專利名稱：一種從白菜葉片中提取黃酮的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于蔬菜營養(yǎng)技術(shù)的提取方法，具體涉及一種從白菜葉十片中提取黃酮的方法。
背景技術(shù)：
生物類黃酮是自然界中存在的酚類物質(zhì)，亦稱維生素P，常與維生素C伴存，屬植物次級代謝產(chǎn)物，是自然界藥用植物中主要活性成分之一。其生理功能主要有抗氧化作用、促進(jìn)胰島β細(xì)胞的恢復(fù)、降低血糖和血清膽固醇、改善糖耐量、對抗腎上腺素的升血糖作用、抑制醛糖還原酶、調(diào)節(jié)動物脂質(zhì)代謝、提高與生長有關(guān)的內(nèi)源激素水平，促進(jìn)肌肉蛋白沉積、加速動物生長、增強(qiáng)機(jī)體的非特異免疫功能和體液免疫功能、抗菌抗病毒。膳食中類黃酮主要來源于蔬菜、水果。大白菜是我國的主要蔬菜之一，2003年栽培面積達(dá)269.9萬hm2，占蔬菜總面積的15.75％，年產(chǎn)量10,197萬t，占蔬菜總產(chǎn)量的19.24％(全國農(nóng)業(yè)統(tǒng)計(jì)提要2004)。古代醫(yī)書《名醫(yī)別錄》中說，白菜能通利腸胃，除胸中煩，解酒毒。清代《本草綱目拾遺》記載說，白菜汁，甘溫?zé)o毒，利胃腸，除胸悶，利大小便，何中止嗽，冬季尤佳。因此有必要對白菜黃酮進(jìn)行研究。
黃酮類化合物極性較強(qiáng)，易溶于極性溶劑，如堿水，熱水，甲醇，乙醇等。植物中黃酮的提取方法比較成熟的主要有三種浸提法、水浴熱回流法、超聲波法。前兩種方法因提取雜質(zhì)多、提取時間長、提取液存放易腐敗變質(zhì)、后續(xù)過濾操作困難、收率較低等缺點(diǎn)，現(xiàn)已不常使用。超聲輔助法是利用超聲波的振動空化、機(jī)械粉碎、攪拌等作用，使植物組織在溶劑中瞬時產(chǎn)生的空化泡崩潰，而使組織中的細(xì)胞破裂，利于溶劑滲透到植物細(xì)胞內(nèi)部，使細(xì)胞中的成分進(jìn)入溶劑中，加速相互滲透、溶解，以增加黃酮類化合物在溶劑中的溶解。超聲萃取技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)是可以大幅度地提高有效成分的提取率，縮短提取時間，一般處理兒十分鐘即可，高效率，省溶劑。目前還有微波法、大孔樹脂吸附法等，這些方法雖有其獨(dú)特之處，但因?yàn)槠涫褂梅秶邢?，設(shè)備成本較高、工藝復(fù)雜、技術(shù)尚不成熟等原因而暫時沒有廣泛使用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種從白菜葉片中提取黃酮的方法。
為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明通過如下技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)一種白菜葉片中提取黃酮的方法，其特征在于，該方法以白菜葉為原料，經(jīng)干燥粉碎、乙醇溶液萃取，過濾、除雜、減壓回收、真空濃縮，得到黃酮提取物，具體包括下列步驟步驟一，將白菜葉片在120℃下殺青10min，于50℃～60℃下烘干，進(jìn)行超細(xì)粉碎，得到60目的白菜葉粉末；步驟二，將白菜葉粉末置于超聲提取器中，以80％質(zhì)量分?jǐn)?shù)的乙醇溶液作為提取溶劑，在50℃的溫度下，以頻率為60Hz的超聲波，提取2次，每次提取的料液比為1∶20，合并濾液；步驟三，將濾液過濾后得到提取液，以2-3倍的石油醚進(jìn)行萃取，除去提取液中的脂溶性雜質(zhì)；步驟四，除雜質(zhì)后的提取液減壓回收，真空濃縮后即可得到黃酮提取物。
