專利名稱：一種抗透明質(zhì)酸單克隆抗體及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種抗透明質(zhì)酸單克隆抗體及其用途，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
透明質(zhì)酸(Hyaluronic Acid，簡寫為HA)是由蛋白質(zhì)與糖胺多糖共價(jià)結(jié)合形成的 一類蛋白多糖，是細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)中蛋白多糖主要成份。正常機(jī)體由間質(zhì)細(xì)胞合成， 當(dāng)肝臟出現(xiàn)病理損害時(shí)，正常結(jié)構(gòu)和功能受到影響，導(dǎo)致透明質(zhì)酸合成增加和透明質(zhì)酸 分解去路受阻，進(jìn)而出現(xiàn)血中透明質(zhì)酸含量升高。透明質(zhì)酸含量與肝纖維化程度呈正相 關(guān)。因此，測定血清中透明質(zhì)酸含量是輔助診斷肝纖維化的一個(gè)重要指標(biāo)。臨床上對肝纖維化的診斷方法主要有肝組織病理學(xué)診斷、影像學(xué)檢查及血清學(xué) 診斷。血清學(xué)診斷是研究最廣泛的肝纖維化診斷方法，其最常用的肝纖維化指標(biāo)有透明 質(zhì)酸、層粘蛋白、III型前膠原氨基末端肽、IV型膠原等。這些血清學(xué)指標(biāo)的高低與肝 纖維化嚴(yán)重程度密切相關(guān)，因而可用于診斷肝纖維化。血清化驗(yàn)的優(yōu)點(diǎn)是取材方便、容 易復(fù)查，如果能定期檢查(如每半年或一年)則可以根據(jù)這些指標(biāo)是升高或降低的總趨勢 來了解肝臟纖維化的發(fā)展變化情況，也能大致了解抗纖維化的治療的臨床效果。除了對肝纖維化進(jìn)行輔助診斷，有報(bào)道稱惡性腫瘤患者體液或組織中HA水平升 高，HA可作為鑒別良、惡性病變的輔助指標(biāo)；腎病綜合征患者和腎小球腎炎患者HA明 顯升高，慢性腎炎和慢性腎衰患者HA均顯著高于正常對照；HA水平與腎臟損害程度呈 正比。觀察血清和骨髓液HA變化，對鑒別良惡性血液病、判斷急性白血病病性及估計(jì) 預(yù)后有意義。另外，還有研究表明結(jié)締組織病(CTD)患者的HA顯著升高。可見， HA含量水平在許多疾病中呈現(xiàn)出明顯的變化，因此，臨床檢測HA的血清含量能反應(yīng)各 種疾病的變化，對輔助診斷和病程監(jiān)控均有顯著的臨床意義。臨床檢測透明質(zhì)酸一般采用放射免疫分析方法或固相酶聯(lián)免疫方法。目前血 清HA的檢測多采用以透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白(HABP)為主要檢測試劑的放免測定法，由于 HABP的活性區(qū)域極易受損，故標(biāo)記時(shí)需先用HA保護(hù)，因而操作繁瑣，耗時(shí)長，回收 率低，且125I-HABP有效期不足45d，藥盒成本高，因此該方法的建立所需工作量大，技 術(shù)要求高。針對Tengblad方法的不足，Delpech et al首創(chuàng)HA的ELISA檢測方法，即以 HABP,標(biāo)準(zhǔn)HA和酶聯(lián)抗HABP抗體為主要檢測試劑的間接法酶聯(lián)免疫測定法，以及以 HABP,抗HABP單抗和酶聯(lián)抗HABP多抗為主要檢測試劑的抑制法酶聯(lián)免疫測定法，雖 然上述技術(shù)能達(dá)到ng檢測水平，但仍然存在操作較繁瑣、成本較高、靈敏度和準(zhǔn)確性不 高的問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種高親和力的抗透明質(zhì)酸單克隆抗體及其在制備基于競 爭原理的固相酶聯(lián)免疫檢測試劑盒中的應(yīng)用，以提高對透明質(zhì)酸的檢測靈敏度和準(zhǔn)確 性，及降低檢測成本和簡化操作。
本發(fā)明所提供的抗透明質(zhì)酸單克隆抗體，其特征在于其輕鏈的氨基酸殘基序 列如SEQ ID No.l所示，其重鏈的氨基酸殘基序列如SEQ ID No.2所示。所述的抗透明質(zhì)酸單克隆抗體，是由保藏號為CCTCCNO.C201056的雜交瘤 細(xì)胞株1G10C11B12分泌產(chǎn)生。
