0178] 然后在后處理過(guò)程中將過(guò)濾的納米顆粒漿熱循環(huán)至高溫。封裝的藥物的小部分 (通常5-10%)在它首次暴露于25°CW后非常快速地從納米顆粒釋放。因?yàn)樵摤F(xiàn)象，在整個(gè) 后處理過(guò)程中保持較冷的批料易于在遞送或解凍膽存的任何部分中形成游離藥物或藥物 晶體。通過(guò)將在后處理過(guò)程中將納米顆粒漿暴露于高溫，該"松散地封裝的"藥物可W被除 去和W藥物負(fù)載的小下降為代價(jià)改善產(chǎn)品穩(wěn)定性。表D總結(jié)了 25°C處理的2個(gè)實(shí)施例。其它 實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證實(shí)，所述產(chǎn)物在~2-4個(gè)滲濾體積W后將它暴露于25°C是足夠穩(wěn)定的，沒(méi)有損失 大部分封裝的藥物。使用5個(gè)滲濾體積作為25°C處理之前的冷處理的量。
[0179] 表D:
[0181] i25°C后處理子批在至少5個(gè)滲濾體積W后暴露于25°C不同的時(shí)間段。報(bào)告了范 圍，因?yàn)榇嬖诙鄠€(gè)25°C暴露子批。
[0182] 2穩(wěn)定性數(shù)據(jù)代表了在漿中形成晶體(通過(guò)顯微術(shù)可見(jiàn))之前在i〇-5〇mg/ml納米顆 粒濃度保持在25°C的終產(chǎn)物的時(shí)間
[0183] 3體外爆發(fā)代表了在第一時(shí)間點(diǎn)(基本上立即）釋放的藥物
[0184] 過(guò)濾過(guò)程W后，使納米顆粒懸浮液穿過(guò)滅菌級(jí)過(guò)濾器(0.2皿絕對(duì)）。使用預(yù)過(guò)濾器 保護(hù)滅菌級(jí)過(guò)濾器，W便使用對(duì)于該過(guò)程而言合理的過(guò)濾面積/時(shí)間。將值總結(jié)在表E中。
[0185] 表E:
[0187] 所述過(guò)濾串是化tel Alsop Micromedia化深度過(guò)濾器M953P膜（0.2皿標(biāo)稱）；具 有Seitz 邸SP深度過(guò)濾器介質(zhì)的化 11 SUPRAcap(0.1-0.3wii標(biāo)稱）；化11 Life Sciences Supor邸V 0.65/0.2微米滅菌級(jí)陽(yáng)S過(guò)濾器。
[0188]可W使用0.2m2的過(guò)濾表面積/千克納米顆粒(對(duì)于深度過(guò)濾器)和1.3m2的過(guò)濾表 面積/千克納米顆粒(對(duì)于滅菌級(jí)過(guò)濾器）。 巧189] 實(shí)施例5:納米顆粒懸浮液
[0190] 制備納米顆粒懸浮液（"組合物A")，其是用于靜脈內(nèi)施用的無(wú)菌的、水性的、顆粒 懸浮液，含有物理封裝在由可生物降解的和生物相容的聚合物PLA-PEG和PLA-PEG-CiL組成 的聚合物基質(zhì)中的多西他賽。所述顆粒懸浮于水性薦糖溶液中。
[0191] 所述化A-PEG-化聚合物是組合物A的PSMA祀向組分。所述聚合物是用S，S-2-{3-[1-簇基-5-氨基-戊基]-脈基}-戊二酸(GL)末端官能化的PLA-PEG，所述化是包含通過(guò)脈鍵 偶聯(lián)的k谷氨酸和心賴氨酸的異源二聚體。所述化部分通過(guò)與賴氨酸側(cè)鏈胺的酷胺鍵連接 至陽(yáng)G末端。所述陽(yáng)G段(數(shù)均分子量，5,000Da)通過(guò)醋鍵連接至PLA(20,000化）?；姆肿恿?是319Da。
[0192] 聚化，k丙交醋-b-乙二醇KPLA-PEG)是一種生物相容的二嵌段共聚物，其組分被 批準(zhǔn)在藥物產(chǎn)品和醫(yī)療裝置中用于人用途。PLA-PEG的式是冊(cè)(C3H4〇2)y-(C2H4〇)zC出。PLA的 數(shù)均分子量是16 ,OOODa,PEG的數(shù)均分子量是5 ,OOODa,且化A-PEG的數(shù)均分子量是21， OOODa。
[0193] 在組合物A的制備中使用的組分W字母順序呈現(xiàn)在表F中，且如在實(shí)施例4中所述 執(zhí)行制備。
[0194] 表F.
