專利名稱：甲狀旁腺素類似物的制作方法
此案是1996年7月3日提交的、中國申請?zhí)枮?00410005427.7、題目為“甲狀旁腺素類似物”的發(fā)明申請的分案申請。
背景技術(shù)：
甲狀旁腺素(“PTH”)是甲狀旁腺產(chǎn)生的一種多肽。這種激素成熟的循環(huán)形式包含84個氨基酸殘基。PTH的生物學(xué)活性可以由它的N末端肽片段(例如氨基酸殘基1到34)重現(xiàn)。甲狀旁腺素相關(guān)蛋白(“PTHrP”)是一種N末端與PTH同源的139到173個氨基酸的蛋白。PTHrP具有許多與PTH相同的生物學(xué)效應(yīng)，包括與一種共有的PTH/PTHrP受體結(jié)合。Tregear等，內(nèi)分泌學(xué)(Endocrinol.)，931349(1983)。已經(jīng)特征性描述了來自例如人，牛，大鼠，雞等多種不同來源的PTH肽。Nissenson等，受體(Receptor)，3193(1993)。
已表明PTH能改進骨重量和質(zhì)量。Dempster等，內(nèi)分泌綜述(EndocrineRev.)，14690(1993)；以及Riggs，美國醫(yī)學(xué)雜志(Amer.J.Med.)，91(Suppl.5B)37S(1991)。已觀察到在同時進行或不進行抗再吸收治療的情況下對骨質(zhì)疏松的男性或女性周期性施用PTH具有合成代謝效應(yīng)。Slovik等，J.BoneMiner.Res，1377(1986)；Reeve等，Br.Med.J.，301314(1990)；以及Hesch，R-D等，Colcif.Tissue Int′l，44176(1989)。
發(fā)明簡述一方面，發(fā)明涉及具有下列通式的PTH(1-34)的肽變體 其中A1是Ser，Ala，或Dap；A3是Ser，Thr，或Aib；A5是Leu，Nle，Ile，Cha，β-Nal，Trp，Pal，Phe或p-X-Phe，其中X是OH，一種鹵素，或CH3；A7是Leu，Nle，Ile，Cha，β-Nal，Trp，Pal，Phe，或p-X-Phe，其中X是OH，一種鹵素，或CH3；A8是Met，Nva，Leu，Val，Ile，Cha，或Nle；A11是Leu，Nle，Ile，Cha，β-Nal，Trp，Pal，Phe，或p-X-Phe，其中X是OH，一種鹵素，或CH3；A12是Gly或Aib；A15是Leu，Nle，Ile，Cha，β-Nal，Trp，Pal，Phe，或p-X-Phe，其中X是OH，一種鹵素，或CH3；A16是Ser，Asn，Ala，或Aib；A17是Ser，Thr，或Aib；A18是Met，Nva，Leu，Val，Ile，Nle，Cha，或Aib；A19是Glu或Aib；A21是Val，Cha，或Met；A23是Trp或Cha；A24是Leu或Cha；A27是Lys，Aib，Leu，hArg，Gln，或Cha；A28是Leu或Cha；A30是Asp或Lys；A31是Val，Nle，Cha，或缺失；A32是His或缺失；A33是Asn或缺失；A34是Phe，Tyr，Amp，Aib，或缺失；每一個R1和R2獨立地是H，C1-12烷基，C2-C12鏈烯基，C7-20苯烷基，C11-20萘烷基(napthylalkyl)，C1-12羥烷基，C2-12羥鏈烯基，C7-20羥苯烷基，或C11-20羥萘烷基；或R1和R2中的一個且只有一個是COE1，其中E1是C1-12烷基，C2-12鏈烯基，C7-20苯烷基，C11-20萘烷基，C1-12羥烷基，C2-12羥鏈烯基，C7-20羥-苯烷基，或C11-20羥萘烷基；以及R3是OH，NH2，C1-12烷氧基，或NH-Y-CH2-Z，其中Y是一種C1-12烴部分并且Z是H，OH，CO2H，或CONH2；條件是(i)A5，A7，A8，A11，A15，A18，A21，A23，A24，A27，A28，和A31中至少一個是Cha，或A3，A12，A16，A17，A18，A19和A34中至少一個是Aib；或(ii)至少A1是Dap，A7是β-Nal，Trp，Pal，Phe，或p-X-Phe，A15是β-Nal，Trp，Pal，Phe，或p-X-Phe，A27是hArg，或A31是Nle。
由上述通式包括的化合物的一個亞組是那些其中的A5，A7，A11，A15，A18，A21，A23，A24，A27，A28，和A31中至少一個是Cha的化合物，例如，A3是Ser；A5是Ile；A7是Leu或Cha；A8是Met，Nva，Leu，Val，Ile，或Nle；A11是Leu或Cha；A12是Gly；A15是Leu或Cha；A16是Asn或Aib；A17是Ser；A18是Met或Nle；A21是Val；A27是Lys，hArg，或Cha；A32是His；A31是Val，Nle，或Cha；A33是Asn；A34是Phe，Tyr，Amp，或Aib；R1是H；R2是H；以及R3是NH2；條件是A5，A7，A8，A11，A15，A18，A21，A23，A24，A27，A28，和A31中至少一個是Cha，或A3，A12，A16，A17，A18，A19和A34中至少一個是Aib。如果需要，A7和A11中至少一個可以是Cha；或A15，A23，A24，A27，A28，和A31中至少一個是Cha。
在另一個亞組中，A3，A12，A16，A17，A18，A19，和A34中至少一個是Aib。例如，A3是Ser或Aib；A5是Ile；A7是Leu或Cha；A8是Met，Nva，Leu，Val，Ile，或Nle；A11是Leu或Cha；A15是Leu或Cha；A16是Asn或Aib；A18是Met，Aib，或Nle；A21是Val；A27是Lys，Aib，Leu，hArg，或Cha；A31是Val，Nle，或Cha；A32是His；A33是Asn；A34是Phe，Tyr，Amp，或Aib；R1是H；R2是H；以及R3是NH2；條件是A5，A7，A8，A11，A15，A18，A21，A23，A24，A27，A28，和A31中至少有一個是Cha，或A3，A12，A16，A17，A18，A19，和A34中至少一個是Aib。如果需要，A7和A11中至少一個可以是Cha；或A15，A23，A24，A27，A28，和A31中至少一個是Cha。
在另一個亞組中，A5，A7，A8，A11，A15，A18，A21，A23，A24，A27，A28，和A31中至少一個是Cha，或A3，A12，A16，A17，A18，A19，和A34中至少一個是Aib。例如，A3是Ser或Aib；A5是Ile；A7是Leu或Cha；A8是Met，Nva，Leu，Val，Ile，或Nle；A11是Leu或Cha；A15是Leu或Cha；A16是Asn或Aib；A18是Met，Aib，或Nle；A21是Val；A27是Lys，Aib，Leu，hArg，或Cha；A31是Val，Nle，或Cha；A32是His；A33是Asn；A34是Phe，Tye，Amp，或Aib；R1是H；R2是H；以及R3是NH2。如果需要，A7和A11中至少一個是Cha并且A16，A19，和A34中至少一個是Aib；或者A24，A28，和A31中至少一個是Cha并且A16和A17中至少一個是Aib。
