專(zhuān)利名稱(chēng)：：包含活性化合物的顆粒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及包含酶和聚合物所成混合物的顆粒(particlescomprisingamixtureofenzymeandpolymer)。本發(fā)明還涉及包含本發(fā)明的顆4立的液體制劑(liquidformulation)。
背景技術(shù)：
：包含活性化合物例如酶并且用含聚合物的材津牛(polymericcontainingmaterial)封裝的顆粒是本領(lǐng)域已知的US6713533描述了具有交聯(lián)聚合物外膜的毫微膠嚢(nanocapsule),其用于生物學(xué)活性化合物和診斷劑的轉(zhuǎn)運(yùn)。WO2005063365描述了可用于酶固定化和藥物遞送的中空結(jié)構(gòu)的、獨(dú)立式的膜。WO2002096551描述了包含聚合物的可溶性毫微膠嚢或微膠嚢，其用于例如包裝和釋放活性物質(zhì)，或洗滌劑，其中所述聚合物是聚兩性電解質(zhì)。WO9741837涉及制備生物可降解的微粒，其包含含有活性化合物的聚合物基質(zhì)。GB1483542描述了從阿拉伯膠(gumarabic)、明膠和天然聚合物制備的微膠嚢。GB1390503涉及聚合物凝膠，其不溶于液態(tài)洗滌劑，但是當(dāng)用水稀釋時(shí)則被釋放。此申請(qǐng)不涉及包含酶的顆粒。EP0356239涉及聚合物/酶顆粒在適于在液態(tài)洗滌劑中使用的液相中的分散。US5198353涉及用于制備穩(wěn)定化的酶分散體的方法。從US5312883、US5317063和US7070854知.曉了對(duì)鹽敏感的水溶性聚合物。EP0672102涉及聚合物膠嚢，其包含疏水聚合物核心和依附于該疏水核心的親水聚合物。US4908233勁物的含水分散體中來(lái)產(chǎn)生微膠嚢的方法。US4777089公開(kāi)了一種含有包含至少一種電解質(zhì)的含水組合物的微膠嚢，和一種包含用水溶性聚合物包被的核心材料的微膠嚢。發(fā)明概述本發(fā)明的一個(gè)目的是提供具有改進(jìn)的儲(chǔ)藏穩(wěn)定性、包含蛋白質(zhì)特別是酶的顆粒，用于液體組合物，例如液體洗滌劑。令人驚訝地發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)例如酶的儲(chǔ)藏穩(wěn)定性可以通過(guò)制備包含所述酶的聚合物基質(zhì)顆粒來(lái)改進(jìn)。因此本發(fā)明在第一個(gè)方面提供包含酶和聚合物的顆粒，其中所述酶和聚合物作為混合物存在于顆粒中，并且按照方法l,所述聚合物在離子強(qiáng)度為Omol/kg的水溶液中是基本上可溶的，而在離子強(qiáng)度高于1mol/kg的水溶液中是不溶的。發(fā)明詳述定義離子強(qiáng)度基于摩爾濃度(molarity)，將離子強(qiáng)度I定義為，其中茹和對(duì)全部離子j進(jìn)行。Zj是離子j的電荷數(shù)。mj是離子j以mol/kg為單位的摩爾濃度。電解質(zhì)電解質(zhì)是當(dāng)溶解或熔融時(shí)電離產(chǎn)生導(dǎo)電介質(zhì)的化合物。方法1:方法1用于確定聚合物的溶解度作為離子強(qiáng)度的函數(shù)將聚合物溶于純水，例如，溶解成10%溶液。在純水中制備N(xiāo)a2S04溶液，使得在將聚合物溶液與Na2S04溶液混合之后，所得混合物含有l(wèi)%w/w5(重量/重量)聚合物和符合下表的Na2SCM農(nóng)度:離子強(qiáng)度mol/kg%w/wNa2S040.00.00,251.1830.52.3671.04.7331.57.1002.09,4674.018.933將溫度均為25。C的兩種溶液在25。C混合成總共100g并攪拌30分鐘。如果得到大量沉淀/聚集體(aggregate)/團(tuán)塊(lump),那么聚合物是不溶性的。如果澄清或渾濁的混合物是均質(zhì)的，那么通過(guò)稱(chēng)為比濁計(jì)(nephelometer)的儀器測(cè)量濁度，并且以比濁法濁度單位(NephelometricTurbidityUnits)(NTU)計(jì)量，參見(jiàn)U.S.EPA方法180.1。將ANTU計(jì)算為聚合物/Na2S(V混合物的NTU減去不含聚合物的相同濃度Na2S04的NTU，兩個(gè)NTU均在25。C測(cè)量。如果ANTU是3.0或以下，將聚合物定義為在當(dāng)前離子強(qiáng)度可溶。即若產(chǎn)生大量可見(jiàn)的沉淀、聚集體或團(tuán)塊或ANTU〉3.0，則聚合物是不溶性的；若沒(méi)有產(chǎn)生可見(jiàn)的沉淀、聚集體或團(tuán)塊或ANTU53.0，則聚合物是可溶性的。優(yōu)選的聚合物是在0mol/kg的離子強(qiáng)度可溶的，但是在1mol/kg的離子強(qiáng)度不溶。介紹顆粒中所包含的酶的穩(wěn)定性受到儲(chǔ)藏時(shí)的周?chē)h(huán)境，即降低穩(wěn)定性的化學(xué)或物理因素的影響。已知在包含對(duì)蛋白質(zhì)有害的化合物的液體制劑中保持蛋白質(zhì)穩(wěn)定是困難的，例如在液體洗滌劑中使酶穩(wěn)定。關(guān)于酶液體洗滌劑的另一個(gè)問(wèn)題是它們通常含有消化蛋白質(zhì)的蛋白水解酶，因而在液體洗滌劑中存在的其它酶可能由存在的蛋白酶滅活，其中蛋白酶解(proteolysis)和自我蛋白酶解都可能發(fā)生。6已經(jīng)有過(guò)幾次制備適用于液體制劑例如液體洗滌劑的酶顆粒的嘗試。這些顆粒具有的一個(gè)問(wèn)題是在加入顆粒之后液體制劑的濁度，原因是相對(duì)大的顆粒的光散射。顆粒在加入之后不改變或只稍微改變液體制劑的外觀并且顆粒沉降的趨勢(shì)P爭(zhēng)低可能是重要的。另外可能重要的是，酶在正確的時(shí)間釋放，例如，就液體洗滌劑而言，酶在與洗滌用水(washwater)接觸時(shí)釋放。代替通常的液體酶產(chǎn)品使用在液體制劑中包含聚合物和酶的混合物的顆粒具有幾項(xiàng)優(yōu)勢(shì)；在需要酶活性之前，可以保持對(duì)酶有害的化合物遠(yuǎn)離酶，并且可以避免酶與液體中活化該酶的化合物直接接觸。令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，包含聚合物和酶的混合物的顆粒制劑能夠改進(jìn)液體制劑例如洗滌劑中酶的儲(chǔ)藏穩(wěn)定性，另外如果使用尺寸較小的顆粒，那么它們?cè)谥苿┲袔缀跏遣豢梢?jiàn)的。由于它們的小尺寸，本發(fā)明的顆粒不沉降，并且由于顆粒的結(jié)構(gòu)，酶不與環(huán)境中的有害化合物直接接觸，且周?chē)后w中的酶敏感性化合物不直接與酶接觸。酶敏感性化合物針對(duì)脂肪酶而言可以是脂質(zhì)，或者針對(duì)蛋白酶而言可以是蛋白質(zhì)。重要的是，酶在其應(yīng)該工作的情況下得到釋放進(jìn)入介質(zhì)中。關(guān)于洗滌劑，重要的是在洗滌過(guò)程中，當(dāng)用水稀釋洗滌劑時(shí)，酶得到釋放。這通過(guò)釋放系統(tǒng)的性質(zhì)來(lái)保證，在此情況下，所述釋放系統(tǒng)是聚合物。顆粒本發(fā)明涉及包含聚合物和酶的顆粒。聚合物和酶作為混合物存在于顆粒內(nèi)。本發(fā)明的顆粒優(yōu)選具有50nm-500，000nm的粒度。發(fā)現(xiàn)在液體制劑中使用小顆粒展現(xiàn)出幾項(xiàng)優(yōu)勢(shì)；顆粒不沉降，并且如果足夠的小，顆粒在液體中不可見(jiàn)或可見(jiàn)度很低。因此在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，粒度小于100,000nm。在本發(fā)明更具體的實(shí)施方案中，粒度小于10，000nm。在更具體的實(shí)施方案中，粒度小于5,000nm。在更具體的實(shí)施方案中，粒度小于l,000nm。在本發(fā)明甚至更具體的實(shí)施方案中，粒度小于800nm。在另一具體實(shí)施方案中，粒度小于500nm。在最具體的實(shí)施方案中，粒度小于300nm。在具體實(shí)施方案中，粒度為50-500nm。為了進(jìn)一步的保護(hù)，可以將本發(fā)明的顆粒涂覆。在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，顆?？梢园辽僖粋€(gè)涂層(coating)。顆?？梢园硗獾牟牧?。聚合物本發(fā)明的聚合物在濃縮液體組合物(如液體洗滌劑)中不溶，而當(dāng)用水稀釋時(shí)可溶。關(guān)于液體洗滌劑組合物，這是指酶與其余洗滌劑組分隔離，直到在洗滌過(guò)程中用水稀釋洗滌劑時(shí)，酶隨之釋放到洗滌用水中。本發(fā)明的合適聚合物對(duì)環(huán)境的離子強(qiáng)度敏感。在具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明的聚合物按照方法1在離子強(qiáng)度為0mol/kg的水溶液中基本上可溶，且在離子強(qiáng)度大于1mol/kg的水溶液中不溶。在具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明中使用的聚合物是改性的水溶性聚合物，其能夠通過(guò)電解質(zhì)沉淀。這種聚合物的選擇使得酶能夠通過(guò)用水稀釋包含顆粒的液體制劑來(lái)釋放。聚合物的(重均)分子量具體為1，000-1，500,000。為了良好的穩(wěn)定化，(重均)分子量具體為1，000，000以下，例如800,000以下，特別是200,000以下，并且最特別為100,000以下。在具體實(shí)施方案中，(重均)分子量為5,000以上，特別是10,000以上，更具體為20,000以上，例如25,000以上。為了獲得充分的穩(wěn)定化，通常優(yōu)選的聚合物的量對(duì)應(yīng)于聚合物:酶(純酶蛋白)重量比為0,03以上的，例如0.1以上，特別是0.4以上，并且具體為1以上。如果聚合物僅用于酶的穩(wěn)定化，優(yōu)選聚合物:酶的比例為5以下，特別是2以下，但是如果還提供其它功能，可以使用更大量的聚合物(例如洗滌劑中用于抗再沉積的PVA或CMC)。本發(fā)明的聚合物可以是分支或不分支的。認(rèn)為分支聚合物與不分支的聚合物相比在保持酶封閉于聚合物基質(zhì)方面更好，特別是由于位阻現(xiàn)象。