5-(4-羥基-3-甲氧基苯亞甲基)羅丹寧在制備預(yù)防或治療腦神經(jīng)組織損傷的藥物中的用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及5-(4-羥基-3-甲氧基苯亞甲基）羅丹寧或其藥學(xué)上可接受的鹽在制 備預(yù)防或治療腦神經(jīng)組織損傷的藥物中的用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 腦卒中是目前全球第二大致死性疾病且致殘率最高。卒中病人至少有60% 由于腦損傷嚴(yán)重而死亡，只有3-10 %的病人能最終恢復(fù)正常生活。腦卒中主要包 括缺血性腦卒中和出血性腦卒中，其中缺血性腦卒中是最普遍的一種，發(fā)病率約占 67.3-80.5%。缺血性腦卒中通常是由于入腦動脈血流被阻斷，腦內(nèi)氧氣和葡萄糖供 應(yīng)減少，觸發(fā)細(xì)胞內(nèi)一系列復(fù)雜的級聯(lián)反應(yīng)進(jìn)而導(dǎo)致腦內(nèi)細(xì)胞死亡及神經(jīng)功能障礙， 參見 Friedlander RM. Apoptosis and caspases in neurodegenerative diseases. N Engl J Med, 2003, 348 (14) :1365-1375。急性缺血性卒中治療的關(guān)鍵在于盡早開通 阻塞血管、挽救缺血半暗帶，目前被證實有效的治療方法是靜脈注射重組組織型纖溶 酶原激活劑溶檢，參見 Xu AD, Wang YJ, Wang DZ,等人 Consensus statement on the use of intravenous recombinant tissue plasminogen activator to treat acute ischemic stroke by the Chinese Stroke Therapy Expert Panel. CNS Neurosci Ther，2013, 19(8) :543-548 ;Jauch EC，Saver JL，Adams HP，等人 Guidelines for the early management of patients with acute ischemic stroke:a guideline for healthcare professionals from the American Heart Association/American Stroke Association. Stroke，2013, 44(3) :870-947;和 Levy EI，Siddiqui AH，Crumlish A，等 A First Food and Drug Administration-approved prospective trial of primary intracranial stenting for acute stroke:SARIS(stent-assisted recanalization in acute ischemic stroke). Stroke，2009, 40 (11) : 3552-3556。但是靜脈溶檢療法帶來的再 灌注損傷的問題已越來越受到重視。臨床現(xiàn)有抗腦缺血再灌注損傷的神經(jīng)保護(hù)藥物種類較 少，亟需尋找更為有效的治療藥物。
[0003] 腦缺血再灌注損傷使腦內(nèi)神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)線粒體膜通透性改變及線粒體通透性轉(zhuǎn) 換孔的開放，細(xì)胞色素 C的釋放等等進(jìn)而導(dǎo)致線粒體功能障礙。線粒體功能障礙是多種神經(jīng) 性疾病共同的病理生理基礎(chǔ)，腦內(nèi)神經(jīng)元的正常生理活動尤其依賴于線粒體來產(chǎn)生ATP作 為能量供體，參見 Court，R A. and Coleman，Μ. P. Mitochondria as a central sensor for axonal degenerative stimuli. Trends in neurosciences，2012, 35 (6) : 364_372〇 越來越 多的研究表明腦卒中里神經(jīng)元細(xì)胞的死亡與線粒體功能障礙有關(guān)，Liu W，Tian F，Kurata T，等人 Dynamic changes of