人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子注射液及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子的注射液。
【背景技術(shù)】
[0002] 干細(xì)胞生長(zhǎng)因子（SCGF)是由骨髓微環(huán)境中的基質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生的一種酸性糖蛋白，它 是一種重要的造血細(xì)胞因子，主要作用于早期的造血干細(xì)胞和原始造血祖細(xì)胞，促進(jìn)其增 殖和分化，在維持造血細(xì)胞存活，促進(jìn)造血細(xì)胞增殖和分化，調(diào)控各系造血細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育 中起著重要作用。隨著研宄的深入，人們發(fā)現(xiàn)人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子具有多種生物學(xué)功能，可廣 泛應(yīng)用于生物醫(yī)藥、精細(xì)化工等諸多領(lǐng)域。特別是近年來(lái)干細(xì)胞迅猛發(fā)展，利用干細(xì)胞技術(shù) 進(jìn)行疾病治療具有很大的發(fā)展前景，尤其是對(duì)于血液病的治療具有極大的意義。骨髓移植 和造血干細(xì)胞移植已經(jīng)成為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中治療血液病的一種主要手段，但是還存在著血液配 型困難、干細(xì)胞數(shù)量少，擴(kuò)增困難等諸多問(wèn)題。如果能從患者或與其配型相同的人的其他組 織和器官中分離出成體干細(xì)胞，在體外實(shí)現(xiàn)造血細(xì)胞的定向分化，快速擴(kuò)增，這將對(duì)與造血 干細(xì)胞移植具有重大的意義。但天然的可溶型SCF在人體和動(dòng)物體內(nèi)含量甚微，在血液中 的濃度為3. 3ng/ml，故不可能從天然組織中分離純化足夠量樣品，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室和臨床應(yīng)用 研宄。蛋白與多肽在很多治療方面都是理想的藥物，然而這些有益的效用最終可能受限于 傳遞蛋白的困難。在口服和透皮給藥中，其生物利用度通常很低，并且半衰期短。將蛋白和 多肽類藥物制備成緩釋制劑可以減少使用頻率，提高患者的順應(yīng)性。目前國(guó)際上注射緩釋 系統(tǒng)主要有微球、脂質(zhì)體和植入劑。對(duì)蛋白和多肽類藥物，由生物可降解材料制備的微球 是相當(dāng)理想的載藥系統(tǒng)。
[0003] 對(duì)于蛋白類藥物而言，復(fù)雜的工藝、劇烈的條件都可能導(dǎo)致蛋白活性的喪失。目前 市場(chǎng)未見(jiàn)具有SEQ ID NO. 1所示的核苷酸序列的注射液。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明目的是提供一種具有SEQ ID NO. 1所示的核苷酸序列的注射液，申請(qǐng)人意 外的發(fā)現(xiàn)，當(dāng)采用特定種類和比例的PEG和SEQ ID NO. 1所示的核苷酸序列得到的注射液 具有良好的穩(wěn)定性，具有SEQ ID NO. 1所示的核苷酸序列（該序列是申請(qǐng)人于2012年1月 17日申請(qǐng)的、申請(qǐng)?zhí)枮?01210016142. 8的發(fā)明專利中請(qǐng)求保護(hù)的序列，在此將該專利的內(nèi) 容全部引入本申請(qǐng)中，具體的制備和保藏不再重復(fù)敘述)。
[0005] -種SEQ ID NO. 1所示的核苷酸序列注射液，包括SEQ ID NO. 1所示的核苷酸序 列、人血清蛋白、檸檬酸鹽緩沖液、氯化鈉和PEG，其pH至4. 5-6. 5。
[0006] 其中，所述 PEG 為 PEG400、600、800，優(yōu)選PEG600，用量為10-20%(w/v)，所述SEQ ID NO. 1所示的核苷酸序列為1-3 mol/L，檸檬酸鹽含量維持pH至4. 5-6. 5,優(yōu)選5. 5,氯化 鈉的用量為維持離子強(qiáng)度在〇. 1-0. 3 mol/L，人血清蛋白（w/v)在3-5%。
