷基部分具有1-18個碳原子的烷氧羰基或烷氧磺?；划攏＝0，m＝1，p≠0或當 m＝0，n＝1，p≠0時，W為O或S，R1可以是苯環(huán)或取代苯環(huán)、吡啶環(huán)或取代吡啶環(huán)、嘧啶環(huán)或取代嘧啶環(huán)、喹啉環(huán)或取代喹啉環(huán)，苯環(huán)、吡啶環(huán)、嘧啶環(huán)和喹啉環(huán)本身可以被相同或不同的取代基所取代，它們是(C1-C6)-烷基或(C3-C7)-環(huán)烷基，(C1-C6)-烷氧基、(C1-C6)-烷磺酰氨基、硝基、氨基、羥基、氰基、鹵素和三氟甲基，還可以是乙氧基羰基、氨基或其中烷基部分具有1-18個碳原子的烷氧羰基或烷氧磺酰基；通式1中基團R2、R4、R5、R6、R7可以相同也可以不同，可以是氫、(C1-C6)-烷基或(C3-C7)-環(huán)烷基，(C1-C6)-烷氧基、(C1-C6)-烷磺酰氨基、硝基、氨基、羥基、氰基、鹵素或三氟甲基，還可以是乙氧羰基、氨基或其中烷基部分具有1-18個碳原子的烷氧羰基或烷氧磺?；?；也可以是苯環(huán)或取代苯環(huán)、吡啶環(huán)或取代吡啶環(huán)、嘧啶環(huán)或取代嘧啶環(huán)、喹啉環(huán)或取代喹啉環(huán)，苯環(huán)、吡啶環(huán)、嘧啶環(huán)和喹啉環(huán)本身可以被相同或不同的取代基所取代，它們是(C1-C6)-烷基或(C3-C7)-環(huán)烷基，(C1-C6)-烷氧基、(C1-C6)-烷磺酰氨基、硝基、氨基、羥基、氰基、鹵素或三氟甲基，還可以是乙氧羰基、氨基或其中烷基部分具有1-18個碳原子的烷氧羰基或烷氧磺?；贿€可以是芳甲氧基或取代芳甲氧基，芳基為苯環(huán)或取代苯環(huán)、吡啶環(huán)或取代吡啶環(huán)、嘧啶環(huán)或取代嘧啶環(huán)、喹啉環(huán)或取代喹啉環(huán)，苯環(huán)、吡啶環(huán)、嘧啶環(huán)和喹啉環(huán)本身可以被相同或不同的取代基所取代，它們是(C1-C6)-烷基或(C3-C7)-環(huán)烷基，(C1-C6)-烷氧基、(C1-C6)-烷磺酰氨基、硝基、氨基、羥基、氰基、鹵素或三氟甲基，還可以是乙氧羰基、氨基或其中烷基部分具有1-18個碳原子的烷氧羰基或烷氧磺?；换鶊FR8＝氫、(C1-C6)-烷基，其中烷基可以是被苯環(huán)單一或多取代，該苯環(huán)本身可以被鹵素、(C1-C6)-烷基、(C3-C7)-環(huán)烷基，(C1-C6)-烷氧基、(C1-C6)-烷磺酰氨基、硝基、氨基、羥基、氰基、鹵素、芐氧羰基、叔丁氧羰基、芐基、乙?；蛉谆€可以是乙氧羰基、氨基或其中烷基部分具有1-18個碳原子的烷氧羰基或烷氧磺?；?、羧基、(C1-C6)-烷基醇酯化的羧基、芐氧基或芐基單或多取代，其中所述的芐基在苯環(huán)部分被(C1-C6)-烷基，鹵素或三氟甲基單一或多取代；基團R9可以是苯環(huán)，該苯環(huán)可以被下列基團單一或多取代(C1-C6)-烷基或(C3-C7)-環(huán)烷基，(C1-C6)-烷氧基、(C1-C6)-烷磺酰氨基、硝基、氨基、羥基、氰基、鹵素或三氟甲基，還可以是乙氧羰基、氨基或其中烷基部分具有1-18個碳原子的烷氧羰基或烷氧磺?