專利名稱：：用于篩選精神分裂癥的新引物及其方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及用于鑒定和篩選無(wú)義突變的新引物，該突變是在染色體22q11-13的囊泡循環(huán)蛋白(synaptogyrin)1基因外顯子2的核苷酸序列825位上，由無(wú)意義密碼子TAG取代了編碼色氨酸的密碼子TGG，并基于此在一組病人中檢測(cè)易患精神分裂癥的體質(zhì)及其方法。
背景技術(shù)：
：精神分裂癥是一種常見(jiàn)的對(duì)人傷害很大的疾病，全世界至少有1％的人受到這種疾病的折磨。該疾病主要的癥狀有認(rèn)知和邏輯推理障礙(如幻想和錯(cuò)覺(jué))，語(yǔ)言、行為和運(yùn)動(dòng)功能不正常(語(yǔ)無(wú)倫次，古怪行為和緊張癥)，以及在情感能力和內(nèi)驅(qū)力方面有缺陷(情感乏味，快感缺乏和無(wú)意志)。神經(jīng)傳遞障礙影響多巴胺、血液中的復(fù)合胺(serotonin)、谷氨酸鹽和γ-氨基丁酸，并且已有報(bào)道說(shuō)，在精神分裂癥患者中存在縮膽囊素系統(tǒng)(Wolfetal，1993)。這些障礙會(huì)影響與神經(jīng)遞質(zhì)代謝相關(guān)的基因，例如兒茶酚-O-甲基轉(zhuǎn)移酶(COMT)(Laehmanetal，1996)和酪氨酸羥化酶(Ref)；還會(huì)影響神經(jīng)遞質(zhì)受體，例如多巴胺受體(Seemanetal，1993)，N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受體(Nudmamudetal，2001)和血液中的復(fù)合胺受體(Chiuetal，2001)；以及神經(jīng)遞質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)子(transporter)例如多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)子(Persicoetal，1997)。精神分裂癥也會(huì)嚴(yán)重地引起神經(jīng)發(fā)育障礙，已有報(bào)道神經(jīng)元細(xì)胞骨架缺陷(Arnoldetal，1991)，以及神經(jīng)元細(xì)胞結(jié)構(gòu)(Arnoldetal，1997)、細(xì)胞遷移、細(xì)胞極化和突觸修剪(synapticpruning)(Arnold，1999)等方面的缺陷。因此，在精神分裂癥中，至少有兩個(gè)過(guò)程表現(xiàn)異常神經(jīng)傳遞和神經(jīng)元發(fā)育，并且主要影響了后續(xù)階段的突觸形成。但是，目前對(duì)于精神分裂癥還沒(méi)有客觀的實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)，診斷還是通過(guò)臨床觀察獲得的。因?yàn)楝F(xiàn)在迫切地需要有對(duì)精神分裂癥的診斷和新的治療方法，許多研究都已經(jīng)側(cè)重于對(duì)這種疾病的基因特點(diǎn)的闡述。在一種嘗試用于診斷精神分裂癥的方法中，Meloni等(USPT-6,210,879)采用位于酪氨酸羥化酶基因第一內(nèi)顯子中的微衛(wèi)星標(biāo)記(microsatellitemarker)HUMTH01來(lái)尋找精神分裂癥的相關(guān)基因。這個(gè)標(biāo)記包含有重復(fù)的TCAT四聚體結(jié)構(gòu)(motif)。該標(biāo)記中最常見(jiàn)的等位基因包含有10個(gè)重復(fù)結(jié)構(gòu)，并且在第五重復(fù)結(jié)構(gòu)位置上缺少一個(gè)堿基對(duì)，即形成CAT。然而，在有關(guān)精神分裂癥重復(fù)結(jié)構(gòu)的相關(guān)基因分析中，研究人員發(fā)現(xiàn)完好的重復(fù)(沒(méi)有堿基對(duì)缺失)非常少，僅存在于精神分裂癥患者內(nèi)。盡管目前還不知道精神分裂癥的病因，但是可以知道該疾病和基因組成有很大關(guān)系。對(duì)于精神分裂癥的基因研究揭示，該疾病是異源的，并且是一種復(fù)雜的基因疾病，也就是說(shuō)有很多基因和該疾病的病因相關(guān)?；?qū)W研究已報(bào)道了該疾病和下述幾個(gè)染色體區(qū)的重要關(guān)聯(lián)性，包括1q21-22，6p24-22，7q，8p22-21，10p14-13，13q32，18p和22q11-13(RileyandMcGuffin，2000)。