專(zhuān)利名稱(chēng)：作為抗腫瘤劑的鉑復(fù)合物與生物化學(xué)調(diào)節(jié)劑的組合的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明的背景本申請(qǐng)要求提交于2002年9月11日的未決的美國(guó)臨時(shí)專(zhuān)利申請(qǐng)序列號(hào)60/409,813專(zhuān)利的優(yōu)先權(quán)。前述專(zhuān)利的整個(gè)文本特異地納入本文作為參考，不放棄任何權(quán)利。依據(jù)來(lái)自國(guó)家癌癥學(xué)院的授權(quán)號(hào)RO1CA50380，政府可擁有本發(fā)明中的權(quán)利。
1.發(fā)明的領(lǐng)域本發(fā)明與癌癥治療領(lǐng)域相關(guān)。更特別地，本發(fā)明涉及用于治療癌癥患者的制劑和方法，應(yīng)用包括特異的鉑復(fù)合物和/或谷胱甘肽(GSH)合成或活性抑制劑的組合物，所述谷胱甘肽合成或活性抑制劑如L-丁硫氨酸亞砜胺(BSO)。
2.相關(guān)技術(shù)的描述順鉑是最有效和最廣泛使用的抗腫瘤藥物之一。由順鉑誘導(dǎo)的凋亡通常被認(rèn)為是由共價(jià)DNA加合物介導(dǎo)的，其阻滯了復(fù)制和轉(zhuǎn)錄。順鉑(順二氯二氨合鉑)已經(jīng)被作為化學(xué)治療劑用了很多年。Rosenberg等，美國(guó)專(zhuān)利4,177,263描述了應(yīng)用順鉑和順鉑類(lèi)似物治療癌癥的方法。該化合物對(duì)于治療誘生在小鼠中的白血病和腫瘤是有效的。順鉑和其類(lèi)似物卡鉑現(xiàn)在已被列入最被廣泛應(yīng)用的抗癌藥物之中。
基于鉑的抗腫瘤劑(如順鉑和卡鉑)在一些癌癥的治療中起著重要的作用。這些治療的主要局限之一是在大部分患者中的復(fù)發(fā)，由于產(chǎn)生了藥物抗性腫瘤細(xì)胞，使后續(xù)的鉑劑治療失敗。該局限使得大家努力去尋找可有效對(duì)抗抗性腫瘤的鉑類(lèi)似物。實(shí)際上，一些鉑類(lèi)似物(如奧沙利鉑(oxaliplatin)和JM216)已經(jīng)進(jìn)入臨床試驗(yàn)。然而，幾乎或根本不知這些類(lèi)似物作用的有效方式。盡管降低的藥物積聚、提高的細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽、以及提高的DNA加合物修補(bǔ)通常作為順鉑抗性的關(guān)鍵機(jī)制被鑒定，目前還沒(méi)獲得對(duì)于由類(lèi)似物引起的抗性逆轉(zhuǎn)的滿意解釋。
通過(guò)與亞砜胺結(jié)合給藥，如D，L-丁硫氨酸-S，R-亞砜胺(BSO)或其它試劑，人們努力提高順鉑或其類(lèi)似物的有效性或使抗性腫瘤細(xì)胞對(duì)其敏感化。在人黑色素瘤細(xì)胞系(RPMI 8322)中，已經(jīng)研究了由雙功能DNA-反應(yīng)性抑制細(xì)胞劑誘導(dǎo)的BSO對(duì)于細(xì)胞毒性和DNA-交聯(lián)的影響。BSO預(yù)處理增強(qiáng)左旋溶肉瘤素(melphalan)的細(xì)胞毒性和氮芥。一種小但明顯的由BSO產(chǎn)生的順鉑毒性的增強(qiáng)也被發(fā)現(xiàn)(劑量修正系數(shù)(DMF)1.5)。該發(fā)現(xiàn)支持由BSO產(chǎn)生的雙功能烷化劑的細(xì)胞毒性的增強(qiáng)是由于提高的DNA交聯(lián)的假設(shè)，所述DNA交聯(lián)是由降低的藥物與谷胱甘肽的細(xì)胞內(nèi)結(jié)合導(dǎo)致的。
沒(méi)有一種用于治療癌癥的方法是完全滿意的，因而新的和改進(jìn)的癌癥治療方法以及組合物是必需的。
發(fā)明概述這里描述的鉑復(fù)合物，單獨(dú)或與其它GSH合成或活性(如BSO)抑制劑結(jié)合，可顯示出對(duì)順鉑-抗性細(xì)胞的敏感性以及抗腫瘤活性的增強(qiáng)。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的鉑化合物對(duì)抗性細(xì)胞的活性大于對(duì)抗敏感細(xì)胞的活性。
在本發(fā)明的某些實(shí)施方式中，化合物氨絡(luò)物/環(huán)庚胺-二氯-鉑(II)、氨絡(luò)物/哌啶-二氯-鉑(II)、氨絡(luò)物/六亞甲基亞胺-二氯-鉑(II)、和/或氨絡(luò)物/六亞甲基亞胺-四氯-鉑(IV)可被單獨(dú)或與GSH合成和/或活性抑制劑結(jié)合使用，治療患有癌癥或高增殖疾病的患者。
在不同的實(shí)施方式中，抗腫瘤制劑或組合物可包括一種具有以下結(jié)構(gòu)式的化合物 結(jié)構(gòu)式I或其鹽。所述制劑或組合物也可包括一種谷胱甘肽的負(fù)調(diào)節(jié)劑(negative modulator)。所述谷胱甘肽的負(fù)調(diào)節(jié)劑可以是谷胱甘肽合成的抑制劑。谷胱甘肽合成的抑制劑可以是L-丁硫氨酸亞砜胺(BSO，L-buthionine-sulfoximine)。BSO可包括一種或多種BSO異構(gòu)體。
在其它的實(shí)施方式中，抗腫瘤制劑或組合物可包括一種具有以下結(jié)構(gòu)式的化合物 結(jié)構(gòu)式II或其鹽。所述制劑或組合物也可包括一種谷胱甘肽的負(fù)調(diào)節(jié)劑。所述谷胱甘肽的負(fù)調(diào)節(jié)劑可以是谷胱甘肽合成的抑制劑。谷胱甘肽合成的抑制劑可以是L-丁硫氨酸亞砜胺(BSO)。BSO可包括一種或多種BSO異構(gòu)體。
在其它的實(shí)施方式中，抗腫瘤制劑或組合物可包括一種具有以下結(jié)構(gòu)式的化合物
結(jié)構(gòu)式III或其鹽。所述制劑或組合物也可包括一種谷胱甘肽的負(fù)調(diào)節(jié)劑。所述谷胱甘肽的負(fù)調(diào)節(jié)劑可以是谷胱甘肽合成的抑制劑。谷胱甘肽合成的抑制劑可以是L-丁硫氨酸亞砜胺(BSO)。BSO可包括一種或多種BSO異構(gòu)體。
在其它的實(shí)施方式中，抗腫瘤制劑或組合物可包括一種具有以下結(jié)構(gòu)式IV的化合物 結(jié)構(gòu)式IV或其鹽。所述制劑或組合物也可包括一種谷胱甘肽的負(fù)調(diào)節(jié)劑。所述谷胱甘肽的負(fù)調(diào)節(jié)劑可以是谷胱甘肽合成的抑制劑。谷胱甘肽合成的抑制劑可以是L-丁硫氨酸亞砜胺(BSO)。BSO可包括一種或多種BSO異構(gòu)體。
在某些實(shí)施方式中，藥物組合物可包括一種或多種鉑復(fù)合物氨絡(luò)物/環(huán)庚胺-二氯-鉑(II)、氨絡(luò)物/哌啶-二氯-鉑(II)、氨絡(luò)物/六亞甲基亞胺-二氯-鉑(II)、或氨絡(luò)物/六亞甲基亞胺-四氯-鉑(IV)。
本發(fā)明的藥物制劑或組合物可包括一種鉑復(fù)合物，其大約的范圍為0.1、0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15mM至5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、40、50mM。本發(fā)明的藥物制劑或組合物可包含谷胱甘肽的生物學(xué)調(diào)節(jié)劑。所述谷胱甘肽的生物學(xué)調(diào)節(jié)劑可以是谷胱甘肽合成的抑制劑，如L-丁硫氨酸亞砜胺。藥物組合物可包括的L-丁硫氨酸亞砜胺的大約范圍為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95μM至100、150、200、250、300、400、500μM或更多。本發(fā)明的藥物組合物可通過(guò)血管內(nèi)、口服、腹腔注射給藥，或通過(guò)其它已知可用于鉑復(fù)合物及類(lèi)似物給藥的途徑給藥。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，考慮了一種抑制順鉑-抗性細(xì)胞增殖的方法，該方法包括向細(xì)胞提供、使其接觸或給予氨絡(luò)物/環(huán)庚胺-二氯-鉑(II)、氨絡(luò)物/哌啶-二氯-鉑(II)、氨絡(luò)物/六亞甲基亞胺-二氯-鉑(II)、或氨絡(luò)物/六亞甲基亞胺-四氯-鉑(IV)。該方法也可包括提供谷胱甘肽的的生物學(xué)調(diào)節(jié)劑。該谷胱甘肽生物學(xué)調(diào)節(jié)劑可以是谷胱甘肽合成的抑制劑，如一種或多種L-丁硫氨酸亞砜胺的異構(gòu)體。在本發(fā)明的特定實(shí)施方式中，所述細(xì)胞位于受試者如哺乳動(dòng)物中。所述哺乳動(dòng)物可以是人或小鼠。
不同的實(shí)施方式包括一種治療癌癥細(xì)胞的方法，該方法包括向癌癥細(xì)胞提供、使其接觸或給予氨絡(luò)物/環(huán)庚胺-二氯-鉑(II)、氨絡(luò)物/哌啶-二氯-鉑(II)、氨絡(luò)物/六亞甲基亞胺-二氯-鉑(II)、或氨絡(luò)物/六亞甲基亞胺-四氯-鉑(IV)。該方法也可包括提供谷胱甘肽的生物學(xué)調(diào)節(jié)劑。該谷胱甘肽的生物學(xué)調(diào)節(jié)劑可以是一種谷胱甘肽合成的抑制劑，如一種或多種L-丁硫氨酸亞砜胺的異構(gòu)體。
本發(fā)明的其它實(shí)施方式包括一種增強(qiáng)抗腫瘤活性的方法，包含提供、接觸或給予一種組合物，該組合物包含選自以下組的鉑復(fù)合物氨絡(luò)物/環(huán)庚胺-二氯-鉑(II)、氨絡(luò)物/哌啶-二氯-鉑(II)、氨絡(luò)物/六亞甲基亞胺-二氯-鉑(II)、和氨絡(luò)物/六亞甲基亞胺-四氯-鉑(IV)；其與谷胱甘肽合成的抑制劑結(jié)合使用。谷胱甘肽合成的抑制劑可進(jìn)一步限定為一種或多種L-丁硫氨酸亞砜胺的異構(gòu)體。L-丁硫氨酸亞砜胺濃度的大約范圍為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95μM至100、150、200、250、300、400、500μM或更多。
