專利名稱：：穩(wěn)定的酶溶液和制造方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本文公開內(nèi)容涉及包含或包括酶、抑制劑和抑制劑加強(qiáng)劑(inhibitorbooster)的液體組合物。背景在含酶液體如含酶液體洗滌劑中的儲(chǔ)存穩(wěn)定性問題是公知的。這點(diǎn)在含蛋白酶的液體洗滌劑中尤是如此?，F(xiàn)有技術(shù)已經(jīng)廣泛地致力于改進(jìn)儲(chǔ)存穩(wěn)定性，例如通過加入蛋白酶抑制劑來進(jìn)行。已知硼酸和代硼酸(boronicacid)可逆地抑制蛋白水解酶。關(guān)于代硼酸對(duì)一種絲氨酸蛋白酶枯草溶菌素(subtilisin)的抑制的討論在Molecular&CellularBiochemistry51,1983,第5-32頁(yè)中提供。代硼酸具有非常不同的作為枯草溶菌素抑制劑的能力。僅含烷基如甲基、丁基或2-環(huán)己基乙基的代硼酸是弱抑制劑，其中曱基硼酸是最弱的抑制劑，而帶有芳香基如苯基、4-曱氧苯基或3，5-二氯苯基的代硼酸是良好的抑制劑，其中3，5-二氯苯基硼酸是尤其有效的一種(參見Keller等，Biochem.Biophys.Res.Com.176,1991，第401-405頁(yè))。還已知在相對(duì)于硼的3-位具有取代的芳基硼酸是可逆性蛋白酶抑制劑。在WO92/19707中，乙酰氨基苯基硼酸(acetamidophenylboronicacid)作為蛋白水解酶抑制劑得到描述。另夕卜EP0832174描述了接近苯基硼酸(adjacenttothephenylboronicacid)在對(duì)位用〉CO取代的苯基硼酸衍生物在液體中具有良好的作為酶穩(wěn)定劑的能力。在配制、制造和包裝包括敏感酶的液體酶組合物中仍有改進(jìn)的空間，以提供在運(yùn)輸和儲(chǔ)存期間不喪失(loose)酶活性的洗滌劑組合物
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供具有改進(jìn)的酶穩(wěn)定性的液體酶組合物。本發(fā)明另一個(gè)目的是提供用于制造所述液體酶組合物的方法。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)向包括酶和抑制劑如苯基硼酸或苯基硼酸衍生物的液體酶組合物加入抑制劑加強(qiáng)劑如可溶性鹽使抑制劑效果顯著改進(jìn)，并由此相對(duì)于酶活性改進(jìn)酶的儲(chǔ)存穩(wěn)定性。本發(fā)明提供一種包括酶組分、苯基硼酸組分或其衍生物和水溶性鹽組分的液體酶組合物。本發(fā)明還涉及所述液體酶組合物的制造及其用途。本發(fā)明的目的已經(jīng)通過提供一種包括酶組分、苯基硼酸組分或其衍生物和溶解的鹽組分的液體組合物而獲得。在多個(gè)實(shí)施方案中，酶組分是蛋白酶如絲氨酸蛋白酶。鹽組分可以包括陽離子如Cu、Ca、Mg、Zn、Na、K、NH4和它們的組合。在多個(gè)實(shí)施方案中，鹽組分可以包括選自下組的陽離子Mg、Zn、NH4和它們的組合。在一些實(shí)施方案中，鹽組分包括陰離子，其包含氯離子、硫酸根、硝酸根、磷酸根、碳酸根、甲酸根和它們的組合。另外，鹽組分可以包括陰離子如氯離子、硫酸根、硝酸根和它們的組合。在特定的實(shí)施方案中，陽離子選自由Cu、Ca、Mg、Zn、Na、K、NH4組成的組且陰離子選自由氯離子、硫酸根、硝酸根、磷酸根、碳酸根和曱酸才艮組成的組。在一些實(shí)施方案中，液體組合物的pH為7-10.5，而在一些實(shí)施方案中，液體組合物的pH為8-9.5。在一些實(shí)施方案中，鹽組分以占總組合物重量的0.1%-20%的量存在。本文公開內(nèi)容的目的還通過提供洗滌劑組合物，如洗衣用洗滌劑組合物或洗石茱用組合物而實(shí)現(xiàn)。本發(fā)明的目的還可以通過提供一種用于制造液體組合物的方法來實(shí)現(xiàn)，所述方法包括如下步驟提供液體；向a)的液體加入水溶性鹽；與b)同時(shí)或在b)之后，在a)中加入酶和苯基硼酸或其衍生物；和混合所述液體組合物。在多個(gè)實(shí)施方案中，所述方法也可以包括將pH調(diào)節(jié)至7-9.5，或8-9的步驟。本發(fā)明的目的還通過使用根據(jù)本文公開內(nèi)容的組合物清潔物體來實(shí)現(xiàn)。還通過使用鹽組分來加強(qiáng)或增強(qiáng)液體酶組合物中苯基硼酸或其衍生物的抑制劑效果來實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的。定義如本文所使用，術(shù)語"％RH"是指空氣的相對(duì)濕度。100。/。RH是在固定的溫度下水分飽和的空氣，且因此。/。RH反映了空氣的百分比濕分飽和度(percentmoisturesaturation)。關(guān)于化合物或物質(zhì)的術(shù)語"恒定濕度"(在本發(fā)明的上下文中有時(shí)簡(jiǎn)寫為CH)是指大氣的。/。RH與同所述化合物的固相接觸的化合物飽和水溶液平衡，其全部限制在給定溫度下的封閉空間內(nèi)。此定義是根據(jù)"/^"必ooto/c/^m&打朋^7/zjw'cs"CRCPress,Inc.,Cleveland,USA,第58版,pE46，1977-1978頁(yè)。因此就某種化合物而言CH,-50。/。是指在20。C下50%濕度的空氣將與該化合物的飽和水溶液平衡。因此，術(shù)語恒定濕M化合物吸濕性質(zhì)的量度。關(guān)于化合物的術(shù)語"pH"在本發(fā)明的上下文中應(yīng)理解為該化合物的10%w/w水溶液的pH。優(yōu)選實(shí)施方案詳述本文公開內(nèi)容涉及包括一種或多種酶組分、一種或多種抑制劑和一種或多種抑制劑加強(qiáng)劑的液體酶組合物。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)如果抑制劑是代硼酸或其衍生物，那么鹽在液體酶組合物中發(fā)揮抑制劑加強(qiáng)劑的作用。不希望受到本文公開內(nèi)容的任何理論的限制，認(rèn)為洗滌劑組合物中的苯基硼酸衍生物的抑制劑作用受到堿性pH和高含水量(水活度(wateractivity))的組合的負(fù)面影響。在堿性pH下，代硼酸經(jīng)由它的抗堿反應(yīng)(antibase-reaction)而變?yōu)閹щ姾傻囊栽黾铀苄浴Ａ硗?，這降低分子對(duì)光解位點(diǎn)的親和力，所述分子有抑制光解位點(diǎn)的傾向。平衡(l)向不受抑制的蛋白酶一側(cè)(右)移動(dòng)(1)EZ[I]"EZ+IEZ是蛋白酶，I是抑制劑，而EZ[I]是失活的復(fù)合物。