那些研究得最多的基因區(qū)域包括染色體22上的幾個(gè)連鎖位點(diǎn)。盡管沒(méi)有任何統(tǒng)計(jì)學(xué)上重要的結(jié)論，但是由不同小組進(jìn)行的精神分裂癥的初始全基因組掃描還是暗示了在染色體22q位標(biāo)記上可能存在連鎖(Schwabetal，1999；Coonetal，1994；Pulveretal，1994)。對(duì)于574個(gè)家族D22S278的傳遞不均衡和連鎖分析進(jìn)一步證實(shí)了在染色體22q上存在易感性連鎖的可能性(SchizophreniaCollaborativeLinkagegroupforchromosome22)。進(jìn)一步的證據(jù)表明，精神分裂癥的染色體22來(lái)源于一種稱為帆-心臟-臉部癥候群(Velo-Cardio-FacialSyndrome，VCFS)的先天畸形患者中。已知VCFS是由22q11.2-q11.23區(qū)域的缺失引起的，該病的患者表現(xiàn)出高發(fā)病率的精神疾病，包括雙重失調(diào)和精神分裂癥(Arnold，2001)。綜合胞質(zhì)基因和連鎖分析研究得到的各自獨(dú)立的證據(jù)，表明染色體22確實(shí)存在對(duì)精神分裂癥的易感基因連鎖。除了連鎖研究，近幾年來(lái)，另外一個(gè)引起很大興趣的研究方向是針對(duì)雙重失調(diào)和精神分裂癥的三核苷酸重復(fù)片段擴(kuò)展(Vincentetal，2000)。采用重復(fù)擴(kuò)展檢測(cè)(RED)技術(shù)來(lái)研究無(wú)名的CAG重復(fù)，表明在患者和對(duì)照之間，精神分裂癥和雙重失調(diào)的擴(kuò)展重復(fù)有很多的重疊(O’Donovanetal，1996；Morrisetal，1995)。許多研究都集中在鑒定包含三核苷酸重復(fù)片段的連鎖位點(diǎn)，其可用作這些疾病的候選基因。在由三核苷酸重復(fù)擴(kuò)展導(dǎo)致的精神分裂癥和雙重失調(diào)的疾病中，候選基因方法不能表明存在三核苷酸重復(fù)的大擴(kuò)展(Vincentetal，2000)。未能觀察到大的擴(kuò)展暗示了需要在患這些疾病的病人上研究中度的三核苷酸重復(fù)擴(kuò)展(Petronisetal，1996)。申請(qǐng)人之前也已提出，在這些多形三核苷酸重復(fù)連鎖位點(diǎn)上，等位基因大小或“等位基因跨度”的差異也可能暗示了雙重失調(diào)和精神分裂癥(Saleemetal，1998；Saleemetal，2000)。由于在雙重失調(diào)和精神分裂癥中多次提到染色體22，在這個(gè)染色體上的易感連鎖位點(diǎn)有可能包含涉及這些疾病發(fā)病機(jī)理的擴(kuò)展的CAG重復(fù)片段。為了鑒定在染色體22上的這些連鎖，已鑒定了包含5個(gè)以上重復(fù)的CAG重復(fù)片段和染色體22上的精神分裂癥易感連鎖圖譜，并用于研究與疾病的相關(guān)性。已證實(shí)在印度人群中，位于染色體22q11-13上的這些CAG重復(fù)標(biāo)記之一22CH3和精神分裂癥相關(guān)聯(lián)(Saleemetal，2001)。這些連鎖位點(diǎn)是具有7和8個(gè)CAG重復(fù)的雙等位基因。當(dāng)和人種匹配的對(duì)照相比時(shí)，該連鎖位點(diǎn)的8重復(fù)等位基因在精神分裂癥患者上呈現(xiàn)過(guò)度表達(dá)。申請(qǐng)人進(jìn)一步鑒定了連鎖位點(diǎn)鄰近的基因。在這些基因中，因?yàn)槟遗菅h(huán)蛋白1在神經(jīng)遞質(zhì)的釋放中起到必不可少的作用，所以選擇該蛋白的基因作為精神分裂癥的候選基因，由此，可用該基因的突變來(lái)解釋精神分裂癥上觀察到的多種缺陷。兩個(gè)近期的研究報(bào)道了在精神分裂癥患者上兩個(gè)不同基因的突變。其中一個(gè)是在位于染色體1q21-22的KCNN3基因上的移碼突變，該突變僅在一個(gè)精神分裂癥患者上發(fā)現(xiàn)(Bowenetal，2001)。和精神分裂癥相關(guān)的在22q11-13的WKL1基因上發(fā)生的錯(cuò)義突變，僅在一個(gè)大家族中分離得到(Meyeretal，2001)。由于精神分裂癥是一種多基因失調(diào)疾病，因此認(rèn)為，這一區(qū)域的其它基因發(fā)生突變也非?？赡軙?huì)導(dǎo)致精神分裂癥。在配對(duì)的精神分裂癥患者和對(duì)照者的前額皮質(zhì)微陣列表達(dá)模型研究中發(fā)現(xiàn)，在所有的精神分裂癥患者中，與突觸前功能調(diào)節(jié)相關(guān)的編碼蛋白的轉(zhuǎn)錄水平下降了(Mirnics2000)。