在另一個亞組中，至少一個A1是Dap，A7是β-Nal，Trp，Pal，Phe，或p-X-Phe，A13是β-Nal，Trp，Pal，Phe，或p-X-Phe。如果，A1是Ser，Gly，或Dap；A3是Ser或Aib；A8是Met，Nva，Leu，Val，Ile，或Nle；A16是Asn或Aib；A18是Met，Aib，或Nle；A21是Val；A27是Lys，Aib，Leu，hArg，或Cha；A31是Val，Nle，或Cha；A32是His；A33是Asn；A34是Phe，Tyr，Amp，或Aib；R1是H；R2是H；以及R3是NH2。
下面是上面通式包括的本發(fā)明肽的例子[Cha7]hPTH(1-34)NH2；[Cha11]hPTH(1-34)NH2；[Cha15]hPTH(1-34)NH2；[Cha7， 11]hPTH(1-34)NH2；[Cha7，11，Nle8，18，Tyr34]hPTH(1-34)NH2；[Cha23]hPTH(1-34)NH2；[Cha24]hPTH(1-34)NH2；[Nle8，18，Cha27]hPTH(1-34)NH2；[Cha28]hPTH(1-34)NH2；[Cha31]hPTH(1-34)NH2；[Cha27]hPTH(1-34)NH2；[Cha27，29]hPTH(1-34)NH2；[Cha28]bPTH(1-34)NH2；[Cha28]rPTH(1-34)NH2；[Cha24，28， 31]hPTH(1-34)NH2；[Aib16]hPTH(1-34)NH2；[Aib19]hPTH(1-34)NH2；[Aib34]hPTH(1-34)NH2；[Aib16，19]hPTH(1-34)NH2；[Aib16，19，34]bPTH(1-34)NH2；[Aib16，34]hPTH(1-34)NH2；[Aib19，34]hPTH(1-34)NH2；[Cha7，11，Nle8，18，Aib16，19，Tyr34]hPTH(1-34)NH2；[Cha7，11，Nle8，18，31，Aib16，19，Tyr34]hPTH(1-34)NH2；[Cha7，Aib16]hPTH(1-34)NH2；[Cha11，Aib16]hPTH(1-34)2；[Cha7，Aib34]hPTH(1-34)NH2；[Cha11，Aib34]hPTH(1-34)NH2；[Cha27，Aib16]hPTH(1-34)NH2；[Cha27，Aib34]hPTH(1-34)NH2；[Cha28，Aib16]hPTH(1-34)NH2；[Cha28，Aib34]hPTH(1-34)NH2；[Nle31]hPTH(1-34)NH2；[hArg27]hPTH(1-34)NH2；[Dap1，Nle8，18，Tyr34]hPTH(1-34)NH2；[Nle31]bPTH(1-34)NH2；[Nle31]rPTH(1-34)NH2；[hArg27]bPTH(1-34)NH2；[hArg27]rPTH(1-34)NH2；[Cha7，11，Aib19，Lys30]hPTH(1-34)NH2；[Aib12]hPTH(1-34)NH2；[Cha24，28，31，Lys30]hPTH(1-34)NH2；[Cha28，31]hPTH(1-34)NH2；[Cha7，11，Nle8，18，Aib34]hPTH(1-34)NH2；[Aib3]hPTH(1-34)NH2；[Cha8]hPTH(1-34)NH2；[Cha15]hPTH(1-34)NH2；[Cha7，11，Aib19]hPTH(1-34)NH2；[Cha7，11，Aib16]hPTH(1-34)NH2；[Aib17]hPTH(1-34)NH2；[Cha5]hPTH(1-34)NH2；[Cha7，11， 15]hPTH(1-34)NH2；[Cha7，11，Nle8，18，Aib19，Tyr34]hPTH(1-34)NH2；[Cha7，11，Nle8，18，Aib19，Lys30，Tyr34]hPTH(1-34)NH2；[Cha7，11，15]hPTH(1-34)NH2；[Aib17]hPTH(1-34)NH2；[Cha7，11，Leu27]hPTH(1-34)NH2；[Cha7，11，15，Leu27]hPTH(1-34)NH2；[Cha7，11，27]hPTH(1-34)NH2；[Cha7，11，15，27]hPTH(1-34)NH2；[Trp15]hPTH(1-34)NH2；[Nal15]hPTH(1-34)NH2；[Trp15，Cha23]hPTH(1-34)NH2；[Cha15，23]hPTH(1-34)NH2；[Phe7，11]hPTH(1-34)NH2；[Nal7， 11]hPTH(1-34)NH2；[Trp7，11]hPTH(1-34)NH2；[Phe7，11， 15]hPTH(1-34)NH2；[Nal7，11，15]hPTH(1-34)NH2；[Trp7，11， 15]hPTH(1-34)NH2；和[Tyr7，11，15]hPTH(1-34)NH2.
另一方面，本發(fā)明涉及由下式包括的肽或其藥學(xué)上可接受的鹽； 其中A1是Ala，Ser或Dap；A3是Ser，或Aib；A5是His，Ile，或Cha；A7是Leu，Cha，Nle，β-Nal，Trp，Pal，Phe，或p-X-Phe，其中X是OH，一種鹵素，或CH3；A8是Leu，Met，或Cha；A10是Asp或Asn；A11是Lys，Leu，Cha，Phe，或β-Nal；A12是Gly或Aib；A14是Ser或His；A15是Ile，或Cha ；A16是Gln或Aib；A17是Asp或Aib；A18是Leu，Aib，或Cha；
A19是Arg或Aib；A22是Phe，Glu，Aib，或Cha；A23是Phe，Leu，Lys，或Cha；A24是Leu，Lys，或Cha；A25是His，Aib，或Glu；A26是His，Aib，或Lys；A27是Leu，Lys，或Cha；A28是Ile，Leu，Lys，或Cha；A29是Ala，Glu，或Aib；A30是Glu，Cha，Aib，或Lys；A31是Ile，Leu，Cha，Lys，或缺失；A32是His或缺失；A33是Thr或缺失；A34是Ala或缺失；每一個R1和R2分別是H，C1-12烷基，C7-C20苯烷基，C11-20萘烷基，C1-12羥烷基，C2-12羥鏈烯基，C7-20羥苯烷基，或C11-20羥萘烷基；或R1和R2中一個且只有一個是COE1，其中E1是C1-12烷基，C2-12烷基，C2-12鏈烯基，C7-20苯烷基，C11-20萘烷基，C1-12羥烷基，C2-12羥鏈烯基，C7-20羥苯烷基，或C11-20羥萘烷基；以及R3是OH，NH2，C1-12烷氧基，或NH-Y-CH2-Z，其中Y是一個C1-12烴部分并且Z是H，OH，CO2H或CONH2；條件是(i)A5，A7，A8，A11，A15，A18，A22，A23，A24，A27，A28，A30和A31中至少一個是Cha，或A3，A12，A16，A17，A18，A19，A22，A25，A26，A29，A30，和A34中至少一個是Aib；或(ii)A23，A24，A27，A28，或A31中至少一個是Lys。在一個實施例中，A7和A11中至少一個是Cha。在另一個實施例中，A16或A19中至少一個是Aib。