通過降低抑制劑在洗滌劑基質(zhì)中的溶解度，平衡(l)將向受抑制的蛋白酶復(fù)合物一側(cè)(左)移動(dòng)一一降低抑制劑將從溶液中析出的可能性。苯環(huán)是高疏水性的，因此認(rèn)為向洗滌劑組合物加入一種或多種鹽組分將使其不利于苯環(huán)存在于溶液中，而更有可能與蛋白酶的活性位點(diǎn)相互作用。還認(rèn)為加強(qiáng)作用可能附帶蛋白酶中的一些小的結(jié)構(gòu)變化，其促進(jìn)抑制劑更好地匹配入活性位點(diǎn)中。抑制劑組分根據(jù)本文公開內(nèi)容一種或多種抑制劑存在于組合物中。在多個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的酶抑制劑是代硼酸和/或其衍生物。在本發(fā)明的特定實(shí)施方案中，抑制劑是苯基硼酸和/或其衍生物。本發(fā)明涵蓋包括代硼酸或其衍生物的液體酶組合物。在特定的實(shí)施方案中，本發(fā)明涵蓋包含苯基硼酸或其衍生物的液體酶組合物。在本發(fā)明的特定實(shí)施方案中，抑制劑是萘硼酸衍生物。所述抑制劑組分以足以提供有益效果的量存在。在多個(gè)實(shí)施方案中，加入的抑制劑組分的量是總液體組合物的0.1%-20%(w/w),在一些實(shí)施方案中，其量是總組合物的0.5%-8°/。(w/w),并且在一些實(shí)施方案中，其量是總組合物的1%-5%(w/w)。在本發(fā)明的特定實(shí)施方案中，抑制劑的量是總液體組合物的1%(w/w)以上。在本發(fā)明更特定的實(shí)施方案中，抑制劑組分的量是總液體組合物的1.5%(w/w)以上。在本發(fā)明最特定的實(shí)施方案中，抑制劑的量是總液體組合物的2。/。(w/w)以上。在本發(fā)明的特定實(shí)施方案中，以總組合物的至少0.1。/。(w/w)的量向酶液體組合物加入抑制劑。在本發(fā)明更特定的實(shí)施方案中，以總組合物的至少0.5%(w/w)的量向液體酶組合物加入抑制劑。在甚至更特定的實(shí)施方案中，以總組合物的至少1%(w/w)的量向液體酶組合物加入抑制劑。在本發(fā)明最特定的實(shí)施方案中，以總組合物的至少1.5%(w/w)的量向液體酶組合物加入抑制劑組分。在本發(fā)明的特定實(shí)施方案中，加入酶液體組合物中的抑制劑的量是低于總組合物的20%(w/w)的量。在本發(fā)明更特定的實(shí)施方案中，加入酶液體組合物的抑制劑的量是低于總組合物的15。/。(w/w)的量。在本發(fā)明甚至更特定的實(shí)施方案中，加入酶液體組合物的抑制劑的量低于總組合物的10%(w/w)。在本發(fā)明最特定的實(shí)施方案中，加入酶液體組合物的抑制劑的量低于總組合物的5%(w/w)。用于根據(jù)本文公開內(nèi)容的用途的合適苯基硼酸衍生物的非限定性實(shí)例具有下式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>其中R選自下組氫、羥基、C廣C6烷基、取代的CrCs烷基、C廣C6烯基和取代的d-C6烯基。在本文公開內(nèi)容的一個(gè)實(shí)施方案中，液體組合物包括酶組分和上文7>開的式子的苯基硼酸衍生的酶抑制劑，其中R是C廣C6烷基，具體而言其中R是CH3、(^3012或013012012，或其中R是氫。在本文公開內(nèi)容的一個(gè)實(shí)施方案中，酶的抑制劑是4-曱酰-苯基-硼酸(4-FPBA)。在多個(gè)實(shí)施方案中，抑制劑的合適的非限定性實(shí)例包括選自下組的化合物蓬吩-2硼酸、硼酸、乙酰胺苯基硼酸、苯并呋喃-2硼酸、硼酸、萘—2硼酸、2-FPBA、3-FBPA、4-FPBA、l-瘞蒽硼酸、4-二苯并呋喃硼酸、5-曱基p塞吩-2硼酸、硫茚硼酸(thionaphtheneboronicacid)、吹喃-2硼酸、呋喃-3硼酸、4,4聯(lián)苯-二硼酸(4,4biphenyl-diborinicacid)、6-羥基-2-萘(6-hydroxy-2-naphtalene)、4-(曱硫基)苯基硼酸、4(三曱基-曱硅烷基)苯基硼酸、3-溴代"塞吩硼酸、4-曱基p塞吩硼酸、2-萘基硼酸、5-溴蓉卩分硼酸(5-bromothipheneboronicacid)、5-氯代噢哈硼酸、二曱基p塞吩硼酸、2-溴代苯基硼酸、3-氯代苯基硼酸、3-曱氧基-2』塞吩、對(duì)-曱基-苯乙基硼酸、2-瘞蒽硼酸、二苯并瘞吩硼酸、4-羧基苯基硼酸、9-蒽基硼酸、3,5二氯苯基硼酸、二苯基硼酸酐、鄰-氯代苯基硼酸、對(duì)-氯代苯基硼酸、間-溴代苯基硼酸、對(duì)-溴代苯基硼酸、對(duì)-氟代苯基硼酸、對(duì)-曱苯基硼酸、鄰-曱苯基硼酸、辛基硼酸、1,3,5三曱基笨基硼酸、3-氯代-4-氟代苯基硼酸、3-M苯基硼酸、3,5-二-(三氟曱基)苯基硼酸、2,4二氯代苯基硼酸、4-曱氧基苯基硼酸和他們的組合。4,963,655、US5,159,060、WO95/12655、WO95/29223、WO92/19707、WO94/04653、WO94/04654、US5442100、US5488157和US5472628中描述(通過^L述將它們整體并入本文)。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物包含酶、抑制劑組分(其中所述組分是代硼酸或其衍生物)和抑制劑加強(qiáng)劑組分。抑制劑加強(qiáng)劑組分根據(jù)本文公開內(nèi)容一種或多種抑制劑加強(qiáng)劑存在于組合物中。抑制劑加強(qiáng)劑可以以足以提供有益效果的量存在，例如，抑制劑加強(qiáng)劑可以以有效量存在。在一個(gè)實(shí)施方案中，抑制劑加強(qiáng)劑是水溶性的。在本文公開內(nèi)容的上下文中，抑制劑加強(qiáng)劑在20。C可以具有IOO克水中至少1克的溶解度，如在20。C在IOO克水中至少2克的溶解度。在本文公開內(nèi)容的一些實(shí)施方案中，抑制劑加強(qiáng)劑是溶解的形式。在一個(gè)抑制劑加強(qiáng)劑是鹽的實(shí)施方案中，將所述鹽溶解，并且因此是離子形式。在一些實(shí)施方案中，僅部分鹽溶解，而剩余的為固體形式。抑制劑加強(qiáng)劑能夠增加或增強(qiáng)抑制劑組分對(duì)酶組分的效果。在多個(gè)實(shí)施方案中，抑制劑加強(qiáng)劑可以是一種或多種可溶性鹽。合適的可溶性鹽的非限定性實(shí)例可以是無機(jī)鹽或有機(jī)鹽，和它們的組合。合適的陽離子的非限定性實(shí)例是銨或金屬離子和堿金屬或堿土金屬離子，如鈉、鉀、鎂、4丐、鋅或鋁，和它們的組合。