一種含有厄洛替尼和熊果酸的藥物組合物及其在制備抗腫瘤藥物中的應用
【專利摘要】一種含有厄洛替尼和熊果酸的藥物組合物及其在制備抗腫瘤藥物中的應用。本發(fā)明提供一種藥物組合物，其中包含物質(zhì)的量比為10?20:1?50的熊果酸與厄洛替尼。該藥物組合物具有良好的抗腫瘤活性，通過將EGFR小分子酪氨酸激酶抑制劑厄洛替尼與高效低毒的抗腫瘤天然產(chǎn)物熊果酸進行聯(lián)合用藥，其可降低組合物中藥物的毒副作用，同時具備良好的抗增殖作用，最終提高治療癌癥的效果，可應用于制備抗腫瘤的藥物領(lǐng)域。
【專利說明】
-種含有厄洛替尼和熊果酸的藥物組合物及其在制備抗腫瘤 藥物中的應用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于抗癌藥物領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明設(shè)及厄洛替尼和熊果酸聯(lián)合用于癌癥 的治療，特別是在抗肺癌中用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 熊果酸即30-徑基-熊果-12-締-28-酸（30-hy化ox}f-urs-12-en-28-〇ic acid， UA)，又名烏索酸、屬于a-香樹脂醇（a-amyrin)型五環(huán)Ξ祗類化合物，其相對分子量為 456.68,分子式為C30化地3,結(jié)果如式I所示，是自然界中分布較廣的天然活性化合物，主要W 游離或糖巧的形式存在其廣泛分布于批把葉、熊果、山植、白花蛇舌草等多種天然植物中， 也是許多傳統(tǒng)中藥的主要活性成分之一，具有廣泛的藥理作用，如抗癌、保肝、抗炎、抗病 毒、抗氧化等其中W抗癌活性最為顯著，不僅對多種致癌物有抵抗作用，而且對多種腫瘤細 胞在體內(nèi)、外均有抑制作用。因其副作用小，毒性低，顯示出較大的臨床應用潛力。近年來國 內(nèi)外對UA的抗腫瘤研究日趨深入，并發(fā)現(xiàn)其在腫瘤預防、治療W及防止晚期復發(fā)轉(zhuǎn)移等方 面有著獨特的優(yōu)勢及潛在的應用前景。專利Ν201510097801.9公開了一種含有熊果酸和環(huán) 憐酷胺的藥物組合物，所述組合物既可W增強單組分的抗腫瘤藥效，也能降低其對正常組 織的毒性，從而提高腫瘤治療的效果，在腫瘤治療領(lǐng)域具有很大的應用前景。專利 Ν03150714.Χ公開了熊果酸對人肝癌細胞、人乳腺癌細胞、人淋己瘤細胞、人成淋己細胞白 血病和人急性成淋己細胞白血病、人急性早幼粒白血病及人慢性髓性白血病都有細胞毒效 應。
[0003] 厄洛替尼(Erlotinb，簡Ε1)，結(jié)構(gòu)如式Π 所示，是近年來才上市的治療晚期非小細 胞肺癌藥物，在國際及國內(nèi)肺癌指引中厄洛替尼均被列為晚期非小細胞肺癌二線治療藥物 之一，它是通過口服治療非小細胞肺癌的祀向藥物，厄洛替尼作為EGFR小分子酪氨酸激酶 抑制劑，因其有口服簡便、副作用小、易于被患者接受而臨床應用廣泛。結(jié)構(gòu)如圖2所示。專 利N201510360703.X公開了苦鬼白毒和厄洛替尼聯(lián)合用藥用于肺癌的治療，兩者聯(lián)合使用 后會產(chǎn)生協(xié)同抗肺癌作用；專利N 200680041064.x公開了將N-辛二酷苯胺異徑朽酸和厄洛 替尼聯(lián)合使用用于肺癌、乳腺癌、膜腺癌等多種癌癥的治療。
