專(zhuān)利名稱(chēng)：取代的6－和7－氨基四氫異喹啉羧酸的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的取代的6-和7-氨基四氫異喹啉羧酸，其制備方法和其作為藥物的應(yīng)用。
申請(qǐng)EP060646、WO95/35276和WO96/27583公開(kāi)了芳基磺?；被惲u肟酸及其作為基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑的作用。特定的芳基磺?；被人岜挥米髦苽淠敢种苿?EP0468231)的中間體和醛糖還原酶抑制劑的中間體(EP0305947)。申請(qǐng)EP0757037還公開(kāi)了磺酰基氨基的酸衍生物作為金屬蛋白酶抑制劑的作用。
在尋找用于治療結(jié)締組織疾病的有效化合物的努力中，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)本發(fā)明羧酸是基質(zhì)金屬蛋白酶的強(qiáng)抑制劑。由于溶基質(zhì)素(基質(zhì)金屬蛋白酶3)和嗜中性膠原酶(MMP-8)這兩種酶主要，特別是參與作為軟骨組織重要組成成分的蛋白聚酶的降解，所以，特別有價(jià)值的是對(duì)這兩種酶的抑制作用(A.J.Fosang等人，臨床研究雜志(J.Clin.Invest.)，98(1998)2292-2299)。
因此，本發(fā)明涉及式I化合物
和/或式I化合物的立體異構(gòu)體形式和/或式I化合物的生理上可耐受的鹽，其中R1是1.苯基；2.被下述取代基單或二取代的苯基2.1.直鏈、環(huán)狀或支鏈的(C1-C6)-烷基，2.2.-OH，2.3.(C1-C6)-烷基-C(O)-O-，2.4.(C1-C6)-烷基-O-，
2.5.(C1-C6)-烷基-O-(C1-C4)-烷基-O-，2.6.鹵素，2.7.-CF3，2.8.-CN，2.9.-NO2，2.10.HO-C(O)-，2.11.(C1-C6)-烷基-O-C(O)，2.12.亞甲二氧基，2.13.R5-(R6)N-C(O)-，其中R5和R6相同或不同，代表氫原子或(C1-C6)-烷基-，或2.14.R5-(R6)N-，其中R5和R6相同或不同，代表氫原子或(C1-C6)-烷基-；3.來(lái)自3.1.至3.15.組的雜芳基，其中雜芳基是未取代的或被如2.1.至2.14.所述取代的，3.1.吡咯，3.2.吡唑，3.3.咪唑，3.4.三唑，3.5.噻吩，3.6.噻唑，3.7.噁唑，3.8.異噁唑，3.9.吡啶，3.10.嘧啶，3.11.吲哚，3.12.苯并噻吩，3.13.苯并咪唑，3.14.苯并噁唑，3.15.苯并噻唑；
4.-OH和A是共價(jià)鍵；5.-O-R14和A是共價(jià)鍵、-CH＝CH-或-C≡C-，其中R14是1)(C1-C6)-烷基、2)(C3-C6)-環(huán)烷基、3)芐基或4)苯基；6.-COOH和A是共價(jià)鍵、-CH＝CH-或-C≡C-；7.(C1-C6)-烷基；8.(C3-C6)-環(huán)烷基-O-(C1-C4)-烷基；9.鹵素和A是共價(jià)鍵、-CH＝CH-或-C≡C-；10.-CN和A是共價(jià)鍵、-CH＝CH-或-C≡C-；11.-NO2和A是共價(jià)鍵、-CH＝CH-或-C≡C-；或12.-CF3；而R2是1.HO(H)N-或2.R7-O-，其中R7是2.1氫原子，2.2(C1-C6)-烷基，2.3.烯丙基，2.4.芐基；R3和R4相同或不同，是1.氫原子，2.(C1-C6)-烷基，3.苯基-(CH2)m，其中苯基是未取代的或被如2.1.至2.14.所述單或二取代的，以及m是整數(shù)0、1、2或3，4.R8-(CO)-，其中R8是4.1(C1-C8)-烷基，4.2苯基-(CH2)m-，其中苯基是未取代的或被如2.1.至2.14.所述單或二取代的，以及m是整數(shù)0、1、2或3，4.3 R7-O-C(O)-(CH2)n-，其中R7定義如上而n是整數(shù)0、1、2、3、4、5或6，