因此，在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，聚合物是分支的。分支分子的分支度(degreeofbmnching)可以按照將實(shí)際生長(zhǎng)方向的數(shù)值與可能生長(zhǎng)方向的最大值比較來(lái)表示。將分支度定義為<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>其中R描述從線性方向產(chǎn)生的衍生(deviation)的數(shù)目。DB還在ActaPolymer,48，30-35(1997)中記載。在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，聚合物的分支度為1%以上。在本發(fā)明更具體的實(shí)施方案中，聚合物的DB大于50/。。在本發(fā)明進(jìn)一步的實(shí)施方案中，聚合物的DB大于15%。在具體的實(shí)施方案中，酶和聚合物彼此不共價(jià)結(jié)合。本發(fā)明的聚合物通常是經(jīng)疏水性改性的聚合物。獲得本發(fā)明的聚合物的一個(gè)方法是用疏水聚合物、單體或疏水基團(tuán)改性親水聚合物，或與之相反(visaversa),用親水聚合物、單體或親水基團(tuán)改性疏水聚合物。疏水》務(wù)飾也可以通過(guò)將至少一種疏水單體，特別是至少一種疏水性單烯鍵不飽和(乙烯型(vinylicmonomer))單體，與至少一種親水單體(特別是至少一種親水性單烯型不飽和單體)進(jìn)行共聚來(lái)實(shí)現(xiàn)。聚合物的制備可以通過(guò)接枝、交聯(lián)、共聚(包括無(wú)規(guī)共聚和嵌段共聚)或本領(lǐng)域已知的任何合適的技術(shù)來(lái)進(jìn)行。疏水聚合物可以包括但不限于氫化蓖麻油(HCO)，乙基纖維素，聚乙烯乙酸酯，聚氯乙烯，有機(jī)硅(silicone)，聚環(huán)氧丙烷，聚乙烯，聚丙烯，聚碳酸酯，聚苯乙烯，聚砜，聚苯醚(polyphenyleneoxide)和/或聚四亞曱基醚。親水聚合物可以包括f旦不限于聚乙烯吡咯烷酮，聚乙烯醇，聚乙二醇，羥丙基纖維素，羥曱基纖維素，羥丙基曱基纖維素，明膠，聚乙烯曱醚，聚曱基口惡口坐啉(polymethyloxazoline)，聚乙基碌喳啉(polyethyloxazoline)，聚輕丙基碌、峻啉(polyhydroxypropyloxazoline),角叉菜聚4唐(carrageenan)，聚羥丙基甲基丙婦酰胺(polyhydroxypropylmethacrylamide),聚甲基丙烯酰胺，聚二曱基丙烯酰胺，聚曱基丙烯酸羥丙酯，聚丙烯酸輕乙酯，羥曱基纖維素，羥乙基纖維素，聚乙二醇，聚天冬酰胺(polyaspartamide),聚環(huán)氧乙烷(PEO)，和多糖。在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，改性聚合物可以選自，但不限于，下列組成的組疏水性改性的聚乙烯吡咯烷酮(PVP),疏水性改性的聚乙烯醇(PVA),疏水性改性的纖維素衍生物例如羧曱基纖維素、曱基纖維素和/或羥丙基纖維素，角叉菜聚糖，膠例如瓜爾豆膠、安息香膠、黃芪膠、阿拉伯膠(gumarabic)和/或阿拉伯樹(shù)月交(gumacacia),蛋白質(zhì)例如酪蛋白、明月交和/或白蛋白。在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，改性聚合物是改性聚乙烯吡咯烷酮例如乙烯吡咯烷酮和至少一種疏水性共聚單體(特別是乙酸乙烯酯)的共聚物。疏水單體通常是乙烯型單體，其在水中具有降低的溶解度，特別是在25。C和1bar的水中溶解度不高于80g/1，特別是不高于50g/1。疏水單體可以選自但不限于下組丙烯酸C1-C18烷基酯和曱基丙烯酸C1-C18烷基酯例如丙烯酸乙酯、丙烯酸丁酯、丙烯酸異丁酯、丙烯酸己酯、丙烯酸庚酯、曱基丙烯酸曱酯、曱基丙烯酸乙酯、曱基丙烯酸丁酯、甲基丙烯酸異丁酯、曱基丙烯酸己酉旨、曱基丙烯酸庚酯，1，3-丁二烯，丙烯酸C3-C18環(huán)烷基酯(C3-C18cycloalkylacrylates)和曱基丙烯酸C3-C18環(huán)烷基酯例如丙烯酸環(huán)烷基酯、丙烯酸異水片酯、曱基丙烯酸異冰片酯和曱基丙烯酸環(huán)烷基酯，C3-C18烷基丙烯酰胺和C3-C18烷基曱基丙烯酰胺，丙烯腈，曱基丙烯腈，乙烯基C1-C18鏈烷酸酯，例如乙酸乙烯酯、丙酸乙烯酯、丁酸乙烯酯、^又羧酸(versaticacid)的乙烯酯和戊酸乙烯酯，C2-C18烯烴，C2-C18卣代烯烴(haloalkenes),苯乙烯，(低級(jí)烷基)苯乙烯，d-曱基苯乙烯，C2-C12烷基乙烯基醚，例如乙烯基乙醚，丙烯酸C2-C10全氟烷基酯和曱基丙烯酸C2-C10全氟烷基酯，部分氟化的丙烯酸酯和曱基丙烯酸酯，如曱基丙烯酸三氟乙酯、曱基丙烯酸六氟異丙酯、曱基丙烯酸六氟丁酯，丙烯酸C3-C12全氟烷基乙硫羰基氨基乙酯和曱基丙烯酸C3-C12全氟烷基乙石克羰基氨基乙酉旨(C3-C12perfluoroalkylethylthiocarbonylaminoethylacrylatesandmethacrylates),如曱基丙烯酸全氟己基乙碌^緣#^乙酯，丙烯酰氧-和曱基丙蟑酰氧烷基硅氧烷，如曱基丙烯酸三-(三曱基曱硅烷基氧基)曱硅烷基丙酉旨(tristrimethylsilyloxysilylpropylmethacrylate)(TRIS)，和3畫(huà)曱基丙烯酰氧丙基五曱基二石圭氧烷(3畫(huà)methacryloxypropylpentamethyldisiloxane),N-乙烯?？ㄟ?，馬來(lái)酸、延胡索酸、衣康酸、曱基延胡索酸的二-Cl-C12烷基酯，例如延胡索酸二曱酯、馬來(lái)酸二曱酯、馬來(lái)酸二丁酯和延胡索酸二丁酯，氯丁二烯，氯乙蹄和偏二氯乙歸(vinylidenechloride)。親水單體通常是在水中具有提高的溶解度乙烯型單體，特別是在25。C和1bar在水中的溶解度高于80g/1，特別是高于100g/1。親水單體可以選自但不限于下組羥基取代的丙烯酸和曱基丙烯酸低級(jí)烷基酯，如丙烯酸羥基乙酯和曱基丙烯酸羥基乙酯、丙烯酸羥基丙酯和曱基丙烯酸輕基丙酯，丙烯酰胺，曱基丙烯酰胺，(低級(jí)烷基)丙烯酰胺和(低級(jí)烷基)甲基丙烯酰胺，N,N-二烷基-丙烯酰胺，乙氧基化的丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯如聚乙二醇-單丙烯酸酯和聚乙二醇—單曱基丙烯酸酯，和聚乙二醇單曱醚丙烯酸酯和聚乙二醇單曱醚甲基丙烯酸酯，羥基取代的(低級(jí)烷基)丙烯酰胺和羥基取代的(低級(jí)烷基)曱基丙烯酰胺，羥基取代的低級(jí)烷基乙埽醚，乙烯基磺酸鈉，苯乙烯磺酸鈉，2-丙烯酰胺-2-曱基丙烷磺酸，N-乙烯基吡咯，N-乙烯基-2-吡咯烷酮，2-乙烯基。惡唑啉，2-乙烯基_4,4'-二烷基碌唑啉-5-酮，2-和4-乙烯基吡啶，氨基(低級(jí)烷基)-[其中術(shù)語(yǔ)氨M包括季銨]，單(低級(jí)烷基^JO(低級(jí)烷基)-以及二(低級(jí)烷基M)(低級(jí)烷基)-丙烯酸酯和曱基丙烯酸酯，烯丙醇，3-曱基丙烯酰氧基2-羥丙基三曱基氯4b4妄(3-trimethylammonium2-hydroxypropylmethacrylatechloride),乙丈希基p比口各烷酮，乙烯醇，丙烯腈，丙烯酰氯，丙烯酸乙二醇酯，羥曱基丙烯酰胺，雙丙酮丙烯酰胺，苯乙烯磺酸鹽，曱基丙烯酸二曱氛基乙酯(DMAEMA),二曱M乙基曱基丙烯酰胺，和N-(l，l-二曱基-3-氧代丁基)-丙烯酰胺。在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，聚合物是包含選自上述單體的至少一種疏水單體和至少一種親水單體的共聚物。在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，親水單體選自中性單體(即不帶酸性或磁i性基團(tuán)的非離子單體)，陽(yáng)離子或堿性單體(即具有陽(yáng)離子或堿性氮原子的單體)和它們的混合物以及它們和酸性單體的混合物。在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，聚合物包含35-95重量％的親水單體。在本發(fā)明更具體的實(shí)施方案中，聚合物包含40-80重量°/。的親水單體。在本發(fā)明最具體的實(shí)施方案中，聚合物包含50-70重量％的親水單體。在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，聚合物包含5-65重量°/。的疏水單體。在本發(fā)明更具體的實(shí)施方案中，聚合物包含20-60重量％的疏水單體。在本發(fā)明最具體的實(shí)施方案中，聚合物包含30-50重量％的疏水單體。在具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明的聚合物組合物是經(jīng)疏水性改性的聚乙烯團(tuán);;口一種或多種類(lèi)^的疏水性聚p:單:單元(下文稱(chēng)為疏水基團(tuán))的i聚物例如聚合的Cl-C18-鏈烷酸乙烯酯，例如乙酸乙烯酯。對(duì)于這些聚合物，優(yōu)選它們含有50-95重量。/。乙烯吡咯烷酮(VP)(和因而為5-50重量°/。的疏水基團(tuán)，例如聚合的Cl-C18-鏈烷酸乙烯酯例如乙酸乙烯酯)，更優(yōu)選50-80%VP，甚至更優(yōu)選50-70%VP(和因而為20-50重量°/。，甚至更優(yōu)選30-50重量％的疏水基團(tuán)，例如Cl-C18-鏈烷酸乙烯酯例如乙酸乙烯酯)。下節(jié)包括對(duì)合適的聚合物的描述，然爾聚合物的選擇不限于以下實(shí)例。自US7070854知曉的離子敏感性陽(yáng)離子聚合物可能是合適的。本發(fā)明的離子敏感性陽(yáng)離子聚合物可以自?xún)煞N、三種或四種不同的單體形成。本發(fā)明的共聚物是陽(yáng)離子單體和至少一種疏水單體的聚合產(chǎn)物。三元ii聚合物或四元聚合物是陽(yáng)離子單體、至少一種疏水單體和任選地至少一種親水單體或水溶性非離子單體的聚合產(chǎn)物。在本發(fā)明的離子敏感性陽(yáng)離子聚合物中優(yōu)選的陽(yáng)離子聚合物是[2-(曱基丙烯酰氧基)乙基]三曱基氯化銨([2-(methacryloyloxy)ethyl]trimethylammoniumchloride)。酸丁酯，丙烯酸-2-乙基己酯和[2-(甲基丙烯酰氧基)乙基]三曱基氯化銨。本發(fā)明的優(yōu)選三元聚合物是從以下三種不同的單體形成的丙烯酸丁酯，丙烯酸-2-乙基己酯和[2-(曱基丙烯酰氧基)乙基]三曱基氯化銨。