陰離子的非限定性實(shí)例包括氯離子、碟離子、硫酸根、亞硫酸根、亞硫酸氫根、硫代硫酸根、膦酸根、磷酸根、磷酸二氫根、磷酸氫根、次磷酸根、焦磷酸二氫根、硝酸根、氯離子、碳酸根、碳酸氫根、正(偏)硅酸根，筒單有機(jī)酸(少于10個(gè)碳原子，例如6個(gè)或更少的碳原子)，如檸檬酸根、蘋果酸根、馬來酸根、丙二酸根、琥珀酸根、乳酸根、曱酸根、乙酸根、丁酸根、丙酸根、苯甲酸根、酒石酸根、抗壞血酸根或葡糖酸根，和它們的組合。具體而言，可以使用堿金屬和堿土金屬的硫酸鹽、亞硫酸鹽、磷酸鹽、膦酸鹽、硝酸鹽、氯化物或碳酸鹽，或簡(jiǎn)單有機(jī)酸的鹽如檸檬酸鹽、丙二酸鹽或乙酸鹽，和它們的組合。具體非限定性實(shí)例包括NaH2P04、Na2HP04、Na3P04、(NH4)H2P04、K2HP04、KH2P04、Na2S04、K2S04、KHS04、ZnS04、MgS04、CuS04、Mg(N03)2、(NH4)2S04、四硼酸鈉(sodiumborate)、乙酸鎂、檸檬酸鈉和它們的組合物。鹽也可以是水合鹽，即帶有結(jié)晶的結(jié)合水的晶體鹽水合物，如WO99/32595中所述。水合鹽的實(shí)例包括七水合硫酸鎂(MgS04(7H20))、七水合硫酸鋅(ZnS04(7H20))、七水合磷酸氫鈉(Na2HP04(7H20))、六水合硝酸鎂(Mg(N03)2(6H20))、十水合硼酸鈉、二7jc合檸檬酸鈉和四水合乙酸鎂。在本發(fā)明的特定實(shí)施方案中，鹽選自下組MgCl2、MgS04、Mg(N03)2、ZnCl2、ZnS04、ZN(N03)2、NH4Cl、,節(jié)3、(NH4)2S04、CaCl2、NaCl、KCl、Na2S04、NaN03、NaH2P04、C2H3Na02、NaHC03和甲酸鈉。在本發(fā)明的另一特定實(shí)施方案中，鹽選自下組MgCl2、MgS04、Mg(N03))2、ZnCl2、ZnS04、Zn(N03)2、NH4Cl、NH4N03、(NH4)2SCVCaCl2、KCl、Na2S04、NaN03、NaH2P04、C2H3Na02、NaHC03和曱酸鈉。在本發(fā)明的特定實(shí)施方案中，鹽選自下組MgCl2、MgS04、Mg(N03))2、ZnCl2、ZnS04、Zn(N03)2、NH4Cl、NH4N03、(NH4)2S04、KCl、Na2S04、NaN03、NaH2P04、C2H3Na02和曱酸鈉。在本發(fā)明的另一特定實(shí)施方案中，鹽選自下組MgCl2、MgS04、Mg(N03))2、ZnCl2、ZnS04、Zn(N03)2、NH4C1、,冊(cè)3、(NH4)2S04、NaN03和NaH2P04。在本發(fā)明的另一特定實(shí)施方案中，鹽選自下組MgCl2、MgS04、Mg(N03))2、NH4C1、NH4N03、(NH4)2S04、NaN03和NaH2P04。在本發(fā)明的另一特定實(shí)施方案中，鹽選自下組MgCl2、MgS04、Mg(N03))2、NH4C1、NH4NOXNH4)2S04。在本發(fā)明的特定實(shí)施方案中，陽離子選自Mg、Zn、Na、K或NH4。在本發(fā)明更特定的實(shí)施方案中，陽離子選自Mg或NH4。在本發(fā)明的特定實(shí)施方案中，陰離子選自氯離子、疏酸根和硝酸根。可以以液體或固體形式向液體洗滌劑加入抑制劑加強(qiáng)劑。如果抑制劑加強(qiáng)劑以液體形式加入，那么具體而言作為水成液(aqueousliquid)力口入。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物不包含磷酸二氫鈉或三水合乙酸鈉。在多個(gè)實(shí)施方案中，用于根據(jù)本文公開內(nèi)容的用途的組合物以有效量含有一種或多種抑制劑加強(qiáng)劑以改進(jìn)穩(wěn)定性和/或延長(zhǎng)的儲(chǔ)存期限。本文使用的"有效量，，是指按照本文公開內(nèi)容的抑制劑加強(qiáng)劑組分的量足以對(duì)根據(jù)本文公開內(nèi)容的液體酶組合物的穩(wěn)定性或儲(chǔ)存期限S1起特定的正面效益。正面效益可以是本質(zhì)上用于化妝(cosmeticinnature),或與活性相關(guān)，或是二者的組合。例如，在一些實(shí)施方案中，在應(yīng)激條件下當(dāng)與不含抑制劑加強(qiáng)劑的類似組合物相比時(shí)，酶的殘余活性可為2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、IO倍長(zhǎng)。本文使用的應(yīng)激條件包括，但不限于，在40。C的高溫下儲(chǔ)存四周。在多個(gè)實(shí)施方案中，正面效益是通過將液體酶組合物與抑制劑組分和抑制劑加強(qiáng)劑組分的組合接觸從而改進(jìn)液體酶組合物的穩(wěn)定性和/或儲(chǔ)存期限來實(shí)現(xiàn)的。例如，在一些實(shí)施方案中，在應(yīng)激條件下酶的殘余活性可以高于10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%，其中應(yīng)激條件包括在40。C的高溫下儲(chǔ)存四周。應(yīng)用的特定抑制劑加強(qiáng)劑組分濃度通常依賴于應(yīng)用該組合物的目的。例如，所述濃度可能依賴于所用酶的類型和溶液中穩(wěn)定性和/或儲(chǔ)存問題的嚴(yán)重性而不同。在多個(gè)實(shí)施方案中，將一種或多種抑制劑加強(qiáng)劑應(yīng)用于液體酶組合物，從而使抑制劑加強(qiáng)劑濃度為占總組合物重量的0.1%-20%的量。在多個(gè)實(shí)施方案中，一種或多種抑制劑加強(qiáng)劑以占總組合物重量約0.5%-10%的量存在。在多個(gè)抑制劑加強(qiáng)劑是一種或多種鹽的實(shí)施方案中，向洗滌劑加入的鹽的量在特定的實(shí)施方案中是總洗滌劑組合物重量的0.1%-20%。在另外的特定實(shí)施方案中，向洗滌劑加入的鹽的量"t安重量計(jì)是0.5°/。-10°/。。在另一特定的實(shí)施方案中，向洗滌劑加入的鹽的量按重量計(jì)是0.8-5%。在更進(jìn)一步的特定實(shí)施方案中，向洗滌劑加入的鹽的量按重量計(jì)是1-3°/。。在特定的實(shí)施方案中，洗滌劑中存在的陽離子的量按重量計(jì)是0.005%-10%。在另一特定的實(shí)施方案中，洗滌劑中存在的陽離子的量按重量計(jì)是0.05%-4%。在另外的特定實(shí)施方案中，洗滌劑中存在的陽離子的量按重量計(jì)是0.1%-2%。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物包含酶、抑制劑組分和抑制劑加強(qiáng)劑組分，其中所述抑制劑加強(qiáng)劑是一種或多種鹽。酵能夠按照本發(fā)明穩(wěn)定化的酶在本發(fā)明的上下文中稱為"洗滌酶(detersiveenzyme)",其用于本文是指任何在洗滌循環(huán)過程中發(fā)揮它們的作用的酶，例如，在洗滌應(yīng)用中具有清潔、織物護(hù)理、抗再沉積和去污作用，并且所述酶是為了這樣的目的而加入的。