制備納米纖維支架。采用轉(zhuǎn)筒接收器，制備管狀樣品。
[0032]③考察支架的抗凝血性和細胞相容性
[0033]選用成纖維細胞，血管內(nèi)皮細胞培養(yǎng)，采用MTT等方法測試細胞相容性(圖3);模擬血液環(huán)境，測定NO釋放能力(圖4);采用常規(guī)凝血測試方法測定抗凝血性能。
[0034]結(jié)果表明，所制備的支架具有良好的細胞相容性、抗凝血性，且能原位催化或誘導(dǎo)內(nèi)源性NO供體釋放NO。
[0035]實施例2?3
[0036]按照與實施例1基本相同的方法制備聚合物/角蛋白復(fù)合抗凝血血管組織工程支架，在步驟②“靜電紡絲構(gòu)建血管組織工程支架”中，聚合物PCL和角蛋白共混物中，角蛋白的質(zhì)量百分比分別為20 %、30 %，其它條件相同。
[0037]選用成纖維細胞，血管內(nèi)皮細胞培養(yǎng)，采用MTT等方法測試細胞相容性；模擬血液環(huán)境，測定NO釋放能力，結(jié)果見圖3和圖4(圖中9/1等表示PCL/角蛋白質(zhì)量比)；采用常規(guī)凝血測試方法測定抗凝血性能。
[0038]結(jié)果表明，所制備的支架具有良好的細胞相容性、抗凝血性，且能原位催化或誘導(dǎo)內(nèi)源性NO供體釋放NO。
[0039]實施例4
[0040]聚合物/角蛋白復(fù)合抗凝血血管組織工程支架的制備方法，依次包括以下步驟:
[0041]①角蛋白還原并穩(wěn)定化
[0042]人發(fā)經(jīng)過堿和甲醇依次洗滌，除去油污。剪碎粗品(Ig)，放入燒瓶中，加入巰基乙醇(4g)，尿素(15g)，十二烷基磺酸鈉(1.50，加熱到601，反應(yīng)241!。透析I天后，過濾得到角蛋白溶液。測定透析后角蛋白的巰基含量，根據(jù)體積計算得到巰基的總量，并加入過量的改性劑碘代乙酸來穩(wěn)定巰基，避光常溫反應(yīng)12小時，再次透析2天，凍干得到改性后的角蛋白O
[0043]②靜電紡絲構(gòu)建血管組織工程支架
[0044]取聚合物聚氨酯和角蛋白共混，其中角蛋白質(zhì)量比例為15%，溶解于有機溶劑六氟異丙醇中形成聚合物溶液。優(yōu)化條件下，紡絲濃度為15%，紡絲電壓為15kV，接收板距離10cm，靜電紡絲制備納米纖維支架。采用轉(zhuǎn)筒接收器，制備管狀樣品。
[0045]③考察支架的抗凝血性和細胞相容性
[0046]選用成纖維細胞，血管內(nèi)皮細胞培養(yǎng)，采用MTT等方法測試細胞相容性；模擬血液環(huán)境，測定NO釋放能力；采用常規(guī)凝血測試方法測定抗凝血性能。
[0047]結(jié)果與實施例1相似，表明本發(fā)明所制備的支架具有良好的細胞相容性、抗凝血性，且能原位催化或誘導(dǎo)內(nèi)源性NO供體釋放NO。
[0048]實施例5?8
[0049]按照與實施例4基本相同的方法制備聚合物/角蛋白復(fù)合抗凝血血管組織工程支架，在步驟②“靜電紡絲構(gòu)建血管組織工程支架”中，聚合物PU分別替換為PLGA、PLA、PHA、PHBV，其它條件相同。
[0050]選用成纖維細胞，血管內(nèi)皮細胞培養(yǎng)，采用MTT等方法測試細胞相容性；模擬血液環(huán)境，測定NO釋放能力；采用常規(guī)凝血測試方法測定抗凝血性能。
[0051]結(jié)果與實施例1相似，表明本發(fā)明所制備的支架具有良好的細胞相容性、抗凝血性，且能原位催化或誘導(dǎo)內(nèi)源性NO供體釋放NO。
【主權(quán)項】