本發(fā)明的另外的實(shí)施方式包括一種制備氨絡(luò)物/環(huán)庚胺-二氯-鉑(II)的方法，該方法包括a)用200mmol的KI處理20mmol的K2PtCl4水溶液，室溫下攪拌10分鐘；b)逐滴加入二倍當(dāng)量的環(huán)庚胺，攪拌30分鐘，形成cis-PtII(c-C7H11NH2)2I2沉淀；c)過(guò)濾和用水洗滌cis-PtII(c-C7H11NH2)2I2沉淀；d)從DMF/H2O混合物再結(jié)晶cis-PtII(c-C7H11NH2)2I2沉淀，用水、甲醇和乙醚洗滌；e)真空干燥cis-PtII(c-C7H11NH2)2I2沉淀；f)將干燥的cis-PtII(c-C7H11NH2)2I2沉淀懸浮在50ml 60-70％HClO4中，在懸浮液中加入150mL乙醇，室溫下攪拌，形成褐色的[PtII(c-C7H11NH2)I2]2沉淀；g)過(guò)濾該褐色的[PtII(c-C7H11NH2)I2]2沉淀，并用水洗滌；h)真空干燥經(jīng)洗滌的褐色[PtII(c-C7H11NH2)I2]2沉淀；i)將5mmol的褐色[PtII(c-C7H11NH2)I2]2沉淀與5ml的1.5M NH4OH在25ml水中混合，室溫下攪拌過(guò)夜，形成黃色的cis-PtII(NH3)(c-C7H11NH2)I2沉淀；j)過(guò)濾該黃色的cis-PtII(NH3)(c-C7H11NH2)I2沉淀，用水洗滌；k)真空干燥經(jīng)洗滌的cis-PtII(NH3)(c-C7H11NH2)I2沉淀；l)將4mmol的cis-PtII(NH3)(c-C7H11NH2)I2沉淀與7.4mmol的AgNO3在200ml水中混合，在黑暗中攪拌過(guò)夜，形成AgI沉淀；m)通過(guò)硅藻土過(guò)濾移走AgI沉淀，形成cis-PtII(NH3)(c-C7H11NH2)NO3濾出液；n)在cis-PtII(NH3)(c-C7H11NH2)NO3濾出液中加入10mL濃縮的HCl，攪拌該混合物3小時(shí)，形成黃色的PtII(NH3)(C7H11N)Cl2沉淀；o)減壓蒸發(fā)該混合物至約2mL，過(guò)濾黃色的PtII(NH3)(C7H11N)Cl2沉淀；p)用水和丙酮洗滌黃色的PtII(NH3)(C7H11N)Cl2沉淀，真空干燥經(jīng)洗滌的黃色的PtII(NH3)(C7H11N)Cl2沉淀。
其它的實(shí)施方式包括一種制備氨絡(luò)物/哌啶-二氯-鉑(II)的方法，包括a)將5.5mmol的K[Pt(NH3)Cl3]溶解在50mL水中；b)在100ml水中加入55mmol的KI，形成棕色溶液，攪拌20分鐘；c)在棕色溶液逐滴加入10ml水中的55mmol哌啶，直至形成金黃色Pt(NH3)(C5H11N)I2沉淀，再攪拌1小時(shí)；d)過(guò)濾金黃色的Pt(NH3)(C5H11N)I2沉淀，用丙酮洗滌；e)真空干燥經(jīng)洗滌的金黃色Pt(NH3)(C5H11N)I2沉淀；f)在100ml水中懸浮4.24mmol的Pt(NH3)(C5H11N)I2沉淀；g)加入在100ml水中的8.48mmolAgNO3，黑暗中室溫下攪拌24小時(shí)；h)過(guò)濾AgI沉淀；i)蒸發(fā)AgI濾液至50mL；j)在攪拌時(shí)逐滴加入1∶1 HCl溶液，形成亮黃色Pt(NH3)(C5H11N)Cl2化合物；以及k)過(guò)濾該亮黃色Pt(NH3)(C5H11N)Cl2化合物，在熱水中再結(jié)晶該亮黃色Pt(NH3)(C5H11N)Cl2化合物，并且真空干燥該亮黃色Pt(NH3)(C5H11N)Cl2晶體。
本發(fā)明的其它實(shí)施方式包括一種制備氨絡(luò)物/六亞甲基亞胺-二氯-鉑(II)的方法，包含a)在50mL水中溶解5.5mmol的K[Pt(NH3)Cl3]；b)加入在100mL水中的55mmolKI，形成棕色溶液，并攪拌20分鐘；c)向棕色溶液中逐滴加入在10mL水中的55mmol的六亞甲基亞胺，直至形成金黃色的Pt(NH3)(C6H13N)I2沉淀，攪拌1小時(shí)；d)過(guò)濾金黃色的Pt(NH3)(C6H13N)I2沉淀，用丙酮洗滌；e)真空干燥金黃色的Pt(NH3)(C6H13N)I2沉淀；f)在100ml水中懸浮4.24mmol的Pt(NH3)(C6H13N)I2沉淀；g)加入在100mL水中的8.48mmol AgNO3，室溫下在黑暗中攪拌24小時(shí)；h)過(guò)濾AgI沉淀；i)蒸發(fā)AgI濾液至50mL；j)邊攪拌邊逐滴加入1∶1 HCl溶液，形成亮黃色Pt(NH3)(C6H13N)Cl2化合物；以及k)過(guò)濾亮黃色Pt(NH3)(C6H13N)Cl2化合物，并在熱水中再結(jié)晶該亮黃色Pt(NH3)(C6H13N)Cl2化合物，在真空下干燥該亮黃色Pt(NH3)(C6H13N)Cl2化合物。
另外的實(shí)施方式包括一種制備氨絡(luò)物/六亞甲基亞胺-四氯-鉑(IV)的方法，包括a)在含有2.61mmol PtII(NH3)(C6H13N)Cl2的200mL水中加入10ml的H2O2，攪拌15分鐘，過(guò)濾該溶液，濃縮至最小體積；b)用丙酮沉淀，形成黃色(PtIV(NH3)(C6H13N)trans-(OH)2Cl2)產(chǎn)物；c)真空干燥該黃色(PtIV(NH3)(C6H13N)trans-(OH)2Cl2)；d)在100mL水中溶解該黃色的1.64mmol的PtIV(NH3)(C6H13N)trans-(OH)2Cl2(0.65g；1.64mmol)；e)加入20mL濃HCl，在室溫下攪拌24小時(shí)，形成清楚的黃色溶液；f)過(guò)濾該澄清的黃色溶液，濃縮該澄清的黃色溶液至最小體積，形成黃色晶體PtIV(NH3)(C6H13N)Cl4；以及g)過(guò)濾、在水中洗滌該黃色晶體PtIV(NH3)(C6H13N)Cl4，真空干燥。
這里揭示的所有的量都是近似的，可以有約5％-約10％，約15％-約20％或更高百分比的差異。在本發(fā)明的其它實(shí)施方式中，量可以相差約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多毫摩爾。這里揭示的量也可以有約5-約10，約15-約20，約25-約30或更多毫升(millitters)的差異。
在權(quán)利要求和/或說(shuō)明書(shū)中，詞“一種”當(dāng)與術(shù)語(yǔ)“包含”連接使用時(shí)，可解釋為“一種”，但其也可解釋為“一種或多種”、“至少一種”和“一種或多于一種”。
通過(guò)接下來(lái)的詳細(xì)描述，本發(fā)明的其它目標(biāo)、特性和優(yōu)點(diǎn)將變得明顯。然而應(yīng)理解，詳細(xì)的描述以及顯示本發(fā)明的特異實(shí)施方式的特異實(shí)施例，僅以例證的方式提供，因?yàn)樵趨⒖剂嗽敿?xì)描述后，包含在本發(fā)明的意愿和范圍內(nèi)的不同的變化和修改對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見(jiàn)的。
附圖的簡(jiǎn)要說(shuō)明以下的附圖形成了本說(shuō)明書(shū)的一部分，并用于進(jìn)一步證明本發(fā)明的某些方面。通過(guò)參考這些附圖的一種或多種，結(jié)合特異實(shí)施方式的詳細(xì)描述，本發(fā)明將得到更好的理解。


圖1.是具代表性的鉑復(fù)合物的化學(xué)身份的列舉。
圖2.在本申請(qǐng)中描述的和在圖1中提供的化學(xué)物質(zhì)的結(jié)構(gòu)圖解。
作為例證的實(shí)施方式的描述通過(guò)單獨(dú)使用特異的鉑復(fù)合物或與GSH負(fù)調(diào)節(jié)劑結(jié)合使用，獲得增強(qiáng)的和/或選擇的抗腫瘤活性，可克服對(duì)鉑復(fù)合物的抗性。在某些實(shí)施方式中，GSH的負(fù)調(diào)節(jié)劑可以是一種GSH合成抑制劑，其包括但不限于L-丁硫氨酸-SR-亞砜胺(BSO)，其可包括BSO的一種或多種異構(gòu)體。本發(fā)明的實(shí)施方式可引起提高的對(duì)順鉑-抗性細(xì)胞的活性，其高于對(duì)抗順鉑-敏感細(xì)胞的活性。特異的鉑類(lèi)似物和GSH合成或活性抑制劑(如BSO)的結(jié)合可被用于對(duì)抗難控制的癌癥，其不受靶細(xì)胞的p53狀況的制約。
與BSO結(jié)合引起的抗腫瘤活性的增強(qiáng)對(duì)于順鉑來(lái)說(shuō)通常在2倍以下，盡管個(gè)別的出版物已經(jīng)證實(shí)了有高達(dá)4倍的提高。此外，順鉑的提高的活性是沒(méi)有選擇性的，因?yàn)槊舾屑?xì)胞和抗性細(xì)胞的反應(yīng)是同樣的。已經(jīng)證實(shí)，順鉑的其它類(lèi)似物以相似的方式作用。這里揭示的鉑復(fù)合物以復(fù)合數(shù)量、化學(xué)名稱(chēng)以及提供在圖1和圖2中的化學(xué)結(jié)構(gòu)來(lái)列舉。
本發(fā)明已經(jīng)鑒定出，特異的鉑復(fù)合物當(dāng)與GSH合成抑制劑(如BSO)結(jié)合使用時(shí)，顯示出(1)抗腫瘤活性大大地增強(qiáng)，以及(2)對(duì)順鉑-抗性細(xì)胞具有選擇性。因而，在等基因?qū)Φ拿舾泻涂剐阅[瘤模型中，與對(duì)抗敏感細(xì)胞相比，特異的類(lèi)似物的活性更多地對(duì)抗抗性細(xì)胞。
