專利名稱：包含桔梗根提取物或桔梗皂甙組分的用于預(yù)防或治療丙型肝炎的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用作抗病毒劑的桔梗(Platycodon grandiflrum)的皂甙組分(皂苷組分，saponin component)，或包含皂甙組分的桔梗根提取物，以及包含它們的用于預(yù)防或治療丙型肝炎的藥物組合物。
背景技術(shù)：
丙型肝炎病毒(下文稱為“HCV”)經(jīng)由輸血(transfusion)和社區(qū)獲得性感染傳播。感染HCV后，20%的感染患者進(jìn)展成急性肝炎，約80%的感染患者患上慢性肝炎，慢性肝炎有可能進(jìn)展成肝硬化或肝癌。根據(jù)最近報(bào)道，全世界有近2億人感染了 HCV，推測(cè)在美國有450萬人感染了 HCV(預(yù)測(cè)該數(shù)字可以增加到1500萬)。在歐洲，推測(cè)至少有500萬人是丙型肝炎患者。還未開發(fā)出令人滿意的丙型肝炎疫苗或治療丙型肝炎有效的治療劑。所以，世界各地許多制藥公司和研究院所都試圖開發(fā)有效的丙型肝炎治療劑。與乙肝相比，HCV患者在世界各地非常普遍，并且進(jìn)展成肝硬化和肝癌的可能性大得多。另外，丙型肝炎進(jìn)展成慢性感染的可能性較大，此進(jìn)展的機(jī)制還在研究。丙型肝炎不僅通過輸血傳播，而且通過靜脈藥物注射或紋身傳播，但主要通過直接血液接觸傳播。感染HCV后，大多數(shù)感染患者進(jìn)展成慢性肝炎，然后進(jìn)一步進(jìn)展成肝硬化和肝癌。所以，迫切需要開發(fā)治療丙型肝炎的有效疫苗和治療劑。HCV株之間有許多不同的基因型和突變體。所以，當(dāng)HCV感染進(jìn)展成慢性肝炎時(shí)， 由于遺傳變異，再感染或共感染的可能性大。這使得HCV疫苗開發(fā)很難。丙型肝炎的現(xiàn)行治療是干擾素-α和利巴韋林(Rikwirin)的聯(lián)合療法。但是，這種治療的治愈率非常低，而且?guī)韲?yán)重的副作用。約25%的丙型肝炎患者對(duì)干擾素-α沒有反應(yīng)，另外25%的患者在暫時(shí)性反應(yīng)之后會(huì)復(fù)發(fā)。剩下50%患者的ALT水平保持正常， 甚至在完成治療后仍然為HCVRNA陰性。但是，這些受治療患者中的50%在第一次治療之后的3 6個(gè)月內(nèi)復(fù)發(fā)。因而，僅25%的丙型肝炎患者表現(xiàn)出持續(xù)的病毒反應(yīng)(SVR)，這意味著這些患者的治療效果至少可以保持6個(gè)月。同時(shí)，丙型肝炎病毒具有6種基因型。在它們當(dāng)中，基因型Ib最常見，但是與基因型2或基因型3相比，對(duì)干擾素-α的反應(yīng)并不是那樣好。在干擾素_α和利巴韋林的聯(lián)合療法的情況下，治療效果加倍。當(dāng)單獨(dú)使用利巴韋林治療時(shí)，治療效果沒有這么好，而且?guī)砀弊饔?，如由紅細(xì)胞破碎引起的貧血。因此，當(dāng)患者對(duì)干擾素-α沒有反應(yīng)或丙型肝炎復(fù)發(fā)時(shí)，僅開處利巴韋林。到目前為止，還未開發(fā)出通過直接抑制復(fù)制而特異性地靶向丙型肝炎病毒的有效抗病毒劑。1989年，通過分子克隆從HCV中首次分離出RNA基因組(Choo，Q-L, et ah, 1989, Isolation of a cDNA clone derived from a blood-borne non-A, non-B viral hepatitis genome. Science 244:359-362)。從那以后，制造出HCV的分子生物途徑，但是其具有局限性，因?yàn)樗鄙俑咝У募?xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)和動(dòng)物模型。但是最近，已確立穩(wěn)定地復(fù)制HCV RNA復(fù)制子的肝瘤細(xì)胞系從而解決了該局限性(Lohmann，V.