[0068] ?進展:新病變，明確進展的非指數(shù)病變，指數(shù)病變生長2 25%，或在不存在放射 進展的情況下明顯的臨床惡化。
[0069] 成膠質(zhì)細胞瘤是對常規(guī)治療有抗性的一種毀滅性的原發(fā)性高級惡性膠質(zhì)瘤。當前 的介入法(例如外科手術(shù)、放射治療和化學治療)使總中值存活延長至約14.6個月。很多新 化合物甚至當組合測試時仍未能改善整體存活或者產(chǎn)生有用的臨床響應。對可影響疾病進 程的對這些腫瘤的新攻擊模式仍然存在遠遠尚未滿足的醫(yī)療需求。
[0070] 高級惡性膠質(zhì)瘤是具有高血管性和浸潤性的腫瘤并且因此即使進行了手術(shù)切除 也傾向于復發(fā)。對于新診斷以及復發(fā)性疾病而言治療選擇有限，對于患有無法進行外科手 術(shù)的腫瘤的患者而言治療選擇尤其有限。此外，盡管80%或更多的成膠質(zhì)細胞瘤復發(fā)發(fā)生 在與原始腫瘤相同的區(qū)域，但是由于毒性問題常常排除額外的放射治療。替莫唑胺被批準 用于治療新診斷的成膠質(zhì)細胞瘤和復發(fā)性間變性星形細胞瘤，并且貝伐單抗被最新批準用 于治療復發(fā)性成膠質(zhì)細胞瘤。這些藥物是全身遞送的并且必需以多劑量方案施用。替莫唑 胺最有效地被用作外科手術(shù)或放射治療的輔藥。相比之下，貝伐單抗通常單獨施用以用于 復發(fā)性疾病，或者實驗性地與現(xiàn)有的化學治療劑(例如依立替康)組合施用。
[0071] 所理解的腫瘤生物學進展已經(jīng)允許鑒定多個關(guān)鍵的信號傳導途徑和腫瘤發(fā)生過 程。然而，由于途徑和可選的信號傳導過多，對單個靶標的抑制可能不足以顯著性地抑制腫 瘤生長，因此可能需要數(shù)種藥劑的組合。
[0072] 目前，有多種抗血管生成劑被考慮用于臨床實踐中。由于其FDA批準加快，因此在 腦瘤患者中最常研究的抗血管生成藥物為貝伐單抗（Avastin?)，其為破壞vegf途徑、誘 導腫瘤血管尺寸減小并產(chǎn)生滲透性降低的較為正常化的血管網(wǎng)絡的人源化單克隆抗體?，F(xiàn) 在，已經(jīng)將該化合物作為單一和組合藥劑兩者在預先(upfront)情況下和復發(fā)性情況下用 于多個研究。
[0073] 目前，大部分目前進行中的II/III期研究已轉(zhuǎn)變?yōu)槭褂眯》肿蛹っ富蛘纤匾种?劑，例如恩扎妥林(enzastaurin)、西地尼布、帕唑帕尼、索拉非尼（sorafenib)、舒尼替尼 (sunitinib)和西侖吉肽。治療方案可包括這些治療劑的組合，通常涉及非抗血管生成治療 的并行處方并且可施用于患有新診斷疾病和復發(fā)性疾病的兩種患者。初始結(jié)果表明，盡管 這些藥劑中的數(shù)種可適度地延長6個月PFS，但是對存活的潛在長期益處和影響仍待證明。
[0074] 多形性成膠質(zhì)細胞瘤是最常見的成人的惡性原發(fā)性腦瘤。這些腫瘤中的一半以上 在參與細胞周期控制的基因中具有異常。通常在CDKN2A中有缺失或成視網(wǎng)膜細胞瘤基因喪 失表達。其它類型的腦瘤包括星形細胞瘤、少突膠質(zhì)瘤、室管膜瘤、成神經(jīng)管細胞瘤、腦脊膜 瘤和神經(jīng)鞘瘤。
