專(zhuān)利名稱(chēng)：海綿動(dòng)物抗腫瘤化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及從海綿動(dòng)物中得到的抗腫瘤化合物。
我們對(duì)從伊良部島以西150km的Iriomote島一帶的珊瑚礁收集到的海綿動(dòng)物即后來(lái)被命名為Stylotella aurantium的海綿動(dòng)物(在澳大利亞產(chǎn)生二氯碳化亞胺的相同物類(lèi)6)的細(xì)胞毒素組成進(jìn)行了檢驗(yàn)。我們的樣品也得到了倍半萜二氯碳化亞胺，包括五種新的同族元素(1-5)，它們是引起該海綿動(dòng)物的親脂性萃取液細(xì)胞毒性的原因。
由此，我們提供由海綿動(dòng)物Stylotella aurantium獲取的五種已被分離的具有二氯碳化亞胺或者醛官能的新倍半萜(1-5)，它們與七種已知的相關(guān)化合物(6-12)一起存在。新化合物的結(jié)構(gòu)已由光譜數(shù)據(jù)說(shuō)明。確定了先前報(bào)道的reticulidin A(10)的絕對(duì)立體化學(xué)。所述新化合物中的四種顯示出相對(duì)于幾種癌細(xì)胞系IC50值為0.1-1μg/mL的細(xì)胞毒性。

昆士蘭博物館的Dr.J.N.A.Hooper確認(rèn)了該海綿動(dòng)物(OP-98-30)為Stylotella aurantium Kelly-Borges & bergquist，1988(Porifera，Demospongiae，Halichondrida，Axinellidae)。憑據(jù)樣品(QM G317008)保存在澳大利亞南布里斯班昆士蘭博物館?？鼓[瘤活性
優(yōu)選實(shí)施方案考慮到體外活性，預(yù)期本發(fā)明的化合物，化合物(1)-(4)可用于治療癌癥。
因此，本發(fā)明提供一種對(duì)患癌癥的任何哺乳動(dòng)物(特別是人類(lèi))進(jìn)行治療的方法，該方法包括給予患者治療有效量的本發(fā)明化合物或其藥用組合物。
本發(fā)明還涉及藥用組合物及其制備方法，該藥用組合物包含作為活性成分的本發(fā)明化合物。
藥用組合物的例子包括具有適當(dāng)組成的任何固體(片劑、丸劑、膠囊劑、顆粒劑等)或液體(溶液劑、混懸劑或乳劑)或者口服、局部給藥或腸胃外給藥，它們可以包含所述純化合物或者與任何載體或其它藥理學(xué)活性化合物相結(jié)合。當(dāng)進(jìn)行腸胃外給藥時(shí)，需要對(duì)這些組合物進(jìn)行滅菌。
本發(fā)明化合物或組合物的給藥可以通過(guò)任何適當(dāng)?shù)姆椒ㄟM(jìn)行，如靜脈輸注、口服制劑、腹膜內(nèi)和靜脈內(nèi)給藥。我們優(yōu)選輸注時(shí)間最多為24小時(shí)，更優(yōu)選2-12小時(shí)，最優(yōu)選2-6小時(shí)。特別理想的是短時(shí)間輸注，短時(shí)間輸注可以無(wú)需在醫(yī)院過(guò)夜治療。但是，如果需要，則輸注時(shí)間可以是12-24小時(shí)或甚至更長(zhǎng)。輸注可以以適當(dāng)?shù)臅r(shí)間間隔如2-4周進(jìn)行。包含本發(fā)明化合物的藥用組合物可以通過(guò)以緩釋配方中的脂質(zhì)體或毫微球包囊方式或通過(guò)其它標(biāo)準(zhǔn)傳遞方式進(jìn)行給藥。
所述化合物的正確劑量將根據(jù)具體劑型、應(yīng)用模式和具體部位、患者及所要治療的腫瘤而變化。還需考慮其它因素如年齡、體重、性別、飲食、給藥時(shí)間、排泄速率、患者癥狀、藥物結(jié)合、反應(yīng)敏感性和疾病嚴(yán)重程度。可以在最大允許劑量范圍內(nèi)連續(xù)給藥或者定期給藥。