所述的雜交瘤細(xì)胞株是以透明質(zhì)酸為免疫源，小鼠為免疫對象，通過免疫注射 小鼠，取免疫小鼠脾臟制備懸液，并使之與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合獲得。所述的抗透明質(zhì)酸單克隆抗體，屬于IgG亞型。所述的抗透明質(zhì)酸單克隆抗體的腹水效價(jià)為1 106。本發(fā)明的抗透明質(zhì)酸單克隆抗體可以與透明質(zhì)酸高度特異性結(jié)合，可 通過本領(lǐng) 域技術(shù)人員所公知的的方法，制備成透明質(zhì)酸的各種檢測試劑盒。尤其是，應(yīng)用本發(fā)明 的抗透明質(zhì)酸單克隆抗體和基于競爭原理的固相酶聯(lián)免疫技術(shù)制備的透明質(zhì)酸檢測試劑 盒，不僅可以定量檢測人血清中透明質(zhì)酸的含量，使檢測靈敏度能達(dá)到10.029ng/ml， 檢測準(zhǔn)確性在0.9至1.1之間，劑量-反應(yīng)曲線的線性在0.992以上，批內(nèi)不精密度小于 10%,批間不精密度小于15%，而且與對比檢測試劑配對T檢驗(yàn)P值> 0.05，與對比檢 測試劑相關(guān)性 r (Pearson Correlation) >0.90、P (Sig. (2-tailed)) <0.01，具有較高的診斷 一致性，可用于臨床上對肝纖維化的輔助診斷。


圖1為5’ RACE產(chǎn)物電泳圖，其中1號為輕鏈結(jié)果，2號為重鏈結(jié)果，M為 DNA Marker。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本 發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明講授的內(nèi)容之后，本領(lǐng) 域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請所附權(quán)利要 求書所限定的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件、實(shí)驗(yàn)室手冊中 所述的條件或按照制造廠商所建議的條件。實(shí)施例1 抗透明質(zhì)酸單克隆抗體的制備一、動物免疫取雌性6 8周齡的BALB/c小鼠，首次免疫用濃度為5mg/ml的透明質(zhì)酸純 品，經(jīng)腹腔和四肢腋下注射，總量lml。每隔2周以同樣的方法加強(qiáng)免疫1次，共免疫3 次，末次免疫后的第4天，從經(jīng)三次免疫后小鼠眼球采血，離心分離血清，用ELISA法 選出效價(jià)高的小鼠準(zhǔn)備融合。二、雜交瘤細(xì)胞系的制備完成免疫過程的小鼠準(zhǔn)備取脾細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞SP2/0融合，在融合前一 天制備飼養(yǎng)細(xì)胞。融合時(shí)無菌下取小鼠脾細(xì)胞，與SP2/0細(xì)胞以10 1混合，以50% PEG介導(dǎo)融合，離心后重懸于HAT選擇性培養(yǎng)基中，接種于含有飼養(yǎng)細(xì)胞的96孔微孔板 中，置37°C、5%C02培養(yǎng)箱培養(yǎng)，融合后第3d、第5d、第7d用HAT培養(yǎng)液半量換液，兩周后換用HT培養(yǎng)液。 觀察雜交瘤細(xì)胞的生長情況，等克隆長至孔底面積的1/3 1/2，取培養(yǎng)上清 液，用ELISA法進(jìn)行抗體檢測，篩選陽性克隆。以有限稀釋法對陽性孔的雜交瘤細(xì)胞 進(jìn)行克隆化培養(yǎng)，直到克隆化細(xì)胞抗體陽性率為100%，選出高分泌特異性細(xì)胞株(即 ELISA效價(jià)在1 IO6以上的陽性克隆)，此時(shí)可將陽性克隆細(xì)胞進(jìn)一步擴(kuò)大培養(yǎng)。將雜 交瘤細(xì)胞經(jīng)體外連續(xù)傳代3個(gè)月以上和反復(fù)凍存、復(fù)蘇，定期收集上清，用篩選抗體的 方法測定上清中的抗體，直至細(xì)胞系能穩(wěn)定分泌單克隆抗體。