上述除雜質(zhì)后的提取液在35℃下對提取液進(jìn)行減壓濃縮結(jié)晶，收集晶體，得到白菜類黃酮粗品。
本發(fā)明提供的從白菜中提取黃酮的方法的有益之處在于1)簡單該方法簡便易行，實(shí)驗(yàn)條件溫和而且容易控制。
2)省時提取時間短。
3)高效提取液中黃酮含量較高，即得率較高。
4)成本低廉由于反應(yīng)過程中沒有加入除乙醇外的其它有機(jī)溶劑，因此在提取過程中不會引入其它的雜質(zhì)，這就大大簡化了分離純化的步驟，降低了分離純化的成本；其選用的乙醇和石油醚均可循環(huán)利用。
5)環(huán)保用于提取的溶劑可以循環(huán)使用，所以提取過程沒有廢液排出，有利于環(huán)境保護(hù)。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明的從白菜葉片中提取黃酮的方法，將白菜葉片在120℃下殺青10min，于50℃～60℃下烘干，粉碎，將白菜葉粉末置于超聲提取器中，以80％的乙醇為提取液，料液比為(g/mL)1∶20，提取溫度50℃～60℃，在50℃的溫度下，以超聲波頻率60Hz，提取1小時，共提取兩次，每次提取的料液比為1∶20，合并濾液，將濾液過濾后得到提取液，以2-3倍的石油醚進(jìn)行萃取，除去提取液中的脂溶性雜質(zhì)；除雜質(zhì)后的提取液減壓回收，真空濃縮后得到黃酮提取物。
以蘆丁做標(biāo)準(zhǔn)物做出標(biāo)準(zhǔn)曲線，用紫外吸收光譜測定提取物中總黃酮的含量。
本發(fā)明提供的從白菜葉片中提取黃酮的方法，使用乙醇/水的混合溶劑，在一定溫度和一定的超聲波頻率下對白菜樣品進(jìn)行提取，可以高效率的獲得黃酮。
本發(fā)明的方法是根據(jù)相似相溶的原理進(jìn)行的。其過程的實(shí)質(zhì)是黃酮化合物從白菜細(xì)胞內(nèi)部向溶劑轉(zhuǎn)移的傳質(zhì)過程首先，溶劑分子從溶劑主體傳遞到白菜固體顆粒的表面。然后，白菜細(xì)胞由于超聲波作用破裂，溶劑滲透到植物細(xì)胞內(nèi)部。接下來，細(xì)胞中的成分由于超聲波的作用迅速進(jìn)入溶劑中。最后，黃酮化合物從白菜固體顆粒溶解于溶劑主體中。其中，黃酮化合物在所選溶劑中溶解度大小以及向溶劑擴(kuò)散的難易程度是影響提取率的兩個主要因素。而黃酮化合物在所選溶劑中的擴(kuò)散速度又取決于提取溫度、料液比、固體顆粒大小、超聲頻率等因素。
黃酮化合物通常存在于植物細(xì)胞內(nèi)，而細(xì)胞膜產(chǎn)生的擴(kuò)散阻力使得其浸捉速率比較小。對原料進(jìn)行諸如干燥或粉碎之類的預(yù)處理，有助于植物細(xì)胞膜的破裂，溶劑也容易進(jìn)入植物細(xì)胞內(nèi)部直接溶解黃酮，從而可以提高提取效率。
以下是發(fā)明人給出的具體實(shí)施例。
實(shí)施例1將剛進(jìn)入結(jié)球期的橙色葉球白菜采收后，稱重、清洗，將葉片攤開，于烘箱中110℃下殺青5min，50～60℃下烘干，粉碎至60目，準(zhǔn)確稱取粉碎后干燥至恒重的白菜樣品0.1g于三角瓶中，以20mL 80％乙醇為提取劑，超聲頻率為60Hz，提取1h，共提取兩次。合并濾液，過濾，以水定容至50mL，用2倍的石油醚脫脂，得到黃酮提取液，經(jīng)分光光度法測定，得黃酮含量為0.653mg，在35℃下對提取液進(jìn)行減壓濃縮結(jié)晶，收集晶體，此為黃酮粗提物，共得到0.671mg晶體。