本發(fā)明的化合物和組合物可以與其它藥物一起使用以提供聯(lián)合治療。所述其它藥物可形成該同一組合物的一部分，或者作為單獨(dú)組合物在相同時(shí)間或不同時(shí)間進(jìn)行給藥。對(duì)其它藥物的特性沒(méi)有特別限制，適當(dāng)?shù)目墒褂盟幬锇╝)具有抗有絲分裂作用的藥物，尤其是那些以細(xì)胞骨架成分為靶向的藥物，包括微管調(diào)節(jié)劑如紫杉烷藥物(如紫杉酚、紫杉醇、taxotere、docetaxel)、鬼臼素或長(zhǎng)春花堿類(lèi)(長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春堿)；b)抗代謝藥物如5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷、吉西他濱、嘌呤類(lèi)似物(如噴司他丁、甲氨蝶呤)；c)烷化劑如氮芥(如環(huán)磷酰胺或異環(huán)磷酰胺)；d)以DNA為靶向的藥物如antracycline藥物阿霉素、多柔比星、表阿霉素或表柔比星；e)以拓樸異構(gòu)酶為靶向的藥物如依托泊苷；f)激素或者激素激動(dòng)劑或拮抗劑如雌激素、抗雌激素(他莫昔芬和相關(guān)化合物)和雄激素、氟他胺、亮丙瑞林、戈舍瑞林、cyprotrone或奧曲肽；g)以癌細(xì)胞中信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)為靶向的藥物，包括抗體衍生物如herceptin；h)烷基化藥物如鉑藥物(順鉑、卡鉑、奧沙利鉑、碳鉑)或者亞硝脲；i)有可能影響癌轉(zhuǎn)移的藥物如基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑；j)基因治療和反義試劑；k)抗體治療劑；l)來(lái)自海中的其它生物活性化合物，尤其是海鞘素如Et-743或者代代寧如aplidine。
本發(fā)明還延及用于治療方法中的本發(fā)明化合物，以及所述化合物在制備用于治療癌癥的組合物中的應(yīng)用。本發(fā)明的實(shí)施例用丙酮萃取S.Aurantium Kelly-Borges and bergquist(familyAxinellidae)的樣品(90g，濕重)，并將該濃縮的萃取液在乙酸乙酯和水之間分配。將EtOAc萃取液(0.65g)經(jīng)硅膠并隨后通過(guò)制備TLC和/或HPLC進(jìn)行分離，得到倍半萜1-12，產(chǎn)量為1.5-12.0mg。
通用試驗(yàn)步驟。在JASCO FT/IR 300上測(cè)定IR光譜，在UVIDEC610分光光度計(jì)上測(cè)定UV光譜。在JEOL A500儀器上在500 Mhz(1H)和125Mhz(13C)下，記錄NMR譜。用日立M-2500質(zhì)譜儀獲得LREIMS和HREIMS。在JASCO DIP-1000旋光計(jì)上獲取旋光度。
動(dòng)物材料。1998年5月在沖繩Iriomote島，使用自攜式水中呼吸器在-15m處，用手收集題述海綿動(dòng)物的樣品(90g，濕重)。憑據(jù)樣品(QM G317008)保存在澳大利亞布里斯班昆士蘭博物館，并且該樣品由澳大利亞昆士蘭南布里斯班昆士蘭博物館，Natural EnvironmentProgram經(jīng)Dr.John N.A.Hooper確認(rèn)。
萃取和分離。將海綿樣品保持冷凍直至萃取。整體動(dòng)物用Me2CO(500mL)萃取三次。將合并的萃取液真空濃縮，將殘余物在EtAOc和H2O之間分配以得到親脂性萃取液(0.70g)。通過(guò)在硅膠柱上用庚烷、庚烷-CH2Cl2、CH2Cl2、CH2Cl2-EtOAc、EtOAc、EtOAc-MeOH和MeOH逐步洗脫，分離大部分萃取液(0.65g)，得到九個(gè)流分。將第一流分(12.7mg)通過(guò)制備TLC(SiO2、庚烷-CH2Cl2，10∶1)并隨后通過(guò)HPLC(RP13，MeOH-H2O，15∶1)進(jìn)行分離，得到化合物5(2.0mg)和6(1.9mg)。將第二流分(39.8mg)通過(guò)HPLC(SiO2、庚烷-CH2Cl2，9∶1)進(jìn)行分離，得到化合物1(6.1mg)、4(1.6mg)和6(8.0mg)。