專利名稱：環(huán)狀促生長素抑制素類似物的制作方法
背景技術(shù)：
本發(fā)明涉及含有咪唑順式酰胺鍵模擬物的環(huán)狀衍生物，該化合物可選擇性地與促生長素抑制素受體亞型結(jié)合。本發(fā)明還涉及制備本發(fā)明化合物的方法。
促生長素抑制素(SRIF)是一種在3位和14位之間含有二硫鍵的環(huán)狀十四肽激素，它可以抑制生長激素(GH)和甲狀腺刺激激素(TSH)的釋放、抑制胰島素和胰高血糖素的釋放以及減少胃的分泌。促生長素抑制素由氨基肽酶和羧基肽酶代謝，作用時間很短。
促生長素抑制素可與五種不同的受體(SSTR)亞型結(jié)合，對每一種亞型都有較高的親和性。本發(fā)明較小的、剛性較強的類似物對多種受體亞型顯示出很高的選擇性。與不同類型的促生長素抑制素亞型結(jié)合與治療如下病癥和/或疾病有關(guān)。2和5型的激活與生長激素抑制、特別是GH分泌腺瘤(肢端肥大癥)和TSH分泌腺瘤有關(guān)。激活2型但不激活5型與治療催乳素分泌腺瘤有關(guān)。與激活促生長素抑制素亞型有關(guān)的其它適應(yīng)癥是再狹窄、胰島素和/或胰高血糖素的抑制，特別是糖尿病、高脂血癥、胰島素不敏感、X綜合征、血管病、增殖性視網(wǎng)膜病、黎明現(xiàn)象和腎?。晃杆岱置诘囊种?，特別是消化性潰瘍、腸皮膚瘺和胰皮膚瘺、過敏性腸疾病、傾倒綜合征、水瀉綜合征、與AIDS有關(guān)的腹瀉、化療引起的腹瀉、急性或慢性胰腺炎和胃腸激素分泌腫瘤；癌癥如肝細(xì)胞瘤的治療；血管生成的抑制、炎性疾病如關(guān)節(jié)炎的治療；慢性同種異體移植物排斥反應(yīng)；血管成形術(shù)；預(yù)防移植血管和胃腸出血。促生長素抑制素激動劑還可用于降低患者的體重。據(jù)報道，促生長素抑制素激動劑還可用于抑制幽門螺旋桿菌的增殖。
一個優(yōu)選的式(I)化合物是化合物H-Trp-D-Trp-Lys-Abu-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly-OH。
另一方面，本發(fā)明提供了式(II)的化合物或其可藥用的鹽， 其中，Y和Z在每次出現(xiàn)時彼此獨立地是D-或L-天然或非天然的α-氨基酸；
m是0或1到10的整數(shù)；n在每次出現(xiàn)時彼此獨立地是0至6；R1在每次出現(xiàn)時彼此獨立地是H、(C1-C4)烷基或芳基-(C1-C4)烷基；R2是H或選自(C1-C4)烷基、苯基、苯基-(C1-C4)烷基和雜環(huán)基-(C1-C4)烷基的選擇性取代的部分，其中，選擇性取代的部分選擇性地被一個或多個取代基所取代，所述取代基彼此獨立地選自(C1-C4)烷基、環(huán)烷基、-O-R6、-S(O)q-R7、-N(R9R9)、-NHCO-R6、-NHSO2R9、-CO2R9、-CONR9R9和-SO2NR9R9，其中q是0、1、2或3；R3和R4彼此獨立地是H、鹵素或選自(C1-C4)烷基、環(huán)烷基、芳基和芳基-(C1-C4)烷基的選擇性取代的部分；其中，選擇性取代的部分選擇性地被一個或多個取代基所取代，所述取代基選自O(shè)H、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、芳氧基、芳基-(C1-C4)烷氧基、-NR9R9、-COOH、-CONR9R9和鹵素；或者R3和R4與它們所連接的碳合在一起形成選擇性取代的芳基，其中的芳基選擇性地被一個或多個取代基所取代，所述取代基彼此獨立地選自O(shè)H、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、芳氧基、芳基-(C1-C4)烷氧基、-NR9R9、-COOR5、-CONR9R9和鹵素；R5在每次出現(xiàn)時彼此獨立地是H或選自(C1-C4)烷基和芳基-(C1-C4)烷基的選擇性取代的部分，其中，選擇性取代的部分選擇性地被一個或多個取代基所取代，所述取代基彼此獨立地選自(C1-C4)烷基、OH、(C1-C4)烷氧基、芳氧基、NO2、芳基-(C1-C4)烷氧基、-NR9R9、COOH、-CONR9R9和鹵素；R6在每次出現(xiàn)時彼此獨立地選自H、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、芳基-(C1-C4)烷基和芳基-(C1-C4)烷氧基；當(dāng)q是3時，R7是H；或者當(dāng)q是0、1或2時，R7在每次出現(xiàn)時彼此獨立地選自(C1-C4)烷基、芳基或芳基-(C1-C4)烷基；
R9在每次出現(xiàn)時彼此獨立地選自H、NO2、(C1-C4)烷基、芳基和芳基-(C1-C4)烷基；X1是天然或非天然的D-或L-α-氨基酸，其中，當(dāng)X1是Phe、Nal、Trp、Tyr、Pal或His時，其芳環(huán)在碳或氮上選擇性地被R6所取代，或者當(dāng)X1是Ser或Thr時，其側(cè)鏈氧選擇性地被一個或多個R1所取代；X2是D-或L-Trp、N-甲基-D-Trp或N-甲基-L-Trp；X3是Lys、α-N-甲基-Lys或ε-N-(C1-C4)烷基-Lys或ε-N-[芳基-(C1-C4)烷基]-Lys；X4是天然或非天然的D-或L-α-氨基酸，其中，當(dāng)X4是Phe、Nal、Trp、Tyr或His時，其芳環(huán)在碳或氮上選擇性地被R8所取代，或者當(dāng)X4是Ser、Tyr或Thr時，其側(cè)鏈氧可以被一個或多個R1所取代。
X1、X2、X3和X4之間的鍵與X1和Z之間的鍵以及X4和Y之間的鍵一樣是酰胺鍵。
一組優(yōu)選的式(II)化合物(指定為A組)是，其中，n是2；m是0或1至5；R1在每次出現(xiàn)時彼此獨立地是H、甲基或芳基-(C1-C4)烷基；R2是選自苯基-(C1-C4)烷基和雜環(huán)基-(C1-C4)烷基的選擇性取代的部分，其中，選擇性取代的部分被選自(C1-C4)烷基和-O-R6的取代基所取代；R3和R4彼此獨立地是H、鹵素或選自(C1-C4)烷基和芳基的選擇性取代的部分；其中，選擇性取代的部分選擇性地被選自O(shè)H、(C1-C4)烷氧基、芳氧基和鹵素的取代基所取代。
A組中，一組優(yōu)選的化合物(指定為B組)是，其中，X1是Phe、Nal、Trp、Tyr、Pal或His，其中，它們的芳環(huán)在碳或氮上選擇性地被R6所取代；
X4是Val、Abu、Ser、Thr、Nal、Trp、Tyr或His，其中，Nal、Trp、Tyr和His的芳環(huán)在碳和/或氮上選擇性地被R8所取代，或者當(dāng)X4是Ser、Tyr或Thr時，側(cè)鏈氧選擇性地被R1所取代。
B組化合物中，一組優(yōu)選的化合物(指定為C組)是，其中，X1是Phe、Trp或Tyr，其中，它們的芳環(huán)在碳或氮上選擇性地被R6所取代；X2是D-Trp或N-甲基-D-Trp；X3是Lys或α-N-甲基-Lys；X4是Val、Thr、Abu、Nal或Tyr，其中Thr和Tyr的羥基的側(cè)鏈氧選擇性地被R1所取代；R1在每次出現(xiàn)時彼此獨立地是H、甲基或芐基；R2是選自苯甲基和雜環(huán)基-甲基的選擇性取代的部分，其中，選擇性取代的部分被選自(C1-C4)烷基和-O-R6的取代基所取代；R3是(C1-C4)烷基或選擇性取代的芳基；其中，選擇性取代的芳基被選自O(shè)H、(C1-C4)烷氧基、芳氧基和鹵素的取代基所取代；R4是H；R6在每次出現(xiàn)時彼此獨立地選自H和芳基-(C1-C4)烷氧基。
C組化合物中，一組優(yōu)選的化合物(指定為D組)是，其中X1是Phe、Trp、Tyr或Tyr(OBzl)；X4是Val、Thr、Abu、Nal或Tyr，其中Thr和Tyr的羥基選擇性地被芐基所取代；m是0、2或4；R2是選自苯甲基或3-吲哚基甲基的選擇性取代的部分，其中，該選擇性取代的部分選擇性地被-O-R6所取代；R3是1，1-二甲基乙基或選擇性取代的芳基；其中，選擇性取代的芳基選擇性地被選自O(shè)H、(C1-C4)烷氧基和鹵素的基團(tuán)所取代；D組化合物中，一組優(yōu)選的化合物(指定為E組)是，其中R2是苯甲基；R3是1，1-二甲基乙基或選擇性取代的苯基，其中，選擇性取代的苯基選擇性地被OH或OCH3所取代；R6在每次出現(xiàn)時彼此獨立地選自H或芐基甲氧基。
E組化合物中，一組優(yōu)選的化合物(指定為F組)是，環(huán)[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Tyr(OBzl)-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Thr(OBzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Thr-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Abu-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Phe-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Pheψ(4-(1，1-二甲基乙基)咪唑)Gly]，環(huán)[Phe-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Phe-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Phe-D-Trp-Lys-Tyr-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Phe-D-Trp-Lys-Tyr-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Phe-D-Trp-Lys-Nal-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑)-Gly]，
環(huán)[Phe-D-Trp-Lys-Nal-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-(γ)Abu]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Pheψ(4-(4-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Pheψ(4-(苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-(ε)Ahx]和環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑-(γ)Abu]。
F組化合物中，一組優(yōu)選的化合物(指定為G組)是，環(huán)[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Tyr(OBzl)-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Thr(OBzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Thr-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Abu-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Phe-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Pheψ(4-(1，1-二甲基乙基)咪唑)Gly]，環(huán)[Phe-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Phe-D-Trp-Lys-Tyr-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑)-Gly]和環(huán)[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑)-Gly]。
G組化合物中，一組優(yōu)選的化合物(指定為H組)是，
環(huán)[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Thr-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Abu-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Phe-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]或環(huán)[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑)-Gly]。
H組化合物中，一組優(yōu)選的化合物(指定為I組)是，環(huán)[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Thr-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑)-Gly]和環(huán)[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑)-Gly]。
F組化合物中，另一組優(yōu)選的化合物(指定為J組)是，環(huán)[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Thr(OBzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Thr-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Abu-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Phe-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Pheψ(4-(1，1-二甲基乙基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Phe-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Phe-D-Trp-Lys-Tyr-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑)-Gly]，