；?C1-C6)-烷醇酯化的羧基；或者R9可以是如下式3的吡啶環(huán)，或該吡啶環(huán)的N-氧化物， 通式3其中所述吡啶結構的2、3和4位可以非此即彼地被環(huán)碳鏈烴所鍵合，并被取代基R10和R11所取代；在通式3中基團R10和R11可以相同或不同，它們是(C1-C6)-烷基或(C3-C7)-環(huán)烷基，(C1-C6)-烷氧基、(C1-C6)-烷磺酰氨基、硝基、氨基、羥基、氰基、鹵素或三氟甲基，還可以是乙氧羰基、氨基或其中烷基部分具有1-18個碳原子的烷氧羰基或烷氧磺酰基；還可以是芳基亞甲氧基或取代芳基亞甲氧基，芳基為苯環(huán)或取代苯環(huán)、吡啶環(huán)或取代吡啶環(huán)、嘧啶環(huán)或取代嘧啶環(huán)、喹啉環(huán)或取代喹啉環(huán)，苯環(huán)、吡啶環(huán)、嘧啶環(huán)和喹啉環(huán)本身可以被相同或不同的取代基所取代，它們是(C1-C6)-烷基或(C3-C7)-環(huán)烷基，(C1-C6)-烷氧基、(C1-C6)-烷磺酰氨基、硝基、氨基、羥基、氰基、鹵素或三氟甲基，還可以是乙氧基羰基、氨基或其中烷基部分具有1-18個碳原子的烷氧羰基或烷氧磺酰基；如果R8是氫或甲基或芐基或芐氧羰基或叔丁氧羰基或乙酰基，R9還可以是下列基團-CH2COOH；-CH(CH3)-COOH；(CH3)2CH-(CH2)2-CH(COOH)-；CH3CH2-CH(CH3)-CH(COOH)-；HOCH2CH(COOH)-；苯基-CH2CH(COOH)-；(4-咪唑?；?-CH2-CH(COOH)-；HN＝C(NH2)-NH-(CH2)3-CH(COOH)-；H2N-(CH2)4-CH(COOH)-；H2N-CO-CH2-CH-(COOH)-；HOOC-(CH2)2-CH(COOH)-；基團R9還可以是天然或非天然氨基酸的?；?，例如α-甘氨酰基、α-肌氨?；?、α-丙氨?；?、α-亮氨?；?、α-異亮氨?；?、α-絲氨?；ⅵ?苯丙氨?；?、α-組氨?；?、α-脯氨?；?、α-精氨?；?、α-賴氨酰基、α-門冬氨酰基或α-谷氨?；渲懈鱾€氨基酸的氨基可以被保護或不被保護，氨基的保護基團可以是芐酯基和或叔丁氧羰基以及乙?；?，當R9是天門冬氨酰基或谷氨?；?，另一個未結合的羧基可以是游離形式，也可以是C1-C6烷醇酯形式，例如甲酯、乙酯和叔丁酯；基團R6還可以是烯丙基氨基羰基-2-甲基丙-1-基；當R9是氨基亞烷基，則R8和R9還可以與同其相連的氮原子一起組成如式4的哌嗪環(huán)和高哌嗪環(huán)， 通式4其中R12為烷基或苯環(huán)，所述苯環(huán)可以被下列基團單一或多取代(C1-C6)-烷基、(C3-C7)-環(huán)烷基、(C1-C6)-烷氧基、(C1-C6)-烷磺酰氨基、硝基、氨基、羥基、氰基、鹵素、三氟甲基或(C1-C6)-烷基氨基，R12還可以是二苯甲基或雙-對氟二苯甲基；X和Y可以相同也可以不同，可以為O或S。
根據通式1的吲哚-3-草酰胺衍生物優(yōu)選的是N-(吡啶-4-基)-1-(3，4-鄰甲二氧基芐基)吲哚-3-基草酰胺(YB-L12)。
N-(吡啶-4-基)-(1-反式肉桂酰基)吲哚-3-基草酰胺(YB-P12)。
根據通式1化合物其酸的加成鹽為無機酸的鹽或有機酸的鹽，所述無機酸為鹽酸、硫酸、磷酸；所述有機酸為乙酸、乳酸、丙二酸、馬來酸、富馬酸、葡萄糖酸、葡萄糖醛酸、檸檬酸、抗壞血酸、撲酸、甲磺酸、三氟乙酸、琥珀酸、2-羥基乙磺酸、煙酸或對甲苯磺酸。
本發(fā)明的藥物組合物，包含至少一種通式1的治療有效量化合物或前述生理上可接收的無機酸或有機酸形成的鹽，并結合一種或多種藥學上可接受的載體或稀釋劑或賦形劑，該藥物組合物的制劑形式為片劑、包衣片劑、膠囊、輸注用溶液或安瓿、栓劑、貼劑、可吸入的粉末制劑、混懸劑、乳膏和軟膏。
根據本發(fā)明的化合物或其酸加成鹽在用于制備抗腫瘤、抗病毒及抗炎藥物的應用。
根據本發(fā)明的化合物或其酸加成鹽在用于治療腫瘤、病毒感染和炎癥的應用。
本發(fā)明的藥物組合物的給藥方式可以是口服、胃腸外、靜脈內、皮下或吸入。
本發(fā)明化合物的制備方法記載于下列反應方案一和方案二的步驟中，所有這些化合物可以按照記載的方法制備或者按照類似方法制備。