將第四流分(64.0mg)通過(guò)HPLC(SiO2、庚烷-CH2Cl2，3∶1)進(jìn)行分離，得到11(1.5mg)和12(1.7mg)。將第五流分(88.7mg)通過(guò)制備TLC(SiO2、第一次庚烷-EtOAc，9∶1；第二次庚烷-CH2Cl2，3∶2；第三次CH2Cl2)反復(fù)進(jìn)行分離，得到2(1.6mg)、3(1.6mg)、8(9.1mg)和9(5.8mg)。將第六流分(184.5mg)經(jīng)硅膠柱(庚烷-CH2Cl2-EtOAc)并隨后通過(guò)制備TLC(庚烷-CH2Cl2，3∶2)進(jìn)行分離，得到7(12.0mg)和10(4.6mg)。
化合物1無(wú)色油；[α]25D+4.5°(c0.20，CHCl3)；UV(MeOH)λmax(logε)205(3.6nm；IR(純的)νmax1655，877cm-1；1H NMR(CDCl3)δ0.84(3H，s，H3-13)，1.16(3H，s，H3-12)，1.74(1H，m，H-7a)，1.77(1H，m，H-5)，1.81(1H，m，H-7b)，1.86(1H，m，H-2β)，1.91(1H，m，H-8a)，2.04(1H，dt，J＝4,13Hz，H-1α)，2.12(1H，dq，J＝13.4Hz，H-2α)，2.38(1H，m，H-8b)，2.41(1H，m，H-1β)，3.84(2H，d，J＝7Hz，H-11)，3.90(1H，dd，J＝4,11Hz，H-3)4.60(1H，t，J＝7Hz，H-10)，4.66(1H，s，H-14a)，4.95(1H，s，H-14b)，5.07(1H，s，H-15a)，5.19(1H，s，H-15b；13C NMR(CDCl3)δ15.9q(C-13)，24.3 t(C-7)，27.2q(C-12)，30.7t(C-8)，34.5t(C-2)，35.4t(C-1)-4)52.4d(C-5)，59.3t(C-11)，62.2d(C-10)，70.9d(C-3)，109.2t(C-14)，114.4t(C-15)，127.0s(C-16)，145.6s(C-6)，146.3s(C-9)；ESIMS m/z 369([M+]，62rel％)；EIMS m/z 334([M-Cl]+，100)，336(98)，338(32)，298(65)，300(40)，302(7)，262(30)，264(12rel％)HREIMS m/z 334.0870(計(jì)算C16H2535Cl3N，334.0894).
化合物2無(wú)色油；[α]25D+16°(c0.13，CHCl3)，UV(MeOH)λmax(logε)235(3.3)nm；IR(純的)νmax3458，1714，1668cm-1；1H NMR(CDCl3)δ1.11(6H，s，H3-12，13)，1.14(3H，s，H3-11)，1.98(1H，dd，J＝3,12Hz，H-5)，1.52(1H，br d，J＝14Hz，H-1α)，1.65(1H，dq，J＝4,13HzH-6β)，1.98(1H，m，H-6α)，2.02(2H，m，H2-9)，2.05(1H，m，H-7α)，2.06(1H，dd，J＝3,14Hz，H-1β)，2.35(1H，br s，OH)，3.50(1H，br d，J＝14Hz，H-7β)，3.94(1H，d，J＝3Hz，H-3)，4.18(1H，q，J＝3Hz，H-2)，5.78(1H，d，J＝8Hz，H-14)，10.02(1H，d，J＝8Hz，H-15)；13CNMR(CDCl3)δ17.8(C-13)20.8q(C-11)，23.9t(C-6)，29.5t(C-7)，30.4q(C-12)，36.7s(C-10)，39.5s(C-4)，45.1t(C-1)，54.1d(C-5)，55.8t(C-9)，71.9d(C-2)，76.3d(C-3)，127.5d(C-14)，163.5s(C-8)，190.1d(C-15)EIMS m/z 270(M+，100)，272(33)，255(18)，226(48)，217(74rel％)；HREIMS m/z 270.1363(計(jì)算C16H23ClCO2，270，1384).