剛敘述的式的肽的特殊例子包括，但不限于，[Cha7]hPTHrP(1-34)NH2；[Cha11]hPTHrP(1-34)NH2；[Cha7， 11]hPTHrP(1-34)NH2；[Aib16，Tyr34hPTHrP(1-34)NH2；[Aib19]hPTHrP(1-34)NH2；[Aib16，19]hPTHrP(1-34)NH2；[Cha7， 11，Aib16hPTHrP(1-34)NH2；[Cha7，11，Aib19]hPTHrP(1-34)NH2；[Cha22，Leu23，28，31，Glu25，29，Lys26，30]hPTHrP(1-34)NH2；[Glu22，25，29，Leu23，28，31，Lys26，27，30]hPTHrP(1-34)NH2；[Cha22，23，Glu25，29，Leu28，31，Lys26，30]hPTHrP(1-34)NH2；[Glu22，25，Leu23，28，31，Aib29，Lys26，30]hPTHrP(1-34)NH2；[Glu22，25，29，Lys23，26，30，Leu28，31]hPTHrP(1-34)NH2；[Glu22，25，29，Leu23，28，31，Lys26，Cha30]hPTHrP(1-34)NH2；[Glu22，25，29，Leu23，28，31，Lys26，Aib30]hPTHrP(1-34)NH2；[Glu22，25，29，Leu23，31，Lys26，28，30]hPTHrP(1-34)NH2；[Cha22，23，24，27，28，31，Glu25，29，Lys26，30]hPTHrP(1-34)NH2；[Glu22，25，29，Cha23，24，28，31，Lys26，27， 30]hPTHrP(1-34)NH2；[Glu22，25，29，Cha23，24，27，31，Lys26， 28，30]hPTHrP(1-34)NH2；[Glu22，25，29，Lys23，26，30，Cha24， 27，28，31]hPTHrP(1-34)NH2；[Cha22，Leu23，28，31，Glu25，29，Lys26，27，30]hPTHrP(1-34)NH2；[Cha22，Leu23，31，Glu25，29，Lys26，28，30]hPTHrP(1-34)NH2；[Cha22，Lys23，26，30，Glu25， 29，Leu28，31]hPTHrP(1-34)NH2；[Cha22，Leu23，28，31，Glu25，Lys26，30，Aib29]hPTHrP(1-34)NH2；[Cha22，Leu23，28，31，Glu25，29，Lys26，Aib30]hPTHrP(1-34)NH2；[Glu22，25，Leu23， 28，31，Lys26，27，30，Aib29]hPTHrP(1-34)NH2；[Glu22，25，Lys23，26，30，Leu28，31，Aib29]hPTHrP(1-34)NH2；[Glu22，25，Leu23，31，Lys26，28，30，Aib29]hPTHrP(1-34)NH2；[Cha7，11，Glu22，25，29，Leu23，28，31，Lys26，30]hPTHrP(1-34)NH2；[Cha7，11，22，Leu23，28，31，Glu25，29，Lys26，30]hPTHrP(1-34)NH2；[Cha7，11，Glu22，25，29，Leu23，28，31，Lys26，27，30]hPTHrP(1-34)NH2；[Cha7，11，22，23，Glu25，29，Leu28，31，Lys26，30]hPTHrP(1-34)NH2；[Cha7，11，Glu22，25，29，Lys23， 26，30，Leu28，31]hPTHrP(1-34)NH2；[Cha7，11，Glu22，25，29，Leu23，31，Lys26，28，30]hPTHrP(1-34)NH2；[Cha7，11，Glu22， 25，Leu23，28，31，Aib29，Lys26，30]hPTHrP(1-34)NH2；[Cha7， 11，Glu22，25，29，Leu23，28，31，Lys26，Aib30]hPTHrP(1-34)NH2；[Cha15，Glu22，25，29，Leu23，28，31，Lys26， 30]hPTHrP(1-34)NH2；[Cha15，22，Leu23，28，31，Glu25，29，Lys26，30]hPTHrP(1-34)NH2；[Cha15，Glu22，25，29，Leu23，28， 31，Lys26，27，30]hPTHrP(1-34)NH2；[Cha15，22，23，Glu25，29，Leu28，31，Lys26，30]hPTHrP(1-34)NH2；[Cha15，Glu22，25，Leu23，28，31，Aib29，Lys26，30]hPTHrP(1-34)NH2；[Cha15，Glu22，25，29，Lys23，26，30，Leu28，31]hPTHrP(1-34)NH2；[Cha15，Glu22，25，29，Leu23，28，31，Lys26，Aib30]hPTHrP(1-34)NH2；[Cha15，Glu22，28，29，Leu23，31，Lys26，28， 30]hPTHrP(1-34)NH2；[Cha15，30，Glu22，25，29，Leu23，28，31，Lys26]hPTHrP(1-34)NH2；[Cha7，8，22，Leu23，28，31，Glu25，29，Lys26，30]hPTHrP(1-34)NH2；[Cha7，8，Glu22，25，29，Leu23，28，31，Lys26，27，30]hPTHrP(1-34)NH2；[Cha7，8，22，23，Glu25，29，Leu28，31，Lys26，30]hPTHrP (1-34)NH2；[Cha7，8，Glu22， 25，29，Leu23，28，31，Lys26，30]hPTHrP(1-34)NH2；[Cha7，8，Glu22，25，Leu23，28，31，Aib29，Lys26，30]hPTHrP(1-34)NH2；[Cha7，8，Glu22，25，29，Lys23，26，30，Leu28，31]hPTHrP(1-34)NH2；[Cha7，8，Glu22，25，29，Leu23，28，31，Lys26，Aib30]hPTHrP(1-34)NH2；[Cha7，8，Glu22，25，29，Leu23，31，Lys26， 28，30]hPTHrP(1-34)NH2；[Cha7，8，30，Glu22，25，29，Leu23，28，31，Lys26]hPTHrP(1-34)NH2；[Ser1，Ile5，Cha7，11，22，Met8，Asn10，His14，Leu23，28，31，Glu25，29，Lys26，30]hPTHrP(1-34)NH2；[Ser1，Ile5，Cha7，11，Met8，Asn10，His14，Glu22，25，29，Leu23，28，31，Lys26，27，30]hPTHrP(1-34)NH2；[Ser1，Ile5，Cha7，11，Met8，Asn10，His14，Glu22，25，29，Leu23，31，Lys26，28，30]hPTHrP(1-34)NH2；Ser1，Ile5，Cha7，11，Met8，Asn10，His14，Glu22，25，29，Lys23，26，30，Leu28，31]hPTHrP(1-34)NH2；[Ser1，Ile5，Cha7，11，Met8，Asn10，His14，Glu22，25，Leu23，28，31，Aib29，Lys26，30]hPTHrP(1-34)NH2；[Ser1，Ile5，Cha7，11，Met8，Asn10，His14，Glu22，25，29，Leu23，28，31，Lys26，Aib30]PTHrP(1-34)NH2；[Ser1，Ile5，Cha7，11，22，23，Met8，Asn10，His14，Glu25，29，Leu28，31，Lys26，30]hPTHrP(1-34)NH2；[Ser1，Ile5，Cha7，11，15，Met8，Asn10，His14]hPTHrP(1-34)NH2；[Ser1，Ile5，Met8，Asn10，Leu11，His14，Aib16]hPTHrP (1-34)NH2；[Ser1，Ile5，Met8，Asn10，Leu11，28，31，His14，Cha22，23，Glu25，29，Lys26，30]hPTHrP(1-34)NH2；[Ser1，Ile5，Cha7，11，Met8，Asn10，His14，Glu22，25，29，Leu23，28，31，Lys26，30]hPTHrP(1-34)NH2；[Ser1，Ile5，Met8，Asn10，His14，Cha15，Glu22， 25，29，Leu23，28，31，Lys26，30]hPTHrP (1-34)NH2；[Ser1，Ile5u，Cha7，8，Asn10，His14，Glu22，25，29，Leu23，28，31，Lys26，30]hPTHrP (1-34)NH2；[Glu22，25，29，Leu23，28，31，Lys24，26，30]hPTHrP(1-34)NH2；[Aib22，Leu23，28，31，Glu25，29，Lys26，30]hPTHrP(1-34)NH2；[Glu22，29，Leu23，28，31，Aib25，Lys26，30]hPTHrP(1-34)NH2；[Glu22，25，29，Leu23，28，31，Aib26，Lys30]hPTHrP (1-34)NH2；[Glu22，25，29，Leu23，28，Lys26，30，31]hPTHrP(1-34)NH2；[Ser1，Ile5，Met8，Asn10，Leu11，23，28，31，His14，Cha22，Glu25，29，Lys26，30]hPTHrP(1-34)NH2；[Ser1，Ile5，Met8，Asn10，Leu11，28，31，His14，Glu22，25，29，Lys23，26，30]PTHrP(1-34)NH2；[Ser1，Ile5，Met8，Asn10，Leu11，23，28，31，His14，Glu22，25，29，Lys26，27，30]hPTHrP(1-34)NH2；[Ser1，Ile5，Met8，Asn10，Leu11，23，31，His14，Glu22，25，29，Lys26，28，30]hPTHrP(1-34)NH2；[Ser1，Ile5，Met8，Asn10，Leu11，23，28，31，His14，Glu22，25，Aib29，Lys26，30]hPTHrP(1-34)NH2；[Ser1，Ile5，Met8，Asn10，Leu11，23，28，31，His14，Glu22，25，29，Lys26，Aib30]hPTHrP(1-34)NH2；or [Ser1，Ile5，Met8]hPTHrP(1-34)NH2.
除了N末端氨基酸以外，此公開中所有氨基酸簡稱(例如Ala或A1)代表-NH-CH(R)-CO-結(jié)構(gòu)，其中，R是氨基酸的側(cè)鏈(例如，CH3是Ala側(cè)鏈)。對于N末端氨基酸，簡稱代表＝N-CH(R)-CO-結(jié)構(gòu)，其中R是氨基酸側(cè)鏈。β-Nal，Nle，Dap，Cha，Nva，Amp，Pal，和Aib分別是下列α-氨基酸的簡稱β-(2-萘基)丙氨酸，正亮氨酸，α，β-二氨基丙酸，環(huán)己基丙氨酸，正纈氨酸，4-氨基-苯丙氨酸，3-吡啶丙氨酸，和α-氨基異丁酸。在上式中，羥烷基，羥苯烷基，和羥萘烷基可能含有1-4個羥基取代基。又及，COE1代表-C＝O·E1。-C＝O·E1的例子包括，但不限于，乙酰基和苯丙?；?br> 本發(fā)明的肽在此處也以另一種形式表示，例如，[Cha7，11]hPTH(1-34)NH2，具有在第二對括號中的天然序列的取代氨基酸(例如，在pHTH中以Cha7取代Leu7，并以Cha11取代Leu11)。簡稱hPTH代表人pTH，hPTHrP代表人PTHrP，rPTH代表大鼠PHT，以及bPTH代表牛PTH。括號中的數(shù)字是指肽中存在的氨基酸數(shù)目(例如，hPTH(1-34)是人PTH肽序列的1到34位氨基酸)。hPTH(1-34)，hPTHrP(1-34)，bPTH(1-34)，和rPTH(1-34)的序列列表于Nissenson等，受體(Receptor)，3193(1993)。PTH(1-34)NH2中的名稱“NH2”表明肽的C末端是氨化的。與此相反，PTH(1-34)具有游離酸C末端。
本發(fā)明的每一種肽都能夠刺激受治療者(換言之，一個哺乳動物例如病人)的骨生長。因而，當(dāng)單獨施用或與抗再吸收治療例如二磷酸鹽和降鈣素等共同使用時，在治療骨質(zhì)疏松和骨折中是有效的。
本發(fā)明的肽可以藥學(xué)可接受鹽的形式提供。此類鹽的例子包括，但不限于，那些與有機酸(例如，乙酸，乳酸，馬來酸，檸檬酸，蘋果酸，抗壞血酸，琥珀酸，苯甲酸，甲磺酸，甲苯磺酸，或pamoic acid)，無機酸(例如，鹽酸，硫酸，或磷酸)，以及聚酸(例如，單寧酸，羧甲基纖維素，聚乳酸，聚乙二醇酸，或聚乳酸-聚乙二醇酸共聚物)形成的鹽。
治療有效量的本發(fā)明的肽與一種藥學(xué)可接受載體物質(zhì)(例如，碳酸鎂，乳糖，或一種磷脂，用其使治療組合物能形成微團)一起形成一種用于對受治療者給藥(例如，口服，靜脈內(nèi)給藥，穿皮給藥，經(jīng)肺給藥，陰道給藥，皮下給藥，鼻內(nèi)給藥，離子電滲給藥，或氣管內(nèi)給藥)的治療組合物(例如，丸劑，片劑，膠囊，或液體)。用于口服的丸劑，片劑，或膠囊可用一種物質(zhì)包被，以保護活性成分在胃部一定時間內(nèi)不被胃酸或腸內(nèi)的酶破壞，足以使它在進入小腸時未被消化。治療組合物也可以生物可降解或生物不可降解緩釋制劑的形式用于皮下或肌肉內(nèi)給藥。參看，例如，美國專利3,773,919和4,767,628和PCT申請No.Wo 94/15587。也可使用可移植的或外接泵(例如，INFUSAIDTMpump)進行連續(xù)給藥。也可進行間歇的例如每天注射一次，或低劑量連續(xù)的，例如緩釋劑型給藥。
用于治療上述疾病或紊亂的本發(fā)明肽的劑量根據(jù)給藥方式，受治療者的年齡和體重，以及要治療的受治療者的健康狀況而變化，并且最終由護理醫(yī)生或獸醫(yī)決定。
在本發(fā)明范圍內(nèi)還考慮到把由上述通式包括的肽用于治療與骨生長缺陷等有關(guān)的疾病或紊亂，例如骨質(zhì)疏松或骨折。
本發(fā)明其它的特征和優(yōu)點將通過詳細的描述以及權(quán)利要求說明。