以下敘述應用方案一制得通式1化合物。
方案一合成通式 第1步將單取代或多取代的吲哚衍生物I溶解于質子溶劑、非質子性極性溶劑或非極性有機溶劑中。所述的溶劑舉例異丙醇、四氫呋喃、二甲亞砜、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮、二氧六環(huán)、甲苯或二氯甲烷。在氮氣保護下，將上述溶液滴入到裝有堿的懸浮液的三頸瓶中，所述堿懸浮液是通過將1摩爾當量或過量的例如氫化鈉、氫氧化鉀、叔丁氧基鉀、吡啶或氨基鈉加入到相應的溶劑中制備的。然后加入化合物II，還可以加入催化劑例如銅，將混合物反應一段時間，例如反應30分鐘至12小時，并維持溫度為0-120℃、優(yōu)選30-80℃、更優(yōu)選50-65℃。反應完成后，將反應混合物加入到水中，并用乙醚、二氯甲烷、氯仿、甲基叔丁基醚或四氫呋喃等有機溶劑提取所得到的水溶液。將各種情況下得到的有機相合并，然后用無水硫酸鈉干燥。將有機相減壓濃縮，剩下的殘余物或者油狀殘余物經研磨結晶或者經重結晶、蒸餾或者用硅膠或氧化鋁柱色譜或快速柱色譜純化得到中間產物III。所用的洗脫劑例如丙酮∶乙醚＝8∶2(體積/體積)比例混合的混合液，或者丙酮∶乙醇＝9∶1(體積/體積)比例混合的混合液。
第2步在氮氣保護下，將按照上述第1步方法制備得到的中間產物III溶解于非質子或非極性有機溶劑中，溶劑舉例甲苯、二甲苯、二氯甲烷、乙醚、叔丁基甲基醚、四氫呋喃、二氧六環(huán)或氯仿；然后在氮氣保護下，將上述溶液加入到過量的草酰氯，溶解于非質子溶劑或非極性溶劑的溶液中，溶劑舉例甲苯、二甲苯、二氯甲烷、乙醚、叔丁基甲基醚、四氫呋喃、二氧六環(huán)或氯仿，在整個加入過程中將溫度維持在-5至20℃。然后將反應溶液加熱30分鐘至5小時，其中的加熱溫度優(yōu)選20-80℃、更優(yōu)選30-50℃，然后蒸除溶劑。將產物溶解于非質子溶劑例如四氫呋喃、二氧六環(huán)、乙醚和甲苯或非質子極性溶劑例如N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺或二甲亞砜中，將其冷卻，溫度范圍在-15℃至10℃、更優(yōu)選-5℃至0℃，加入伯胺或叔胺等酸清除劑溶于稀釋劑中的溶液?？捎玫南♂寗┛梢允撬臍溥秽⒍趿h(huán)、乙醚或甲苯。應用的酸清除劑為三乙胺、吡啶、吡啶、陽離子交換樹脂、碳酸鈉、碳酸鉀、氫氧化鉀的一種和反應中所用的過量伯胺或仲胺。再加入相應的胺進行反應，反應的發(fā)生溫度為0-120℃、優(yōu)選20-80℃、更優(yōu)選40-60℃。反應1-3小時后，將其室溫下靜置24小時，過濾，將濾液真空濃縮，將殘余物用有機溶劑重結晶，或者用硅膠柱色譜或氧化鋁色譜純化得到最終如通式1的化合物IV。所用的洗脫劑例如丙酮∶乙醚＝8∶2(體積/體積)比例混合的混合液或者丙酮∶乙醇＝9∶1(體積/體積)比例混合的混合液。
實施例1按照方案一中的通法，合成下面化合物N-(吡啶-4-基)-(1-反式肉桂?；?吲哚-3-基草酰胺(YB-P12)第1步制備1-反式肉桂?；胚嵊?4.0g(0.2mol)吲哚，溶于100mL二甲亞砜中的溶液加入到5.28g氫化鈉(0.22mol，50％)在200mL二甲亞砜中的懸濁液中，然后再加入38.6g(0.22mol)反式肉桂酰氯。將該溶液加熱至60℃，室溫下放置12小時，然后攪拌下傾入到700mL水中。再總共用300mL二氯甲烷分次萃取該混合液，用無水硫酸鈉干燥有機相，過濾，蒸除溶劑。用硅膠柱色譜純化殘余物(硅膠60-100目，洗脫劑丙酮/乙醚＝1∶9，v/v)得產品。產量38.6g(產率78％)MSm/z 248.3(M+H)第2步合成N-(吡啶-4-基)-(1-反式肉桂?；?吲哚-3-基草酰胺(YB-P12)在氮氣保護下，將9.9g(0.04mol)1-反式肉桂酰基吲哚溶解于50mL乙醚中，將此溶液于0℃滴入到4.50mL草酰氯溶解于50ml乙醚的溶液進行反應。滴加完畢后，將混合物回流加熱2小時，然后蒸除溶劑。將100mL四氫呋喃滴入到上述殘余物中，冷卻至0℃，此溫度下滴入9.32g(0.1mol)4-氨基吡啶溶解于400mL四氫呋喃的溶液。將該混合物回流加熱3小時，室溫下靜置過夜。抽濾除去4-氨基吡啶鹽酸鹽，濾餅用四氫呋喃洗滌，真空濃縮濾液，殘余物用乙酸乙酯重結晶得產品。