環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Phe-D-Trp-Lys-Nal-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Phe-D-Trp-Lys-Nal-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-(γ)Abu]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(4-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-(ε)Ahx]和環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑-(γ)Abu]。
J組化合物中，一組優(yōu)選的化合物(指定為K組)是，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Thr-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Phe-D-Trp-Lys-Nal-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-(γ)Abu]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(4-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]和環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(苯基)咪唑)-Gly]。
K組化合物中，一組優(yōu)選的化合物(指定為L組)是，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-(γ)Abu]，
環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(4-甲氧基苯基)咪唑-Gly]和環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(苯基)咪唑)-Gly]。
另一方面，本發(fā)明提供了含有有效量的式(I)或式(II)化合物或其可藥用鹽以及可藥用載體的藥物組合物。
另一方面，本發(fā)明還提供了在存在需要的哺乳動物中誘導(dǎo)促生長素抑制素受體激動劑作用的方法，該方法包括，向所述哺乳動物施用有效量的式(I)或式(II)化合物或其可藥用鹽。
另一方面，本發(fā)明還提供了在存在需要的哺乳動物中誘導(dǎo)促生長素抑制素受體拮抗劑作用的方法，該方法包括，向所述哺乳動物施用有效量的式(I)或式(II)化合物或其可藥用鹽。
另一方面，本發(fā)明還提供了在需要治療的哺乳動物中治療催乳素分泌腺瘤再狹窄、糖尿病、高脂血癥、胰島素不敏感、X綜合征、血管病、增殖性視網(wǎng)膜病、黎明現(xiàn)象、腎病、胃酸分泌、消化性潰瘍、腸皮膚瘺和胰皮膚瘺、過敏性腸疾病、傾倒綜合征、水瀉綜合征、與AIDS有關(guān)的腹瀉、化療引起的腹瀉、急性或慢性胰腺炎、胃腸激素分泌腫瘤、癌癥、肝細(xì)胞瘤、血管生成、炎性疾病、關(guān)節(jié)炎、慢性同種異體移植物排斥反應(yīng)、血管成形術(shù)、移植血管出血或胃腸出血的方法，該方法包括，向所述哺乳動物施用式(I)或式(II)化合物或其可藥用鹽。
另一方面，本發(fā)明還提供了在需要治療的哺乳動物中抑制幽門螺旋桿菌增殖的方法，該方法包括，向所述哺乳動物施用式(I)或式(II)化合物或其可藥用鹽。
另一方面，本發(fā)明提供了制備下面式中化合物的方法 或 該方法包括，通過裂解Prt基團(tuán)將下面式中的化合物脫保護(hù)， 或 其中，Prt是氨基酸側(cè)鏈保護(hù)基；Y和Z彼此獨立地是選擇性帶有保護(hù)的側(cè)鏈的D-或L-天然或非天然α-氨基酸，其中H-N*是Y所定義的N-末端的氨基酸的氨基，O＝C*是Z所定義的C-末端氨基酸的羧基；n在每次出現(xiàn)時彼此獨立地是1至50；其它所有變量均如以上所示的式(I)中所定義。
另一方面，本發(fā)明提供了制備下面式中化合物的方法， 或 該方法包括； 或 對于式(a)化合物，通過將式(a’)的化合物與肽偶聯(lián)劑和添加劑反應(yīng)，在Y所定義的最后一個氨基酸的末端氨基和Z所定義的最后一個氨基酸的末端羧基之間形成酰胺鍵；或者，對于式(b)化合物，通過將式(b’)的化合物與肽偶聯(lián)劑和添加劑反應(yīng)，在末端氨基和Z所定義的最后一個氨基酸的末端羧基之間形成酰胺鍵；或者，對于式(c)化合物，通過將式(c’)的化合物與肽偶聯(lián)劑和添加劑反應(yīng)，在Y所定義的最后一個氨基酸的末端氨基和末端羧基之間形成酰胺鍵；其中，Prt是氨基酸側(cè)鏈保護(hù)基；Y和Z彼此獨立地是選擇性帶有保護(hù)的側(cè)鏈的D-或L-天然或非天然α-氨基酸，其中H-N*是Y所定義的N-末端的氨基酸的氨基，O＝C*是Z所定義的C-末端氨基酸的羧基；n在每次出現(xiàn)時彼此獨立地是1至50；其它所有變量均如以上所示的式(I)中所定義。
另一方面，本發(fā)明提供了制備下式化合物的方法，
該方法包括，將式 的化合物與式X’-CH(R3)CO(R4)的α-鹵代酮在堿和極性非質(zhì)子溶劑的存在下反應(yīng)直至反應(yīng)基本結(jié)束；蒸除極性非質(zhì)子溶劑得到固體；將固體溶于非質(zhì)子有機(jī)溶劑和過量的NH4OAc水溶液以形成溶液；將溶液回流并同時除去極性層得到式(A)化合物；其中X是胺保護(hù)基；X’是鹵素；其它所有變量均如以上所示的式(I)中所定義。
另一方面，本發(fā)明涉及制備式(I)化合物的方法， 該方法包括，將式(B)的化合物 與Nα-保護(hù)的氨基酸，(Prt)-Y，在堿的存在下偶聯(lián)直至反應(yīng)基本結(jié)束生成式(C)的化合物，其中，Nα-保護(hù)的氨基酸是其活潑酯、酸酐或酰鹵的形式， 選擇性地通過常規(guī)的脫保護(hù)反應(yīng)將Nα-保護(hù)的氨基酸(Prt)-Y的氨基脫保護(hù)，然后與另一個Nα-保護(hù)的氨基酸重復(fù)進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)直至獲得所需的式(I)化合物；Y在每次出現(xiàn)時彼此獨立地是選擇性帶有含保護(hù)基的側(cè)鏈的D-或L-天然或非天然α-氨基酸；Prt是氨基保護(hù)基；R’是烷基酯或芐基酯；n是1至100；其它所有變量均如以上所示的式(I)中所定義。
另一方面，本發(fā)明提供了制備以上定義的式(I)化合物的方法，該方法包括，將以其活潑酯、酸酐或酰鹵的形式活化了的式(B)化合物與通過熟悉肽合成的技術(shù)人員熟知的方法制備的N-脫保護(hù)的肽-樹脂(A’)偶聯(lián)，用哌啶在DMF、TAEA或類似的堿中將N-末端的Fmoc基團(tuán)脫保護(hù)，然后用強酸將形成的中間體(B’)脫保護(hù)并且從樹脂上裂解下來。所有變量均如以上所示的式(I)中所定義。
另一方面，本發(fā)明提供了制備式(I)化合物的方法，該方法包括，將以其活潑酯、酸酐或酰鹵的形式活化了的式(B)化合物與通過熟悉肽合成的技術(shù)人員熟知的方法制備的N-脫保護(hù)的肽-樹脂(H)偶聯(lián)，用哌啶在DMF、TAEA或類似的堿中將N-末端的Fmoc基團(tuán)脫保護(hù)，將釋放出的N-末端的氨基用Nα-Fmoc-保護(hù)的氨基酸(x)和本領(lǐng)域熟知的肽偶聯(lián)反應(yīng)酰化，根據(jù)需要重復(fù)堿脫保護(hù)和偶聯(lián)步驟，以摻入另外的氨基酸(x)，用強酸將形成的中間體(C’)脫保護(hù)并從樹脂上裂解下來。所有變量均如以上所示的式(I)中所定義。 另一方面，本發(fā)明提供了制備式(I)化合物的方法，該方法包括，將以其活潑酯、酸酐或酰鹵的形式活化了的式(B)化合物與氨基取代的樹脂如三-(烷氧基)-芐基胺樹脂(PAL樹脂)、4-(2’，4’-二甲氧基苯基-氨基甲基)-苯氧基樹脂(N-脫保護(hù)的Rink樹脂)或二苯甲基胺樹脂偶聯(lián)，用哌啶在DMF、TAEA或類似的堿中將N-末端的Fmoc基團(tuán)脫保護(hù)，將釋放出的N-末端的氨基用Nα-Fmoc-保護(hù)的氨基酸(x)通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的肽偶聯(lián)反應(yīng)?；?，根據(jù)需要重復(fù)堿脫保護(hù)和偶聯(lián)步驟以摻入另外的氨基酸(x)，用強酸將形成的中間體(D’)脫保護(hù)并從樹脂上裂解下來。所有變量均如以上所示的式(I)中所定義。 另一方面，本發(fā)明提供了制備式(I)化合物的方法，該方法包括，將式(B)化合物與堿如Cs2CO3反應(yīng)，將形成的酚的銫鹽(E’)與鹵代甲基化的聚苯乙烯樹脂如Merrifield肽樹脂反應(yīng)，用哌啶或類似的有機(jī)堿除去Fmoc保護(hù)基，將釋放出的N-末端的氨基用Nα-Fmoc-保護(hù)的氨基酸(x)通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的肽偶聯(lián)反應(yīng)?；?，根據(jù)需要重復(fù)堿脫保護(hù)和偶聯(lián)步驟以摻入另外的氨基酸(x)，用哌啶或類似的有機(jī)堿在最終的保護(hù)的肽序列的N-末端脫保護(hù)并用Tfa在C-末端脫保護(hù)，將形成的中間體(F’)通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的肽偶聯(lián)反應(yīng)環(huán)化，用強酸將形成的中間體(G’)從樹脂上裂解下來。所有變量均如以上所示的式(I)中所定義。 另一方面，本發(fā)明提供了制備以上定義的式(I)化合物的方法，該方法包括，將以其活潑酯、酸酐或酰鹵的形式活化了的式(B)化合物與通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法制備的N-脫保護(hù)的肽-樹脂(A’)偶聯(lián)，用Tfa將N-末端的Boc基團(tuán)脫保護(hù)，然后用強酸如HF將側(cè)鏈保護(hù)基脫保護(hù)并將形成的中間體(H’)從樹脂上裂解。所有變量均如以上所示的式(I)中所定義。 另一方面，本發(fā)明提供了制備式(I)化合物的方法，該方法包括，將以其活潑酯、酸酐或酰鹵的形式活化了的式(B)化合物與通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法制備的N-脫保護(hù)的肽-樹脂(H)偶聯(lián)，用Tfa將N-末端的Boc基團(tuán)脫保護(hù)，將釋放出的N-末端的氨基用Nα-Boc-保護(hù)的氨基酸(x)通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的肽偶聯(lián)反應(yīng)酰化，根據(jù)需要重復(fù)Tfa脫保護(hù)和偶聯(lián)步驟以摻入另外的氨基酸(x)，用強酸將形成的中間體(I’)脫保護(hù)并從樹脂上裂解。所有變量均如以上所示的式(I)中所定義。 另一方面，本發(fā)明提供了制備式(I)化合物的方法，該方法包括，將式(B)化合物與堿如Cs2CO3反應(yīng)，將形成的酚的銫鹽(J’)與鹵代甲基化的聚苯乙烯樹脂如Merrifield肽樹脂反應(yīng)，用Tfa除去Boc保護(hù)基，將釋放出的N-末端的氨基用Nα-Boc-保護(hù)的氨基酸(x)通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的肽偶聯(lián)反應(yīng)酰化，根據(jù)需要重復(fù)Tfa脫保護(hù)和偶聯(lián)步驟以摻入另外的氨基酸(x)，用Tfa在最終的保護(hù)的肽序列的N-末端脫保護(hù)并用無機(jī)堿如LiOH在含水DMF中對C-末端脫保護(hù)，將形成的中間體(K’)通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的肽偶聯(lián)反應(yīng)環(huán)化，用強酸將形成的中間體(L’)從樹脂上裂解。所有變量均如以上所示的式(I)中所定義。 另一方面，本發(fā)明提供了制備式(I)化合物的方法，該方法包括，將以其活潑酯、酸酐或酰鹵的形式活化了的式(B)化合物與通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法制備的N-脫保護(hù)的肽、4-硝基二苯酮肟樹脂(M’)偶聯(lián)，用Tfa將N-末端的Boc基團(tuán)脫保護(hù)，將釋放出的N-末端的氨基用Nα-Boc-保護(hù)的氨基酸(x)通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的肽偶聯(lián)反應(yīng)酰化，根據(jù)需要重復(fù)Tfa脫保護(hù)和偶聯(lián)步驟以摻入另外的氨基酸(x)，用Tfa將N-末端的Boc基團(tuán)脫保護(hù)，通過用適宜的有機(jī)堿中和將形成的N’-脫保護(hù)的中間體(N’)環(huán)化和裂解，然后用強酸如HF除去側(cè)鏈保護(hù)基。所有變量均如以上所示的式(I)中所定義。 詳細(xì)描述本文所用的術(shù)語“雜環(huán)”是指可以出現(xiàn)在氨基酸側(cè)鏈上的任意雜環(huán)。其例子包括但不僅限于，苯并噻吩基、苯并呋喃基(coumaryl)、咪唑基、吲哚基、嘌呤基、吡啶基、嘧啶基、喹啉基、噻唑基、噻吩基和三唑基等雜環(huán)。
本文所用的術(shù)語“芳基”是指在每個環(huán)中含有最多7個碳原子的任何穩(wěn)定的單環(huán)或二環(huán)碳環(huán)，其中至少有一個環(huán)是芳香性的。芳基的例子包括聯(lián)苯基、茚基、萘基、苯基和1，2，3，4-四氫萘。
在本申請中，對氨基酸成分、某些優(yōu)選的保護(hù)基、試劑和溶劑采用了縮寫的符號。這些縮寫符號的含義如表1所示。
表1
體外試驗通過測量對[125I-Tyr11]SRIF-14與CHO-K1轉(zhuǎn)染細(xì)胞結(jié)合的抑制作用來確定化合物對人促生長素抑制素亞型受體1至5(分別為sst1、sst2、sst3、sst4和sst5)的親和性。