[0075] 在很多情況下，并不一定必需將細胞殺死或者誘導細胞經(jīng)歷細胞死亡或"細胞凋 亡"。反之，為了實現(xiàn)有意義的治療，所需要的只是使腫瘤生長減慢至一定程度。其可以是完 全阻斷細胞生長或者實現(xiàn)一些腫瘤退化?？紤]其正常用途時，臨床術(shù)語如"減輕"和"腫瘤負 荷減小"也在構(gòu)思之內(nèi)。
[0076]術(shù)語"治療益處"指與對象疾病(condition)的醫(yī)療治療有關(guān)的促進或增強其好轉(zhuǎn) 的任何事情，其包括初癌(pre-cancer)、癌癥和過度增生性疾病的治療。其非窮盡實例的列 表包括延長對象的壽命任意時間段、疾病的贅生物發(fā)生減少或延遲、過度增殖降低、腫瘤生 長降低、轉(zhuǎn)移延遲、癌細胞或腫瘤細胞增殖速率降低以及由對象疾病引起的對象的疼痛降 低。
[0077] A ·腺病毒治療
[0078] 本領(lǐng)域技術(shù)人員充分知曉如何將腺病毒遞送應用于體內(nèi)和離體情況。對于病毒載 體，一般將制備病毒載體貯存液。根據(jù)病毒種類及可達到的滴度，將如下文所討論的在可藥 用組合物中向患者遞送1至100、10至50、100至1000，或者高達1\10 4、1\105、1\106、1\ 107、1 X 108、1 X 109、1 X 101。、1 X 10n、l X 1012或1 X 1013的感染性顆粒。
[0079] 針對不同的腫瘤類型考慮不同的途徑。當可鑒定離散腫瘤質(zhì)量或?qū)嶓w瘤時，可采 用多種直接、局部和區(qū)域性方法。例如，可用腺病毒直接注射腫瘤?？稍谇谐?或其它治療 之前、期間或之后處理瘤床。在切除或其它治療之后，一般將通過接入腫瘤或術(shù)后殘余腫瘤 部位的導管遞送腺病毒?？衫媚[瘤脈管系統(tǒng)通過注射支持靜脈或動脈來將載體引入腫瘤 中。也可利用較遠端的供血途徑。
[0080] 治療癌癥的方法包括腫瘤的治療以及靠近腫瘤或腫瘤周圍的區(qū)域的治療。在本申 請中，術(shù)語"殘余腫瘤部位"指鄰近腫瘤的區(qū)域。該區(qū)域可包括腫瘤所在的體腔以及鄰近腫 瘤的細胞和組織。
[0081] B.針對患者的施用制劑和途徑
[0082] 當考慮臨床應用時，將必需制備適合預期應用的形式的藥物組合物。一般來說，這 將需要制備基本不含熱原以及可對人或動物有害的其它雜質(zhì)的組合物。
[0083] 本發(fā)明的活性組合物可包括典型的藥物制劑。一般將期望采用合適的鹽和緩沖劑 以使遞送載體穩(wěn)定并允許被靶細胞攝取。本發(fā)明的水性組合物包含有效量的溶解或分散于 可藥用載劑或水性介質(zhì)中的載體:細胞。也可將這樣的組合物稱為接種物。短語"可藥用或 藥理學上可接受的"指當施用于動物或人時不產(chǎn)生有害反應、變應性反應或其它不利反應 的分子實體和組合物。本文中使用的"可藥用載體"包括任何和所有的溶劑、分散介質(zhì)、包被 物(coatings)、抗細菌劑和抗真菌劑、等滲劑和吸收延遲劑等。這些介質(zhì)和藥劑用于藥物活 性物質(zhì)的用途在本領(lǐng)域中是公知的。除非任何常規(guī)介質(zhì)或藥劑與本發(fā)明不相容，否則其在 治療性組合物中的用途均在考慮之內(nèi)。還可向組合物中摻入補充活性成分。
