專利名稱：藥物復合物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及多糖衍生物等藥物載體與抗腫瘤藥等藥物化合物通過間隔區(qū)(spacer)結合的藥物復合物。
背景技術：
在治療肺癌、消化器官癌癥等實體瘤或白血病等血液癌癥時使用的抗腫瘤藥采用靜脈給藥或口服給藥等給藥途徑全身性給藥后，通過向特定的腫瘤部位移行，阻礙或抑制癌細胞增殖，發(fā)揮治療效果。但是，全身給藥的抗腫瘤藥迅速從血液中進入肝臟、網(wǎng)內(nèi)系臟器，或迅速從尿中排泄出去，因此血中藥濃度低，有時向腫瘤部位的移行會受到限制。另外，由于通常的抗腫瘤藥自身向腫瘤部位移行的選擇性低，抗腫瘤藥遍布在全身的各個細胞、組織中，對正常的細胞和組織也產(chǎn)生細胞毒作用，因此存在嘔吐、發(fā)熱或脫毛發(fā)等副作用發(fā)生率非常高的問題。因此，需要開發(fā)一種使抗腫瘤藥有效而且選擇性地向腫瘤部位移行的手段。
已經(jīng)提出了一種這樣的手段，它是使用具有羧基的多糖衍生物作為藥物載體，使抗腫瘤藥與該多糖衍生物結合，延遲抗腫瘤藥在血液中的消失，同時提高對癌組織的靶向性的方法。例如國際公開WO94/19376號中公開了肽鏈(氨基酸數(shù)1～8)結合在具有羧基的多糖的羧基上，而且通過該肽鏈與阿霉素(Doxorubicin)、柔紅霉素(Daunorubicin)、絲裂霉素C(Mitomycin)或博萊霉素(Bleomycin)等結合的藥物復合物。另外在特公平7-84481號公報中公開了將上述抗腫瘤藥通過席夫堿或酰胺鍵引入羧甲基化的甘露葡聚糖衍生物(mannoglucan)中得到的藥物復合物。這些藥物復合物的特征在于與結合在藥物載體上的抗腫瘤藥自身相比，具有更優(yōu)良的抗腫瘤效果，同時毒、副作用也有所減輕。
另外，使用多元醇化多糖衍生物作為藥物載體的藥物復合物的有關技術已有“有關多糖-肽-阿霉素復合物的研究。多糖衍生物在血液中的穩(wěn)定性與抗腫瘤效果的關系”(第10回日本DDS學會講演要點集，279,1994)；“有關多糖-肽-阿霉素復合物的研究·體內(nèi)動態(tài)與抗腫瘤效果”(第9回日本藥物動態(tài)學會年會講演要點集，292,1994)；第19回研究開發(fā)動向學術討論會(藥品機構主辦)要點集，D-9,1995；以及“有關通過多糖載體向腫瘤輸送藥物的研究”(第12回膠體·界面技術專題論文集，日本化學會，講演要點集，51,1995)等報道。另一方面，作為使抗腫瘤藥與抗體等結合的技術，開發(fā)了使對氨基苯甲氧基羰基與肽基組合的試劑(Dubowchik,G.M.,Tetrahedron Lett.,38,5257,5261,1997)，但是尚不知道在具備上述藥物載體的藥物復合物中的應用。
發(fā)明的公開本發(fā)明人對于多糖衍生物等藥物載體與抗腫瘤藥等藥物化合物通過含有1至8個氨基酸的間隔區(qū)結合的藥物復合物進行悉心的研究，成功地提供了可以使抗腫瘤藥等藥物化合物具有部位選擇性向目的組織移行的藥物復合物(WO97/46260)。但是，已經(jīng)判斷出具備含有1至8個氨基酸的間隔區(qū)的藥物復合物，其藥物化合物的游離速度未必依賴于間隔區(qū)部位的酶解(通過肽酶水解)速度，游離速度有時會影響藥物化合物的立體結構。特別是發(fā)現(xiàn)藥物化合物的反應性官能團(例如氨基)與間隔區(qū)結合的部分存在立體位阻時，這種傾向特別顯著。另外，這種藥物復合物有時通過間隔區(qū)的酶解游離出的藥物化合物殘留有1個至數(shù)個來源于間隔區(qū)的氨基酸，結果有時會造成藥物化合物釋放不均勻。
因此，本發(fā)明的課題是提供一種抗腫瘤藥或抗炎藥等藥物化合物與藥物載體通過含有1至8個氨基酸的間隔區(qū)結合的藥物復合物，它可以使有效成分具有部位選擇性向腫瘤部位移行，而且，藥物化合物的游離速度實質(zhì)上依賴于間隔區(qū)部分的酶解速度。另外，本發(fā)明的另一課題在于提供一種藥物復合物，其藥物化合物的游離速度實質(zhì)上不受藥物化合物立體結構的影響，根據(jù)間隔區(qū)部分的酶解速度可以實現(xiàn)所需的藥物化合物的游離速度。
本發(fā)明人為了解決上述課題進行了悉心的研究，結果發(fā)現(xiàn)抗腫瘤藥或抗炎藥等藥物化合物與藥物載體通過含有1至8個氨基酸的間隔區(qū)結合的藥物復合物中，如果該間隔區(qū)與藥物化合物之間進一步插入氨基苯甲氧基羰基等，間隔部分出現(xiàn)酶解后，氨基苯甲氧基羰基立即進行非酶水解，使藥物化合物游離，而且該藥物復合物其藥物化合物的游離速度不受藥物化合物的立體結構的影響，實質(zhì)上依賴于間隔區(qū)部分的酶解速度。本發(fā)明就是基于這一發(fā)現(xiàn)完成的。本發(fā)明的藥物復合物特征在于不考慮藥物化合物的立體結構，基于間隔區(qū)的酶解速度控制藥物化合物的游離速度。
也就是說，按照本發(fā)明可以提供下述式(Ⅰ)表示的藥物復合物，A-R-NH-Y-CH2-O-CO-Q(式中，A表示作為藥物載體的高分子；R表示含有1個氨基酸的間隔區(qū)或含有通過肽鍵結合的2至8個氨基酸的間隔區(qū)；Y表示可以具有取代基的亞苯基，Q表示藥物化合物的殘基)。該藥物復合物作為例如具備DDS(Drug Delivery System)功能的DDS化合物是有用的。
從另一角度來看，提供了R’-NH-Y-CH2-O-CO-Q表示的化合物(式中，R’表示含有1個氨基酸或含有通過肽鍵結合的2至8個氨基酸，N末端被保護或未被保護的基團；Y表示可以具有取代基的亞苯基，Q表示藥物化合物的殘基)；以及下述式A-R-NH-Y-CH2-O-CO-X表示化合物(式中A表示作為藥物載體的高分子；R表示含有1個氨基酸的間隔區(qū)或含有通過肽鍵結合的2至8個氨基酸的間隔區(qū)；Y表示可以具有取代基的亞苯基，X表示羥基、-O-M(M表示羧基的保護基)或離去基團)。這些化合物作為上述藥物復合物的制備用中間體是有用的。
按照本發(fā)明的優(yōu)選方式，提供了藥物載體為具有羧基的多糖衍生物的上述藥物復合物；R為含有通過肽鍵結合的2至8個氨基酸的間隔區(qū)的上述藥物復合物；Y為可以具有取代基的對亞苯基的上述藥物復合物；Y為沒有取代的對亞苯基的上述藥物復合物；具有羧基的多糖衍生物為羧基C1-4烷基葡聚糖多元醇的上述藥物復合物；構成羧基C1-4烷基葡聚糖多元醇的葡聚糖多元醇是在實質(zhì)上可以完全多元醇化的條件下處理葡聚糖得到的葡聚糖多元醇的上述藥物復合物；羧基C1-4烷基葡聚糖多元醇為羧甲基葡聚糖多元醇的上述藥物復合物；藥物化合物為抗腫瘤藥或抗炎藥的上述藥物復合物；A-R-NH-Y-CH2-O-CO-與藥物化合物的氨基結合的上述藥物復合物；以及藥物化合物為(1S,9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2,3-二氫-9-羥基-4-甲基-1H,12H-苯并〔de〕吡喃并〔3’,4’∶6,7〕吲嗪并〔1,2-b〕喹啉10,13(9H,15H)-二酮的上述藥物復合物。
圖面的簡單說明

圖1表示本發(fā)明的藥物復合物(例1)的GPC(gel permeationchromatography)圖。
圖2表示本發(fā)明的藥物復合物(例1)的紫外吸收光譜。
圖3表示本發(fā)明的藥物復合物(例5)的GPC圖。
圖4表示本發(fā)明的藥物復合物(例5)的紫外吸收光譜。
圖5表示本發(fā)明的藥物復合物(例7)的GPC圖。
圖6表示本發(fā)明的藥物復合物(例7)的紫外吸收光譜。
發(fā)明的最佳實施方式本發(fā)明提供的藥物復合物如式(Ⅰ)A-R-NH-Y-CH2-O-CO-Q所示。式中，Q表示藥物化合物的殘基，本發(fā)明藥物復合物中含有的藥物化合物殘基例如是作為抗腫瘤藥、抗炎藥、抗菌藥等藥物用于治療和/或預防包括人在內(nèi)的哺乳動物疾病的藥物化合物的主要部分結構，至少含有表達其藥物作用所不可缺少的部分?？墒牵撍幬锘衔锏挠猛静⒉粌H限于上述用途，作為藥物化合物也可以使用具有能夠與A-R-NH-Y-CH2-O-CO-所示基團中的羰基結合的1或2個以上反應性官能團(例如氨基、羧基、羥基、巰基、酯基等)的物質(zhì)。本說明書中，稱作藥物化合物的場合，也包括其自身含有具備藥物活性的化合物的主要結構作為其部分結構，在生物體內(nèi)可以再生為該化合物的前藥化合物。