[0007] 本發(fā)明的注射液可以按下述方法制備： (1)將注射用水用檸檬酸鹽調(diào)節(jié)PH至4. 5-6. 5,加入人血清蛋白，攪拌； (2) 將SEQ ID NO. 1所示的核苷酸序列步驟1的溶液中，加入PEG，攪拌混合均勻， 2_5°C放置10小時(shí)，加入氯化鈉，使溶液離子強(qiáng)度在0. 1-0. 3 mol/L ; (3) 再用檸檬酸鹽調(diào)節(jié)pH至4. 5-6. 5,得到注射液。
[0008] 本發(fā)明涉及的人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子注射液具有以下有益效果： (1) 提高生物利用度，也可在維持同等藥效時(shí)降低給藥量，從而減少服用藥物給患者 帶來(lái)的副作用； (2) 產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，適合大規(guī)模生產(chǎn)應(yīng)用。
【具體實(shí)施方式】
[0009] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】作進(jìn)一步描述，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和特點(diǎn)將 會(huì)隨著描述而更為清楚。但這些實(shí)施例僅是范例性的，并不對(duì)本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何限制。 本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解的是，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可以對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案的 細(xì)節(jié)和形式進(jìn)行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
[0010] 實(shí)施例1 取1000 mL注射用水，用檸檬酸鹽調(diào)節(jié)pH至5. 5,加入人血清蛋白40g，攪拌，得到溶液， 然后取20mgSEQ ID NO. 1所示的核苷酸序列加入到溶液中，加入PEG400至15%(w/v)，攪拌 混合均勻，3°C放置10小時(shí)，加入氯化鈉，使溶液離子強(qiáng)度在0. 2 mol/L，再用檸檬酸鹽調(diào)節(jié) pH至5. 5,得到注射液。
[0011] 實(shí)施例2 取1000 mL注射用水，用檸檬酸鹽調(diào)節(jié)pH至5. 5,加入人血清蛋白40g，攪拌，得到溶液， 然后取20mgSEQ ID NO. 1所示的核苷酸序列加入到溶液中，加入PEG600至15%(w/v)，攪拌 混合均勻，3°C放置10小時(shí)，加入氯化鈉，使溶液離子強(qiáng)度在0. 2 mol/L，再用檸檬酸鹽調(diào)節(jié) pH至5. 5,得到注射液。
[0012] 實(shí)施例3 取1000 mL注射用水，用檸檬酸鹽調(diào)節(jié)pH至5. 5,加入人血清蛋白40g，攪拌，得到溶液， 然后取20mgSEQ ID NO. 1所示的核苷酸序列加入到溶液中，加入PEG800至15%(w/v)，攪拌 混合均勻，3°C放置10小時(shí)，加入氯化鈉，使溶液離子強(qiáng)度在0. 2 mol/L，再用檸檬酸鹽調(diào)節(jié) pH至5. 5,得到注射液。
[0013] 實(shí)施例4 取1000 mL注射用水，用檸檬酸鹽調(diào)節(jié)pH至5. 5,加入人血清蛋白40g，攪拌，得到溶液， 然后取20mgSEQ ID NO. 1所示的核苷酸序列加入到溶液中，加入PEG200至15%(w/v)，攪拌 混合均勻，3°C放置10小時(shí)，加入氯化鈉，使溶液離子強(qiáng)度在0. 2 mol/L，再用檸檬酸鹽調(diào)節(jié) pH至5. 5,得到注射液。