[0084] 根據(jù)本發(fā)明的這些組合物的施用將通過合適的途徑進行，但特別地提及顱內(nèi)/瘤 內(nèi)施用。施用可通過注射或輸注進行，有關(guān)進行顱內(nèi)施用的方法，參見Kruse等（1994)，其特 別地通過引用并入。這樣的組合物通常將作為可藥用組合物施用。
[0085] 治療劑的有效量根據(jù)預期目標(例如消除腫瘤細胞)來確定。術(shù)語"單位劑量"指適 用于對象的物理離散單位，每個單位包含經(jīng)計算與其施用（即，合適途徑和治療方案)聯(lián)合 時產(chǎn)生上述討論的期望響應的預定量的治療性組合物。根據(jù)治療數(shù)量和單位劑量二者施用 的量取決于待治療的對象、對象的狀況以及所期望的保護。治療性組合物的精確量還取決 于醫(yī)師的判斷并且因個體而異?？蓪⒈景l(fā)明的經(jīng)改造病毒直接施用于動物，或者可替選地 施用于細胞，隨后將細胞施用于動物。
[0086] 本文中使用的術(shù)語體外施用指對從動物取出的細胞進行的操作，所述細胞包括但 不限于培養(yǎng)的細胞。術(shù)語離體施用指已對細胞進行體外操作并隨后將其施用于活動物。術(shù) 語體內(nèi)施用包括在動物體內(nèi)對細胞進行的所有操作。在本發(fā)明的某些方面，所述組合物可 體外、離體或體內(nèi)施用。體內(nèi)施用的一個實例包括通過顱內(nèi)施用將本發(fā)明組合物直接向腫 瘤注射以選擇性地殺死腫瘤細胞。
[0087] 特別地考慮將瘤內(nèi)注射或注射到腫瘤脈管系統(tǒng)中用于離散的、實心的、可接近的 腫瘤，包括在外科手術(shù)期間暴露的腫瘤。對于直徑為1.5cm至5cm的腫瘤，注射體積將是lcc 至3cc，優(yōu)選3cc。對于直徑大于5cm的腫瘤，注射體積將是4cc至10cc，優(yōu)選5cc。作為單次劑 量遞送的多次注射包含約0. lml至約0.5ml體積，優(yōu)選0.2ml。有利地，可通過間隔約lcm間距 向腫瘤施用多次注射來與病毒顆粒進行接觸。
[0088] 在手術(shù)介入的情況下，可在術(shù)前使用本發(fā)明以使不宜手術(shù)的腫瘤對象能夠進行切 除?？商孢x地，可在手術(shù)時使用本發(fā)明，和/或者其后使用本發(fā)明以治療殘余疾病或轉(zhuǎn)移性 疾病。例如，可用含有腺病毒的制劑注射或灌注經(jīng)切除的瘤床?？稍谇谐蟪掷m(xù)進行灌 注，例如通過將植入的導管保留在手術(shù)部位。定期的術(shù)后治療也在設想之內(nèi)。
[0089] 適當時，也可應用優(yōu)選經(jīng)由導管插入術(shù)的持續(xù)施用，例如當腫瘤被切除并且處理 瘤床以消除殘余的顯微可見疾病時。在開始治療之后，這樣的持續(xù)灌注可發(fā)生約1-2小時至 約2-6小時、至約6-12小時、至約12-24小時、至約1-2天、至約1-2周或更長的時間段。一般來 說，治療性組合物經(jīng)由持續(xù)灌注的劑量將等同于通過單次或多次注射所提供的劑量，在灌 注發(fā)生的時間段期間進行調(diào)整。
[0090] 治療方案也可進行變化，并且通常根據(jù)腫瘤類型、腫瘤位置、疾病進展以及患者的 健康和年齡。顯然，某些腫瘤類型將需要更積極的治療，而同時，某些患者不能耐受較為繁 重的方案。臨床醫(yī)生將最適宜依據(jù)治療制劑的已知效力和毒性(如果有的話)作出這樣的決 定。