本說明書中的藥物化合物殘基是指假定A-R-NH-Y-CH2-O-CO-所示基團的羰基與藥物化合物殘基的鍵是通過藥物化合物中的反應性官能團與A-R-NH-Y-CH2-O-COOH表示的羧基反應(例如脫水縮合等)形成的場合，結合后藥物復合物中存在的來源于藥物化合物的部分結構。例如，藥物化合物表示D-NH2、D-NH-D’、D-OH和D-SH的場合，藥物化合物的殘基可以分別用D-NH-、D-N(D’)-、D-O-和D-S-表示，使用這些藥物化合物的藥物復合物可以分別用A-R-NH-Y-CH2-O-CO-NH-D、A-R-NH-Y-CH2-O-CO-N(D’)-D、A-R-NH-Y-CH2-O-CO-O-D和A-R-NH-Y-CH2-O-CO-S-D表示?？墒牵珹-R-NH-Y-CH2-O-CO-表示的基團與藥物化合物殘基形成的鍵的種類并不僅限于上述鍵。
藥物化合物優(yōu)選使用例如阿霉素、柔紅霉素、絲裂霉素C或博萊霉素、安西他濱(Cyclocytidine)、長春新堿(leurocristine)、長春堿(vinblastine)、甲氨蝶呤(methotrexate)、鉑類抗腫瘤藥(順鉑或其衍生物)、紫杉醇(taxol)或其衍生物、喜樹堿(camptothecin)或其衍生物(特開平6-87746號公報中記載的抗腫瘤藥，優(yōu)選發(fā)明2記載的(1S,9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2,3-二氫-9-羥基-4-甲基-1H,12H-苯并〔de〕吡喃并〔3’,4’∶6,7〕吲嗪并〔1,2-b〕喹啉10,13(9H,15H)-二酮等)等抗腫瘤藥。另外，還優(yōu)選例如琥珀酸氫化可的松、琥珀酸潑尼松等甾體類抗炎藥，或甲滅酸、氟滅酸、二氯苯胺苯乙酸、布洛芬、替諾立定(tinoridine)等非甾體類抗炎藥的殘基。
Y表示的亞苯基可以是鄰亞苯基或對亞苯基中任意一種。亞苯基具有取代基時，對取代基的種類以及取代基的個數(shù)、取代位置沒有特別的限定。亞苯基的環(huán)上可能存在的取代基例如低級烷基(直鏈或支鏈狀C1- 6烷基或環(huán)狀C3-6烷基等。以下含有低級烷基部分的取代基也同樣。)、鹵代低級烷基(氯甲基、三氟甲基等)、羥基低級烷基(羥甲基等)、低級烷氧基(甲氧基、乙氧基等)、低級鏈烯基(乙烯基、烯丙基等)、低級炔基(丙炔基等)、羥基、鹵素原子(氟原子、氯原子、溴原子或碘原子中任意一種)、羧基、烷氧基羰基(甲氧基羰基等)、烷?；?乙?；?、鹵代烷?；?三氟乙?；?、芳基(苯基、萘基等)、芳烷基(苯甲基等)、芳氧基(苯氧基等)、芳烷氧基(苯甲氧基等)、芳?；?苯甲酰基等)、雜芳基(吡啶基、喹啉基等)、氨基、單或二低級烷基氨基、氨基甲?；⑾趸?、氰基、低級烷基亞磺酰基、低級烷基磺?；?、巰基或低級烷硫基等，但是并不限定于此。
亞苯基的環(huán)上存在2個以上的取代基時，它們可以相同或不同。另外，這些的取代基也可以進一步具有其它的1個或2個以上官能團。這種取代基的例子具體可以舉出氯苯基、甲基氨基甲酰基、氯苯甲基、烷氧基苯甲基等。Y表示的亞苯基優(yōu)選取代或未取代的對亞苯基，特別優(yōu)選未取代的對亞苯基。
R表示間隔區(qū)。本說明書中使用的所謂“間隔區(qū)”的用語是本發(fā)明藥物復合物的部分結構，是指存在于作為藥物載體的高分子和藥物化合物殘基之間，由1個氨基酸或2至8個氨基酸構成的部分，具有在藥物不應游離的組織或血中等使藥物化合物殘基保留在藥物載體上，在藥物化合物應游離的組織(例如腫瘤組織等)中通過酶解游離藥物化合物的作用。作為間隔區(qū)可以使用含有1個氨基酸的間隔區(qū)或含有通過肽鍵結合的2至8個氨基酸的間隔區(qū)。該間隔區(qū)具有1個氨基酸的殘基(是指分別從氨基酸的氨基和羧基上除去1個氫原子和1個羥基得到的殘基)或含有通過肽鍵結合的2至8個氨基酸低聚肽殘基(是指分別從N末端的氨基和C末端的羧基上除去1個氫原子和1個羥基得到的殘基)形態(tài)，通過C末端(含有1個氨基酸的間隔區(qū)的場合為羧基)與NH-Y-CH2-O-CO-Q結合形成肽鍵。
一般，A表示的藥物載體與間隔區(qū)的結合是通過藥物載體的羧基與低聚肽間隔區(qū)的N末端(含有1個氨基酸的間隔區(qū)的場合為氨基)之間的肽鍵形成的。可是，間隔區(qū)與藥物載體之間的結合并不僅限于上述肽鍵，也可以是其它化學鍵，或是利用1個或2個以上間隔區(qū)的鍵。例如間隔區(qū)中含有1個或2個以上的二羧酸化合物殘基(例如琥珀酸等二羧酸的殘基等)作為其結構單元，兩個末端形成羧基時，可以藥物載體中的反應性氨基等結合。
優(yōu)選的間隔區(qū)是含有2至6個氨基酸的低聚肽殘基。構成間隔區(qū)的氨基酸的種類沒有特別的限定，例如可以使用L-或D-氨基酸，優(yōu)選L-氨基酸，除α-氨基酸以外，還可以使用β-丙氨酸、ε-氨基己酸、γ-氨基丁酸等。這種α-氨基酸以外的氨基酸優(yōu)選在間隔區(qū)中處于與藥物載體接近的位置。
使用含有低聚肽的間隔區(qū)時，氨基酸的序列沒有特別的限定，優(yōu)選使用例如間隔區(qū)為-X-Z-表示的二肽殘基(X表示疏水性氨基酸的殘基，Z表示親水性氨基酸的殘基，-X-Z-是指疏水性氨基酸(X)與親水性氨基酸(Z)分別形成N末端側和C末端側，分別從通過肽鍵結合的二肽的N末端的氨基與C末端的羧基除去1個氫原子和1個羥基得到的殘基)，或含有該二肽殘基作為部分肽序列的間隔區(qū)。疏水性氨基酸可以使用例如苯基丙氨酸、酪氨酸、亮氨酸等，親水性氨基酸可以使用例如甘氨酸、丙氨酸等。間隔區(qū)也可以具有這種二肽殘基的交替序列(例如-X-Z-X-Z-、-X-Z-X-Z-X-Z-等)。
由于如果使用含有這種二肽結構的間隔區(qū)，在認為肽酶豐富的腫瘤部位或炎癥部位間隔區(qū)被水解，在該部位短時間游離出高濃度的藥物化合物，因此，含有上述二肽的間隔區(qū)與藥物化合物結合形成的部分結構是本發(fā)明藥物復合物優(yōu)選的部分結構。作為藥物化合物的殘基，在使用依賴于濃度表達抗腫瘤作用的抗腫瘤藥(濃度越高抗腫瘤作用越強的抗腫瘤藥濃度依存型抗腫瘤藥，例如阿霉素等)的殘基時，優(yōu)選使用-X-Z-表示的上述二肽殘基構成的間隔區(qū)或含有該二肽殘基作為部分肽序列的間隔區(qū)。
另一方面，作為藥物化合物的殘基，使用必須在一定濃度以上持續(xù)作用的抗腫瘤藥時(例如甲氨蝶呤等)，有時通過使用上述間隔區(qū)可以達到較高的抗腫瘤效果，但一般并不限于上述間隔區(qū)，從抗腫瘤藥的體內(nèi)動態(tài)的特征或毒性等觀點來看有必要選擇優(yōu)選的間隔區(qū)。另外，一般對于增殖迅速的癌種，優(yōu)選選擇可以短時間游離出高濃度藥物化合物的上述間隔區(qū)。特別是由于間隔區(qū)部分的酶解速度實質(zhì)上是限速步驟，本發(fā)明的藥物復合物中藥物化合物的游離速度可以通過根據(jù)酶解速度的觀點選擇適當?shù)拈g隔區(qū)很容易地達到藥物化合物的所需游離速度。
作為間隔區(qū)可以利用的低聚肽的具體例子記載在特開平11-92405號公報的表1中，這些低聚肽可以很好地用作本發(fā)明的間隔區(qū)。
A表示的藥物載體除多糖衍生物之外，可以使用合成高分子等。作為多糖衍生物以及合成高分子，只要對生物體實質(zhì)上不顯示毒性可以用作藥物載體，可以使用任何一種物質(zhì)。例如以前用于制備藥物復合物的多糖衍生物和合成高分子均可以用于本發(fā)明的藥物復合物。例如具有羧基的多糖衍生物適用于本發(fā)明的藥物復合物，多元醇化多糖衍生物特別合適。另外，合成高分子例如聚乙二醇類，聚谷氨酸、聚天冬氨酸或聚賴氨酸等聚氨基酸類，或N-(2-羥丙基)甲基丙烯酰胺衍生物等聚乙烯化合物的衍生物。
更具體地說，具有羧基的多糖衍生物可以使用例如多糖類或對其進行化學或生物學修飾的衍生物，只要分子中具有羧基即可，可以使用任何一種物質(zhì)。例如除透明質(zhì)酸、果膠酸、海藻酸、軟骨素、肝素等多糖類之外，可以使用對茁酶多糖、葡聚糖、甘露聚糖、甲殼質(zhì)、旋覆花素、左聚糖、木聚糖、阿拉伯聚糖、甘露葡聚糖、殼聚糖、茁酶多糖等多糖的一部分或全部羥基引入具有羧基的官能團的物質(zhì)等。