4.4 R7-N(H)-(R9)-C(H)-，其中R7定義如上，以及R9是蛋白原α-氨基酸的特征基，且其中R9是未取代的或在氧或硫原子上被(C1-C4)-烷基、芐基或烯丙基單或二取代，或被N-保護(hù)基取代，4.5 R7-C(O)-N(H)-(R9)-C(H)-，其中R7和R9定義如4.4，4.6 R10-O-C(O)-N(H)-(R9)-C(H)-，其中R9定義如4.4，以及R10是4.6.1(C1-C6)-烷基、4.6.2烯丙基、4.6.3芐基或4.6.4(9-芴基)甲基，5.R10-O-C(O)-，其中R10定義如4.6.1至4.6.4，6.R15-SO2-，其中R15是6.1 C1-C6)-烷基，6.2烯丙基6.3苯基-(CH2)m-，其中苯基是未取代的或被如2.1.至2.14.所述單或二取代的，以及m是整數(shù)0、1、2或3，或7.H2N-C(＝NH)-；或R3和R4與氮原子一起形成式Xa或Xb的基團(tuán)；
或R3和R4與氮原子一起形成硝基；A是a)共價(jià)鍵，b)-O-，c)-CH＝CH-或d)-C≡C-；B是a)-(CH2)m-，其中m定義如上，b)-O-(CH2)q，其中q是整數(shù)1、2、3、4或5，或c)-CH＝CH-；以及X是-CH＝CH-，氧原子或硫原子。
術(shù)語(yǔ)“鹵素”是指氟、氯、溴或碘。術(shù)語(yǔ)“烷基”或“鏈烯基”是指碳鏈?zhǔn)侵辨溁蛑ф湹臒N基。環(huán)烷基為，例如3-至6-元單環(huán)，如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基或環(huán)己基。“R9為蛋白質(zhì)氨基酸的特征基”是指式Xc中的R基團(tuán)，
其中R衍生自氨基酸甘氨酸、丙氨酸、頡氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、天冬氨酸、谷氨酰胺、賴(lài)氨酸、組氨酸、精氨酸、谷氨酸、天冬氨酸，并可使用其對(duì)映體以及外消旋體形式或任何所需的混合物。由此使用的N-保護(hù)基E優(yōu)選肽化學(xué)中常見(jiàn)的N-保護(hù)基，例如脲烷類(lèi)型的保護(hù)基(如芐氧羰基(Z)、叔丁氧羰基(Boc)、9-芴基甲氧羰基(Fmoc)和烯丙氧羰基(Aloc)或酰胺類(lèi)型的保護(hù)基(特別是甲?；?、乙酰基或三氟乙?；?或烴基類(lèi)型保護(hù)基(如芐基)。已證實(shí)(三甲基甲硅烷基)乙氧羰基(Teoc)尤其適合(P.Kocienski，保護(hù)基(Protecting Groups)，ThiemeVerlag1994)。此外，鏈烯基還可含有多個(gè)雙鍵。
化學(xué)反應(yīng)的起始物是已知的，或可通過(guò)文獻(xiàn)中的已知方法容易地制得。
本發(fā)明進(jìn)一步涉及制備式I化合物和/或式I化合物的立體異構(gòu)體和/或式I化合物的生理上可耐受的鹽的方法，所述方法包括a)將式II化合物
轉(zhuǎn)化為式III化合物，
其中R10和R11是-NO2或氫原子，且R10和R11不同；和b)在堿存在下，將得自a)的式III化合物與式IV化合物反應(yīng)，
其中B、X、A和R1如式I中所定義，和R2是氯原子、咪唑基或-OH，如果適宜的話(huà)，與脫水劑反應(yīng)生成式V化合物，
其中R10和R11是-NO2或氫原子，且R10和R11不同；和c)將b)中所得式V化合物進(jìn)行異構(gòu)體分離，并得到式I化合物，該式I化合物中R3和R4與氮原子一起形成在位置6或7與苯基鍵相連的NO2；或d)將c)中所得化合物還原為R3和R4為氫的式I化合物；或e)將d)中所得化合物用碳?；蚧酋Ｂ?、羧基或磺基咪唑烷、氯甲酸酯、活性酯或酸酐酰化；或f)將d)中所得化合物與適宜的氨基酸、羧酸、醛或任選取代的胍反應(yīng)；或g)將d)中所得化合物烷基化；或h)使a)中所得化合物反應(yīng)生成式IV化合物，
