一種由地龍制成的治療瘢痕的藥物及其制法與質(zhì)檢方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及中藥領(lǐng)域，具體涉及一種地龍與鷹爪花根的活性藥物及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 瘢痕是繼發(fā)于創(chuàng)傷后創(chuàng)面修復(fù)過(guò)程中形成的結(jié)構(gòu)異常的纖維化組織，過(guò)度愈合的 創(chuàng)面形成增生性瘢痕或瘢痕疙瘩影響美觀，甚至瘢痕攣縮導(dǎo)致畸形，影響機(jī)體的功能。目前 瘢痕的治療方法主要有藥物、壓迫、放射、激光以及外科手術(shù)等治療方法，但尚無(wú)一種方法 具有絕對(duì)的權(quán)威性，各種治療方法都在不斷地探索之中。因此，如何調(diào)控瘢痕使其增生至適 當(dāng)?shù)某潭?，成為?dāng)今醫(yī)學(xué)研究的熱點(diǎn)。
[0003] 本發(fā)明藥物是經(jīng)發(fā)明人多年來(lái)精心研制，主要用于治療瘢痕。經(jīng)研究表明，本發(fā)明 藥物對(duì)瘢痕具有較好的治療效果。
[0004] 在本發(fā)明藥物中原料藥的基原如下： 地龍為鉅蚓科環(huán)毛蚓屬動(dòng)物參環(huán)毛蚓和通俗環(huán)毛蚓、威廉環(huán)毛蚓、櫛盲環(huán)毛蚓等的全 體。前一種藥材習(xí)稱"廣地龍"，后三種藥材習(xí)稱"滬地龍"。
[0005] 鷹爪花根為番荔枝科鷹爪花屬植物鷹爪花的根。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種治療瘢痕的藥物。
[0007] 本發(fā)明的另一目的是提供該藥物的制備方法。
[0008] 本發(fā)明還提供了該藥物的質(zhì)量檢測(cè)方法。
[0009] 本發(fā)明還提供了該藥物的制藥用途。
[0010] 本發(fā)明的目的是由以下方式實(shí)現(xiàn)的： 一種治療瘢痕的藥物是由以下重量份的原料制成的：地龍1~2重量份，鷹爪花根1~2 重量份。
[0011] 該藥物優(yōu)選是由以下重量份的原料制成的:地龍1重量份，鷹爪花根2重量份。
[0012] 該藥物優(yōu)選是由以下重量份的原料制成的:地龍2重量份，鷹爪花根1重量份。
[0013] 該藥物優(yōu)選是由以下重量份的原料制成的:地龍1重量份，鷹爪花根1重量份。
[0014] 該藥物可以制備成任意外用劑型。優(yōu)選制備成軟膏劑。
[0015] 該藥物軟膏劑的制備方法為：取地龍、鷹爪花根，混合，加入3~15倍量的水浸泡 0.5~2小時(shí)，煎煮0.5~2小時(shí)，煎煮2~4次，每次0.5~2小時(shí)，提取液合并，濾過(guò)，濾液濃縮 后加入1倍量無(wú)水乙醇使沉淀，靜置12~24小時(shí)，濾取上清液，濃縮至相對(duì)密度為1.05~ 1.25,加入對(duì)羥基苯甲酸乙酯，羊毛脂與凡士林，混勻，制成軟膏劑。
[0016] 優(yōu)選采用如下方法制備:取干燥的地龍、鷹爪花根，第一次加11倍量水浸泡1小時(shí)， 煎煮1小時(shí)，第二次加4倍量水煎煮1小時(shí)，合并水煎液，濾過(guò)，濾液濃縮后加入1倍量無(wú)水乙 醇使沉淀，靜置24小時(shí)，濾取上清液，濃縮至相對(duì)密度為1.15,加入對(duì)羥基苯甲酸乙酯，羊毛 脂與凡士林，混勻，制成軟膏劑。
[0017] 該藥物科采用如下方法檢測(cè):采用高效液相色譜法進(jìn)行蚯蚓素和6-羥基嘌呤的含 量測(cè)定： (1) 色譜條件：色譜柱:Phenomenex Luna Cis;流動(dòng)相：比例為10~30:70~90的甲醇-水，其中水中含〇. 02 m〇L/L醋酸鈉、0.2mL/L三乙胺、4mL/L四氫呋喃，用冰醋酸調(diào)pH至6.0; 流速:0·5~2·OmL/min;柱溫：15~20°C ;檢測(cè)波長(zhǎng):200~220nm;進(jìn)樣量:5~20yL; (2) 對(duì)照品溶液制備:取6-羥基嘌呤對(duì)照品、蚯蚓素對(duì)照品適量，用流動(dòng)相溶解，配制成 對(duì)照品混合溶液； (3) 供試品溶液的制備:取本品，置具塞錐形瓶中，精密稱定，加三氯甲烷，超聲提取，加 0.3 m〇L/L~0.9m〇L/L鹽酸回流，置分液漏斗中，分取酸液層，三氯甲烷液再用0.3 m〇L/L~ 0.9m〇L/L鹽酸提取，合并酸水液，酸液加濃氨試液調(diào)pH值為8~10，用三氯甲烷提取，合并三 氯甲烷液，蒸干，殘?jiān)昧鲃?dòng)相溶解，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過(guò)，即得； (4 )測(cè)定：分別精密量取上述供試品溶液、對(duì)照品溶液各5~20yL，注入高效液相色譜 儀，進(jìn)行檢測(cè)。