化合物3無(wú)色油；[α]20D-28°(c0.13，CHCls)，UV(MeOH)λmax(logε)24-0(3.9)，285(3.1)nm；IR(純的)νmax3467，1716，1651cm-1；1H NMR(CDCL2)δ1.09(3H，s，H3-12)，1.10(3H，s，Hs-13)，1.16(3H，s，Hs-11)，1.38(1H，dd，J＝2.5，13.0Hz，H-5)，1.58(1H，m，H-1α)，1.67(1H，dq，J＝4.0，13.0Hz，H-6β)，1.80(1H，d，J＝13.0Hz，H-9α)，1.96(1H，m，H6α)，2.09(1H；dd，J＝2.5，14.5Hz，H-1β)，2.26(1H，dt，J＝6.0，13.0Hz，H-7α)，2.36(1H，s，OH)，2.49(1H，br d，J＝13.0Hz，H-7β)，3.02(1H，br d，J＝13.0Hz，H-9β)，3.94(1H，d，J＝3.0Hz，H-3)，4.19(1H，br s，H-2)，5.95(1H，d，J＝8.1Hz，H-14)，9.95(1H，d，J＝8.1Hz，H-15)；1BC NMR(CDCL3)δ17.8q(C-13)，20.9q(C-11)，24.2t(C-6))，30.3q(C-12)，36.5a(C-10)，37.9t(C-7)，39.5a(C-4)，45.1t(C-1)，47.2t(C-9)，54.2d(C-5)，71.9d(C-2)，76.3d(C-3)，127.7d(C-14)，163.7s(C-8)，190.5d(C-15)；EIMS m/z 270(M+，98)，272(34)，255(42)，226(70)，217(100rel ％)；HREIMS m/z 270.1400(計(jì)算C15H233GC102，270.1384).
化合物4無(wú)色油；[α]25D+40°(c0.13，CHCl3)，UV(MeOH)λmax(logε)288(4.2)nm；IR(純的)νmax1640；900cm-1；1HNMR(CDCl3)δ0.94(3H，s，H3-13)，1.03(3H，s，H3-11)，1.10(3H，s，H3-12)，120(1H，dd，J＝2,13Hz，H-5)1.38(1H，dt，J＝4,13Hz，H-1a)，1.57(1H，t，J＝3Hz，H-6β)，1.59(1H，t，J＝3Hz，H-1β)，1.89(1H，br dd，J＝7,13Hz，H-6a)，2.01(1H，m，H-2α)，2.07(1H，m，H-2β)，2.21(1H，m，H-7α)，2.36(1H，dd，J＝6,17Hz，H-7β)，3.75(1H，dd，J＝5,12Hz，H-3)，5.59(1H，s，H-9)，6.51(1H，d，J＝13Hz，H-14)，6.70(1H，d，J＝13Hz，H-15)；13C NMR(CDCl2)δ16.6q(C-13)，19.2t(C-6)，20.8q(C-11)，26.2t(C-7)，28.9q(C-12)，29.8t(C-2)，36.0s(C-10)，38.8t(C-1)，40.0s(C-4)，51.3d(C-5)，72.4d(C-3)，124.0s(C-16)，128.9d(C-15)，130.6s(C-8)，137.7d(c-14)，146.4d(C-9)；EIMSm/z 333(M+，52)，335(52)，337(17)，339(1)，298(100，300(65)，302(12)，262(75)，264(26)，226(36rel％)；HREIMS m/z 333.0823(計(jì)算C16H2228ClsN，333.0816).