例如可以優(yōu)選使用對羥基進行羧基C1-4烷基化的物質(zhì)，或使羥基與多元酸的一個羧基形成酯鍵的物質(zhì)。另外，也可以使用將上述多糖類多元醇化后，引入具有羧基的官能團的物質(zhì)。本說明書中使用的所謂“多糖衍生物”這一用語除含有糖作為結構要素的多糖化合物之外，還包括多糖化合物的環(huán)狀糖部位部分地或完全地開環(huán)得到的化合物(例如多元醇化合物等)，必須對其作最廣義的解釋。這些多糖衍生物中，優(yōu)選使用羧基C1-4烷基葡聚糖多元醇或羧基C1-4烷基茁酶多糖多元醇等。以下，具體說明利用羧基C1-4烷基葡聚糖多元醇制備本發(fā)明藥物復合物的場合，本發(fā)明藥物復合物中的藥物載體并不限于羧基C1-4烷基葡聚糖多元醇。
本發(fā)明藥物載體在制備時所使用的羧基C1-4烷基葡聚糖多元醇的多元醇化度沒有特別的限定，構成羧基C1-4烷基葡聚糖多元醇的葡聚糖多元醇是在實質(zhì)上可以完全多元醇化的條件下處理葡聚糖得到的葡聚糖多元醇，優(yōu)選進行多元醇化達到作為DDS化合物耐用的程度。
用于制備羧基C1-4烷基葡聚糖多元醇的葡聚糖的種類沒有特別的限定，也能以任意比例含有α-D-1,6-鍵。例如，可以使用α-D-1,6-鍵的比例為85％以上、90％以上或95％以上的葡聚糖等。葡聚糖的分子量沒有特別的限定，例如可以使用10000至2000000的物質(zhì)，優(yōu)選50000至800000的物質(zhì)。構成羧基C1-4烷基葡聚糖多元醇的羧基C1-4烷基的C1-4烷基可以使用直鏈或支鏈狀的C1-4烷基，具體地說可以使用甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基等，優(yōu)選使用甲基。
使用葡聚糖作為原料時，使葡聚糖依次與大量過剩的過碘酸鈉和硼氫化鈉作用，可以制得將葡聚糖實質(zhì)上完全多元醇化的葡聚糖多元醇?？墒牵暇厶堑亩嘣蓟椒ú⒉幌抻谏鲜龇椒?，只要本領域技術人員可以利用，任何一種方法均可采用。羧基C1-4烷基化可以通過使氯醋酸、溴醋酸、α-氯丙酸、α-甲基-α-氯丙酸、β-氯丙酸、α-甲基-β-氯丙酸、α-氯丁酸、β-氯丁酸、γ-氯丁酸等鹵化C1-4烷基羧酸，優(yōu)選氯醋酸，對葡聚糖多元醇的羥基反應，使羥基部分地或完全地羧基C1-4烷基化進行。
例如，將葡聚糖多元醇溶解于不反應的惰性溶劑(例如水、N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亞砜等)，在堿(例如氫氧化鈉或氫氧化鉀等)存在下添加鹵化C1-4烷基羧酸或其鹽，使之在冰冷條件下至100℃的溫度范圍內(nèi)反應數(shù)分鐘至數(shù)日即可。羧基C1-4烷基引入的程度可以通過例如適當選擇羧基C1-4烷基化的反應溫度和用作試劑的鹵化C1-4烷基羧酸及堿的量容易地調(diào)節(jié)，這種手段是本領域技術人員眾所周知的。對葡聚糖多元醇的羥基的羧基C1-4烷基化程度沒有特別的限定，例如每個糖殘基為0.01～2.0，優(yōu)選0.1～1.0。這樣，可以配制羧基C1-4烷基葡聚糖多元醇的鈉鹽或鉀鹽等堿金屬鹽形態(tài)的水溶液。
除了如上所述制得的堿金屬鹽形態(tài)的多糖衍生物之外，也可以使用有機胺鹽形態(tài)的多糖衍生物作為藥物載體的原料。有機胺鹽形態(tài)的多糖衍生物由于可以高濃度地溶于實質(zhì)上不含水的有機溶劑中，使用這種鹽可以在非水系統(tǒng)中進行反應，有時可以顯著提高反應效率。有機胺的鹽，例如，除三乙胺、三甲胺、三乙醇胺等脂肪族胺類的鹽之外，還可以使用N-甲基吡咯烷、N-甲基哌啶、N-甲基嗎啉、二甲基氨基吡啶等脂環(huán)式或芳香族胺類的鹽、氯化四甲基銨鹽、氯化四乙基銨鹽等季銨鹽等。
由多糖衍生物的鈉鹽轉變成有機胺的鹽可以通過使用離子交換樹脂等進行。例如可以將羧甲基葡聚糖多元醇的鈉鹽溶解于水，用填充有Bio-Rad AG50W-X2(200-400目，H+型)樹脂的柱處理，用水洗脫后，添加三乙胺等有機胺，冷凍干燥。另外，也可以將羧甲基葡聚糖多元醇的鈉鹽溶解于水，使之通過填充有三乙基銨型的樹脂，一步轉變而成。
本發(fā)明的藥物復合物可以通過下述方法制備，例如可以采用適當?shù)姆椒ㄖ苽銻’-NH-Y-CH2-O-CO-Q(式中的定義與上述相同)表示的化合物，必要時除去保護基后，使間隔區(qū)的N-末端氨基與羧甲基葡聚糖多元醇的羧基通過酰胺鍵結合。例如，可以使保護N-末端的肽化合物通過酰胺鍵與NH2-Y-CH2-OH的氨基結合，必要時延長肽鏈后，在羥基處引入CO-X部分或CO-G部分。引入CO-X部分時，進一步將X轉變成Q即可。作為引入CO-X部分所使用的反應試劑，可以使用對硝基苯基二碳酸酯、對硝基苯基氯甲酸酯(X相當于對硝基苯氧基)、1,1’-羰基二咪唑基(X相當于咪唑基)等。作為引入CO-Q部分的方法，可以使用使光氣作用于Q得到的Cl-CO-Q、使對硝基苯基氯甲酸酯作用于Q得到的X-CO-Q(X相當于對硝基苯氧基)。另外，將R’-NH-Y-CH2-O-CO-X轉變成R’-NH-Y-CH2-O-CO-Q時，使藥物化合物或被保護的藥物化合物反應，必要時根據(jù)X和Q的種類也可以在反應系統(tǒng)中添加三乙胺、二異丙基乙胺等堿或1-羥基苯并三唑等活化劑。之后，根據(jù)保護基的種類采用適當?shù)姆椒ǔケＷo基可以得到目的產(chǎn)物。保護基的種類和除去方法已經(jīng)記載在例如T.W.Green and P.G.M.Wuts,“Protective Groups in OrganicSynthesis,2nd ed.”,John Wiley & Sons,Inc.(1991)等中。例如，叔丁基羰基的場合，可以使用三氟醋酸、醋酸、甲酸等酸類，優(yōu)選使用甲酸等比較弱的酸；三苯甲基的場合，可以使用醋酸等酸類。9-芴基甲基羧基的場合，可以使用哌嗪等堿類。
為了形成酰胺鍵，可以使用合成肽鏈所使用的常規(guī)脫水縮合劑，除N,N-二環(huán)己基碳化二亞胺(DCC)等N,N’-二環(huán)烷基碳化二亞胺類、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亞胺(EDAPC)等碳化二亞胺衍生物、1-羥基苯并三唑(HOBT)等苯并三唑衍生物之外，還可以使用1-乙氧基羰基-2-乙氧基-1,2-二羥基喹啉(EEDQ)等。另外，可以采用活性酯法或酰鹵法等進行反應。
使用多糖衍生物在非水系統(tǒng)中進行反應時，只要是實質(zhì)上不含水的有機溶劑，可以溶解反應原料(多糖衍生物的有機胺鹽以及游離或鹽形態(tài)的H-R-NH-Y-CH2-O-CO-Q:H-R表示N末端沒有被保護)即可，可以使用任何一種物質(zhì)。例如使用N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亞砜、乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮、環(huán)丁砜(sulfolane)等較合適。在藥物載體上引入藥物化合物殘基的量沒有特別的限定，可以從藥物化合物殘基的種類以及藥物復合物的體內(nèi)動態(tài)、藥效和毒性等觀點適當選擇。一般可以選擇0.1～30重量％的范圍，優(yōu)選2～15重量％的范圍。藥物載體上引入的藥物化合物殘基的比例可以根據(jù)例如吸光度分析等很容易地確定。
另外，本發(fā)明藥物復合物的制備方法的更具體的實例如實施例所示。本領域技術人員基于上述一般的說明和實施例的具體說明，通過適當選擇原料和反應試劑，并在必要時對反應條件和步驟進行適當?shù)男揎椈蚋淖?，可以制備上述通?Ⅰ)包括的本發(fā)明的藥物復合物。
本發(fā)明的藥物復合物具有下述特征，可以根據(jù)藥物化合物殘基的種類(例如抗腫瘤藥或抗炎藥等藥物化合物的殘基)使之在腫瘤部位或炎癥部位等局部特異性表達所需的藥物活性，而且可以減低藥物化合物自身具有的毒性。例如，具有羧甲基葡聚糖多元醇作為多糖衍生物的藥物復合物具有非常優(yōu)良的血管通透性，具有腫瘤部位選擇性和炎癥部位選擇性。
另外，本發(fā)明的藥物復合物具有下述特征，在腫瘤部位或炎癥部位通過蛋白酶(肽酶)使間隔區(qū)被酶水解，氨基苯甲氧基甲酰胺(carbonylamide)的尿烷鍵立即被水解。因此，本發(fā)明的藥物復合物在游離后，藥物化合物上完全沒有殘留來源于間隔區(qū)的氨基酸，不會影響到藥物化合物自身的藥效。而且，本發(fā)明的藥物復合物具有下述特征，通過選擇間隔區(qū)的種類可以達到適當?shù)乃幬锘衔锏挠坞x速度。