mitochondrial fusion and fission proteins after transient cerebral ischemia in mice. J Neurosci Res，2012, 90 (6) : 1183-1189 ;以及 Besancon E，Guo Sj Lok Jj 等人 Beyond NMDA and AMPA glutamate receptors: emerging mechanisms for ionic imbalance and cell death in stroke.Trends Pharmacol Sci，2008, 29(5) :268-275。也是腦缺血再灌注損傷的一個重要機制。線粒體質(zhì)量及數(shù)量上 的動態(tài)變化對維持細(xì)胞內(nèi)正常的能量平衡至關(guān)重要。細(xì)胞內(nèi)的受損線粒體不僅無法產(chǎn)生能 量，還會生成活性氧自由基（ROS)。一方面，能量需求旺盛的神經(jīng)元因 ATP的生成不足無法 完成正常的生理活動，另一方面因受損線粒體的堆積導(dǎo)致氧化損傷，這種雙重打擊構(gòu)成了 多種神經(jīng)疾病病理過程中的共同環(huán)節(jié)。因此調(diào)控并維持線粒體的正常功能對神經(jīng)系統(tǒng)功能 的執(zhí)行至關(guān)重要。
[0004] 線粒體自噬（Mitophagy)是細(xì)胞控制線粒體功能的一種重要途徑，在維持正常細(xì) 胞表型及功能方面發(fā)揮著關(guān)鍵性作用。神經(jīng)元自我清除受損線粒體的功能缺失則會誘導(dǎo)線 粒體依賴型凋亡。越來越多的研究者將聚焦于靶向調(diào)節(jié)線粒體自噬從而減少缺血再灌注損 傷。通過誘導(dǎo)線粒體自噬進(jìn)而選擇性的將細(xì)胞內(nèi)受損的線粒體及時清除，防止受損線粒體 的堆積使細(xì)胞免于死亡。因此激活線粒體自噬，靶向清除受損線粒體有望成為腦缺血疾病 的一種新的治療策略。
[0005] PINKl/Parkin通路的激活在清除受損線粒體過程中發(fā)揮重要作用。一般情況下， PINKl可以被表達(dá)并轉(zhuǎn)運到所有的線粒體上，但健康線粒體上的蛋白水解酶會將其降解，而 受損的線粒體由于蛋白水解酶活性被抑制，PINKl持續(xù)累積，并募集Parkin選擇性轉(zhuǎn)位到 損傷的線粒體上進(jìn)而誘導(dǎo)線粒體自噬的發(fā)生。Parkin參與的泛素蛋白酶體系統(tǒng)對于體內(nèi) 毒素和代謝物的清除有著重要意義，正常表達(dá)水平的Parkin對神經(jīng)元內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)的維持 起著重要作用，尤其對線粒體運動和功能的發(fā)揮是關(guān)鍵。PINKl/Parkin通路還可以通過下 調(diào)MFN的蛋白水平來促進(jìn)線粒體分裂和（或）抑制線粒體融合，共同協(xié)調(diào)線粒體分裂-融 合過程，而這種動態(tài)平衡對于線粒體形態(tài)的的維持及完整性至關(guān)重要。
[0006] 另外線粒體融合分裂過程的控制調(diào)節(jié)是保證能量生成的基礎(chǔ)，在缺血性腦血管病 的發(fā)病機制中具有重要作用。線粒體的動態(tài)變化過程受多個線粒體融合分裂相關(guān)蛋白精確 調(diào)控。其中Drpl是介導(dǎo)線粒體分裂過程的重要一員，其存在于胞漿中由Fisl招募至線粒 體外膜，形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)逐漸收縮致使線粒體分裂。細(xì)胞微環(huán)境的變化可以影響的表達(dá)進(jìn)而 改變線粒體的分裂狀態(tài)。而Opal主要影響線粒體內(nèi)膜的融合過程。但有趣的是，不同細(xì)胞 亞環(huán)境的改變可以導(dǎo)致Opal的不同變化，從而在線粒體融合分裂過程中起不同作用。并且 線粒體蛋白酶也可以靶向作用于促使線粒體分裂。二者的失衡標(biāo)志著線粒體正常形態(tài)的破 壞，線粒體分裂融合失衡。通過檢測Drpl及Opal在腦缺血再灌注后的表達(dá)變化觀察線粒 體的動力學(xué)平衡狀態(tài)。