，F(xiàn). Korner, J-OKoch,U. Herian,L. Theilmann,R. Bartenschlager,1999,Replication of subgenomic hepatitis cvirus RNAs in a hepatoma cell line. Science 285 :110-113) HCV RNA 復(fù)制子分為兩類包含完整HCV基因的全長(zhǎng)復(fù)制子和其中不包括結(jié)構(gòu)蛋白的亞基因組復(fù)制子。HCV RNA復(fù)制子是雙順反子復(fù)制子，其包含HCV 5端、HCV IRES、耐新霉素基因(新霉素轉(zhuǎn)移酶基因) 和EMCV(腦心肌炎病毒)IRES。HCV非結(jié)構(gòu)蛋白由包含NS3-NS5B和HCV 3'端(非翻譯區(qū)) 的序列組成。已開發(fā)出對(duì)抗每個(gè)HCV基因型的HCV復(fù)制子，其有助于不同情況的研究。本發(fā)明的發(fā)明人如此完成本發(fā)明基于發(fā)明人證實(shí)從桔梗根提取物中分離出的桔梗皂甙組分以及包含它的桔梗根提取物具有優(yōu)異的HCV復(fù)制子抑制作用，提出從桔梗根提取物中分離出的桔梗皂甙組分以及包含它的桔梗根提取物可以有效地用于預(yù)防和/或治療丙型肝炎。桔梗(Platycodi Radix)是屬于桔梗科(Campanulaceae)的多年生植物桔梗 A. DC(Platycodon grandiflorum A. DC)的根，其廣泛分布或栽培在東亞，其蓋侖制劑名稱 (galenical name)為 Gilgyeong0據(jù)報(bào)道，桔梗根含有許多碳水化合物(糖，至少90% )、蛋白質(zhì))、脂質(zhì)(0.1%)和灰分(1.5%)。另外，它包含各種三萜皂甙( 種，包括桔梗皂甙A、C、 D、D2 (platycodin A、C、D、D2)，遠(yuǎn)志皂甙 D、D2 (polygalacinD, D2)，等)(約 2 % )。這些皂甙已受到很多關(guān)注，因?yàn)樗鼈兙哂卸喾N藥理作用，這使得它們?yōu)榻酃５幕钚猿煞帧＿€報(bào)道了桔梗的其它次要(minor)成分如類固醇化合物，例如α-菠菜甾醇 (α-spinasterol), Δ 7_ 豆甾醇(Δ 7-stigmasterol)和 α -菠菜甾醇-β-D-葡萄糖苷 (α -spinasteryl-β -D-glucoside)，它們占0. 03 %。桔梗中的碳水化合物組分主要由單糖、二糖或三糖如葡萄糖、果糖、蔗糖、蔗果三糖(kestose)等組成，還包括一些多糖如菊粉 (inulin)和桔梗糖(platycodinin)。已被現(xiàn)代醫(yī)藥研究證明的桔梗的許多藥理作用如下保護(hù)腦細(xì)胞[YooKi-Yeon等人，Neurosci. Lett. 444 (1)，97-101 (2008)]、抗肥胖[Zhao, H. L.等人，J. Food. Sci. 73 (8)， H195-H200, (200 ]、保護(hù)肝功能[Lee, K. J.等人，^Toxicol. Lett. 147,271-282, (2004)]、 調(diào)節(jié)免疫功能[Ahn, K. S.等人，Life Sci. 76，2315-2328，(2005)]和引起細(xì)胞毒性[Lee, Kyung Jin 等人，F(xiàn)ood Chem. Toxicol. 46 (5), 1778-1785 (2008) ；Zhang，Lin 等人，Molecules 12(4) ,832-841, (2007) ] [參考文獻(xiàn) l]Yoo Ki-Yeon.等人，Neurosci. Lett. 444(1)，97-101，(2008)[參考文獻(xiàn) 2] Zhao，H. L.等人，J. Food Sci. 73 (8)，H195-H200，(2008)[參考文獻(xiàn) 3]Lee, K. J.等人，Toxicol. Lett. 147,271-282, (2004)[參考文獻(xiàn) 4]Ahn，K. S.等人，LifeSci. 76，2315-2328，(2005)[參考文獻(xiàn) 5]Lee，K. J.等人，F(xiàn)ood Chem. Toxicol. 46 (5), 1778-1785, (2008)[參考文獻(xiàn) 6] Zhang，L.等人，Molecules 12 (4)，832-841，(2007)