基于此處的描述，本發(fā)明可得以最充分程度地使用。要理解下面的特定實施例僅是為了說明，而不在任何意義上限制本公開的其余部分。此外，此處引用的所有出版物都以參考文獻并入本發(fā)明。
結(jié)構(gòu)已報道PTH(1-34)有兩個雙嗜性α螺旋結(jié)構(gòu)域。參看，例如，Barden等，生物化學(xué)(Biochem.)，327126(1992)。第一個α-螺旋在氨基酸殘基4到13之間形成，而第二個α-螺旋在氨基酸殘基21到29之間形成。本發(fā)明的一些肽含有在PTH(1-34)這兩個區(qū)域內(nèi)部或附近的一個或多個殘基的Cha取代，例如，第一個α-螺旋內(nèi)的Cha7和Cha11或者第二個α-螺旋內(nèi)的Cha27和Cha28。
本發(fā)明還包括具有Aib對鄰近α-螺旋的取代，例如，Aib16，Aib19，和Aib34；hArg27和Nle31，或Dpa對N-末端殘基取代的PTH(1-34)的變體。
合成本發(fā)明的肽可通過標準的固相合成法制備。參看，例如Stewart，J.M.等，固相合成(Solid Phase Synthesis)(Pierce Chemical Co.，2d ed.1984)。下面是對怎樣制備[Aib34]hPTH(1-34)NH2的描述。本發(fā)明的其它肽可以由本技術(shù)領(lǐng)域普通技術(shù)人員通過類似方式制備。
肽在Applied Biosystems(Foster City，CA)的改進以加速Boc-化學(xué)固相肽合成的430A型肽合成儀上合成。參看Schnoize，等，“國際肽和蛋白質(zhì)研究雜志”(Int.J.Peptide Protein Res.)，90180(1992)。使用了具有0.93mmol/g取代基的4-甲基二苯甲基胺(MBHA)樹脂(Peninsula，Belmont，CA)。使用具有下面的側(cè)鏈保護的Boc氨基酸(Bachem，CA，Torrance，CA；Nova Biochem.，La Jolla，CA)Boc-Arg(Tos)-OH，Boc-Asp(OcHxl)-OH，Boc-Asn(Xan)-OH，Boc-Glu(OcHxl)-OH，Boc-His(DNP)-OH，Boc-Asn-GH，Boc-Val-OH，Boc-Leu-OH，Boc-Ser-OH，Boc-Gly-OH，Boc-Met-OH，Boc-Gln-OH，Boc-Ile-OH，Boc-Lys(2ClZ)-OH，Boc-Ser(Bzl)-OH，和Boc-Trp(Fm)-OH。合成在0.14mmol的量進行。用100％TFA處理2×1分鐘去除Boc基團。Boc氨基酸(2.5mmol)在4ml DMF中用HBTU(2.0mmol)和DIEA(1.0ml)預(yù)活化并在不預(yù)先中和肽-樹脂TFA鹽條件下偶聯(lián)。偶聯(lián)時間是5分鐘，但Boc-Aib-OH和下面Boc-Asn(Xan)-OH殘基的情況除外，其偶聯(lián)時間是20分鐘。
肽鏈裝配結(jié)束之后，在DMF中用20％巰基乙醇/10％DIEA溶液處理樹脂2×30分鐘以去除組氨酸側(cè)鏈上的DNP基團。然后用100％TFA處理2×2分鐘去除N末端Boc基團。用DMF中的10％DIEA中和肽-樹脂(1×1分鐘)之后，用15％乙醇胺/15％水/70％DMF溶液處理2×30分鐘去除色氨酸側(cè)鏈上的甲?；?。用DMF和DCM洗脫部分去保護的肽-樹脂并減壓干燥。最后一步斷裂通過在含有1mL苯甲醚的10mLHF中于0℃下振蕩肽-樹脂75分鐘進行。用氮氣流除去HF。用乙醚(6×10mL)洗脫殘余物并用4NHOAc(6×10mL)提取。
使用反相VydacTMC18柱(Nest Group，Southborough，MA)用反相制備高壓液相色譜(HPLC)方法純化水提物中的肽混合物。以10ml/分鐘的流速采取線性梯度(130分鐘內(nèi)溶液B從10％到45％)洗脫柱(溶液A＝0.1％TFA水溶液；溶液B＝含0.1％TFA的乙腈)。收集級分并用檢測HPLC測定。把含有純產(chǎn)物的級分合并，并冷凍干燥。獲得62.3毫克白色固體。根據(jù)檢測HPLC測定的純度＞99％。電噴射質(zhì)譜儀檢測得到的分子量是4054.7(與計算分子量4054.7相符)。hPTH(1-34)NH2的合成和純化以與上述[Aib34]hPTH(1-34)NH2的合成相同的方式進行。被保護的氨基酸Boc-Cha-OH購于Bachem，CA。終產(chǎn)物純度＞98％，電噴射質(zhì)譜儀得到的分子量是4197.0(計算分子量是4196.9)。
上面所用簡稱的全名如下Boc代表叔丁氧羰基，HF代表氟化氫，F(xiàn)m代表甲酰基，Xan代表呫噸基，Bzl代表芐基，Tos代表甲苯磺酰基，DNP代表2，4-二硝基苯基，DMF代表二甲基甲酰胺，DCM代表二氯甲烷，HBTU代表2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸，DIEA代表二異丙基乙胺，HOAc代表乙酸，TFA代表三氟乙酸，2ClZ代表2-氯芐氧羰基以及OcHxl代表鄰-環(huán)己酯。
上述通式中的取代基R1和R2可以通過本技術(shù)領(lǐng)域熟知的標準方法連結(jié)到N末端氨基酸的游離胺。例如，烷基，諸如，C1-12烷基，可以使用還原烷基化方法連結(jié)。羥烷基，例如C1-12羥烷基，也可以在用叔丁酯保護自由羥基情況下使用還原烷基化方法連結(jié)。?；?，例如，COE1，可以通過把全部樹脂與二氯甲烷中3摩爾當(dāng)量的兩種游離酸和二異丙基碳二亞胺混合1小時，并以產(chǎn)生的樹脂按上述洗脫程序(a)至(f)步驟循環(huán)，將游離酸例如E1COOH偶聯(lián)到N末端氨基酸的游離胺實現(xiàn)結(jié)合。如果游離酸含有自由羥基，例如，對-羥苯丙酸，則偶聯(lián)應(yīng)當(dāng)在添加3摩爾當(dāng)量HOBT的情況下進行。
本發(fā)明的其它肽可以由本技術(shù)領(lǐng)域普通技術(shù)人員按照類似方法制備。
功能檢測A.與PTH受體的結(jié)合測定了本發(fā)明肽結(jié)合到SaOS-2(人骨肉瘤細胞)上PTH受體的能力。SaOS-2細胞(美國典型培養(yǎng)物保藏中心(American Type Culture Collection，Rockville，MD；ATCC # HTB 85)保存于于37℃下空氣中含5％二氧化碳的潮濕空氣中的補充有10％胎牛血清(FBS)和2mM谷氨酸的RPMI 1640培養(yǎng)基中(Sigma，St.Louis，MO)。每三或四天換一次培養(yǎng)基，每星期通過胰蛋白酶消化對細胞傳代培養(yǎng)。
將SaOS-2細胞保持四天直到鋪滿為止。用含5％FBS的RPMI 1640培養(yǎng)基替換原培養(yǎng)基，并在10-11M到10-4M之間不同濃度的競爭性發(fā)明肽存在下與10×104cpm單-125I-[Nle8，18，Tyr34(3-125I)]bPTH(1-34)NH2一起室溫培養(yǎng)2小時。使用冰冷PBS洗細胞四次并用0.1M氫氧化鈉裂解，細胞相聯(lián)的放射活性用閃爍計數(shù)儀計數(shù)。單-125I-[Nle8，18，Tyr34(3-125I)]bPTH(1-34)NH2按照Goldman，M.E.等，內(nèi)分泌學(xué)(Endocrinol.)，1231468(1988)所述進行合成。