[0004] W不同類型腫瘤細胞作為研究對象，通過熊果酸和厄洛替尼進行聯(lián)合用藥，對不 同腫瘤細胞進行體外抗癌活性測試，結(jié)果表明，熊果酸和厄洛替尼的聯(lián)合使用對癌細胞特 別是對非小細胞肺癌具有顯著的增殖抑制作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的就是提供厄洛替尼和熊果酸聯(lián)合抗腫瘤細胞增殖的用途，通過將 EGFR小分子酪氨酸激酶抑制劑厄洛替尼與高效低毒的抗腫瘤天然產(chǎn)物熊果酸進行聯(lián)合用 藥，考察其聯(lián)合用藥后對癌細胞的抗增殖作用，從而降低藥物的毒副作用，最終提高治療癌 癥的效果，可應用于制備抗腫瘤的藥物領(lǐng)域。
[0006] -種藥物組合物及其在制備抗腫瘤藥物中的應用，其特征在于包含物質(zhì)的量比為 10-20:1-50的熊果酸與厄洛替尼。
【附圖說明】
[0007] 圖1.熊果酸和厄洛替尼單獨使用及聯(lián)合使用24h后對A549細胞增殖的抑制結(jié)果； 圖2.熊果酸和厄洛替尼單獨使用及聯(lián)合使用48h后對A549細胞增殖的抑制結(jié)果； 圖3.熊果酸和厄洛替尼單獨使用及聯(lián)合使用72h后對A549細胞增殖的抑制結(jié)果； 圖4.熊果酸和厄洛替尼單獨使用及聯(lián)合使用24h后對H1975細胞增殖的抑制結(jié)果； 圖5.熊果酸和厄洛替尼單獨使用及聯(lián)合使用48h后對H1975細胞增殖的抑制結(jié)果； 圖6.熊果酸和厄洛替尼單獨使用及聯(lián)合使用72h后對H1975細胞增殖的抑制結(jié)果； 圖7.熊果酸和厄洛替尼單獨使用及聯(lián)合使用24h后對H1299細胞增殖的抑制結(jié)果； 圖8.熊果酸和厄洛替尼單獨使用及聯(lián)合使用48h后對H1299細胞增殖的抑制結(jié)果； 圖9.熊果酸和厄洛替尼單獨使用及聯(lián)合使用72h后對H1299細胞增殖的抑制結(jié)果。
【具體實施方式】
[000引為了使本發(fā)明所述的內(nèi)容更加便于理解，下面結(jié)合【具體實施方式】對本發(fā)明所述的 技術(shù)方案做進一步的說明，但是本發(fā)明不僅限于此。
[0009] 實施例1 熊果酸和厄洛替尼單獨使用及聯(lián)合使用24、48、72 h對A549細胞的增殖抑制作用:采用 標準Μ?Τ比色法測定了熊果酸和厄洛替尼不同聯(lián)合比例對A549細胞株的增殖抑制活性。 [0010]將對數(shù)期的細胞，用膜酶消化后，細胞計數(shù)，配成SXloVml的細胞濃度，將制得的 細胞懸液，每孔100 μ1接種到96孔板，放于37°C、5% C〇2培養(yǎng)箱中；棄掉舊的培養(yǎng)基，每孔加 入100 μ1含有不同藥物濃度梯度的培養(yǎng)基。置于37°C、5% 0)2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24、48和72 h， 棄掉含藥培養(yǎng)基，每孔加入100 yl含有MTT(0.5 mg/ml)的無血清無酪紅培養(yǎng)基，繼續(xù)解育4 h;小屯、吸取各孔中的上清液，每孔加入DMSO 150 pL，搖床中振蕩搖勻10 min,使藍紫色結(jié) 晶全部溶解，酶標儀巧70 nm)測定各孔光吸收值(0D值），并計算細胞的存活率，結(jié)果如圖1- 3所示：