含有本發(fā)明藥物復合物的藥物通常能以冷凍干燥制品等形態(tài)填充到小瓶等中，作為用時溶解型的注射用或輸液用制劑等非口服給藥用制劑用于臨床，這種藥物的制劑形態(tài)并不僅限于上述方式。制備上述制劑時，可以使用溶解助劑、pH調(diào)節(jié)劑、穩(wěn)定劑等本領域可以利用的制劑用添加劑。上述藥物的給藥量沒有特別的限定，通常應當根據(jù)構成藥物化合物殘基的藥物化合物的給藥量、藥物復合物中引入的藥物化合物殘基的量、患者的狀態(tài)、疾病的種類等確定。例如，投給以約6重量％的比例引入特開平6-87746號公報中權利要求2記載的抗腫瘤藥殘基的藥物復合物時，非口服給藥的場合，優(yōu)選一般每日每1m2體表面積一次投給約0.1～100mg，優(yōu)選1～30mg，每3～4周重復操作。
從另一觀點來看提供的本發(fā)明的化合物用下述通式(Ⅱ):R’-NH-Y-CH2-O-CO-Q(式中R’表示含有1個氨基酸或通過肽鍵結合的2至8個氨基酸，N末端被保護或未被保護的基團，Y表示可以具有取代基的亞苯基，Q表示藥物化合物的殘基)。該化合物中，優(yōu)選Y為未取代的對亞苯基，R’為H-Gly-Gly-Phe-Gly-或H-Gly-Gly-Gly-PHe-表示的基團，藥物化合物為(1S,9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2,3-二氫-9-羥基-4-甲基-1H,12H-苯并〔de〕吡喃并〔3’,4’∶6,7〕吲嗪并〔1,2-b〕喹啉10,13(9H,15H)-二酮的化合物。
另外，本發(fā)明也可以提供下述通式(Ⅲ):A-R-NH-Y-CH2-O-CO-X表示的化合物〔式中A表示作為藥物載體的高分子，R表示含有1個氨基酸或含有通過肽鍵結合的2至8個氨基酸的間隔區(qū)，Y表示可以被取代的亞苯基，X表示羥基、-O-M(M表示羧基的保護基)或離去基團〕。羧基保護基的種類沒有特別的限定，只要是本領域技術人員可以利用的物質(zhì)，任何一種均可使用。另外，離去基團只要在羰基碳原子上的取代反應中作為離去基團作用即可，可以使用任何一種物質(zhì)，例如氯原子、溴原子等鹵素原子，乙氧基等烷氧基，對甲苯基磺酰氧基等芳基磺酰氧基等。另外，式(Ⅱ)或式(Ⅲ)中Y、Q或R等符號與式(Ⅰ)中已經(jīng)說明的定義相同。式(Ⅱ)或式(Ⅲ)表示的這些化合物作為本發(fā)明的藥物復合物的制備用中間體是有用的。
實施例以下，結合實施例更具體的說明本發(fā)明，但本發(fā)明的范圍并不僅限于下述實施例。
實施例中，羧甲基葡聚糖多元醇的羧甲基化度(每個糖殘基的羧甲基取代度)通過將羧甲基葡聚糖多元醇的鈉鹽轉變成游離酸型后，溶解于0.1N氫氧化鈉水溶液，用0.1N鹽酸滴定求出。用Bio-Rad AG50W-X2(H+)型柱處理羧甲基葡聚糖多元醇的鈉鹽的水溶液，將通過的液體冷凍干燥，作為試樣使用。將該試樣溶解于一定過剩量的0.1N氫氧化鈉水溶液，用酚酞作為指示劑，用0.1N鹽酸滴定。采取的試樣量為s(mg)、0.1N氫氧化鈉水溶液的一定過剩量為a(ml)、0.1N鹽酸的滴定量為b(ml)，根據(jù)下式13.4(a-b)/[s-5.8(a-b)]求出羧甲基化度。另外，藥物的引入量(重量％)由利用藥物特性吸收的吸光度分析求出。而且，凝膠過濾法按照以下條件進行(柱TSK gel G4000 PWXL、洗脫液0.1M NaCl、流速0.8ml/min、柱溫度40℃)。
另外，DX-8951是特開平6-87746號公報的權利要求2記載的藥物化合物(1S,9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2,3-二氫-9-羥基-4-甲基-1H,12H-苯并〔de〕吡喃并〔3’,4’∶6,7〕吲嗪并〔1,2-b〕喹啉10,13(9H,15H)-二酮，-CO-DX-8951表示該藥物化合物的1-位氨基與-CO-表示的羰基形成肽鍵。DX-8951應當理解為內(nèi)酯環(huán)可以作為閉環(huán)型或開環(huán)型或它們的混合形態(tài)存在。另外，在下述方案中表示的糖鏈的結構單元中引入1個或2個羧甲基，這應當理解為是糖鏈結構單元的一個例子，本發(fā)明藥物復合物的藥物載體部分并不是通過上述結構單元的反復構成的。另外，實施例中的化合物序號對應于以下方案中的化合物序號。例如，實施例5中的化合物2a與方案中的化合物2a對應，該方案中的結構式的肽部分表示GGFG化合物(方案中Peptide=GGFG)。
例1羧甲基葡聚糖多元醇-Gly-Gly-Phe-Gly-NH-p-C6H4-CH2-O-CO-DX8951的合成將葡聚糖T500(20g,Pharmacia公司制，分子量500K)溶解在0.1M醋酸緩沖液(PH5.5,2000ml)中，加入過碘酸鈉(66.0g)的水溶液(2000ml)。避光，在4℃下攪拌10天后，加入乙二醇(14.0ml),攪拌1夜。使用8M氫氧化鈉水溶液調(diào)整反應液至pH7。加入硼氫化鈉(28g)，溶解后，攪拌l夜。用冰冷卻反應液，用乙酸調(diào)整至pH5.5,4℃下攪拌1小時后，用8M氫氧化鈉水溶液調(diào)整至pH7.5。用生物麥克斯-50膜采用超濾法進行脫鹽處理。冷凍干燥未能通過膜的殘留溶液，得到葡聚糖多元醇(10.5g)。該物質(zhì)的分子量(硅膠過濾，茁酶多糖標準)為159K。
將氫氧化鈉(31.5g)溶解在水(225ml)中，向得到的水溶液中加入該葡聚糖多元醇(7.5g)，室溫下使之溶解。冰冷條件下，向該溶液中加入一氯乙酸(45g)使之溶解后，室溫下反應1夜。用乙酸調(diào)整該反應液pH至8后，用生物麥克斯-50膜采用超濾法脫鹽。冷凍干燥未能通過膜的殘留溶液，得到羧甲基葡聚糖多元醇的鈉鹽(8.5g)。該物質(zhì)的分子量(硅膠過濾，茁酶多糖標準)為274K，羧甲基化度為0.4。
向Boc-Gly-Gly-Phe-Gly-OH(875mg)、4-氨基苯甲醇(492mg)、N,N-二甲基甲酰胺(10ml)的混合物中加入1-乙氧基羰基-2-乙氧基-1,2-二羥基喹啉(989mg)。室溫下攪拌1夜，使之反應后，減壓干燥反應液。將得到的殘渣用硅膠柱色譜法(洗脫液二氯甲烷∶甲醇=96∶4溶液)精制，得到化合物(2)800mg。1H-NMR(DMSO-d6)δ:9.73(s,1H),8.38(s,1H),8.17(d,1H,J=7.2Hz),7.91-7.93(m,1H),7.56(d,2H,J=8.0Hz),7.24-7.26(m,4H),7.24(d,2H,J=8.OHz),7.17-7.20(m,1H),4.50-4.54(m,1H),4.44(s,2H),3.66-3.94(m,3H),3.63(dd,1H,J=4.8,16.7Hz),3.56(d,2H,J=5.6Hz),3.09(dd,1H,J=4.8,13.5Hz),2.83(dd,1H,J=9.6,13.5Hz),1.38(s,9H).
將化合物(2)(465mg)、二(4-硝基苯基)碳酸酯(522mg)、二異丙基乙胺(0.224ml)、4-(二甲基氨基)吡啶(10.5mg)和四氫呋喃(3ml)的混合物在室溫下攪拌4天，使之反應后，減壓干燥反應液。將得到的殘渣用硅膠柱色譜法(洗脫液二氯甲烷∶甲醇=99∶1溶液)精制，得到化合物(3)205mg。1H-NMR(DMSO-d6)δ:9.88(s,1H),8.40-8.42(m,1H),8.31(d,2H,J=9.5Hz),8.27-8.28(m,1H),7.92-7.94(m,1H),7.67(d,2H,J=7.9Hz),7.55(d,2H,J=9.5Hz),7.41(d,2H,J=7.9Hz),7.24-7.26(m,4H),7.17-7.20(m,1H),6.93-6.95(m,1H),5.25(s,1H),4.50-4.53(m,1H),3.77-3.95(m,3H),3.61-3.66(m,1H),3.55-3.57(m,2H),3.08(dd,1H,J=4.8,13.5Hz),2.83(dd,1H,J=9.5,13.5Hz),1.38(s,9H).