產量11.9g(產率75％)MSm/z 396.4(M+H)以下敘述應用方案二制得通式1化合物。
方案二
第1步將未取代或者在2、4、5、6和7位單取代或多取代的吲哚衍生物溶解于質子溶劑、非質子性極性溶劑或非極性有機溶劑中。所用的溶劑可以是例如上述用于溶解草酰氯所用的溶劑，然后在氮氣保護下，將上述溶液加入到過量的草酰氯溶解于非質子溶劑或非極性溶劑的溶液中，所述溶劑可以為甲苯、二甲苯、二氯甲烷、乙醚、叔丁基甲基醚、四氫呋喃、二氧六環(huán)或氯仿，在整個加入過程中將溫度維持在-5至20℃。然后將反應溶液加熱30分鐘至5小時，其中的加熱溫度優(yōu)選20-80℃、更優(yōu)選30-50℃，然后蒸除溶劑。將產物溶解于非質子溶劑中，例如四氫呋喃、二氧六環(huán)、乙醚或甲苯，或溶解于非質子極性溶劑中，例如N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺或二甲亞砜，將其冷卻-15℃至10℃、更優(yōu)選-5℃至0℃，加入伯胺或叔胺等酸清除劑溶于稀釋劑中的溶液?？捎玫南♂寗┛梢允撬臍溥秽⒍趿h(huán)、乙醚或甲苯。應用的酸清除劑為三乙胺、吡啶、吡啶、陽離子交換樹脂、碳酸鈉、碳酸鉀、氫氧化鉀和反應中所用的過量伯胺或仲胺。再加入相應的胺進行反應，反應的發(fā)生溫度為0-120℃、優(yōu)選20-80℃、更優(yōu)選40-60℃。反應1-3小時后，將其在室溫下靜置24小時，過濾，將濾液真空濃縮，將殘余物用有機溶劑重結晶，或者用硅膠柱色譜或氧化鋁色譜純化。所用的洗脫劑為例如丙酮∶乙醚＝8∶2(體積/體積)比例混合的混合液或者丙酮∶乙醇＝9∶1(體積/體積)比例混合的混合液。
第2步將第1步上述步驟得到的未取代或者在2、4、5、6和7位單取代或多取代的吲哚-3-基草酰胺衍生物溶解于質子溶劑、非質子性極性溶劑或非極性有機溶劑中。所述的溶劑舉例異丙醇、四氫呋喃、二甲亞砜、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮、二氧六環(huán)、甲苯或二氯甲烷。在氮氣保護下，將上述溶液滴入到裝有堿的懸浮液的三頸瓶中，所述堿懸浮液是通過將1摩爾當量或過量的例如氫化鈉、氫氧化鉀、叔丁氧基鉀、吡啶或氨基鈉加入到合適溶劑中制備的。然后加入例如所需要的烷基、芳烷基或雜芳烷基的鹵化物，還可以加入催化劑例如銅，將混合物反應一段時間，例如反應30分鐘至12小時，并維持溫度為0-120℃、優(yōu)選30-80℃、更優(yōu)選50-65℃。反應完成后，將反應混合物加入到水中，并用乙醚、二氯甲烷、氯仿、甲基叔丁基醚或四氫呋喃等有機溶劑提取所得到的水溶液。將各種情況下得到的有機相合并，然后用無水硫酸鈉干燥。將有機相減壓濃縮，剩下的殘余物或者油狀殘余物經研磨結晶或者經重結晶、蒸餾或者用硅膠或氧化鋁柱色譜或快速柱色譜純化。所用的洗脫劑為例如丙酮∶乙醚＝8∶2(體積/體積)比例混合的混合液或者丙酮∶乙醇＝9∶1(體積/體積)比例混合的混合液。
實施例2按照方案二中的通法，合成下面化合物N-(吡啶-4-基)-(1-反式肉桂?；?吲哚-3-基草酰胺(YB-P12)第1步制備N-(吡啶-4-基)-吲哚-3-基草酰胺以將未取代或者在2、4、5、6和7位單取代或多取代的吲哚衍生物為起始原料，參照方案一中的實例化合物制備第2步操作方法制得產物。