根據(jù)本發(fā)明，液體組合物含有至少一種酶。所述酶可以是任何可以通過商業(yè)方法獲得的酶，具體而言是選自下組的酶蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、纖維素酶、裂合酶、氧化還原酶和它們的任意組合。也包括來自同一類別的多種酶(例如多種蛋白酶)的混合物。根據(jù)本發(fā)明，包含蛋白酶的液體組合物是優(yōu)選的。在特定的實(shí)施方案中，優(yōu)選的是包含兩種或更多種酶的液體組合物，其中第一種酶是蛋白酶，并且第二種酶選自下組淀粉酶、脂肪酶、纖維素酶、裂合酶和氧化還原酶。在更特定的實(shí)施方案中，第二種酶是脂肪酶。應(yīng)該理解的是，酶變體(例如，通過重組技術(shù)產(chǎn)生的)包括在術(shù)語"酶"的含義內(nèi)。這樣的酶變體的實(shí)例公開在例如EP251,446(Genencor)、WO91/00345(NovoNordisk)、EP525,610(Solvay)和WO94/02618(Gist-BrocadesNV)中?？梢愿鶕?jù)來自NC-IUBMB,1992的酶命名手冊(cè)(handbookEnzymeNomenclaturefromNC-IUBMB,1992)對(duì)酶進(jìn)行分類，也可參見因特網(wǎng)上的ENZYME網(wǎng)站http:〃www.expasy.ch/e歸me/。ENZYME是有關(guān)酶的命名的信息庫(kù)。其主要基于國(guó)際生物化學(xué)和分子生物學(xué)聯(lián)合會(huì)命名委員會(huì)(NomenclatureCommitteeoftheInternationalUnionofBiochemistryandMolecularBiology)(IUB-MB),AcademicPress,Inc.,1992的建議，并且其描述了已為之提供了EC(酶學(xué)委員會(huì))號(hào)的經(jīng)表征的酶的各種類型(BairochA.TheENZYMEdatabase,2000,NucleicAcidsRes28:304-305)。這種IUB-MB酶命名法是基于它們的底物特異性，有時(shí)基于它們的分子機(jī)制；這樣的分類法不反映這些酶的結(jié)構(gòu)特征。幾年前已經(jīng)提出了另一種基于氨基酸序列相似性將某些糖苷水解酶，如內(nèi)切葡聚糖酶、木聚糖酶、半乳聚糖酶、甘露聚糖酶、葡聚糖酶和a-半乳糖苷酶，歸類到家族中。目前它們屬于90個(gè)不同的家族參見CAZy(ModO)因特網(wǎng)網(wǎng)站(Coutinho，RM.&Henrissat,B.(1999)Carbohydrate-ActiveEnzymes服務(wù)器，在URL:http:〃afmb.cnrs-mrs.fr/~cazy/CAZY/index.html上(相應(yīng)的i侖文Coutinho,P.M.&Henrissat,B.(1999)Carbohydrate-activeenzymes:anintegrateddatabaseapproach.In"RecentAdvancesinCarbohydrateBioengineering",H丄Gilbert,G.Davies,B.Henrissat和B.Svensson纟扁4專,TheRoyalSocietyofChemistry,Cambridge,第3-12頁(yè)；Coutinho,P.M.&Henrissat,B.(1999)Themodularstructureofcellulasesandothercarbohydrate-activeenzymes:anintegrateddatabaseapproach.In"Genetics,BiochemistryandEcologyofCelluloseDegradation".,K.Ohmiya,K.Hayashi,K.Sakka，Y.Kobayashi,S.Karita和T.Kimura編輯，UniPublishersCo"Tokyo，第15-23頁(yè))。液體酶添加劑優(yōu)選包含蛋白酶，如絲氨酸蛋白酶。蛋白酶合適的蛋白酶包括動(dòng)物、植物或微生物來源的那些蛋白酶。微生物來源是優(yōu)選的。包括化學(xué)修飾的或遺傳修飾的突變體。蛋白酶可以是絲氨酸蛋白酶，優(yōu)選是堿性微生物蛋白酶或胰蛋白酶-樣蛋白酶。堿性蛋白酶的實(shí)例是枯草溶菌素，特別是源自芽孢桿菌屬(Bacillus)的那些枯草溶菌素，例如枯草溶菌素Novo、枯草溶菌素Carlsberg、枯草溶菌素309、枯草溶菌素147和枯草溶菌素168(在WO89/06279中描述)。胰蛋白酶-樣蛋白酶的實(shí)例是胰蛋白酶(例如，豬或牛來源的)和WO89/06270中描述的鐮孢屬(Fusarium)蛋白酶。在本發(fā)明的特定實(shí)施方案中，蛋白酶是絲氨酸蛋白酶。絲氨酸蛋白酶或絲氨酸內(nèi)肽酶(較新名稱)是一類肽酶，其特征在于酶活性中心內(nèi)存在絲氨酸殘基。絲氨酸蛋白酶絲氨酸蛋白酶是催化肽鍵水解的酶，并且在所述酶的活性部位存在必要的絲氨酸殘基(White,Handler和Smith,1973"PrinciplesofBiochemistry,"第五版，McGraw-HillBookCompany,NY,第271-272頁(yè))。細(xì)菌絲氨酸蛋白酶分子量在20,000-45,000道爾頓的范圍。它們受到二異丙基氟磷酸的抑制。它們水解簡(jiǎn)單的末端酯，并且在活性上類似于真核生物的胰凝乳蛋白酶，其也是一種絲氨酸蛋白酶。更狹義的術(shù)語，堿性蛋白酶，包括一個(gè)亞組，反映了一些絲氨酸蛋白酶從pH9.0-11.0的高最適pH(綜述參見Priest(1977)BacteriologicalRev.41711-753)?？莶莸鞍酌?subtilase):Siezen等(1991),ProteinEng.,4719-737提出了暫時(shí)定名為枯草蛋白酶的絲氨酸蛋白酶的亞組。它們通it^"先前稱作枯草溶菌素-樣(subtilisin-like)蛋白酶的絲氨酸蛋白酶的超過40個(gè)氨基S^f列的同源性分析來定義。先前將枯草溶菌素定義為由革蘭氏陽性細(xì)菌或真菌產(chǎn)生的絲氨酸蛋白酶，而根據(jù)Siezen等枯草溶菌素目前是枯草蛋白酶的亞組。已鑒定出多種枯草溶菌素，并且已經(jīng)測(cè)定了許多枯草溶菌素的氨基酸序列。