[00川如圖1所示，當藥物作用24 h之后，熊果酸在10 μΜ的條件下，它抑制A549細胞增殖 的效果不明顯；單用Ε1在>50 liM的條件下，能表現(xiàn)出明顯的抑制Α549細胞的增殖;但當兩 者聯(lián)合用藥時，當El^lO μΜ時就能表現(xiàn)出明顯的抑制A549細胞增殖，且隨著E1濃度的增大 抑制細胞的增殖越明顯。如圖2所示，當藥物作用48 h之后，熊果酸在10 liM的條件細胞存活 率大約在70%左右;E1在>10 μΜ的條件下，能有效的抑制A549細胞的增殖;但聯(lián)合給藥的時 候當Ε1濃度>5 μΜ的條件下就能夠明顯的抑制細胞的增殖，兩者聯(lián)用可W起到協(xié)同的抑制 細胞的增殖；如圖3所示，當藥物作用72 h之后，熊果酸在10 μΜ的條件下細胞細胞死傷一 半;厄洛替尼>10 μΜ的條件下能夠抑制Α549細胞的增殖;但兩者聯(lián)用之后厄洛替尼在>2 μΜ的條件就能夠表現(xiàn)出明顯的抑制細胞的增殖。綜上結(jié)果可W發(fā)現(xiàn)，兩者聯(lián)合給藥能夠明 顯降低Ε1的給藥劑量，可W起到協(xié)同的抑制Α549細胞的增殖，且隨著Ε1濃度的增大和作用 時間的延長抑制Α549細胞的增殖越明顯。
[0012] 實施例2 采用金氏修正式計算熊果酸和厄洛替尼兩者聯(lián)合給藥在不同配比下作用24、48、72 h 對A549細胞的協(xié)同作用，篩選出最佳的藥物配比，結(jié)果如表1-3所示。計算出UA=10 μΜ的條 件下對Α549細胞的抑制率為ΕΑ，計算出不同厄洛替尼濃度對Α549細胞的抑制率為邸1、邸2、 ΕΒ3等，再計算出兩者聯(lián)合給藥在不同配比下對Α549細胞的抑制率分別為EC1、EC2、EC3等， 通過W下公式計算聯(lián)合用藥指數(shù)q值，q=EC/化B+EA-EB*EA)，當q值〉1.15為協(xié)同效應，0.85< q<l. 15為相加效應，q<0.85為括抗效應。通過上述聯(lián)合用藥指數(shù)的計算進一步判斷兩種藥 物聯(lián)合用藥的最終藥效。
[0013」
如表1-3所示，熊果酸和厄洛替尼兩者聯(lián)合給藥在不同配比下作用24、48、72 h對A549 細胞當厄洛替尼在低濃度的條件下兩者聯(lián)藥效基本為相加效應;當厄洛替尼在高濃度的條 件下兩者聯(lián)藥效基本為協(xié)同效應，可W協(xié)同的抑制A549細胞的增殖，藥物濃度越大，抑制越 明顯。
[0014] 實施例3 熊果酸和厄洛替尼單獨使用及聯(lián)合使用24、48、72 h對H1975細胞的增殖抑制作用，步 驟同實施例1，結(jié)果如圖4-6所示。
[001引如圖4所示，當藥物作用24 h之后，UA在10 μΜ的條件下，它抑制H1975細胞增殖的 效果不明顯;厄洛替尼在>50 μΜ的條件下，才能表現(xiàn)出明顯的抑制Η1975細胞的增殖;當兩 者聯(lián)合給藥時厄洛替尼>10 μΜ的條件下就可W明顯的抑制細胞的增殖;如圖5所示，當藥 物作用48 h之后，UA在10 μΜ的條件下能夠有效的抑制細胞的增殖;單用厄洛替尼在>25 μ Μ條件下，可W有效的抑制細胞的增殖;但聯(lián)合給藥的時候，當厄洛替尼>5 μΜ的條件下就 能夠明顯的抑制細胞的增殖;如圖6所示，當藥物作用72 h之后，熊果酸在10 liM的條件下就 死傷過半；厄洛替尼>10 μΜ的條件下能夠抑制H1975細胞的增殖；但聯(lián)合給藥時，抑制 Η1975細胞的殺傷比單用厄洛替尼來的強。綜上結(jié)果可W發(fā)現(xiàn)，UA和Ε1聯(lián)用能夠明顯降低厄 洛替尼的給藥劑量，可W起到協(xié)同的抑制Η1975細胞的增殖，且呈濃度依賴性和時間依賴性 的抑制化975細胞的增殖。