[0196] a用于配制藥物產(chǎn)品的PLA-陽(yáng)G-化的量是2.5mol %的PLA-陽(yáng)G和PLA-陽(yáng)G-GL。
[0197] 具有納米顆粒的最終組合物(組合物A)呈現(xiàn)在表G中。將納米顆粒包裝在30-mL透 明玻璃管形瓶中，所述管形瓶含有IOmU 11.4g)多西他賽濃度為5mg/mL的懸浮液。
[019引表G-組合物A.
[0199]
巧200] 實(shí)施例6:通過(guò)C電位確定表面電荷
[0201]使用稀鹽溶液（ImM KCl或化Cl)作為分散劑，測(cè)量實(shí)施例5的納米顆粒懸浮液的C 電位。在具有35mW固態(tài)激光器(在66化m)的化OO化aven ZetaPALs儀器上在25°C進(jìn)行測(cè)量。 軟件(ZetaPALs 2.5版)使用Smoluchowski模型來(lái)計(jì)算C電位(Hosokawa等人,2007)。結(jié)果表 明，公開(kāi)的納米顆粒的表面電荷是弱陰性的，具有大約-10至-15mV的C電位。用0-10%PLA-PEG-化配制的顆粒都表現(xiàn)出在-10至-15mV之間的C電位，從而指示在組合物A的納米顆粒中 使用的低水平的GL祀向配體的存在沒(méi)有強(qiáng)烈地影響表面電荷。 巧202] 實(shí)施例7:通過(guò)Ih NMR光譜法進(jìn)行納米顆粒表面化分析
[0203]使用Ih NMR光譜法評(píng)價(jià)化配體在實(shí)施例5的顆粒的顆粒表面處的存在?；瘽舛冉?近常規(guī)NMR方法的檢測(cè)限。為了提高用于觀察表面配體的方法的靈敏度，使用600-MHz波譜 儀獲取醒R譜。如下制備樣品：使用離屯、過(guò)濾用化0交換顆粒膽存溶液(30%的薦糖在水中的 溶液），并將懸浮液濃縮至lOOmg/mL的顆粒濃度。由于它們與化的相關(guān)峰相比明顯更大的尺 寸，使用預(yù)飽和技術(shù)抑制來(lái)自陽(yáng)G和殘余出O的信號(hào)。圖4顯示了實(shí)施例6的組合物A納米顆粒 W及由PLA-PEG和多西他賽組成、但是不含PLA-陽(yáng)G-化的組合物A-樣納米顆粒的波譜。指示 了分配給化配體質(zhì)子的較好解析的共振。配體-相關(guān)的共振的檢測(cè)表明，化配體存在于顆粒 表面上。 巧204] 實(shí)施例8:每3周1次(Q3W)定量施用
[020引使用實(shí)施例5的納米顆粒懸浮液進(jìn)行了標(biāo)簽公開(kāi)、安全性、藥代動(dòng)力學(xué)和藥效動(dòng)力 學(xué)劑量遞增研究。通過(guò)靜脈內(nèi)（IV)輸注將納米顆粒施用給具有晚期或轉(zhuǎn)移性癌癥的患者。 該研究評(píng)估當(dāng)在21-天計(jì)劃的第1天每3周1次(Q3W)通過(guò)靜脈內(nèi)施用時(shí)所述組合物的劑量限 制毒性(DLT)和最大耐受劑量(MTD)。