囊泡循環(huán)蛋白1和突觸體素(synaptophysin)基因的雙敲除小鼠進(jìn)一步呈現(xiàn)出短期和長(zhǎng)期的突觸可塑性(Rogeretal，1999)。這些研究表明囊泡循環(huán)蛋白1是一種作為精神分裂癥易感基因的潛在的候選基因。申請(qǐng)人接著還在印度人群中進(jìn)行了囊泡循環(huán)蛋白1基因產(chǎn)生精神分裂癥易感性的研究。人SYNGR1基因揭示了三個(gè)不同的轉(zhuǎn)錄形式(SYNGR1a，SYNGR1b，SYNGR1c)，分別為4.5，1.3和0.9kb。通過(guò)原位雜交組織化學(xué)方法鑒定可知，最多的一種轉(zhuǎn)錄子SYNGR1a(4.5kb)其對(duì)應(yīng)于產(chǎn)物RATSYNGR1，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)元中高表達(dá)，而在其它組織中表達(dá)量很低。SYNGR1b和SYNGR1c的轉(zhuǎn)錄水平很低，并僅限于心臟，骨骼肌，卵巢和胎兒的肝臟中(Kedraetal，1997)。精神分裂癥是一種多基因紊亂疾病，因此除了已有的基因外，還需要有更多的候選基因來(lái)預(yù)測(cè)易患精神分裂癥的體質(zhì)，而不僅僅是在癥狀已經(jīng)出現(xiàn)的時(shí)候來(lái)診斷。這可以用來(lái)幫助那些易患該病的個(gè)體改變生活方式，采用更合適的環(huán)境來(lái)減輕精神分裂癥的病狀。本發(fā)明涉及一種鑒定囊泡循環(huán)蛋白1基因突變的方法，以便能發(fā)現(xiàn)易患精神分裂癥的體質(zhì)。本發(fā)明的實(shí)用性就在于鑒定導(dǎo)致個(gè)體易患精神分裂癥的基因—囊泡循環(huán)蛋白1基因的突變。本發(fā)明還可用于提供一種精神分裂癥的治療方法，以及構(gòu)建表達(dá)突變基因的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。已發(fā)現(xiàn)，在印度人群中染色體22q11-13位的CAG重復(fù)標(biāo)記(22CH3)和精神分裂癥有關(guān)。而鄰近區(qū)域的囊泡循環(huán)蛋白1基因在神經(jīng)傳遞中有著必不可少的作用。本發(fā)明尤其涉及一種鑒定囊泡循環(huán)蛋白1基因中的突變的方法。本發(fā)明進(jìn)一步提供了可用于鑒定囊泡循環(huán)蛋白1基因中的突變的特定引物。本發(fā)明還涉及到診斷和檢測(cè)囊泡循環(huán)蛋白1基因突變體的載體的方法。本發(fā)明的目的本發(fā)明的主要目的是提供一種針對(duì)精神分裂癥患者的基因突變位點(diǎn)的探針和/或引物。本發(fā)明的另一主要目的是提供一種鑒定精神分裂癥基因突變的方法。本發(fā)明的另一目的是提供一種篩選患精神分裂癥的病人的方法。本發(fā)明的還一個(gè)目的是提供一種寡核苷酸引物，用來(lái)擴(kuò)增包含精神分裂癥患者的一段DNA突變體。本發(fā)明的還一個(gè)目的是確定精神分裂癥患者的突變體性質(zhì)。本發(fā)明的還一個(gè)目的是在人類基因組中確定突變的位置。本發(fā)明的還一個(gè)目的是在各種等位基因的精神分裂癥患者中鑒定突變體。本發(fā)明的還一個(gè)目的是在易感家族中確定精神分裂癥的遺傳模式。本發(fā)明的還一個(gè)目的是確認(rèn)人腦組織基因突變的功能含義。本發(fā)明的還一個(gè)目的是提供一種鑒定和篩選易患精神分裂癥的體質(zhì)診斷試劑盒。本發(fā)明的概況本發(fā)明涉及用于鑒定和篩選無(wú)義突變的新引物，該突變是在染色體22q11-13的囊泡循環(huán)蛋白(synaptogyrin)1基因外顯子2的核苷酸序列825位上，由無(wú)意義密碼子TAG取代了編碼色氨酸的密碼子TGG，并基于此在一組病人中檢測(cè)易患精神分裂癥的體質(zhì)及其方法。本發(fā)明的詳細(xì)描述本發(fā)明涉及一種用于鑒定和篩選無(wú)義突變的新引物，該突變是在染色體22q11-13的囊泡循環(huán)蛋白(synaptogyrin)1基因外顯子2的核苷酸序列825位上，由無(wú)意義密碼子TAG取代了編碼色氨酸的密碼子TGG，并基于此在一組病人中檢測(cè)易患精神分裂癥的體質(zhì)及其方法(參見(jiàn)圖4中引物序列SEQIDNos.1到9)。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，引物是SEQIDNos.1和2。