本發(fā)明的優(yōu)選共聚物是[2-(曱基丙烯酰氧基)乙基]三曱基氯化銨和丙烯酸丁酯或丙烯酸-2-乙基己酯的聚合產(chǎn)物。本發(fā)明的特別優(yōu)選的三元聚合物是[2-(曱基丙烯酰氧基)乙基]三曱基氯化銨和丙烯酸丁酯和丙烯酸-2-乙基己酯的聚合產(chǎn)物。丙烯酰胺、[2-(曱基丙烯酰氧基)乙基]三曱基氯化銨、丙烯酸丁酯和丙烯酸-2-乙基己酯均可從AldrichChemical,Milwaukee,Wis通過(guò)商業(yè)方法獲得。對(duì)于自丙烯酰胺、丙烯酸丁酯、丙烯酸-2-乙基己酯和[2-(曱基丙烯酰氧基)乙基]三曱基氯化銨制備的離子敏感性四元聚合物，四元聚合物中單體的摩爾百分比如下約35至小于80摩爾百分比的丙烯酰胺；大于0至約45摩爾百分比的丙烯酸丁酯；大于0至約65摩爾百分比的丙烯酸-2-乙基己酯；和大于0至約20摩爾百分比的[2-(曱基丙烯酰氧基)乙基]三曱基氯化銨。更具體而言，四元聚合物中單體的摩爾百分比是約50至約67摩爾百分比的丙烯酰胺；約15至約28摩爾百分比的丙烯酸丁酯；約7至約15摩爾百分比的丙烯酸-2-乙基己酯；和大于0至約10摩爾百分比[2-(曱基丙烯酰氧基)乙基]三曱基氯化銨。更具體而言，四元聚合物中單體的摩爾百分比是約57至約66摩爾百分比的丙烯酰胺；約15至約28摩爾百分比的丙烯酸丁酯；約7至約13摩爾百分比的丙烯酸-2-乙基己酉旨；和約1至約6摩爾百分比的P-(曱基丙烯酰氧基)乙基]三曱基氯化銨。對(duì)于自丙烯酸丁酯、丙烯酸-2-乙基己酯和[2-(曱基丙烯酰氧基)乙基]三曱基氯化銨制備的離子敏感性共聚物和三元聚合物，三元聚合物中單體的摩爾百分比如下0至約90摩爾百分比的丙烯酸丁酯；0至約75摩爾百分比的丙烯酸-2-乙基己酯；和5至約60摩爾百分比的[2-(曱基丙烯酰氧基)乙基]三曱基氯化銨。本發(fā)明的其它離子敏感性陽(yáng)離子聚合物包含l)陽(yáng)離子單體，2)至少一種水不溶性疏水單體，和任選地，3)親水性和/或水溶性非離子單體。可用于本發(fā)明的陽(yáng)離子單體包括季銨單體，包括，但不限于，選自下列的陽(yáng)離子單體[2-(曱基丙烯酰氧)-乙基]三曱基氯化銨，(3-丙烯酰胺基丙基)三曱基氯化銨，N，N-二烯丙基二曱基氯化銨，丙烯酰氧基乙基三曱基氯化4妄(acryloxyethyltrimethylammoniumchloride),丙婦酰氧基乙基-二曱基千基氯化4妄(acryloxyethyl畫(huà)dimethylbenzylammoniumchloride)，曱基丙烯酰氧基乙基二曱基氯化銨(methacryloxyethyldimethylammoniumchloride)，曱基丙烯酰氧基乙基三曱基千基氯化銨(methacryloxyethyltrimethylbenzylammoniumchloride)和季銨化乙烯基吡啶。其它當(dāng)與水不溶性疏水單體在二價(jià)金屬絡(luò)合陰離子存在下共聚時(shí)形成離子交聯(lián)聚合物(ionomer)的乙烯基功能單體也可用于本發(fā)明。對(duì)于自陽(yáng)離子單體和水不溶性疏水單體制備的離子敏感性共聚物，共聚物中單體的摩爾百分比如下約10至小于50摩爾百分比的陽(yáng)離子單體；和大于50至約90摩爾百分比的水不溶性疏水單體。更具體而言，共聚物中單體的摩爾百分比是約15至約25摩爾百分比的陽(yáng)離子單體；和約70至約85摩爾百分比的水不溶性疏水單體。最具體而言，共聚物中單體的摩爾百分比是約20摩爾百分比的陽(yáng)離子單體；和約80摩爾百分比的水不溶性疏水單體。對(duì)于自陽(yáng)離子聚合物、水不溶性疏水單體和水溶性或親水單體制備的離子敏感性三元聚合物，三元聚合物中單體的摩爾百分比如下約5至小于50摩爾百分比的陽(yáng)離子單體；約30至約90摩爾百分比的水不溶性疏水單體；和約10至約60摩爾百分比的水溶性或親水單體。含有膦酸基(phosphonicgroup)、硫代磺酸基(thiosulphonicgroup)或其它有機(jī)含磷基團(tuán)的磷酸化聚合物可以用作本發(fā)明中的離子敏感性聚合物。這可以包括改性纖維素或纖維素衍生物和相關(guān)的膠(gum)，其因一價(jià)鹽或其它電解質(zhì)的存在而成為不溶性的。在一個(gè)實(shí)施方案中，可溶性纖維素衍生物，如CMC，被磷酸化且使其成為不溶性的，并且當(dāng)在高離子強(qiáng)度的或適當(dāng)pH的溶液中時(shí)能夠有效地作為離子敏感性聚合物制劑，而在自來(lái)水中可分散。在另一實(shí)施方案中，向聚合物加入可以是陰離子或兼性離子的氨基次膦酸基團(tuán)(aminophosphinicgroup)。氨基次膦酸基團(tuán)可以經(jīng)由次石粦酸鹽(hypophosphitesalt)與伯胺的縮合而加入。氯曱基次膦酸與胺的反應(yīng)也可以生成有用的陰離13子基團(tuán)，如GuentherW.Wasow在"Phosphorous-ContainingAnionicSurfactants,"AnionicSurfactants:OrganicChemistry,ed.HelmutStache,NewYork:MarcelDekker，1996，第589-590頁(yè)中所述。Wasow的整個(gè)章節(jié)，包括上述書(shū)中的第551-629頁(yè)，提供了關(guān)于制備帶有有用含磷基團(tuán)的聚合物的其它教導(dǎo)，將其通過(guò)提述并入本文。已經(jīng)提供了有用的陰離子基團(tuán)的天然聚合物也可用于本發(fā)明。這樣的聚合物包括瓊脂和角叉菜聚糖(carageenan)，其具有多個(gè)硫酸酯基團(tuán)(estersulfategroup)。如有必要，可以對(duì)它們進(jìn)行進(jìn)一步修飾，以具有額外的陰離子基團(tuán)(例如，磺化、磷酸化等)。具有兩個(gè)或更多個(gè)不同的陰離子基團(tuán)的聚合物，例如具有磺基和膦酸基的陰離子基團(tuán)聚合物也可用于本發(fā)明，其中可以調(diào)節(jié)不同陰離子的相對(duì)量以?xún)?yōu)化聚合物的強(qiáng)度、離子敏感性和分散性。這還包括兩性離子和兼性離子化合物。聚兩性電解質(zhì)特別可以在等電點(diǎn)之上或之下輕易溶解，但是在等電點(diǎn)不溶，其為基于電解質(zhì)濃度和pH的觸發(fā)機(jī)制提供了潛在可能。聚兩性電解質(zhì)的實(shí)例包括，但不限于，曱基丙烯酸和烯丙胺的共聚物，曱基丙烯酸和2-乙烯基吡啶的共聚物，帶有兼性側(cè)基的聚硅氧烷離聚物，和直接由兩性離子單體鹽形成的聚合物，例如Salamone等的共聚單體離子對(duì)(IPC)，全部如IrjaPiirma在PolymericSurfactants,NewYork:MarcelDekker,Inc.,1992中于第251-254頁(yè)中所公開(kāi)的，將該文件通過(guò)4是述并入本文。在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，對(duì)聚合物進(jìn)行選擇以使其對(duì)世界上存在的普通水硬度不敏感，即聚合物不僅在純水中可溶，還在水硬度高達(dá)至少60°dH或更通常為高達(dá)至少30。dH的水中可溶(參見(jiàn)例如K.H611;Wasser[Water],第7版(1986),WalterdeGruyter,Berlin)。在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，對(duì)聚合物進(jìn)行選擇，使其溶解度對(duì)特定離子的存在特別敏感。這能夠用于通過(guò)加入特定離子來(lái)避免在例如洗滌劑中的過(guò)早的(premature)釋放。例如k-角叉菜聚糖或修飾型k-角叉菜聚糖的溶解度對(duì)鉀離子比對(duì)鈉離子更敏感。本發(fā)明的組合物可以額外地含有任何與活性成分兼容的、藥物和酶領(lǐng)域中常規(guī)使用的賦形劑。酶本發(fā)明的上下文中的酶可以是任何酶或不同酶的組合。因此，提到"酶"時(shí)，這將概括地理解為包括一種酶或幾種酶的組合。根據(jù)本發(fā)明液體組合物含有至少一種酶。酶可以是任何可以通過(guò)商業(yè)方法獲得的酶，特別是選自下組的酶蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、纖維素酶、裂合酶、氧化還原酶和任何它們的混合物。還包括來(lái)自同一類(lèi)別的酶(例如蛋白酶)的混合物。根據(jù)本發(fā)明包含蛋白酶的液體組合物是優(yōu)選的。在具體的實(shí)施方案中，優(yōu)選的是包含兩種或更多種酶的液體組合物，其中第一種酶是蛋白酶，并且第二種酶選自下組淀粉酶、脂肪酶、纖維素酶、裂合酶和氧化還原酶。在更具體的實(shí)施方案中，第二種酶是脂肪酶。應(yīng)該理解的是酶變體(通過(guò)例如重組技術(shù)產(chǎn)生的)包括在術(shù)語(yǔ)"酶"的含義中。這樣的酶變體的實(shí)例公開(kāi)在例如EP251,446(Genencor)、WO91/00345(NovoNordisk)、EP525,610(Solvay)和WO94/02618(Gist-BrocadesNV)中。酶可以基于NC-IUBMB，1992的酶命名手冊(cè)(handbookEnzymeNomenclature)分類(lèi)，還可參見(jiàn)因特網(wǎng)上的ENZYME網(wǎng)站http:〃www.expasy.ch/enzvme/。ENZYME是有關(guān)酶的命名的信息庫(kù)。其主要基于國(guó)際生物化學(xué)和分子生物學(xué)聯(lián)合會(huì)命名委員會(huì)(NomenclatureCommitteeoftheInternationalUnionofBiochemistryandMolecularBiology)(IUB-MB),AcademicPress,Inc.，1992的建議，并且其描述了已為之提供了EC(酶學(xué)委員會(huì))號(hào)的經(jīng)表征的酶的各種類(lèi)型(BairochA.TheENZYMEdatabase,2000，NucleicAcidsRes28:304-305)。這種IUB-MB酶命名法是基于它們的底物特異性，有時(shí)基于它們的分子機(jī)制；這樣的分類(lèi)法不反映這些酶的結(jié)構(gòu)特征。幾年前已經(jīng)提出了另一種基于氨基酸序列相似性將某些糖苷水解酶，例如內(nèi)切葡聚糖酶、木聚糖酶、半乳聚糖酶、甘露聚糖酶、葡聚糖酶和a-半乳糖苷酶，歸類(lèi)到家族中。