一種疫苗組合物及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種疫苗組合物，具體地說(shuō)，涉及一種圓環(huán)病毒疫苗組合物。
【背景技術(shù)】
[0002] 豬圓環(huán)病毒（PCV)是迄今發(fā)現(xiàn)的一種最小的動(dòng)物病毒。現(xiàn)已知PCV有兩個(gè)血清 型，即PCVl和PCV2。PCVl為非致病性的病毒。PCV2為致病性的病毒，它是斷奶仔豬多系統(tǒng) 衰竭綜合征（PMWS)的主要病原。PMWS的臨床特征有消瘦、皮膚蒼白、呼吸困難、腹瀉、黃疽 等。病理變化可見(jiàn)全身淋巴結(jié)腫大，特別是腹股溝淋巴結(jié)腫大可達(dá)5?10倍；肺主要呈彌 散性、間質(zhì)性肺炎變化，質(zhì)地硬如橡皮，表面一般呈灰褐色的斑駁狀外觀；腎的變化較多，可 見(jiàn)皮質(zhì)和髓質(zhì)散在大小不一的白色壞死灶，由于水腫而導(dǎo)致其呈現(xiàn)蠟樣外觀；脾輕度腫大； 大多病豬的肝有不同程度的萎縮、纖維化。
[0003] 除PMWS外，豬皮炎與腎病綜合征（PDNS)、增生性壞死性肺炎（PNP)、豬呼吸道疾病 綜合征（PRDC)、繁殖障礙、先天性顫抖、腸炎等疾病亦與PCV2感染有重要關(guān)聯(lián)。PCV2相關(guān) 的豬病，死亡率達(dá)10%?30%不等，較嚴(yán)重的豬場(chǎng)在暴發(fā)時(shí)死淘率高達(dá)40%，給養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán) 重的經(jīng)濟(jì)損失?，F(xiàn)有技術(shù)通過(guò)全病毒滅活疫苗和PCV2的CAP蛋白制備的亞單位疫苗用于 預(yù)防PMWS，然而全病毒滅活疫苗，由于PCV的細(xì)胞產(chǎn)量不高造成成本較高，而亞單位疫苗具 有不在動(dòng)物體內(nèi)增殖，無(wú)外源性核酸，因此不具傳染性等優(yōu)點(diǎn)，但同時(shí)也存在純化成本高的 問(wèn)題?，F(xiàn)有技術(shù)需要一種成本低廉且高效的針對(duì)圓環(huán)病毒的疫苗。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 為解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供一種圓環(huán)病毒疫苗，包含：圓環(huán)病毒2型抗 原、左旋咪唑或其衍生物、聚合物和藥學(xué)上可以接受的載體。
[0005] 本發(fā)明的主要目的在于提供一種疫苗組合物，所述疫苗組合物包括免疫量的圓環(huán) 病毒2型抗原以及左旋咪唑或其衍生物。
[0006] 術(shù)語(yǔ)"豬圓環(huán)病毒2型抗原"是指含有至少一種PCV2抗原形式的任何組合物，所述 抗原接種豬可誘導(dǎo)、刺激或增強(qiáng)抵抗PCV2感染的免疫應(yīng)答。所述PCV2抗原可以是PCV2全 病毒、如滅活的PCV2全病毒、含有PCV2免疫原性氨基酸序列(如0RF2蛋白）的嵌合病毒，任 何其它至少含PCV2免疫原性氨基酸序列的多肽或亞單位或其他成分。PCV2抗原還可以包 含以下組合物的任一種抗原：如梅里亞公司（Merial)的CilXOVac?;輝瑞公司（Pfizer) 的Suvaxyn?: PCV2 ;哈爾濱維科生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司的豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗（LG株）； 福州大北農(nóng)生物技術(shù)有限公司的豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗（DBN-SX07株）和基因工程亞單 位疫苗(如勃林格殷格翰公司（Boehringer-Ingelheim)的Ingelvac CirC0_FLEX?等等） 因 PCV2基因組大小為1767bp或1768bp，不同毒株之間核苷酸序列同源性較高，均在90%以 上，因此 PCV2SH 株（GenBank 登錄號(hào)為 AY686763 )、PCV2LG 株（GenBank 登錄號(hào)為 HM038034 )、 PCV2DBN-SX07-2 (GenBank登錄號(hào)為HM641752)均在本發(fā)明之內(nèi)。
[0007] 優(yōu)選地，所述圓環(huán)病毒2型抗原為PCV20RF2蛋白，所述PCV20RF2蛋白為2?300 微克/mL，更優(yōu)選2?60微克/mL，最優(yōu)選60微克/mL。
[0008] 優(yōu)選地，所述圓環(huán)病毒2型抗原為滅活的豬圓環(huán)病毒2型全病毒抗原，所述豬圓環(huán) 病毒2型全病毒抗原為滅活前彡10 6_°TCID5Q。