化合物5無(wú)色油；1H NMR(CDCl3)δ1.61(6H，s，H3-13，14)，1.68，s，H3-12)，1.99(2H，t，J＝7Hz，H-8)，2.07(2H，q，J＝7,13Hz，H-9)，2.23(2H，m，H-5)，2.28(2H，m，H-4)，5.09(1H，br t，J＝7Hz，H-10)，5.16(1H，tq J＝7.2Hz，H-6)，5.19(1H，br s，H-15a)，5.23(1H，br s，H-15b)，6.62(1H，d，J-13Hz，H-2)，6.87(1H，d，J＝13Hz，H-1)；13C NMR(C-5)，26.7t(C-9)，32.1t(C-4)，39.7t(C-8)，120.3t(C-15)，123.4d(C-6)，124.3d(C-10)，125.2s(C-16)，130.8d(C-1)，131.4s(C-11)，135.9s(C-7，137.0d(C-2)，143.9s(C-3).
10的(R)-MTPA酯。將.035mg reticulidin A(10)、0.31mg DCC、0.35mg(R)-MTPA和0.12mg DMAP在0.15mL CH2Cl2中的混合物在室溫下靜置3小時(shí)。除去溶劑，然后將殘余物通過(guò)制備TLC(SiO2，己烷-EtOAc，4∶1)進(jìn)行分離，得到0.30mg(R)-MTPA酯1H NMR(CDCl3)δ1.034(3H，s，H3-13)，1.156(6H，s，H2-11，12)，2.025(1H，dd，J＝4,12Hz，H-1β)，3.741(1H，d，J＝11Hz，H-3)，5.387(1H，dt，J＝5,11Hz，H-2)，5.562(1H，s，H-9)，6.486(1H，d，J＝13Hz，H-14)，6.712(1H，d，J＝13Hz，H-15)。
10的(S)-MTPA酯。用(S)-MTPA，采用上述方法類(lèi)似地制備該酯1H NMR(CDCl3)δ1.028(3H，s，H3-13)，1.148(3H，s，H3-12)，1.172(3H，s，H3-11)，2.112(1H，dd，J＝4,12Hz，H-1β)，3.720(1H，d，J＝11Hz，H-3)，5.417(1H，dt，J＝5,11Hz，H-2)，5.610(1H，s，H-9)，6.507(1H，d，J＝13Hz，H-14)，6.729(1H，d，J＝13Hz，H-15)。
用酸處理Reticulidin B(8)。將1.0mg reticulidin B(8)和催化量的對(duì)甲苯磺酸一水合物在0.5mL 30％THF水溶液中的混合物在室溫下靜置12小時(shí)。反應(yīng)混合物在TLC(SiO2，庚烷-EtOAc，3∶2)上僅顯示一個(gè)斑點(diǎn)，回收未反應(yīng)物8(0.8mg)。
分離化合物1，[α]D+4.5°(c0.20，CHCl3)，為無(wú)色油狀物。通過(guò)在ESIMS中在m/z 369下并在HREIMS在m/z 334.0870([M-Cl]+)下監(jiān)測(cè)分子離子確定分子式C16H23NCl4。如早前所報(bào)道的2-6一樣，從在δ127.0s的碳信號(hào)并且也通過(guò)在1655cm-1的IR吸收上推斷出存在二氯碳化亞胺官能團(tuán)。1H和外亞甲基[δ4.66s，4.95s，5.07s，5.19s；δ109.2t(C-14)，114.4t(C-15)，145.6s(C-6)，146.3s(C-9)]，帶兩個(gè)氯的次甲基[δ3.90dd，4.60t；δ62.2d(C-10)，70.9d(C-3)]，帶一個(gè)氮的亞甲基[δ3.84d；δ59.3t(C-11)]以及兩個(gè)甲基[δ0.84s，1.16s；δ15.9q(C-12)，27.2q(C-13)]。這些數(shù)據(jù)與不飽和要求結(jié)合考慮，推斷1為單環(huán)。通過(guò)解析2D NMR(COSY，HMQX，HMBC)光譜確立了一致性。