產率48％MSm/z 266.3(M+H)第2步合成N-(吡啶-4-基)-(1-反式肉桂?；?吲哚-3-基草酰胺(YB-P12)以上一步的產物為原料，參照方案一中的實例化合物制備第1步操作方法制得產物。
產率51％MSm/z 396.4(M+H)實施例3合成N-(吡啶-4-基)-1-(3，4-鄰甲二氧基芐基)吲哚-3-基草酰胺(YB-L12)第一步用0.2mol吲哚，溶于100mL二甲亞砜中的溶液加入到5.28g氫化鈉(0.22mol，50％)在200mL二甲亞砜中的懸濁液中。在65℃加熱1小時(方案一中沒有此條件)，然后冷卻，再加入0.22mol 3，4-鄰甲二氧基氯芐。將該溶液加熱至60℃，室溫下放置12小時，然后攪拌下傾入到700mL水中。再總共用300mL二氯甲烷分次萃取該混合液，用無水硫酸鈉干燥有機相，過濾，蒸除溶劑。用硅膠柱色譜純化殘余物(硅膠60-100目，洗脫劑丙酮/乙醚＝1∶9，v/v)得產品3，4-鄰甲二氧基芐基-吲哚。產量32.5g。
第二步在氮氣保護下，將0.04mol 3，4-鄰甲二氧基芐基-吲哚溶解于50mL乙醚中，將此溶液于0℃滴入到4.50mL草酰氯溶解于50ml乙醚的溶液進行反應。滴加完畢后，將混合物回流加熱2小時，然后蒸除溶劑。將100mL四氫呋喃滴入到上述殘余物中，冷卻至0℃，此溫度下滴入9.32g(0.1mol)4-氨基吡啶溶解于400mL四氫呋喃的溶液。將該混合物回流加熱3小時，室溫下靜置過夜。抽濾除去4-氨基吡啶鹽酸鹽，濾餅用四氫呋喃洗滌，真空濃縮濾液，殘余物用乙酸乙酯重結晶得產品N-(吡啶-4-基)-1-(3，4-鄰甲二氧基芐基)吲哚-3-基草酰胺。產量12.3g。
MSm/z 399(M+)實施例4-35按照方案一的方法制備通式5的吲哚-3-基草酰胺衍生物，

通式5通式5中R、R5、R6、R8的取代基如表1所示表1吲哚-3-基草酰胺衍生物結構及物理性質



藥理測試已證明本發(fā)明所涉及的化合物具有抗腫瘤、抗病毒及抗炎方面的活性?？鼓[瘤活性測試
體外抗腫瘤活性篩選將對數生長期細胞稀釋成1·104cell/ml，立即接種于96孔培養(yǎng)板，0.1ml/孔，然后在實驗孔中加入含不同濃度的培養(yǎng)基，每濃度平行三孔，對照組加等體積溶劑，置37℃ CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)96，然后離心(1000r/min，20min)，棄上清液，每孔加0.2ml新鮮配置的0.2mg/ml MTT的無血清培養(yǎng)基，37℃繼續(xù)培養(yǎng)4h，再離心，傾出血清后，0.2ml DMSO溶解MTT甲簪沉淀，用微型超聲震蕩器震蕩5min混勻，在MR700型酶標儀上測定570nm處的光密度，并計算抑制腫瘤細胞生長率。
表2吲哚-3-基草酰胺衍生物對Hela、KB腫瘤細胞的抑制作用(×10-6mol/L)

抗病毒活性1、抗MDCK細胞細胞毒性試驗MDCK細胞分別以每毫升4×105個接種于96孔培養(yǎng)板中，37℃、5％CO2培養(yǎng)24h，分別加入吲哚衍生物陽性對照化合物利巴韋林，每濃度接種3孔，每孔100μl。同時設正常細胞對照。置37℃、5％CO2培養(yǎng)5～7d。每隔24h在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞形態(tài)變化。用Reed-Muench法計算藥物半數中毒濃度(TD50)和最大無毒濃度(TD0)。