[0091] 可在適當?shù)鼗旌嫌斜砻婊钚詣?例如羥丙基纖維素)的水中制備活性化合物(如游 離堿或可藥用鹽）的溶液劑。還可在甘油、液態(tài)聚乙二醇及其混合物中和在油中制備分散 體。在普通貯存和使用條件下，這些制劑包含防止微生物生長的防腐劑。本發(fā)明的治療性組 合物有利地以作為液體溶液劑或混懸劑形式的可注射組合物施用;還可制備適合在注射前 溶解或混懸于液體中的固體形式。也可對這些制劑進行乳化。用于這樣的目的的典型組合 物包含可藥用載劑。例如，所述組合物可包含l〇mg、25mg、50mg或高至約lOOmg人血清白蛋 白/毫升磷酸鹽緩沖鹽水。其它的可藥用載劑包括水溶液，無毒賦形劑，包括鹽類、防腐劑、 緩沖劑等。非水性溶劑的實例為丙二醇、聚乙二醇、植物油和可注射的有機酯如油酸乙酯。 水性載劑包括水、醇溶液/水性溶液、鹽水溶液、腸胃外載劑例如氯化鈉或林格葡萄糖。靜脈 內(nèi)載劑包括流體和營養(yǎng)補充劑。防腐劑包括抗微生物劑、抗氧化劑、螯合劑和惰性氣體。藥 物組合物中pH和各種組分的精確濃度可根據(jù)公知參數(shù)進行調(diào)整。當所述途徑是外用的時， 所述形式可以是乳膏、軟膏或油膏。
[0092] C.聯(lián)合治療
[0093] 對多種治療有抗性的腫瘤細胞提出了臨床腫瘤學中的一個重大問題。當前癌癥研 究的一個目標是找到提高化學治療和放射治療以及其它常規(guī)癌癥治療之效力的方式。一種 方式是通過將此類傳統(tǒng)治療與溶瘤腺病毒治療組合。治療癌癥的傳統(tǒng)治療可包括去除受感 染器官的全部或一部分、外束照射、氙弧和氬激光凝固、冷凍治療、免疫治療以及化學治療。 對治療的選擇基于多個因素，例如1)多病灶或單病灶疾病，2)腫瘤的部位和尺寸，3)疾病的 轉(zhuǎn)移，4)患者的年齡，或5)組織病理學發(fā)現(xiàn)(The Genetic Basis of Human Cancer，1998)。
[0094] 在本發(fā)明的背景下，考慮可將腺病毒治療與抗癌劑聯(lián)合使用，包括化學治療或放 射治療介入以及放射診斷技術(shù)。將溶瘤病毒治療與免疫治療組合也被證實是有效的。
[0095]使"祀"細胞接觸突變?nèi)芰霾《静⑷芜x地接觸至少一種其它藥劑可殺死細胞、抑制 細胞生長、抑制轉(zhuǎn)移、抑制血管生成或者另外逆轉(zhuǎn)或降低靶細胞的過度增殖表型。這些組合 物將以有效殺死靶細胞或抑制其增殖的組合量提供。這一過程可涉及使細胞與表達構(gòu)建體 和藥劑或因子在相同時間或不同時間接觸?？扇缦聦崿F(xiàn)這一點：使細胞與單一組合物或包 含兩種藥劑的藥理學制劑接觸，或者使細胞與兩種不同的組合物或制劑接觸，其中一種組 合物包含溶瘤腺病毒而另一種組合物包含第二藥劑。
[0096] 還可將溶瘤腺病毒治療與免疫抑制組合。免疫抑制可如W0 96/12406中所述進行， 其通過引用并入本文。免疫抑制劑的實例包括環(huán)孢素、FK506、環(huán)磷酰胺和甲氨蝶呤。