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，引物是SEQIDNos.3。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，引物和/或探針是SEQIDNos.4-7。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，所述的引物用于擴(kuò)增囊泡循環(huán)蛋白1基因的外顯子2。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，使用所述的引物來(lái)篩選無(wú)義突變，該突變是在染色體22q11-13的囊泡循環(huán)蛋白(synaptogyrin)1基因外顯子2的5’端核苷酸序列825位上，由無(wú)意義密碼子TAG取代了編碼色氨酸的密碼子TGG。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，所述的引物設(shè)計(jì)直到所述無(wú)義突變的倒數(shù)第二位置。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，所述引物的GC含量在40-60％之間。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，使用所述的引物和/或探針來(lái)篩選無(wú)義等位基因突變，該突變是在染色體22q11-13的囊泡循環(huán)蛋白(synaptogyrin)1基因外顯子2的5’端核苷酸序列825位上，由無(wú)意義密碼子TAG取代了編碼色氨酸的密碼子TGG。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，其中設(shè)計(jì)的引物和/或探針SEQIDNos.4和5具有突變堿基，并包含引物和/或探針SEQIDNo.5的3’位置。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，其中設(shè)計(jì)的引物和/或探針SEQIDNos.6和7具有突變堿基，并包含引物和/或探針SEQIDNo.7的中間位置。在本發(fā)明進(jìn)一步的實(shí)施方式中，提供了一種檢測(cè)易患精神分裂癥的體質(zhì)而篩選人群的方法，該方法是通過(guò)鑒定在染色體22q11-13的囊泡循環(huán)蛋白(synaptogyrin)1基因外顯子2的5’端核苷酸序列825位上，由無(wú)意義密碼子TAG取代編碼色氨酸的密碼子TGG而得到的無(wú)義突變。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，涉及從血液白細(xì)胞中分離DNA。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，采用針對(duì)囊泡循環(huán)蛋白1基因外顯子的引物，SEQIDNo.1和/或2，通過(guò)PCR擴(kuò)增分離的DNA。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，將擴(kuò)增的DNA測(cè)序。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，將測(cè)序的DNA和正常的囊泡循環(huán)蛋白1基因進(jìn)行比較。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，鑒定所述的突變。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，設(shè)計(jì)寡核苷酸引物和/或探針SEQIDNo.3，其中序列的3’端延伸至所述突變的倒數(shù)第二位。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，用引物和/或探針SEQIDNo.3篩選所述的無(wú)義突變。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，采用選自SEQIDNo.4到7的合適的等位基因特異性的寡核苷酸探針和/或引物篩選所述無(wú)義突變的等位基因變化。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，使用所述的方法來(lái)認(rèn)識(shí)精神分裂癥家族的遺傳模式。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，早期檢測(cè)可有助于在生理表現(xiàn)出現(xiàn)之前控制疾病。