[0009] 本發(fā)明所述圓環(huán)病毒2型抗原，優(yōu)選亞單位抗原或滅活后的全病毒抗原。作為本 發(fā)明的一種實(shí)施方式，全病毒抗原為SH株全病毒抗原，可按照專(zhuān)利申請(qǐng)CN101240264A公開(kāi) 的方法、菌株制備，作為本發(fā)明的另外一種實(shí)施方式，抗原為PCV20RF2蛋白，可按照專(zhuān)利申 請(qǐng)CN103173470A公開(kāi)的方法、基因來(lái)源制備。
[0010] 所述SH菌株，保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏日期 2008年3月4日，保藏號(hào)為CGMCC No. 2389。
[0011] 圓環(huán)病毒的抗原含量，至少包含2微克PCV20RF2蛋白/劑量，優(yōu)選2?300微 克PCV20RF2蛋白/劑量，更優(yōu)選20-150微克PCV20RF2蛋白/劑量，更優(yōu)選50-100微克 PCV20RF2蛋白/劑量，更優(yōu)選60微克PCV20RF2蛋白/劑量。
[0012] 全病毒的滅活疫苗滅活前病毒含量述豬圓環(huán)病毒抗原為IX IO5 tlTCID5ci/劑量以 上，優(yōu)選IO6 qTCID5q/劑量以上。
[0013] 優(yōu)選地，左旋咪唑衍生物為左旋咪唑鹽酸鹽或磷酸鹽，所述左旋咪唑或其衍生物 的含量為〇. 1?10暈克/mL，更優(yōu)選1. 5?3暈克/mL。
[0014] 術(shù)語(yǔ)左旋咪唑?yàn)榉肿邮紺11H12N2S化合物，左旋咪唑的衍生物是指左旋咪唑衍生物 是其鹽酸鹽或磷酸鹽，使用時(shí)按其分子量折算為左旋咪唑的量。
[0015] 左旋咪唑或衍生物優(yōu)選0. 1毫克?10毫克/劑量，更優(yōu)選0. 5毫克g?5毫克/ 劑量，更優(yōu)選I. 〇暈克?3暈克/劑量，更優(yōu)選1. 5暈克?2暈克/劑量最優(yōu)選1. 5暈克/ 劑量。
[0016] 優(yōu)選地,所述疫苗組合物進(jìn)一步包括聚合物,所述聚合物包括DEAE葡聚糖、聚 乙二醇、聚丙烯酸，以及聚甲基丙烯酸，優(yōu)選聚丙烯酸，更優(yōu)選卡波姆，所述聚合物含量為 0. 1?500毫克/mL，更優(yōu)選2毫克//mL。
[0017] 疫苗組合物還可包括一或多種聚合物，諸如，例如：DEAE葡聚糖、聚乙二醇和聚丙 烯酸，以及聚甲基丙烯酸。這類(lèi)物質(zhì)可自市場(chǎng)購(gòu)得。適合用于佐劑組合物中的聚合物的量 取決于所使用的聚合物的性質(zhì)。優(yōu)選地，本發(fā)明所述聚合物為聚丙烯酸；更優(yōu)選地，所述聚 合物為商品名為卡波姆（Carbomer)的聚丙烯酸；
[0018] 本發(fā)明所述聚合物的量為0. 1暈克?500暈克/劑量，優(yōu)選1暈克?20暈克劑 量，更優(yōu)選5暈克?10暈克/劑量，更優(yōu)選1暈克?3暈克劑量，最優(yōu)選2mg/劑量。
[0019] 優(yōu)選地，所述疫苗組合物進(jìn)一步包括DDA，DDA含量為1?5000微克/mL，更優(yōu)選 50?150微克/mL。
[0020] 作為本發(fā)明的另一種實(shí)施方式，組合物中還含有DDA，所述DDA為雙十八烷基二甲 基溴化銨的簡(jiǎn)稱(chēng)。通常為每劑量約1微克至約5000微克。其使用量亦可為每劑量約1微 克至約4000微克、每劑量約1微克至約3000微克、每劑量約1微克至約2000微克及每劑 量約1微克至約1000微克。其使用量亦可為每劑量約5微克至約750微克、每劑量約5微 克至約500微克、每劑量約5微克至約200微克、每劑量約5微克至約100微克、每劑量約 15微克至約100微克及每劑量約30微克至約75微克。
[0021] 優(yōu)選地，所述疫苗組合物進(jìn)一步包括藥學(xué)上可以接受的載體，所述藥學(xué)上可以接 受的載體包括任何可用的溶劑、分散介質(zhì)、穩(wěn)定劑、等滲劑、稀釋劑、或防腐劑。
[0022] 術(shù)語(yǔ)"藥學(xué)上可以接受的載體包括任何所用溶劑、等滲劑、分散介質(zhì)、穩(wěn)定劑、稀釋 齊U、防腐劑。如稀釋劑包括但不限于水、磷酸鹽緩沖溶液，鹽水、乙醇、甘油，等滲劑包括但不 限于氯化鈉、右旋糖苷、葡萄糖；穩(wěn)定劑包括蛋白或乙二胺四乙酸二鈉，由于蛋白可以和蛋 白酶結(jié)合，因此具有穩(wěn)定作用。
[0023] 組合物中還可以含有抗生素或防腐劑，包括，例如：慶大霉素、硫柳汞、或氯甲酚； 本領(lǐng)域技術(shù)人員公知可以選用不同類(lèi)別的抗生素或防腐劑。
[0024] 優(yōu)選地，所述疫苗組合物包括PCV20RF2蛋白抗原20微克/mL，鹽酸左旋咪唑 I. 8mg/mL，卡波姆10毫克/mL，以及DDA100微克/mL ;或所述疫苗組合物包括PCV20RF2蛋 白20ug/mL，鹽酸左旋咪唑I. 8mg/mL，卡波姆2mg/mL，以及DDA50微克/mL ;或所述疫苗組合 物包括PCV20RF2蛋白60 μ g/mL，鹽酸左旋咪唑I. 8mg/mL，卡波姆2mg/mL，以及DDA100微克 /!TIT,η
[0025] 作為本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式、圓環(huán)病