COSY(H-1αβH-2αβ，H-2αβ，H-2αβ/H-3，H-1α/H-5，H-1α/H-14a，H-1β/H-14b和H-5/H-14ab)和HMBC數(shù)據(jù)(H-1αβ/C-2，-3，-5，-6，-14，H-2αβ/C-1，-3，-4，-6，H-3/C-4，-12，-13，H-5/C-3，-4，-6，-8，-14，和Ha-12，-13/C-3，-4，-5)顯示存在六元環(huán)。通過(guò)COSY(H-5/H-7ab，-8ab；H-7ab/H-8ab，H-8ab/H-15ab，H-10/H-11，-15b)和HMBC(H-10/C-15，H2-11/C-16)交叉峰(cross-peak)確立環(huán)與末端二氯碳化亞胺之間的一致性。通過(guò)監(jiān)測(cè)陽(yáng)性NOEs(H-3/H-5，H-3/Ha-12，H-7/H3-13)解釋說(shuō)明了環(huán)的相對(duì)立體化學(xué)。在C-10的立體化學(xué)留待解決。
獲得化合物2，[α]D+16°(c0.13，CHCl3)，為無(wú)色玻璃狀物。2的EIMS顯示在m/z 270的分子離子。該峰的高分辨測(cè)定給出了分子式C16H25ClO2。該式顯示四個(gè)不飽和度。NMR光譜顯示出三個(gè)甲基單峰信號(hào)[δ1.11(Ha-12)，1.11(H3-13)，1.14(H3-11)；δ17.8q，23.9t，30.4q]，α，β-不飽和醛[δ10.02d；δ127.5d(C-14)，163.5s(C-8)，190.1d(C-15)]，帶一個(gè)氯和/或一個(gè)羥基的兩個(gè)次甲基[δ3.93d，4.18q；δ71.9d(C-2)，76.3d(C-3)]。在1666cm-1的IR吸收帶也顯示存在α，β-不飽和醛。將這些數(shù)據(jù)和2D NMR數(shù)據(jù)與reticulidin B(8)的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，可推測(cè)2由近似于reticulidin B的雙環(huán)部分和代替8中的二氯碳化亞胺的烯醛部分構(gòu)成。如前所述1，通過(guò)氘-誘導(dǎo)位移實(shí)驗(yàn)確定羥基在C-2上(Δδ-0.115)。通過(guò)在H-9和H-14之間以及在H-7β和H-15之間的陽(yáng)性NOEs表明烯醛的雙鍵幾何構(gòu)型為E型。經(jīng)NOE觀測(cè)(H-2/H-3，H-3/H-5)確定化合物2具有與8相同的相對(duì)立體化學(xué)。因?yàn)槿┛捎?水解得到，所以猜測(cè)2可能是在分離步驟期間形成的人工制品。但是，當(dāng)用THF水溶液中的p-TsOH處理8(室溫，12小時(shí))時(shí)，8被回收而無(wú)反應(yīng)跡象，推測(cè)2的確為天然產(chǎn)品。
化合物3，[α]D-28°(c0.13，CHCl3)具有與2中經(jīng)HREIMS確定的相同的分子式C16H23ClO2。除了對(duì)于C-7(Δδ8.4)和C-9(Δδ-8.6)的信號(hào)不同之外，3的13C NMR光譜與2幾乎完全相同。在1H NMR光譜中，3與2的主要不同在于化學(xué)位移H-7(Δδ0.21，-1.01)，H-9(-0.22，1.00)，H-14(0.17)和H-15(-0.07)，推測(cè)是圍繞雙鍵的構(gòu)型不同。陽(yáng)性NOEs的觀測(cè)(H-7β/H-14，H-9β/H-15)揭示了雙鍵的Z-構(gòu)型。經(jīng)NOE測(cè)定確認(rèn)，雙環(huán)部分上的相對(duì)立體化學(xué)與2的一樣。經(jīng)氘-誘導(dǎo)位移(Δδ-0.115)也確認(rèn)了羥基的位置在C-2上。