2、在MDCK細胞細胞培養(yǎng)內對A3病毒毒力的測定在MDCK細胞培養(yǎng)內對A3病毒毒力的測定MD(MDCK細胞以每毫升4×10個接種于96孔培養(yǎng)板中，37℃、5％CO2培養(yǎng)24h。在MDCK細胞中加入A3病毒，10倍稀釋成1×10-1×10-4共4個濃度，每個濃度設置3孔，每孔100μL同時設正常細胞對照。33℃5％CO2培養(yǎng)5～7d。每隔24h在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞形態(tài)變化。用Reed-Muench法計算病毒半數感染濃度(TCID50)。
3、在MDCK細胞培養(yǎng)內對A3的抑制試驗MDCK細胞分別以每毫升4×105個接種于96孔培養(yǎng)板中，37℃培養(yǎng)24～48 h至細胞單層，棄去培養(yǎng)液，分別加入體積比為1∶30的A3病毒液(每孔100L，33℃吸附3h)，棄去病毒液。分別加入對細胞的最大無毒濃度(TD0)的供試化合物和利巴韋林溶液，二倍稀釋7個濃度，每濃度設3孔，每孔100μLo陽性對照利巴韋林選用對細胞的最大無毒濃度(TD0)，二倍稀釋7個濃度，每濃度設3孔，每孔100μL。同時設病毒對照和正常細胞對照，37℃、5％CO2培養(yǎng)5～7d，每隔24h在倒置顯微鏡下觀察病毒細胞形態(tài)變化，至病毒對照細胞病變出現50％～100％的細胞形態(tài)變化時結束試驗。試驗重復3次，計算化合物半數有效濃度(IC50)測定結果見表3。
表3吲哚-3-基草酰胺衍生物對感染A3的抑制作用(μg/ml)

抗炎方面活性吲哚衍生物對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響取昆明種小鼠，隨機分成組，每組15只。將吲哚衍生物混懸于水中，灌胃給藥。劑量見表4；阿司匹林陽性對照組(實驗前取阿司匹林片，用蒸餾水配成質量濃度為20mg/ml的溶液)按劑量(體質量計)10ml/kg灌胃給藥；空白對照組灌服等容量蒸餾水。連續(xù)給藥7d.最后一次給藥后1h，于小鼠左耳涂二甲苯，30min后斷頭處死小鼠，剪下雙耳，用8mm打孔器于兩耳相同部位打下8mm圓片稱質量，計算腫脹度和腫脹抑制率，實驗結果見表4。
表4吲哚-3-基草酰胺衍生物對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響(n＝15)

權利要求
1.一種如通式1的具有多種生物活性的取代吲哚-3-草酰胺衍生物 通式1其中M＝0或1；N＝0或1；P＝0、1、2或3；其中基團數目m、n和p以及基團R1、R2、R4、R5、R6、R7、R8、R9、W、X和Y具有下列意義當m＝1，n＝p＝0時和當n＝0，m＝1，p≠0時以及當m＝0，n＝1，p≠0時，W為O或S，R1可以是如下通式2所示的取代苯環(huán) 通式2通式2中所述的取代苯環(huán)結構中，q為1或2，苯環(huán)的其他取代位置可以被相同或不同的取代基所取代，它們是(C1-C6)-烷基和(C3-C7)-環(huán)烷基，(C1-C6)-烷氧基、(C1-C6)-烷磺酰氨基、硝基、氨基、羥基、氰基、鹵素和三氟甲基，還可以是乙氧基羰基、氨基和其中烷基部分具有1-18個碳原子的烷氧羰基或烷氧磺?；?；當n＝0，m＝1，p≠0或當 m＝0，n＝1，p≠0時，W為O或S，R1可以是苯環(huán)或取代苯環(huán)、吡啶環(huán)或取代吡啶環(huán)、嘧啶環(huán)或取代嘧啶環(huán)、喹啉環(huán)或取代喹啉環(huán)，苯環(huán)、吡啶環(huán)、嘧啶環(huán)和喹啉環(huán)本身可以被相同或不同的取代基所取代，它們是(C1-C6)-烷基或(C3-C7)-環(huán)烷基，(C1-C6)-烷氧基、(C1-C6)-烷磺酰氨基、硝基、氨基、羥基、氰基、鹵素和三氟甲基，還可以是乙氧基羰基、氨基或其中烷基部分具有1-18個碳原子的烷氧羰基或烷氧磺?