[0097] 可替選地，溶瘤腺病毒治療可發(fā)生在第二藥劑或治療之前或之后，間隔數(shù)分鐘至 數(shù)周。在其中第二藥劑和溶瘤腺病毒單獨施用于細胞的實施方案中，一般將確保各次遞送 時間之間不超過顯著時間段，使得第二藥劑和溶瘤病毒將仍能夠?qū)毎┘佑欣慕M合作 用。在這樣的情況下，考慮使細胞與兩種模式在彼此的約12小時至24小時內(nèi)，并且更優(yōu)選地 在彼此的約6小時至12小時內(nèi)接觸，其中最優(yōu)選僅約12小時的延遲時間。然而，在一些情況 下，當各次施用之間間隔數(shù)天(2、3、4、5、6或7天)至數(shù)周（1、2、3、4、5、6、7或8周）時，可理想 地顯著延長治療時間段。
[0098] 還可設想的是，將期望超過一次地施用溶瘤腺病毒和/或第二藥劑。如下文所例示 的，可采用多種組合，其中溶瘤腺病毒為"A"而另一藥劑為"B" ：
[0099] A/B/A B/A/B B/B/A A/A/B B/A/A A/B/B B/B/B/A B/B/A/B
[0100] A/A/B/B A/B/A/B A/B/B/A B/B/A/A B/A/B/A B/A/A/B B/B/B/A
[0101] A/A/A/B B/A/A/A A/B/A/A A/A/B/A A/B/B/B B/A/B/B B/B/A/B
[0102] 其它組合也在考慮之內(nèi)。此外，為了實現(xiàn)細胞殺傷，將兩種藥劑以有效殺死細胞的 組合量遞送至細胞。
[0103]適用于聯(lián)合治療的藥劑或因子為任何抗血管生成劑和/或具有抗癌活性的任何化 學化合物或治療方法；因此本申請通篇使用的術(shù)語"抗癌劑"指具有抗癌活性的藥劑。這些 化合物或方法包括烷化劑、拓撲異構(gòu)酶I抑制劑、拓撲異構(gòu)酶II抑制劑、RNA/DNA抗代謝物、 DNA抗代謝物、抗有絲分裂劑以及當施用于細胞時誘導DNA損傷的DNA損傷劑。
[0104]化學治療藥物和前藥的實例包括CPT11、替莫唑胺、鉑化合物和前藥例如5-FC。烷 化劑的實例特別包括苯丁酸氮芥、順鉬、環(huán)代松(cyclodisone)、f lurodopan、甲基CCNU、哌 嗪二酮、替羅昔隆。拓撲異構(gòu)酶I抑制劑涵蓋化合物如喜樹堿和喜樹堿衍生物以及嗎啉代多 柔比星。拓撲異構(gòu)酶11抑制劑的實例為多柔比星、啦唑啉吖啶(？7瓜2〇1〇&(31^(1；[116)、米托蒽 醌和柔紅霉素苯腙（別1^(1 &20116)。1?財/0財抗代謝物包括1^-阿拉諾新、5-氟尿嘧啶（5-fluoraouraci 1)、氨基蝶呤衍生物、甲氨蝶呤和吡唑咲喃菌素;而DNA抗代謝物組涵蓋例如 阿糖孢苷(ara-C)、guanozo 1 e、羥基脲、硫代噪呤。典型的抗有絲分裂劑為秋水仙堿、根霉 素、紫杉醇和硫酸長春堿。其它藥劑和因子包括誘導DNA損傷的輻射和波，例如γ -輻射、X-射線、UV-輻射、微波、電子發(fā)射等。多種抗癌劑(也描述為"化學治療劑"）起誘導DNA損傷的 功能，其全部旨在用于本文中公開的聯(lián)合治療方法?？紤]使用的化學治療劑包括例如阿霉 素、博來霉素、5-氟尿嘧啶(5-FU)、依托泊苷(VP-16)、喜樹堿、放線菌素-D、絲裂霉素 C、順鉑 (⑶DP)、鬼臼毒素、維拉帕米以及甚至過氧化氫。本發(fā)明還涵蓋一種或更多種DNA損傷劑的 組合的使用，不管是基于輻射還是實際化合物，例如X-射線與順鉑的使用或者順鉑與依托 泊苷的使用。
[0105]在根據(jù)本發(fā)明對初癌或癌癥的治療中，將使癌前病變(precancerous lesion)的 細胞或腫瘤細胞與除溶瘤腺病毒之外的藥劑接觸。這可通過用輻射(例如X-射線、U