[0016] 實施例4 采用金氏修正式計算UA和厄洛替尼兩者聯(lián)合給藥在不同配比下作用24、48、72 h對 H1975細胞的協(xié)同作用，篩選出最佳的藥物配比，方法同實施例2,結(jié)果如表4-6所示。
[0017] 如表4-6所示，熊果酸和厄洛替尼兩者聯(lián)合給藥在不同配比下作用24、48、72 h對 H1975細胞當厄洛替尼在低濃度的條件下兩者聯(lián)藥效基本為相加效應；當厄洛替尼在高濃 度的條件下兩者聯(lián)藥效基本為協(xié)同效應，可W協(xié)同的抑制H1975細胞的增殖，藥物濃度越 大，抑制越明顯。
[001引實施例5 熊果酸和厄洛替尼單獨使用及聯(lián)合使用24、48、72 h對H1299細胞的增殖抑制作用，步 驟同實施例1，結(jié)果如圖7-9所示。
[0019]如圖4所示，當藥物作用24 h之后，UA在10 μΜ的條件下，它抑制H1299細胞增殖的 效果不明顯;厄洛替尼在>50 μΜ的條件下，才能表現(xiàn)出明顯的抑制Η1299細胞的增殖;當兩 者聯(lián)合給藥時厄洛替尼>5 μΜ的條件下就可W明顯的抑制細胞的增殖;如圖5所示，當藥物 作用48 h之后，UA在10 μΜ的條件下能夠有效的抑制細胞的增殖;單用厄洛替尼在>25 μΜ 條件下，可W有效的抑制細胞的增殖;但聯(lián)合給藥的時候，當厄洛替尼>2 μΜ的條件下就能 夠明顯的抑制細胞的增殖;如圖6所示，當藥物作用72 h之后，熊果酸在10 μΜ的條件下就死 傷過半;厄洛替尼> 10 μΜ的條件下能夠抑制Η1299細胞的增殖;但聯(lián)合給藥時，厄洛替尼> 1 liM的條件下能夠有效的抑制Η1299細胞的增殖。綜上結(jié)果可W發(fā)現(xiàn)，UA和化聯(lián)用能夠明顯 降低厄洛替尼的給藥劑量，可W起到協(xié)同的抑制H1299細胞的增殖，且呈濃度依賴性和時間 依賴性的抑制化299細胞的增殖。
[0020] 實施例6 采用金氏修正式計算UA和厄洛替尼兩者聯(lián)合給藥在不同配比下作用24、48、72 h對 H1299細胞的協(xié)同作用，篩選出最佳的藥物配方法同實施例3,結(jié)果如表7-9所示。
[0021]如表7-9示，熊果酸和厄洛替尼兩者聯(lián)合給藥在不同配比下作用24、48、72 h對 H1299細胞當厄洛替尼在低濃度的條件下兩者聯(lián)藥效基本為相加效應；當厄洛替尼在高濃 度的條件下兩者聯(lián)藥效基本為協(xié)同效應，可W協(xié)同的抑制H1299細胞的增殖，藥物濃度越 大，抑制越明顯D
【主權(quán)項】
1. 一種具有抗腫瘤活性的藥物組合物，其特征在于包含物質(zhì)的量比為10-20:1-50的熊 果酸與厄洛替尼。2. 如權(quán)利要求1所述的藥物組合物在制備抗腫瘤藥物中的應用。
【文檔編號】A61P35/00GK105998033SQ201610520707
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年7月5日
【發(fā)明人】邵敬偉, 鄭桂容, 劉亞軍, 江凱
【申請人】福州大學