這些包括超過六種來自芽孢桿菌屬菌株的枯草溶菌素，即，枯草溶菌素168、枯草溶菌素BPN'、枯草溶菌素Carlsberg、枯草溶菌素Y、枯草溶菌素amylosacchariticus和腸系膜肽酶(mesentericopeptidase)(Kurihara等(1972)J.Biol.Chem.2475629-5631;Wells等(1983)NucleicAcidsRes,117911-7925;Stahl和Ferrari(1984)J.Bacteriol.159811-819,Jacobs等(1985)Nucl,AcidsRes.138913-8926;Nedkov等(1985)Biol.Chem.Hoppe-Seyler366421-430，Svendsen等(1986)FEBSLett.196228-232),—種來自放線菌目的枯草溶菌素，來自普通高溫》丈線菌(Thermoactinomycesvulgaris)的耐熱蛋白酶(thermitase)(Meloun等(1985)FEBSLett.198195-200)，和一種真菌枯草溶菌素，來自白麥軸霉(Tritirachiumalbum)的蛋白酶K(proteinaseK)(Jany和Mayer(1985)Biol.Chem.Hoppe-Seyler366584-492)。為了進(jìn)一步參考在下文再現(xiàn)了Siezen等的表I?？莶萑芫卦谖锢砗突瘜W(xué)上是充分表征的。除了對(duì)這些酶的初級(jí)結(jié)構(gòu)(氨基酸序列)的認(rèn)識(shí)，已經(jīng)測(cè)定了枯草溶菌素的超過50種高解析度X射線結(jié)構(gòu)，其描繪了底物結(jié)合、過渡態(tài)、產(chǎn)物、至少三種不同的蛋白酶抑制劑，并且定義了天然變異的結(jié)構(gòu)影響(structuralconsequence)(Kraut(1977)Ann.Rev.Biochem.46331-358)。枯草蛋白酶的一個(gè)亞組，I-Sl,包含"經(jīng)典，，枯草溶菌素，如枯草溶菌素168,枯草溶菌素BPN',枯草溶菌素Carlsberg(ALCALASE,NovozymesA/S)和枯草溶菌素DY?？莶莸鞍酌傅牧硪粋€(gè)亞組I-S2，是由Siezen等(見上文)識(shí)別的。將亞組I-S2蛋白酶描述為高堿性枯草溶菌素并且包括如下的酶，如枯草溶菌素PB92(MAXACAL,Gist-BrocadesNV)、枯草溶菌素309(SAVINASE(灑維奈斯),NovozymesA/S)、枯草溶菌素147(ESPERASE,NovozymesA/S)和堿性彈性蛋白酶YaB。枯草蛋白酶基因的隨機(jī)和定點(diǎn)突變都源于對(duì)酶的物理和化學(xué)性質(zhì)的認(rèn)識(shí)和貢獻(xiàn)出的涉及枯草蛋白酶催化活性、底物特異性、三級(jí)結(jié)構(gòu)等的信息(Wells等(1987)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.84;1219-1223;Wells等(1986)Phil.Trans.R.Soc.Lond.A.317415-423;Hwang和Warshel(1987)Biochem.262669-2673;Rao等，(1987)Nature328551-554。涵蓋這個(gè)領(lǐng)域的最近的公開文獻(xiàn)是與切割底物中特定耙序列(第24和64位)的變體的設(shè)計(jì)有關(guān)的Carter等(1989)Proteins6240-248;討論多個(gè)之前公開的結(jié)果的Graycar等(1992)AnnalsoftheNewYorkAcademyofSciences67271-79;和同樣綜述了之前的結(jié)果的Takagi(1993)Int.J.Biochem.25307-312。可以通過商業(yè)方法獲得的蛋白酶(肽酶)的實(shí)例包括KannaseTM、EverlaseTM、EsperaseTM、Alcalase、Neutrase、Durazym、Savinase、Ovozyme、PyraseTM、PancreaticTrypsinNOVO(PTN)、Bio-FeedPro和Clear-LensTMPro(全部可從NovozymesA/S,Bagsvaerd，Denmark獲得)。其它優(yōu)選的蛋白酶包括在WO01/58275和WO01/58276中描述的那些蛋白酶。其它可以通過商業(yè)方法獲得的蛋白酶包括RonozymePro、MaxataseTM、MaxacalTM、MaxapemTM、OpticleanTM、PropeaseTM、Purafect和PurafectOxTM(可從GenencorInternationalInc.,Gist-Brocades,BASF或DSMNutritionalProducts獲得)。脂肪酶合適的脂肪酶包括細(xì)菌或真菌來源的那些。包括化學(xué)^奮飾或遺傳修飾的突變體。有用的脂肪酶的實(shí)例包括疏棉狀腐質(zhì)霉(Humicolalanuginosa)脂肪酶，例如，如EP258068和EP305216中描述的；曼赫根毛霉(Rhizomucormiehei)脂肪酶，例如，如EP238023中所述；念J朱菌屬(Candida)脂肪酶，例如南^L念珠菌(C.antarctica)脂肪酶，例如，EP214761中描述的南極念珠菌脂肪酶A或B;假單胞菌屬(Pseudomonas)脂肪酶如類產(chǎn)堿假單胞菌(P.pseudoalcaligenes)和產(chǎn)堿假單胞菌(P.alcaligenes)脂肪酶，例如，如EP218272中所述，洋蔥假單胞菌(P.cepacia)脂肪酶，例如，如EP331376中所述，施氏假單胞菌(P.stutzeri)脂肪酶，例如，如BP1,372,034中所公開，熒光布i單胞菌(P.fluorescens)脂肪酶；芽孢桿菌屬(Bacillus)脂肪酶，例如，枯草芽孢桿菌(B.subtilis)脂肪酶(Dartois等，(1993),BiochemicaetBiophysicaacta1131,253-260),嗜熱脂肪芽孢桿菌(B.stearothermophilus)脂肪酶(JP64/744992)和短小芽孢桿菌(B,pumilus)脂肪酶(WO91/16422)。另外，許多克隆的脂肪酶可能是有用的，包括Yamaguchi等，(1991)，Gene103，61-67)描述的沙門柏干酪青霉(Penicilliumcamenbertii)脂肪酶；念珠地絲菌(白地霉)(Geotricumcandidum)脂肪酶(Schimada,Y等，(1989),J.Biochem.106,383-388)，和多種根霉屬(Rhizopus)脂肪酶如德氏根霉(R.delemar)脂肪酶(Hass,M.J等，(1991),Gene109,117-113),雪白根霉(R.niveus)脂肪酶(Kugimiya等，(1992),Biosci.Biotech.Bio畫chem.56,716-719)和米根霉(R.oryzae)月旨肪酶。