[0014] 實(shí)施例5 取1000 mL注射用水，用檸檬酸鹽調(diào)節(jié)pH至5. 5,加入人血清蛋白40g，攪拌，得到溶液， 然后取20mgSEQ ID NO. 1所示的核苷酸序列加入到溶液中，加入PEG2000至15% (w/v)，攪 拌混合均勻，3°C放置10小時(shí)，加入氯化鈉，使溶液離子強(qiáng)度在0. 2 mol/L，再用檸檬酸鹽調(diào) 節(jié)pH至5. 5,得到注射液。
[0015] 實(shí)施例6 取1000 mL注射用水，用檸檬酸鹽調(diào)節(jié)pH至5. 5,加入人血清蛋白40g，攪拌，得到溶液， 然后取20mgSEQ ID NO. 1所示的核苷酸序列加入到溶液中，加入PEG4000至15% (w/v)，攪 拌混合均勻，3°C放置10小時(shí)，加入氯化鈉，使溶液離子強(qiáng)度在0. 2 mol/L，再用檸檬酸鹽調(diào) 節(jié)pH至5. 5,得到注射液。
[0016] 實(shí)施例7實(shí)施例1~6所得注射液的穩(wěn)定性試驗(yàn) 取實(shí)施例1-6的注射液各10等份，每份10 mL，置于離心機(jī)中，分別于37°C下，4000rpm 離心5小時(shí)。觀察并記錄各組樣品出現(xiàn)沉淀的時(shí)間（分鐘)，離心結(jié)束分離沉淀稱量沉淀重 量，沉淀含量以沉淀重量占樣品中SEQ ID NO. 1所示的核苷酸序列含量的百分?jǐn)?shù)表示，沉淀 出現(xiàn)較快或最終沉淀含量較大視為制劑穩(wěn)定性較差，結(jié)果見(jiàn)下表：
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種SEQIDNO. 1所示的核苷酸序列注射液，包括SEQIDNO. 1所示的核苷酸序列、 人血清蛋白、檸檬酸鹽緩沖液、氯化鈉和PEG，注射液pH為4. 5-6. 5。2. 如權(quán)利要求1所述的注射液，其特征在于：所述PEG用量為10-20% (w/v)。3. 如權(quán)利要求2所述的注射液，其特征在于：PEG為PEG400、600、800,優(yōu)選PEG600。4. 如權(quán)利要求1所述的注射液，其特征在于：所述SEQIDNO. 1所示的核苷酸序列為 l-3mg/mL〇5. 如權(quán)利要求1所述的注射液，其特征在于：檸檬酸鹽含量維持pH至4. 5-6. 5,優(yōu)選 5. 5〇6. 如權(quán)利要求1所述的注射液，其特征在于：氯化鈉的用量為維持離子強(qiáng)度在0. 1-0. 3 mol/L〇7. 如權(quán)利要求1所述的注射液，其特征在于：人血清蛋白（w/v)在3-5%。8. -種制備權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的注射液的制備方法，其特征在于： (1)將注射用水用檸檬酸鹽調(diào)節(jié)PH至4. 5-6. 5,加入人血清蛋白，攪拌； (2) 將SEQIDNO. 1所示的核苷酸序列步驟1的溶液中，加入PEG，攪拌混合均勻， 2_5°C放置10小時(shí)，加入氯化鈉，使溶液離子強(qiáng)度在0. 1-0. 3mol/L; (3) 再用檸檬酸鹽調(diào)節(jié)pH至4. 5-6. 5,得到注射液。
【專利摘要】本發(fā)明涉及人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子注射液及其制備方法，該注射液能夠達(dá)到緩釋的技術(shù)效果，減少患者的服藥次數(shù)，提高順應(yīng)性，該注射液可用于制備治療貧血、放化療及骨髓移植術(shù)后造血功能的重建和恢復(fù)、干細(xì)胞體外擴(kuò)增、基因治療藥物以及在促進(jìn)表皮細(xì)胞新陳代謝、修復(fù)衰老和損傷皮膚細(xì)胞、延緩肌膚衰老等化妝品方面的應(yīng)用等。
【IPC分類】A61K48/00, A61K38/19, A61K47/34, A61K47/42, A61P7/00
【公開(kāi)號(hào)】CN104922698
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510298631
【發(fā)明人】王一飛, 王巧利, 任哲
【申請(qǐng)人】廣州暨南生物醫(yī)藥研究開(kāi)發(fā)基地有限公司
【公開(kāi)日】2015年9月23日
【申請(qǐng)日】2015年6月3日