；?；通式1中基團R2、R4、R5、R6、R7可以相同也可以不同，可以是氫、(C1-C6)-烷基或(C3-C7)-環(huán)烷基，(C1-C6)-烷氧基、(C1-C6)-烷磺酰氨基、硝基、氨基、羥基、氰基、鹵素或三氟甲基，還可以是乙氧羰基、氨基或其中烷基部分具有1-18個碳原子的烷氧羰基或烷氧磺酰基；也可以是苯環(huán)或取代苯環(huán)、吡啶環(huán)或取代吡啶環(huán)、嘧啶環(huán)或取代嘧啶環(huán)、喹啉環(huán)或取代喹啉環(huán)，苯環(huán)、吡啶環(huán)、嘧啶環(huán)和喹啉環(huán)本身可以被相同或不同的取代基所取代，它們是(C1-C6)-烷基或(C3-C7)-環(huán)烷基，(C1-C6)-烷氧基、(C1-C6)-烷磺酰氨基、硝基、氨基、羥基、氰基、鹵素或三氟甲基，還可以是乙氧羰基、氨基或其中烷基部分具有1-18個碳原子的烷氧羰基或烷氧磺?；?；還可以是芳甲氧基或取代芳甲氧基，芳基為苯環(huán)或取代苯環(huán)、吡啶環(huán)或取代吡啶環(huán)、嘧啶環(huán)或取代嘧啶環(huán)、喹啉環(huán)或取代喹啉環(huán)，苯環(huán)、吡啶環(huán)、嘧啶環(huán)和喹啉環(huán)本身可以被相同或不同的取代基所取代，它們是(C1-C6)-烷基或(C3-C7)-環(huán)烷基，(C1-C6)-烷氧基、(C1-C6)-烷磺酰氨基、硝基、氨基、羥基、氰基、鹵素或三氟甲基，還可以是乙氧羰基、氨基或其中烷基部分具有1-18個碳原子的烷氧羰基或烷氧磺?；换鶊FR8＝氫、(C1-C6)-烷基，其中烷基可以是被苯環(huán)單一或多取代，該苯環(huán)本身可以被鹵素、(C1-C6)-烷基、(C3-C7)-環(huán)烷基，(C1-C6)-烷氧基、(C1-C6)-烷磺酰氨基、硝基、氨基、羥基、氰基、鹵素、芐氧羰基、叔丁氧羰基、芐基、乙?；蛉谆€可以是乙氧羰基、氨基或其中烷基部分具有1-18個碳原子的烷氧羰基或烷氧磺?；?、羧基、(C1-C6)-烷基醇酯化的羧基、芐氧基或芐基單或多取代，其中所述的芐基在苯環(huán)部分被(C1-C6)-烷基，鹵素或三氟甲基單一或多取代；基團R9可以是苯環(huán)，該苯環(huán)可以被下列基團單一或多取代(C1-C6)-烷基或(C3-C7)-環(huán)烷基，(C1-C6)-烷氧基、(C1-C6)-烷磺酰氨基、硝基、氨基、羥基、氰基、鹵素或三氟甲基，還可以是乙氧羰基、氨基或其中烷基部分具有1-18個碳原子的烷氧羰基或烷氧磺酰基或(C1-C6)-烷醇酯化的羧基；或者R9可以是如下式3的吡啶環(huán)，或該吡啶環(huán)的N-氧化物， 通式3其中所述吡啶結構的2、3和4位可以非此即彼地被環(huán)碳鏈烴所鍵合，并被取代基R10和R11所取代；在通式3中基團R10和R11可以相同或不同，它們是(C1-C6)-烷基或(C3-C7)-環(huán)烷基，(C1-C6)-烷氧基、(C1-C6)-烷磺酰氨基、硝基、氨基、羥基、氰基、鹵素或三氟甲基，還可以是乙氧羰基、氨基或其中烷基部分具有1-18個碳原子的烷氧羰基或烷氧磺?；?；還可以是芳基亞甲氧基或取代芳基亞甲氧基，芳基為苯環(huán)或取代苯環(huán)、吡啶環(huán)或取代吡啶環(huán)、嘧啶環(huán)或取代嘧啶環(huán)、喹啉環(huán)或取代喹啉環(huán)，苯環(huán)、吡啶環(huán)、嘧啶環(huán)和喹啉環(huán)本身可以被相同或不同的取代基所取代，它們是(C1-C6)-烷基或(C3-C7)-環(huán)烷基，(C1-C6)-烷氧基、(C1-C6)-烷磺酰氨基、硝基、氨基、羥基、氰基、鹵素或三氟甲基，還可以是乙氧基羰基、氨基或其中烷基部分具有1-18個碳原子的烷氧羰基或烷氧磺?