脂肪分解酶的其它類型例如角質(zhì)酶也可能是有用的，例如，如WO88/09367中所述的源自門多薩假單胞菌(Pseudomonasmendocina)的角質(zhì)酶，或源自豌豆腐皮鐮孢(Fusariumsolanipisi)的角質(zhì)斷例如WO90/09446中所述)。可以通過商業(yè)方法獲得的脂肪酶的實(shí)例包括LipexTM、LipoprimeTM、LipopanTM、LipolaseTM、LipolaseTMUltra、Lipozyme、PalataseTM、ResinaseTM、NovozymTM435和Lecitase(全部可從NovozymesA/S獲得)。其它可以通過商業(yè)方法獲得的脂肪酶包括Lumafast(來自GenencorInternationalInc.的門多薩假單胞菌脂肪酶)；Lipomax(來自Gist-Brocades/Genencorlnt.Inc.的類產(chǎn)堿假單胞菌脂肪酶；和來自Solvayenzymes的芽孢桿菌屬菌種脂肪酶。另外的脂肪酶可從其它供應(yīng)商例如LipaseP"Amano"(AmanoPharmaceuticalCo.Ltd.)獲得。淀粉酶合適的淀粉酶(a和/或！3)包括細(xì)菌或真菌來源的那些。包括化學(xué)修飾的或遺傳修飾的突變體。例如，淀粉酶包括獲得自地衣芽孢桿菌(B.licheniformis)的特殊菌抹的a-淀粉酶，其在英國(guó)專利說明書(BritishPatentSpecification)No.1,296,839中更詳細(xì)地描述?？梢酝ㄟ^商業(yè)方法獲得的淀粉酶是DuramyFM、Termamyl、FungamylTM和BAN(可/人NovozymesA/S獲得)和RapidaseTM和MaxamylP"tm(可/人Gist-Brocades獲得)。纖維素酶合適的纖維素酶包括細(xì)菌或真菌來源的那些。包括化學(xué)修飾的或遺傳修飾的突變體。合適的纖維素酶在US4,435,307中公開，其公開了從特異腐質(zhì)霉(Humicolainsolens)產(chǎn)生的真菌纖維素酶。特別合適的纖維素酶是具有顏色保護(hù)效益(colorcarebenefits)的纖維素酶。這樣的纖維素酶的實(shí)例是在歐洲專利申請(qǐng)No.0495257中描述的纖維素酶。氧化還原酶適合于在液體組合物中使用的任何氧化還原酶，例如，過氧化物酶或氧化酶如漆酶，可以用于本文。在本文中合適的過氧化物酶包括植物、細(xì)菌或真菌來源的那些。包括化學(xué)修飾的或遺傳修飾的突變體。合適的過氧化物酶的實(shí)例是源自鬼傘屬(Coprinus)菌抹，例如，灰蓋鬼傘(C.cinerius)或長(zhǎng)根鬼傘(C.macrorhizus)的那些，或源自芽孢桿菌屬菌株，例如，短小芽孢桿菌的那些，特別是根據(jù)WO91/05858的過氧化物酶。在本文中合適的漆酶包括細(xì)菌或真菌來源的那些。包括化學(xué)修飾的或遺傳修飾的突變體。合適的漆酶的實(shí)例是可以從栓菌屬菌林，例如，長(zhǎng)絨毛栓菌(T.villosa)或變色栓菌(T.versicolor),或可以從鬼傘屬菌抹，例如，灰蓋鬼傘，或可以/人毀絲霉屬(Myceliophthora)菌林，例如嗜熱毀絲霉(M.thermophila)獲得的那些?？梢源嬖谟诒景l(fā)明液體中的酶的類型包括氧化還原酶(EC轉(zhuǎn)移酶(EC2,.-.-)，水解酶(EC3.-,.-)，裂合酶(EC4.-,.-)，異構(gòu)酶(EC5.-.-,)和連接酶(EC6.-,.-)。在本發(fā)明的上下文中優(yōu)選的氧化還原酶是過氧化物酶(EC1.11.1),漆酶(EC1.10.3.2)和葡萄糖氧化酶(EC1丄3.4)?？梢酝ㄟ^商業(yè)方法獲得的氧化還原酶(ECL-.-,)的實(shí)例是GluzymeTM(可從NovozymesA/S獲得的酶)。另外的氧化還原酶可從其它供應(yīng)商獲得。優(yōu)選的轉(zhuǎn)移酶是任何以下亞類中的轉(zhuǎn)移酶a轉(zhuǎn)移一碳基團(tuán)的轉(zhuǎn)移酶(EC2.1);b轉(zhuǎn)移醛或酮?dú)埢霓D(zhuǎn)移酶(EC2.2);?；D(zhuǎn)移酶(EC2.3);c糖基轉(zhuǎn)移酶(EC2.4);d轉(zhuǎn)移除曱基之外的烷基或芳基的轉(zhuǎn)移酶(EC2.5);和e轉(zhuǎn)移含氮基團(tuán)的轉(zhuǎn)移酶(EC2.6)。在本發(fā)明的上下文中最優(yōu)選的轉(zhuǎn)移酶類型是轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶(蛋白質(zhì)-谷氨酰胺丫-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶；EC2.3.2.13)。合適的轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的其它實(shí)例在WO96/06931(NovoNordiskA/S)中描述。在本發(fā)明的上下文中優(yōu)選的水解酶是羧酸酯水解酶(EC3丄l.-)如脂肪酶(EC3.1.1.3);肌醇六磷酸酶(EC3.1.3,),例如3-肌醇六磷酸酶(EC3.1.3.8)和6-肌醇六磷酸酶(EC3丄3.26);糖苷酶(EC3.2,其屬于本文稱作"糖酶，，的組)，如a-淀粉酶(EC3.2.1.1);肽酶(EC3.4，也稱為蛋白酶)；和其它羰基水解酶?？梢酝ㄟ^商業(yè)方法獲得的肌醇六磷酸酶的實(shí)例包括Bio-FeedTMPhytase(Novozymes),RonozymeP(DSMNutritionalProducts)，Natuphos(BASF),FinaseTM(ABEnzymes)和Phyzyme頂產(chǎn)品系列(Danisco)。其它優(yōu)選的肌醇六磷酸酶包括在WO98/28408、WO00/43503和WO03/066847中描述的那些。在本文上下文中，術(shù)語"糖酶，，不僅用于指能夠斷裂糖鏈(例如淀粉或纖維素)特別是五元和六元環(huán)結(jié)構(gòu)的酶(即糖苦酶，EC3.2),還指能夠異構(gòu)化糖的酶，例如將六元環(huán)結(jié)構(gòu)如D-葡萄糖異構(gòu)為五元環(huán)結(jié)構(gòu)如D-果糖的酶。