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，其中具有所述突變的患病個(gè)體是異基因型組合狀態(tài)(heterozygousstate)。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，提供了一種檢測(cè)易患精神分裂癥的體質(zhì)而篩選人群的診斷試劑盒，該試劑盒包括引物SEQIDNo.1-2以及探針和/或引物SEQIDNo.3-7，和其它選白下列物質(zhì)的添加物如限制性酶、逆轉(zhuǎn)錄酶、聚合酶、連接酶、連接子(Linkers)、作為底物的三磷酸核苷、合適的緩沖液，標(biāo)記和/或其它附加物，該試劑盒是通過(guò)鑒定在染色體22q11-13的囊泡循環(huán)蛋白1基因外顯子2的5’端核苷酸序列825位上，由無(wú)意義密碼子TAG取代編碼色氨酸的密碼子TGG而得到的無(wú)義突變。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，在所述的底物上任意地固定探針。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，其中限制酶選自HpaII，HaeIII，BamHI，HpaI，EcoRI，HindIII和PvuII。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，其中連接子選自粘性末端和平末端類型。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，其中三磷酸核苷選自三磷酸腺嘌呤，三磷酸鳥嘌呤，三磷酸胞嘧啶或三磷酸胸腺嘧啶。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，通過(guò)對(duì)患者相應(yīng)基因的外顯子直接測(cè)序，發(fā)現(xiàn)了一個(gè)精神分裂癥家族中第二外顯子的無(wú)義突變。在該家族的患者中，發(fā)現(xiàn)編碼色氨酸的密碼子TGG突變?yōu)橐粋€(gè)無(wú)義密碼子TAG。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，突變存在于患者的異基因型組合狀態(tài)中，使得囊泡循環(huán)蛋白1基因產(chǎn)物單倍不足(haploinsufficiency)。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，由于囊泡循環(huán)蛋白1和神經(jīng)傳遞有關(guān)，在該基因上的無(wú)義突變可能導(dǎo)致易患精神分裂癥。進(jìn)一步的148個(gè)精神分裂癥的先證者和143個(gè)種族匹配的正常對(duì)照的基因型沒(méi)有顯示這種突變。這一結(jié)果也證實(shí)了第一個(gè)論證，就是在候選基因中的無(wú)義突變相關(guān)基因?qū)е聜€(gè)體易患精神分裂癥。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，一組精神分裂癥患者在該基因中可能也攜帶有這種突變或其它未知的突變，這是由于有許多不同的突變定位于該基因上，而許多病人患病正是由于該基因功能的喪失。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，使用外顯子2和外顯子4的特定引物SEQIDs8和9，擴(kuò)增腦中包括無(wú)義突變區(qū)域的cDNA，證實(shí)了在腦中存在囊泡循環(huán)蛋白1基因外顯子2的表達(dá)。5’GGCATGCCTCCTTGGTCTCA3’(如SEQIDNO8所列)5’CGTCCGTCCCTTCGTTCA3’(如SEQIDNO9所列)在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，所列方法中包含無(wú)義突變用來(lái)擴(kuò)增囊泡循環(huán)蛋白1基因外顯子2的引物選自SEQIDNO1，SEQIDNO2和其互補(bǔ)序列。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，用于檢測(cè)囊泡循環(huán)蛋白1基因的無(wú)義突變的方法中的等位基因特異性引物和探針可選自SEQIDNO4，SEQIDNO5，SEQIDNO6和SEQIDNO7(其中突變的堿基占據(jù)探針的中間位置)。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，寡核苷酸引物和探針的長(zhǎng)度在5-100個(gè)堿基的范圍內(nèi)。