該研究還試圖表征按照每3周1次計(jì)劃在靜脈內(nèi)輸注W 后組合物A的藥代動(dòng)力學(xué)，W使用實(shí)體瘤中的應(yīng)答評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)（Response Evaluation 化iteria in Solid Tumors,RECIST 1.1版)成像評(píng)價(jià)來(lái)評(píng)估化合物A的抗腫瘤活性的初步 證據(jù)，并評(píng)估血清腫瘤標(biāo)志物的變化，所述血清腫瘤標(biāo)志物包括PSA、CA 125、CA 15-3和CA 27.29或CA 19-9。
[0206]將患者招募進(jìn)劑量組群W在21-天計(jì)劃的第1天(每3周1次)接受組合物A的靜脈內(nèi) 劑量(如在實(shí)施例5中）。向下一個(gè)劑量水平的升高依賴于在施用給每個(gè)組群內(nèi)的患者的第 一個(gè)周期中觀察到的化T的發(fā)生率。升高劑量，直到達(dá)到MTD^w。
[0207]每個(gè)患者在周期I的第I天接受一劑組合物A。將周期定義為21天。在每個(gè)另外周期 的第1天用組合物A再次治療患者，直到他們由于醫(yī)學(xué)觀察結(jié)果或管理考慮而中斷研究。用 皮質(zhì)類固醇和抗組胺藥預(yù)治療患者。
[020引從3.5mg/m2(基于多西他賽的量)開(kāi)始升高劑量，直到達(dá)到MTD胃。將MTD定義為不 滿足化T的定義的最高劑量水平。將化T劑量水平定義為在該劑量組的最多6位患者內(nèi)的兩 位或更多位患者中經(jīng)歷化T時(shí)的最低劑量水平。
[0209] 繼續(xù)每個(gè)劑量水平1位患者的加速升高，直到患者在他或她的第一治療周期中具 有> 2級(jí)毒性。除非含2級(jí)毒性與疾病進(jìn)展明顯相關(guān)，否則終止加速階段，并開(kāi)始非加速階 段。在觸發(fā)向非加速設(shè)計(jì)轉(zhuǎn)換的劑量和在每個(gè)后續(xù)劑量水平，獲得最少3位可評(píng)價(jià)的患者。 在加速階段中，在下一個(gè)較高劑量水平?jīng)]有招募患者，直到將在當(dāng)前較低劑量水平的患者 觀察至少21天(結(jié)束周期1)。
[0210] 在非加速階段中，如果3位患者中的1位具有化T，將該組群擴(kuò)大至最多6位患者。如 果6位患者中的僅1位具有化T，繼續(xù)劑量遞增。如果2位患者具有化T，停止劑量遞增。認(rèn)為在 6位患者中的2位具有DLT時(shí)的劑量水平比MTD高至少1個(gè)劑量水平。然后通過(guò)治療至多6位患 者來(lái)更充分地評(píng)價(jià)下一個(gè)較低劑量。如果2位或更多患者在該較低劑量水平具有化T，繼續(xù) 不增加(de-escalation),直到鑒別出運(yùn)樣的劑量水平:在此水平，在該劑量水平招募的最 初6位患者中沒(méi)有或僅1位具有化T。運(yùn)被鑒別為MTD胃。鑒別出MTD(在該劑量水平招募的最 初6位患者中沒(méi)有或僅1位具有化T時(shí)的劑量水平）W后，招募共計(jì)12位患者（即另外6位患 者）W進(jìn)一步表征不利事件和藥代動(dòng)力學(xué)。
[0211 ]下述表H解釋了在每3周1次試驗(yàn)中使用的劑量遞增方案。
[0引2] 表H.