將化合物(3)(185mg)、DX-8951的甲磺酸鹽(152mg)、1-羥基苯并三唑(54mg)、二異丙基乙胺(0.093ml)和N,N-二甲基甲酰胺(20ml)的混合物在室溫下攪拌2天，使之反應，減壓干燥反應液。將得到的殘渣用硅膠柱色譜法(洗脫液二氯甲烷∶甲醇=96∶4溶液)精制，將得到的黃色固體物質(zhì)再次用硅膠柱色譜法(洗脫液含0.5％乙酸的二氯甲烷∶甲醇=97∶3溶液)精制，得到化合物(4)130mg。1H-NMR(DMSO-d6)δ:9.84(s,1H),8.40-8.41(m,1H),8.19(d,1H,J=8.0Hz),8.04(d,1H,J=8.8Hz),7.92-7.93(m,1H),7.74(d,1H,J=11.1Hz),7.63(d,2H,J=8.0Hz),7.37(d,2H,J=8.0Hz),7.32(s,1H),7.24-7.26(m,4H),7.16-7.20(m,1H),6.94-6.95(m,1H),6.48(s,1H),5.46(d,1H,J=16.7Hz),5.41(d,1H,J=16.7Hz),5.24-5.34(m,3H),5.08(s,2H),4.49-4.52(m,1H),3.92(dd,1H,J=5.6,16.7Hz),3.85(dd,1H,J=5.6,16.7Hz),3.78(dd,1H,J=5.6,16.7Hz),3.63(dd,1H,J=4.8,16.7Hz),3.54-3.56(m,1H),3.31-3.33(m,2H),3.08(dd,1H,J=4.8,13.5Hz),2.83(dd,1H,J=10.3,13.5Hz),2.38(s,3H),1.86-1.89(m,2H),1.37(s,9H),0.88(t,3H,J=7.2Hz)Mass(FAB)；m/e 797(M+1)將化合物(4)(98mg)溶解在三氟乙酸(1.5ml)中，放置1.5小時。將反應液滴加到乙醚(30ml)中，過濾收集沉淀。用乙醚洗滌，得到化合物(5)100mg。1H-NMR(DMSO-d6)δ:9.86(s,1H),8.48-8.61(m,2H),8.37(d,1H,J=8.3Hz),8.00-8.20(m,1H),7.75(d,1H,J=10.7Hz),7.66(d,2H,J=8.8Hz),7.41(d,2H,J=8.8Hz),7.37(s,1H),7.24-7.27(m,4H),7.17-7.19(m,1H),6.48(s,1H),5.72(d,1H,J=19.0Hz),5.33-5.48(m,3H),5.23-5.30(m,1H),5.08-5.11(m,2H),4.58-4.61(m,1H),3.84-3.99(m,3H),3.71(dd,1H,J=4.9,16.6Hz),3.56-3.66(m,2H),3.22-3.30(m,1H),3.12-3.18(m,1H),3.09-3.11(m,1H),2.78-2.83(m,1H),2.46-2.57(m,1H),2.38(s,3H),2.18-2.23(m,1H),1.82-1.93(m,2H),0.90(t,3H,J=7.3Hz)將化合物(5)(95mg)溶解在水(5ml)和甲醇(10ml)中。將該溶液加入到上面得到的羧甲基葡聚糖多元醇鈉鹽(600mg)溶解在水(10ml)和甲醇(20ml)的溶液中。加入水溶性碳化二亞胺(26mg)、1-羥基苯并三唑(15mg)后，用0.1N氫氧化鈉水溶液調(diào)整pH至7.0。室溫下攪拌2小時后，加入水溶性碳化二亞胺(13mg)，室溫下反應1夜。向反應液中加入水(500ml)后，采用超濾膜10K(Filutoron公司制)進行超濾。用0.1N氫氧化鈉水溶液將未能通過膜的殘留溶液調(diào)節(jié)為pH9，使之通過過濾膜(0.16μm,Filutoron公司制)。將通過的溶液用生物麥克斯-50膜采用超濾法脫鹽。將未能通過膜的殘留溶液用微孔濾器(0.22μm)過濾后，冷凍干燥，得到化合物(6)490mg。將該化合物溶解在0.1M氯化鈉水溶液中，GPC(柱東SOH-TSK Gel PW-4000XL、溶劑0.1M NaCl、流速0.8ml/min)分析的結果以及該化合物紫外吸收圖譜(0.1M Tris緩沖液，pH10.0,0.20mg/ml)分別如圖1和圖2所示。以0.1M Tris緩沖液(pH10.0)乙腈=7∶3中在366nm處的吸光度為基礎，定量測定該化合物的藥物化合物殘基的含量為2.3％(w/w)。
例2藥物化合物從藥物復合物的游離將例1得到的藥物復合物溶解在37℃的Meth A(murinefibrosarcoma Meth A)勻漿中或緩沖液中(378μg/ml),20小時后定量游離的DX-8951。制備間隔區(qū)和DX-8951不通過對氨基苯甲氧基羰基結合的化合物，用作比較化合物。結果如表1所示。藥物的游離量用相對于所使用的藥物復合物中藥物量的游離藥物量(％)表示。本發(fā)明的藥物復合物在弱酸性的勻漿中迅速游離，但在緩沖液中幾乎不游離。另一方面，比較化合物在弱酸性的勻漿中只有少量游離，在緩沖液中完全不游離。
表1

-未進行實驗例3Meth A荷瘤小鼠對例1的藥物復合物的最大耐受量(MTD、Maximum Tolerated Dose)將Meth A細胞移植到BALB/c系小鼠上制成Meth A荷瘤小鼠，第20天給與例1的藥物復合物一次。給藥后，經(jīng)時測定體重并觀察有無因毒性死亡，將最大體重減少率、死亡率歸納在表2中。給藥量是換算成DX-8951的無水游離堿的重量。由于在以2.5mg/kg給藥時僅觀察到體重減少，在以10mg/kg投藥時觀察到全部因毒性死亡，所以判斷例1的MTD為5～7.5mg/kg。
表2

a體重的最大減少率(括號內(nèi)為觀察到最大減少的天數(shù))＜0表示未觀察到體重減少。
b死亡的小鼠/使用的小鼠例4例1藥物復合物的抗腫瘤活性將Meth A細胞(murine fibrosarcoma Meth A)移植到BALB/c系小鼠上制成Meth A荷瘤小鼠，移植后第7天給與例1的藥物復合物一次。第21天測定腫瘤的重量，評價對腫瘤的抑制效果和毒性。結果如表3所示。表中，*表示通過Dunnet’s檢驗具有顯著性差異(***p＜0.001,**p＜0.01)，給藥量為換算成DX-8951的無水游離堿的重量，IR表示腫瘤的縮小率?？梢钥闯?，例1的藥物復合物用量依存地發(fā)揮其縮小腫瘤的效果。
表3

a體重的最大減少率(括號內(nèi)為觀察到最大減少的天數(shù))b死亡的小鼠/使用的小鼠例5使用甲酸作為脫保護劑的羧甲基葡聚糖多元醇-Gly-Gly-Phe-Gl y-NH-p-C6H4-CH2-O-CO-DX8951的合成將葡聚糖T500(20g,Pharmacia公司制，分子量500K)溶解在0.1M醋酸緩沖液(PH5.5,2000ml)中，加入過碘酸鈉(66.0g)的水溶液(2000ml)。避光，在4℃下攪拌10天后，加入乙二醇(14.0ml)，攪拌1夜。使用8M氫氧化鈉水溶液調(diào)整反應液至pH7。加入硼氫化鈉(28g)，溶解后，攪拌1夜。用冰冷卻反應液，用乙酸調(diào)整至pH5.5,4℃下攪拌1小時后，用8M氫氧化鈉水溶液調(diào)整至pH7.5。將得到的水溶液用生物麥克斯-50膜采用超濾法進行脫鹽處理。冷凍干燥未能通過膜的殘留溶液，得到葡聚糖多元醇(10.5g)。該物質(zhì)的分子量(硅膠過濾，茁酶多糖標準)為159K。
將氫氧化鈉(31.5g)溶解在水(225ml)中，向得到的水溶液中加入該葡聚糖多元醇(7.5g)，室溫下使之溶解。冰冷條件下，向該溶液中加入-氯乙酸(45g)使之溶解后，室溫下反應1夜。用乙酸調(diào)整該反應液pH至8后，用生物麥克斯-50膜采用超濾法脫鹽。冷凍干燥未能通過膜的殘留溶液，得到羧甲基葡聚糖多元醇的鈉鹽(8.5g)。該物質(zhì)的分子量(硅膠過濾，茁酶多糖標準)為274K，羧甲基化度為0.4。
向Boc-Gly-Gly-Phe-Gly-OH(875mg)、4-氨基苯甲醇(492mg)、N,N-二甲基甲酰胺(10ml)的混合物中加入1-乙氧基羰基-2-乙氧基-1,2-二羥基喹啉(989mg)。室溫下攪拌1夜，使之反應后，減壓干燥反應液。將殘渣用硅膠柱色譜法(洗脫液二氯甲烷∶甲醇=96∶4溶液)精制，得到化合物2a(800mg)。1H-NMR(DMSO-d6)δ:9.73(s,1H),8.38(s,1H),8.17(d,1H,J=7.2Hz),7.91-7.93(m,1H),7.56(d,2H,J=8.0Hz),7.24-7.26(m,4H),7.24(d,2H,J=8.0Hz),7.17-7.20(m,1H),4.50-4.54(m,1H),4.44(s,2H),3.66-3.94(m,3H),3.63(dd,1H,J=4.8,16.7Hz),3.56(d,2H,J=5.6Hz),3.09(dd,1H,J=4.8,13.5Hz),2.83(dd,1H,J=9.6,13.5Hz),1.38(s,9H).
將化合物2a(465mg)、二(4-硝基苯基)碳酸酯(522mg)、二異丙基乙胺(0.224ml)、4-(二甲基氨基)吡啶(10.5mg)和四氫呋喃(3ml)的混合物在室溫下攪拌4天，使之反應后，減壓干燥反應液。將殘渣用硅膠柱色譜法(洗脫液二氯甲烷∶甲醇=99∶1溶液)精制，得到化合物3a(205mg)。1H-NMR(DMSO-d6)δ:9.88(s,1H),8.40-8.42(m,1H),8.31(d,2H,J=9.5Hz),8.27-8.28(m,1H),7.92-7.94(m,1H),7.67(d,2H,J=7.9Hz),7.55(d,2H,J=9.5Hz),7.41(d,2H,J=7.9Hz),7.24-7.26(m,4H),7.17-7.20(m,1H),6.93-6.95(m,1H),5.25(s,1H),4.50-4.53(m,1H),3.77-3.95(m,3H),3.61-3.66(m,1H),3.55-3.57(m,2H),3.08(dd,1H,J=4.8,13.5Hz),2.83(dd,1H,J=9.5,13.5Hz),1.38(s,9H).