將人sst1受體基因以基因組片段的形式克隆。通過加入BglII接頭對含有100bp 5’-非翻譯區(qū)、1.17Kb的完整編碼區(qū)和230bp的3’-非翻譯區(qū)的1.5Kb Pstl-Xmnl進(jìn)行修飾。將得到的DNA片段亞克隆到pCMV-81的BamHl位點以產(chǎn)生哺乳動物表達(dá)質(zhì)粒(由Dr.Graeme Bell提供，芝加哥大學(xué))。通過用磷酸鈣共沉淀法(1)轉(zhuǎn)染到CHO-K1細(xì)胞(ATCC)中獲得穩(wěn)定表達(dá)sst1受體的克隆細(xì)胞系。含有質(zhì)粒pRSV-neo(ATCC)作為可選擇的標(biāo)記。在含有0.5mg/ml的G418(Gibco)的RPMI 1640培養(yǎng)液中選擇克隆細(xì)胞系，環(huán)克隆然后擴(kuò)展到培養(yǎng)基中。
人sst2促生長素抑制素受體基因作為1.7Kb BamHI-HindIII基因組DNA片段分離，然后亞克隆到由Dr.G.Bell(芝加哥大學(xué))提供的質(zhì)粒載體pGEM3Z(Promega)中。通過將1.7Kb BamHl-HindII片段插入到質(zhì)粒pCMV5的相容性限制核酸內(nèi)切酶位點來構(gòu)建哺乳動物細(xì)胞表達(dá)載體。用磷酸鈣共沉淀法轉(zhuǎn)染到CHO-K1細(xì)胞中獲得克隆細(xì)胞系。含有質(zhì)粒pRSV-neo作為可選擇的標(biāo)記。
將人sst3作為基因組片段分離，在2.4Kb BamHI/HindIII片段中含有完整的編碼序列。在修飾末端并加入EcoR1接頭后，通過將2.0KbNcoI-HindIII片段插入pCMV載體的EcoR1位點來構(gòu)建哺乳動物表達(dá)質(zhì)粒pMCV-h3。用磷酸鈣共沉淀法轉(zhuǎn)染到CHO-K1細(xì)胞(ATCC)中獲得穩(wěn)定表達(dá)sst3受體的克隆細(xì)胞系。含有質(zhì)粒pRSV-neo(ATCC)作為可選擇的標(biāo)記。在含有0.5mg/ml的G418(Gibco)的RPMI 1640培養(yǎng)液中選擇克隆細(xì)胞系，環(huán)克隆然后擴(kuò)展到培養(yǎng)基中。
由Dr.Graeme Bell(芝加哥大學(xué))提供人sst4受體表達(dá)質(zhì)粒pCMV-HX。該載體含有1.4Kb NheI-NheI編碼人sst4的基因組片段、456bp的5’-非翻譯區(qū)和200bp的3’-非翻譯區(qū)，然后克隆入PCMV-HX的XbaI/EcoR1位點。用磷酸鈣共沉淀法轉(zhuǎn)染到CHO-K1細(xì)胞(ATCC)中獲得穩(wěn)定表達(dá)sst4受體的克隆細(xì)胞系。含有質(zhì)粒pRSV-neo(ATCC)作為可選擇的標(biāo)記。在含有0.5mg/ml的G418(Gibco)的RPMI 1640培養(yǎng)液中選擇克隆細(xì)胞系，環(huán)克隆然后擴(kuò)展到培養(yǎng)基中。
用λ基因組克隆作為模板通過PCR得到人sst5基因，由Dr.GraemeBell(芝加哥大學(xué))提供。所得的1.2Kb PCR片段含有5’-非翻譯區(qū)的21個堿基對和3’-非翻譯區(qū)的55bp。將所述克隆插入質(zhì)粒pBSSK(+)的EcoR1位點。以1.2Kb HindIII-XbaI片段回收該插入片段，然后亞克隆到pCVM5哺乳動物表達(dá)載體中。用磷酸鈣共沉淀法轉(zhuǎn)染到CHO-K1細(xì)胞(ATCC)中獲得穩(wěn)定表達(dá)sst5受體的克隆細(xì)胞系。含有質(zhì)粒pRSV-neo(ATCC)作為可選擇的標(biāo)記。在含有0.5mg/ml的G418(Gibco)的RPMI 1640培養(yǎng)液中選擇克隆細(xì)胞系，環(huán)克隆然后擴(kuò)展到培養(yǎng)基中。
使穩(wěn)定表達(dá)人sst受體之一的CHO-K1細(xì)胞在含有10％胎牛血清和0.4mg/ml遺傳霉素的RPMI 1640中生長。用0.5mM EDTA收集細(xì)胞，以500g在約4℃下離心約5分鐘。將沉積物重新懸浮在50mM Tris、pH7.4中并兩次以500g在約4℃下離心約5分鐘。通過超聲處理并以39000g在約4℃下離心約10分鐘使細(xì)胞溶解。將沉積物重新懸浮在相同的緩沖液中并以50000g在約4℃下離心約10分鐘，將得到的沉積物中的膜于-80℃下存放。SRIF-14結(jié)合的競爭性抑制實驗一式兩份地在聚丙烯96孔板中進(jìn)行。將細(xì)胞膜(10μg蛋白質(zhì)/孔)與[125I-Tyr11]SRIF-14(0.05nM)一起在約37℃下在50mM HEPES(pH7.4)、0.2％BSA、5mM的MgCl2、200KIU/ml抑肽酶，0.02mg/ml桿菌肽和0.02mg/ml苯甲磺酰氟中保溫約60分鐘。
通過立即用預(yù)先用0.1％聚乙烯亞胺(P.E.I.)浸泡過的GF/C玻璃纖維濾板(Unifilter，Packard)過濾，用Filtermate 196(Packard)細(xì)胞收集器分離由游離的[125I-Tyr11]SRIF-14產(chǎn)生的結(jié)合。將濾紙用50mM HEPES在約0-4℃洗滌4秒鐘，然后用Packard Top Count檢測放射性。
從總的結(jié)合中減去非特異性結(jié)合(在0.1μM SRIF-14的存在下測定)得到特異性結(jié)合。將結(jié)合數(shù)據(jù)通過計算機(jī)輔助的非線性回歸分析(MDL)進(jìn)行分析并確定抑制常數(shù)(Ki)值。
通過如下試驗來確定本發(fā)明的化合物是激動劑還是拮抗劑。
功能試驗cAMP細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生的抑制作用
將表達(dá)人促生長素抑制素(SRIF-14)亞型受體的CHO-K1細(xì)胞接種在24-孔組織培養(yǎng)板中的含有10％FCS和0.4mg/ml遺傳霉素的RPMI 1640培養(yǎng)液中。在實驗前一天更換培養(yǎng)液。
將細(xì)胞(105細(xì)胞/孔)用0.5ml含有0.2％BSA和0.5mM(1)3-異丁基-1-甲基黃嘌呤(IBMX)的新鮮的RPMI洗滌兩次，然后在約37℃保溫約5分鐘。
·通過加入1mM毛喉素(FSK)在約37℃下約15-30分鐘刺激環(huán)AMP的生產(chǎn)。
·通過同時加入FSK(1μM)、SRIF-14(10-12M至10-6M)和試驗化合物(10-10M至10-5M)測定化合物的激動劑作用。
·通過同時加入FSK(1μM)、SRIF-14(1至10nM)和試驗化合物(10-10M至10-5M)測定化合物的拮抗劑作用。
除去反應(yīng)液并加入200ml 0.1N的HCl。用放射免疫試驗方法(KitFlashPlate SMP001A，New England Nuclear)測定cAMP。
放射性配體結(jié)合試驗用于體外受體結(jié)合試驗的膜通過如下方法制得將表達(dá)hsst受體亞型的CHO-K1細(xì)胞在冰冷的50mM Tris-HCl中勻化(Polytron，設(shè)置6、15秒)，然后以39,000g(10分鐘)離心兩次，在兩次之間用新鮮的緩沖液重新懸浮。將最終的沉積物重新懸浮在10mM Tris-HCl中用于試驗。對于hsst1、hsst3、hsst4、hsst5試驗，將膜制備物的等分試樣在約37℃下與0.05nM[125I-Tyr11]SRIF-14一起在含有BSA(10mg/ml)、MgCl2(5mM))、抑肽酶(200KIU/ml)、桿菌肽(0.02mg/ml)和苯甲磺酰氟(0.02mg/ml)的50mM HEPES(pH7.4)中保溫約30分鐘。最終的試驗體積為0.3ml。
對于hsst2試驗，采用[125I]MK-678(0.05nM)作為放射性配體，在約25℃下保溫約90分鐘。通過迅速用GF/C濾紙(預(yù)先在0.3％聚乙烯亞胺中浸泡過)用Brandel過濾歧管過濾終止保溫。然后將各試管和濾紙用每份5ml冰冷的緩沖液洗滌3次。
特異性結(jié)合的定義為，總的放射性配體結(jié)合減去在1000nM SRIF-14(hsst1、3、4、5)或1000nM MK678(hsst2)存在下的結(jié)合。
可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法體內(nèi)檢測本發(fā)明化合物與促生長素抑制素受體結(jié)合有關(guān)的應(yīng)用，包括與促生長素抑制素亞型受體的特異性結(jié)合，本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的所述方法的例子可以參見I.Shimon等，“在人胎兒腦垂體培養(yǎng)物中的促生長素抑制素受體亞型特異性”，《臨床研究雜志》(J.Clin.Invest.)、99卷、No.4、789-798頁，1997；和C.Gilon等，“骨架-環(huán)狀，受體5-選擇性促生長素抑制素類似物合成、生物活性和核磁共振構(gòu)象分析”，《藥物化學(xué)雜志》(J.Med.Chem.)1998，41，919-929。
正如本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的，促生長素抑制素激動劑和/或拮抗劑的已知及潛在的應(yīng)用是多種多樣的。促生長素抑制素的這些不同用途可以概括如下促生長素抑制素激動劑可用于抑制生長激素、特別是GH分泌腺瘤(肢端肥大癥)和TSH分泌腺瘤；治療催乳素分泌腺瘤；抑制胰島素和/或胰高血糖素，特別是糖尿病、血管病、增殖性視網(wǎng)膜病、黎明現(xiàn)象和腎??；抑制胃酸分泌，特別是消化性潰瘍；腸皮膚瘺和胰皮膚瘺；過敏性腸疾病；傾倒綜合征；水瀉綜合征；與AIDS有關(guān)的腹瀉；化療引起的腹瀉；急性或慢性胰腺炎和胃腸激素分泌腫瘤；治療癌癥如肝細(xì)胞瘤；抑制血管生成；治療炎性疾病如關(guān)節(jié)炎；視網(wǎng)膜病；慢性同種異體移植物排斥反應(yīng)；血管成形術(shù)；預(yù)防移植血管和胃腸出血。
因此，本發(fā)明包括含有至少一種文中所述的本發(fā)明化合物作為活性成分以及可藥用載體的藥物組合物。
本發(fā)明的化合物可以通過口服、胃腸外(例如肌肉內(nèi)、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)或皮下注射，或植入)、鼻、陰道、直腸、舌下或局部給藥途徑進(jìn)行給藥，并且可以用可藥用載體配制成適于各種給藥途徑的劑量形式。
用于口服給藥的固體劑量形式包括膠囊、片劑、丸劑、散劑和顆粒劑。在所述固體劑量形式中，活性化合物與至少一種惰性可藥用載體如蔗糖、乳糖或淀粉混合。通常，所述劑量形式還可以含有除所述惰性稀釋劑之外的其它物質(zhì)，例如潤滑劑如硬脂酸鎂。在膠囊、片劑和丸劑的情況下，劑量形式可以含有緩沖劑。片劑和丸劑還可以用腸溶包衣制備。
用于口服給藥的液體劑量形式包括含有本領(lǐng)域常用的惰性稀釋劑例如水的可藥用乳液、溶液、混懸液、糖漿、酏劑。除所述惰性稀釋劑外，組合物中還可含有輔劑，例如濕潤劑、乳化劑和助懸劑，以及甜味劑、矯味劑和加香劑。
用于胃腸外給藥的本發(fā)明制劑包括無菌的含水或非水溶液、混懸液或乳液。非水溶劑或載體的例子是丙二醇、聚乙二醇、植物油例如橄欖油和玉米油、明膠、可注射的有機(jī)酯例如油酸乙酯。所述劑量形式還可以含有輔劑如防腐劑、濕潤劑、乳化劑和分散劑。它們可以通過，例如，用能夠保留細(xì)菌的濾紙過濾、在組合物中摻入殺菌劑、對組合物進(jìn)行照射或者將組合物加熱進(jìn)行滅菌。還可以將其制成可在臨用前立刻溶于無菌水或其它無菌可注射溶媒的無菌固體組合物的形式。
用于直腸或陰道給藥的組合物優(yōu)選栓劑，所述栓劑除活性物質(zhì)外，還含有賦形劑如可可脂或栓劑蠟。
用于鼻或舌下給藥的組合物也可以用本領(lǐng)域熟知的常規(guī)賦形劑制備。
此外，本發(fā)明的化合物還可以以如下專利中描述的緩釋組合物的形式給藥。美國專利5,672,659教導(dǎo)了含有生物活性劑和聚酯的緩釋組合物。美國專利5,595,760教導(dǎo)了可凝膠化形式的含有生物活性劑的緩釋組合物。U.S.申請?zhí)?8/929,363(申請日1997年9月9日)教導(dǎo)了含有生物活性劑和脫乙酰殼多糖的聚合的緩釋組合物。U.S.申請?zhí)?8/740,778(申請日1996年11月1日)教導(dǎo)了含有生物活性劑和環(huán)糊精的緩釋組合物。U.S.申請?zhí)?9/015,394(申請日1998年1月29日)教導(dǎo)了含有生物活性劑的可吸收的緩釋組合物。上述專利和專利申請的教導(dǎo)引入本文作為參考。
本發(fā)明組合物中的活性成分的劑量可以改變；但是，活性成分的量必需能夠獲得適宜的劑量形式。所選擇的劑量取決于所需的治療作用、給藥途徑以及治療的持續(xù)時間。通常，向人和其它動物、例如哺乳動物施用0.0001至100mg/kg體重的每日劑量以達(dá)到治療作用。
優(yōu)選的劑量范圍是0.01至5.0mg/kg體重/天，所述劑量可以單次給藥或分成多次給藥。
本發(fā)明的化合物可以按照反應(yīng)路線I中的描述合成。在第一步中，將在α-氨基上用Boc、Cbz或其它適宜的基團(tuán)保護(hù)了的氨基酸用無機(jī)堿如NaOH、KOH、K2CO3或者首選的CsCO3在極性溶劑例如水、DMF、THF等中轉(zhuǎn)變成羧酸鹽。真空蒸除溶劑，將殘余的鹽重新溶于極性非質(zhì)子溶劑如DMF中并在約-20℃至約100℃、首選室溫下攪拌的同時加入適宜的α-鹵代酮。繼續(xù)攪拌約10分鐘至約24小時，或者直至TLC分析證實酯的形成已經(jīng)完全，此時，將溶液在約0℃至約100℃、首選約40℃至約70℃下真空濃縮。將中間體重新溶于非質(zhì)子有機(jī)溶劑如苯、甲苯或者首選的二甲苯中，然后加入約5倍至100倍、首選約15-20倍摩爾過量的NH4OAc。將該兩相混合物加熱回流并在約1至約4小時的時間內(nèi)通過Dean-Stark分水器徹底除去極性層得到粗品中間體(A)，該中間體可以粗品的形式使用，或者通過結(jié)晶或柱色譜純化。 反應(yīng)路線I在第二步，采用催化氫化或強酸如HF、鹽酸、HBr或Tfa對中間體(A)進(jìn)行脫保護(hù)。然后，可對α-氮進(jìn)行保護(hù)，可以采用堿敏感性保護(hù)基團(tuán)如Fmoc基團(tuán)，使用商購的N-(9-芴基甲氧基羰氧基)琥珀酰亞胺和碳酸鉀的乙腈和水溶液。或者，Nα-Cbz-保護(hù)的咪唑氮可用保護(hù)的羧酸酯鹵化物進(jìn)行烷基化，和用催化氫化對α-氨基基團(tuán)進(jìn)行脫保護(hù)，得到B’(V＝H，W＝-(CH2)mCR5-CO2R’，其中，R’表示烷基或芐基酯)。咪唑氮可采用商購的三苯基甲基氯化物和叔胺堿如4-甲基-嗎啉、二異丙基乙基胺或三乙胺進(jìn)行保護(hù)以得到Fmoc-保護(hù)的中間體，其可隨后采用堿，例如TAEA對α-氨基進(jìn)行脫保護(hù)，得到中間體(B)(V＝H，W＝Trt)?；蛘?，N-脫保護(hù)的咪唑B”(V＝H，W＝H)可不經(jīng)進(jìn)一步修飾即可使用。