目前它們屬于90個(gè)不同的家族參見(jiàn)CAZy(ModO)因特網(wǎng)網(wǎng)站(Coutinho，P.M.&Henrissat，B.(1999)Carbohydrate-ActiveEnzymes服務(wù)器，在URL:http:〃afinbcnrs-mrs.fr/cazy/CAZY/index.html上(相應(yīng)的"i倉(cāng)文Coutinho，P.M.&Henrissat,B.(1999)Carbohydrate-activeenzymes:anintegrateddatabaseapproach.于"RecentAdvancesinCarbohydrateBioengineering，，,H.J.Gilbert,G.Davies,B.Henrissat禾口B.Svensson編,TheRoyalSocietyofChemistry,Cambridge,第3-12頁(yè)；Coutinho,P.M.&Henrissat,15B.(1999)Themodularstructureofcellulasesandothercarbohydrate-activeenzymes:anintegrateddatabaseapproach.于"Genetics,BiochemistryandEcologyofCelluloseDegradation""K.Ohmiya,K.Hayashi,K.Sakka，Y.Kobayashi,S,Karita和T.Kimura編，UniPublishersCo.,Tokyo，第15-23頁(yè))?？梢圆⑷氡景l(fā)明的顆粒的酶類(lèi)型包括氧化還原酶(ECl,.-.-)，轉(zhuǎn)移酶(EC2,,,)，水解酶(EC3.-,.-)，裂合酶(EC4.-.-.-)，異構(gòu)酶(EC5,.-.-)和連接酶(EC6.--.-)。顆粒可以包含蛋白酶，例如絲氨酸蛋白酶。蛋白酶合適的蛋白酶包括動(dòng)物、植物或微生物來(lái)源的那些蛋白酶。微生物來(lái)源是優(yōu)選的。包括化學(xué)修飾的或遺傳修飾的突變體。蛋白酶可以是絲氨酸蛋白酶，優(yōu)選是堿性微生物蛋白酶或胰蛋白酶-樣蛋白酶。堿性蛋白酶的實(shí)例是枯草溶菌素(subtilisin)，特別是源自芽孢桿菌屬(Bacillus)的那些枯草溶菌素，例如枯草溶菌素Novo、枯草溶菌素Carlsberg、枯草溶菌素309、枯草溶菌素147和枯草溶菌素168(在WO89/06279中有所描述)。胰蛋白酶-樣蛋白酶的實(shí)例是胰蛋白酶(例如，豬或牛來(lái)源的)和WO89/06270中描述的鐮孢屬(Fusarium)蛋白酶。在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，蛋白酶是絲氨酸蛋白酶。絲氨酸蛋白酶或絲氨酸內(nèi)肽酶(較新的名稱(chēng))是一類(lèi)肽酶，其特征在于酶活性中心內(nèi)存在絲氨酸殘基。絲氨酸蛋白酶絲氨酸蛋白酶是催化肽鍵水解的酶，并且在所述酶的活性部位存在必需的絲氨酸殘基(White,Handler和Smith,1973"PrinciplesofBiochemistry，"第五版，McGraw-HillBookCompany,NY,第271-272頁(yè))。細(xì)菌絲氨酸蛋白酶分子量在20,000-45,000道爾頓的范圍。它們受到二異丙基氟磷酸(鹽)的抑制。它們水解簡(jiǎn)單的末端酯，并且在活性上類(lèi)似于真核生物的胰凝乳蛋白酶，其也是一種絲氨酸蛋白酶。更狹義的術(shù)語(yǔ)，堿性蛋白酶，包括一個(gè)亞組，反映了一些絲氨酸蛋白酶從pH9.0-11.0的高最適pH(綜述參見(jiàn)Priest(1977)BacteriologicalRev,41711-753)?？莶莸鞍酌?subtilase):Siezen等(1991)，ProteinEng.,4719-737提出了暫時(shí)定名為枯草蛋白酶的絲氨酸蛋白酶的亞組。它們通過(guò)對(duì)先前稱(chēng)作枯草溶菌素-樣(subtilisin-like)蛋白酶的絲氨酸蛋白酶的超過(guò)40個(gè)氨基酸序列的同源性分析來(lái)定義。先前將枯草溶菌素定義為由革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌或真菌產(chǎn)生的絲氨酸蛋白酶，而根據(jù)Siezen等枯草溶菌素目前是枯草蛋白酶的亞組。已鑒定出多種枯草溶菌素，并且已經(jīng)測(cè)定了許多枯草溶菌素的氨基酸序列。這些包括超過(guò)六種來(lái)自芽孢桿菌屬菌株的枯草溶菌素，即，枯草溶菌素168、枯草溶菌素BPN'、枯草溶菌素Carlsberg、枯草溶菌素Y、枯草溶菌素amylosacchariticus和腸系膜肽酶(mesentericopeptidase)(Kurihara等(1972)J.Biol.Chem.2475629-5631;Wells等(l983)NucleicAcidsRes.117911-7925;Stahl和Fe麗i(1984)J.Bacteriol.159811-819,Jacobs等(1985)Nucl.AcidsRes.138913-8926;Nedkov等(1985)Biol.Chem.Hoppe-Seyler366421-430，Svendsen等(1986)FEBSLett.196228-232),—種來(lái)自放線菌目的枯草溶菌素，來(lái)自普通高溫》文線菌(Thermoactinomycesvulgaris)的耐熱蛋白酶(thermitase)(Meloun等(1985)FEBSLett.198195-200),和一種真菌枯草溶菌素，來(lái)自白麥軸才更霉(Tritirachiumalbum)的蛋白酶K(proteinaseK)(Jany禾口Mayer(1985)Biol.Chem.Hoppe-Seyler366584-492)。為了進(jìn)一步參考在下文再現(xiàn)了Siezen等的表I?？莶萑芫卦谖锢砗突瘜W(xué)上是充分表征的。除了對(duì)這些酶的初級(jí)結(jié)構(gòu)(氨基酸序列)的認(rèn)識(shí)，已經(jīng)測(cè)定了枯草溶菌素的超過(guò)50種高解析度X射線結(jié)構(gòu)，其描繪了底物結(jié)合、過(guò)渡態(tài)、產(chǎn)物、至少三種不同的蛋白酶抑制劑，并且定義了天然變異的結(jié)構(gòu)影響(stmcturalconsequence)(Kraut(1977)Ann.Rev.Biochem.46331-358)?？莶莸鞍酌傅囊粋€(gè)亞組，I-Sl，包含"經(jīng)典，，枯草溶菌素，例如枯草溶菌素168，枯草溶菌素BPN'，枯草溶菌素Carlsberg(ALCALASE,NovozymesA/S)和枯草溶菌素DY?？莶莸鞍酌傅牧硪粋€(gè)亞組I-S2，是由Siezen等(見(jiàn)上文)識(shí)別的。將亞組I-S2蛋白酶描述為高堿性枯草溶菌素并且包括以下的酶，如枯草溶菌素PB92(MAXACAL,Gist-BrocadesNV)、枯草溶菌素309(SAVINASE(灑維奈斯)，NovozymesA/S)、枯草溶菌素147(ESPERASE,NovozymesA/S)和堿性彈性蛋白酶YaB。枯草蛋白酶基因的隨機(jī)和定點(diǎn)突變都源于對(duì)酶的物理和化學(xué)性質(zhì)的認(rèn)識(shí)和貢獻(xiàn)出的涉及枯草蛋白酶催化活性、底物特異性、三級(jí)結(jié)構(gòu)等的信息(Wells等(1987)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.84;1219-1223;Wells等(1986)Phil.Trans.R.Soc.Lond.A.317415-423;Hwang和Warshel(1987)Biochem.262669-2673;Rao等，(1987)Nature328551-554。涵蓋這個(gè)領(lǐng)域的最近的公開(kāi)文獻(xiàn)是涉及設(shè)計(jì)切割底物中的特定靶序列(第24和64位)的變體的Carter等(1989)Proteins6240J48;討論多個(gè)之前公開(kāi)的結(jié)果的Graycar等(1992)AnnalsoftheNewYorkAcademyofSciences67271-79;和同樣綜述了之前的結(jié)果的Takagi(1993)Int.J.Biochem.25307-312?？梢酝ㄟ^(guò)商業(yè)方法獲得的蛋白酶(肽酶)的實(shí)例包括KannaseTM、EverlaseTM、Esperase、AlcalaseTM、Neutrase、Durazym、Savinase、OvozymeTM、Pyrase、PancreaticTrypsinNOVO(PTN)、Bio-FeedTMPro和Clear-LensPro(全部可從NovozymesA/S，Bagsvaerd，Denmark獲得)。其它優(yōu)選的蛋白酶包括在WO01/58275和WO01/58276中描述的那些蛋白酶。其它可以通過(guò)商業(yè)方法獲得的蛋白酶包括RonozymePro、MaxataseTM、MaxacalTM、MaxapemTM、OpticleanTM、PropeaseTM、Purafect禾口PurafectOxTM(可/人GenencorInternationalInc.,Gist-Brocades,BASF或DSMNutritionalProducts獲得)?？梢酝ㄟ^(guò)商業(yè)方法獲得的脂肪酶的實(shí)例包括LipexTM、Lipoprime、LipopanTM、Lipolase、LipolaseUltra、LipozymeTM、Palatase、ResinaseTM、Novozym435和Lecitase(全部可從NovozymesA/S獲得)。脂肪酶合適的脂肪酶包括細(xì)菌或真菌來(lái)源的那些。包括化學(xué)修飾或遺傳修飾的突變體。有用的脂肪酶的實(shí)例包括疏棉狀腐質(zhì)霉(Humicolalanuginosa)脂肪酶，例如，如EP258068和EP305216中描述的；曼赫根毛霉(Rhizomucormiehei)脂肪酶，例如，如EP238023中所述；念珠菌屬(Candida)脂肪酶，例如南極念珠菌(C.antarctica)脂肪酶，例如，EP214761中描述的南極念珠菌脂肪酶A或B;假單胞菌屬(Pseudomonas)脂肪酶如類(lèi)產(chǎn)堿假單胞菌(P.pseudoalcaligenes)和產(chǎn)堿假單胞菌(P.alcaligenes)脂肪酶，例如，如EP218272中所述，洋蔥假單胞菌(P.cepacia)脂肪酶，例如，如EP331376中所述，施氏假單胞菌(P.stutzeri)脂肪酶，例如，如BP1,372,034中所公開(kāi)，熒光假單胞菌(P.fluorescens)脂肪酶；芽孢桿菌屬(Bacillus)脂肪酶，例如，枯草芽孢桿菌(B.subtilis)脂肪酶(Dartois等，(1993)，BiochemicaetBiophysicaacta1131,253-260)，嗜熱脂肪芽孢桿菌(B.stearothermophilus)脂肪酶(JP64〃44"2)和短小芽孢桿菌(B.pumilus)脂肪酶(WO91/16422)。