[0007] LC3-I轉(zhuǎn)化為LC3-II是自噬小體形成的關(guān)鍵，其轉(zhuǎn)化程度是細(xì)胞自噬程度的重要 標(biāo)志。Beclinl是哺乳動物細(xì)胞自噬所必須的組分，與LC3相互作用激活自噬，兩者均為細(xì) 胞自噬標(biāo)志性蛋白。有研究表明PI3K/Akt/mT0R通路是調(diào)節(jié)細(xì)胞自噬過程的重要機制，TOR 激酶通過兩種途徑抑制細(xì)胞自噬：其一是TOR通過調(diào)控其下游蛋白如p70S6K和eIF-4E等 一系列級聯(lián)反應(yīng)調(diào)控細(xì)胞相應(yīng)蛋白的轉(zhuǎn)錄與翻譯進(jìn)而抑制自·;另外作為自相關(guān)蛋白， 其可以直接或間接影響自噬小體的形成。通過檢測mTOR及其下游相關(guān)蛋白的表達(dá)可以推 測是否以mTOR依賴或非依賴方式調(diào)控細(xì)胞自噬。
[0008] 我們前期的實驗表明，5-(4-羥基-3-甲氧基苯亞甲基）羅丹寧（RDl)能顯著對抗 MPTP，MPTP-DSP-4雙損傷以及6-OHDA誘導(dǎo)的多巴胺能神經(jīng)元損傷毒性，具有良好的抗帕金 森病作用，參見中國專利ZL20111006053. 8,其內(nèi)容全部引入作為參考。
[0009] 5-(4-羥基-3-甲氧基苯亞甲基）羅丹寧具有如下化學(xué)結(jié)構(gòu)：
[0011] 對RDl機制的深入研究其顯示，RDl可以明顯改善MPP+損傷導(dǎo)致的Neur〇-2a線 粒體膜電位的下降；此外RDl顯著對抗腹腔注射MPTP誘導(dǎo)的中腦區(qū)線粒體軸突轉(zhuǎn)運相關(guān)蛋 白Parkin以及線粒體外膜蛋白Miro2水平的改變；RDl還可以有效抑制MPTP誘導(dǎo)的紋狀體 區(qū)線粒體蛋白中Parkin表達(dá)的變化，參見發(fā)明人之前發(fā)表的文章 Ren Zhili, Yang Nan, Ji Chao, Ji Zheng, Tao Wang, Yanyong Liu, Pingping Zuo. Neuroprotective effects of5-( 4-hydroxy-3-dimethoxybenzylidene)-thiazolidinone in MPTP induced Parkinsonism model in mice. Neuropharmacology，2015,93:209-218。
[0012] 在本發(fā)明中，申請人意想不到地發(fā)現(xiàn)RDl對腦缺血再灌注模型中所致的線粒體功 能障礙有改善作用，進(jìn)而發(fā)揮抗腦缺血疾病的神經(jīng)保護(hù)作用。其作用機制可能是通過RDl 顯著改善MPTP誘導(dǎo)ro模型中所致的線粒體功能障礙實現(xiàn)的。本發(fā)明采用大鼠中動脈梗阻 造成急性腦缺血再灌注模型，驗證RDl 了抗腦缺血再灌注損傷作用。
[0013] 現(xiàn)有技術(shù)中未見報道RDl抗腦缺血有療效。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)這種化合物對是具有很 強的抗缺血效應(yīng)，對神經(jīng)具有很強的保護(hù)作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0014] 本發(fā)明提供5-(4-羥基-3-甲氧基苯亞甲基）羅丹寧或其藥學(xué)上可接受的鹽在制 備預(yù)防或治療腦神經(jīng)組織損傷的藥物中的用途。具體而言，本發(fā)明涉及治療腦神經(jīng)組織損 傷的方法，所述方法包括向有需要的受試者施用有效劑量的5-(4-羥基-3-甲氧基苯亞甲 基）羅丹寧或其藥學(xué)上可接受的鹽。
[0015] 根據(jù)本發(fā)明的5-(4-羥基-3-甲氧基苯亞甲基）羅丹寧或其藥學(xué)上可接受的鹽是 片劑、丸劑、膜劑、滴丸、合劑、膠囊劑、顆粒劑或者注射劑。
[0016] 進(jìn)一步地，根據(jù)本發(fā)明的5-(4-羥基-3-甲氧基苯亞甲基）羅丹寧或其藥學(xué)上可 接受的鹽的藥用劑量為5mg/kg體重-25mg/kg體重。
[0017] 進(jìn)一步地，根據(jù)本發(fā)明的5-(4-羥基-3-甲氧基苯亞甲基）羅丹寧藥學(xué)上可接受 的鹽為鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硝酸鹽、硫酸鹽、偏磷酸鹽、硫酸氫鹽，亞硫酸鹽、磷酸鹽、磷酸氫 鹽、磷酸二氫鹽、焦磷