一種桔梗皂甙的提取方法
【專利說明】
[0001]本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種生物酶解技術(shù)與大孔吸附樹脂相結(jié)合的方法提取、純化桔梗皂甙。
【背景技術(shù)】
[0002]桔梗(學(xué)名:Platycodon grandiflorus，英語:Balloon Flower)，別名包揪花、鈴鐺花、僧帽花，桔?？平酃僦参铮嗄晟荼?，葉子卵形或卵狀披針形，花暗藍(lán)色或暗紫白色，可作觀賞花丼；朝鮮族人用作野菜食用；其根可入藥，有止咳祛痰、宣肺、排膿等作用，中醫(yī)常用藥。
[0003]桔梗所含的化學(xué)成分為:根含多種皂甙，迄今已分得18種三萜皂甙，它們是;桔梗阜式(platycodin) A、C、D、D2、D3，去序菜糖基桔梗阜式(deap1platycodin)D、D3，2-0-=乙?；酃Ｔ磉?2-0-acetylplatycodin) D2，3_0_乙?；酃Ｔ磉?3-0-acetylplaty-codin) D2,遠(yuǎn)志阜式(polyglalacin) D、D2，2_0-乙?；h(yuǎn)志阜式(2-0-acetylpolygalacin) D、D2，3_0-乙?；h(yuǎn)志阜 ft (3-0-acetylpolygalacin)D、D2，桔梗式酸-A甲醋(methyl platyconate-A)，2_0_甲基桔梗式酸-A甲醋(methyl-2-O-methyplatyconate-A)，桔梗式酸-A 內(nèi)醋(platyconic acid-A lactone),其中主成分是桔梗皂甙D，桔梗皂甙A又叫做2-0-乙酰基桔梗皂甙D，桔梗皂甙C又叫做3-0-乙?；酃Ｔ磉癉。多種混合皂甙經(jīng)完全水解所產(chǎn)生的皂甙元有:桔梗皂甙元(platycodigenin)，遠(yuǎn)志酸(polygalacic acid)，以及少量的桔梗酸(platycogenic acid)A、B、C ;
皂苷(saponin)別稱:堿皂體、皂素、皂甙、皂角苷或皂草苷?！霸碥铡?一詞由英文名Saponin意譯而來，英文名則源于拉丁語的Sapo，意為肥阜。阜苷(Saponin)是苷元為三釀或螺旋留烷類化合物的一類糖苷，主要分布于陸地高等植物中，也少量存在于海星和海參等海洋生物中。許多中草藥如人參、遠(yuǎn)志、桔梗、甘草和柴胡等的主要有效成分都含有皂苷。有些皂苷還具有抗菌的活性或解熱、鎮(zhèn)靜、抗癌等有價(jià)值的生物活性。
[0004]經(jīng)現(xiàn)代研宄證明，桔梗皂甙具有的藥理作用:1.祛痰與鎮(zhèn)咳作用；2.抑制胃液分泌和抗?jié)冏饔茫?.抗炎作用；4.對(duì)循環(huán)系統(tǒng)的作用；5.其他作用，粗桔梗皂甙有鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛和解熱作用。
[0005]目前，在我國有關(guān)提取桔梗皂甙的工藝文獻(xiàn)和專利很多，其主要是采取溶劑浸提，超聲波提取，這兩種方法制備的桔梗皂甙不僅提取率低，而且純度不高。本發(fā)明采用生物酶解技術(shù)與大孔吸附樹脂相結(jié)合的方法提取、純化桔梗皂甙，可以很好地解決這些問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是為了彌補(bǔ)現(xiàn)有提取桔梗皂甙的技術(shù)不足和缺陷，提供一種操作簡單、提取效率高、所得純度高、污染小的桔梗皂甙的提取方法。
[0007]為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案:
I)將桔梗烘干，粉碎，過20~60目篩； 2)稱取一定量的桔梗粉末加水浸潤，然后加入桔梗粉末重量0.5%-2%的生物酶進(jìn)行酶解處理；
3)在步驟(2)所得物料中加入乙醇水溶液回流提取，得到提取液；
4)將提取液過濾，濾渣重復(fù)提取2-3次，合并提取液，減壓濃縮成浸膏狀；
5)將步驟(4)中所得浸膏用水溶解，并將溶解液上大孔吸附樹脂柱、60°/『70%的乙醇洗脫，收集洗脫液減壓濃縮，干燥，即得桔梗皂甙。
[0008]步驟2)中所述的粉末與水的質(zhì)量體積比為1:0.5-1，浸泡時(shí)間為20-60分鐘。
[0009]步驟2)中所述的生物酶為纖維素酶、淀粉酶、半纖維素酶和果膠酶中的一種，酶解時(shí)的溫度設(shè)定在30-45°C，酶解時(shí)間為2-4小時(shí)。
[0010]步驟3)中所述的乙醇水溶液濃度為50%-70%，體積為粉末重量的3-6倍。
[0011]步驟5 )中所述的大孔吸附樹脂為 X-5、AB-8、NK-2、NKA-2、NK-9、D3520、D101、WLD中的一種。
[0012]步驟5)中所述洗脫過程為先用2~4倍柱體積水洗去糖分，然后用2~5倍柱體積、10%~20%乙醇洗去部分雜質(zhì)，最后用2~5倍柱體積、60%~70%的乙醇洗脫，收集洗脫液。
[0013]采用本方法生產(chǎn)桔梗皂甙，利用生物酶解技術(shù)與大孔吸附樹脂相結(jié)合的方法，充分破壞細(xì)胞壁，增加和加快了活性成分的流出，通過大孔吸附樹脂柱純化過程，不僅大大提高了桔梗皂甙的純度，而且大孔吸附樹脂可以回收再利用，從而降低了生產(chǎn)成本。該工藝簡便易操作、提取效率高、污染小、所得產(chǎn)品純度高、易于實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。
[0014]下面將結(jié)合【具體實(shí)施方式】進(jìn)一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實(shí)施方式。