實(shí)施例2將成熟期橙色葉球白菜采收后，稱重、清洗，將葉片攤開，于烘箱中110℃下殺青5min，50～60℃下烘干，粉碎至60目，準(zhǔn)確稱取粉碎后干燥至恒重的白菜樣品0.2g于三角瓶中，以40mL 80％乙醇為提取劑，超聲頻率為60Hz，提取1h，共提取兩次。合并濾液，過濾，以水定容至100mL，2倍的石油醚脫脂，得到黃酮提取液，經(jīng)分光光度法測定，得黃酮含量為0.244mg，在35℃下對提取液進(jìn)行減壓濃縮結(jié)晶，收集晶體，此為黃酮粗提物，共得到0.250mg晶體。
實(shí)施例3將成熟期普通結(jié)球白菜采收后，稱重、清洗，將葉片攤開，于烘箱中110℃下殺青5min，50～60℃下烘干，粉碎至60目，準(zhǔn)確稱取粉碎后干燥至恒重的白菜樣品0.5g于三角瓶中，以100mL 80％乙醇為提取劑，超聲頻率為60Hz，提取1h，共提取兩次。合并濾液，過濾，在35℃下對提取液進(jìn)行減壓濃縮至20mL左右，以50mL石油醚萃取脫脂，得到黃酮提取液，經(jīng)分光光度法測定，其黃酮含量為0.087mg，在35℃下對濃縮液繼續(xù)進(jìn)行減壓濃縮結(jié)晶，收集晶體，此為黃酮粗提物，共得到0.089mg晶體。
權(quán)利要求
1.一種從白菜葉片中提取黃酮的方法，其特征在于，該方法以白菜葉為原料，經(jīng)干燥粉碎、乙醇溶液萃取，過濾、除雜、減壓回收、真空濃縮，得到黃酮提取物，具體包括下列步驟步驟一，將白菜葉片在120℃下殺青10min，于50℃～60℃下烘干，進(jìn)行超細(xì)粉碎，得到60目的白菜葉粉末；步驟二，將白菜葉粉末置于超聲提取器中，以80％質(zhì)量分?jǐn)?shù)的乙醇溶液作為提取溶劑，在50℃的溫度下，以頻率為60Hz的超聲波，提取2次，每次提取的料液比為1∶20，合并濾液；步驟三，將濾液過濾后得到提取液，以2-3倍的石油醚進(jìn)行萃取，除去提取液中的脂溶性雜質(zhì)；步驟四，除雜質(zhì)后的提取液減壓回收，真空濃縮后即可得到黃酮提取物。
2.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述的除雜質(zhì)后的提取液在35℃下對提取液進(jìn)行減壓濃縮結(jié)晶，收集晶體，得到白菜類黃酮粗品。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種從白菜葉片中提取黃酮的方法，該方法以白菜葉片為原料，以80％乙醇為提取液，在50－60℃，超聲頻率為60Hz下提取兩次，合并濾液，過濾后，石油醚除雜，最后將濾液真空濃縮后得到黃酮提取物。本發(fā)明提供的方法簡便易行，試驗(yàn)條件溫和而且容易控制；提取時間短；提取液黃酮含量高；由于提取過程中沒有加入乙醇以外的其它有機(jī)溶劑，因此提取過程中不會引入其它雜質(zhì)，以石油醚除雜，以HPLC法檢測到除雜后色譜圖中去除了大部分雜峰，主要黃酮類物質(zhì)分離度和理論塔板數(shù)更高。用于提取和除雜的溶劑可以循環(huán)利用，所以沒有廢液排出，有利于環(huán)境保護(hù)。
文檔編號C07H17/00GK101016287SQ20071001740
公開日2007年8月15日 申請日期2007年2月12日 優(yōu)先權(quán)日2007年2月12日
發(fā)明者張魯剛, 李娟 , 張明科, 惠麥俠 申請人:西北農(nóng)林科技大學(xué)