將化合物3a(185mg)、DX-8951的甲磺酸鹽(152mg)、1-羥基苯并三唑(54mg)、二異丙基乙基胺(0.093ml)和N,N-二甲基甲酰胺(20ml)的混合物在室溫下攪拌2天，使之反應，減壓干燥反應液。將殘渣用硅膠柱色譜法(洗脫液二氯甲烷∶甲醇=96∶4溶液)精制。將得到的黃色固體物質(zhì)再次用硅膠柱色譜法(洗脫液含0.5％乙酸的二氯甲烷∶甲醇=97∶3溶液)精制，得到化合物4a(130mg)。1H-NMR(DMSO-d6)δ:9.84(s,1H),8.40-8.41(m,1H),8.19(d,1H,J=8.0Hz),8.04(d,1H,J=8.8Hz),7.92-7.93(m,1H),7.74(d,1H,J=11.1Hz),7.63(d,2H,J=8.0Hz),7.37(d,2H,J=8.0Hz),7.32(s,1H),7.24-7.26(m,4H),7.16-7.20(m,1H),6.94-6.95(m,1H),6.48(s,1H),5.46(d,1H,J=16.7Hz),5.41(d,1H,J=16.7Hz),5.24-5.34(m,3H),5.08(s,2H),4.49-4.52(m,1H),3.92(dd,1H,J=5.6,16.7Hz),3.85(dd,1H,J=5.6,16.7Hz),3.78(dd,1H,J=5.6,16.7Hz),3.63(dd,1H,J=4.8,16.7Hz),3.54-3.56(m,1H),3.31-3.33(m,2H),3.08(dd,1H,J=4.8,13.5Hz),2.83(dd,1H,J=10.3,13。5Hz),2.38(s,3H),1.86-1.89(m,2H),1.37(s,9H),0.88(t,3H,J=7.2Hz).
將化合物4a(200mg)溶解在甲酸(4ml)中，放置2小時。將反應液滴加到乙醚(40ml)中。用乙醚洗滌沉淀，得到化合物5a(198mg)。1H-NMR(DMSO-d6)δ:9.90(s,1H),8.48-8.50(m,1H),8.33-8.36(m,1H),8.27-8.30(m,2H),8.00-8.08(m,1H),7.74-7.76(m,1H),7.63(d,1H,J=8.2Hz),7.31-7.39(m,3H),7.21-7.25(m,5H),7.15-7.20(m,1H),5.43-5.48(m,2H),5.22-5.33(m,3H),5.08(s,2H),4.51-4.53(m,1H),3.93(dd,1H,J=5.5,16.5Hz),3.80-3.90(m,2H),3.64-3.72(m,3H),3.20-3.25(m,1H),3.09-3.13(m,1H),3.07(dd,1H,J=4.1,13.8Hz),2.81(dd,1H,J=10.1,13.8Hz),2.37(s,3H),2.15-2.22(m,2H),1.82-1.88(m,2H),0.88(t,3H,J=7.3Hz)將化合物5a(190mg)溶解在水(5ml)和甲醇(10ml)中。將該溶液加入到例1得到的羧甲基葡聚糖多元醇鈉鹽(1.0g)溶解在水(10ml)和甲醇(5ml)的溶液中。加入1-羥基苯并三唑(44mg),1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)-碳化二亞胺(39mg)后，用0.1N氫氧化鈉水溶液調(diào)整pH至7.0。室溫下攪拌3小時后，加入1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)-碳化二亞胺(22mg)，室溫下攪拌1.75小時后，加入1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)-碳化二亞胺(11mg)，在室溫下反應1夜。向反應液中加入0.1N氫氧化鈉水溶液調(diào)整pH至8.9后，用生物麥克斯-50膜采用超濾法脫鹽。將未能通過膜的殘留溶液用微孔濾器(0.22μm)過濾后，冷凍干燥。將得到的無定形物質(zhì)用Sep-PakC18藥筒(cartridge)(Warters公司制)和Bio-rad AGSOW-X8(Na+型)柱精制后，再次用生物麥克斯-50膜采用超濾法脫鹽。將未能通過膜的殘留溶液用微孔濾器(0.22μm)過濾后，冷凍干燥，得到化合物6a(700mg)。將該化合物溶解在0.1M氯化鈉水溶液中，用GPC(柱東SOH-TSK Gel PW-4000XL、溶劑含有20％乙腈的0.1M NaCl水溶液、流速0.8ml/min)分析的結果以及該化合物紫外吸收圖譜(0.1M Tris緩沖液，pH9.0,0.10mg/ml)分別如圖3和圖4所示。以在0.1M Tris緩沖液(pH10.0)∶乙腈=7∶3中366nm的吸光度為基礎，定量測定該化合物的藥物化合物殘基的含量為3.3％(w/w)。
例6使用甲酸作為脫保護劑的羧甲基葡聚糖多元醇-Gly-Gly-Gly-Phe-NH-p-C6H4-CH2-O-CO-DX8951的合成將葡聚糖T500(20g,Pharmacia公司制，分子量500K)溶解在0.1M醋酸緩沖液(PH5.5,2000ml)中，加入過碘酸鈉(66.0g)的水溶液(2000ml)。避光，在4℃下攪拌10天后，加入乙二醇(14.0ml)，攪拌1夜。使用8M氫氧化鈉水溶液調(diào)整反應液至pH7。加入硼氫化鈉(28g)，溶解后，攪拌1夜。用冰冷卻反應液，用乙酸調(diào)整至pH5.5,4℃下攪拌1小時后，用8M氫氧化鈉水溶液調(diào)整至pH7.5。用生物麥克斯-50膜采用超濾法對得到的水溶液進行脫鹽處理。冷凍干燥未能通過膜的殘留溶液，得到葡聚糖多元醇(10.5g)。該物質(zhì)的分子量(硅膠過濾，茁酶多糖標準)為159K。
將氫氧化鈉(31.5g)溶解在水(225ml)中，向得到的水溶液中加入該葡聚糖多元醇(7.5g)，室溫下使之溶解。冰冷條件下，向該溶液中加入一氯乙酸(45g)使之溶解后，室溫下反應1夜。用乙酸調(diào)整該反應液pH至8后，用生物麥克斯-50膜采用超濾法脫鹽。冷凍干燥未能通過膜的殘留溶液，得到羧甲基葡聚糖多元醇的鈉鹽(8.5g)。該物質(zhì)的分子量(硅膠過濾，茁酶多糖標準)為274K，羧甲基化度為0.4。
向Boc-Gly-Gly-Gly-Phe-OH(1000mg)、4-氨基苯甲醇(324mg)、1-羥基苯并三唑(464mg)、N,N-二甲基甲酰胺(10ml)的混合物中加入1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)-碳化二亞胺(571mg)。室溫下攪拌1夜，使之反應后，減壓干燥反應液。將殘渣用硅膠柱色譜法(洗脫液二氯甲烷∶甲醇=92∶8溶液)精制，得到化合物2b(1220mg)。1H-NMR(DMSO-d6)δ:9.91(s,1H),8.25(d,1H,J=3.7Hz),8.08-8.20(m,2H),7.54(d,2H,J=8.3Hz),7.25-7.29(m,4H),7.23(d,2H,J=8.3Hz),7.16-7.21(m,1H),6.95(t,1H,J=5.9Hz),5.08(d,1H,J=5.9Hz),4.62-4.67(m,1H),4.44(d,2H,J=5.9Hz),3.74(dd,1H,J=4.9,5.4Hz),3.65(dd,1H,J=5.9,16.6Hz),3.59(d,2H,J=5.4Hz),3.07(dd,1H,J=5.4,13.7Hz),2.90(dd,1H,J=9.3,13.7Hz),1.37(s,9H).
將化合物2b(1160mg)、二(4-硝基苯基)碳酸酯(1303mg)、二異丙基乙胺(0.555ml)、4-(二甲基氨基)吡啶(26mg)和四氫呋喃(0ml)的混合物在室溫下攪拌4天，使之反應后，減壓干燥反應液。將殘渣用硅膠柱色譜法(洗脫液二氯甲烷∶甲醇=96∶4溶液)精制，得到化合物3b(650mg)。1H-NMR(DMSO-d6)δ:10.07(s,1H),8.31(d,1H,J=8.8Hz),8.24-8.25(m,1H),8.09-8.12(m,2H),7.65(d,2H,J=8.3Hz),7.56(d,2H,J=8.8Hz),7.42(d,2H,J=8.3Hz),7.27-7.28(m,5H),7.18-7.19(m,1H),6.95(s,1H),5.68-5.73(m,1H),5.25(s,2H),4.64-4.69(m,1H),3.58-3.79(m,6H),3.08(dd,1H,J=4.9,13.7Hz),2.91(dd,1H,J=9.8,13.7Hz),1.37(s,9H).
將化合物3b(576mg)、DX-8951的甲磺酸鹽(497mg)、1-羥基苯并三唑(113mg)、二異丙基乙基胺(0.303ml)和N,N-二甲基甲酰胺(10ml)的混合物在室溫下攪拌1夜，使之反應后，減壓干燥反應液。將殘渣用硅膠柱色譜法(洗脫液含0.5％乙酸的二氯甲烷∶甲醇=92∶8溶液)精制，得到化合物4b(290mg)。1H-NMR(DMSO-d6)δ:10.01(s,1H),8.24(d,1H,J=9.8Hz),8.09-8.13(m,2H),8.05(d,1H,J=8.8Hz),7.74(d,1H,J=10.7Hz),7.61(d,2H,J=8.3Hz),7.37(d,2H,J=8.3Hz),7.32(s,1H),7.24-7.27(m,4H),7.17-7.19(m,1H),6.94(s,1H),5.47(d,1H,J=16.1Hz),5.42(d,1H,J=16.1Hz),5.31(d,1H,J=19.5Hz),5.27-5.29(m,1H),5.24(d,1H,J=16.1Hz),5.09(s,2H),4.62-4.67(m,1H),3.73-3.78(m,2H),3.66(d,1H,J=5.4Hz),3.63(d,1H,J=5.4Hz),3.53-3.59(m,2H),3.23-3.27(m,2H),3.07(dd,1H,J=4.9,13.7Hz),2.90(dd,1H,J=9.8,13.7Hz),2.37(s,3H),2.17-2.23(m,2H),1.81-1.90(m,2H),1.36(s,9H),0.89(d,1H,J=6.8Hz).