其中E為N-保護(hù)基，R10和R11定義如上，將式VI化合物分離為式VII和VIII的區(qū)域異構(gòu)體，
并且，在如d)所述的條件下使硝基反應(yīng)并在如e)、f)或g)所述的條件下使所得化合物反應(yīng)；或i)或通過(guò)方法h)、g)、f)、e)或d)得到化合物反應(yīng)生成相應(yīng)的羧酸酯(R2＝O-R7)或使其與羥基胺反應(yīng)(R2＝-N(H)-OH)。
本發(fā)明還涉及藥物，該藥物含有有效量的至少一個(gè)式I化合物和/或式I化合物的生理上可耐受的鹽和/或式I化合物的任選的立體異構(gòu)體，連同適合于藥用的和生理上可耐受的賦形劑、添加劑和/或其它活性化合物和輔助劑。
因?yàn)樗幚韺W(xué)性質(zhì)，本發(fā)明化合物適于預(yù)防和治療所有在病程中與基質(zhì)-降解金屬蛋白酶的活性增長(zhǎng)有關(guān)的疾病；包括關(guān)節(jié)創(chuàng)傷后或關(guān)節(jié)的半月板或膝蓋骨損傷或韌帶撕裂后的相當(dāng)長(zhǎng)期的固定術(shù)引起的變性關(guān)節(jié)疾病，如骨關(guān)節(jié)病、椎關(guān)節(jié)強(qiáng)硬、軟骨溶解。此外，還包括結(jié)締組織疾病，如膠原性疾病、牙周疾病、傷口愈合疾病和運(yùn)動(dòng)器官的慢性病，如與炎癥、免疫或代謝有關(guān)的急性或慢性關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)病、肌痛和骨代謝疾??；本發(fā)明式I化合物還適于治療潰瘍、動(dòng)脈粥樣硬化和狹窄；此外，本發(fā)明式I化合物也適于治療炎癥、癌癥、瘤轉(zhuǎn)移的形成、惡病質(zhì)、厭食和膿毒性休克。
通常，本發(fā)明藥物口服或腸胃外給藥；還可以直腸或經(jīng)皮給藥。
本發(fā)明還涉及藥物的制備方法，其中包括使用適于藥用的和生理上可耐受的的賦形劑和，如果適宜的話(huà)，使用其它活性化合物、添加劑或輔助劑使至少一個(gè)式I化合物成為合適的給藥形式。
合適的固體藥物劑型例如顆粒劑、粉劑、包衣片劑、片劑、(微)膠囊、栓劑、糖漿、汁液、懸浮劑、乳劑、滴劑或注射溶液和延長(zhǎng)活性化合物釋放的制劑，其中使用常規(guī)制劑輔助劑，如賦形劑、崩解劑、包衣劑、溶脹劑、潤(rùn)滑劑、調(diào)味劑、甜味劑和增溶劑。可提到的經(jīng)常使用的輔助劑是碳酸鎂、二氧化鈦、乳糖、甘露糖醇和其它糖、滑石、乳蛋白質(zhì)、明膠、淀粉、纖維素及其衍生物、動(dòng)物和植物油(如魚(yú)肝油、向日葵、花生或芝麻油)、聚乙二醇和溶劑(如無(wú)菌水和單-或多羥基醇(如甘油))。
優(yōu)選將藥物制劑以劑量單位的形式制備和給藥，每個(gè)單位作為活性成分含有特定劑量的本發(fā)明式I化合物。在如片劑、膠囊、包衣片劑或栓劑的固體劑量單位中，該劑量可為多至大約1000mg，但是優(yōu)選大約50-300mg；在安瓿形式的注射溶液中，該劑量為多至大約300mg，優(yōu)選大約10-100mg。
基于本發(fā)明化合物的功效，治療體重大約70kg的成人，每日劑量大約為20mg-1000mg活性化合物，優(yōu)選大約100mg-500mg。但是，在某些情況下，較高或較低的每日劑量也是適宜的。每日劑量的給藥既可以單獨(dú)劑量單位的形式或以多個(gè)較小劑量單位的形式一次給藥，也可以特定間隔用細(xì)分的劑量多次給藥。
在Varian的200MHz設(shè)備或Bruker的400MHz設(shè)備上記錄1H-NMR圖譜，通常在室溫(RT)下并使用四甲基甲硅烷(TMS)為內(nèi)標(biāo)。如無(wú)另外指出，每次用的溶劑為DMSO-d6。通常，通過(guò)質(zhì)譜法(FAB-，ESI-MS)測(cè)定終產(chǎn)物。溫度數(shù)據(jù)以攝氏度表示，RT代表室溫(20℃-26℃)。所用縮寫(xiě)是解釋過(guò)的或按照常規(guī)慣例的。