發(fā)明內(nèi)容
技術(shù)問題本發(fā)明的目的在于提供對(duì)預(yù)防和治療丙型肝炎有效的藥物組合物。解決問題的方案
為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了預(yù)防和治療丙型肝炎的藥物組合物，其包含作為活性成分的從桔梗的根提取物中分離出的一些桔梗皂甙組分，和包含它的桔梗根提取物以及藥學(xué)上可接受的載體。包含從桔梗根提取物中分離出的桔梗皂甙組分和包含它作為活性成分的桔梗根提取物以及藥學(xué)上可接受的載體的預(yù)防和治療丙型肝炎的本發(fā)明藥物組合物，可以單獨(dú)地用作丙型肝炎預(yù)防或治療劑，或者與干擾素和/或利巴韋林一起治療，或者與選自各種各樣的丙型肝炎病毒增殖抑制劑的一種或至少兩種化合物的混合組合物聯(lián)合治療，其中該丙型肝炎病毒增殖抑制劑包括免疫調(diào)節(jié)劑、細(xì)胞信號(hào)調(diào)節(jié)劑、抗病毒劑、HCV聚合酶(NS5B)抑制劑、HCV蛋白酶(NS3/4A)抑制劑、HCV解旋酶(NS3解旋酶)抑制劑、HCV NS4B抑制劑、 HCV NS5A抑制劑、HCV細(xì)胞進(jìn)入抑制劑，和HCV組裝抑制劑。本文的干擾素包括任一種干擾素，例如，天然干擾素、干擾素-α、干擾素-β、干擾素-Y、聚乙二醇化干擾素、白蛋白連接的干擾素等，優(yōu)選為選自上面的一種或多種干擾素，但不局限于此。本文的抗病毒劑是選自由利巴韋林、拉米夫定(Lamivudine)、金剛烷胺 (Amantadine)等組成的組的一種或多種藥物，但不局限于此。在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施例中，本發(fā)明提供了預(yù)防和治療丙型肝炎的藥物組合物，其包含選自由下面物質(zhì)組成的組中的一種或多種物質(zhì)作為活性成分通過利用水、有機(jī)溶劑或其混合物提取的桔梗提取物，和從桔梗根提取物中分離的桔梗皂甙組分，以及包含它們的桔梗根提取物。本文的有機(jī)溶劑優(yōu)選為10% -100%濃度的C1 C4低級(jí)醇。所述桔梗提取物包括從溶劑提取制得的桔梗提取物通過超濾膜純化的桔梗提取物。此時(shí)，使用截留分子量為100，000,5, 000或1，000的超濾膜。所以，通過該超濾膜純化獲得的桔梗提取物是分子量為1，000 100，000的提取物或分子量為1，000 5，000
的提取物。所述桔梗提取物包括利用截留分子量達(dá)到500的納米過濾膜分離的通過超濾膜純化的桔梗提取物中分子量為500 5，000的提取物。從桔梗提取物中分離的皂甙化合物包括由式1表示的皂甙化合物和由式2表示的 (前)皂甙元((pro) sapogenin,(原)皂甙元)化合物。
[式1]
權(quán)利要求
1.一種預(yù)防或治療丙型肝炎的藥物組合物，包含選自以下組中的一種或多種活性成分，所述組由利用水、有機(jī)溶劑或其混合物提取的桔梗(platycodon grandiflorum)根提取物，和從所述桔梗根提取物中分離的皂甙組分組成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的預(yù)防或治療丙型肝炎的藥物組合物，其中，所述有機(jī)溶劑為 10-100%濃度的C1 C4低級(jí)醇。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的預(yù)防或治療丙型肝炎的藥物組合物，其中，所述桔梗提取物包括通過用超濾膜過濾溶劑提取的桔梗提取物制得的桔梗提取物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的預(yù)防或治療丙型肝炎的藥物組合物，所述超濾膜截留分子量為 100，000,5, 000 或 1，000。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的預(yù)防或治療丙型肝炎的藥物組合物，其中，通過用超濾膜過濾制得的所述桔梗提取物的分子量為1，000 100，000或1，000 5，000。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的預(yù)防或治療丙型肝炎的藥物組合物，其中，所述桔梗提取物包括從用超濾膜制得的所述桔梗提取物，通過用截留分子量達(dá)到500的納米過濾膜制備的分子量為500 5000的桔梗提取物。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的預(yù)防或治療丙型肝炎的藥物組合物，其中，從所述桔梗根提取物中分離的所述皂甙組分包括由式1表示的皂甙化合物和由式2表示的(前)皂甙元化合物