；?；如果R8是氫或甲基或芐基或芐氧羰基或叔丁氧羰基或乙酰基，R9還可以是下列基團-CH2COOH；-CH(CH3)-COOH；(CH3)2CH-(CH2)2-CH(COOH)-；CH3CH2-CH(CH3)-CH(COOH)-；HOCH2CH(COOH)-；苯基-CH2CH(COOH)-；(4-咪唑?；?-CH2-CH(COOH)-；HN＝C(NH2)-NH-(CH2)3-CH(COOH)-；H2N-(CH2)4-CH(COOH)-；H2N-CO-CH2-CH-(COOH)-；HOOC-(CH2)2-CH(COOH)-；基團R9還可以是天然或非天然氨基酸的?；绂?甘氨?；?、α-肌氨?；ⅵ?丙氨?；ⅵ?亮氨?；?、α-異亮氨?；?、α-絲氨?；?、α-苯丙氨?；?、α-組氨?；?、α-脯氨?；?、α-精氨?；?、α-賴氨?；ⅵ?門冬氨?；颚?谷氨?；渲懈鱾€氨基酸的氨基可以被保護或不被保護，氨基的保護基團可以是芐酯基和或叔丁氧羰基以及乙?；擱9是天門冬氨?；蚬劝滨；?，另一個未結合的羧基可以是游離形式，也可以是C1-C6烷醇酯形式，例如甲酯、乙酯和叔丁酯；基團R9還可以是烯丙基氨基羰基-2-甲基丙-1-基；當R9是氨基亞烷基，則R8和R9還可以與同其相連的氮原子一起組成如式4的哌嗪環(huán)和高哌嗪環(huán)， 通式4其中R12為烷基或苯環(huán)，所述苯環(huán)可以被下列基團單一或多取代(C1-C6)-烷基、(C3-C7)-環(huán)烷基、(C1-C6)-烷氧基、(C1-C6)-烷磺酰氨基、硝基、氨基、羥基、氰基、鹵素、三氟甲基或(C1-C6)-烷基氨基，R12還可以是二苯甲基或雙-對氟二苯甲基；X和Y可以相同也可以不同，可以為O或S。
2.根據通式1的吲哚-3-草酰胺衍生物優(yōu)選的是N-(吡啶-4-基)-1-(3，4-鄰甲二氧基芐基)吲哚-3-基草酰胺(YB-L12)。
3.根據通式1的吲哚-3-草酰胺衍生物優(yōu)選的是N-(吡啶-4-基)-(1-反式肉桂?；?吲哚-3-基草酰胺(YB-P12)。
4.根據通式1化合物酸的加成鹽，為無機酸的鹽或有機酸的鹽，所述無機酸為鹽酸、硫酸、磷酸；所述有機酸為乙酸、乳酸、丙二酸、馬來酸、富馬酸、葡萄糖酸、葡萄糖醛酸、檸檬酸、抗壞血酸、撲酸、甲磺酸、三氟乙酸、琥珀酸、2-羥基乙磺酸、煙酸或對甲苯磺酸。
5.一種藥物組合物，包含至少一種通式1的治療有效量化合物或如權利要求5所述的生理上可接收的無機酸或有機酸形成的鹽，并結合一種或多種藥學上可接受的載體或稀釋劑或賦形劑，所述藥物組合物的制劑形式為片劑、包衣片劑、膠囊、輸注用溶液或安瓿、栓劑、貼劑、可吸入的粉末制劑、混懸劑、乳膏和軟膏。
6.權利要求1或2或3或4或5的化合物或其酸加成鹽在用于制備抗腫瘤、抗病毒及抗炎藥物的應用。
7.權利要求1或2或3或4或5的化合物或其酸加成鹽在用于治療腫瘤、病毒感染和炎癥的應用。
全文摘要
本發(fā)明涉及新的下式所示的取代吲哚－3－草酰胺衍生物及其在治療腫瘤、抗病毒及抗炎方面的應用。本發(fā)明還涉及其生理上可接受的無機酸或有機酸所成的鹽和它們可能的N－氧化物，以及上述物質的可藥用賦形劑和/或稀釋劑。本發(fā)明還涉及含有至少一種該結構式化合物或其鹽的上式化合物給藥劑型，其劑型為片劑、包衣片劑、膠囊、注射用溶液或安瓿、栓劑、貼劑、可吸入的粉末制劑、混懸劑、乳劑和軟膏。
文檔編號C07D417/00GK101016294SQ20071005691
公開日2007年8月15日 申請日期2007年3月13日 優(yōu)先權日2007年3月13日
發(fā)明者陳虹, 于鵬飛, 雷志勇, 程卯生, 曹波, 白淑芳 申請人:中國人民武裝警察部隊醫(yī)學院