實(shí)施例1(6/7)-硝基-1，2，3，4-四氫異喹啉-(R)-3-羧酸在-10℃下，將100g 1，2，3，4-四氫異喹啉-3-羧酸(564mmol)溶解或懸浮于500ml硫酸(濃度98％，密度1.84)，并冷卻至-30℃；將59g(584mmol)硝酸鉀溶于200ml硫酸并冷卻至0℃，接著，在1.5小時(shí)(h)的過(guò)程中，將其逐滴加入。在該過(guò)程中，內(nèi)部溫度再次升至-10℃。硝酸鹽加完后，在-10℃下再攪拌混合物10分鐘；并在沒(méi)有外部冷卻的情況下，攪拌1h。將混合物倒在冰上，并在冷卻的情況下用濃氨水溶液中和；消耗量大約為1.8升25％濃度溶液。在濾除氨基酸之前，先用同樣體積的水稀釋該混合物。將所得固體再次懸浮在水中并從殘余可溶性銨鹽中濾除。將其用充足冷水洗滌后在60℃減壓干燥。產(chǎn)量110.1g(理論值的88％)熔點(diǎn)從245℃開(kāi)始(緩慢脫色)，272-275℃(在分解情況下熔化)1H-NMR(400MHz，DCl/D2O)3.05(dd，1H，7-異構(gòu)體)；3.30(2dd，疊加，2H，6-和7-異構(gòu)體)；3.44(dd，1H，6-異構(gòu)體)；4.25(m，3H)；7.20；7.80(2m，3H)；6-異構(gòu)體的比例為13％元素分析C53.9(理論值54.06)，H4.50(理論值4.55)，N12.6(理論值12.61)IR1640(s)，1540(s)，1400(s)，1350(s)cm-1實(shí)施例2叔丁氧羰基-(6/7)-硝基-1，2，3，4-四氫異喹啉-(R)-3-羧酸將13.3g(59.9mmol)得自實(shí)施例1的化合物溶解或懸浮于13.1g(60mmol)一縮二碳酸二叔丁酯(di-tert-butyl dicarbonate)和12.72g(120mmol)碳酸鈉于300ml二噁烷/水(1∶1)的溶液中，并將混合物在室溫下攪拌16h。接著在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上蒸除二噁烷，并用200ml乙酸乙酯層覆蓋殘余水懸浮液。將該混合物冷卻至5℃，用1N HCl酸化至pH為3，并分離出有機(jī)相。將其用飽和NaCl溶液洗二次后，用硫酸鈉干燥。濾除干燥劑，減壓蒸發(fā)濾液。產(chǎn)量18.1g(理論值的94％)純度/異構(gòu)體分布HPLC測(cè)定Nucleosil RP18，125×4mm，254nm，乙腈/0.1M磷酸5∶95至70∶30；6-異構(gòu)體保留時(shí)間14.19分鐘，7-異構(gòu)體保留時(shí)間14.72分鐘。比率大約為1∶9；純度99.0％1H-NMR(200MHz)1.4(2s，9H)；3.3(m，2H)；4.4-5.0(3m，3H)；7.4-8.2(5m，3H)；12.7(s，1H)實(shí)施例32-叔丁氧羰基-7-硝基-1，2，3，4-四氫異喹啉-(R)-3-羧酸二環(huán)己銨鹽為了分離區(qū)域異構(gòu)體，將10g得自實(shí)施例2的化合物溶于300ml乙酸乙酯，并在室溫下用10ml乙酸乙酯中用1當(dāng)量(6.2ml)二環(huán)己胺處理。在冷卻下，加入正庚烷后，慢慢結(jié)晶出二環(huán)己銨鹽，16小時(shí)后將其濾除并干燥。再重結(jié)晶二次后，在總純度大于99％的情況下，6-異構(gòu)體的比例小于1.0％。從母液中可得到更多的物質(zhì)。產(chǎn)量6.1g(第一部分)純度/異構(gòu)體分布HPLC測(cè)定Nucleosil RP18，125×4mm，254nm，乙腈/0.1M磷酸5∶95至70∶30；6-異構(gòu)體保留時(shí)間13.51
分鐘，7-異構(gòu)體保留時(shí)間14.23分鐘。