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，用于檢測(cè)無(wú)義突變(TGG到TAG)的診斷試劑盒包含選自序列SEQIDNO1-9的合適的引物和探針。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，申請(qǐng)人用寡核苷酸引物PCR擴(kuò)增人囊泡循環(huán)蛋白1基因的外顯子2；這些引物是由SangerCenter，Hinxton，Cambridgeshire，CB101SAandUK根據(jù)囊泡循環(huán)蛋白1基因序列設(shè)計(jì)的(08-DEC-1999)(GenBank序列號(hào)AL022326)。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，純化的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的測(cè)序揭示了在一個(gè)精神分裂癥家族中，囊泡循環(huán)蛋白1基因的外顯子2存在無(wú)義突變。因此，這很明顯說(shuō)明存在迄今未知的囊泡循環(huán)蛋白1基因的等位基因或亞型。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，提供了一個(gè)序列，該序列與數(shù)據(jù)庫(kù)中的人囊泡循環(huán)蛋白1基因序列相比(GenBank序列號(hào)AL022326)，是一個(gè)包含無(wú)義突變的人囊泡循環(huán)蛋白1基因的等位突變體。表1在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，變化的位置和采用囊泡循環(huán)蛋白1基因側(cè)翼外顯子2的引物(SEQID1和2)獲得的PCR產(chǎn)物序列相對(duì)應(yīng)。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，突變的位置為G或A。G變?yōu)锳導(dǎo)致色氨酸位置為無(wú)意義密碼子，結(jié)果使得人囊泡循環(huán)蛋白1基因的等位基因突變體核苷酸序列包含無(wú)義突變。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，用囊泡循環(huán)蛋白1基因側(cè)翼外顯子2的引物(SEQID1和2)獲得的PCR產(chǎn)物序列。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，申請(qǐng)人用寡核苷酸引物來(lái)進(jìn)行人囊泡循環(huán)蛋白1基因外顯子2的PCR擴(kuò)增。這些引物是由SangerCenter，Hinxton，Cambridgeshire，CB101SAandUK根據(jù)囊泡循環(huán)蛋白1基因序列設(shè)計(jì)的(08-DEC-1999)(GenBank序列號(hào)AL022326)。突變位置在所述基因序列的核苷酸825位。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，分析20個(gè)起源于南印度的精神分裂癥多發(fā)性家族，同時(shí)以種族匹配的正常個(gè)體為對(duì)照，結(jié)果顯示在其中一個(gè)精神分裂癥家族中有這種無(wú)義突變。這個(gè)家族包括3個(gè)精神分裂癥患者和2個(gè)正常個(gè)體。其中，無(wú)義突變存在于所有三個(gè)精神分裂癥患者的異基因型組合狀態(tài)中，并且在其中一個(gè)正常個(gè)體中也有該突變，在另一個(gè)正常個(gè)體中沒(méi)有該突變。具有突變的正常個(gè)體由于她年齡小或者是因?yàn)橥蛔兊牟煌耆怙@率，在目前可能沒(méi)有癥狀。進(jìn)一步對(duì)148個(gè)精神分裂癥患者和143個(gè)種族匹配的正常對(duì)照進(jìn)行的基因型分析沒(méi)有顯示出這一突變。本發(fā)明的另一個(gè)在人腦中證實(shí)外顯子2(包含無(wú)義突變)表達(dá)的實(shí)施方式中，申請(qǐng)人設(shè)計(jì)了外顯子2和4的特異性引物，然后從人腦中分離RNA，制備cDNA并且擴(kuò)增人腦cDNA中包含無(wú)義突變的區(qū)域。發(fā)現(xiàn)包含無(wú)義突變的外顯子2在腦中表達(dá)。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，進(jìn)一步提供了一種診斷試劑盒，它包含如SEQID1到9的至少一種或更多的等位基因特異性的寡核苷酸片斷。