對本發(fā)明的不同肽進行了結(jié)合檢測，并計算了每種肽的IC50值(單-125I-[Nle8，18，Tyr34(3-125I)]bPTH(1-34)NH2結(jié)合的半最大抑制)。
如表I所示，所有檢測的肽對SaOS-2細胞上的PTH受體具有高結(jié)合親合性。
B.刺激腺苷酸環(huán)化酶活性檢測了本發(fā)明肽誘導(dǎo)SaOS-2細胞生物學(xué)反應(yīng)的能力。更特定地，通過按Rodan等，“臨床研究雜志”(J.Clin.Invest.)721511(1983)和Goldman等，“內(nèi)分泌學(xué)”(Endocrinol.)1231468(1988)所述檢測cAMP(腺嘌呤核苷3′，5′-單磷酸)的合成水平測定了對腺苷酸環(huán)化酶的刺激。在24孔板上新鮮培養(yǎng)基中鋪滿的SAOS-2細胞與0.5μCi[3H]腺嘌呤(26.9Ci/mmol，New England Nuclear，Boston，MA)一起37℃溫育2小時，并用Hank′s平衡鹽溶液(Gibco，Gaithersburg，MD)洗兩次。細胞在新鮮培養(yǎng)基中用1mM IBMX[異丁甲基-黃嘌呤，Sigma，St，Louis，MO]處理15分鐘，并將發(fā)明的肽加到培養(yǎng)基中溫育5分鐘。加入1.2M三氯乙酸(TCA)(Sigma，St.Louis，MO)終止反應(yīng)，隨后用4N氫氧化鉀中和樣品。用雙柱色譜方法(Salmon，等，1974，分析生物化學(xué)(Anal.Biochem.)58，541)分離cAMP。在閃爍計數(shù)儀中(液體閃爍計數(shù)儀2200 CA，PACKARD，Downers Grove，IL)計數(shù)放射活性。
分別計算供試肽的EC50值(腺苷酸環(huán)化酶半最大刺激)并顯示于表1。所有供試肽都是對腺苷酸環(huán)化酶活性的有效刺激物，其表現(xiàn)為作為次于成骨細胞增殖(例如，骨生長)的信號的生化途徑。
表1
注Kd(μM)解離常數(shù)；EC50(nM)半最大刺激濃度。
其它實施方案必須了解當(dāng)與其詳細描述結(jié)合描述本發(fā)明時，前面的描述是為了說明而不是限制發(fā)明的范圍，它由附上的權(quán)利要求的范圍確定。其它方面，優(yōu)點以及改進都在權(quán)利要求中。
權(quán)利要求
1.下式的一種肽或其藥學(xué)上可接受的鹽 A16-A17-A18-A19-Arg-A21-Glu-A23-A24-Arg-Lys-A27-A28-Gln-A30-A31-A32-A33-A34-R3，其中A1是Ser，Ala，或Dap；A3是Ser，Thr，或Aib；A5是Leu，Nle，Ile，Cha，β-Nal，Trp，Pal，Phe或p-X-Phe，其中X是OH，一種鹵素，或CH3；A7是Leu，Nle，Ile，Cha，β-Nal，Trp，Pal，Phe，或p-X-Phe，其中X是OH，一種鹵素，或CH3；A8是Met，Nva，Leu，Val，Ile，Cha，或Nle；A11是Leu，Nle，Ile，Cha，β-Nal，Trp，Pal，Phe，或p-X-Phe，其中X是OH，一種鹵素，或CH3；A12是Gly或Aib；A15是Leu，Nle，Ile，Cha，β-Nal，Trp，Pal，Phe，或p-X-Phe，其中X是OH，一種鹵素，或CH3；A16是Ser，Asn，Ala，或Aib；A17是Ser，Thr，或Aib；A18是Met，Nva，Leu，Val，Ile，Nle，Cha，或Aib；A19是Glu或Aib；A21是Val，Cha，或Met；A23是Trp或Cha；A24是Leu或Cha；A27是Lys，Aib，Leu，hArg，Gln，或Cba；A28是Leu或Cha；A30是Asp或Lys；A31是Val，Nle，Cha，或缺失；A32是His或缺失；A33是Asn或缺失；A34是Phe，Tyr，Amp，Aib，或缺失；每一個R1和R2獨立地是H，C1-12烷基，C2-C12鏈烯基，C7-20苯烷基，C11-20萘烷基，C1-12羥烷基，C2-12羥鏈烯基，C7-20羥苯烷基，或C11-20羥萘烷基；或R1和R2中的一個且只有一個是COE1，其中E1是C1 -12烷基，C2-12鏈烯基，C7-20苯烷基，C11-20萘烷基，C1-12羥烷基，C2 -12羥鏈烯基，C7-20羥-苯烷基，或C11-20羥萘烷基；以及R3是OH，NH2，C1-12烷氧基，或NH-Y-CH2-Z其中Y是一個C1-12烴部分并且Z是H，OH，CO2H，或CONH2；條件是A5，A7，A8，A11，A15，A18，A21，A23，A24，A27，A28，和A31中至少一個是Cha，或A3，A12，A16，A17，A18，A19和A34中至少一個是Aib。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的肽或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中A7，A11，A15，A23，A24，A27，A28，和A31中至少一個是Cha。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的肽或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中A3是Ser；A5是Ile；A7是Leu；或Cha；A8是Met，Nva，Leu，Val，Ile，或Nle；A11是Leu或Cha；A12是Gly；A15是Leu或Cha；A16是Asn或Aib；A17是Ser；A18是Met，或Nle；A21是Val；A27是Lys，hArg，或Cha；A32是His；A31是Val，Nle，或Cha；A33是Asn；A34是Phe，Tyr，Amp，或Aib；R1是H；R2是H；以及R3是NH2。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的肽或其藥學(xué)可接受的鹽，其中A7和A11中至少一個是Cha。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的肽或其藥學(xué)可接受鹽，其中所述肽是[Cha7， 11]hPTH(1-34)NH2，[Cha7，11，Nle8，18，Tyr34]hPTH(1-34)NH2；[Cha11]hPTH(1-34)NH2；[Cha7，11，15]hPTH(1-34)NH2；或[Cha7]hPTH(1-34)NH2。