另外，許多克隆的脂肪酶可能是有用的，包括Yamaguchi等，(1991),Gene103,61-67)描述的沙門(mén)柏干酪青霉(Penicilliumcamenbertii)脂肪酶；白地霉(Geotricumcandidum)月旨肪酶(Schimada，Y.等，(1989),J.Biochem.106,383-388)，和多種根霉屬(Rhizopus)脂肪酶如德氏根霉(R.delemar)脂肪酶(Hass,M.J等，(1991),Gene109,117-113)，雪白根霉(R.niveus)脂肪酶(Kugimiya等，(1992)，Biosci.Biotech.Bio畫(huà)chem.56，716隱719)和米根霉(R.oryzae)月旨肪酶。脂肪分解酶的其它類(lèi)型例如角質(zhì)酶也可能是有用的，例如，如WO88/09367中所述的源自門(mén)多薩假單胞菌(Pseudomonasmendocina)的角質(zhì)酶，或源自豌豆腐皮鐮孢(Fusariumsolanipisi)的角質(zhì)酶(例如WO90/09446中所述)?？梢酝ㄟ^(guò)商業(yè)方法獲得的脂肪酶的實(shí)例包括LipexTM、Lipoprime、Lipopan、LipolaseTM、LipolaseUltra、LipozymeTM、PalataseTM、ResinaseTM、NovozymTM435和Lecitase(全部可從NovozymesA/S獲得)。其它可以通過(guò)商業(yè)方法獲得的脂肪酶包括LumafastTM(來(lái)自GenencorInternationalInc.的門(mén)多薩假單胞菌脂肪酶)；LipomaxTM(來(lái)自Gist-Brocades/GenencorInt.Inc.的類(lèi)產(chǎn)石咸々I單胞菌月旨肪酶；和來(lái)自Solvayenzymes的芽孢桿菌屬菌種脂肪酶。另外的脂肪酶可從其它供應(yīng)商例如LipaseP"Amano"(AmanoPharmaceuticalCo.Ltd.)獲得。淀粉酶合適的淀粉酶(a和/或p)包括細(xì)菌或真菌來(lái)源的那些。包括化學(xué)修飾的或遺傳修飾的突變體。例如，淀粉酶包括獲得自地衣芽孢桿菌(B.licheniformis)的特殊菌抹的a-淀粉酶，其在英國(guó)專(zhuān)利說(shuō)明書(shū)(BritishPatentSpecification)No.1,296,839中更詳細(xì)地描述。可以通過(guò)商業(yè)方法獲得的淀粉酶是DuramylTM、TermamylTM、Fungamyl7,BAN(可從NovozymesA/S獲得)和RapidaseTM和MaxamylPTM(可,人Gist-Brocades獲得)。纖維素酶合適的纖維素酶包括細(xì)菌或真菌來(lái)源的那些。包括化學(xué)修飾的或遺傳修飾的突變體。合適的纖維素酶在US4,435,307中公開(kāi)，其公開(kāi)了從特異腐質(zhì)霉(Humicolainsolens)產(chǎn)生的真菌纖維素酶。特別合適的纖維素酶是具有顏色保護(hù)效益(colorcarebenefits)的纖維素酶。這樣的纖維素酶的實(shí)例是在歐洲專(zhuān)利申請(qǐng)No.0495257中描述的纖維素酶。氧化還原酶適合于在液體組合物中使用的任何氧化還原酶，例如，過(guò)氧化物酶或氧化酶如漆酶，可以用于本文。在本文中合適的過(guò)氧化物酶包括植物、細(xì)菌或真菌來(lái)源的那些。包括化學(xué)修飾的或遺傳修飾的突變體。合適的過(guò)氧化物酶的實(shí)例是源自鬼傘屬(Coprinus)菌抹，例如，灰蓋鬼傘(C.cinerius)或長(zhǎng)根鬼傘(C.macrorhizus)的那些，或源自芽孢桿菌屬菌抹，例如，短小芽孢桿菌的那些，特別是根據(jù)WO91/05858的過(guò)氧化物酶。在本文中合適的漆酶包括細(xì)菌或真菌來(lái)源的那些。包括化學(xué)修飾的或遺傳修飾的突變體。合適的漆酶的實(shí)例是可以從栓菌屬菌抹，例如，長(zhǎng)絨毛栓菌(T.villosa)或變色栓菌(T.versicolor),或可以/人鬼傘屬菌抹，例如，灰蓋鬼傘，或可以從毀絲霉屬(Myceliophthora)菌抹，例如嗜熱毀絲霉(M,thermophila)獲得的那些?？梢源嬖谟诒景l(fā)明液體中的酶的類(lèi)型包括氧化還原酶(EC轉(zhuǎn)移酶(EC2.-,.-)，水解酶(EC3.-.-,),裂合酶(EC4,.-.-)，異構(gòu)酶(EC5.-,.-)和連接酶(EC6.-,,)。在本發(fā)明的上下文中優(yōu)選的氧化還原酶是過(guò)氧化物酶(EC1.11.1)，漆酶(EC1.10.3.2)和葡萄糖氧化酶(EC1丄3.4)?？梢酝ㄟ^(guò)商業(yè)方法獲得的氧化還原酶(EC1.-,.-)的實(shí)例是GluzymeTM(可從NovozymesA/S獲得的酶)。另外的氧化還原酶可從其它供應(yīng)商獲得。優(yōu)選的轉(zhuǎn)移酶是任何以下亞類(lèi)中的轉(zhuǎn)移酶a轉(zhuǎn)移一碳基團(tuán)的轉(zhuǎn)移酶(EC2.1);b轉(zhuǎn)移醛或酮?dú)埢霓D(zhuǎn)移酶(EC2.2);酰基轉(zhuǎn)移酶(EC2.3);c糖基轉(zhuǎn)移酶(EC2.4);d轉(zhuǎn)移除甲基之外的烷基或芳基的轉(zhuǎn)移酶(EC2.5);和e轉(zhuǎn)移含氮基團(tuán)的轉(zhuǎn)移酶(EC2.6)。在本發(fā)明的上下文中最優(yōu)選的轉(zhuǎn)移酶類(lèi)型是轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶(蛋白質(zhì)-谷氨酰胺Y-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶；EC2.3.2.13)。合適的轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的其它實(shí)例在WO96/06931(NovoNordiskA/S)中描述。在本發(fā)明的上下文中優(yōu)選的水解酶是羧酸酯水解酶(EC3丄l.-)例如脂肪酶(EC3.1.1.3);肌醇六磷酸酶(EC3丄3.-)，例如3-肌醇六磷酸酶(EC3.1.3.8)和6-肌醇六磷酸酶(EC3丄3.26);糖苷酶(EC3.2，其屬于本文稱(chēng)作"糖酶"的組)，如a-淀粉酶(EC3.2.1.1);肽酶(EC3.4,也稱(chēng)為蛋白酶)；和其它羰基水解酶。可以通過(guò)商業(yè)方法獲得的肌醇六磷酸酶的實(shí)例包括Bio-Feed肌酉孚六磷酸酶(Novozymes),RonozymeP(DSMNutritionalProducts)，Natuphos(BASF)，F(xiàn)inase(ABEnzymes)和Phyzyme產(chǎn)品系列20(Danisco)。其它優(yōu)選的肌醇六磷酸酶包括在WO98/28408、WO00/43503和WO03/066847中描述的那些。在本文上下文中，術(shù)語(yǔ)"糖酶"不僅用于指能夠斷裂糖鏈(例如淀粉或纖維素)特別是五元和六元環(huán)結(jié)構(gòu)的酶(即糖普酶，EC3.2),還指能夠異構(gòu)化糖的酶，例如將六元環(huán)結(jié)構(gòu)如D-葡萄糖異構(gòu)為五元環(huán)結(jié)構(gòu)如D-果糖。相關(guān)的糖酶包括以下(EC號(hào)在圓括號(hào)內(nèi))a-淀粉酶(EC3.2丄l)、p-淀粉酶(EC3.2丄2)、葡聚糖1,4-a-葡糖苷酶(EC3.2丄3)、內(nèi)切-l，4-卩-葡聚糖酶(纖維素酶，EC3.2.1.4)、內(nèi)切-l，3(4)-卩-葡聚糖酶(EC3.2.1.6)、內(nèi)切畫(huà)l,4-p-木聚糖酶(EC3.2.1.8)、葡聚糖酶(dextranase)(EC3.2丄11)、殼多糖酶(EC3.2丄14)、多聚半乳糖趁酸酶(EC3.2.1.15)、溶菌酶(EC3.2.1.17)、卩-葡糖苷酶(EC3.2.1.21)、a-半乳糖苷酶(EC3.2.1.22)、p陽(yáng)半乳糖香酶(EC3.2.1.23)、淀粉-l,6-葡糖苷酶(EC3.2.1.33)、木聚糖1,4-卩-木糖苷酶(EC3.2丄37)、葡聚糖內(nèi)切-l,3-(3-D-葡糖苷酶(EC3.2.1.39)、a-糊精內(nèi)切-1,6-01-葡糖苷酶(￡€3.2丄41)、蔗糖a-葡糖苷酶(EC3.2丄48)、葡聚糖內(nèi)切-U-a-葡糖苷酶(EC3.2丄59)、葡聚糖1,4-卩-葡糖苷酶(EC3.2.1.74)、葡聚糖內(nèi)切-l,6-卩-葡糖苷酶(EC3.2丄75)、半乳聚糖酶(EC3.2丄89)、阿拉伯聚糖內(nèi)切-l,5-a-L-阿拉伯糖苷酶(EC3.2丄99)、乳糖酶(EC3.2丄108)、殼聚糖酶(chitosanase)(EC3.2.1.132)和木糖異構(gòu)酶(EC5.3.1.5)?？梢酝ㄟ^(guò)商業(yè)方法獲得的糖酶的實(shí)例包括Alpha-GalTM、Bio-FeedAlpha、Bio-FeedTMBeta、Bio-FeedTMPlus、Bio-FeedWheat、Bio-FeedZ、NovozymeTM188、CarezymeTM、CelluclastTM、CellusoftTM、CelluzymeTM、CeremylTM、CitrozymTM、DenimaxTM、DezymeTM、DextrozymeTM、DuramylTM、Energex、Finizym、Fungamyl、GamanaseTM、Glucanex、Lactozym、LiquezymeTM、MaltogenaseTM、NatalaseTM、Pentopan、Pectinex、PromozymeTM、PulpzymeTM、NovamylTM、TermamylTM、AMGTM(AmyloglucosidaseNovo)、MaltogenaseTM、SweetzymeTM和AquazymTM(全部可從NovozymesA/S獲得)。