本發(fā)明包括用于治療癌癥和其它高增殖疾病的制劑和方法，該制劑和方法使用了包括鉑復(fù)合物和/或生物學(xué)反應(yīng)調(diào)節(jié)劑的藥物組合物，這些制劑提高了抗腫瘤化合物的活性，或增強(qiáng)了腫瘤細(xì)胞對(duì)于抗腫瘤化合物的敏感性。在某些實(shí)施方式中，鉑復(fù)合物可包括一種或多種的以下物質(zhì)氨絡(luò)物/環(huán)庚胺-二氯-鉑(II)(復(fù)合物號(hào)7)、氨絡(luò)物/哌啶-二氯-鉑(II)(復(fù)合物號(hào)11)、氨絡(luò)物/六亞甲基亞胺-二氯-鉑(II)(復(fù)合物號(hào)12)、或氨絡(luò)物/六亞甲基亞胺-四氯-鉑(IV)(復(fù)合物號(hào)17)，它們以這里描述的化學(xué)結(jié)構(gòu)表示。
1.鉑復(fù)合物順鉑是一種臨床上非常重要的基于金屬的抗癌/抗腫瘤藥物，其配位到DNA上，使DNA的雙螺旋構(gòu)象扭曲(Rosenberg，1999；O’Dwyer等，1999‘Reedijk，1996；Lepre和Lippard，1990；Johnson等，1989)。順鉑的抗癌作用與這些扭曲相關(guān)，終止了DNA聚合酶的作用(Comess等，1992)，并誘導(dǎo)了凋亡(Eastman，1999)。并且，這些扭曲吸引了各種各樣的受損的DNA-結(jié)合蛋白，這些蛋白的結(jié)合已被假設(shè)能夠介導(dǎo)順鉑的抗腫瘤特性(Jamieson和Lippard，1999；Zamble和Lippard，1999)。本發(fā)明的化合物具有與順鉑相當(dāng)?shù)幕虮软樸K更好的抗腫瘤活性，顯示幾乎沒(méi)有或沒(méi)有交叉抗性，即對(duì)順鉑產(chǎn)生的抗性并非等于對(duì)本發(fā)明的化合物產(chǎn)生的抗性。對(duì)于抗順鉑的細(xì)胞系，所述化合物通常比順鉑更有效。
本發(fā)明的某些實(shí)施方式可包括氨絡(luò)物/環(huán)庚胺-二氯-鉑(II)，復(fù)合物#7，該化合物的結(jié)構(gòu)為 結(jié)構(gòu)式I及其鹽。
本發(fā)明的一些實(shí)施方式可包括氨絡(luò)物/哌啶-二氯-鉑(II)，復(fù)合物#11，該化合物的結(jié)構(gòu)式為 結(jié)構(gòu)式II及其鹽。
本發(fā)明的一些實(shí)施方式可包括氨絡(luò)物/六亞甲基亞胺-二氯-鉑(III)，復(fù)合物#12，該化合物的結(jié)構(gòu)式為
結(jié)構(gòu)式III及其鹽。
本發(fā)明的其它實(shí)施方式可包括氨絡(luò)物/六亞甲基亞胺-四氯-鉑(IV)，復(fù)合物#17，該化合物的結(jié)構(gòu)式為 結(jié)構(gòu)式IV及其鹽。
在本發(fā)明的不同的實(shí)施方式中，氨絡(luò)物/環(huán)庚胺-二氯-鉑(II)、氨絡(luò)物/哌啶-二氯-鉑(II)、氨絡(luò)物/六亞甲基亞胺-二氯-鉑(II)和/或氨絡(luò)物/六亞甲基亞胺-四氯-鉑(IV)的順鉑復(fù)合物被給于需要進(jìn)行癌或高增殖狀態(tài)治療的患者。所述復(fù)合物可被單獨(dú)給藥或與抑制劑、GSH合成或活性抑制劑結(jié)合給藥。在某些實(shí)施方式中，抑制劑或GSH合成抑制劑在氨絡(luò)物/環(huán)庚胺-二氯-鉑(II)、氨絡(luò)物/哌啶-二氯-鉑(II)、氨絡(luò)物/六亞甲基亞胺-二氯-鉑(II)、氨絡(luò)物/六亞甲基亞胺-四氯-鉑(IV)或其組合給藥之前、之后或同時(shí)給藥。在不同的實(shí)施方式中，患者或受試者帶有對(duì)順鉑、卡鉑或其它治療劑有抗性的腫瘤、癌癥或高增殖細(xì)胞。在一些實(shí)施方式中，鉑復(fù)合物對(duì)于對(duì)順鉑、卡鉑或其它治療和試劑有抗性的細(xì)胞具有選擇性。
II.GSH合成或活性的抑制劑谷胱甘肽(L-谷氨酰-L-半胱氨酸-甘氨酸；GSH)可在幾乎所有細(xì)胞中以相對(duì)高的濃度(1至10mM)找到(Meister和Anderson，1983；Anderson和Meister，1983)。GSH具有許多的細(xì)胞內(nèi)功能。它是一種有效的細(xì)胞內(nèi)還原劑。其也在催化作用、新陳代謝、轉(zhuǎn)運(yùn)方面起作用，并且保護(hù)細(xì)胞對(duì)抗外來(lái)化合物、自由基和活性氧化合物。在毀壞H2O2和有機(jī)過(guò)氧化物的反應(yīng)中，GSH是一種有活性的參與者。
GSH通過(guò)γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(反應(yīng)1)和GSH合成酶(反應(yīng)2)的連續(xù)作用，在細(xì)胞內(nèi)合成(Anderson，1997)L-谷氨酸+L-半胱氨酸+ATP L-γ-谷氨酰-L-半胱氨酸+ADP+Pi(Meister和Anderson，1983)L-γ-谷氨酰-L-半胱氨酸+甘氨酸+ATP 谷胱甘肽+ADP+Pi
(Anderson和Meister；1983)GSH的合成受底物的可用性的限制，限制性底物通常是半胱氨酸。γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶是由GSH以非變構(gòu)方式反饋抑制(Richman和Meister，1973)。谷胱甘肽是自我平衡調(diào)節(jié)的，不管在細(xì)胞內(nèi)還是在細(xì)胞外。酶系統(tǒng)合成它、利用它、并再生它，被稱(chēng)為γ-谷氨酰循環(huán)。
在本發(fā)明的不同的實(shí)施方式中，鉑復(fù)合物和GSH合成抑制劑的組合可用作抗腫瘤制劑或組合物并應(yīng)用在抗腫瘤方法和治療中。
A.γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶的抑制劑已發(fā)現(xiàn)BSO是一種特異的γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶抑制劑(Griffith和Meister，1979，納入本文作為參考)。γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶催化L-谷氨酸與MgATP的反應(yīng)，形成g-谷氨酰磷酸，作為一種酶結(jié)合中間體(Griffith，1982和Campbell等，1991，每一篇納入本文作為參考)。
B.谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶(GST)抑制劑抑制GSH與其它化合物結(jié)合的試劑可被用于和本發(fā)明的一種或多種鉑復(fù)合物聯(lián)合。這些不同的化合物被歸類(lèi)為GST抑制劑。GST抑制劑包括但不限于肽、肽模擬物、小分子等。已知三環(huán)抗憂郁劑如阿米替林(amitriptyline)、多塞平(doxepin)、環(huán)庚二烯(cycloheptadiene)及其衍生物能夠抑制各種GST酶的活性。典型的抑制劑和方法描述在Tew等，1997；Baranczyk等，2001；Burg等，2002；Tew，1994；以及Kunze，1996)中有所描述。
III.聯(lián)合治療目前治療許多類(lèi)型的癌癥，特別是治療婦產(chǎn)科癌癥，主要是手術(shù)、放射或化療。本發(fā)明包括給藥一種或多種鉑復(fù)合物的方法，所述鉑復(fù)合物選自氨絡(luò)物/環(huán)庚胺-二氯-鉑(II)、氨絡(luò)物/哌啶-二氯-鉑(II)、氨絡(luò)物/六亞甲基亞胺-二氯-鉑(II)以及氨絡(luò)物/六亞甲基亞胺-四氯-鉑(IV)。所述鉑復(fù)合物可與谷胱甘肽合成或活性抑制劑聯(lián)合給于經(jīng)診斷為不同癌癥的患者，特別是已經(jīng)證明對(duì)于其它基于鉑的治療有抗性的癌癥患者。并且，這些制劑或組合物和方法可與其它傳統(tǒng)的以及正在發(fā)展的治療手段結(jié)合使用。
在許多治療中，提供多于一種的有功效的治療劑或試劑是有優(yōu)勢(shì)的。這種“結(jié)合(聯(lián)合)”療法對(duì)于狀態(tài)、疾病或其它異常生理狀態(tài)的多個(gè)方面，如對(duì)一種或多種傳統(tǒng)治療產(chǎn)生抗性的治療是尤其重要的。例如治療多藥物抗性(MDR)癌癥。因此，本發(fā)明的一個(gè)方面是施加一種或多種鉑復(fù)合物至組織、器官或有機(jī)體的適當(dāng)位置，用于疾病治療，同時(shí)還采用提供治療劑和/或增強(qiáng)或敏化作用的第二療法。
敏化或增強(qiáng)治療可在鉑復(fù)合物治療之前或之后進(jìn)行，間隔的時(shí)間范圍從秒、分鐘到周。在其它試劑和鉑復(fù)合物分開(kāi)給藥到相關(guān)位置或?qū)ο蟮膶?shí)施方式中，通常應(yīng)確保在每次給藥之間有意義的時(shí)間階段沒(méi)有到期，從而使試劑和鉑復(fù)合物仍保持在治療位置上發(fā)揮有利的聯(lián)合作用。在這些例子中，打算使細(xì)胞各自在12-24小時(shí)內(nèi)接觸兩種療法，更特別的，各自在6-12小時(shí)內(nèi)，最優(yōu)選的具有約12小時(shí)的延遲時(shí)間。然而，在一些狀況下，需要延長(zhǎng)時(shí)間周期以使治療更有意義，在分別給藥之間有幾天(2，3，4，5，6或7)至幾周(1，2，3，4，5，6，7或8)的延遲。