6.根據(jù)權(quán)利要求3的肽或其藥學(xué)可接受鹽，其中A15，A23，A24，A27，A28，和A31中至少一個是Cha。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的肽或其藥學(xué)可接受鹽，其中所述肽是[Cha23]hPTH(1-34)NH2，[Cha24]hPTH(1-34)NH2，[Nle8，18，Cha27]hPTH(1-34)NH2，[Cha28]hPTH(1-34)NH2，[Cha31]hPTH(1-34)NH2，[Cha24，28，31]hPTH(1-34)NH2；[Cha24，28，31，Lys30]hPTH(1-34)NH2；[Cha28，31]hPTH(1-34)NH2；或[Cha15]hPTH(1-34)NH2。
8.根據(jù)權(quán)利要求1的肽或其藥學(xué)可接受鹽，其中A3，A12，A16，A17，A18，A19，和A34中至少一個是Aib。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的肽或其藥學(xué)可接受鹽，其中A3是Ser或Aib；A5是Ile；A7是Leu或Cha；A8是Met，Nva，Leu，Val，Ile，或Nle；A11是Leu或Cha；A15是Leu或Cha；A16是Asn或Aib；A18是Met，Aib，或Nle；A21是Val；A27是Lys，Aib，Leu，hArg，或Cha；A31是Val，Nle，或Cha；A32是His；A33是Asn；A34是Phe，Tyr，Amp，或Aib；R1是H；R2是H；以及R3是NH2。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的肽或其藥學(xué)可接受鹽，其中A3，A12，A16，A17，A19，和A34中至少一個是Aib。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的肽或其藥學(xué)可接受鹽，其中所述肽是[Aib16]hPTH(1-34)NH2，[Aib19]hPTH(1-34)NH2，[Aib34]hPTH(1-34)NH2；[Aib16，19]hPTH(1-34)NH2；[Aib3]hPTH(1-34)NH2；[Aib17]hPTH(1-34)NH2；或[Aib12]hPTH(1-34)NH2。
12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽或其藥學(xué)可接受鹽，其中A7，A11，A15，A23，A24，A27，A28，和A31中至少一個是Cha并且A3，A12，A16，A17，A18，A19，和A34中至少一個是Aib。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的肽或其藥學(xué)可接受鹽，其中A3是Ser或Aib；A5是Ile；A7是Leu或Cha；A8是Met，Nva，Leu，Val，Ile，或Nle；A11是Leu或Cha；A15是Leu或Cha；A16是Asn或Aib；A18是Met，Aib，或Nle；A21是Val；A27是Lys，Aib，Leu，hArg，或Cha；A31是Val，Nle，或Cha；A32是His；A33是Asn；A34是Phe，Tye，Amp，或Aib；R1是H；R2是H；以及R3是NH2。
14.根據(jù)權(quán)利要求13的肽或其藥學(xué)可接受鹽，其中A7和A11中至少一個是Cha并且A16，A19，和A34中至少一個是Aib。
15.根據(jù)權(quán)利要求14的肽，其中所述肽是[Cha7，11，Nle8，18，Aib16，19，Tyr34]hPTH(1-34)NH2，[Cha7，11，Nle8，18，31，Aib16，19，Tyr34]hPTH(1-34)NH2；[Cha7，11，Aib19]hPTH(1-34)NH2；[Cha7，11，Aib16]hPTH(1-34)NH2；[Cha7，11，Nle8，18，Aib34]hPTH(1-34)NH2；或[Cha7，11，Aib19，Lys30]hPTH(1-34)NH2。
16.根據(jù)權(quán)利要求13的肽或其藥學(xué)可接受鹽，其中A24，A28，和A31中至少一個是Cha并且A16和A17中至少一個是Aib。
17.根據(jù)權(quán)利要求16的肽或其藥學(xué)可接受鹽，其中所述肽是[Cha28，Nle8， 18，Aib16，19，Tyr34]hPTH(1-34)NH2，或[Cha28，Aib16，19]PTH(1-34)NH2。
18.下式的肽或其藥學(xué)可接受鹽 A16-A17-A18-A19-Arg-A21-Glu-A23-A24-Arg-Lys-A27-A28-Gln-A30-A31-A32-A33-A34-R3，其中A3是Ser，Thr，或Aib；A5是Leu，Nle，Ile，Cha，β-Nal，Trp，Pal，Phe或p-X-Phe，其中X是OH，一種鹵素，或CH3；A7是Leu，Ile，Nle，Cha，β-Nal，Trp，Pal，Phe，或p-X-Phe，其中X是H，OH，一種鹵素，或CH3；A8是Met，Nva，Leu，Val，Ile，Cha，或Nle；A11是Leu，Nle，Ile，Cha，β-Nal，Trp，Pal，Phe，或p-X-Phe，其中X是OH，一種鹵素，或CH3；A12是Gly或Aib；A15是Leu，Nle，Ile，Cha，β-Nal，Trp，Pal，Phe，或p-X-Phe，其中X是OH，一種鹵素，或CH3；A16是Ser，Asn，Ala，或Aib；A17是Ser，Thr，或Aib；A18是Met，Nva，Leu，Val，Ile，Nle，Cha，或Aib；A19是Glu或Aib；A21是Val，Cha，或Met；A23是Trp或Cha；A24是Leu或Cha；A27是Lys，Aib，Leu，hArg，Gln，Cha；A28是Leu或Cha；A30是Asp或Lys；A31是Val，Nle，Cha，或缺失；A32是His或缺失；A33是Asn或缺失；A34是Phe，Tyr，Amp，Aib，或缺失；每一個R1和R2獨立地是H，C1-12烷基，C2-C12鏈烯基，C7-20苯烷基，C11-20萘烷基，C1-12羥烷基，C2-12羥鏈烯基，C7-20羥苯烷基，或C11-20羥萘烷基；或R1和R2中的一個且只有一個是COE1，其中E1是C1 -12烷基，C2-12鏈烯基，C7-20苯烷基，C11-20萘烷基，C1-12羥烷基，C2 -12羥鏈烯基，C7-20羥-苯烷基，或C11-20羥萘烷基；R3是OH，NH2，C1-12烷氧基，或NH-Y-CH2-Z，其中Y是一個C1-12烴部分并且Z是H，OH，CO2H，或CONH2；條件是至少A1是Dap，A7是β-Nal，Trp，Pal，Phe，或p-X-Phe；P15是β-Nal，Trp，Pal，Phe，或p-X-Phe，A27是hArg，或A31是Nle。
19.根據(jù)權(quán)利要求18的肽或其藥學(xué)可接受鹽，其中A1是Ser，Gly，或Dap；A3是Ser或Aib；A8是Met，Nva，Leu，Val，Ile，或Nle；A16是Asn或Aib；A18是Met，Aib或Nle；A21是Val；A27是Lys，Aib，Leu，hArg，或Cha；A31是Val，Nle，或Cha；A32是His；A33是Asn；A34是Phe，Tyr，Amp，或Aib；R1是H；R2是H；以及R3是NH2。