在第三步，中間體B、B’或B”用作目標(biāo)肽的連續(xù)溶液相合成的錨基團(tuán)。因此，將錨基團(tuán)溶解于乙酸乙酯中，濃度為約50-200mmol/L，以及加入活化酯、酸酐或酰鹵形式的約1-5摩爾當(dāng)量，或更優(yōu)選為1.1-1.5摩爾當(dāng)量的Nα-Fmoc保護(hù)的氨基酸。將混合物在弱堿如碳酸鈉水溶液，或者更優(yōu)選碳酸氫鈉溶液的第二層上方進(jìn)行攪拌，直至反應(yīng)完成。除去水層，加入約1-10ml/mmol，或者更優(yōu)選約2-4ml/mmol的TAEA或哌啶，將混合物攪拌約30分鐘。然后，溶劑用飽和氯化鈉溶液洗滌(2次，約30ml/mmol)，然后用10％磷酸鹽緩沖溶液調(diào)節(jié)至pH＝5.5(3次，約10ml/mmol)。隨后，以與第一循環(huán)類似的方式進(jìn)行隨后的循環(huán)。最后的氨基酸可用Boc或Fmoc基團(tuán)對Nα進(jìn)行保護(hù)。
在第四步，N-末端的和C-末端的保護(hù)基可采用堿或強酸的水溶液除去，形成的肽中間體可采用典型的肽偶聯(lián)技術(shù)進(jìn)行環(huán)化，如下述文獻(xiàn)所述“肽合成實踐(The Practice of Peptide Synthesis)”，Bodanszky和Bodanszky，Springer-Varlag，1984。此后，再將肽中間體溶解于非質(zhì)子溶劑如DMF中，通過加入叔胺堿如4-甲基-嗎啉對溶液進(jìn)行堿化。中間體的羧酸部分可通過加入1至6倍摩爾過量的碳化二亞胺如DCC或EDC和一種添加劑如1-羥基苯并三唑進(jìn)行活化。將混合物在約0℃至100℃下攪拌，更優(yōu)選在大約室溫下攪拌，直至反應(yīng)完成。
在最后一步，采用催化氫化或強酸如HF、鹽酸、HBr或Tfa對保護(hù)的肽脫除保護(hù)基，得到最后的產(chǎn)物(C)，其中，R4至R5、a、b、Y、Z、和n均如式(I)所定義。
采用備有ESI(電子噴射電離)源的Finnigan SSQ 7000分光儀測量注入質(zhì)譜數(shù)據(jù)。NMR數(shù)據(jù)是采用300MHz的Varian Unity光譜儀獲得的，樣品為在約10-20mg/ml濃度范圍內(nèi)在指定溶劑中的樣品。
或者，本發(fā)明的化合物可采用固相肽合成技術(shù)制備。因此，中間體A(X＝Boc)例如用溴乙酸乙酯和適宜的堿如在非質(zhì)子溶劑如DMF中的碳酸鉀進(jìn)行烷基化反應(yīng)，形成的乙基酯中間體采用堿水溶液如氫氧化鈉水溶液進(jìn)行水解，得到中間體B(V＝Boc，W＝-CH2CO2H)。中間體B(V＝Boc，W＝-CH2CO2H)可采用公知的活化技術(shù)活化，所述技術(shù)如下述文獻(xiàn)所述“肽合成實踐(The Practice of Peptide Synthesis)”，Bodanszky和Bodanszky，Springer-Varlag，1984，并且直接用于與固體載體上的生長肽進(jìn)行偶聯(lián)，或者，中間體B(V＝Boc，W＝-CH2CO2H)也可直接與固體載體關(guān)聯(lián)以開始固體相合成。N-末端的Boc基團(tuán)可采用例如Tfa進(jìn)行脫保護(hù)，在本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的條件下繼續(xù)進(jìn)行肽合成。
中間體B(例如，V＝Fmoc，W＝-CH2CO2t-Bu)可用酸如Tfa處理以除去羧酸鹽保護(hù)的叔丁基酯，并且形成的中間體B(例如，V＝Fmoc，W＝-CH2CO2H)可用于利用Fmoc策略的固相肽合成。因此，中間體B(V＝Fmoc，W＝-CH2CO2H)可采用公知的活化技術(shù)活化，所述技術(shù)如下述文獻(xiàn)所述“肽合成實踐(ThePractice of Peptide Synthesis)”，M.Bodanszky和A.Bodanszky，Springer-Varlag，1984，并且直接用于與固體載體上的生長肽進(jìn)行偶聯(lián)。N-末端的Fmoc基團(tuán)可采用例如哌啶進(jìn)行脫保護(hù)，在本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的條件下繼續(xù)進(jìn)行肽合成。
環(huán)狀類似物的固體相合成也可按照以下的反應(yīng)路線II進(jìn)行。
中間體A(X＝Boc或Cbz、R3＝2-甲氧基苯基、3-甲氧基苯基或4-甲氧基苯基)可用1M的BBr3的二氯甲烷溶液處理約1/2小時，得到游離的酚A(X＝H、R3＝2-羥基苯基、3-羥基苯基或4-羥基苯基)。然后，α-氮可用酸敏感性保護(hù)基團(tuán)如Boc基團(tuán)進(jìn)行保護(hù)，采用二叔丁基二碳酸酯和一種堿如氫氧化鈉在有機(jī)水不混溶的溶劑如二噁烷與水的混合物中的溶液。中間體A(X＝Boc、R3＝2-羥基苯基、3-羥基苯基或4-羥基苯基)例如用溴乙酸乙酯和適宜的堿如在非質(zhì)子溶劑如DMF中的碳酸鉀進(jìn)行烷基化反應(yīng)，得到形成的乙基酯中間體D。然后，將中間體D通過用碳酸銫進(jìn)行作用而轉(zhuǎn)化成其銫鹽。銫鹽過量地與Merrifield樹脂反應(yīng)，得到中間體E。中間體E再采用標(biāo)準(zhǔn)Boc固相肽合成技術(shù)或如前所述的標(biāo)準(zhǔn)Fmoc固相合成進(jìn)行加工，得到中間體F。當(dāng)構(gòu)建了完整的氨基酸序列時，C-末端的乙基酯采用適宜的堿如LiOH的含水DMF溶液進(jìn)行脫保護(hù)(unmask)，肽采用標(biāo)準(zhǔn)的活化方法進(jìn)行環(huán)化，例如，采用碳化二亞胺和例如羥基苯并三唑和叔胺堿，例如，二異丙基乙基胺，得到中間體G。最后的側(cè)鏈脫保護(hù)和與從樹脂分裂是通過加入非常強的酸來實現(xiàn)，如加入HF，得到本發(fā)明的化合物。
以下通過實施例進(jìn)一步說明本發(fā)明，但并非用以對本發(fā)明保護(hù)范圍的限制。
實施例1環(huán)[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly] 實施例1是按照如下的合成反應(yīng)路線1進(jìn)行合成 反應(yīng)路線1
步驟a2-(1-(S)-氨基-2-苯基乙基)-4-(3-甲氧基苯基)-咪唑?qū)bz-(L)-苯基丙氨酸(10.0g，33.4mmol)和碳酸銫(5.44g，16.7mmol)合并于2∶1的DMF∶水(75ml)中，將混合物攪拌直至均勻。減壓除去溶劑，將殘余物溶解于DMF(70ml)中，加入2-溴-3’-甲氧基苯乙酮(7.65g，33.4mmol)的DMF(30ml)溶液。將混合物在室溫下攪拌約30分鐘，然后，減壓濃縮。將形成的酮-酯溶解于二甲苯(150ml)中，濾出CsBr。加入乙酸銨(40.0g，0.52mol)，再將混合物加熱回流約2小時，采用Dean-Stark分水器除去過量的NH4OAc并釋放出水。將反應(yīng)混合物冷卻，并用飽和碳酸氫鈉溶液(50ml)和飽和氯化鈉溶液(50ml)洗滌。二甲苯層用硫酸鈉干燥、過濾及真空濃縮。
將殘余物溶解于二噁烷(30ml)中，加入6N的鹽酸(115ml)，將混合物回流下加熱約3小時。將溶液真空濃縮，并用乙醚(4×100ml)研制。再將殘余物在真空下干燥至恒重，得到12.15g(99％)的中間體1a，質(zhì)譜294.2 MH+。
步驟b2-(1-(S)-((芴基甲氧基)羰基)氨基-2-苯基乙基)-4-(3-甲氧基苯基)-咪唑?qū)⒅虚g體1a(11.8g，32.2mmol)溶解于1∶1/乙腈∶水(200ml)中，分批連續(xù)小心地加入碳酸鉀(5.38g，39mmol)，加入9-芴基甲基-琥珀酰亞胺基碳酸酯，將形成的混合物劇烈攪拌約20分鐘。產(chǎn)物用乙酸乙酯(100ml)萃取，乙酸乙酯層用水(2×50ml)洗滌。乙酸乙酯層再用硫酸鈉干燥、過濾、真空濃縮。將產(chǎn)物用硅膠閃蒸色譜純化(150g)，用2∶2∶1的二氯甲烷∶己烷∶乙酸乙酯淋洗，然后用1∶1的己烷∶乙酸乙酯淋洗。將產(chǎn)物餾分合并并真空濃縮，得到中間體1b，為一種淺黃色泡沫物，14.77g(85％)。質(zhì)譜516.3 MH+，NMR(300MHz，DMSO-d6)，11.8-12.0(1H，s)，7.8-8.0(3H，d)，7.6-7.8(2H，d)，7.5(1H，s)，7.1-7.5(12H，m)，6.7-6.9(1H，d)，4.8-5.0(1H，m)，4.1-4.3(3H，m)，3.7-3.9(3H，s)，3.0-3.4(2H，m)。
步驟c2-(1-(S)-((芴基甲氧基)羰基)氨基-2-苯基乙基)-4-(3-甲氧基-苯基)-1-三苯基甲基-咪唑在氮氣氛下，將中間體1b(13.9g，26.9mmol)溶解于二氯甲烷(50ml)中，加入4-甲基嗎啉(2.96ml，26.9mmol)和氯代三苯基甲烷(7.51g，26.9mmol)，將溶液在室溫下攪拌約45分鐘。過濾除去固體，將濾液用硅膠閃蒸色譜純化(300g)，采用70∶30的己烷∶乙酸乙酯作為淋洗劑。將產(chǎn)物餾分合并，真空濃縮，得到中間體1c，為一種泡沫物，18.0g(88％)，NMR(300MHz，DMSO-d6)，7.84-7.95(2H，d)，7.7-7.8(1H，d)，7.6-7.7(1H，d)，6.7-7.5(29H，m)，4.3-4.5(1H，m)，3.75-3.95(2H，m)，3.75-3.85(3H，s)，3.6-3.7(1H，m)，2.65-2.85(1H，d，d)，2.05-2.2(1H，m)。
步驟d2-(1-(S)-((Fmoc-Tyr(OBzl)-D-Trp-Lys(Cbz)-Val)氨基-2-苯基乙基)-4-(3-甲氧基苯基)-1-(三苯基甲基)-咪唑?qū)⒅虚g體1c(1.89g，2.50mmol)溶解于乙酸乙酯(40ml)中，加入三(2-氨基乙基)胺(9ml)，將混合物劇烈攪拌約1/2小時。乙酸乙酯層用飽和氯化鈉溶液(2×120ml)洗滌，再用10％磷酸鹽緩沖溶液調(diào)節(jié)至約pH＝5.5(3×40ml)。乙酸乙酯層再用飽和碳酸氫鈉溶液(40ml)攪拌，加入Fmoc-Val-F(1.02g，3.00mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌約1小時，除去水層。
然后，中間體順序進(jìn)行脫保護(hù)和偶聯(lián)，采用的是Fmoc-Lys(Cbz)-OSu、Fmoc-D-Trp-OSu和Fmoc-Tyr(OBzl)-OSu，以與上述Fmoc-Val-F循環(huán)類似的方式進(jìn)行。乙酸乙酯層用1.5倍體積的己烷稀釋，并通過閃蒸色譜的硅膠柱進(jìn)行純化，首先采用50∶30∶20的二氯甲烷∶乙酸乙酯∶己烷，然后采用4∶1的乙酸乙酯∶己烷作為淋洗劑。合并產(chǎn)物餾分并真空濃縮，得到中間體1d，為一種白色泡沫物，1.90g(46％)。質(zhì)譜1581.2 MNa+，1559.5MH+。
步驟e1-((2-乙氧基-2-氧代)乙基)-2-(1-(S)-((Fmoc-Tyr(OBzl)-D-Trp-Lys(Cbz)-Val)氨基-2-苯基乙基)-4-(3-甲氧基苯基)-咪唑?qū)⒅虚g體1d(519mg，0.33mmol)溶解于包含iPr3SiH(205μl，1.0mmol)的Tfa(10ml)中，將混合物攪拌約15分鐘。加入乙醚(60ml)沉淀出中間體，過濾。質(zhì)譜1316 MH+。將中間體溶解于DMF(3ml)中，加入碳酸氫鉀(198mg，2.0mmol)和溴乙酸乙酯(721μl，6.5mmol)，將混合物在室溫下攪拌過夜。將混合物真空濃縮、溶解于二氯甲烷(10ml)中，用水(10ml)洗滌。二氯甲烷層用硫酸鈉干燥，過濾和真空濃縮，得到中間體1e的粗產(chǎn)物(540mg)，其無需純化即可使用。
步驟f環(huán)[Tyr(OBzl)-D-Trp-Lys(Cbz)-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]將中間體1e(540mg，0.33mmol)懸浮于乙酸乙酯(10ml)中，加入三(氨基乙基)胺(1ml)，將混合物劇烈攪拌約1/2小時。加入乙酸乙酯(10ml)，溶液用飽和氯化鈉溶液(2×25ml)洗滌，再用10％磷酸鹽緩沖溶液(pH＝5.5，3×10ml)洗滌。加入己烷(40ml)沉淀出中間體，潷析出溶劑。將殘余物溶解于甲醇(10ml)中，在室溫下與2.5N氫氧化鈉(0.5ml)攪拌過夜。將混合物用水稀釋劑至渾濁，并將pH調(diào)節(jié)至約6.7。濾出脫保護(hù)的中間體并真空干燥。將固體吸收于DMF(25ml)中，加入DCC(340mg，1.65mmol)和HOBt(252mg，1.65mmol)。將混合物在室溫下攪拌約2小時和減壓濃縮。將粗產(chǎn)物用硅膠閃蒸色譜純化，采用乙酸乙酯作為淋洗劑。將產(chǎn)物餾分合并，真空濃縮，得到中間體1f，為-種玻璃狀物(180mg，48％，由中間體1d計)。質(zhì)譜1134.5 MH+。
步驟g環(huán)[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]將中間體1f(180mg，0.16mmol)溶解于包含10％Pd/C(24mg)的乙酸(10ml)中，將混合物在氫氣氛(25psi)下，于室溫下振搖約8小時。濾出催化劑，將殘余物真空濃縮。粗混合物由完全脫保護(hù)的物質(zhì)(均除去了Cbz和芐基醚)和部分脫保護(hù)的物質(zhì)(除去Cbz和芐基醚完整)組成。將混合物通過制備色譜HPLC純化，在VYDAC蛋白質(zhì)&肽C18柱(The Nest GroupInc.，Southborough，MA)上進(jìn)行，采用20％至70％的CH3CN/0.1％Tfa梯度洗脫，時間為約55分鐘。將更具極性峰值的純化餾分合并、濃縮、冷凍干燥(2×10ml 0.5％鹽酸，然后1×10ml水)，得到實施例1的標(biāo)題化合物，45mg(29％)。質(zhì)譜910.4 MH+。