其它糖酶可從其它供應(yīng)商獲得，例如RoxazymeTM和RonozymeTM產(chǎn)品系列(DSMNutritionalProducts),Avizyme、Porzyme和Grindazyme產(chǎn)品系歹'J(Danisco,Finnfeeds)，以及Natugrain(BASF)、PurastarTM和PurastarTMOxAm(Genencor)。21其它可以通過(guò)商業(yè)方法獲得的酶包括MannawayTM、PectawayTM、StainzymeTM,pRenozymeTM。額外的材料并入顆粒中的額外的材料可以是多糖、蠟、酶活化劑或增強(qiáng)劑、填充劑、酶穩(wěn)定劑、增溶劑、交聯(lián)劑、懸浮劑、粘度調(diào)節(jié)劑、輕球(lightsphere)、氯清除劑(chlorinescavenger)、增塑劑(plasticizer)、色素、鹽、防腐劑和香料。多糖本發(fā)明的多糖可以是未修飾的天然存在的多糖或經(jīng)修飾的天然存在的多糖。合適的多糖包括纖維素、果膠、糊精和淀粉。淀粉可以溶于水或不溶于水。在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，多糖是淀粉。在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，多糖是不溶性淀粉。淀粉本身，或者作為改性淀粉的出發(fā)點(diǎn))，且相關(guān)的淀粉包括來(lái)自下列的淀粉稻、玉米、小麥、馬鈴薯、燕麥、木薯、西谷椰子(sago-palm)、木薯粉(yuca)、大麥、甘薯、高粱、薯蕷(yam)、黑麥、黍(millet)、蕎麥(buckwheat)、竹芋(arrowroot)、芋(taro)、箭葉黃體芋(tannia)，并且可以例如以面粉的形式。木薯淀粉屬于本發(fā)明上下文中的優(yōu)選淀粉；就此可能提到木薯和木薯淀粉已知許多同義詞，包4舌木薯(tapioca)、木薯(manioc)、木薯(mandioca)和木薯(manihot)。如在本發(fā)明的上下文中采用的，術(shù)語(yǔ)"改性淀粉"是指經(jīng)過(guò)某種至少是部分化學(xué)改性、酶改性和/或物理或物理化學(xué)改性的天然存在的淀粉，并且其相對(duì)于"親本"淀粉通常展現(xiàn)出改變的性質(zhì)。蠟本發(fā)明的上下文中的"蠟，，應(yīng)理解為熔點(diǎn)為25-150°C,特別是30-100。C，更特別是35-85。C，最特別是40-75。C的聚合材料。蠟優(yōu)選在室溫25°C為固態(tài)。優(yōu)選下限以在蠟開(kāi)始熔化的溫度和通常儲(chǔ)藏顆?；虬w粒的組合物的溫度(20-30。C)之間設(shè)定一個(gè)合理差距。對(duì)于一些顆粒，例如用于洗滌劑工業(yè)的顆粒，蠟的優(yōu)選特征是蠟應(yīng)該是水溶性或在水中可分散的，特別是在中性和堿性溶液中，從而當(dāng)本發(fā)明的包被顆粒導(dǎo)入水溶液中時(shí)，即通過(guò)用水稀釋它時(shí)，蠟應(yīng)該分解和/或溶解，提供并入顆粒的活性物質(zhì)(activeincorporatedintheparticle)向水溶液的快速釋放和溶解。水溶性蠟的實(shí)例是聚乙二醇(PEG)。在水不溶性蠟中，可分散在水溶液中的是甘油三酯和油。對(duì)于一些顆粒，優(yōu)選的是涂層含有一些不溶性蠟，例如，飼料顆粒(feedparticle)。本發(fā)明的蠟組合物可以包含化學(xué)合成的任何蠟。還可以同樣合適地包含從天然來(lái)源分離的蠟或其衍生物。因此，本發(fā)明的蠟組合物可以包含選自以下蠟的非限定性列表的蠟畫(huà)聚乙二醇，PEG。不同的PEG蠟可以通過(guò)商業(yè)方法獲得，具有不同的分子大小，其中分子大小低的PEG也具有低熔點(diǎn)。合適的PEG的實(shí)例是PEG1500、PEG2000、PEG3000、PEG4000、PEG6000、PEG8000、PEG9000等，例如，來(lái)自BASF(PluriolE系列)或來(lái)自Clariant或來(lái)自Ineos。聚乙二醇的衍生物也可以使用。-聚丙烯(例如來(lái)自BASF的聚丙二醇PluriolP系列)或聚乙烯或其混合物。聚丙烯和聚乙烯的衍生物也可以使用。-在室溫是固體的非離子表面活性劑，例如具有高乙氧基水平的乙氧基化脂肪醇，例如來(lái)自BASF的LutensolAT系列，每分子具有不同量的環(huán)氧乙烷的C16-C18脂肪醇，例如LutensolATI1、AT13、AT25、AT50、AT80,其中數(shù)目說(shuō)明環(huán)氧乙烷基團(tuán)的平均數(shù)?？蛇x地，環(huán)氧乙烷、環(huán)氧丙烷的聚合物或它們的共聚物是有用的，例如嵌段聚合物，例如來(lái)自BASF的PluronicPE6800。乙氧基化脂肪醇的衍生物。-從天然來(lái)源分離的蠟，例如Carnauba蠟(熔點(diǎn)80-88°C)，Candelilla蠟(熔點(diǎn)68-7(TC)和蜂蠟。其它天然蠟或其衍生物是源自動(dòng)物或植物的蠟，例如源自海洋來(lái)源的動(dòng)物或植物的蠟。氫化的植物油或動(dòng)物脂(animaltallow)。這種蠟的實(shí)例是氫化的牛脂(hydrogenatedoxtallow)、氫化棕櫚油、氫化棉籽和/或氫化大豆油，其中術(shù)語(yǔ)"氪化"用于本文應(yīng)理解為未飽和碳水化合物鏈(例如甘油三酯中)的飽和，其中將碳=碳雙鍵轉(zhuǎn)化成碳-碳單鍵。氬化棕櫚油是可以通過(guò)商業(yè)方法獲得的，例如從HobumOeleundFetteGmbH—Germany或DeutcheCargillGmbH—Germany。-脂肪酸醇(fattyacidalcohol),例如來(lái)自CondeaChemieGMBH-Germany的線性長(zhǎng)鏈脂肪酸醇NAFOL1822(C18,20,22)，其具有55-60。C的熔點(diǎn)。脂肪醇的衍生物。-甘油單酯和/或甘油二酯，如硬脂酸甘油酯是有用的蠟，其中硬脂酸(stearate)是硬脂酸和棕櫚酸的混合。其實(shí)例是來(lái)自DaniscoIngredients,Denmark的DimodanPM。-脂肪酸，如氫化的線性長(zhǎng)鏈脂肪酸和脂肪酸的衍生物。-石蠟，即固態(tài)烴。-微晶蠟。在另外的實(shí)施方案中，可用于本發(fā)明的蠟可以在C.M.McTaggart等，Int.丄Pharm.19，139(1984)或Flanders等，DrugDev.Ind.Pharm.13,1001(1987)中找到，將中兩篇文獻(xiàn)通過(guò)提述并入本文。在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的蠟是兩種或更多種不同的蠟的混合物。在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，一種或多種蠟選自下組PEG、乙氧基化脂肪醇、脂肪酸、脂肪酸醇和甘油酯。在本發(fā)明的另一具體實(shí)施方案中，蠟選自合成蠟。在更具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明的蠟是PEG或非離子表面活性劑。在本發(fā)明最具體的實(shí)施方案中，蠟是PEG。填充劑合適的填充劑是水溶性和/或水不溶性無(wú)機(jī)鹽，如精磨的堿性硫酸鹽(alkalisulphate)、堿性碳酸鹽和/或堿性氯化物，粘土例如高嶺土(例如SPESWHTTE,EnglishChinaClay)、膨潤(rùn)土、滑石、沸石、白堊、碳酸4丐和/或硅酸鹽。典型的填充劑是硫酸二鈉和木素磺酸鈣(calcium-lignosulphonate)。其它填充劑是硅石(silica)、石膏、高嶺土、滑石、硅酸鋁鎂和纖維素纖維。酶穩(wěn)定劑或除床護(hù)劑酶穩(wěn)定劑或酶保護(hù)劑可以分成幾類(lèi)堿性或中性材料，還原劑，抗氧化劑和/或第一過(guò)渡系金屬離子的鹽。這些中的每一種可以與其它相同或不同種類(lèi)的保護(hù)劑聯(lián)合使用。堿性保護(hù)劑的實(shí)例是堿金屬硅酸鹽、碳酸鹽或重碳酸鹽，24其通過(guò)活性中和例如氧化劑來(lái)提供化學(xué)清除效果。還原性保護(hù)劑的實(shí)例是亞硫酸鹽、碌^代亞石克酸鹽或碌^R/危酸鹽，而抗氧化劑的實(shí)例是曱辟u(mài)氮酸、丁羥曱苯(BHT)或丁基化羥基苯曱醚(BHA)。最優(yōu)選的劑是硫代硫酸鹽，例如硫代硫酸鈉。同樣酶穩(wěn)定劑可以是硼酸鹽、硼砂、曱酸鹽、二羧酸和三羧酸和所謂的可逆的酶抑制劑如具有巰基的有機(jī)化合物或烷基化或芳基化的硼酸。交聯(lián)劑交聯(lián)劑如酶相容性表面活性劑，例如乙氧基化醇，特別是具有10-80個(gè)乙氧基的乙氧基化醇。增溶劑顆粒的溶解度在包被顆粒是洗滌劑制劑的成分的情況下特別關(guān)鍵。如本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，許多作用劑，通過(guò)多種方法，用于增加制劑的溶解度，且本領(lǐng)域已知的典型的作用劑可以在NationalPharmacopeia(國(guó)家藥典)中找到。輕球輕球是低真密度的小顆粒。通常，它們是內(nèi)有空氣或氣體的空心球形顆粒。這樣的材料通常通過(guò)膨脹固體材料制備。這些輕球可以是無(wú)機(jī)或有機(jī)的，例如可以從ThePQCorporation獲得的PM系列。輕球也可以從多糖，如淀粉或其衍生物制備。Biodac⑧是從纖維素(來(lái)自造紙的廢料)制備的非空心輕質(zhì)材料的實(shí)例，可從GranTekInc獲得。這些材料可以單獨(dú)地或作為不同輕質(zhì)材料的混合物包括在本發(fā)明的顆粒中。懸浮劑可以將懸浮劑、媒介劑(mediator)(在例如洗滌應(yīng)用中在顆粒溶解時(shí)用于增強(qiáng)漂白作用)和/或溶劑并入顆粒。粘度調(diào)節(jié)劑粘度調(diào)節(jié)劑可以存在于顆粒中。增塑劑25在本發(fā)明的上下文中可用于顆粒中的增塑劑包括，例如多元醇如糖、糖醇、甘油(glycerin)、甘油三羥曱基丙坑(glyceroltrimethylolpropane)、新戊二醇(neopentylglycol)、三乙醇胺、單乙二醇、二乙二醇和三乙二醇或分子量低于1000的聚乙二醇(PEG);尿素、鄰苯二曱酸酯例如鄰苯二曱酸二丁酯或鄰苯二曱酸二曱酯；硫氰酸S旨(鹽)、非離子表面活性劑如乙氧基化醇和乙氧基化磷酸酯(鹽)和水。色素合適的色素包括，但不限于，細(xì)碎的增白劑，例如二氧化鈦或高嶺土，彩色色素，水溶性著色劑，以及一種或多種色素和水溶性著色劑的組合。