三、單克隆抗體的制備和純化選用成年BALB/c小鼠，腹腔注射0.5ml液體石蠟，1 2周后收集生長狀態(tài)良 好的單克隆雜交瘤細(xì)胞株1G10C11B1該細(xì)胞株已在設(shè)置于中國武漢大學(xué)內(nèi)的中國典 型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏日期為2010年7月1日，保藏號為CCTCC NO.C201056，每只腹腔注射lml。接種2周左右的小鼠腹部可見明顯膨大，以頸椎脫 臼法處死后打開腹腔，取出腹水。離心后吸取上清，用硫酸銨沉淀后，再用DEAE離子 交換柱純化，用PH5.6，20mM的醋酸鹽緩沖液洗脫，收集洗脫液。再用親和層析純化法 (蛋白A-Sepharose4B柱)繼續(xù)純化，上樣條件樣品和蛋白A_Sepharose4B柱用PH8.2， 1.0M的Tris緩沖液平衡后再上樣。洗脫條件用PH3.0，50mM的甘氨酸緩沖液洗脫， 收集洗脫液，制得特異的單克隆抗體。四、單克隆抗體的腹水效價(jià)及鑒定取小鼠腹水抗體，用篩選抗體的方法測定效價(jià)為1 106，亞型鑒定為IgG 型。馬嵐等通過常規(guī)單抗雜交瘤細(xì)胞技術(shù)也獲得了抗透明質(zhì)酸單克隆抗體，其效價(jià)為 1 IO5;免疫印跡試驗(yàn)表明sigma公司的抗透明質(zhì)酸單克隆抗體的效價(jià)僅為1 IO4 ；可 見本發(fā)明的抗透明質(zhì)酸單克隆抗體的效價(jià)高于現(xiàn)有技術(shù)。實(shí)施例2 單克隆抗體的特異性鑒定材料層粘蛋白、III型前膠原氨基末端肽、IV型膠原、硫酸軟骨素。方法采用ELISA法檢測，以透明質(zhì)酸為陽性對照。結(jié)果顯示層粘蛋白、III型前膠原氨基末端肽、IV型膠原、硫酸軟骨素均為陰 性。說明本發(fā)明的抗透明質(zhì)酸單克隆抗體對透明質(zhì)酸具有高度特異性。實(shí)施例3 單克隆抗體的可變區(qū)序列的克隆與測序采用5，RACE (Rapid Amplification of cDNA Ends，快速擴(kuò)增 cDNA 末端)技術(shù)，
從分泌抗透明質(zhì)酸單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株1G10C11B12中克隆功能性抗體的可變區(qū) 序列。其步驟可簡述為由一個(gè)反義的基因特異性引物(GSPl)來合成cDNA第一鏈， cDNA第一鏈純化后，利用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal deoxynucleotidy transferase, TdT)在cDNA的3’末端加上一個(gè)合成的同聚核苷酸錨定序列。利用第二個(gè)巢式基因特 異性引物(GSP2)和一個(gè)與同聚核苷酸尾巴可以退火的錨定引物來擴(kuò)增cDNA。具體實(shí)驗(yàn) 過程如下材料-由雜交瘤細(xì)胞株1G10C11B12分泌產(chǎn)生的抗透明質(zhì)酸單克隆抗體-大腸桿菌ToplO菌株
-pGEM-T Easy 克隆載體引物設(shè)計(jì)根據(jù)免疫球蛋白基因的特點(diǎn)，設(shè)計(jì)兩套分別對應(yīng)Ig和Kappa恒定區(qū)的基因特異 性引物GSP1、GSP2,引物序列如下pRace-H-GSPl GTCCACCKYGGTSYTGCTGGCYGGGTGpRace-H-GSP2 GCACACYRCTGGACAGGGATCCAGAGTTCCpRace-K-GSPl ACTTGACATTGATGTCTTTGpRace-K-GSP2 CACGACTGAGGCACCTCCAGATG克隆過程A、第一鏈合成以總RNA為模板，以GSPl為引物，在反轉(zhuǎn)錄酶的作用下合成cDNA第一鏈。 具體步驟如下1)在一個(gè)0.5ml的微量離心管中加入以下組分GSPl2.5ml總 RNA 1 5 μ g補(bǔ)充經(jīng)DEPC處理的水至總體積為15.5 μ 1，混勻。2)70°C變性lOmin，冰浴Imin，短暫離心后依次加入以下組分IO^PCRbuffer 2.5 μ 125mM MgCl2 2.5 μ 1IOmM dNTP mix 1.0 μ 10.IM DTT 2.5 μ 1。3)混勻，短暫離心后置42°C lmin。4)在反應(yīng)體系中加入1 μ 1 SuperScriptTMII RT (Invitrogen公司)，輕輕混勻后置 42°C 反應(yīng) 50min。5)反轉(zhuǎn)錄結(jié)束后置70°C、15min以終止反應(yīng)。