實施例2環(huán)[Tyr(OBzl)-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]基本按照實施例1的合成反應(yīng)路線1進(jìn)行實施例2，只是采用適宜的氨基酸。合并1g的來自純化過程的較低極性峰值的純化餾分，濃縮和冷凍干燥(2×10ml 0.5％鹽酸，然后1×10ml水)，得到實施例2的標(biāo)題產(chǎn)物，33mg(21％)。質(zhì)譜1000.4 MH+。
實施例3環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]以與實施例1基本類似的方式，按照合成反應(yīng)路線1進(jìn)行實施例3，其區(qū)別如下步驟d2-(1-(S)-((Fmoc-Trp-D-Trp-Lys(Cbz)-Val-)氨基-2-苯基乙基)-4-(3-甲氧基苯基)-1-(三苯基甲基)-咪唑?qū)⒅虚g體1c(757mg，1.0mmol)溶解于乙酸乙酯(20ml)中，加入三(2-氨基乙基)胺(3ml)，將混合物劇烈攪拌約1/2小時。乙酸乙酯層用飽和氯化鈉溶液(2×60ml)洗滌，然后用10％磷酸鹽緩沖溶液調(diào)節(jié)至pH為約5.5(3×20ml)。將乙酸乙酯層與飽和碳酸氫鈉溶液(20ml)一起攪拌，加入Fmoc-Val-F(825mg，2.33mmol)。再將反應(yīng)混合物攪拌約1小時，除去水層。
以與如前所述類似的方式，將中間體順序進(jìn)行脫保護(hù)和偶聯(lián)，采用Fmoc-Lys(Cbz)-OSu、Fmoc-D-Trp-OSu和Fmoc-Trp-OSu。乙酸乙酯層用1.5倍體積的己烷稀釋，首先通過閃蒸色譜的硅膠柱純化，采用的是50∶30∶20的二氯甲烷∶乙酸乙酯∶己烷作為淋洗劑，然后采用4∶1的乙酸乙酯∶己烷作為淋洗劑。將產(chǎn)物餾分合并，真空濃縮，得到中間體3d，為一種白色泡沫物，1.02g(68％)。質(zhì)譜11492.0 MNa+，1514.2 MH+。
步驟e1-((2-乙氧基-2-氧代)乙基)-2-(1-(S)-((Fmoc-Trp-D-Trp-Lys(Cbz)-Val-)氨基-2-苯基乙基)-4-(3-甲氧基苯基)-咪唑?qū)⒅虚g體3d(1.00g，0.67mmol)溶解于二氯甲烷(10ml)、Tfa(1ml)和iPr3SiH(205μl，1.0mmol)的混合物中，將混合物攪拌約20分鐘。加入1∶1的乙醚∶己烷(100ml)的混合物，將中間體過濾并干燥(0.88g)。再將中間體溶解于DMF(10ml)中，加入碳酸氫鉀(200mg，2.00mmol)和溴代乙酸乙酯，將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。再將混合物減壓濃縮，得到中間體3e，其可不經(jīng)純化直接使用。質(zhì)譜1335.7 MH+。
步驟f環(huán)[Trp-D-Trp-Lys(Cbz)-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]將中間體3e(粗產(chǎn)物，0.67mmol)溶解于甲醇(10ml)中，將在室溫下與2.5N氫氧化鈉(10ml)一起攪拌約45分鐘。將混合物用水稀釋至混濁，將pH值調(diào)節(jié)至6.9。潷析出溶劑，將殘余物用水研制，得到一種淺黃色的粉末(650mg，質(zhì)譜1085.5 MH+)。將這種粉末(629mg)溶解于DMF(20ml)中，然后，加入NMM(220μl，2.0mmol)、EDC(192mg，1.0mmol)和HOBt(153mg，1.0mmol)。將混合物在室溫下攪拌約2小時，真空濃縮。將粗產(chǎn)物溶解于二氯甲烷(15ml)中，用10％磷酸鹽緩沖溶液(調(diào)節(jié)至pH＝5.5)洗滌。將二氯甲烷層用硫酸鈉干燥、過濾，然后濃縮至2ml。加入乙醚沉淀出產(chǎn)物，將其過濾和干燥，得到中間體3f(440mg，71％)。質(zhì)譜1067.4MH+。
步驟g環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-Gly]將中間體3f(200mg，0.19mmol)溶解于包含10％Pd/C(40mg)的乙酸(15ml)中，將混合物在氫氣氛(25psi)下，于室溫下振搖約2天。濾出催化劑，將殘余物真空濃縮。將粗混合物通過制備色譜HPLC純化，在C18柱(Rainin MicrosorbTM80-220-C5)上進(jìn)行，采用20％至70％CH3CN/0.1％Tfa梯度洗脫，時間為約55分鐘。第二次通過，采用30％至50％CH3CN/0.1％Tfa梯度洗脫，時間為約55分鐘，以獲得優(yōu)良的分離效果。將純化餾分合并，濃縮、冷凍干燥(2×10ml 0.5％鹽酸，然后1×10ml水)，得到實施例3的標(biāo)題化合物，26mg(14％)。質(zhì)譜933.5 MH+。
實施例4環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑)-Gly]以與實施例1基本類似的方式，按照合成反應(yīng)路線1進(jìn)行實施例4，其區(qū)別如下步驟g環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑-Gly]將中間體3f(150mg，0.14mmol)溶解于二氯甲烷(12ml)中，在氮氣氛下加入1M的BBr3的己烷溶液。將形成的漿液攪拌約1/2小時。加入甲醇(10ml)，將混合物真空濃縮。將粗混合物通過制備HPLC在C18柱上純化，采用24％至48％的CH3CN/0.2％NH4OAC梯度洗脫，時間為約50分鐘。合并純化餾分，濃縮、冷凍干燥(2×10ml水)，得到實施例4的標(biāo)題化合物，40mg(29％)。質(zhì)譜919.4 MH+。
實施例5環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Thr(OBzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]以與實施例3基本類似的方式，按照合成反應(yīng)路線1進(jìn)行實施例5，只是在步驟d中采用Fmoc-Thr(OBzl)-F代替Fmoc-Val-F。質(zhì)譜1025.5 MH+。
實施例6環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Thr-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑-Gly]以與實施例4基本類似的方式，按照合成反應(yīng)路線1進(jìn)行實施例6，只是采用中間體5f，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys(Cbz)-Thr(Obzyl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-Gly]代替步驟g中的中間體3f。質(zhì)譜1025.5 MH+。
實施例7H-Trp-D-Trp-Lys-Abu-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑)-Gly-OH以與實施例3基本類似的方式，按照合成反應(yīng)路線1進(jìn)行實施例7，只是在步驟3d中采用Fmoc-Abu-F代替Fmoc-Val-F，并用碳化二亞胺和HOBt進(jìn)行環(huán)化，而不進(jìn)行步驟3f。質(zhì)譜937.3 MH+。
實施例8環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Abu-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑)-Gly]
以與實施例3基本類似的方式，按照合成反應(yīng)路線1進(jìn)行實施例8，只是在步驟3d中，采用Fmoc-Abu-F代替Fmoc-Val-F。質(zhì)譜919.5 MH+。
實施例9環(huán)[Phe-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Pheψ(4-(1，1-二甲基乙基)咪唑)-Gly]實施例9按照反應(yīng)路線2制備。 反應(yīng)路線2
步驟a2-(1-(S)-氨基-2-苯基乙基)-4-(1，1-二甲基乙基)-咪唑?qū)oc-(L)-苯基丙氨酸(5.31g，20.0mmol)和碳酸銫(3.26g，10.0mmol)合并于1∶1/DMF∶水(50ml)中，將混合物進(jìn)行攪拌直至獲得均勻的混合物。減壓除去溶劑，將殘余物溶解于DMF(50ml)中，加入1-氯頻哪酮(2.63ml，20.0mmol)。將混合物在室溫下攪拌過夜，減壓濃縮。將形成的酮-酯溶解于二甲苯(100ml)中，濾除CsBr。加入乙酸銨(25.0g，0.33mol)，將混合物加熱回流約2小時，采用Dean-Stark分水器，除去過量的乙酸銨并釋放出水。將反應(yīng)混合物冷卻，用飽和碳酸氫鈉溶液(50ml)洗滌，用硫酸鈉干燥、過濾和真空濃縮。對保護(hù)的中間體通過閃蒸色譜的硅膠柱進(jìn)行純化，采用80∶20的己烷∶乙酸乙酯作為淋洗劑，得到3.45g(50％)的結(jié)晶中間體(質(zhì)譜344.3 MH+)。將這種中間體溶解于甲醇(30ml)中，加入濃鹽酸(5.0ml)，將混合物攪拌約3小時。將溶液真空濃縮，殘余物從THF和乙醚中沉淀出來。將固體真空干燥，得到1.89g(95％)的中間體9a。NMR(300MHZ，DMSO-d6)，8.5-10.5(3H，寬s)，7.3-7.4(1H，s)，7.15-7.35(3H，m)，7.0-7.1(2H，m)，4.9-5.1(1H，t)，3.5-3.65(2H，d)，1.2-1.3(9H，s)。
步驟h2-(1-(S)-((Fmoc-Phe-D-Trp-Lys(Boc)-Tyr(OBzl))-氨基-2-苯基乙基)-4-(1，1-二甲基乙基)-1H-咪唑?qū)⒅虚g體9a(790mg，2.50mmol)溶解于乙酸乙酯(40ml)中，加入三(2-氨基乙基)胺(9ml)，將混合物劇烈攪拌約1/2小時。乙酸乙酯層用飽和氯化鈉溶液(2×120ml)洗滌，然后用10％磷酸鹽緩沖溶液調(diào)節(jié)至pH＝5.5(3×40ml)。乙酸乙酯層用飽和碳酸氫鈉溶液(40ml)攪拌，加入FmocTyr(OBzl)-OSu(1.02g，3.00mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌約1.5小時，除去水層。
以與前述類似的方式，將中間體順序進(jìn)行脫保護(hù)和偶聯(lián)，采用Fmoc-Lys(Cbz)-OSu、Fmoc-D-Trp-OSu和Fmoc-Phe-OSu。將乙酸乙酯層通過閃蒸色譜的硅膠柱進(jìn)行純化，采用1％乙酸/乙酸乙酯作為淋洗劑。將產(chǎn)物餾分合并，真空濃縮。將粗產(chǎn)物再溶解于乙酸乙酯中，加入己烷進(jìn)行沉淀、過濾。將固體進(jìn)行真空干燥，得到中間體9h，1.67g(52％)。質(zhì)譜1280.7MH+。
步驟e4-(1，1-二甲基乙基)-2-(1-(S)-((Fmoc-Phe-D-Trp-Lys(Boc)-Tyr(OBzl))氨基-2-苯基乙基)-1-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)-咪唑?qū)⒅虚g體9h(128mg，0.10mmol)溶解于DMF(2ml)中，加入碳酸鉀(35mg，0.25mmol)和溴乙酸乙酯(28μl，0.25mmol)，將混合物在室溫下攪拌過夜。將混合物真空濃縮，溶解于乙酸乙酯(10ml)中，再用水(10ml)洗滌。將乙酸乙酯層用硫酸鈉干燥，過濾和真空濃縮，得到粗中間體9e(126mg，92％)，其可不經(jīng)純化直接使用。
步驟f環(huán)[Phe-D-Trp-Lys(Boc)-Tyr(OBzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]將中間體9e(116mg，0.085mmol)懸浮于乙酸乙酯(2ml)中，加入三(氨基乙基)胺(0.5ml)，將混合物劇烈攪拌約1/2小時。加入乙酸乙酯(10ml)，將溶液用飽和氯化鈉溶液(2×5ml)洗滌，然后用10％磷酸鹽緩沖溶液(pH＝5.5，3×5ml)洗滌。加入己烷(40ml)沉淀出中間體，對中間體(76mg)進(jìn)行過濾。將殘余物溶解于甲醇(2ml)中，在室溫下與2.5N的氫氧化鈉(0.1ml)一起攪拌過夜。將混合物用水稀釋至混濁，將pH值調(diào)節(jié)至約6.0。將脫保護(hù)的中間體過濾和真空干燥。將固體吸收于DMF(20ml)中，加入DCC(126mg，0.60mmol)和HOBt(90mg，0.60mmol)。將混合物在室溫下攪拌約6小時，真空濃縮。將其溶解于乙酸乙酯(5ml)中，用飽和碳酸氫鈉水溶液(1×5ml)洗滌，再用飽和氯化鈉溶液(5ml)洗滌。用硫酸鈉干燥、過濾和真空濃縮，得到中間體9f。質(zhì)譜1098.5 MH+。
步驟g環(huán)[Phe-D-Trp-Lys-Tyr-Pheψ(4-(1，1-二甲基乙基)咪唑)-Gly]將中間體9f(粗產(chǎn)物，0.085mmol)溶解于包含iPr3SiH的Tfa(9.4ml)和水(0.5ml)中，攪拌約20分鐘，真空濃縮。將粗混合物在C18柱上進(jìn)行制備HPLC純化，采用30％至60％CH3CN/0.1％Tfa進(jìn)行梯度洗脫，時間為約50分鐘。第二次通常，采用32％至80％CH3CN/0.2％乙酸銨進(jìn)行梯度洗脫，時間為約50分鐘，以獲得優(yōu)良的分離效果。合并純化餾分、濃縮和冷凍干燥(2×10ml 0.5％鹽酸，然后1×10ml水)，得到實施例9的標(biāo)題化合物，9mg(10％)。質(zhì)譜998.4 MH+。
實施例10環(huán)[Phe-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-Gly]以與實施例3基本類似的方式，按照合成反應(yīng)路線1進(jìn)行實施例10，只是在步驟d中，采用Fmoc-Phe-OSu代替Fmoc-Trp-F。質(zhì)譜894.4 MH+。