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的預(yù)防或治療丙型肝炎的藥物組合物，其中，從所述桔梗根提取物中分離的所述皂甙組分包括通過如下過程獲得的桔梗粗皂甙利用反相凝膠分離桔梗溶劑提取物；將所獲得的提取物溶解在乙醇或甲醇中；和用乙酸乙酯使所得物結(jié)晶。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的預(yù)防或治療丙型肝炎的藥物組合物，其中，所述由式1表示的阜甙化合物選自由以下物質(zhì)組成的組去芹糖桔梗糖苷E、桔梗糖苷E、桔梗皂甙D3、遠(yuǎn)志阜
10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的預(yù)防或治療丙型肝炎的藥物組合物，其中，所述由式(2)表示的(前)皂甙元化合物選自由以下物質(zhì)組成的組桔梗皂甙元、遠(yuǎn)志酸、桔梗酸A內(nèi)酯、 桔梗酸A內(nèi)酯3-0-吡喃葡萄糖苷、桔梗皂甙元3-0-吡喃葡萄糖苷甲酯和桔梗皂甙元
11.根據(jù)權(quán)利要求8或10所述的預(yù)防或治療丙型肝炎的藥物組合物，其中，所述(前) 皂甙元化合物通過水解桔梗粗皂甙制備。
12.根據(jù)權(quán)利要求1 10中任一項(xiàng)所述的預(yù)防或治療丙型肝炎的藥物組合物，其中，所述組合物進(jìn)一步包括一種或多種HCV增殖抑制劑。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的預(yù)防或治療丙型肝炎的藥物組合物，其中，所述HCV增殖抑制劑選自由以下物質(zhì)組成的組免疫調(diào)節(jié)劑、細(xì)胞信號(hào)調(diào)節(jié)劑、抗病毒劑、HCV聚合酶 (NS5B)抑制劑、HCV蛋白酶(NS3/4A)抑制劑、HCV解旋酶(NS3解旋酶)抑制劑、HCV NS4B 抑制劑、HCV NS5A抑制劑、HCV細(xì)胞進(jìn)入抑制劑和HCV組裝抑制劑。
14.根據(jù)權(quán)利要求1 10中任一項(xiàng)所述的預(yù)防或治療丙型肝炎的藥物組合物，其中，所述組合物進(jìn)一步包括屬于免疫調(diào)節(jié)劑的干擾素，和利巴韋林。
15.根據(jù)權(quán)利要求13所述的預(yù)防或治療丙型肝炎的藥物組合物，其中，所述免疫調(diào)節(jié)劑選自由以下物質(zhì)組成的組天然干擾素、干擾素-α、干擾素-β、干擾素-Y、聚乙二醇化干擾素、白蛋白連接的干擾素和細(xì)胞因子。
16.一種預(yù)防或改善丙型肝炎的保健功能食品，包含選自由以下物質(zhì)組成的組中的一種或多種活性成分，所述組由利用水、有機(jī)溶劑或其混合物提取的桔梗根提取物，和從所述桔梗根提取物中分離的皂甙組分組成。
全文摘要
本發(fā)明涉及預(yù)防或治療丙型肝炎的藥物組合物，其包含用作抗病毒劑的桔梗(Plalycodon grandiflorum)根提取物和/或桔梗中的皂甙(saponin)組分。本發(fā)明的組合物對(duì)人無害，并且可以抑制丙型肝炎病毒增殖，因此它可以有效地用作丙型肝炎的預(yù)防或治療劑。
文檔編號(hào)A61K36/346GK102264378SQ201080003747
公開日2011年11月30日 申請(qǐng)日期2010年1月21日 優(yōu)先權(quán)日2009年1月23日
發(fā)明者慎重哲, 樸相珍, 李常旭, 林鐘煥, 梁栽源, 金鐘宇 申請(qǐng)人:B&C生物制藥株式會(huì)社