6)離心10 20秒后置于37°C。7)加入1 μ 1 RNase mix,輕輕混勻后置于37°C反應(yīng)30min。8)將反應(yīng)管取出置冰上備用。B、DNA 純化使用QIAGEN公司QIAquick PCR純化試劑盒。1)加5倍體積于反轉(zhuǎn)錄體系的PB緩沖液于反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)管中，混勻。2)將QIAquick離心柱置于2ml收集管中，把樣品加入離心柱，13000rpm離心60秒。3)棄去液體，將離心柱放回原來的收集管中，加入0.75ml PE緩沖液于QIAquick 離心柱，13000rpm離心60秒。4)棄去液體，將QIAquick離心柱放回原來 的收集管，13000rpm離心60秒。5)將QIAquick離心柱置于一干凈的1.5ml離心管，在QIAquick膜中央加入30 μ 1 EB緩沖液，靜置Imin后，13000rpm離心60秒。C、cDNA 加尾
1)在一個(gè)0.5ml的微量離心管中一次加入以下組分DEPC 處理的水 6.5 μ 1
5*tailing buffer 5.0 μ 12mM dCTP2.5 μ 1純化的cDNA10.0 μ 1，混勻。 2)將反應(yīng)管置94°C維持3min后，冰浴lmin，短暫離心后置冰上。3)加入 1 μ 1 TdT,混勻后置 37°C反應(yīng) lOmin。4)將反應(yīng)管置于65°C中作用30min終止反應(yīng)，離心后置于冰上備用。D、PCR在一個(gè)0.2ml的PCR薄壁管中加入以下組分滅菌水31.5 μ 110*PCR Buffer 5.0 μ 125mM MgCl2 3.0 μ 1IOmMdNTPmix 1.0 μ 1GSP2 (lOpmol/ μ 1) 2.0 μ 1ΑΑΡ (IOpmol/ μ 1) 2.0 μ 1dC-tailed cDNA 5.0 μ 1Tag 酶0.5 μ 1合計(jì)50.0 μ 1混勻后置PCR儀中進(jìn)行反應(yīng)。E、PCR產(chǎn)物電泳純化PCR產(chǎn)物經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳鑒定，結(jié)果如圖1所示其中1號為輕鏈結(jié) 果，在約420bp處有一特異性條帶；2號為重鏈結(jié)果，在約450bp處有一特異性條帶。F、使用Promega公司的pGEM-T Easy試劑盒，將PCR產(chǎn)物克隆到pGEM-TEasy 載體，轉(zhuǎn)化大腸桿菌ToplO (Invitrogen公司)具體過程為1)輕鏈和重鏈PCR產(chǎn)物經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳，分別回收420bp和450bp的條 帶，最終定容于20 μ 1體積的滅菌水中；2)在一個(gè)0.5ml的微量離心管中，加入以下組分2*連接緩沖液 5 μ 1pGEM-T Easy 50ng (1 μ 1)PCR 產(chǎn)物25ng (3 μ 1)Τ4 連接酶1 μ 1混勻后室溫連接2小時(shí)或者4°C連接16小時(shí)以上。3)轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞，涂布于含有氨芐青霉素和IPTG、X-GAL的LB平 板上，37 °C培養(yǎng)12小時(shí)左右。G、測定所克隆的PCR產(chǎn)物的堿基序列各選取至少5個(gè)質(zhì)粒測定其所含的PCR產(chǎn)物的堿基序列。H、根據(jù)堿基序列與氨基酸編碼序列的相應(yīng)關(guān)系，分析PCR產(chǎn)物的閱讀框架， 確定相應(yīng)可變區(qū)的氨基酸序列，其輕鏈和重鏈的序列分別如SEQ ID No.l和SEQ ID No.2所示。根據(jù)免疫球蛋白基因的特點(diǎn)驗(yàn)證其為小鼠IgG抗體序列。實(shí)施例4 本發(fā)明的抗透明質(zhì)酸單克隆抗體的應(yīng)用采用本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的基于競爭原理的固相酶聯(lián)免疫技術(shù)，制作透明質(zhì) 酸檢測試劑盒，在體外定量檢測人血清中的透明質(zhì)酸的含量，用于臨床上輔助診斷肝纖 維化疾病。 