比率＞1∶991H-NMR(200MHz)0.9-1.9(多重m，約30H)；2.7-3.05；3.4；4.6(5m，約5H)；7.4；8.0(2m，3H)旋光率-23.6℃(MeOH，c＝1)實(shí)施例42-叔丁氧羰基-7-硝基-1，2，3，4-四氫異喹啉-(R)-3-羧酸為了釋放被保護(hù)的氨基酸，將得自實(shí)施例3的DCHA鹽溶于乙酸乙酯，并通過(guò)用過(guò)量的10％檸檬酸水溶液搖動(dòng)萃取。再將有機(jī)相通過(guò)用飽和NaCl溶液搖動(dòng)萃取、用硫酸鈉干燥并減壓蒸發(fā)。收率87％和95％之間1H-NMR二環(huán)己胺的特征信號(hào)消失。
立即將釋放出的化合物進(jìn)一步處理。實(shí)施例57-硝基-1，2，3，4-四氫異喹啉-(R)-3-羧酸氫氯化物將0.5g得自實(shí)施例4的化合物(1.55mmol)用在乙醚中的19ml HCl處理，并在RT下將混合物攪拌30分鐘，蒸發(fā)至干，再與甲苯一起共蒸發(fā)數(shù)次并減壓干燥。產(chǎn)量0.385g(理論值的96％)1H-NMR(200MHz)3.2-3.6(m，2H)；4.3-4.6(m，3H)；7.6(d，1H)；8.1(dd，1H)；8.3(d，1h)；10.5(s，br.，1H)MS223.1(M+H)旋光率+143.5°(c＝1，MeOH)實(shí)施例62-叔丁氧羰基-7-氨基-1，2，3，4-四氫異喹啉-(R)-3-羧酸將38g得自實(shí)施例4的硝基化合物(117mmol)在室溫下在甲醇中在稍高壓力下用2g 10％披鈀碳?xì)浠?h。蒸去溶劑后，用異丙醚洗滌殘余物，從水/乙醇中重結(jié)晶，最后減壓下干燥。產(chǎn)量33g(理論值的95％)1H-NMR(200MHz)1.4(2S，9H)；2.9(m，2H)；4.2-4.8(多重m，3H)；6.4(m，2H)；6.8(m，1H)MS293.1(M+H)旋光率+28.33°(c＝1，甲醇)實(shí)施例72-叔丁氧羰基-(6/7)-氨基-1，2，3，4-四氫異喹啉-(R)-3-羧酸為了還原得自實(shí)施例2的氨基酸，步驟如實(shí)施例6中所述；將粗產(chǎn)物減壓蒸發(fā)。1H-NMR(200MHz)1.4(2S，9H)；2.9(m，2H)；4.2-4.8(多重m，3H)；6.4(m，寬，2H)；6.8(m，1H)MS293.1(M+H)實(shí)施例82-叔丁氧羰基-7-氨基-1，2，3，4-四氫異喹啉-(R)-3-羧酸(另一種方法)將得自實(shí)施例7的混合物在沸點(diǎn)熱下用乙腈處理。冷卻后，將其濾除；該處理進(jìn)行2-3次。1H-NMR(200MHz)1.4(2S，9H)；2.9(m，2H)；4.2-4.8(多重m，3H)；6.4(m，2H)；6.8(m，1H)；與實(shí)施例6無(wú)區(qū)別。MS293.1(M+H)旋光率+28.13°(c＝1，甲醇)實(shí)施例97-氨基-1，2，3，4-四氫異喹啉-(R)-3-羧酸二氫氯化物室溫下，將0.5g得自實(shí)施例8的化合物(1.7mmol)用在乙醚中的HCl處理30分鐘；減壓蒸發(fā)后，將殘余物再與甲苯一起共蒸發(fā)；并在油泵抽的真空下，從溶劑殘余物中分出產(chǎn)物。產(chǎn)量0.41g(理論值的91％)1H-NMR(200MHz)3.0-3.5(m，2H)；4.2-4.5(m，3H)；7.1-7.4(2m，3H)；10.0(s，寬，1H)MS193.0(M+H)旋光率+86.3°(c＝1，甲醇)實(shí)施例102-(4-甲氧基苯磺酰基)-7-氨基-1，2，3，4-四氫異喹啉-(R)-3-(N-羥基)甲酰胺以本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法，在標(biāo)準(zhǔn)條件下，由實(shí)施例1提到的化合物通過(guò)方法a)的變形中提及的路線(xiàn)制得2-(4-甲氧基苯磺?；?-7-(叔丁氧羰基)-氨基-1，2，3，4-四氫異喹啉-(R)-3-羧酸(其中所述的方法為用4-甲氧基苯磺酰氯形成磺酰胺，6-/7-異構(gòu)體的色譜純化(實(shí)施例13)，將硝基還原為氨基(實(shí)施例12)并引入Boc保護(hù)基)。