1.一種聚合物/角蛋白復(fù)合抗凝血血管組織工程支架的制備方法，其特征在于，提取角蛋白并進行穩(wěn)定化改性；將改性后的角蛋白與生物可降解聚合物混合，采用靜電紡絲紡法制備所述的聚合物/角蛋白復(fù)合血管組織工程支架。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的聚合物/角蛋白復(fù)合抗凝血血管組織工程支架的制備方法，其特征在于:所述的角蛋白來源為人或動物的毛發(fā)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的聚合物/角蛋白復(fù)合抗凝血血管組織工程支架的制備方法，其特征在于:所述的生物可降解聚合物選自聚己內(nèi)酯、聚乳酸-羥基乙酸共聚物、聚乳酸、聚羥基脂肪酸酯、3-羥基丁酸酯和3-羥基戊酸酯的共聚物、生物可降解聚氨酯中的一種或幾種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的聚合物/角蛋白復(fù)合抗凝血血管組織工程支架的制備方法，其特征在于:所述的方法包括以下步驟: 步驟I)角蛋白的提取和改性:將人或動物的毛發(fā)洗凈后烘干，剪成小段，在PH值為8.0-9.0的還原液中溶脹I?2小時，然后在45?60°C攪拌反應(yīng)至少12小時，過濾得到角蛋白溶液，透析2-3天；所得的角蛋白溶液中，加入過量的改性劑封端活潑的巰基，反應(yīng)0.5-2天后，再次透析2-3天，凍干后得到棉花狀角蛋白； 步驟2)血管組織工程支架的制備:將步驟I)得到的改性后的角蛋白和可生物降解聚合物的混合物溶解在有機溶劑中形成混合溶液，采用轉(zhuǎn)筒接收器，靜電紡絲法制備管狀樣品，制得所述的聚合物/角蛋白復(fù)合血管組織工程支架。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的聚合物/角蛋白復(fù)合抗凝血血管組織工程支架的制備方法，其特征在于:步驟I)中，所述的還原液為巰基乙醇或巰基乙酸、十二烷基硫酸鈉和尿素的混合液，所用毛發(fā)與還原液的質(zhì)量體積比為1:50?1:100克/暈升。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的聚合物/角蛋白復(fù)合抗凝血血管組織工程支架的制備方法，其特征在于:步驟I)中，所述的改性劑選自碘代乙酸或(甲基)丙烯酸單體。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的聚合物/角蛋白復(fù)合抗凝血血管組織工程支架的制備方法，其特征在于:步驟2)中，所述的可生物降解聚合物為聚己內(nèi)酯、聚乳酸-羥基乙酸共聚物、聚乳酸、聚羥基脂肪酸酯、3-羥基丁酸酯和3-羥基戊酸酯的共聚物、生物可降解聚氨酯中的一種或者幾種。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的聚合物/角蛋白復(fù)合抗凝血血管組織工程支架的制備方法，其特征在于:步驟2)中，角蛋白和可生物降解聚合物的混合物中，所述的角蛋白所占質(zhì)量比為 5%~ 50%。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種利用角蛋白構(gòu)建抗凝血血管組織工程支架的方法，包括角蛋白的提取并穩(wěn)定化；將提取的角蛋白與生物可降解聚合物共混紡絲制備復(fù)合纖維膜片。本發(fā)明方法制備的復(fù)合纖維膜片作為血管組織工程支架，利用角蛋白在血液環(huán)境中的原位催化或誘導(dǎo)內(nèi)源性NO供體釋放NO的能力，從而實現(xiàn)NO釋放；進而提高支架的血液相容性和細胞相容性，抑制平滑肌生長，最終原位形成血管。本發(fā)明方法，不僅用于制備血管組織工程支架，還可用于與血液接觸的其它醫(yī)療器械。
【IPC分類】A61L27-48, A61L27-58, A61L33-12, A61L27-50, A61L27-22
【公開號】CN104784758
【申請?zhí)枴緾N201510233594
【發(fā)明人】袁江, 李鵬飛, 沈健
【申請人】南京師范大學(xué)
【公開日】2015年7月22日
【申請日】2015年5月9日