鹽可以是無(wú)機(jī)鹽，例如硫酸鹽、亞硫酸鹽、磷酸鹽、膦酸鹽、硝酸鹽、氯化物和碳酸鹽，或簡(jiǎn)單的有機(jī)酸(少于10個(gè)碳原子例如6個(gè)或更少的碳原子)的鹽例如檸檬酸鹽、丙二酸鹽或乙酸鹽。在這些鹽中的陽(yáng)離子的實(shí)例是石咸金屬離子或堿土金屬離子，盡管也可為銨離子或第一過(guò)渡系的金屬離子，如鈉、鉀、鎂、4丐、鋅或鋁。陰離子的實(shí)例包括氯離子(chloride)、溴離子(bromide)、碘(iodide)、硫酸根、亞硫酸根、亞硫酸氫根、硫代硫酸根、磷酸根、磷酸二氫根、磷酸氬根、次磷酸根、焦磷酸二氬根、四硼酸根、硼酸根、碳酸根、碳酸氬根、正(或偏)硅酸根(metasilicate)、檸檬酸根、蘋(píng)果酸根、馬來(lái)酸根、丙二酸根、琥珀酸根、乳酸才艮、曱酸根、乙酸根、丁S交根、丙酸才艮、苯曱酸根、酒石酸根、抗壞血酸根或葡糖酸根。具體而言，可以使用堿金屬或堿土金屬的硫酸鹽、亞硫酸鹽、磷酸鹽、膦酸鹽、硝酸鹽、氯化物或碳酸鹽或簡(jiǎn)單有機(jī)酸的鹽如檸檬酸鹽、丙二酸鹽或乙酸鹽。具體實(shí)例包括NaH2P04、Na2HP04、Na3P04、(NH4)H2P04、K2HP04、KH2P04、Na2S04、K2S04、KHS04、ZnS04、MgS04、CuS04、Mg(N03)2、(NH4)2S04、硼酸鈉、乙酸鎂和檸檬酸鈉。鹽可以是水合的鹽，即結(jié)合有結(jié)晶水的結(jié)晶水合鹽，例如W099/32595中描述的。水合鹽的實(shí)例包括七水合硫酸鎂(MgS04(7H20))、七水合石克酸鋅(ZnS04(7H20))、五水合硫酸銅(CuS04(5H20))、七水合磷酸氫二鈉(Na2HP04(7H20))、六水合硝S吏鎂(Mg(N03)2(6H20))、十水合硼酸鈉、二水合檸檬酸鈉和四水合乙酸鎂。附加的涂層本發(fā)明的顆粒可以包含一層、兩層或多層附加的涂層。在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，顆粒包含至少兩層涂層。附加的涂層可以應(yīng)用于顆粒以提供附加的特征和性質(zhì)。因此，例如，附加的包^皮可以實(shí)現(xiàn)一種或多種以下效果(i)進(jìn)一步保護(hù)顆粒中的活性化合物以防環(huán)境中的有害化合物。(ii)當(dāng)顆粒引入液體介質(zhì)(如酸性介質(zhì))時(shí)按期望的比例溶解；(iii)提供更好的顆粒的物理強(qiáng)度。在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，外層可以按照微嚢化技術(shù)中已知的來(lái)涂覆(apply),例如經(jīng)由縮聚如界面聚合和原位聚合，凝聚(coacervation),凝膠化和螯合，溶劑提取，蒸發(fā)和懸浮交聯(lián)。不同的涂覆才支術(shù)在"Microspheres,MicrocapsulesandLiposomes",ed.RezaArshady，CitusBooksLtd.中和WO97/24179中描述，將其通過(guò)提述并入。顆粒的制備在第二方面本發(fā)明進(jìn)一步提供用于制備酶顆粒的方法，包括制備酶和聚合物的溶液、將此溶液在氣體或液體中霧化以制備小液滴(在氣體中霧化對(duì)應(yīng)于噴霧干燥過(guò)程，在與水不混溶的液體中霧化產(chǎn)生乳劑)和將這些液滴干燥形成固體顆粒的步驟。對(duì)于乳劑，干燥過(guò)程可以是如例如EP0356239中所述的共沸蒸餾(azeotropicdistillation)。顆?？梢酝ㄟ^(guò)但不限于制備毫微顆粒和微粒的領(lǐng)域內(nèi)已知的技術(shù)來(lái)制備，例如經(jīng)由在空氣或液體中的霧化，即a)噴霧干燥或b)乳化過(guò)程或通過(guò)c)較大顆粒的粒度減小，例如經(jīng)由干磨或濕磨。a)噴霧干燥過(guò)程，其中在噴霧干燥塔中將液態(tài)含酶溶液霧化形成小液滴，所述小液滴在它們向下經(jīng)過(guò)干燥塔的過(guò)程中干燥形成含酶的顆粒材料。這種方法能夠產(chǎn)生非常小的顆粒(MichaelS.Showell(編)；戶(hù)cwcfewdSurfactantScienceSeries;1998;vol.71;page140-142;MarcelDekker)。b)乳化過(guò)程，其中在與水不混溶的液體例如石蠟油中將液態(tài)含酶水溶液乳化。為了使液滴的形成更容易并且使乳劑穩(wěn)定，使用多種乳化劑和表面活性劑。其后可以通過(guò)蒸餾例如共沸蒸餾或通過(guò)將乳劑噴霧干燥(如果與水不混溶的液體是揮發(fā)性的)將水從液滴去除。c)粉碎過(guò)程，其中將預(yù)成型的較大顆粒/團(tuán)塊(briquette)等經(jīng)由研磨該較大顆粒來(lái)使粒度減小。這可以對(duì)干燥顆粒進(jìn)行(干磨)或使用顆粒在液體中的分散劑即所謂的漿料進(jìn)行(濕磨)。本發(fā)明的顆?？梢酝ㄟ^(guò)制備酶和聚合物的混合物、形成顆粒并干燥來(lái)制備。在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，顆粒是通過(guò)噴霧干燥、乳化過(guò)程和/或粉碎過(guò)程來(lái)制備的。包含本發(fā)明的顆粒的組合物液體組合物本文組合物的液體組合物可以是任何適合包含本發(fā)明的顆粒的液體組合物。液體組合物可以是任何組合物，但是尤其適合的組合物是個(gè)人護(hù)理組合物，清潔組合物，紡織品加工組合物例如漂白用，藥用組合物，皮革加工組合物，燃料，紙漿或紙加工組合物，食品和飲料組合物，和動(dòng)物飼料組合物。在本發(fā)明進(jìn)一步的具體實(shí)施方案中，液體組合物是液體洗滌劑組合物。在本發(fā)明更具體的實(shí)施方案中，液體組合物是洗衣或洗碟用洗滌劑組合物。在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，液體組合物包含電解質(zhì)。在本發(fā)明中，電解質(zhì)防止顆粒的溶解。后者對(duì)酶進(jìn)行保護(hù)直到洗滌劑被引入洗滌用液體，其中電解質(zhì)充分稀釋以使顆粒溶解并釋放酶，從而使其可以作用于污漬。在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，液體組合物包含少于50%的水。在更具體的實(shí)施方案中，液體組合物包含少于30°/。的水。在本發(fā)明進(jìn)一步的實(shí)施方案中，液體組合物包含少于20%的水。如果液體組合物是液體洗滌劑組合物，該液體組合物可以包含表面活性劑去溶液化電解質(zhì)(surfactantdesolubilisingelectrolyte),所述電解質(zhì)以一定濃度存在，在該濃度所述表面活性劑形成能夠使酶/聚合物顆粒穩(wěn)定懸浮并且足以防止或抑制水溶性聚合物溶解的結(jié)構(gòu)。在具體實(shí)施方案中液體洗滌劑組合物包含占該液體洗滌劑重量的30%-70°/。的水。在更具體的實(shí)施方案中液體洗滌劑包含占液體洗滌劑重量40%-60%的水。在最具體的實(shí)施方案中液體洗滌劑包含占液體洗滌劑重量80%-90%的7&。在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中液體洗滌劑組合物包含多于30%但是少于90%的水。液體洗滌劑組合物中包含的水的量特別地低于液體洗滌劑重量的85%，更特別地低于75%,如低于60%。規(guī)組合物。在具體實(shí)施方案中，組合物包含有效量的洗滌劑增效劑。合適的增效劑包括縮合的磷酸鹽，特別是三聚磷酸鈉或，次優(yōu)選地，焦磷酸鈉或四磷酸鈉，偏磷酸鈉，碳酸鈉，硅酸鈉，正磷酸鈉，檸檬酸鈉，氮川三乙酸鈉，膦酸鹽例如乙二胺四(亞曱基膦酸)鈉，二亞乙基三胺五(亞曱基膦酸)鈉，乙酰二膦酸鈉或氨基三(亞曱基膦酸)鈉，乙二胺四乙酸鈉或沸石。其它次優(yōu)選的增效劑包括上述鈉鹽的鉀或鋰類(lèi)似物。增效劑的比例通常從液體洗滌劑組合物重量的約5%至約40%。通常為10%-35%,優(yōu)選15-30%，更優(yōu)選18-28%，最優(yōu)選20-27%。通常采用兩種或更多種增效劑的混合物，例如三聚磷酸鈉與硅酸鈉和/或碳酸鈉和/或與沸石的混合物；或氮川三乙酸鈉與檸檬酸鈉的混合物。優(yōu)選地增效劑至少部分作為懸浮于組合物中的固體顆粒存在。本發(fā)明也可應(yīng)用于制備無(wú)增效劑的清潔組合物(unbuiltcleaningcomposition)或全部增效劑存在于溶液中的組合物。在具體實(shí)施方案中本發(fā)明的洗滌劑組合物包含一種或多種表面活性劑，其可以是非離子(包括半極性)和/或陰離子和/或陽(yáng)離子和/或兩性離子的。通常，表面活性劑將以占組合物重量約0.1%-90%的量存在于液體組合物中。在具體實(shí)施方案中，表面活性劑將以占組合物重量約10%-60%的量存在于液體組合物中。在另一具體實(shí)施方案中，表面活性劑將以占組合物重量約2-35%的量存在于液體組合物中。當(dāng)包括在其中時(shí)(Whenincludedtherein),洗滌劑將通常含有約1%至約40%的陰離子表面活性劑，例如線性烷基苯磺酸鹽，a-烯烴磺酸鹽，烷基硫酸鹽(脂肪醇硫酸鹽)，醇乙氧基硫酸鹽(alcoholethoxysulfate)，仲烷基磺酸鹽，a-磺基脂肪酸曱酯，烷基或烯基琥珀酸或肥皂。高度優(yōu)選的陰離子表面活性劑是線性烷基苯磺酸鹽(LAS)材料。這樣的表面活性劑和它們的制備在例如美國(guó)專(zhuān)利2,220,099和2,477,383中描述，將所述文件通過(guò)提述并入本文。特別優(yōu)選的是線性直鏈烷基苯磺酸的鈉鹽和鉀鹽，其中烷基中的平均碳原子數(shù)是大約11至14。Cu-d4(例如，d2)LAS鈉是特別優(yōu)選的。其他有用的陰離子表29面活性劑在WO99/0478第11至13頁(yè)中描述，將其通過(guò)4是述并入本文。當(dāng)包括在其中時(shí)，洗滌劑將通常含有約0.2%至約40%的非離子表面活性劑例如醇乙氧基化物，壬基酚乙氧基化物(nonylphenolethoxylate),烷基多聚糖苷(alkylpolyglycoside)，烷基二曱基氧化胺，乙氧基化脂肪酸單乙醇酰胺(ethoxylatedfattyacidmonoethanolamide),脂肪酸單乙醇酰胺，多羥基烷基脂肪酸酰胺(polyhydroxyalkylfattyacidamide)或葡糖胺的N-?；鵑-烷基衍生物("葡糖酰胺(glucamides)")。這些有用的非離子表面活性劑在WO99/0478的第13至14頁(yè)中進(jìn)一步描述，將其通過(guò)提述并入本文。