[0018] 優(yōu)選采用如下方法檢測(cè):采用高效液相色譜法進(jìn)行蚯蚓素和6-羥基嘌呤的含量測(cè) 定： (1) 色譜條件:色譜柱:Phenomenex Luna Cis;流動(dòng)相：比例為20:80的甲醇-水，其中水 中含0.02 moL/L醋酸鈉、0.2mL/L三乙胺、4mlVL四氫呋喃，用冰醋酸調(diào)pH至6.0;流速：ImL/ 11^11;柱溫 ：18°(：;檢測(cè)波長(zhǎng):21〇11111;進(jìn)樣量 :2(^; (2) 對(duì)照品溶液制備:取6-羥基嘌呤對(duì)照品、蚯蚓素對(duì)照品適量，用流動(dòng)相溶解，配制成 對(duì)照品混合溶液，即6-羥基嘌呤(0.0350mg/mL)、蚯蚓素(0.0650mg/mL); (3 )供試品溶液的制備:取本品5g，置IOOmL具塞錐形瓶中，精密稱定，加三氯甲烷50mL， 超聲提取30min，加0.6 m〇L/L鹽酸30mL回流Ih，置分液漏斗中，分取酸液層，三氯甲烷液再 用0.6moL/L鹽酸提取3次，每次25mL，合并酸水液，酸液加濃氨試液調(diào)pH值為9，用三氯甲烷 提取3次，每次30mL，合并三氯甲烷液，蒸干，殘?jiān)昧鲃?dòng)相溶解轉(zhuǎn)移至IOmL量瓶中，加流動(dòng) 相稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μπι微孔濾膜濾過(guò)，即得； (4) 測(cè)定:分別精密量取上述供試品溶液、對(duì)照品溶液各20yL，注入高效液相色譜儀，進(jìn) 行檢測(cè)。
[0019] 所述的藥物可用于制備治療瘢痕、甲癬的藥物或保健品。
[0020] 實(shí)驗(yàn)一:本發(fā)明藥物對(duì)兔耳增生性瘢痕作用的實(shí)驗(yàn)研究 本研究采用兔耳瘢痕模型，觀察并研究了本發(fā)明藥物對(duì)增生性瘢痕組織作用的影響， 為增生性瘢痕防治藥物臨床應(yīng)用提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
[0021] 1材料和方法 1.1材料 本發(fā)明藥物:參照本發(fā)明說(shuō)明書【具體實(shí)施方式】中的實(shí)施例1制備。
[0022] 對(duì)比藥物A:參照本發(fā)明說(shuō)明書【具體實(shí)施方式】中的實(shí)施例2制備。
[0023] 對(duì)比藥物B:參照本發(fā)明說(shuō)明書【具體實(shí)施方式】中的實(shí)施例3制備。
[0024] TrizolRNA提取試劑、PCR試劑（TIANGEN)，RT試劑盒（Τ0Υ0Β0)，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β? (TGF-m)抗體(武漢博士德有限公司），三步法染色試劑盒和DAB試劑盒(北京中杉金橋生物 技術(shù)有限公司）。
[0025] 1.2 方法 1.2.1動(dòng)物模型的建立 健康成年日本大耳白兔20只，體重1.8~2.5kg，雌雄不論，購(gòu)自黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn) 動(dòng)物中心，分籠飼養(yǎng)。
[0026] 動(dòng)物癒痕模型的制作參照Morris(Morris D E，Wu L，Zhao L L，et al .Acute and chronic animal models for excessive dermal scarring：quantitative[J].Plast Reconstr surg，1997，100:674- 681)方法并加以改良：速眠新臀部肌注(0.2mL/kg)麻醉。 常規(guī)消毒兔耳腹側(cè)面，在每側(cè)的兔耳腹側(cè)中部沿長(zhǎng)軸避開(kāi)血管做4個(gè)邊長(zhǎng)為Icm的正方形切 口，完整切除全層皮膚及軟骨膜，保留軟骨，其間相距l(xiāng)cm，創(chuàng)面用濕鹽水紗布?jí)浩戎寡?、?紗覆蓋，其上用彈力膠帶固定，每日更換敷料1次，直至其痊愈后形成瘢痕增生塊。
[0027] 1.2.2動(dòng)物分組及處理 20只日本大耳白兔共制備160個(gè)全層皮膚缺損創(chuàng)面，傷后21d創(chuàng)面均上皮化，局部涂抹 本發(fā)明藥物、對(duì)比藥物A、對(duì)比藥物B。
[0028] 造有瘢痕的兔子隨機(jī)分為5組，其中實(shí)驗(yàn)治療組3組:本發(fā)明藥物治療組:給予本發(fā) 明藥物治療、對(duì)比藥物A治療組:給予對(duì)比藥物A治療、對(duì)比藥物B治療組:給予對(duì)比藥物B治 療，另外兩組分別為：陽(yáng)性對(duì)照組:相同容積的生理鹽水對(duì)照組、陰性對(duì)照組:未處理的瘢痕 組，各組4只兔子(32個(gè)瘢痕），均每天涂抹1次，用藥11天后（即術(shù)后32d)取材、取每組瘢痕數(shù) 的一半;取材后繼續(xù)涂抹剩余的瘢痕，均每天涂抹1次，用藥11