20.根據(jù)權(quán)利要求19的肽或其藥學(xué)可接受鹽，其中所述肽是[Nle31]hPTH(1-34)NH2，[hArg27]hPTH(1-34)NH2，或[Dap1，Nle8，18，Tyr34]hPTH(1-34)NH2。
21.有下面分子式的肽或其藥學(xué)可接受鹽 A16-A17-A18-A19-Arg-Arg-A22-A23-A24-A25-A26-A27-A28-A29-A30-A31-A32-A33-A34-R3其中A1是Ala，Ser或Dap；A3是Ser，或Aib；A5是His，Ile，或Cha；A7是Leu，Cha，Nle，β-Nal，Trp，Pal，Phe，或p-X-Phe，其中X是OH，一種鹵素，或CH3；A8是Leu，Met，或Cha；A10是Asp或Asn；A11是Lys，Leu，Cha，Phe，或β-Nal；A12是Gly或Aib；A14是Ser或His；A15是Ile，或Cha；A16是Gln或Aib；A17是Asp或Aib；A18是Leu，Aib，或Cha；A19是Arg或Aib；A22是Phe，Glu，Aib，或Cha；A23是Phe，Leu，Lys，或Cha；A24是Leu，Lys，或Cha；A25是His，Aib，或Glu；A26是His，Aib，或Lys；A27是Leu，Lys，或Cha；A28是Ile，Leu，Lys，或Cha；A29是Ala，Glu，或Aib；A30是Glu，Cha，Aib，或Lys；A31是Ile，Leu，Cha，Lys，或缺失；A32是His或缺失；A33是Thr或缺失；A34是Ala缺失；每一個R1和R2獨立地是H，C1-12烷基，C7-20苯烷基，C11-20萘烷基，C1-12羥烷基，C2-12羥鏈烯基，C7-20羥苯烷基，或C11-20羥萘烷基；或R1和R2中一個且只有一個是COE1，其中E1是C1-12烷基，C2-12烷基，C2-12鏈烯基，C7-20苯烷基，C11-20萘烷基，C1-12羥烷基，C2-12羥鏈烯基，C7-20羥苯烷基，或C11-20羥萘烷基；以及R3是OH，NH2，C1-12烷氧基，或NH-Y-CH2-Z，其中Y是一個C1-12烴部分并且Z是H，OH，CO2H或CONH2；條件是A5，A7，A8，A11，A15，A18，A22，A23，A24，A27，A28，A30或A31中至少一個是Cha，或A3，A12，A16，A17，A18，A19，A22，A25，A26，A29，A30，或A34中至少一個是Aib。
22.根據(jù)權(quán)利要求21的肽或其藥學(xué)可接受鹽，其中A22是Phe或Cha；A23是Phe或Cha；A25是His；A26是His；A27是Leu或Cha；A28是Ile或Cha；A29是Ala；A30是Glu或Lys；A31是Ile或Cha；A32是His；A33是Thr；以及A34是Ala。
23.根據(jù)權(quán)利要求22的肽或其藥學(xué)可接受鹽，其中A7和A11中至少一個是Cha。
24.根據(jù)權(quán)利要求22的肽或其藥學(xué)可接受鹽，其中A16或A19中至少一個是Aib。
25.根據(jù)權(quán)利要求21的肽或其藥學(xué)可接受鹽，其中A22是Glu，Aib或Cha；A23是Leu，Lys，或Cha；A25是Aib或Glu；A26是Aib或Lys；A28是Leu，Lys，或Cha；A29是Glu或Aib；A30是Cha，Aib或Lys；A31是Ieu，Cha或Lys；A32是His；A33是Thr；以及A34是Ala。
26.根據(jù)權(quán)利要求25的肽或其藥學(xué)可接受鹽，其中A7和A11中至少一個是Cha。
27.根據(jù)權(quán)利要求25的肽或其藥學(xué)可接受鹽，其中A16或A19中至少一個是Aib。
28.下式的肽或其藥學(xué)可接受鹽 A16-A17-A18-A19-Arg-Arg-A22-A23-A24-A25-A26-A27-A28-其中A29-A30-A31-A32-A33-A34-R3A1是Ala，Ser或Dap；A3是Ser或Aib；A5是His，Ile，或Cha；A7是Leu，Cha，Nle，β-Nal，Trp，Pal，Phe，或p-X-Phe，其中X是OH，一種鹵素，或CH3；A8是Leu，Met，或Cha；A10是Asp或Asn；A11是Lys，Leu，Cha，Phe，或β-Nal；A12是Gly或Aib；A14是Ser或His；A15是Ile，或Cha；A16是Gln或Aib；A17是Asp或Aib；A18是Leu，Aib，或Cha；A19是Arg或Aib；A22是Phe，Glu，Aib，或Cha；A23是Phe，Leu，Lys，或Cha；A24是Leu，Lys，或Cha；A25是His，Aib，或Glu；A26是His，Aib，或Lys；A27是Leu，Lys，或Cha；A28是Ile，Leu，Lys，或Cha；A29是Ala，Glu，或Aib；A30是Glu，Cha，Aib，或Lys；A31是Ile，Leu，Cha，Lys，或缺失；A32是His或缺失；A33是Thr或缺失；A34是Ala或缺失；每一個R1和R2獨立地是H，C1-12烷基，C7-20苯烷基，C11-20萘烷基，C1-12羥烷基，C2-12羥鏈烯基，C7-20羥苯烷基，或C11-20羥萘烷基；或R1和R2中一個且只有一個是COE1，其中E1是C1-12烷基，C2-12烷基，C2-12鏈烯基，C7-20苯烷基，C11-20萘烷基，C1-12羥烷基，C2-12羥鏈烯基，C7-20羥苯烷基，或C11-20羥萘烷基；以及R3是OH，NH2，C1-12烷氧基，或NH-Y-CH2-Z，其中Y是一個C1-12烴部分并且Z是H，OH，CO2H或CONH2；條件是A23，A24，A27，A28或A31中至少一個是Lys。
29.根據(jù)權(quán)利要求28的肽或其藥學(xué)可接受鹽，其中A22是Glu，Aib，或Cha；A23是Leu，Lys，或Cha；A25是Aib或Glu；A26是Aib或Lys；A28是Leu，Lys，或Cha；A29是Glu或Aib；A30是Cha，Aib，或Lys；A31是Leu，Cha，或Lys；A32是His；A33是Thr；以及A34是Ala。
30.根據(jù)權(quán)利要求29的肽或其藥學(xué)可接受鹽，其中A7和A11中至少一個是Cha；或其藥學(xué)可接受鹽。
31.根據(jù)權(quán)利要求29的肽或其藥學(xué)可接受鹽，其中A16或A19中至少一個是Aib。
全文摘要
甲狀旁腺素片段(1－34)的肽變體，其中在位于7，11，23，24，27，28和31位的氨基酸殘基中至少有一個是環(huán)己基丙氨酸，或在位于3，16，17，18，19和34位的氨基酸殘基中至少有一個是α－氨基異丁酸；或者，至少在1位的氨基酸殘基是α，β－二氨基丙酸，27位的氨基酸殘基是高精氨酸，或31位的氨基酸殘基是正亮氨酸。
文檔編號C07K14/435GK1916025SQ20061010011
公開日2007年2月21日 申請日期1996年7月3日 優(yōu)先權(quán)日1995年7月13日
發(fā)明者董正欣 申請人:提議和科學(xué)執(zhí)行公司