每種試劑多于一次給藥也是可能的?？墒褂枚喾N組合，當(dāng)鉑復(fù)合物(氨絡(luò)物/環(huán)庚胺-二氯-鉑(II)、氨絡(luò)物/哌啶-二氯-鉑(II)、氨絡(luò)物/六亞甲基亞胺-二氯-鉑(II)以及氨絡(luò)物/六亞甲基亞胺-四氯-鉑(IV)，或其結(jié)合)為“A”，其它試劑為“B”時(shí)，如下所示A/B/A B/A/B B/B/A A/A/B B/A/A A/B/B B/B/B/A B/B/A/BA/A/B/B A/B/A/B A/B/B/A B/B/A/A B/A/B/A B/A/A/B B/B/B/AA/A/A/B B/A/A/A A/B/A/A A/A/B/A A/B/B/B B/A/B/B B/B/A/B其它的試劑可以是治療、增強(qiáng)和/或敏化試劑，如GSH合成的抑制劑或其它癌癥治療劑。
也可預(yù)期其它的結(jié)合。例如，在本發(fā)明的上下文中，預(yù)期本發(fā)明的鉑復(fù)合物可被用于與它抗癌試劑協(xié)同使用，包括化學(xué)-或放射治療調(diào)節(jié)。為了殺死細(xì)胞、抑制細(xì)胞生長(zhǎng)、抑制轉(zhuǎn)移、抑制血管新生或甚至逆轉(zhuǎn)或降低腫瘤細(xì)胞的惡性表型，通過(guò)應(yīng)用本發(fā)明的方法和制劑/組合物，通常可將“靶”細(xì)胞與如這里所描述的鉑復(fù)合物以及至少一種其它試劑(如一種GSH合成抑制劑)接觸，這些制劑/組合物將以可達(dá)到所述目標(biāo)的有效的量提供。該方法可包括使用于治療的靶位點(diǎn)與鉑復(fù)合物以及其它試劑或因子同時(shí)接觸。這可通過(guò)給予或提供一種同時(shí)包括兩種試劑的單獨(dú)的組合物或藥物制劑來(lái)實(shí)現(xiàn)，或通過(guò)同時(shí)或不同時(shí)地給予兩種不同的組合物或制劑(其中一種組合物包括鉑復(fù)合物而另一種包括敏化或增強(qiáng)試劑)來(lái)實(shí)現(xiàn)。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的組合物和方法可用在標(biāo)準(zhǔn)的順鉑治療之后或之前。
在其它實(shí)施方式中，適用于與本發(fā)明的鉑復(fù)合物聯(lián)合治療的試劑是任何化學(xué)化合物或具有治療活性的治療方法。例如，“抗癌試劑”是指一種具有抗癌活性的試劑。所述化合物或方法包括其它烷基化試劑、拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑、拓?fù)洚悩?gòu)酶II抑制劑、RNA/DNA抗代謝物、DNA抗代謝物、抗有絲分裂劑，以及DNA破壞劑(當(dāng)用于細(xì)胞時(shí)其可誘導(dǎo)DNA損壞)。
此外，烷基化劑的例子包括苯丁酸氮芥、順鉑、cyclodisone、flurodopan、甲基CCNU、二氧哌嗪、替羅昔隆(teroxirone)。拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑包含化合物如喜樹(shù)堿(camptothecin)和喜樹(shù)堿衍生物，以及嗎啉代阿霉素(morpholinodoxorubicin)。阿霉素(doxorubicin)、吡唑并吖啶、米托蒽醌(Mitoxantrone)以及苯甲酰腙柔紅霉素是拓?fù)洚悩?gòu)酶II的例證。RNA/DNA抗代謝物包括L-阿拉諾新(Alanosine)、5-fluoraouracil、氨基蝶呤(aminopterin)、甲氨蝶呤(Methotrexate)以及吡唑呋喃菌素(pyrazofurin)；而DNA抗代謝物包括如ara-C、guanozole、羥基脲(Hydroxyurea)、硫嘌呤(thiopurine)。典型的抗有絲分裂劑是秋水仙堿(colchicine)、利索新(Rhizoxin)、紫杉醇(Taxol)和硫酸長(zhǎng)春堿(Vinblastine Sulfate)。其它試劑和因子包括誘導(dǎo)DNA損壞的放射和波，如γ-照射、X-射線、UV-照射、微波、電子發(fā)射等。許多抗-癌劑，如描述為“化療試劑”的試劑，能夠誘導(dǎo)DNA損壞，它們都可被用于與這里所揭示的治療方法相聯(lián)合。預(yù)期可應(yīng)用的化療劑包括如阿霉素(adriamycin)、博來(lái)霉素(bleomycin)、5-氟尿嘧啶(5FU)、依托泊苷(Etoposide，VP-16)、喜樹(shù)堿(camptothecin)、放線菌素D(actinomycin D)、絲裂霉素C(Mitomycin C)、順鉑(CDDP)、鬼臼毒素(podophyllotoxin)、維拉帕米以及過(guò)氧化氫。本發(fā)明也包含應(yīng)用一種或多種DNA損壞試劑，不管是基于射線的或是真實(shí)的化合物，如應(yīng)用X-射線與順鉑或應(yīng)用順鉑和依托泊苷。
熟練的技術(shù)人員可直接參考“雷明頓藥物科學(xué)”第15版，第33章，特別是624-652頁(yè)。根據(jù)需要治療的受試者的狀況，劑量必須做一些改變。無(wú)論如何，負(fù)責(zé)給藥的人將確定適合于個(gè)體受試者的劑量。此外，用于人體給藥時(shí)，制劑應(yīng)該進(jìn)行滅菌、熱原試驗(yàn)、常規(guī)安全試驗(yàn)和制定純化標(biāo)準(zhǔn)，如FDA局的生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)所要求的。
除了將鉑復(fù)合物治療與敏化或化學(xué)-及放射治療相結(jié)合，可預(yù)期與基因治療相結(jié)合將具有優(yōu)勢(shì)。例如，應(yīng)用p53、p16、p21、Rb、APC、DCC、NF-1、NF-2、BCRA2、p16、FHIT、WT-1、MEN-I、MEN-II、BRCA-1、VHL、FCC或MCC的結(jié)合，或致癌基因ras、myc、neu、raf、erb、src、fms、jun、trk、ret、gsp、hst、bcl、abl或任何前面提及的基因的反義版本，都包括在本發(fā)明的范圍中。
IV.疾病狀態(tài)本發(fā)明涉及治療的疾病狀態(tài)包括高增殖(過(guò)度增殖)失調(diào)，包括良性的和惡性的瘤。這種失調(diào)包括惡性血液疾病、再狹窄、癌、多藥物抗性癌、原生疾病、牛皮癬、炎癥性腸病、類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎和轉(zhuǎn)移腫瘤。
特別地，本發(fā)明直接針對(duì)人癌癥的治療，包括前列腺、肺、腦、皮膚、肝、乳腺、淋巴系統(tǒng)、胃、睪丸、卵巢、胰腺、骨、骨髓、頭頸、子宮頸、食道、眼、膽囊、腎、腎上腺、心臟、結(jié)腸、直腸和血癌的癌，特別是已經(jīng)或可能發(fā)展到對(duì)常規(guī)化學(xué)治療產(chǎn)生抗性的那些癌癥。其它可用本發(fā)明的制劑/組合物或方法治療的疾病也可包括腎細(xì)胞癌；病毒感染，如丙型肝炎(Garini等，2001)、HIV-1(Hatzakis等，2001)；Erdheim-Chester疾病(Esmali等，2001)；血小板減少性紫癜(Dikici等，2001)、馬爾堡出血熱(Kolokol′tsov等，2001)。在某些實(shí)施方式中，方法和制劑/組合物被用于治療患卵巢癌的受試者。
V.鉑復(fù)合物的合成A.氨絡(luò)物/環(huán)戊胺-二氯-鉑(II)cis(順式)-PtII(NH3)(c-C5H9NH2)Cl2(化合物#5)的制備水性溶液K2PtCl4(8.30g；20mmol)用KI(33.2g；200mmol)處理，在室溫?cái)嚢?0分鐘。在K2PtCl4溶液中逐滴加入二當(dāng)量的環(huán)戊胺。攪拌30分鐘，形成黃色的沉淀(cis-PtII(c-C5H9NH2)2I2)。過(guò)濾該黃色的沉淀，并用水徹底地洗滌。該沉淀從DMF/H2O混合物中再結(jié)晶。用水、甲醇和乙醚洗滌后，結(jié)晶的產(chǎn)物(cis-PtII(c-C5H9NH2)2I2)進(jìn)行真空干燥。
150毫升(mL)的乙醇被加入到cis-PtII(c-C5H9NH2)2I2(6.9g；10mmol)溶于50mL 60-70％HClO4的懸浮液中。在反應(yīng)過(guò)程中，提取樣品用195Pt NMR分光法分析。在室溫下攪拌4天后，過(guò)濾棕色的沉淀([PtII(c-C5H9NH2)I2]2)，用水洗滌，真空干燥。2(5.25g；5mmol)與5mL的1.5M NH4OH混合于25mL水中，混合物室溫下攪拌過(guò)夜。同樣，整個(gè)反應(yīng)通過(guò)195Pt NMR分光鏡監(jiān)控。過(guò)濾形成的黃色沉淀(cis-PtII(NH3)(c-C5H9NH2)I2)，用水洗滌，真空干燥。
cis-PtII(NH3)(c-C5H9NH2)I2(2.20g；4mmol)與AgNO3(1.25g；7.4mmol)混合于200mL水中，黑暗中攪拌過(guò)夜。通過(guò)硅藻土過(guò)濾移走AgI后，在濾液中加入10mL濃縮的HCl。將混合物攪拌3小時(shí)，然后在降低壓力的情況下蒸發(fā)至約2mL。將黃色沉淀(cis-PtII(NH3)(c-C5H9NH2)Cl2)過(guò)濾，用水和丙酮過(guò)濾，真空干燥。
B.氨絡(luò)物/環(huán)庚胺-二氯-鉑(II)[PtII(NH3)(c-C7H11N)Cl2](化合物#7)的制備K2PtCl4(8.30g；20mmol)水性溶液用KI(33.2g；200mmol)處理，在室溫?cái)嚢?0分鐘。在所得的K2PtCl4溶液中逐滴加入二當(dāng)量的環(huán)庚胺。攪拌30分鐘，形成黃色的沉淀(cis-PtII(c-C7H11NH2)2I2)。過(guò)濾該黃色的沉淀，并用水徹底地洗滌。該沉淀從DMF/H2O混合物中再結(jié)晶。用水、甲醇和乙醚洗滌后，產(chǎn)物(cis-PtII(c-C7H11NH2)2I2)進(jìn)行真空干燥。