通常，這種試劑盒包含一對(duì)或更多對(duì)的等位基因特異性的寡核苷酸，它能和不同種類的多形性雜交。在一些試劑盒中，將等位基因特異性的寡核苷酸和底物固定，用于檢測(cè)囊泡循環(huán)蛋白1基因中的突變。試劑盒的任意附加組分包括例如限制酶，逆轉(zhuǎn)錄酶或聚合酶，底物核苷三磷酸，用于標(biāo)記的方法(如，當(dāng)標(biāo)記物是生物素時(shí)，用抗生物素蛋白酶結(jié)合、酶底物以及色原體)，以及合適的逆轉(zhuǎn)錄、PCR或雜交反應(yīng)的緩沖液。這種試劑盒還經(jīng)常會(huì)包含使用方法的說(shuō)明、其它SNP檢測(cè)試劑以及諸如Taqman的方法。附圖的簡(jiǎn)要說(shuō)明圖1為囊泡循環(huán)蛋白1基因無(wú)義突變的示意性說(shuō)明。上部的線條表示了囊泡循環(huán)蛋白1基因的6個(gè)外顯子位置，并在第二外顯子具有相應(yīng)的無(wú)義突變位置，另外還有用于RT-PCR的引物。圖2是以外顯子2(SEQID8)和外顯子4(SEQID9)的特異性引物進(jìn)行RT-PCR，得到的在腦的不同部位的囊泡循環(huán)蛋白1基因外顯子2的表達(dá)情況。圖3為發(fā)現(xiàn)突變的家族的遺傳家譜。圓圈代表女性成員，方框代表男性成員。填滿的圓圈和方框代表患病的家族成員，空白的代表正常的家族成員。水平線代表婚姻，垂直線代表下一代。篩選的有突變的家族成員的基因型如下面所示。在遺傳家譜下方表示的是囊泡循環(huán)蛋白1基因外顯子2中顯示突變的電泳圖譜。圖4表示SEQIDNos.1-9。以下的實(shí)施例是用來(lái)說(shuō)明本發(fā)明的，不能理解為對(duì)本發(fā)明的限制。參考文獻(xiàn)1.ArnoldPD，Siegel-BarteltJ，CytrynbaumC，TeshimaI，SchacharR.(2001).Velo-cardio-facialsyndromeImplicationsofmicrodeletion22q11forschizophreniaandmooddisorders.AmJMedGenet；105(4)354-622.ArnoldSE，LeeVM，GurRE，TrojanowskiJQ.(1991).Abnormalexpressionoftwomicrotubule-associatedproteins(MAP2andMAP5)inspecificsubfieldsofthehippocampalformationinschizophrenia.ProcNatlAcadSciUSA；88(23)10850-43.ArnoldSE，RuscheinskyDD，HanLY.(1997).Furtherevidenceofabnormalcytoarchitectureoftheentorhinalcortexinschizophreniausingspatialpointpatternanalyses.BiolPsychiatry；42(8)639-474.ArnoldSE.(1999).Neurodevelopmentalabnormalitiesinschizophreniainsightsfromneuropathology.DevPsychopathol；11(3)439-565.BowenT，WilliamsN，NortonN，SpurlockG，WittekindtOR，Morris-RosendahlDJ，WilliamsH，BrzustowiczL，HoogendoornB，ZammitS，JonesG，SandersRD，JonesLA，McCarthyG，JonesS，BassettA，CardnoAG，OwenMJ，O′DonovanMC.(2001).MutationscreeningoftheKCNN3generevealsarareframeshiftmutation.MolPsychiatry6(3)259-60.6.ChiuHJ，WangYC，LiouJH，ChaoCH，LeeH，TsaiKY，LiuWC.(2001).Serotonin6receptorpolymorphisminschizophreniafrequency，ageatonsetandcognitivefunction.Neuropsychobiology；43(3)113-67.CoonH，JensenS，HolikJ，HoffM，Myles-WorsleyM，ReimherrF，WenderP，WaldoM，F(xiàn)reedmanR，LeppertM，etal.(1994).Genomicscanforgernespredisposingtoschizophrenia.AmJMedGenetMar；54(1)59-718.JanzR，SudhofTC，HammerRE，UnniV，SiegelbaumSA，Bolshakov.VY.