[0015]【具體實(shí)施方式】:
實(shí)施例1:
取新鮮的桔梗烘干、粉碎、過20目篩。稱取桔梗粉末50克放入提取器中，加入25毫升的水浸泡20分鐘，然后加入0.25克的果膠酶試劑，在溫度為30°C的條件下酶解2分鐘，收集酶解原料，然后加入250毫升60%的乙醇水溶液回流提取，濾渣提取2次，合并3次濾液，減壓濃縮成浸膏，將所得浸膏溶解，并將溶解液倒入X-5大孔吸附樹脂柱中，先用2倍柱體積水洗去糖分，然后用2倍柱體積、10%乙醇洗去部分雜質(zhì)，最后用2倍柱體積、60%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液減壓濃縮，干燥，即得總皂苷。經(jīng)檢測總皂苷的含量為88.53%，總皂苷的提取率為57.5%。
[0016]實(shí)施例2:
取新鮮的桔梗烘干、粉碎、過40目篩。稱取桔梗粉末50克放入提取器中，加入30毫升的水浸泡40分鐘，然后加入0.5克的果膠酶，在溫度為40°C的條件下酶解3分鐘，收集酶解原料，然后加入250毫升60%的乙醇水溶液回流提取，濾渣提取2次，合并3次濾液，減壓濃縮減壓濃縮成浸膏，將所得浸膏溶解，并將溶解液倒入D3520大孔吸附樹脂柱中，先用3倍柱體積水洗去糖分，然后用4倍柱體積、15%乙醇洗去部分雜質(zhì)，最后用4倍柱體積、65%的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液減壓濃縮，干燥，即得總皂苷。經(jīng)檢測總皂苷的含量為89.13%，總皂苷的提取率為60.52%。
[0017]實(shí)施例3:
取新鮮的桔梗烘干、粉碎、過60目篩。稱取桔梗粉末50克放入提取器中，加入50毫升的水浸泡60分鐘，然后加入Ig克的生物酶試劑，在溫度為45°C的條件下酶解4分鐘，收集酶解原料，然后加入250毫升60%的乙醇水溶液回流提取，濾渣提取3次，合并4次濾液，減壓濃縮成浸膏，將所得浸膏溶解，并將溶解液倒入AB-8大孔吸附樹脂柱中，先用4倍柱體積水洗去糖分，然后用5倍柱體積、20%乙醇洗去部分雜質(zhì)，最后用5倍柱體積、70%的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液減壓濃縮，干燥，即得總皂苷。經(jīng)檢測總皂苷的含量為90.55%，總皂苷的提取率為61.45%ο
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種桔梗皂甙的提取方法，其特征在于采用以下步驟: 1)將桔梗烘干，粉碎，過20~60目篩； 2)稱取一定量的桔梗粉末加水浸潤，然后加入桔梗粉末重量0.5%-2%的生物酶進(jìn)行酶解處理； 3)在步驟(2)所得物料中加入乙醇水溶液回流提取，得到提取液； 4)將提取液過濾，濾渣重復(fù)提取2-3次，合并提取液，減壓濃縮成浸膏狀； 5)將步驟(4)中所得浸膏用水溶解，并將溶解液上大孔吸附樹脂柱、60°/『70%的乙醇洗脫，收集洗脫液減壓濃縮，干燥，即得桔梗皂甙。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的桔梗皂甙的提取方法，其特征在于:步驟2)中所述的粉末與水的質(zhì)量體積比為1:0.5-1，浸泡時(shí)間為20-60分鐘。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的桔梗皂甙的提取方法，其特征在于:步驟2)中所述的生物酶為纖維素酶、淀粉酶、半纖維素酶和果膠酶中的一種，酶解時(shí)的溫度設(shè)定在30-45?，酶解時(shí)間為2-4小時(shí)。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的桔梗皂甙的提取方法，其特征在于:步驟3)中所述的乙醇水溶液濃度為50%-70%，體積為粉末重量的3-6倍。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的桔梗皂甙的提取方法，其特征在于:步驟5)中所述的大孔吸附樹脂為 X-5、AB-8、NK-2、NKA-2、NK-9、D3520、DlOUffLD 中的一種。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的桔梗皂甙的提取方法，其特征在于:步驟5)中所述洗脫過程為先用2~4倍柱體積水洗去糖分，然后用2~5倍柱體積、10%~20%乙醇洗去部分雜質(zhì)，最后用2~5倍柱體積、60%~70%的乙醇洗脫，收集洗脫液。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種桔梗皂甙的提取方法。方法步驟如下：1）將桔梗烘干，粉碎，過篩；2）稱取一定量的桔梗粉末加水浸潤，然后加入桔梗粉末重量0.5%-2%的生物酶試劑進(jìn)行酶解處理；3）酶解完成后，加入乙醇水溶液回流提取，得到提取液；4）將提取液過濾，濾渣重復(fù)提取，合并提取液，減壓濃縮成浸膏狀；5）將浸膏溶解并將溶解液上大孔吸附樹脂柱洗脫，收集洗脫液減壓濃縮，干燥，即得桔梗皂甙。采用本發(fā)明制備桔梗皂甙，工藝操作簡單、生產(chǎn)成本低、所得產(chǎn)品純度高。
【IPC分類】A61K36/34
【公開號(hào)】CN104906165
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510263738
【發(fā)明人】劉東鋒, 楊成東
【申請(qǐng)人】南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司
【公開日】2015年9月16日
【申請(qǐng)日】2015年5月22日