150毫升(mL)的乙醇被加入到cis-PtII(c-C7H11NH2)2I2(10mmol)溶于50mL 60-70％HClO4的懸浮液中。在反應(yīng)過(guò)程中，提取樣品用195Pt NMR分光鏡分析。在室溫下攪拌4天后，過(guò)濾棕色的沉淀([PtII(c-C7H11NH2)I2]2)，用水洗滌，真空干燥。2(5mmol)與5mL的1.5M NH4OH混合于25mL的水中，混合物室溫下攪拌過(guò)夜。同樣，整個(gè)反應(yīng)通過(guò)195Pt NMR分光鏡監(jiān)控。過(guò)濾形成的黃色沉淀(cis-PtII(NH3)(c-C7H11NH2)I2)，用水洗滌，真空干燥。
cis-PtII(NH3)(c-C7H11NH2)I2(4mmol)與AgNO3(1.25g；7.4mmol)混合于200mL水中，黑暗中攪拌過(guò)夜。通過(guò)硅藻土過(guò)濾移走AgI后，在濾液中加入10mL濃縮的HCl。將混合物攪拌3小時(shí)，然后在降低壓力的情況下蒸發(fā)至約2mL。將黃色沉淀(cis-PtII(NH3)(c-C7H11N)Cl2)過(guò)濾，用水和丙酮過(guò)濾，真空干燥。
C.氨絡(luò)物/哌啶-二氯-鉑(II)[PtII(NH3)(C5H11N)Cl2(化合物#11)的制備將Cosa鹽K[Pt(NH3)Cl3](1.98g；5.5mmol)溶解在50mL的水中。KI(9.19g；55mmol)溶解在100mL水中，加入到Cosa鹽溶液中。隨著KI溶液的加入，形成棕色溶液。反應(yīng)混合物攪拌20分鐘。哌啶(55mmol)溶解在10mL水中，逐滴加入到反應(yīng)混合物中，直至形成金黃色沉淀([Pt(NH3)(C5H11N)I2])。反應(yīng)混合物保持?jǐn)嚢?小時(shí)。過(guò)濾沉淀，用丙酮洗滌，真空干燥。獲得金黃色的化合物[Pt(NH3)(C5H11N)I2]。將[Pt(NH3)(C5H11N)I2](2.39g，4.24mmol)懸浮在100mL水中。加入溶于100mL水中的AgNO3(1.44g；8.48mmol)。反應(yīng)混合物室溫下在黑暗中攪拌24小時(shí)。過(guò)濾AgI沉淀，濾液蒸發(fā)至50mL。攪拌的同時(shí)逐滴加入HCl(1∶1)。獲得亮黃色的化合物[Pt(NH3)(C5H11N)Cl2]。過(guò)濾，用熱水重結(jié)晶，真空干燥。
D.氨絡(luò)物/六亞甲基亞胺-二氯-鉑(II)cis-PtII(NH3)(C6H13N)Cl2(化合物#12)的制備將Cosa鹽K[Pt(NH3)Cl3](1.98g；5.5mmol)溶解在50mL水中。將KI(9.19g；55mmol)溶解在100mL水中，加入到Cosa鹽溶液中，形成棕色溶液。反應(yīng)混合物攪拌20分鐘。六亞甲基亞胺(55mmol)溶解在10mL水中，逐滴加入到反應(yīng)混合物中，直至形成金黃色沉淀(Pt(NH3)(C6H13N)I2)。反應(yīng)混合物保持?jǐn)嚢?小時(shí)。過(guò)濾沉淀，用丙酮洗滌，真空干燥。獲得金黃色的化合物(Pt(NH3)(C6H13N)I2)。Pt(NH3)(C6H13N)I2(4.24mmol)懸浮在100mL水中。加入溶于100mL水中的AgNO3(1.44g；8.48mmol)。反應(yīng)混合物室溫下在黑暗中攪拌24小時(shí)。過(guò)濾AgI沉淀，濾液蒸發(fā)至50mL。攪拌的同時(shí)逐滴加入HCl(1∶1)。獲得亮黃色的化合物[Pt(NH3)(C6H13N)Cl2]。過(guò)濾，用熱水重結(jié)晶，真空干燥。
E.氨絡(luò)物/六亞甲基亞胺-四氯-鉑(IV)PtIV(NH3)(C6H13N)Cl4(化合物#17)的制備10ml的H2O2加入到溶于200mL水的PtII(NH3)(C6H13N)Cl2(1.0g；2.61mmol)懸浮液中，攪拌15分鐘。過(guò)濾溶液，濃縮到最小體積，用丙酮沉淀。獲得黃色產(chǎn)物(PtIV(NH3)(C6H13N)trans-(OH)2Cl2)。真空干燥(PtIV(NH3)(C6H13N)trans-(OH)2Cl2)。將PtIV(NH3)(C6H13N)trans-(OH)2Cl2(0.650g；1.64mmol)溶解在100mL水中，并加入20mL濃縮的HCl。反應(yīng)混合物在室溫下保持?jǐn)嚢?4小時(shí)。獲得澄清的黃色溶液。過(guò)濾，濃縮到最小體積，以獲得黃色晶體狀固體(PtIV(NH3)(C6H13N)Cl4)。過(guò)濾，用水洗滌，真空干燥。
VI.藥物制劑本發(fā)明的藥物制劑/組合物包含有效量的鉑復(fù)合物，如這里所描述的。在各種其它的實(shí)施方式中，鉑復(fù)合物與生物學(xué)調(diào)節(jié)劑的組合溶解或分散在藥學(xué)可接受的載體中。屬于“藥學(xué)或藥理學(xué)可接受的”是指當(dāng)施加給動(dòng)物(如人)時(shí)，分子實(shí)體和組合物不產(chǎn)生不利的、過(guò)敏的或其它不適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)。通過(guò)本發(fā)明的揭示，包含本發(fā)明的鉑復(fù)合物和/或與谷胱甘肽合成抑制劑或其它活性成分組合的藥物組合物的制備是本領(lǐng)域技術(shù)人員可知的。本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的藥物組合物及方法的例子和指導(dǎo)可在“雷明頓藥物科學(xué)”第18版，Mack出版公司，1990中找到，納入本文作為參考。此外，對(duì)于動(dòng)物(如人)的給藥，應(yīng)理解，所述制劑應(yīng)該符合如FDA局的生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)所要求的無(wú)菌、熱原性、常規(guī)安全性和純化標(biāo)準(zhǔn)。
如這里所用，“藥學(xué)可接受的載體”包括任何以及全部的溶劑、分散介質(zhì)、包衣、表面活性劑、抗氧化劑、防腐劑(如抗細(xì)菌劑、抗真菌劑)、等滲劑、吸附延遲劑、鹽、防腐劑、藥物、藥物穩(wěn)定機(jī)、凝膠、粘合劑、賦形劑、分解劑、滑潤(rùn)劑、甜味劑、調(diào)味劑、染料，類(lèi)似這些材料以及它們的組合，這對(duì)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是已知的(參見(jiàn)如“雷明頓藥物科學(xué)”第18版，Mack出版公司，1990，pp1289-1329，納入本文作為參考)。除了任何與活性成分不相容的常規(guī)載體，預(yù)計(jì)其能用于治療或藥物組合物中。
包含本發(fā)明的鉑復(fù)合物或本發(fā)明的鉑復(fù)合物與谷胱甘肽合成抑制劑之組合的組合物，根據(jù)其是否以固體或液體形式給藥以及其是否需要為這種給藥途徑如注射進(jìn)行滅菌，可包含不同類(lèi)型的載體。本發(fā)明可靜脈內(nèi)、皮內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下、口服、通過(guò)注射、通過(guò)連續(xù)灌輸、通過(guò)脂質(zhì)組合物(如脂質(zhì)體)、或通過(guò)其它方法或任何前述方法的組合進(jìn)行給藥，如本領(lǐng)域普通人員所已知的(參見(jiàn)，如“雷明頓藥物科學(xué)”第18版，Mack出版公司，1990，納入本文作為參考)。預(yù)期的或包含在本發(fā)明中的組合物包括常規(guī)的藥物制劑，包括靜脈內(nèi)給藥的制劑或通過(guò)任何其它方法或任何如本領(lǐng)域普通人員所已知的以前描述的組合給藥(參見(jiàn)，如“雷明頓藥物科學(xué)”第18版，Mack出版公司，1990，納入本文作為參考)。
給予受試者的本發(fā)明的組合物的實(shí)際劑量可通過(guò)物理和生理的因素來(lái)決定，如體重、病情的嚴(yán)重性、需要治療的疾病類(lèi)型、以前的或同時(shí)正在進(jìn)行的治療干擾、患者的突發(fā)性疾病以及給藥的途徑。不管怎樣，負(fù)責(zé)給藥的專(zhuān)業(yè)人員能確定組合物中活性成分的濃度以及給予個(gè)體受試者的適當(dāng)?shù)膭┝俊?br> 在某些實(shí)施方式中，藥物組合物可包含，如至少包含0.1％的活性化合物。在其它的實(shí)施萬(wàn)式中，活性化合物可占約2％至約75％重量單位、或約25％至約60％重量單位，以及任何從其中引伸出來(lái)的范圍。在其它的非限制實(shí)施例中，每次給藥劑量也可包含從約1微克/kg/體重、約5微克/kg/體重、約10微克/kg/體重、約50微克/kg/體重、約100微克/kg/體重、約200微克/kg/體重、約350微克/kg/體重、約500微克/kg/體重、約1毫克/kg/體重、約5毫克/kg/體重、約10毫克/kg/體重、約50毫克/kg/體重、約100毫克/kg/體重、約200毫克/kg/體重、約350毫克/kg/體重、約500毫克/kg/體重，至約1000毫克/kg/體重或更多，以及包含任何從其中引伸出來(lái)的范圍。在從這里列出的數(shù)字中引伸出范圍的非限制的實(shí)施例中，可給藥的范圍為約5mg/kg/體重至約100mg/kg/體重，約5微克/kg/體重至約500毫克/kg/體重等，基于前述的數(shù)字。同樣，劑量可以約為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、30、40、45、50、60、70、80、90、100或更高mg/m2，包括它們之間的所有劑量。