一、檢測原理采用基于競爭原理的固相酶聯(lián)免疫方法(ELISA)。微孔內(nèi)包被透明質(zhì)酸，將標(biāo) 準(zhǔn)品或待測標(biāo)本加入微孔中，再加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗透明質(zhì)酸單克隆抗體共同 進(jìn)行溫育。在溫育過程中，標(biāo)本中的透明質(zhì)酸與微孔內(nèi)包被的透明質(zhì)酸競爭與酶標(biāo)抗體 結(jié)合。洗滌除掉未結(jié)合的物質(zhì)，加底物顯色。顏色的強(qiáng)弱反映了結(jié)合的酶標(biāo)抗體的量。 它與標(biāo)本中的透明質(zhì)酸的濃度成反比。終止反應(yīng)后，用酶標(biāo)儀在450nm讀吸光度，其值 與標(biāo)本中的透明質(zhì)酸濃度成反比。根據(jù)所測定的標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，待測標(biāo) 本中的透明質(zhì)酸濃度值即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上獲得。二、檢測方法A、試劑配制1)配制洗滌液將濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水按1 20比例稀釋，得到洗 滌液備用。2)配制酶結(jié)合物將濃縮酶結(jié)合物與酶結(jié)合物稀釋液按1 50比例混勻得到酶 結(jié)合物工作液。配制好的工作液于2 8°C下可保存4周。3)準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)品臨用前用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液將標(biāo)準(zhǔn)品原液(1600ng/ml)倍比稀釋， 得到濃度為 800ng/ml，400ng/ml, 200ng/ml, 100ng/ml, 50ng/ml 的標(biāo)準(zhǔn)品。B、操作步驟1)根據(jù)實(shí)驗(yàn)用量，取出相應(yīng)數(shù)量的板條，其余板條放回密封袋中，于2 8°C下 密封保存。2)在相應(yīng)的微孔中分別加入HA標(biāo)準(zhǔn)品或被測血清標(biāo)本100 μ 1，另設(shè)一孔為零 孔，加入100 μ 1標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(則該孔透明質(zhì)酸濃度為Ong/ml)；然后每孔(包括零孔) 再各加入10 μ 1酶結(jié)合物，混勻。3) 37°C溫箱中溫育反應(yīng)60分鐘。4)棄去微孔中液體，用洗滌液洗滌4 5次，洗滌完畢后，將微孔板在吸水紙上 拍干。5)每孔加底物液A，底物液B各1滴，避光37°C反應(yīng)10分鐘(或當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品孔顯 示蘭色梯度，零孔為深藍(lán)色時(shí)終止反應(yīng))。6)每孔加終止液一滴終止反應(yīng)，在終止反應(yīng)后15分鐘內(nèi)于酶標(biāo)儀450nm處測定 各孔0.D值。C、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制以450nm處的O.D.值為縱座標(biāo)，透明質(zhì)酸的濃度為橫座標(biāo)，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度 及相應(yīng)的實(shí)際O.D.值制得標(biāo)準(zhǔn)曲線。D、結(jié)果計(jì)算根據(jù)被測血清標(biāo)本在450nm處的實(shí)際O.D.值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上求得其相對應(yīng)的透明質(zhì)酸濃度(ng/ml)。 三、結(jié)果判定正常參考值范圍20 120ng/ml。選取135例正常個(gè)體作為參考人群進(jìn)行檢測，采用百分位數(shù)法確定參考值范 圍。以可信度95%為正常值范圍，計(jì)算單測上限P95。