(1999).EssentialrolesinsynapticplasticityforSynaptogyrin1andSynaptophysin1.Neuron；24687-7009.KedraD，PanH-Q，SeroussiE，F(xiàn)ranssonI，GuilbaudC，CollinsIE，DunhamI，BlennowE，RoeBA，PiehlF，DumanskiJP.(1998).Characterizationofhuman30Synaptogyringenefamily.HumGenet；103131-14110.LachmanHM，PapolosOF，SaitoT，YuYM，SzumlanskiCL.WeinshilboumRM.(1996).Humancatechol-O-methyltransferascpharmacogeneticsdescriptionofafunctionalpolymorphismanditspotentialapplicationtoneuropsychiatricdisorders.Pharmacogenetics；6(3)243-5011.Melonietal.2001.Methodfordiagnosingschizophrcnia.USPatent6.210，879.12.MeyerJ，HuberthA，OrtegaG，SyagailoYV，JatzkeS，MossnerR.，StromTM，Teuberill，StoberG，S.chmittA，LeschKP.(2001).Amissensemutationinanovelgeneencodingaputativecationchannelisassociatedwithcatatonicschizophreniainalargepedigree.MolPsychiatry；6302-30613.MimicsK，MiddletonFA，MarquezA，LewisDA，LevittP.(2000).Molecularcharacterizationofschizophreniaviewedbymicroarrayanalysisofgeneexpressioninprefrontalcortex.Neuron；2853-6714.MorrisAG，GaitondeE，McKennaPJ，MollonJD，HuntDM.(1995).CAGrepeatexpansionsandschizophreniaassociationwithdiseaseinfemaleswithearlyage-at-onset.HumMolGenet；4(10)1957-6115.NudmamudS，ReynoldsGP.(2001).Increaseddensityofglutamate/N-methyl-D-aspartatereceptorsinsuperiortemporalcortexinschizophrenia.NeuroseiLett；304(1-2)9-1216.O′DonovanMC，GuyC，CraddockN，BowenT，McKeonP，MacedoA，MaierW，WildenauerD，AschauerHN，SorbiS，F(xiàn)eldmanE，Mynett-JohnsonL，ClaffeyE，NacmiasB，ValenteJ，DouradoA，GrassiE，LenzingerE，HeidenAM，MoorheadSHarrisonD，WilliamsJ，McGuffinP，OwenMJ.(1996).ConfirmationofassociationbetweenexpandedCAG/CTGrepeatsandbothschizophreniaandbipolardisorder.PsycholMed；26(6)1145-5317.PersicoAM，MacciardiF.(1997).Genotypicassociationbetweendopaminetransportergenepolymorphismsandschizophrenia.AmJMedGenet；74(1)53-7.18.PetronisA，BassettAS，HonerWG，VincentJB，TatuchY，SasakiT，YingDJ，KlempanTA，KennedyJL.(1996).SearchforunstableDNAinschizophreniafamilieswithevidenceforgeneticanticipation.AmJHumGenet；59(4)905-1119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