在各種實(shí)施方式中，藥物制劑或組合物中鉑復(fù)合物的濃度約在0.1μM、0.5μM、1μM、2μM、3μM、4μM、5μM、6μM、7μM、8μM、9μM、10μM、25μM、50μM、0.1mM、0.5mM、1mM、至10μM、11μM、12μM、13μM、14μM、15μM、16μM、17μM、18μM、19μM、20μM、50μM、0.1mM、1mM、2 mM、3 mM、4mM、5 mM、6mM、7mM、8mM、9mM、或10mM的范圍內(nèi)。
無(wú)論如何，所述制劑或組合物可包含各種抗氧化劑以延遲一種或多種組分的氧化。并且，可以通過(guò)防腐劑如各種抗細(xì)菌劑和抗真菌劑預(yù)防微生物的作用，包括但不限于對(duì)羥基苯甲酸(如對(duì)羥基苯甲酸甲酯，對(duì)羥基苯甲酸丙酯)、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞或其組合。
本發(fā)明的治療組合物可配制成游離堿、中性或鹽形式的組合物。藥學(xué)可接受的鹽，包括酸添加的鹽，如那些與蛋白質(zhì)組合物的自由氨基形成的，或與無(wú)機(jī)酸(例如鹽酸或磷酸)形成的，或與有機(jī)酸(如醋酸、草酸、酒石酸、扁桃酸)形成的鹽。與自由羧基形成的鹽也可來(lái)自無(wú)機(jī)堿，如鈉、鉀、銨、鈣或鐵的氫氧化物；或有機(jī)堿如異丙胺、三甲胺、組氨酸或普魯卡因(procaine)。
在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的治療組合物通常制備成經(jīng)由一些途徑如靜脈內(nèi)注射來(lái)給藥。在這些實(shí)施方式中，組合物可包括如溶液、懸浮液、乳劑或其組合。
無(wú)菌的可注射溶液通過(guò)將活性化合物以所需量加入到適當(dāng)?shù)娜軇┲衼?lái)制備，加入各種前面列舉的所需的其它成分，接著過(guò)濾滅菌。通常，通過(guò)將各種滅菌的活性成分加入到滅菌的賦形劑中來(lái)制備分散相，所述滅菌的賦形劑包含基礎(chǔ)分散介質(zhì)和/或其它成分。在用于制備滅菌的可注射溶液、懸浮液或乳劑的滅菌粉末情況下，優(yōu)選的制備方法是真空干燥或凍干技術(shù)，其從事先滅菌過(guò)濾的液體介質(zhì)中生產(chǎn)具有活性成分以及任何附加的所需成分的粉末。如果需要，液體介質(zhì)應(yīng)是經(jīng)適當(dāng)緩沖的，并且在注射前，液體稀釋物首先用足夠的鹽或葡萄糖進(jìn)行等滲處理。也考慮了用于直接注射的高度濃縮的組合物的制備，預(yù)期其中DMSO作為溶劑的應(yīng)用將引起非?？焖俚臐B透，傳遞高濃度的活性劑到一個(gè)小的部位。
在制造和儲(chǔ)藏條件下，所述組合物必須是穩(wěn)定的，在防止微生物(如細(xì)菌和真菌)污染作用的情況下應(yīng)進(jìn)行保存。應(yīng)注意，應(yīng)該保持最小的內(nèi)毒素污染，在安全的水平上，如低于0.5ng/mg蛋白。
VII.實(shí)施例以下的實(shí)施例屬于本發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施方式的例證。本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)注意，伴隨著本發(fā)明人所發(fā)現(xiàn)的技術(shù)，在實(shí)施例中揭示的技術(shù)在本發(fā)明的實(shí)踐中效力很好，因而可認(rèn)為構(gòu)成了本發(fā)明實(shí)施的優(yōu)選方式。然而，根據(jù)這里所揭示的，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該意識(shí)到，在特異的實(shí)施方式中可進(jìn)行許多的改變，它們是被公開(kāi)的并仍然獲得相同或相似的結(jié)果，并沒(méi)有背離本發(fā)明的意愿和范圍。
實(shí)施例1實(shí)驗(yàn)步驟卵巢A2780和2008細(xì)胞系是順鉑敏感的，而相應(yīng)的2780CP和2008/C13*細(xì)胞系經(jīng)過(guò)體外與順鉑接觸后，經(jīng)選擇是具有抗性的。SKOV-3細(xì)胞系建立自一個(gè)對(duì)順鉑治療產(chǎn)生抗性的患者，并認(rèn)為是順鉑抗性的模型。A2780和2780CP細(xì)胞具有野生型p53功能，而SKOV-3沒(méi)有p53功能。2008和2008/C131細(xì)胞的p53狀態(tài)目前未知。
細(xì)胞毒評(píng)估步驟。所有的細(xì)胞系保持在添加了10％胎牛血清、50μg/ml青霉素、50μg/ml鏈霉素、100μg/ml新霉素和0.3mg/ml L-谷氨酸的RPMI 1640培養(yǎng)基中。卵巢細(xì)胞系也需要2μg/ml胰島素，用于最大化生長(zhǎng)。細(xì)胞在37℃、含有潮濕的氣體5％CO2:95％空氣下單層生長(zhǎng)。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)MTT試驗(yàn)測(cè)定細(xì)胞毒性。簡(jiǎn)要地說(shuō)，指數(shù)生長(zhǎng)細(xì)胞進(jìn)行胰蛋白酶化，以在使用前移走它們。稀釋腫瘤細(xì)胞至適當(dāng)?shù)臐舛?2,000-30,000細(xì)胞/ml)后，在96孔微量滴定板的每個(gè)孔中加入100μl細(xì)胞懸浮液的等分試樣。使細(xì)胞附著過(guò)夜，然后與BSO接觸24小時(shí)，BSO的濃度等于或小于最大耐受濃度(MTC)。在加入BSO 22小時(shí)后，加入鉑復(fù)合物，2小時(shí)后洗滌細(xì)胞并再孵育。再過(guò)5天后，當(dāng)對(duì)照細(xì)胞在指數(shù)生長(zhǎng)階段時(shí)，將50μl的MTT溶液(3mg/ml)加入到每個(gè)孔中。接著進(jìn)行3小時(shí)的孵育，將培養(yǎng)介質(zhì)移走，用50μl的100％DMSO取代，以溶解MTT甲(formazan)晶體。滴定板在搖晃器上搖動(dòng)5分鐘，在多孔掃描分光光度計(jì)上測(cè)量570nm的吸光度。
IC50值定義為，與對(duì)照孔相比，抑制50％細(xì)胞生長(zhǎng)的藥物濃度(μM)。IC50濃度通過(guò)應(yīng)用計(jì)算機(jī)程序，依據(jù)是否符合S型(sigmoidal)曲線來(lái)確定?？剐砸蛩匾钥剐约?xì)胞系對(duì)應(yīng)的IC50與親代細(xì)胞系對(duì)應(yīng)的IC50的比例來(lái)計(jì)算。劑量修正系數(shù)(DMF)獲自沒(méi)有BSO的IC50與帶有BSO的IC50的比例。
實(shí)施例2抗腫瘤活性評(píng)估本發(fā)明人已經(jīng)鑒定了特異的鉑復(fù)合物，當(dāng)其與GSH合成抑制劑(如BSO)組合給藥時(shí)，顯示出(1)抗腫瘤活性大大增強(qiáng)，以及(2)對(duì)于順鉑-抗性的細(xì)胞具有敏感性。數(shù)據(jù)證明，在等基因?qū)Φ拿舾行院涂剐缘哪[瘤模型中，特異性類(lèi)似物對(duì)于抗性細(xì)胞的活性比對(duì)敏感細(xì)胞的活性大大增強(qiáng)(表1)。
表1.在BSO不存在或存在下，順鉑以及類(lèi)似物對(duì)于人A2780和2780CP細(xì)胞系的細(xì)胞毒性
MTC＝BSO最大耐受濃度。
nd＝未確定。
有人提出，提高水平的GSH可構(gòu)建一種順鉑抗性的機(jī)制，并且通過(guò)降低抗腫瘤劑可用的量，GSH使鉑復(fù)合物失去活性。更近地時(shí)候，已經(jīng)暗示GSH參與程序性細(xì)胞死亡或凋亡途徑的調(diào)節(jié)。提高水平的GSH可抑制凋亡過(guò)程，因而提高對(duì)抗腫瘤治療或處理的抗性。因此，本發(fā)明人確定用BSO或其它抑制GSH活性或合成的化合物在細(xì)胞水平上降低GSH是否提高順鉑和其它鉑復(fù)合物或化合物的抗腫瘤活性。
順鉑和許多鉑類(lèi)似物在與BSO聯(lián)合時(shí)顯示提高的抗腫瘤活性，提高倍數(shù)在敏感性和抗性模型中都低于2倍(表2)。特異的類(lèi)似物，如復(fù)合物號(hào)7、11、12和17(分別是氨絡(luò)物/環(huán)庚胺-二氯-鉑(II)、氨絡(luò)物/哌啶-二氯-鉑(II)、氨絡(luò)物/六亞甲基亞胺-二氯-鉑(II)、和氨絡(luò)物/六亞甲基亞胺-四氯-鉑(IV))在GSH-去除的人2780CP腫瘤細(xì)胞中提高活性5-14倍。這些類(lèi)似物還顯示出，與對(duì)相應(yīng)的A2780順鉑-敏感性細(xì)胞相比，它們對(duì)于順鉑-抗性細(xì)胞的選擇性效率大大提高。這些類(lèi)似物的抗性倍數(shù)(resistance factor)同樣大大地降低了，如下面表3中所證實(shí)的。特別地，復(fù)合物號(hào)11、12和17分別顯示抗性系數(shù)為0.39、0.44和0.27(表3)。這些提高的活性在攜帶野生型p53或無(wú)p53(表4-6)的人腫瘤細(xì)胞系中可見(jiàn)，被發(fā)現(xiàn)與p53狀態(tài)無(wú)關(guān)。
表2.在人A2780和2780CP細(xì)胞系中順鉑及類(lèi)似物與BSO相結(jié)合的劑量修正系數(shù)(DMF)
DMF以不存在BSO(對(duì)照)的IC50與存在BSO的IC50的比例來(lái)確定。
MTC＝BSO最大耐受濃度nd＝未確定。
表3.在不存在或存在BSO的情況下，人2780CP細(xì)胞系中順鉑和類(lèi)似物的抗性系數(shù)