將化合物4b(200mg)溶解在甲酸(4ml)中，放置2小時。將反應液滴加到乙醚(40ml)中。用乙醚洗滌沉淀，得到化合物5b(198mg)。1H-NMR(DMSO-d6)δ:10.06(s,1H),8.20-8.41(m,3H),8.07(d,1H,J=8.7Hz),7.75(d,1H,J=7.8Hz),7.61(d,2H,J=8.3Hz),7.37(d,2H,J=8.3Hz),7.32(s,1H),7.21-7.30(m,5H),7.18-7.20(m,1H),5.41-5.48(m,2H),5.23-5.33(m,3H),5.08(s,2H),4.62-4.65(m,1H),3.77(s,2H),3.72-3.76(m,1H),3.63(dd,1H,J=5.0,16.5Hz),3.58-3.60(m,1H),3.40(dd,1H,J=6.9,13.7Hz),3.20-3.23(m,1H),3.10-3.13(m,1H),3.06(dd,1H,J=5.0,13.7Hz),2.90(dd,1H,J=9.6,13.7Hz),2.37(s,3H),2.15-2.22(m,2H),1.84-1.90(m,2H),0.88(d,1H,J=6.9Hz).
將化合物5b(100mg)溶解在水(5ml)和甲醇(10ml)中。將該溶液加入到例1得到的羧甲基葡聚糖多元醇鈉鹽(1100mg)溶解在水(10ml)和甲醇(20ml)的溶液中。加入1-羥基苯并三唑(15mg)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)-碳化二亞胺(26mg)后，用0.1N氫氧化鈉水溶液調(diào)整pH至7.0。室溫下攪拌2小時后，加入1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)-碳化二亞胺(25mg)。室溫下攪拌1.5小時后，加入1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)-碳化二亞胺(13mg)，室溫下反應1夜。用0.1N氫氧化鈉水溶液調(diào)整反應液pH至8.5后，用生物麥克斯-50膜采用超濾法脫鹽。將未能通過膜的殘留溶液用微孔濾器(0.22μm)過濾后，冷凍干燥。將得到的無定形物質(zhì)用Sep-PakC18藥筒(Warters公司制)和Bio-rad AG50W-X8(Na+型)柱精制后，再次用生物麥克斯-50膜采用超濾法脫鹽。將未能通過膜的殘留溶液用微孔濾器(0.22μm)過濾后，冷凍干燥，得到化合物6b(405mg)。以在0.1M Tris緩沖液(pH10.0)∶乙腈=7∶3中366nm的吸光度為基礎，定量測定該化合物的藥物化合物殘基的含量為1.7％(w/w)。
例7使用甲酸作為脫保護劑的羧甲基葡聚糖多元醇-Gly-Gly-NH-p-C6H4-CH2-O-CO-DX8951的合成將葡聚糖T500(20g,Pharmacia公司制，分子量500K)溶解在0.1M醋酸緩沖液(PH5.5,2000ml)中，加入過碘酸鈉(66.0g)的水溶液(2000ml)。避光，在4℃下攪拌10天后，加入乙二醇(14.0ml)，攪拌1夜。使用8M氫氧化鈉水溶液調(diào)整反應液至pH7。加入硼氫化鈉(28g)，溶解后，攪拌1夜。用冰冷卻反應液，用乙酸調(diào)整至pH5.5,4℃下攪拌1小時后，用8M氫氧化鈉水溶液調(diào)整至pH7.5。用生物麥克斯-50膜采用超濾法對得到的水溶液進行脫鹽處理。冷凍干燥未能通過膜的殘留溶液，得到葡聚糖多元醇(10.5g)。該物質(zhì)的分子量(硅膠過濾，茁酶多糖標準)為159K。
將氫氧化鈉(31.5g)溶解在水(225ml)中，向得到的水溶液中加入該葡聚糖多元醇(7.5g)，室溫下使之溶解。冰冷條件下，向該溶液中加入一氯乙酸(45g)使之溶解后，室溫下反應1夜。用乙酸調(diào)整該反應液pH至8后，用生物麥克斯-50膜采用超濾法脫鹽。冷凍干燥未能通過膜的殘留溶液，得到羧甲基葡聚糖多元醇的鈉鹽(8.5g)。該物質(zhì)的分子量(硅膠過濾，茁酶多糖標準)為274K，羧甲基化度為0.4。
向Boc-Gly-Gly-OH(2.3g)、4-氨基苯甲醇(2.0g)、1-羥基苯并三唑(3.29g)、N,N-二甲基甲酰胺(20ml)的混合物中加入1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)-碳化二亞胺(4.05g)。室溫下攪拌1夜，使之反應后，減壓干燥反應液。將殘渣用硅膠柱色譜法(洗脫液二氯甲烷∶甲醇=94∶6溶液)精制，得到化合物2c(2.9g)。1H-NMR(DMSO-d6)δ:9.75(s,1H),8.15(s,1H),7.54(d,2H,J=8.3Hz),7.23(d,2H,J=8.3Hz),7.07(s,1H),5.09(t,1H,J=8.6Hz),4.44(d,2H,J=8.6Hz),3.88(s,2H),3.60(s,1H),1.39(s,9H).
將化合物2c(1.0g)、(4-硝基苯基)羧酸二酯(2.72g)、二異丙基乙胺(1.17ml)、4-(二甲基氨基)吡啶(55mg)和四氫呋喃(50ml)的混合物在室溫下攪拌3天，使之反應后，減壓干燥反應液。將殘渣用硅膠柱色譜法(洗脫液二氯甲烷∶甲醇=96∶4溶液)精制，得到化合物3c(376mg)。1H-NMR(DMSO-d6)δ:9.92(s,1H),8.31(d,1H,J=9.3Hz),8.14-8.25(m,2H),7.65(d,2H,J=8.3Hz),7.56(d,2H,J=9.3Hz),7.41(d,2H,J=8.3Hz),7.05(d,1H,J=5.4Hz),5.25(s,2H),3.91(d,2H,J=4.9Hz),3.61(d,2H,J=5.4Hz),1.40(s,9H).
將化合物3c(338mg)、DX-8951的甲磺酸鹽(400mg)、1-羥基苯并三唑(109mg)、二異丙基乙基胺(0.243ml)和N,N-二甲基甲酰胺(20ml)的混合物在室溫下攪拌1夜，使之反應后，減壓干燥反應液。將殘渣用硅膠柱色譜法(洗脫液含0.5％乙酸的二氯甲烷∶甲醇=94∶6溶液)精制，得到化合物4c(460mg)。1H-NMR(DMSO-d6)δ:9.84(s,1H),8.13-8.15(m,1H),8.04(d,1H,J=8.8Hz),7.73(d,1H,J=10.7Hz),7.60(d,2H,J=8.3Hz),7.37(d,2H,J=8.3Hz),7.32(s,1H),7.04(d,1H,J=5.9Hz),6.48(s,1H),5.46(d,1H,J=16.1Hz),5.41(d,1H,J=16.1Hz),5.31(d,1H,J=19.0Hz),5.26-5.29(m,1H),5.24(d,1H,J=19.0Hz),5.08(s,2H),3.90(d,2H,J=4.9Hz),3.61(d,2H,J=5.9Hz),3.07-3.12(m,2H),2.37(s,3H),2.15-2.23(m,2H),1.83-1.92(m,2H),1.39(s,9H),0.89(d,1H,J=7.3Hz).
將化合物4c(100mg)溶解在甲酸(4ml)中，放置2小時。將反應液滴加到乙醚(40ml)中。用乙醚洗滌沉淀，得到化合物5c(98mg)。1H-NMR(DMSO-d6)δ:10.02(s,1H),8.24-8.30(m,3H),8.05-8.09(m,1H),7.73-7.76(m,2H),7.59(d,2H,J=6.6Hz),7.34-7.38(m,3H),6.51(s,1H),5.41-5.49(m,2H),5.24-5.31(m,3H),5.08(s,2H),3.95(s,2H),3.28(s,2H),3.07-3.14(m,2H),2.39(s,3H),2.14-2.28(m,2H),1.86-1.90(m,2H),0.90(d,1H,J=6.0Hz).