實施例11環(huán)[Phe-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-Gly]以與實施例3基本類似的方式，按照合成反應(yīng)路線1進(jìn)行實施例11，只是在步驟d中，采用Fmoc-Phe-OH代替Fmoc-Trp-F，采用Fmoc-Tyr(OBzl)-OH代替Fmoc-Val-F。Fmoc-Tyr(OBzl)-OH用DCC和商購的HOAt活化。在步驟g中的粗混合物由完全脫保護(hù)的物質(zhì)(Cbz和芐基醚均除去)和部分脫保護(hù)的物質(zhì)(Cbz除去而芐基醚完整)組成。由部分脫保護(hù)形成的較低極性峰得到實施例11的標(biāo)題化合物。質(zhì)譜1048.5 MH+。
實施例12環(huán)[Phe-D-Trp-Lys-Tyr-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-Gly]以與實施例3基本類似的方式，按照合成反應(yīng)路線1進(jìn)行實施例12，只是在步驟d中，采用Fmoc-Phe-OH代替Fmoc-Trp-F，采用Fmoc-Tyr(OBzl)-OH代替Fmoc-Val-F。用DCC和商購的HOAt活化Fmoc-Tyr(OBzl)-OH。在步驟g中的粗混合物由完全脫保護(hù)的物質(zhì)(Cbz和芐基醚均除去)和部分脫保護(hù)的物質(zhì)(Cbz除去而芐基醚完整)組成。由完全脫保護(hù)形成的較高極性峰得到實施例12的標(biāo)題化合物。質(zhì)譜958.4 MH+。
實施例13環(huán)[Phe-D-Trp-Lys-Tyr-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑-Gly]以與實施例4基本類似的方式，按照合成反應(yīng)路線1進(jìn)行實施例13，只是在步驟g中，采用中間體11f，環(huán)[Phe-D-Trp-Lys(Cbz)-Tyr(OBzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-Gly]代替中間體3f。質(zhì)譜944.6 MH+。
實施例14環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-Gly]以與實施例9基本類似的方式，按照合成反應(yīng)路線2進(jìn)行實施例14，其區(qū)別如下步驟h2-(1-(S)-((Fmoc-Trp-D-Trp-Lys(Cbz)-Tyr(Bzl))-氨基)-2-苯基乙基)-4-(3-甲氧基苯基)-1-(三苯基甲基)-咪唑以與步驟9h類似的方式進(jìn)行肽合成，只是采用Fmoc-Trp-OSu代替Fmoc-Phe-OSu，采用Fmoc-Lys(Boc)-OSu代替Fmoc-Lys(Cbz)-OSu和采用Fmoc-Tyr(Bzl)-OSu代替Fmoc-Val-OSu。得到783mg(57％)，質(zhì)譜＝1370.6 MH+。
步驟e1-((2-乙氧基-2-氧代)乙基)-2-(1-(S)-((Fmoc-Trp-D-Trp-Lys(Boc)-Tyr(OBzl))-氨基)-2-苯基乙基)-4-(3-甲氧基苯基)咪唑中間體14h的烷基化反應(yīng)以與反應(yīng)9h類似的方式完成，得到640mg(80％)，質(zhì)譜＝1456.3 MH+。
步驟f環(huán)[Trp-D-Trp-Lys(Boc)-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]將中間體14e(640mg，0.44mmol)溶解于15ml甲醇中，加入2.5N氫氧化鈉(1ml，2.5mmol)。將混合物攪拌約1/2小時，然后加入5％鹽酸溶液將pH值調(diào)節(jié)至約7.0。減壓除去甲醇，潷析出水層。將殘余物在減壓下充分干燥，然后，再溶解于15ml DMF中。加入DCC(206mg，1.0mmol)和HOBt(153mg，1.0mmol)，將反應(yīng)混合物攪拌過夜。將反應(yīng)混合物真空濃縮，再溶解于乙酸乙酯(10ml)中，用10％磷酸鹽緩沖液(pH＝5.5)洗滌兩次。將乙酸乙酯層放在硅膠柱上，產(chǎn)物用較多的乙酸乙酯淋洗。合并產(chǎn)物餾分并濃縮，得到240mg(46％)的中間體14f。
步驟g環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]將中間體14f(240mg，0.20mmol)溶解于二氯甲烷(10ml)中，加入包含iPr3SiH(205μl，1.0mmol)的Tfa(10ml)。將混合物在室溫下攪拌約15分鐘。減壓蒸出二氯甲烷，加入醚沉淀出粗產(chǎn)物。潷析出溶劑，將殘余物進(jìn)一步在C18柱上通過制備HPLC純化，采用30％至50％CH3CN/0.1％Tfa進(jìn)行梯度洗脫，時間為約55分鐘。合并純化餾分，濃縮和冷凍干燥(2×10ml0.5％鹽酸，然后1×10ml水)，得到實施例14的標(biāo)題化合物，25mg(11％)。質(zhì)譜1087.4 MH+。
實施例15環(huán)[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑-Gly]以與實施例4基本類似的方式，按照合成反應(yīng)路線1進(jìn)行實施例15，其區(qū)別如下步驟g環(huán)[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑)-Gly]將中間體1f(130mg，0.115mmol)溶解于二氯甲烷(5ml)中，在氮氣氣氛下，加入1M BBr3的己烷溶液(5ml)。將形成的漿液攪拌約1/2小時，然后冷卻至約0℃。加入甲醇(10ml)，將混合物真空濃縮。將粗混合物放于C18柱上，用1％乙酸銨溶液洗滌，再用0.1％Tfa溶液洗滌，然后用20％至35％CH3CN/0.1％Tfa進(jìn)行梯度洗脫，時間為約50分鐘。合并純化餾分、濃縮和冷凍干燥(2×10ml 0.5％鹽酸)，得到實施例15的標(biāo)題化合物，60mg(54％)。質(zhì)譜896 MH+。
實施例16環(huán)[Phe-D-Trp-Lys-Nal-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑-Gly]以與實施例3基本類似的方式，按照合成反應(yīng)路線1進(jìn)行實施例16，其區(qū)別如下步驟d2-(1-(S)-((Fmoc-Phe-D-Trp-Lys(Cbz)-Nal)氨基)-2-苯基乙基)-4-(3-甲氧基苯基)-1-(三苯基甲基)-咪唑以與中間體1d基本類似的方式制備中間體16d，只是采用Fmoc-Nal-OAt代替Fmoc-Val-F和采用Fmoc-Phe-OH代替Fmoc-Tyr(Bzl)-OH。
步驟g環(huán)[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑)-Gly]以與步驟4g基本相同的方式進(jìn)行步驟16g，獲得實施例16的標(biāo)題化合物。質(zhì)譜實施例17環(huán)[Phe-D-Trp-Lys-Nal-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-Gly]以與實施例16基本類似的方式，按照反應(yīng)路線1進(jìn)行實施例17，其區(qū)別如下步驟g環(huán)[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]將中間體17f(310mg，0.27mmol)懸浮于茴香醚(3ml)中，將懸浮液在約12ml的無水HF中處理。將混合物在約0℃下攪拌約1小時。蒸出HF，通過加入醚沉淀出產(chǎn)物。將粗產(chǎn)物過濾，再用制備HPLC進(jìn)一步純化，采用20-80％CH3CN/0.1％Tfa進(jìn)行梯度洗脫，時間為約40分鐘。合并純化餾分，濃縮和在稀鹽酸溶液中冷凍干燥兩次，得到產(chǎn)物56mg(19％)，質(zhì)譜992.4 MH+。 反應(yīng)路線3實施例18環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-(γ)Abu]按照合成反應(yīng)路線3進(jìn)行實施例18。
步驟i2-(1-(S)-((苯基甲氧基)羰基)-氨基-2-苯基乙基)-4-(4-甲氧基苯基)-咪唑?qū)bz-(L)-苯基丙氨酸(10.0g，33.4mmol)和碳酸銫(5.44g，16.7mmol)合并入2∶1/DMF∶水(75ml)中，將混合物進(jìn)行攪拌直至獲得均勻的混合物。減壓除去溶劑，將殘余物溶解于DMF(70ml)中，加入2-溴-3’-甲氧基苯乙酮(7.65g，33.4mmol)的DMF(30ml)溶液。將混合物在室溫下攪拌約1/2小時，然后減壓濃縮。將形成的酮-酯溶解于二甲苯(150ml)中，濾除CsBr。加入乙酸銨(40.0g，0.52mol)，將混合物加熱回流約2小時，采用Dean-Stark分水器，除去過量的乙酸銨并釋放出水。將反應(yīng)混合物冷卻，用飽和碳酸氫鈉溶液(50ml)和飽和氯化鈉溶液(50ml)洗滌。用硫酸鈉干燥二甲苯層，過濾和真空濃縮，得到中間體18i，為一種棕褐色固體(13.8g，96％)。質(zhì)譜428.2(MH+)。
步驟j2-(1-(S)-氨基-2-苯基乙基)-1-(4-(1，1-二甲基乙氧基)-4-氧代-丁基)-4-(4-甲氧基苯基)-咪唑?qū)⒅虚g體18i(2.14g，5.0mmol)溶解于DMF(11.5ml)中，用碳酸氫鉀(1.50g，15.0mmol)和丁酸4-溴-叔丁基酯(4-bromo-t-butylbutyrate)(6.69g，30mmol)分三次進(jìn)行處理，在約50℃下攪拌約18小時。將混合物用乙醚稀釋，用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌一次和用飽和氯化鈉溶液洗滌一次。醚層用硫酸鈉干燥，過濾和濃縮形成一種油。用硅膠柱色譜進(jìn)行處理，采用二氯甲烷作為淋洗劑，得到一種油狀產(chǎn)物。
將烷基化的粗產(chǎn)物通過在乙酸中采用10％ Pd/C作為催化劑進(jìn)行氫化而脫保護(hù)。濾除催化劑，減壓蒸出溶劑。將殘余物溶解于乙酸乙酯中，用飽和碳酸氫鈉溶液和飽和氯化鈉溶液洗滌，用硫酸鈉進(jìn)行干燥并濃縮得到中間體18j，為一種油(450mg)，其可不經(jīng)進(jìn)一步純化即用于下一步驟。
步驟k2-(1-(S)-((Boc-Trp-D-Trp-Lys(Cbz)-Val)-氨基-2-苯基乙基)-1-((4-(1，1-二甲基乙氧基)-4-氧代)丁基)-4-(3-甲氧基苯基)-咪唑以與步驟1d詳述的合成過程相同的方式進(jìn)行溶液合成，只是采用Boc-Trp-OSu代替Fmoc-Tyr(OBzl)-OSu和采用Fmoc-Tyr(OBzl)-OAt代替Fmoc-Val-F，得到中間體18k。得到產(chǎn)物1.03g(81％)。
步驟12-(1-(S)-((H-Trp-D-Trp-Lys(Cbz)-Val)-氨基-2-苯基乙基)-1-((4-羥基-4-氧代)丁基)-4-(3-甲氧基苯基)-咪唑中間體18k用含有(iPr)3SiH(593μl，2.90mmol)的Tfa(10ml)溶液處理，攪拌約1小時。將反應(yīng)混合物濃縮，用1∶1乙醚∶己烷溶液進(jìn)行研制，得到中間體181，為一種棕褐色固體，其可不經(jīng)進(jìn)一步純化即可用于下一步驟。質(zhì)譜1267.7 MH+。
步驟f環(huán)[Trp-D-Trp-Lys(Cbz)-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-(γ)Abu]將中間體18l溶解于DMF(20ml)中，加入4-甲基嗎啉(159μl，1.45mmol)、HOBt(196mg，1.45mmol)和EDC(278mg，1.45mmol)，將反應(yīng)混合物攪拌過夜。再將反應(yīng)混合物真空濃縮，用硅膠閃蒸色譜純化，采用二氯甲烷∶甲醇(9∶1)作為淋洗劑，得到中間體18f，得到產(chǎn)物220mg(24％)。質(zhì)譜1249.7 MH+。
步驟g環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-(γ)Abu]在30psi的氫氣氣氛下，于室溫，將中間體18f(220mg，176μmol)在乙酸中部分氫化14小時，采用的催化劑為10％Pd/C。濾除催化劑，將濾液進(jìn)行真空濃縮。將粗混合物在C18柱上進(jìn)行制備HPLC純化，采用0％至75％CH3CN/0.1％Tfa進(jìn)行梯度洗脫，時間為40分鐘。合并產(chǎn)物峰的純化餾分，濃縮和冷凍干燥(2×10ml 0.5％鹽酸，然后1×10ml水)，得到實施例18的標(biāo)題化合物，72mg(37％)。質(zhì)譜1115.6 MH+。
實施例19環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(4-甲氧基苯基)咪唑-Gly]以與實施例18基本類似的方式，按照合成反應(yīng)路線3進(jìn)行實施例19，其區(qū)別如下步驟j2-(1-(S)-氨基-2-苯基乙基)-1-(2-(1，1-二甲基乙氧基)-2-氧代-乙基)-4-(4-甲氧基苯基)-咪唑?qū)⒅虚g體18i(854mg，2.0mmol)溶解于DMF(10ml)中，加入溴代乙酸叔丁酯(646μl，4.0mmol)和碳酸鉀(552mg，4.0mmol)，將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。減壓除去溶劑，將殘余物溶解于乙酸乙酯中，用飽和氯化鈉溶液洗滌。乙酸乙酯層用硫酸鈉干燥，過濾和真空濃縮，得到1.02g的泡沫物。質(zhì)譜428.2 MH+，NMR(300MHZ，DMSO-d6)，7.85-8.0(1H，d)，7.6-7.75(2H，d)，7.85-7.95(1H，s)，7.1-7.35(10H，m)，6.9-7.0(2H，d)，4.75-5.05(5H，m)，3.7-3.9(3H，s)，3.1-3.4(2H，m)，1.3-1.5(9H，s)。
將中間體白色泡沫物(1.02g，1.88mmol)溶解于包含10％Pd/C(50mg)的HOAc(50ml)中，在30psi的氫氣氣氛下進(jìn)行氫化10小時。濾除催化劑，加入2N鹽酸(940μL，1.88mmol)。將混合物冷凍干燥一次，然后再在20％CH3CN/水中冷凍干燥，得到中間體19j，為一種淺褐色固體(862mg)，其可不經(jīng)進(jìn)一步純化直接使用。質(zhì)譜408.2 MH+。
步驟g以與步驟18g基本類似的方式進(jìn)行催化氫化和處理，得到標(biāo)題產(chǎn)物(22mg，4％)，為一種白色固體。質(zhì)譜1088.2 MH+。