相關(guān)的糖酶包括以下(EC號(hào)在圓括號(hào)內(nèi))a-淀粉酶(EC3.2.1.1)、卩-淀粉酶(EC3.2.1.2)、葡聚糖1，4-a-葡糖苷酶(EC3.2.1.3)、內(nèi)切-1,4-|3-葡聚糖酶(纖維素酶，EC3.2.1.4)、內(nèi)切-1,3(4)-|3-葡聚糖酶(EC3.2.1.6)、內(nèi)切-1,4-(3國(guó)木聚糖酶(EC3.2.1.8)、葡聚糖酶(dextranase)(EC3.2.1.11)、殼多糖酶(EC3.2.1.14)、多聚半乳糖醛酸酶(EC3.2.1.15)、溶菌酶(EC3.2.1.17)、卩-葡糖苷酶(EC3.2.1.21)、a-半乳糖苦酶(EC3.2.1.22)、p畫半乳糖香酶(EC3,2丄23)、淀粉-l,6-葡糖香酶(EC3.2.1.33)、木聚糖1,4-卩-木糖苷酶(EC3.2.1.37)、葡聚糖內(nèi)切-l,3-卩-D-葡糖苷酶(EC3.2.1.39)、a-糊精內(nèi)切-l，6-a-葡糖苷酶(EC3.2丄41)、蔗糖a-葡糖香酶(EC3.2.1.48)、葡聚糖內(nèi)切-1,3-a-葡糖苷酶(EC3.2丄59)、葡聚糖1,4-卩-葡糖苷酶(EC3.2丄74)、葡聚糖內(nèi)切-l，6-(3-葡糖香酶(EC3.2.1.75)、半乳聚糖酶(EC3.2.1.89)、阿拉伯聚糖內(nèi)切-1,5-a-L-阿拉伯糖苦酶(EC3.2.1.99)、乳糖酶(EC3.2.1.108)、殼聚糖酶(chitosanase)(EC3.2.1.132)和木糖異構(gòu)酶(EC5.3.1.5)?？梢酝ㄟ^商業(yè)方法獲得的糖酶的實(shí)例包括Alpha-GalTM、Bio-FeedTMAlpha、Bio-FeedTMBeta、Bio-FeedTMPlus、Bio-FeedTMWheat、Bio-FeedTMZ、Novozyme188、CarezymeTM、Celluclast、CellusoftTM、CdluzymeTM、CeremylTM、Citrozym、DenimaxTM、Dezyme、DextrozymeTM、DuramylTM、EnergexTM、FinizymTM、FungamylTM、GamanaseTM、GlucanexTM、Lactozym、Liquezyme、Maltogenase、NatalaseTM、Pentopan、PectinexTM、PromozymeTM、PulpzymeTM、NovamylTM、TermamylTM、AMGTM(AmyloglucosidaseNovo)、MaltogenaseTM、SweetzymeTM和AquazymTM(全部可從NovozymesA/S獲得)。其它糖酶可從其它供應(yīng)商獲得，例如Roxazyme和Ronozyme/^品系列(DSMNutritionalProducts),Avizyme、PorzymeT"和Grindazyme產(chǎn)品系歹'J(Danisco，F(xiàn)innfeeds)，以及Natugrain(BASF)、Purastar丁M和PurastarTMOxAm(Genencor)。其它可以通過商業(yè)方法獲得的酶包括Mannaway、Pectaway、StainzymeTM和RenozymeTM。液體洗滌劑根據(jù)本發(fā)明，液體洗滌劑組合物將在酶、抑制劑和抑制劑加強(qiáng)劑之外還包括一種或多種表面活性劑。例如，所述洗滌劑組合物可以是洗衣用洗滌劑組合物或洗碟用洗滌劑組合物。洗滌劑將通常含有0-50%的陰離子表面活性劑如直鏈烷基苯磺酸酯(鹽)(LAS)、a-烯烴磺酸酉旨(鹽)(AOS)、烷基硫酸酉旨(鹽)(月旨肪醇硫酸酯(鹽》(AS)、醇乙氧基硫酸酉旨(鹽)(alcoholethoxysulfate)(AEOS或AES)、仲烷基磺酸西旨(鹽)(secondaryalkanesulfonate)(SAS)、a-磺基脂肪酸曱酯、烷基-或烯基琥珀酸或肥皂(soap)。洗滌劑也可以含有0-40%的非離子表面活性劑，例如醇乙lL^化物(AEO或AE)、醇丙氧基化物、羧化醇乙氧基化物(carboxylatedalcoholethoxylates)、壬基苯酚乙氧基化物、烷基聚糖苷(alkylpolyglycoside)、烷基二甲基氧化胺(alkyldimethylamineoxide)、乙^^化脂肪酸單乙醇酰胺(ethoxylatedfattyacidmonoethanolamide)、脂肪酸單乙醇酰胺或多羥基烷基脂肪酸酰胺(例如如WO92/06154中所述)。通常洗滌劑含有1-65%的助洗劑(detergentbuilder),但是一些洗石茱用洗滌劑可以含有甚至高達(dá)90%的助洗劑，或絡(luò)合劑如沸石，二石舞酸鹽，三磷酸鹽，膦酸鹽，檸檬酸鹽，氮川三醋酸(NTA),乙二胺四乙酸(EDTA)，二亞乙基三胺五乙酸(DTMPA),烷基-或烯基琥珀酸，可溶性硅酸鹽或?qū)訝罟杷猁}(例如來自Hoechst的SKS-6)。助洗劑可以細(xì)分為^^岸型和不含》岸型。含磷的無積^威性助洗劑的實(shí)例包括水溶性鹽，特別是堿金屬焦磷酸鹽、正磷酸鹽、聚磷酸鹽和膦酸鹽。不含磷的無機(jī)助劑的實(shí)例包括水溶性堿金屬碳酸鹽、硼酸鹽和硅酸鹽以及層狀二硅酸鹽和各種類型的水不溶性晶狀或無定形鋁硅酸鹽(aluminosilicate),其中沸石是最為人所知的代表。合適的有機(jī)助劑的非限定性實(shí)例包括琥珀酸、丙二酸、脂肪酸丙二酸、脂肪酸磺酸、羧曱氧基琥珀酸、聚乙酸、羧酸、聚羧酸、氨基聚羧酸和聚乙酰羧酸的堿金屬鹽、銨鹽或取代的銨鹽。洗滌劑也可以是無助洗的(unbuilt),即基本上不含助洗劑。洗滌劑可以包含或包括一種或多種聚合物。非限定性實(shí)例是羧曱基纖維素(CMC)、聚(乙烯基吡咯烷酮)(PVP)、聚乙二醇(PEG)、聚(乙烯醇)(PVA)、聚羧化物(polycarboxylates)如聚丙烯酸酯(polyaciylates)、聚馬來酸酯、馬來酸/丙烯酸共聚物和曱基丙烯酸月桂酯/丙烯酸共聚物。洗滌劑組合物可以含有氯/溴型或氧型漂白劑。漂白劑可以是涂覆的或包嚢的。無機(jī)氯/溴型漂白劑的實(shí)例是鋰、鈉或4丐的次氯酸鹽或次溴酸鹽以及氯4t石粦酸三鈉(chlorinatedtrisodiumphosphate)。漂白體系也可以包含H202源如過硼酸鹽或過碳酸鹽，其可以與形成過酸的漂白劑活化劑如四乙酰乙二胺(TAED)或壬酰氧苯磺酸鹽(NOBS)組合。有機(jī)氯/溴型漂白劑的實(shí)例是雜環(huán)N-溴代和N-氯代亞胺，如三氯異氰尿酸、三溴異氰尿酸、二溴異氰尿酸和二氯異氰尿酸，和它們與水溶陽離子如鉀和鈉的鹽。乙內(nèi)酰脲(海因)化合物(hydantoincompound)也是合適的。漂白體系也可以包含例如酰胺、酰亞胺或石風(fēng)型的過氧酸(peroxyacid)。在洗碟用洗滌劑中，氧漂白劑是優(yōu)選的，例如以無機(jī)過酸鹽(persalt)的形式，優(yōu)選與漂白劑前體一起或作為過氧酸化合物。合適的過氧漂白化合物的典型實(shí)例是堿金屬的過硼酸鹽(四水合物和一水合物)，堿金屬的過碳酸鹽，過珪酸鹽(persilicate)和過磷酸鹽(perphosphate)。優(yōu)選的活化物質(zhì)是TAED或NOBS。本發(fā)明的洗滌劑組合物的酶可以額外地使用常規(guī)穩(wěn)定劑穩(wěn)定化，所述穩(wěn)定劑例如多元醇如丙二醇或甘油，糖或糖醇，或乳酸。