洗滌劑也可以含有兼性和/或兩性離子表面活性劑。陰離子、非離子、兼性和兩性離子表面活性劑的典型列表在1972年5月23日授予Norris的US3,664,961中提供。概括而言，GB1,123,846中或Schwartz,Perry和Berch的"SurfaceActiveAgentsandDetergents"(表面活性劑和洗滌劑)中提及的任何表面活性劑可以使用。優(yōu)選地，液體洗滌劑組合物的pH為堿性，例如7.5以上，特別是7.5-12，通常為8-11,例如9-10.5。在具體的實(shí)施方案中液體洗滌劑組合物包含溶解的表面活性劑-去溶液化電解質(zhì)。實(shí)例包括氯化鈉、硝酸鈉、溴化鈉、碘化鈉、氟化鈉、硼酸鈉、曱酸鈉或乙酸鈉，或相應(yīng)的鉀鹽。然而，具體而言，電解質(zhì)是在洗滌用液體中執(zhí)行有用的功能所需的鹽。在具體的實(shí)施方案中，溶液中電解質(zhì)的濃度大于重量的3%，例如大于5%。在另一實(shí)施方案中，溶液中電解質(zhì)濃度是基于組合物的重量，溶液中電解質(zhì)的重量占6-20%,特別是7-19%，例如8-18°/。，9-17°/。，10-16%,例如11-15%。優(yōu)選調(diào)整電解質(zhì)含量以提供在環(huán)境中，在0。C-40。C至少三個(gè)月的儲(chǔ)藏穩(wěn)定性。洗滌劑組合物可以含有任何常規(guī)的少量成分，例如懸污劑(例如羧曱基纖維素)，防腐劑如曱醛或四(羥曱基)磷鐵鹽，膨潤(rùn)土，或任何本文描述的、按照本發(fā)明保護(hù)的酶。在采用漂白劑的情況下，將漂白劑封裝可能是方便的，例如用親水性膠嚢用材料封裝或封裝在疏水介質(zhì)例如，如有^U圭(silicone)或烴中，如EP-A-0238216或GB-A-2200377中所述。按照本發(fā)明的液體洗滌劑組合物也可以含有0-65°/。w/w螯合劑。這些30螯合劑可以選自下組氨基羧酸鹽/酯(aminocarboxylate)、氨基膦酸鹽/酯(aminophosphonate)、多官能取代的芳族螯合劑、二磷酸鹽/酯、三磷酸鹽/酯、碳酸鹽/酯、檸檬酸鹽/酯、氮川三乙酸、乙二胺四乙酸、二亞乙基三胺五乙酸、烷基或烯基琥珀酸、可溶性硅酸鹽或?qū)訝罟杷猁}(layeredsilicate)(例如來(lái)自Hoechst的SKS-6)和它們的混合物。另外的螯合劑在WO99/00478中描述。液體洗滌劑中的酶也可以使用液相中的穩(wěn)定劑來(lái)穩(wěn)定，所述穩(wěn)定劑例如多元醇如丙二醇或甘油，糖或糖醇，乳酸，短鏈羧酸如曱酸或乙酸，硼酸或硼酸衍生物，例如芳族硼酸酯，或苯基硼酸衍生物如4-曱酰苯基硼酸(4-formylphenylboronicacid)，并且所述組合物可以如例如WO92/19709和WO92/19708中所述配制。特別優(yōu)選的液體洗滌劑是含有以下的那些液體洗滌劑含量為5-12%的長(zhǎng)鏈(例如d(M4)線性烷基苯磺酸鹽，含量為0-3%的長(zhǎng)鏈烷基或烷基醚硫酸鹽(alkyl，oralkylether,sulphates),例如具有0-5個(gè)乙烯氧基(ethyleneoxy)單元；含量為l-5。/。的脂肪酸烷醇酰胺(fattyacidalkanolamide)和/或具有小于12的HLB的醇乙氧基化物；含量為0-3%,例如0.1-1%的單長(zhǎng)鏈烷基磷酸鹽和二長(zhǎng)《連》克基石舞酸鹽的'混合物(mixturesofmono-anddi-longchainalkylphosphates);含量為14-30%,例如14-18%或20-30%的三聚磷酸鈉(優(yōu)選與0.5-5重量％的水預(yù)水合)；任選地含量高達(dá)10%，例如5-10%的碳酸鈉，三聚磷酸鈉和碳酸鈉總共優(yōu)選為20-30%;含量為0.05-0.5%的抗再沉積劑如羧曱基纖維素鈉；含量為0.5%-0.5%的光學(xué)增亮劑；螯合劑，例如氬基膦酸鹽/酯如二胺和聚胺的亞曱基膦酸S旨，特別是乙二胺四[亞曱基膦酸]鈉或二亞乙基三胺六[亞曱基膦酸]鈉，任選地以0.1-15%的量存在；連同常規(guī)次要添加劑(minoradditives)如香料、著色料、防腐劑，剩余為水，百分比按全部液體洗滌劑的重量計(jì)。液體洗滌劑在稀釋到1%之后可以具有6-13的pH，優(yōu)選7-12，更通常為8-11,例如9-10.5。通過(guò)以下實(shí)施例進(jìn)一步描述本發(fā)明，不應(yīng)將這些實(shí)施例理解為對(duì)本發(fā)明范圍的限制。實(shí)施例實(shí)施例1按照方法1測(cè)試了可以通過(guò)商業(yè)方法從BASF獲得的乙烯吡咯烷酮(VP)和乙酸乙烯酯(VA)的共聚物(無(wú)規(guī)共聚物，全部具有大約30的K值，對(duì)應(yīng)于約40,000g/mol的分子量)，LuviskolVA37(30%VP+70%VA)，LuviskolVA55(50%w/wVP+50%w/wVA)，LuviskolVA64(60%VP+40%VA),LuviskolVA73(70%VP+30%VA)和Polyvidon(聚維酮)K30(100%VP),得到以下ANTU結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>8=可溶的，1=不溶的從表中可以看出，僅VA64(含60%乙烯吡咯烷酮和40%乙酸乙烯酯單體)在0mol/kg的離子強(qiáng)度下可溶而在1mol/kg的離子強(qiáng)度下不溶。VA37和VA55在純水中也不溶，而VA73和純PVP需要高于1mol/kg離子強(qiáng)度來(lái)沉淀。實(shí)施例2將100g含30%固體的含水Savinase濃縮物(一種蛋白酶)與6000g水和250gLuviskolVA64聚合物混合。使用MobilMinor(來(lái)自NiroA/S的噴霧干燥器)用165。C作為入口溫度來(lái)噴霧干燥溶液。將146g細(xì)粉與200gWhitewayT15礦物油混合以制備基質(zhì)顆粒在油中的漿料。所得顆粒的蛋白酶活性是5KNPU/g(千Novo蛋白酶單位)在洗滌劑中的儲(chǔ)藏穩(wěn)定性在具有以下配方的^^莫式洗滌劑中測(cè)試了穩(wěn)定性170gSurfacSLS/BP(陰離子表面活性劑)100g油酸40gNeodol25-3非離子表面活性劑50gNeodol25-7非離子表面活性劑5g碳酸鈉40g麗NaOH42.5g檸檬酸30g曱苯磺酸鈉(助水溶劑(hydrotrope))30g乙醇加水至1065gpH9.0將以下加入洗滌劑來(lái)自上述的VA64/Savinase顆粒(5KNPU/g)Savinase16.0L(16KNPU/g)-無(wú)保護(hù)的蛋白酶(水溶液)作為參照Lipolase100L(100KLU/g)-無(wú)保護(hù)的脂肪酶(水溶液)作為"提供"酶("offer"enzyme)加入Savinase至最終活性為0.06KNPU/g，和脂肪酶至最終活性為0.6KLU/g。在35。C儲(chǔ)藏7天之后測(cè)量了殘余Savinase活性，并在30。C儲(chǔ)藏3天之后觀'j量了殘余Lipolase活性。_樣品加入的蛋白酶加入的脂肪酶殘余Savinase活性殘余Lipolase活性ASavinase16.0LLipolase100L6%20%BVA64/Savinase顆粒Lipolase100L41%43%從數(shù)據(jù)中清楚的是將Savinase封裝在LuviskolVA64聚合物中使蛋白酶本身和存在的其它酶(脂肪酶)的穩(wěn)定性均得到提高。3權(quán)利要求1.一種包含酶和聚合物的顆粒，其中所述酶和聚合物作為混合物存在于顆粒中，并且按照方法1，所述聚合物在離子強(qiáng)度為0mol/kg的水溶液中是基本上可溶的，而在離子強(qiáng)度高于1mol/kg的水溶液中不溶。2.權(quán)利要求1的顆粒，其中所述聚合物包含基于聚合物總重量為35-95%w/w的親水單體單元。3.權(quán)利要求1的顆粒，其中所述聚合物具有5,000-500,000道爾頓的重均分子量。4.任一前述權(quán)利要求中的顆粒，其中所述聚合物選自下組改性的烯類(lèi)聚合物、纖維素衍生物、膠和蛋白質(zhì)。5.權(quán)利要求4的顆粒，其中所述改性的烯類(lèi)聚合物選自疏水性改性的聚乙烯吡咯烷酮和疏水性改性的聚乙烯醇。6.權(quán)利要求4的顆粒，其中所述改性的纖維素衍生物選自改性的羧曱基纖維素、曱基纖維素和羥丙基纖維素。7.權(quán)利要求4的顆粒，其中所述改性的膠選自改性的瓜爾豆膠、安息香膠、黃芪月交、阿拉伯月交(gumarabic)和阿拉伯樹(shù)膠(gumacacia)。8.權(quán)利要求4的顆粒，其中所述改性的蛋白質(zhì)選自改性的酪蛋白、明膠禾口白蛋白。9.權(quán)利要求4的顆粒，其中所述改性的聚合物選自至少一種疏水性乙烯型單體與至少一種親水性乙烯型的共聚物。10.權(quán)利要求9的顆粒，其中所述親水性乙烯型單體是乙烯吡咯烷酮。11.權(quán)利要求9的顆粒，其中所述疏水性乙烯型單體選自丙烯酸C1-C18烷基酯，曱基丙烯酸C1-C18烷基酯，丙烯酸C3-C18環(huán)烷基酯，曱基丙烯酸C3-C18環(huán)烷基酯，和乙烯基C1-C18鏈烷酸酯和它們的混合物。12.權(quán)利要求10的顆粒，其中所述聚合物包含1%-99%的乙烯吡咯烷酮。13.任一前述權(quán)利要求的顆粒，其中所述聚合物的分支度為5%-95%。14.任一前述權(quán)利要求的顆粒，其中所述聚合物和酶彼此不共價(jià)結(jié)合。15.—種用于制備任何權(quán)利要求1-11的顆粒的方法，包括制備酶和聚合物的混合物、形成顆粒和干燥的步驟。16.權(quán)利要求15的方法，其中所述顆粒是通過(guò)噴霧干燥、乳化方法和/或粉碎方法來(lái)制備的。17.—種包含權(quán)利要求1-14中任一項(xiàng)的顆粒的組合物。18.權(quán)利要求15的組合物，其中所述組合物是液體洗滌劑。19.權(quán)利要求15的組合物用于清潔衣物的用途。全文摘要本發(fā)明涉及包含酶和聚合物的顆粒，其中所述酶和聚合物作為混合物存在于顆粒中，并且按照本發(fā)明的方法1，所述聚合物在離子強(qiáng)度為0mol/kg的水溶液中基本上是可溶的，而在離子強(qiáng)度高于1mol/kg的水溶液中不溶。本發(fā)明還涉及制備所述顆粒的方法，包含所述顆粒的組合物和該組合物用于清潔衣物的用途。文檔編號(hào)C11D3/22GK101636480SQ200880008046公開(kāi)日2010年1月27日申請(qǐng)日期2008年1月11日優(yōu)先權(quán)日2007年1月11日發(fā)明者奧利·西蒙森申請(qǐng)人:諾維信公司