四、臨床應(yīng)用結(jié)果為評價(jià)透明質(zhì)酸檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法)在臨床上應(yīng)用于定量測定人血清中透 明質(zhì)酸的含量的適用性與準(zhǔn)確性，從臨床中選出344例樣本作為研究對象進(jìn)行檢測，產(chǎn) 品所檢測的透明質(zhì)酸不因年齡或性別而導(dǎo)致差異，因此在選擇研究對象時(shí)年齡與性別基 本不做限制，入選對象以臨床表現(xiàn)肝病病人為主，也包括部分無癥狀的就診患者。采用 與鄭州安圖綠科生物工程公司生產(chǎn)的透明質(zhì)酸定量測定試劑盒(化學(xué)發(fā)光法)作為參比的 方法。比較檢測結(jié)果，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1所示。表1本發(fā)明的檢測試劑盒的臨床應(yīng)用結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種抗透明質(zhì)酸單克隆抗體，其特征在于其輕鏈的氨基酸殘基序列如SEQ ID Nal所示，其重鏈的氨基酸殘基序列如SEQ ID No.2所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗透明質(zhì)酸單克隆抗體，其特征在于所述的抗透明質(zhì)酸 單克隆抗體是由保藏號為CCTCC NO.C201056的雜交瘤細(xì)胞株1G10C11B12分泌產(chǎn)生。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的抗透明質(zhì)酸單克隆抗體，其特征在于所述的雜交瘤細(xì)胞 株是以透明質(zhì)酸為免疫源，小鼠為免疫對象，通過免疫注射小鼠，取免疫小鼠脾臟制備 懸液，并使之與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合獲得。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗透明質(zhì)酸單克隆抗體，其特征在于所述的抗透明質(zhì)酸 單克隆抗體屬于IgG亞型。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗透明質(zhì)酸單克隆抗體，其特征在于所述的抗透明質(zhì)酸 單克隆抗體的腹水效價(jià)為1 106。
6.—種權(quán)利要求1所述的抗透明質(zhì)酸單克隆抗體的應(yīng)用，其特征在于用于透明質(zhì) 酸檢測試劑盒的制備中。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的抗透明質(zhì)酸單克隆抗體的應(yīng)用，其特征在于用于基于競 爭原理的固相酶聯(lián)免疫技術(shù)制備的透明質(zhì)酸檢測試劑盒。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的抗透明質(zhì)酸單克隆抗體的應(yīng)用，其特征在于用于臨床上 對肝纖維化疾病的輔助診斷。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種抗透明質(zhì)酸單克隆抗體，所述抗體的輕鏈的氨基酸殘基序列如SEQ ID No.1所示，其重鏈的氨基酸殘基序列如SEQ ID No.2所示。所述的抗體是由保藏號為CCTCC NO.C201056的雜交瘤細(xì)胞株1G10C11B12分泌產(chǎn)生。本發(fā)明的抗透明質(zhì)酸單克隆抗體可應(yīng)用于透明質(zhì)酸的各種檢測試劑盒的制備中。使用本發(fā)明的抗透明質(zhì)酸單克隆抗體及基于競爭原理的固相酶聯(lián)免疫技術(shù)制備的透明質(zhì)酸檢測試劑盒，不僅可以定量檢測人血清中透明質(zhì)酸的含量，而且具有高靈敏度、準(zhǔn)確性和較高的診斷一致性，可用于臨床上對肝纖維化的輔助診斷。
文檔編號G01N33/577GK102010469SQ20101051665
公開日2011年4月13日 申請日期2010年10月22日 優(yōu)先權(quán)日2010年10月22日
發(fā)明者周季余, 黃桂民, 黃波 申請人:上海貝西生物科技有限公司