化合物4，[α]D+40°(c0.13，CHCl3)具有分子式C16H22NCl3(HREIMS，Δ+0.7mmu)。它包含二氯碳化亞胺(1640cm-1；δ124.0s)，兩個(gè)雙鍵[δ5.59s(H-9)，6.51d(H-14)，6.70d(H-15)；δ128.9d，130.6s，137.7d，146.4d]，一個(gè)帶氯的次甲基(δ3.75dd；δ72.4d)和三個(gè)甲基[δ0.94s(H-13)，1.03s(H-11)，1.10s(H-12)；δ16.6q，20.8q，28.9q]。4的結(jié)構(gòu)經(jīng)COSY、HMQC和HMBC數(shù)據(jù)確證并將這些數(shù)據(jù)與9和13的數(shù)據(jù)相比較4。其相對(duì)立體化學(xué)基于NOESY交叉峰(H-3/H-2α，H-3/H-5，H-3/H3-12，H-5/H3-12，H3-11/H3-13)以及NMR數(shù)據(jù)與13的情況的相似性4。最后，偶合常數(shù)J14，15(13.0Hz)和介于H-9與H-14之間以及介于H-7β與H-15之間的NOEs顯示了該二取代雙鍵的E幾何構(gòu)型。
因?yàn)榛衔?在儲(chǔ)存于NMR管中期間分解，所以我們未能記錄到質(zhì)譜數(shù)據(jù)。由NMR數(shù)據(jù)可以推導(dǎo)出可能的分子式C16H23NCl2。5的1H NMR光譜由下列信號(hào)組成兩個(gè)外亞甲基質(zhì)子[δ5.19和5.23s(H-15)]、四個(gè)乙烯基質(zhì)子[δ5.09t(H-10)，5.16t(H-6)，6.62d(H-2)，和6.87d(H-1)]、四個(gè)亞甲基[δ1.99t(H-8)，2.07q(H-9)，2.23q(H-5)，2.28t(H-4)]和三個(gè)乙烯基甲基[δ1.61s(H-13)，1.61s(H-14)，1.69s(H-12)]。除NCCl2的在δ124.2s的特征信號(hào)外，13C NMR數(shù)據(jù)與HMQC實(shí)驗(yàn)一起確認(rèn)存在上述官能團(tuán)。將這些數(shù)據(jù)與6的進(jìn)行比較，推測(cè)5具有反式雙鍵(J＝13.1Hz)代替6中的亞甲基(C-1)和氯代次甲基(C-2)。
通過(guò)經(jīng)修改的Mosher’s法7確定reticulidin A(10)的絕對(duì)立體化學(xué)。當(dāng)記錄10的MTPA衍生物的NMR光譜時(shí)，監(jiān)測(cè)H-1β(+0.087)、H3-11(+0.016)和H-9(+0.048)的正值(Δδs-R)，而在H-3(-0.021)、H3-12(-0.008)和H3-12(-0.006)檢測(cè)為負(fù)值。因此，10的絕對(duì)構(gòu)型經(jīng)確認(rèn)為(2R，3R，5S，10S)。當(dāng)用MTPA、DCC和DMAP進(jìn)行處理時(shí)，reticulidin B(8)不形成MTPA酯，推測(cè)這是因?yàn)榱u基的位阻所致。但是，從10的結(jié)果和它們的緊密結(jié)構(gòu)關(guān)系，可以推斷8-12和2及3的絕對(duì)立體化學(xué)與如上對(duì)結(jié)構(gòu)的描述一致。
醛2和3可能是對(duì)應(yīng)二氯碳化亞胺的分解代謝產(chǎn)物。但是，不能排除它們作為生物合成前體的可能性。對(duì)此我們沒(méi)有確實(shí)的證據(jù)確定它們的生物合成關(guān)系。
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權(quán)利要求
1.一種選自下式化合物(1)-(4)的化合物
2.一種藥用組合物，該組合物含有權(quán)利要求1的化合物和藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。
全文摘要
分離自海綿動(dòng)物的新抗腫瘤化合物，如式(1)、(2)、(3)和(4)所示。
文檔編號(hào)C07C47/273GK1429203SQ0180944
公開(kāi)日2003年7月9日 申請(qǐng)日期2001年3月20日 優(yōu)先權(quán)日2000年3月20日
發(fā)明者田中淳一, 比嘉辰雄 申請(qǐng)人:法馬馬有限公司