實施例20環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(苯基)咪唑-Gly]以與實施例18基本類似的方式，按照合成反應(yīng)路線3進(jìn)行實施例20，只是在步驟i中，采用2-溴苯乙酮代替2-溴-3′-甲氧基苯乙酮。質(zhì)譜1057.4 MH+。
實施例21環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-(ε)Ahx]以與實施例18基本類似的方式，按照合成反應(yīng)路線3進(jìn)行實施例21，其區(qū)別如下步驟j2-(1-(S)-氨基-2-苯基乙基)-1-(6-(乙氧基)-6-氧代-己基)-4-(3-甲氧基苯基)-咪唑?qū)⒅虚g體21i(855mg，2.0mmol)溶解于DMF(8.0ml)中，并用碳酸氫鉀(200mg，2.0mmol)和6-溴己酸乙酯(3.56ml，20mmol)在約120℃下處理約8小時。將混合物濃縮，將殘余物通過硅膠柱色譜進(jìn)行純化，采用2∶1的己烷∶乙酸乙酯作為淋洗劑，得到純化產(chǎn)物，為一種膠狀物(0.94g)。
將烷基化的粗產(chǎn)物通過在乙酸中進(jìn)行氫化脫保護(hù)，采用10％Pd/C作為催化劑。濾除催化劑，減壓蒸出溶劑。將殘余物溶解于稀鹽酸中，冷凍并冷凍干燥，得到中間體21j，為一種淺黃色固體(720mg，91％)，其不經(jīng)進(jìn)一步純化即可用于下一步驟。質(zhì)譜436.2 MH+。
步驟k和步驟l2-(1-(S)-((H-Trp-D-Trp-Lys(Boc)-Tyr(OBzl)-2-(1-(S)-氨基-2-苯基乙基)-1-(6-(乙氧基)-6-氧代-己基)-4-(3-甲氧基苯基)-咪唑通過將Fmoc-Tyr(OBzl)-OH(493mg，1.00mmol)、HOAt(136mg，1.0mmol)和DCC(206mg，1.0mmol)在8ml乙酸乙酯中混合約1/2小時，然后除去二環(huán)己基脲而制得Fmoc-Tyr(OBzl)-OAt。將形成的溶液加至中間體21j(457mg，0.9mmol)的乙酸乙酯(4ml)溶液中，將混合物與飽和碳酸氫鈉溶液(10ml)攪拌，直至經(jīng)質(zhì)譜分析表明反應(yīng)完成。除去水層，乙酸乙酯層用硫酸鈉干燥，過濾并再用三(2-氨基乙基)胺(2.7ml)處理。將混合物劇烈攪拌約1/2小時。乙酸乙酯層用飽和氯化鈉溶液(2×60ml)洗滌，然后用10％磷酸鹽緩沖溶液調(diào)節(jié)pH值至約5.5(3×15ml)。
以與如上所述Fmoc-Tyr(OBzl)-OAt循環(huán)類似的方式，將中間體順序進(jìn)行脫保護(hù)和偶聯(lián)，采用Fmoc-Lys(Cbz)-OSu、Fmoc-D-Trp-OSu和Fmoc-Trp-OSu。最后的Fmoc脫保護(hù)得到N-末端的脫保護(hù)的中間體乙基酯。將乙酸乙酯層用硫酸鈉干燥，過濾并用4倍體積的己烷進(jìn)行稀釋。倒出溶劑，將殘余物用己烷研制，得到一種固體狀產(chǎn)物(0.67g，58％)，其可不經(jīng)進(jìn)一步純化即可使用。質(zhì)譜1289.6 MH+。
通過用1.7M的氫氧化鈉溶液(1.7ml)過夜處理在甲醇(5.0ml)中的中間體以除去乙基酯。用5％鹽酸溶液將混合物的pH值調(diào)節(jié)至約8.2，減壓除去溶劑。將殘余物吸收于DMF中，過濾除去氯化鈉，不經(jīng)進(jìn)一步純化即可將DMF溶液用于下一步驟。
以與實施例18類似的方式進(jìn)行環(huán)化反應(yīng)和脫保護(hù)，得到實施例21的標(biāo)題化合物，為一種白色粉末，62mg。質(zhì)譜1143.9 MH+。
實施例22
環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑-(γ)Abu]以與實施例18基本類似的方式，按照合成反應(yīng)路線3進(jìn)行實施例22，其區(qū)別如下步驟j2-(1-(S)-氨基-2-苯基乙基)-1-(4-(乙氧基)-4-氧代-丁基)-4-(4-羥基苯基)-咪唑?qū)⒅虚g體22i(2.0g，4.68mmol)溶解于DMF(7.0ml)中，用碳酸氫鉀(468mg，4.68mmol)和4-溴-丁酸乙酯(6.70ml，46.8mmol)處理，在約100℃下攪拌約30小時。將混合物用乙醚稀釋，用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌一次，再用飽和氯化鈉溶液洗滌一次。醚層用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮得到一種油。進(jìn)行硅膠柱色譜純化，采用二氯甲烷作為淋洗劑，得到一種油狀產(chǎn)物(2.53g，94％)。質(zhì)譜542.3 MH+。
在15分鐘內(nèi)，于約-10℃下，將在二氯甲烷(50ml)中的烷基化的粗產(chǎn)物(2.53g，4.67mmol)滴加到1M BBr3/己烷(23.4ml)的二氯甲烷(250ml)溶液中。將混合物升溫至室溫，攪拌約2小時。加入乙醇(40ml)，再將混合物濃縮至約50ml。將溶液用乙醇(100ml)稀釋，在室溫下攪拌過夜。將混合物減壓濃縮，使殘余物在乙酸乙酯與飽和碳酸氫鈉溶液間進(jìn)行分配。乙酸乙酯層用硫酸鈉干燥，過濾并減壓濃縮，得到一種油(1.41g，76％)，其可不經(jīng)苯酚保護(hù)即可用于下一步驟。質(zhì)譜394.3 MH+。
HPLC停留時間
HPLC系統(tǒng)A梯度20-80％CH3CN/0.1％Tfa，24分鐘流速1.0ml/分鐘檢測254nm柱 VYDAC蛋白質(zhì)和肽C18B梯度35-50％CH3CN/0.1％Tfa，24分鐘流速1.0ml/分鐘檢測254nm柱 VYDAC蛋白質(zhì)和肽C18C梯度32-64％CH3CN/0.1％乙酸銨，24分鐘流速1.0ml/分鐘檢測254nm柱 VYDAC蛋白質(zhì)和肽C18D梯度20-60％CH3CN/0.1％Tfa，24分鐘流速1.0ml/分鐘檢測254nm柱 VYDAC蛋白質(zhì)和肽C18E梯度55-75％CH3CN/0.1％Tfa，24分鐘流速1.0ml/分鐘檢測220nm柱 Phenomenex LICHROSPHERE5 RP18(Phenomenex，2320W，205thSt.，Torrance，CA)F梯度60％CH3CN/0.1％Tfa等度洗脫流速1.0ml/分鐘檢測254nm
柱 VYDAC蛋白質(zhì)和肽C18G梯度50％CH3CN/0.1％Tfa，等度洗脫流速1.0ml/分鐘檢測254nm柱 VYDAC蛋白質(zhì)和肽C18H梯度38％CH3CN/0.1％Tfa，等度洗脫流速1.0ml/分鐘檢測254nm柱 VYDAC蛋白質(zhì)和肽C18I梯度20-40％CH3CN/0.1％Tfa，24分鐘流速1.0ml/分鐘檢測254nm柱 VYDAC蛋白質(zhì)和肽C18J梯度50％CH3CN/0.1％Tfa，等度洗脫流速1.0ml/分鐘檢測254nm柱 NUCLEOSILTMC18，5微米(Alltech Associates，2051Waukegan Rd.，Deerfield，Illinois)K梯度40％CH3CN/0.1％Tfa，等度洗脫流速1.0ml/分鐘檢測254nm柱 NUCLEOSILTMC18，5微米L梯度52％CH3CN/0.1％Tfa，等度洗脫流速1.0ml/分鐘檢測254nm
柱 NUCLEOSILTMC18，5微米M梯度50％CH3CN/0.1％Tfa，等度洗脫流速1.0ml/分鐘檢測254nm柱 NUCLEOSILTMC18，5微米N梯度48％CH3CN/0.1％Tfa，等度洗脫流速1.0ml/分鐘檢測254nm柱 NUCLEOSILTMC18，5微米
權(quán)利要求
1.式(I)化合物或其可藥用鹽， 其中，Y和Z在每次出現(xiàn)時彼此獨立地是D-或L-天然或非天然的α-氨基酸；n在每次出現(xiàn)時彼此獨立地是0至50，條件是兩個n不能同時為0；m是0或1到10的整數(shù)；a是H或R1；b是OH、-OR1或-NR9R9；或者a與b合在一起形成酰胺鍵；R1彼此獨立地是H、(C1-C4)烷基或芳基-(C1-C4)烷基；R2是H或選自(C1-C4)烷基、苯基、苯基-(C1-C4)烷基和雜環(huán)基-(C1-C4)烷基的選擇性取代的部分，其中，選擇性取代的部分選擇性地被一個或多個取代基所取代，所述取代基彼此獨立地選自(C1-C4)烷基、(C3-C8)環(huán)烷基、-O-R6、-S(O)q-R7、-N(R9R9)、-NHCO-R6、-NHSO2R9、-CO2R9、-CONR9R9和-SO2NR9R9，其中q是0、1、2或3；R3和R4彼此獨立地是H、鹵素或選自(C1-C4)烷基、(C3-C8)環(huán)烷基、芳基和芳基-(C1-C4)烷基的選擇性取代的部分；其中，選擇性取代的部分選擇性地被一個或多個取代基所取代，所述取代基彼此獨立地選自O(shè)H、(C1-C4)烷基、(C4-C4)烷氧基、芳氧基、芳基-(C1-C4)烷氧基、-NR9R9、-COOH、-CONR9R9和鹵素；或者R3和R4與它們所連接的碳合在一起形成選擇性取代的芳基，其中的芳基選擇性地被一個或多個取代基所取代，所述取代基彼此獨立地選自O(shè)H、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、芳氧基、芳基-(C1-C4)烷氧基、-NR9R9、-COOR5、-CONR9R9和鹵素；R5在每次出現(xiàn)時彼此獨立地是H或選自(C1-C4)烷基和芳基-(C1-C4)烷基的選擇性取代的部分，其中，選擇性取代的部分選擇性地被一個或多個取代基所取代，所述取代基彼此獨立地選自(C1-C4)烷基、OH、(C1-C4)烷氧基、芳氧基、NO2、芳基-(C1-C4)烷氧基、-NR9R9、COOH、-CONR9R9和鹵素；R6在每次出現(xiàn)時彼此獨立地選自H、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、芳基-(C1-C4)烷基和芳基-(C1-C4)烷氧基；當(dāng)q是3時，R7是H；或者當(dāng)q是0、1或2時，R7在每次出現(xiàn)時彼此獨立地選自(C1-C4)烷基、芳基或芳基-(C1-C4)烷基；R9在每次出現(xiàn)時彼此獨立地選自H、NO2、(C1-C4)烷基、芳基和芳基-(C1-C4)烷基。
2.式(II)的化合物或其可藥用鹽， 其中，Y和Z在每次出現(xiàn)時彼此獨立地是D-或L-天然或非天然的α-氨基酸；m是0或1到10的整數(shù)；n在每次出現(xiàn)時彼此獨立地是0至6；R1在每次出現(xiàn)時彼此獨立地是H、(C1-C4)烷基或芳基-(C1-C4)烷基；R2是H或選自(C1-C4)烷基、苯基、苯基-(C1-C4)烷基和雜環(huán)基-(C1-C4)烷基的選擇性取代的部分，其中，選擇性取代的部分選擇性地被一個或多個取代基所取代，所述取代基彼此獨立地選自(C1-C4)烷基、環(huán)烷基、-O-R6、-S(O)q-R7、-N(R9R9)、-NHCO-R6、-NHSO2R9、-CO2R9、-CONR9R9和-SO2NR9R9，其中q是0、1、2或3；R3和R4彼此獨立地是H、鹵素或選自(C1-C4)烷基、環(huán)烷基、芳基和芳基-(C1-C4)烷基的選擇性取代的部分；其中，選擇性取代的部分選擇性地被一個或多個取代基所取代，所述取代基選自O(shè)H、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、芳氧基、芳基-(C1-C4)烷氧基、-NR9R9、-COOH、-CONR9R9和鹵素；或者R3和R4與它們所連接的碳合在一起形成選擇性取代的芳基，其中的芳基選擇性地被一個或多個取代基所取代，所述取代基彼此獨立地選自O(shè)H、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、芳氧基、芳基-(C1-C4)烷氧基、-NR9R9、-COOR5、-CONR9R9和鹵素；R5在每次出現(xiàn)時彼此獨立地是H或選自(C1-C4)烷基和芳基-(C1-C4)烷基的選擇性取代的部分，其中，選擇性取代的部分選擇性地被一個或多個取代基所取代，所述取代基彼此獨立地選自(C1-C4)烷基、OH、(C1-C4)烷氧基、芳氧基、NO2、芳基-(C1-C4)烷氧基、-NR9R9、COOH、-CONR9R9和鹵素；R6在每次出現(xiàn)時彼此獨立地選自H、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、芳基-(C1-C4)烷基和芳基-(C1-C4)烷氧基；當(dāng)q是3時，R7是H；或者當(dāng)q是0、1或2時，R7在每次出現(xiàn)時彼此獨立地選自(C1-C4)烷基、芳基或芳基-(C1-C4)烷基；R9在每次出現(xiàn)時彼此獨立地選自H、NO2、(C1-C4)烷基、芳基和芳基-(C1-C4)烷基；X1是天然或非天然的D-或L-α-氨基酸，其中，當(dāng)X1是Phe、Nal、Trp、Tyr、Pal或His時，其芳環(huán)在碳或氮上選擇性地被R6所取代，或者當(dāng)X1是Ser或Thr時，其側(cè)鏈氧選擇性地被一個或多個R1所取代；X2是D-或L-Trp、N-甲基-D-Trp或N-甲基-L-Trp；X3是Lys、α-N-甲基-Lys或ε-N-(C1-C4)烷基-Lys或ε-N-[芳基-(C1-C4)烷基]-Lys；X4是天然或非天然的D-或L-α-氨基酸，其中，當(dāng)X4是Phe、Nal、Trp、Tyr或His時，其芳環(huán)在碳或氮上選擇性地被R8所取代，或者當(dāng)X4是Ser、Tyr或Thr時，其側(cè)鏈氧可以被一個或多個R1所取代。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的化合物，其中，n是2；m是0或1至5；R1在每次出現(xiàn)時彼此獨立地是H、甲基或芳基-(C1-C4)烷基；R2是選自苯基-(C1-C4)烷基和雜環(huán)基-(C1-C4)烷基的選擇性取代的部分，其中，選擇性取代的部分被選自(C1-C4)烷基和-O-R6的取代基所取代；R3和R4彼此獨立地是H、鹵素或選自(C1-C4)烷基和芳基的選擇性取代的部分；其中，選擇性取代的部分選擇性地被選自O(shè)H、(C1-C4)烷氧基、芳氧基和鹵素的取代基所取代。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的化合物，其中，X1是Phe、Nal、Trp、Tyr、Pal或His，其中，它們的芳環(huán)在碳或氮上選擇性地被R6所取代；X4是Val、Abu、Ser、Thr、Nal、Trp、Tyr或His，其中，Nal、Trp、Tyr和His的芳環(huán)在碳和/或氮上選擇性地被R8所取代，或者當(dāng)X4是Ser、Tyr或Thr時，側(cè)鏈氧選擇性地被R1所取代。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的化合物，其中，X1是Phe、Trp或Tyr，其中，它們的芳環(huán)在碳或氮上選擇性地被R6所取代；X2是D-Trp或N-甲基-D-Trp；X3是Lys或α-N-甲基-Lys；X4是Val、Thr、Abu、Nal或Tyr，其中Thr和Tyr的羥基的側(cè)鏈氧選擇性地被R1所取代；R1在每次出現(xiàn)時彼此獨立地是H、甲基或芐基；R2是選自苯甲基和雜環(huán)基-甲基的選擇性取代的部分，其中，選擇性取代的部分被選自(C1-C4)烷基和-O-R6的取代基所取代；R3是(C1-C4)烷基或選擇性取代的芳基；其中，選擇性取代的芳基被選自O(shè)H、(C1-C4)烷氧基、芳氧基和鹵素的取代基所取代；R4是H；和R6在每次出現(xiàn)時彼此獨立地選自H和芳基-(C1-C4)烷氧基。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的化合物，其中X1是Phe、Trp、Tyr或Tyr(OBzl)；X4是Val、Thr、Abu、Nal或Tyr，其中Thr和Tyr的羥基選擇性地被芐基所取代；m是0、2或4；R2是選自苯甲基或3-吲哚基甲基的選擇性取代的部分，其中，該選擇性取代的部分選擇性地被-O-R6所取代；和R3是1，1-二甲基乙基或選擇性取代的芳基；其中，選擇性取代的芳基選擇性地被選自O(shè)H、(C1-C4)烷氧基和鹵素的基團(tuán)所取代；