抗性系數(shù)以存在或不存在BSO的2780CP細(xì)胞中的IC50與不存在BSO的A2780細(xì)胞中的IC50的比例來(lái)確定。
MTC＝BSO最大耐受濃度nd＝未確定。
表4.在BSO不存在或存在下，順鉑和類(lèi)似物對(duì)抗人腫瘤細(xì)胞系的細(xì)胞毒性
由不存在(對(duì)照)或存在BSO所確定的鉑復(fù)合物的細(xì)胞毒性[所有細(xì)胞系采用最大耐受濃度(MTC)，除了SKOV-3，其采用次-MTC]。
nd＝未確定表5.在BSO不存在或存在下，人腫瘤細(xì)胞系中順鉑和類(lèi)似物的劑量修正系數(shù)(DMF)
DMF以不存在(對(duì)照)BSO的IC50與存在BSO(所有細(xì)胞系采用BSO最大耐受濃度(MTC)，除了SKOV-3，其采用次-MTC)的IC50的比例來(lái)確定。
nd＝未確定。
表6.在BSO不存在或存在下，人腫瘤細(xì)胞系中順鉑和類(lèi)似物的抗性系數(shù)(RF)
抗性系數(shù)以(1)存在或不存在BSO的2780CP細(xì)胞中IC50與不存在BSO的A2780細(xì)胞中IC50的比例，或(2)存在或不存在BSO的2008/C13*和SKOV-3細(xì)胞系中IC50與不存在BSO的2008細(xì)胞中IC50的比例來(lái)確定。
MTC＝BSO最大耐受濃度。
nd＝未確定。
****************************************根據(jù)本發(fā)明所公開(kāi)的，這里揭示和要求的所有組合物和/或方法可被制作和實(shí)現(xiàn)，沒(méi)有不適當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)。當(dāng)本發(fā)明的組合物和方法以優(yōu)選的實(shí)施方式的方式被描述時(shí)，對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見(jiàn)的是可對(duì)組合物和/或方法以及方法的步驟次序進(jìn)行改變，這不背離本發(fā)明的概念、意愿和范圍。更特別地，很顯然某些化學(xué)和生理學(xué)相關(guān)的試劑可適合作為這里描述的試劑，將達(dá)到相同或相似的結(jié)果。所有這些對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)顯而易見(jiàn)的、相似的取代和變化屬于本發(fā)明的意愿、范圍和概念內(nèi)，如附加的權(quán)利要求所限定的。
參考文獻(xiàn)以下的參考文獻(xiàn)提供了可采用的步驟或其它詳細(xì)資料，對(duì)這里所公開(kāi)的內(nèi)容作補(bǔ)充，特異地納入本文作為參考。
美國(guó)專(zhuān)利4,177,263Anderson，Adv.Pharmacol.，3865-78，1997.
Anderson和Meister，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，80707-711，1983.
Burg等，Bioorg.Med.Chem.，10(1)195-205，2002Campbell等，Anal.Biochem.，194268-277，1991
Comess等，Biochemistry，31，3975-3990，1992.
Dikici等，Pediatr.Int.，43(6)577-580，2001.
Eastman，In順鉑，一種主要抗癌藥物的化學(xué)和生物化學(xué)，Lippert(ed.)，Wiley-VCH，蘇黎世，瑞士111-134，1999.
Esmali等，Am.J.Ophthalmol.，132(6)945-947，2001Gzrini等，Am.J.Kidney Dis，38(6)E35，2001.
Griffith，J.Biol.Chem.，25713704-13712，1982.
Griffith和Meister，J.Biol.Chem.，2547558-7560，1979.
Hatzakis等，J.Interferon.Cytokine Res，21(10)861-869，2001.
Jamieson和Lippard，Chem.Rev.，992467-2498，1999.
Johnson et al，.Prog.Clin.Biochem.Med.，101-24，1989.
Kolokol’tsov等，Bull Exp.Biol.Med.，132(1)686-688，2001Kunze，Arch.Pharm.，329(11)503-509，1996.
Lepre和Lippard，Nucleic Acids Mol.Biol.，49-38，1990.
Meister和Anderson，Glutathione.Annl.Rev.Biochen.，52711-760，1983.
O’Dwyer等，在順鉑，一種主要抗癌藥物的化學(xué)和生物化學(xué)，Lippert(ed.)，Wiley-VCH，蘇黎世，瑞士，31-72，1999.
Reedijk，Chem.Commun.，801-806，1996.
雷明頓藥物科學(xué)，15thed.，第624-652頁(yè)，Mack出版公司，Easton，PA，1980.
雷明頓藥物科學(xué)，18thEd.Mack出版公司，第1289-1329頁(yè)，1990.
Richman和Meister，J.Biol.Chem.，2501422-1426，1973.
Rosenberg，在順鉑，一種主要抗癌藥物的化學(xué)和生物化學(xué)，Lippert(ed.)，Wiley-VCH，蘇黎世，瑞士，3-30，1999/Tew，Cancer Res.54(16)4313-4320，1994.
Tew等，Adv.Drug Delic.Rev.，26(2-3)91-104，1997.
Zamble和Lippard，在順鉑，一種主要抗癌藥物的化學(xué)和生物化學(xué)，Lippert(ed.)，Wiley-VCH，蘇黎世，瑞士，73-110，1999.
權(quán)利要求
1.一種抗腫瘤制劑，包含一種具有以下結(jié)構(gòu)式的化合物 或其鹽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的制劑，它還包含谷胱甘肽的負(fù)調(diào)節(jié)劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的制劑，其中所述谷胱甘肽的負(fù)調(diào)節(jié)劑是谷胱甘肽合成抑制劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的制劑，其中谷胱甘肽合成抑制劑是L-丁硫氨酸亞砜胺。
5.一種抗腫瘤制劑，它包含一種具有以下結(jié)構(gòu)式的化合物 或其鹽。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的制劑，它還包含谷胱甘肽的負(fù)調(diào)節(jié)劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的制劑，其中所述谷胱甘肽的負(fù)調(diào)節(jié)劑是谷胱甘肽合成抑制劑。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的制劑，其中谷胱甘肽合成抑制劑是L-丁硫氨酸亞砜胺。
9.一種抗腫瘤制劑，包含一種具有以下結(jié)構(gòu)式的化合物 或其鹽。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的制劑，它還包含谷胱甘肽的負(fù)調(diào)節(jié)劑。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的制劑，其中所述谷胱甘肽的負(fù)調(diào)節(jié)劑是谷胱甘肽合成抑制劑。
12.根據(jù)權(quán)利要求11的制劑，其中谷胱甘肽合成抑制劑是L-丁硫氨酸亞砜胺。
13.一種抗腫瘤制劑，它包含一種具有以下結(jié)構(gòu)式的化合物 或其鹽。
14.根據(jù)權(quán)利要求13的制劑，它還包含谷胱甘肽的負(fù)調(diào)節(jié)劑。
15.根據(jù)權(quán)利要求14的制劑，其中所述谷胱甘肽的負(fù)調(diào)節(jié)劑是谷胱甘肽合成抑制劑。
16.根據(jù)權(quán)利要求15的制劑，其中谷胱甘肽合成抑制劑是L-丁硫氨酸亞砜胺。
17.一種藥物制劑，它包含選自以下組的鉑復(fù)合物氨絡(luò)物/環(huán)庚胺-二氯-鉑(II)、氨絡(luò)物/哌啶-二氯-鉑(II)、氨絡(luò)物/六亞甲基亞胺-二氯-鉑(II)和氨絡(luò)物/六亞甲基亞胺-四氯-鉑(IV)。
18.根據(jù)權(quán)利要求17的藥物制劑，其中選定的鉑復(fù)合物的濃度大約在0.1mM至20mM范圍內(nèi)。
19.根據(jù)權(quán)利要求17的藥物制劑，其中選定的鉑復(fù)合物的濃度大約在1mM至10mM范圍內(nèi)。
20.根據(jù)權(quán)利要求17的藥物制劑，其中選定的鉑復(fù)合物的濃度大約在1mM至5mM范圍內(nèi)。
21.根據(jù)權(quán)利要求17的藥物制劑，其中該制劑還包含谷胱甘肽的生物學(xué)調(diào)節(jié)劑。
22.根據(jù)權(quán)利要求21的藥物制劑，其中所述的谷胱甘肽的生物學(xué)調(diào)節(jié)劑是谷胱甘肽合成抑制劑。
23.根據(jù)權(quán)利要求22的藥物制劑，其中，所述的谷胱甘肽合成抑制劑是L-丁硫氨酸亞砜胺。
24.根據(jù)權(quán)利要求17的藥物制劑，其中L-丁硫氨酸亞砜胺的濃度大約在1μM至300μM范圍內(nèi)。