[0214]劑量組接受在21-天計(jì)劃的第1天(每3周1次)施用的遞增劑量的組合物經(jīng)歷60分 鐘的靜脈內(nèi)輸注(在0.9%氯化鋼溶液或5%葡萄糖溶液中）?；颊呓邮苡闷べ|(zhì)類固醇和抗組 胺藥的標(biāo)準(zhǔn)預(yù)先用藥。如通過(guò)在21-天計(jì)劃的第1天(Q3W)每3周1次靜脈內(nèi)施用的，確定MTD 為60mg/m2。 巧引引 實(shí)施例9:每周1次(QlW)定量施用
[0216]進(jìn)行了實(shí)施例5的懸浮液的標(biāo)簽公開(kāi)、安全性、藥代動(dòng)力學(xué)和藥效動(dòng)力學(xué)劑量遞增 研究。通過(guò)靜脈內(nèi)（IV)輸注將組合物A中的納米顆粒施用給具有晚期或轉(zhuǎn)移性癌癥的患者。 進(jìn)行該研究W評(píng)估當(dāng)在28-天計(jì)劃的第1、8和15天每周1次(QlW)通過(guò)靜脈內(nèi)施用時(shí)化合物A 的劑量限制毒性(DLT)和最大耐受劑量(MTD)。該研究還試圖表征按照每周1次計(jì)劃在靜脈 內(nèi)輸注W后所述組合物的藥代動(dòng)力學(xué)，W使用實(shí)體瘤中的應(yīng)答評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)（Response Evaluation Criteria in Solid Tumors,RECIST 1.1版)成像評(píng)價(jià)來(lái)評(píng)估所述組合物的抗 腫瘤活性的初步證據(jù)，并評(píng)估血清腫瘤標(biāo)志物的變化，所述血清腫瘤標(biāo)志物包括PSA、CA 125、CA 15-3和CA 27.29或CA 19-9。
[0217] 每個(gè)患者在周期1的第1、8和15天接受一劑組合物A。將周期定義為28天。在每個(gè)另 外周期的第1、8和15天用組合物A治療患者，直到他們中斷研究。用皮質(zhì)類固醇和抗組胺藥 預(yù)治療患者。
[0218] 在試驗(yàn)中使用的開(kāi)始劑量是15mg/m2，其對(duì)應(yīng)于在28-天時(shí)段內(nèi)45mg/m2的累積劑 量。然后給患者施用后續(xù)逐步增加至25、30、35和40-mg/m 2劑量水平。
[0219] 在每種劑量水平治療最少3位患者。如果3位患者中的1位具有化T，將該組群擴(kuò)大 至最多6位患者。如果6位患者中的僅1位具有化T，繼續(xù)劑量遞增。如果2位患者具有化T，停 止劑量遞增。認(rèn)為在6位患者中的2位具有DLT時(shí)的劑量水平比MTD高至少1個(gè)劑量水平。然后 通過(guò)治療至多6位患者來(lái)更充分地評(píng)價(jià)下一個(gè)較低劑量。如果2位或更多患者在該較低劑量 水平具有化T，繼續(xù)不增加(de-escalation),直到鑒別出運(yùn)樣的劑量水平:在此水平，在該 劑量水平招募的最初6位患者中沒(méi)有或僅1位具有化T。運(yùn)被鑒別為MTDWw。
[0220] 下述表1解釋了在QlW試驗(yàn)中使用的劑量遞增方案。
[0221] 表1.
[0223] 劑量組接受在28-天計(jì)劃的第1、8和15天每周一次地(QlW)施用的遞增劑量的組合 物A經(jīng)歷60分鐘的靜脈內(nèi)輸注(在250mL 0.9%氯化鋼溶液或5%葡萄糖溶液中）?；颊呓邮?W下標(biāo)準(zhǔn)預(yù)先用藥:在輸注前1小時(shí)口服施用Smg地塞米松，或在輸注前靜脈內(nèi)施用Smg地塞 米松。表J提供了關(guān)于患者群體的信息，且表K提供了關(guān)于患者的具體癌癥的信息(PD:進(jìn)行 性疾病;SD:穩(wěn)定疾?。?br>[0224] 表J.
[0226