7.根據(jù)權(quán)利要求6的化合物，其中R2是苯甲基；R3是1，1-二甲基乙基或選擇性取代的苯基，其中，選擇性取代的苯基選擇性地被OH或OCH3所取代；R6在每次出現(xiàn)時彼此獨立地選自H或芐基甲氧基。
8.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中，所述化合物是H-Trp-D-Trp-Lys-Abu-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly-OH。
9.根據(jù)權(quán)利要求7的化合物，其中，所述化合物是環(huán)[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Tyr(OBzl)-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Thr(OBzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Thr-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Abu-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Phe-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Pheψ(4-(1，1-二甲基乙基)咪唑)Gly]，環(huán)[Phe-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Phe-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Phe-D-Trp-Lys-Tyr-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Phe-D-Trp-Lys-Tyr-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Phe-D-Trp-Lys-Nal-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Phe-D-Trp-Lys-Nal-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-(γ)-Abu]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Pheψ(4-(4-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Pheψ(4-(苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-(ε)Ahx]，或環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑-(γ)Abu]。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的化合物，其中，所述化合物是環(huán)[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Tyr(OBzl)-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Thr(OBzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Thr-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Abu-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Phe-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Pheψ(4-(1，1-二甲基乙基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Phe-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Phe-D-Trp-Lys-Tyr-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑)-Gly]，或環(huán)[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑)-Gly]。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的化合物，其中，所述化合物是環(huán)[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Thr-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Abu-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Phe-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，或環(huán)[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑)-Gly]。
12.根據(jù)權(quán)利要求11的化合物，其中，所述化合物是環(huán)[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Thr-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑)-Gly]，或環(huán)[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑)-Gly]。
13.根據(jù)權(quán)利要求9的化合物，其中，所述化合物是環(huán)[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Thr(OBzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Thr-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Abu-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Phe-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Pheψ(4-(1，1-二甲基乙基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Phe-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Phe-D-Trp-Lys-Tyr-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Phe-D-Trp-Lys-Nal-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Phe-D-Trp-Lys-Nal-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-(γ)Abu]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(4-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-(ε)Ahx]，或環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑-(γ)Abu]。
14.根據(jù)權(quán)利要求13的化合物，其中，所述化合物是環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Thr-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Phe-D-Trp-Lys-Nal-Pheψ(4-(3-羥基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-(γ)Abu]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(4-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，或環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(苯基)咪唑)-Gly]。
15.根據(jù)權(quán)利要求14的化合物，其中，所述化合物是環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-(γ)Abu]，環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(4-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，或環(huán)[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(苯基)咪唑)-Gly]。
16.含有有效量的權(quán)利要求1的化合物或其可藥用鹽以及可藥用載體的藥物組合物。
17.含有有效量的權(quán)利要求2的化合物或其可藥用鹽以及可藥用載體的藥物組合物。
18.在存在需要的哺乳動物中誘導(dǎo)促生長素抑制素受體激動劑作用的方法，該方法包括，向所述哺乳動物施用有效量的權(quán)利要求1的化合物或其可藥用鹽。
19.在存在需要的哺乳動物中誘導(dǎo)促生長素抑制素受體激動劑作用的方法，該方法包括，向所述哺乳動物施用有效量的權(quán)利要求2的化合物或其可藥用鹽。
20.在存在需要的哺乳動物中誘導(dǎo)促生長素抑制素受體拮抗劑作用的方法，該方法包括，向所述哺乳動物施用有效量的權(quán)利要求1的化合物或其可藥用鹽。
21.在存在需要的哺乳動物中誘導(dǎo)促生長素抑制素受體拮抗劑作用的方法，該方法包括，向所述哺乳動物施用有效量的權(quán)利要求2的化合物或其可藥用鹽。
22.在需要治療的哺乳動物中治療催乳素分泌腺瘤再狹窄、糖尿病、高脂血癥、胰島素不敏感、X綜合征、血管病、增殖性視網(wǎng)膜病、黎明現(xiàn)象、腎??；胃酸分泌、消化性潰瘍、腸皮膚瘺和胰皮膚瘺、過敏性腸疾病、傾倒綜合征、水瀉綜合征、與AIDS有關(guān)的腹瀉、化療引起的腹瀉、急性或慢性胰腺炎、胃腸激素分泌腫瘤、癌癥、肝細(xì)胞瘤、血管生成、炎性疾病、關(guān)節(jié)炎、慢性同種異體移植物排斥反應(yīng)、血管成形術(shù)、移植血管出血或胃腸出血的方法，該方法包括，向所述哺乳動物施用權(quán)利要求1的化合物或其可藥用鹽。
23.在需要治療的哺乳動物中治療催乳素分泌腺瘤再狹窄、糖尿病、高脂血癥、胰島素不敏感、X綜合征、血管病、增殖性視網(wǎng)膜病、黎明現(xiàn)象、腎?。晃杆岱置?、消化性潰瘍、腸皮膚瘺和胰皮膚瘺、過敏性腸疾病、傾倒綜合征、水瀉綜合征、與AIDS有關(guān)的腹瀉、化療引起的腹瀉、急性或慢性胰腺炎、胃腸激素分泌腫瘤、癌癥、肝細(xì)胞瘤、血管生成、炎性疾病、關(guān)節(jié)炎、慢性同種異體移植物排斥反應(yīng)、血管成形術(shù)、移植血管出血或胃腸出血的方法，該方法包括，向所述哺乳動物施用權(quán)利要求2的化合物或其可藥用鹽。
24.在需要治療的哺乳動物中抑制幽門螺旋桿菌增殖的方法，該方法包括，向所述哺乳動物施用權(quán)利要求1化合物或其可藥用鹽。
25.在需要治療的哺乳動物中抑制幽門螺旋桿菌增殖的方法，該方法包括，向所述哺乳動物施用權(quán)利要求2化合物或其可藥用鹽。
全文摘要
本發(fā)明涉及可選擇性地與促生長素抑制素受體亞型結(jié)合的含有咪唑順式酰胺鍵模擬物的環(huán)狀衍生物,本發(fā)明還涉及該化合物在治療可通過從促生長素抑制素亞型受體誘導(dǎo)激動劑或拮抗劑作用進(jìn)行治療的疾病中的用途。本發(fā)明還涉及制備本發(fā)明化合物的方法。
文檔編號A61P13/00GK1305496SQ99807502
公開日2001年7月25日 申請日期1999年6月11日 優(yōu)先權(quán)日1998年6月16日
發(fā)明者湯瑪斯·D·高登 申請人:研究及應(yīng)用科學(xué)協(xié)會股份有限公司