洗滌劑也可以舍有其他常^見洗滌劑成分如，例如，織物整理劑(fabricconditioner)包括粘土、反絮凝物質(zhì)(deflocculantmaterial)、泡沫促進(jìn)劑/泡沫抑制劑(在洗碟用洗滌劑泡沫抑制劑中)、抑泡劑、防腐蝕劑、懸污劑、抗污物再沉積劑、染料、脫水劑、殺菌劑、光亮劑(opticalbrightener)或香料。pH(3^f吏用濃度在水溶液中測(cè)量)將通常為中性或堿性，例如在7-11的范圍內(nèi)。在本發(fā)明的特定實(shí)施方案中，pH為7-9.5。在本發(fā)明更特定的實(shí)施方案中，pH為8-9。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了對(duì)于某些洗滌劑，如果洗滌劑的pH為8-9,那么洗滌劑的效果特別好。以下非限定性實(shí)施例進(jìn)一步闡明了按照本文^Hf內(nèi)容的組合物、方法和處實(shí)施例實(shí)施例1儲(chǔ)存穩(wěn)定性試驗(yàn)洗滌劑基底55g陰離子表面活性劑Na-LAS105g陰離子表面活性劑SurfacLC7025g非離子表面活性劑Neodol25-330g非離子表面活性劑Neodol25-740gNaC0333gSXS(二曱苯磺酸鈉40重量％水溶液)17g—水合檸檬酸鹽10gSTS(曱苯磺酸鈉)10g乙醇pH調(diào)節(jié)至pH9(NaOH)加水至1000gpH9將所述洗滌劑基底用水按1:1.5稀釋(diluted1:1.5water)。加入的鹽的量為按重量計(jì)占稀釋的洗滌劑基底3%的鹽。蛋白酶以0.173KNPU-S/g、395u/g比活性的量加入。4-FPBA以0.17mg/g經(jīng)稀釋洗滌劑基底+鹽的量加入。選擇的儲(chǔ)存條件是在4CTC儲(chǔ)存4周。<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>能夠得出結(jié)論，大多數(shù)鹽對(duì)包含苯基硼酸衍生物的洗滌劑基底的穩(wěn)定性具有正面影響。最有希望的陽離子應(yīng)為鎂和鋁。實(shí)施例2儲(chǔ)存穩(wěn)定性試-驗(yàn)洗滌劑基底55g陰離子表面活性劑Na-LAS105g陰離子表面活性劑SurfacLC7025g非離子表面活性劑Neodol25-330g非離子表面活性劑Neodol25-740gNaC0333gSXS(二曱苯石黃酸鈉40重量％水溶液)17g—水合檸檬酸鹽10gSTS(曱苯磺酸鈉)10g乙醇pH調(diào)節(jié)至pH9(NaOH)加水至1000g將所述洗滌劑基底用水按1:1.5稀釋。加入的鹽的量為按重量計(jì)占洗滌劑3%的鹽。蛋白酶以0.173KNPU-S/g、395u/g比活性的量加入。4-FPBA以0.17mg/g洗滌劑+鹽的量加入。選擇的儲(chǔ)存條件是在4CTC儲(chǔ)存4周。<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>兩種鋅鹽都顯示了對(duì)穩(wěn)定性的顯著改進(jìn)。應(yīng)理解的是，可以對(duì)本文公開的實(shí)施方案進(jìn)行各種修改。因此，不應(yīng)將上述描述理解為限制，他們僅作為對(duì)實(shí)施方案的示例說明。本領(lǐng)域那些技術(shù)人員將會(huì)預(yù)見到本文所附權(quán)利要求范圍和宗旨內(nèi)的其他修改。權(quán)利要求1.一種液體組合物，其包含酶組分、苯基硼酸組分或其衍生物和溶解的鹽組分。2.權(quán)利要求1的液體組合物，其中所述酶組分是蛋白酶。3.權(quán)利要求2的液體組合物，其中所述蛋白酶是絲氨酸蛋白酶。4.任一前述權(quán)利要求的液體組合物，其中所述苯基硼酸或其衍生物是其中R選自下組氫、羥基、d-C6烷基、取代的d-C6烷基、C廣C6烯基和取代的d-C6烯基。5.任一前述權(quán)利要求的液體組合物，其中所述鹽組分包含一種或多種陽離子，其中所述一種或多種陽離子包含Ca、Mg、Zn、Na、K或NH4，和它們的組合。6.任一前述權(quán)利要求的液體組合物，其中所述鹽組分包含一種或多種選自下組的陽離子Ca、Mg、Zn、Na、K、NH4和它們的組合。7.任一前述權(quán)利要求的液體組合物，其中所述鹽組分包含一種或多種選自下組的陽離子Zn、Mg、NH4和它們的組合。8.任一前述權(quán)利要求的液體組合物，其中所述鹽組分包含一種或多種陰離子，其中所述一種或多種陰離子包含氯離子、硫酸根、硝酸根、磷酸根、碳酸根或曱酸根，和它們的組合。9.任一前述權(quán)利要求的液體組合物，其中所述鹽組分包含一種或多種選自下組的陰離子氯離子、硫酸根、硝酸根、磷酸根、碳酸根、曱酸根，和它們的組合。10.任一前述權(quán)利要求的液體組合物，其中所述鹽組分包含一種或多種陰離子，其中所述一種或多種陰離子選自下組氯離子、硫酸鹽、硝酸鹽和它們的組合。11.任一前述權(quán)利要求的液體組合物，其中所述液體組合物的pH是7-10.5。12.任一前述權(quán)利要求的液體組合物，其中所述液體組合物的pH是8-9.5。13.任一前述權(quán)利要求的液體組合物，其中所述鹽組分以占總組合物重量的0.1°/。-20°/。的量存在。14.任一前述權(quán)利要求的液體組合物，其中所述液體組合物是洗滌劑組合物。15.任一前述權(quán)利要求的液體組合物，其中所述液體組合物是洗衣用洗滌劑組合物。16.任一前述權(quán)利要求的液體組合物，其中所述液體組合物是洗碟用組合物。17.—種用于制造任一前述權(quán)利要求的液體組合物的方法，其包括如下步驟a)提供液體；b)向a)的液體加入水溶性鹽；c)與b)同時(shí)或在b)之后將酶和苯基硼酸或其衍生物加入a)中；和d)混合液體組合物。18.權(quán)利要求17的方法，進(jìn)一步包括將pH調(diào)節(jié)至7-9.5的步驟。19.權(quán)利要求17的方法，進(jìn)一步包括將pH調(diào)節(jié)至8-9的步驟。20.權(quán)利要求1-16的組合物用于清潔物體的用途。21.鹽用于加強(qiáng)苯基硼酸或其衍生物在液體組合物中的抑制劑效果的用途。22.—種穩(wěn)定的液體酶組合物，其包含酶組分、抑制劑組分或其4汙生物和有效量的抑制劑加強(qiáng)劑組分。23.—種穩(wěn)定的液體酶組合物，其中抑制劑加強(qiáng)劑的有效量是占總組合物重量的0.5%-20%的量。全文摘要本發(fā)明涉及在包含于液體洗滌劑組合物中的酶的儲(chǔ)存過程中的穩(wěn)定化。文檔編號(hào)C11D3/02GK101646760SQ200880010193公開日2010年2月10日申請(qǐng)日期2008年3月27日優(yōu)先權(quán)日2007年3月27日發(fā)明者基姆·B·安德森申請(qǐng)人:諾維信公司