將化合物5c(95mg)溶解在水(15ml)和甲醇(15ml)中。將該溶液加入到例1得到的羧甲基葡聚糖多元醇鈉鹽(1000mg)溶解在水(15ml)和甲醇(15ml)的溶液中。加入1-羥基苯并三唑(28mg)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)-碳化二亞胺(53mg)后，用0.1N氫氧化鈉水溶液調(diào)整pH至7.0。室溫下攪拌3小時后，加入1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)-碳化二亞胺(26mg)。室溫下攪拌1.5小時后，加入1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)-碳化二亞胺(12mg)，室溫下反應1夜。用0.1N氫氧化鈉水溶液調(diào)整反應液pH至8.5后，用生物麥克斯-50膜采用超濾法脫鹽。將未能通過膜的殘留溶液用微孔濾器(0.22μm)過濾后，冷凍干燥。將得到的無定形物質(zhì)用Sep-PakC18筒(Warters公司制)和Bio-rad AG5OW-X8(Na+型)柱精制后，再次用生物麥克斯-50膜采用超濾法脫鹽。將未能通過膜的殘留溶液用微孔過濾器(0.22μm)過濾后，冷凍干燥，得到化合物6c(588mg)。將該化合物溶解在0.1M氯化鈉水溶液中后，用GPC(柱東SOH-TSK GelPW-4000XL、溶劑含有20％乙腈的0.1MNaCl水溶液、流速0.8ml/min)分析的結果以及該化合物紫外吸收圖譜(0.1M Tris緩沖液，pH9.0,0.12mg/ml)分別如圖5和圖6所示。以在0.1M Tris緩沖液(pH10.0)乙腈=7∶3中366nm的吸光度為基礎，定量測定該化合物的藥物化合物殘基的含量為3.3％(w/w)。
例8由藥物復合物游離的藥物化合物將例5、6和7得到的藥物復合物溶解在37℃的Meth A(murinefibrosarcoma Meth A)勻漿中或緩沖液中(50μg/ml),20小時后定量游離的DX-8951。制備間隔區(qū)和DX-8951不通過對氨基苯甲基氧基羰基結合的化合物，用作比較化合物。結果如表4所示。藥物的游離量用相對于所使用的藥物復合物中的藥物量的游離藥物量(％)表示。例5、6和7的藥物復合物在弱酸性的勻漿中迅速游離，但在緩沖液中幾乎不游離。另一方面，比較化合物在弱酸性的勻漿中只有少量游離，在緩沖液中完全不游離。
表4反應系 例5 例6 例7 比較化合物Meth A 勻漿(pH4.5) 110.69 15.48 0.44 0.85Meth A 勻漿(pH5.5) 110.31 4.97 0.37 0.12Meth A 勻漿(pH6.5) 42.71 1.78 0.55 0.01緩沖液 (pH4.5) 0.790.12 0.15 0.00緩沖液 (pH5.5) 0.710.19 0.12 0.00緩沖液 (pH6.5) 0.8 0.23 0.16 0.00血漿0.130.51 0.12 0.00例9Meth A荷瘤小鼠對例5、例6、例7的藥物復合物的最大耐受量(MTD、Maximum Tolerated Dose)將Meth A細胞移植到BALB/c系小鼠上制成Meth A荷瘤小鼠，第13天給與例5、例6和例7中得到的藥物復合物一次。給藥后，經(jīng)時測定體重、觀察有無因毒性死亡，最大體重減少率、死亡率歸納在表5中。給藥量為換算成DX-8951的無水游離堿的重量。
表5化合物給藥量 BWLmaxa(％)[day]Nb(mg/kg)對照 0＜0 0/3例51027.1[18]3/35 28.6[18]3/32.5 28.9[20]3/31.25 5.0[18] 0/30.625 2.0[14] 0/3例61027.1[18]3/35 24.0[18]3/32.5 22.1[20]0/31.25 2.4[14] 0/3例73014.6[16]3/32014.2[16]3/31013.7[16]3/35 25.4[18]3/32.5 31.0[21]3/3a體重的最大減少率(括號內(nèi)為觀察到最大減少的天數(shù))＜0表示未能觀察到體重減少。
b死亡的小鼠/使用的小鼠從能夠觀察到體重減少和死亡小鼠的給藥量，判斷各個復合物的MTD如下所示。
表6MTD(mg/kg)例5 1.25～2.5例6 2.5例7 ＜2.5例5中所得藥物復合物的MTD是例1中所得藥物復合物的MTD(參照例3)的約1/3，使用例1中所得藥物復合物時DX-8951的游離率(參照例2的表)是使用例5中所得藥物復合物時DX-8951的游離率的約1/3(參照例8的表)。
例10例5和例6所示藥物復合物的抗腫瘤活性將Meth A細胞移植到BALB/c系小鼠上制成Meth A荷瘤小鼠，移植后第7天給與例1、例5和例6所示的藥物復合物一次。第21天測定腫瘤的重量，評價對腫瘤的抑制效果和毒性。結果如表7所示。表中*表示通過Dunnet’s檢驗具有顯著性差異(***p＜0.001,**p＜0.01,*p＜0.05)，給藥量為換算成DX-8951的無水游離堿的重量，IR表示腫瘤的縮小率。可以看出，例5和例6的藥物復合物用量依存地影響其縮小腫瘤的效果。
另外，例5所示藥物復合物最小有效用量是例1所示藥物復合物最小有效用量的約1/3，對于在腫瘤勻漿中的DX-8951的游離率(參照例2的表和例8的表)和Meth A荷瘤小鼠的MTD(參照例33的表和例9)，與觀察到同樣的背離相互關聯(lián)。
表7化合物 給藥量 腫瘤重量平均值 IR BWLmaxaNb(mg/kg) (g)(％) (％)[day]對照 0 2.624±0.417 0 ＜0 0/6例1 7.5 0.005±0.003***100 26.1[16]2/65 0.004±0.001***100 4.0[13] 0/62.5 0.031±0.014***99＜0 0/61.250.775±0.207***71＜0 0/60.625 1.489±0.215**43＜0 0/6例5 1.875 0.011±0.003***100 12.3[13]0/61.250.010±0.004***100 ＜0 0/60.625 0.328±0.164***88＜0 0/60.3125 1.128±0.173***57＜0 0/60.15625 2.394±0.231 9 ＜0 0/6例6 2.5 0.012±0.004***100 25.9[13]3/61.250.016±0.008***99＜0 0/60.625 0.272±0.066***90＜0 0/60.3125 1.419±0.163**46＜0 0/60.15625 1.645±0.191*37＜0 0/6a體重的最大減少率(括號內(nèi)為觀察到最大減少的天數(shù))＜0表示未能觀察到體重減少。
b死亡的小鼠/使用的小鼠工業(yè)實用性本發(fā)明的藥物復合物可以使抗腫瘤藥和抗炎藥等藥物化合物具有部位選擇性，向腫瘤部位等移行，并在該部位迅速游離出藥物化合物。另外，由于游離后的藥物化合物中未殘留來源于間隔區(qū)部分的氨基酸，還具有能夠確實發(fā)揮所需藥物化合物的藥效的特征。
權利要求
1．下述式表示的藥物復合物，A-R-NH-Y-CH2-O-CO-Q(式中，A表示作為藥物載體的高分子；R表示含有1個氨基酸的間隔區(qū)或含有通過肽鍵結合的2至8個氨基酸的間隔區(qū)；Y表示可以具有取代基的亞苯基，Q表示藥物化合物的殘基)。
2．按權利要求1所述的藥物復合物，藥物載體為具有羧基的多糖衍生物。
3．按權利要求1或2所述的藥物復合物，R為含有通過肽鍵結合的2至8個氨基酸的間隔區(qū)。
4．按權利要求1至3中任意一項所述的藥物復合物，Y為可以具有取代基的對亞苯基。
5．按權利要求1至3中任意一項所述的藥物復合物，Y為沒有取代的對亞苯基。
6．按權利要求2至5中任意一項所述的藥物復合物，具有羧基的多糖衍生物為羧基C1-4烷基葡聚糖多元醇。
7．按權利要求6所述的藥物復合物，構成羧基C1-4烷基葡聚糖多元醇的葡聚糖多元醇是在實質(zhì)上可以完全多元醇化的條件下處理葡聚糖得到的葡聚糖多元醇。
8．按權利要求6或7所述的藥物復合物，羧基C1-4烷基葡聚糖多元醇為羧甲基葡聚糖多元醇。
9．按權利要求1至8中任意一項所述的藥物復合物，藥物化合物為抗腫瘤藥或抗炎藥。
10．按權利要求1至9中任意一項所述的藥物復合物，具有氨基的藥物化合物通過該氨基與A-R-NH-Y-CH2-O-CO-結合。
11．按權利要求10所述的藥物復合物，藥物化合物為(1S,9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2,3-二氫-9-羥基-4-甲基-1H,12H-苯并〔de〕吡喃并〔3’,4’∶6,7〕吲嗪并〔1,2-b〕喹啉10,13(9H,15H)-二酮。
12．按權利要求11所述的藥物復合物，R為-Gly-Gly-Phe-Gly-。
13．按權利要求11所述的藥物復合物，R為-Gly-Gly-Gly-Phe-。
14．下式表示的DDS化合物，A-R-NH-Y-CH2-O-CO-Q(式中，A表示作為藥物載體的高分子；R表示含有1個氨基酸的間隔區(qū)或含有通過肽鍵結合的2至8個氨基酸的間隔區(qū)；Y表示可以具有取代基的亞苯基，Q表示藥物化合物的殘基)。
15．按權利要求14所述的DDS化合物，藥物化合物為(1s,9s)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2,3-二氫-9-羥基-4-甲基-1H,12H-苯并〔de〕吡喃并〔3’,4’∶6,7〕吲嗪并〔1,2-b〕喹啉10,13(9H,15H)-二酮。
16．按權利要求15所述的DDS化合物，R為-Gly-Gly-Phe-Gly-。
17．按權利要求15所述的DDS化合物，R為-Gly-Gly-Gly-Phe-。
18．R’-NH-Y-CH2-O-CO-Q表示的化合物(式中，R’表示含有1個氨基酸或含有通過肽鍵結合的2至8個氨基酸，N末端被保護或未被保護的基團；Y表示可以具有取代基的亞苯基，Q表示藥物化合物的殘基)。
19．按權利要求18所述的化合物，Y為未取代的對亞苯基，R’為H-Gly-Gly-Phe-Gly-表示的基團，藥物化合物為(1S,9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2,3-二氫-9-羥基-4-甲基-1H,12H-苯并〔de〕吡喃并〔3’,4’∶6,7〕吲嗪并〔1,2-b〕喹啉10,13(9H,15H)-二酮。
20．按權利要求18所述的化合物，Y為未取代的對亞苯基，R’為H-Gly-Gly-Gly-Phe-表示的基團，藥物化合物為(1S,9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2,3-二氫-9-羥基-4-甲基-1H,12H-苯并〔de〕吡喃并〔3’,4’∶6,7〕吲嗪并〔1,2-b〕喹啉10,13(9H,15H)-二酮。
21．下式A-R-NH-Y-CH2-O-CO-X(式中A表示作為藥物載體的高分子；R表示含有1個氨基酸或含有通過肽鍵結合的2至8個氨基酸的間隔區(qū)；Y表示可以具有取代基的亞苯基，X表示羥基、-O-M(M表示羧基的保護基)或離去基團)表示的化合物。
22．權利要求18至21中任意一項所述的化合物在制備權利要求1至11中任意一項所述的藥物復合物中的用途。
全文摘要
下述式A－R－NH－Y－CH
文檔編號A61K47/48GK1310631SQ99808979
公開日2001年8月29日 申請日期1999年5月21日 優(yōu)先權日1998年5月22日
發(fā)明者洲崎浩, 井上和泓, 久我洋 申請人:第一制藥株式會社