25.根據(jù)權(quán)利要求17的藥物制劑，其中L-丁硫氨酸亞砜胺的濃度大約在10μM至200μM范圍內(nèi)。
26.根據(jù)權(quán)利要求17的藥物制劑，其中L-丁硫氨酸亞砜胺的濃度大約在20μM至100μM范圍內(nèi)。
27.根據(jù)權(quán)利要求17的藥物制劑，它還是靜脈內(nèi)注射的藥學(xué)制劑。
28.一種抑制順鉑-抗性細(xì)胞的增殖的方法，該方法包括給予所述細(xì)胞氨絡(luò)物/環(huán)庚胺-二氯-鉑(II)、氨絡(luò)物/哌啶-二氯-鉑(II)、氨絡(luò)物/六亞甲基亞胺-二氯-鉑(II)、或氨絡(luò)物/六亞甲基亞胺-四氯-鉑(IV)。
29.根據(jù)權(quán)利要求28的方法，其中所述順鉑-抗性細(xì)胞位于受試者體內(nèi)。
30.根據(jù)權(quán)利要求29的方法，其中所述受試者是哺乳動(dòng)物。
31.根據(jù)權(quán)利要求30的方法，其中，所述的哺乳動(dòng)物是人或小鼠。
32.根據(jù)權(quán)利要求28的方法，它還包括給予谷胱甘肽的生物學(xué)調(diào)節(jié)劑。
33.根據(jù)權(quán)利要求32的方法，其中所述谷胱甘肽的生物學(xué)調(diào)節(jié)劑是谷胱甘肽合成抑制劑。
34.根據(jù)權(quán)利要求33的方法，其中谷胱甘肽合成的抑制劑是L-丁硫氨酸亞砜胺。
35.一種治療癌細(xì)胞的方法，該方法包括給予所述細(xì)胞氨絡(luò)物/環(huán)庚胺-二氯-鉑(II)、氨絡(luò)物/哌啶-二氯-鉑(II)、氨絡(luò)物/六亞甲基亞胺-二氯-鉑(II)、或氨絡(luò)物/六亞甲基亞胺-四氯-鉑(IV)。
36.根據(jù)權(quán)利要求35的方法，其中所述癌細(xì)胞位于受試者體內(nèi)。
37.根據(jù)權(quán)利要求35的方法，其中所述受試者是哺乳動(dòng)物。
38.根據(jù)權(quán)利要求37的方法，其中所述哺乳動(dòng)物是人或小鼠。
39.根據(jù)權(quán)利要求35的方法，它還包括給予谷胱甘肽的生物學(xué)調(diào)節(jié)劑。
40.一種增強(qiáng)細(xì)胞的抗腫瘤活性的方法，該方法包括給予制劑，該制劑包含選自以下組的鉑復(fù)合物氨絡(luò)物/環(huán)庚胺-二氯-鉑(II)、氨絡(luò)物/哌啶-二氯-鉑(II)、氨絡(luò)物/六亞甲基亞胺-二氯-鉑(II)、和氨絡(luò)物/六亞甲基亞胺-四氯-鉑(IV)，以及結(jié)合使用的谷胱甘肽合成的抑制劑。
41.根據(jù)權(quán)利要求40的方法，其中所述谷胱甘肽合成的抑制劑為L(zhǎng)-丁硫氨酸亞砜胺。
42.根據(jù)權(quán)利要求41的方法，其中L-丁硫氨酸亞砜胺的濃度大約在1μM至300μM范圍。
43.根據(jù)權(quán)利要求41的方法，其中L-丁硫氨酸亞砜胺的濃度大約在10μM至200μM范圍。
44.根據(jù)權(quán)利要求41的方法，其中L-丁硫氨酸亞砜胺的濃度大約在20μM至100μM范圍。
45.一種制備氨絡(luò)物/環(huán)庚胺-二氯-鉑(II)的方法，該方法包括a)用200mmol的KI處理20mmol的K2PtCl4水溶液，室溫下攪拌10分鐘；b)逐滴加入二倍當(dāng)量的環(huán)庚胺，攪拌30分鐘，形成cis-PtII(c-C7H11NH2)2I2沉淀；c)過(guò)濾和用水洗滌cis-PtII(c-C7H11NH2)2I2沉淀；d)從DMF/H2O混合物再結(jié)晶cis-PtII(c-C7H11NH2)2I2沉淀，用水、甲醇和乙醚洗滌；e)真空干燥cis-PtII(c-C7H11NH2)2I2沉淀；f)在50ml 60-70％HClO4中將干燥的cis-PtII(c-C7H11NH2)2I2沉淀懸浮，在懸浮液中加入150mL乙醇，室溫下攪拌，形成褐色的[PtII(c-C7H11NH2)I2]2沉淀；g)過(guò)濾該褐色的[PtII(c-C7H11NH2)I2]2沉淀，并用水洗滌；h)真空干燥經(jīng)洗滌的褐色[PtII(c-C7H11NH2)I2]2沉淀；i)將5mmol的褐色[PtII(c-C7H11NH2)I2]2沉淀與5ml的1.5M NH4OH在25ml的水中混合，室溫下攪拌過(guò)夜，形成黃色的cis-PtII(NH3)(c-C7H11NH2)2I2沉淀；j)過(guò)濾該黃色的cis-PtII(NH3)(c-C7H11NH2)I2沉淀，用水洗滌；k)真空干燥經(jīng)洗滌的cis-PtII(NH3)(c-C7H11NH2)I2沉淀；l)將4mmol的cis-PtII(NH3)(c-C7H11NH2)I2沉淀與7.4mmol的AgNO3在200ml水中混合，在黑暗中攪拌過(guò)夜，形成AgI沉淀；m)通過(guò)硅藻土過(guò)濾移走AgI沉淀，形成cis-PtII(NH3)(c-C7H11NH2)NO3濾出液；n)在cis-PtII(NH3)(c-C7H11NH2)NO3濾出液中加入10mL濃縮的HCl，攪拌該混合物3小時(shí)，形成黃色的PtII(NH3)(C7H11N)Cl2沉淀；o)減壓蒸發(fā)該混合物至約2mL，過(guò)濾黃色的PtII(NH3)(C7H11N)Cl2沉淀；p)用水和丙酮洗滌黃色的PtII(NH3)(C7H11N)Cl2沉淀，真空干燥經(jīng)洗滌的黃色的PtII(NH3)(C7H11N)Cl2沉淀。
46.一種制備氨絡(luò)物/哌啶-二氯-鉑(II)的方法，該方法包括a)將5.5mmol的K[Pt(NH3)Cl3]溶解在50mL水中；b)在100ml水中加入55mmol的KI，形成棕色溶液，攪拌20分鐘；c)在棕色溶液逐滴加入10ml水中的55mmol哌啶，直至形成金黃色Pt(NH3)(C5H11N)I2沉淀，攪拌1小時(shí)；d)過(guò)濾金黃色的Pt(NH3)(C5H11N)I2沉淀，用丙酮洗滌；e)真空干燥經(jīng)洗滌的金黃色Pt(NH3)(C5H11N)I2沉淀；f)在100ml水中懸浮4.24mmol的Pt(NH3)(C5H11N)I2沉淀；g)加入在100ml水中的8.48mmol AgNO3，黑暗中室溫下攪拌24小時(shí)；h)過(guò)濾AgI沉淀；i)蒸發(fā)AgI濾液至50mL；j)在攪拌時(shí)逐滴加入1∶1 HCl溶液，形成亮黃色Pt(NH3)(C5H11N)Cl2化合物；以及k)過(guò)濾該亮黃色Pt(NH3)(C5H11N)Cl2化合物，在熱水中再結(jié)晶該亮黃色Pt(NH3)(C5H11N)Cl2化合物，并且真空干燥該亮黃色Pt(NH3)(C5H11N)Cl2晶體。
47.一種制備氨絡(luò)物/六亞甲基亞胺-二氯-鉑(II)的方法，該方法包括a)在50mL水中溶解5.5mmol的K[Pt(NH3)Cl3]；b)加入在100mL水中的55mmol KI，形成棕色溶液，并攪拌20分鐘；c)向棕色溶液中逐滴加入在10mL水中的55mmol的六亞甲基亞胺，直至形成金黃色的Pt(NH3)(C6H13N)I2沉淀，攪拌1小時(shí)；d)過(guò)濾金黃色的Pt(NH3)(C6H13N)I2沉淀，用丙酮洗滌；e)真空干燥經(jīng)洗滌的金黃色的Pt(NH3)(C6H13N)I2沉淀；f)在100ml水中懸浮4.24mmol的Pt(NH3)(C6H13N)I2沉淀；g)加入在100mL水中的8.48mmol AgNO3，室溫下在黑暗中攪拌24小時(shí)；h)過(guò)濾AgI沉淀；i)蒸發(fā)AgI濾液至50mL；j)邊攪拌邊逐滴加入1∶1 HCl溶液，形成亮黃色Pt(NH3)(C6H13N)Cl2化合物；以及k)過(guò)濾亮黃色Pt(NH3)(C6H13N)Cl2化合物，并在熱水中再結(jié)晶該亮黃色Pt(NH3)(C6H13N)Cl2化合物，在真空下干燥該亮黃色Pt(NH3)(C6H13N)Cl2化合物。
48.一種制備氨絡(luò)物/六亞甲基亞胺-四氯-鉑(IV)的方法，該方法包括a)在含有2.61mmol PtII(NH3)(C6H13N)Cl2的200mL水中加入10ml的H2O2，攪拌15分鐘，過(guò)濾該溶液，濃縮到最小體積；b)用丙酮沉淀，形成黃色(PtIV(NH3)(C6H13N)trans-(OH)2Cl2)產(chǎn)物；c)真空干燥該黃色(PtIV(NH3)(C6H13N)trans-(OH)2Cl2)；d)在100mL水中溶解該黃色的1.64mmol的PtIV(NH3)(C6H13N)trans-(OH)2Cl2(0.65g；1.64mmol)；e)加入20mL濃縮的HCl，在室溫下攪拌24小時(shí)，形成澄清的黃色溶液；f)過(guò)濾該澄清的黃色溶液，濃縮該澄清的黃色溶液至最小體積，形成黃色晶體PtIV(NH3)(C6H13N)Cl4；以及g)過(guò)濾、在水中洗滌該黃色的晶體PtIV(NH3)(C6H13N)Cl4，真空干燥。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于腫瘤和其它高增殖疾病治療的方法和組合物的應(yīng)用。在某些實(shí)施方式中，描述了用于治療腫瘤和/或高增殖疾病的方法，通過(guò)單獨(dú)給藥包含至少一種鉑復(fù)合物的組合物，或與谷胱甘肽調(diào)節(jié)劑相結(jié)合給藥來(lái)進(jìn)行。特別地，該方法可被用于治療順鉑(cisplatin)或卡鉑(carboplatin)抗性的腫瘤細(xì)胞。
文檔編號(hào)C07F15/00GK1681558SQ03821455
公開(kāi)日2005年10月12日 申請(qǐng)日期2003年9月5日 優(yōu)先權(quán)日2002年9月11日
發(fā)明者Z·H·西迪克, A·R·科卡 申請(qǐng)人:得克薩斯州大學(xué)系統(tǒng)董事會(huì)