為了制備異羥肟酸，將10g(22mmol)2-(4-甲氧基苯磺酰基)-7-(叔丁氧羰基)-氨基-1，2，3，4-四氫異喹啉-(R)-3-羧酸溶于100ml四氫呋喃(THF)，冷卻至-15℃，并順次用2.1ml(22mmol)氯甲酸乙酯和4.8ml(44mmol)N-甲基嗎啉處理，并在該溫度45分鐘后用13.5ml(110mmol)0-三甲基甲硅烷基羥胺處理。在RT下，再攪拌混合物3h，減壓除去溶劑，將殘余物溶于乙酸乙酯中，并通過(guò)連續(xù)用10％檸檬酸溶液、10％碳酸鈉溶液和飽和NaCl溶液搖動(dòng)進(jìn)行萃取，用硫酸鈉干燥并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中蒸發(fā)，再在油泵抽的真空中除去溶劑殘余物。
在色譜純化后，將2.6g該化合物(總產(chǎn)量9.1g)(該化合物如實(shí)施例11所提及)用50ml在乙醚中的HCl處理，并在RT下攪拌混合物30分鐘。然后，減壓蒸發(fā)并將殘余物與甲苯一起共蒸發(fā)。產(chǎn)量1.97g(理論值的89％)1H-NMR2.75(m，2H)；3.8(s，3H)；4.40(m，3H)；6.9-7.3(m，3H)；7.0；7.7(2d，4H)；8.8；9.3；10.7(3s，3H)以與上述實(shí)施例類(lèi)似的方法制備下表1中提及的化合物。表1
藥理實(shí)施例制備并測(cè)定人溶基質(zhì)素和嗜中性白細(xì)胞膠原酶的催化區(qū)域的酶活性按照Ye等人所述的方法(生物化學(xué)(Biochemistry)；31(1992)第11231-11235頁(yè))制備溶基質(zhì)素(MMP-3)和嗜中性白細(xì)胞膠原酶(MMP-8)這兩種酶。為了測(cè)定酶活性或酶抑制劑活性，將70μl緩沖溶液和10μl酶溶液用10μl任選含有酶抑制劑的10％濃度(v/v)二甲基亞砜水溶液孵育15分鐘。加入含有1mmol/l底物的10μl 10％濃度(v/v)二甲基亞砜水溶液后，通過(guò)熒光分光鏡(328nm(ex)/393nm(em))監(jiān)視酶反應(yīng)。
酶活性表示為每分鐘消光的增長(zhǎng)。列于表2中的IC50值是測(cè)得的每次對(duì)酶的抑制達(dá)到50％時(shí)抑制劑濃度。
緩沖溶液含有0.05％Brij(Sigma，Deisenhofen，德國(guó))和0.1mol/ltris/HCl，0.1mol/l NaCl，0.01mol/l CaCl2和0.1mol/l哌秦-N，N-二〔2-乙磺酸〕(pH＝6.5)。
酶溶液含有5μg/ml按照Ye等人所述的方法制備的酶之一。底物溶液含有1mmol/l的熒光底物(7-甲氧基香豆素-4-基)乙?；?Pro-Leu-Gly-Leu-3-(2′，4′-二硝基苯基)-L-2，3-二氨基丙酰基-Ala-Arg-NH2(Bachem，Heidelberg，德國(guó))。表權(quán)利要求
1.式I化合物
和/或式I化合物的立體異構(gòu)體形式和/或式I化合物的生理上可耐受的鹽，其中R1是1.苯基；2.被下述取代基單或二取代的苯基；2.1.直鏈、環(huán)狀或支鏈的(C1-C6)-烷基，2.2.-OH，2.3.(C1-C6)-烷基-C(O)-O-，2.4.(C1-C6)-烷基-O-，2.5.(C1-C6)-烷基-O-(C1-C4)-烷基-O-，2.6.鹵素，2.7.-CF3，2.8.-CN，2.9.-NO2，2.10.HO-C(O)-，2.11.(C1-C6)-烷基-O-C(O)，2.12.亞甲二氧基，2.13.R5-(R6)N-C(O)-，其中R5和R6相同或不同，代表氫原子或(C1-C6)-烷基-，或2.14.R5-(R6)N-，其中R5和R6相同或不同，代表氫原子或(C1-C6)-烷基-；3.選自3.1.至3.15.組的雜芳基，其中雜芳基是未取代的或被如2.1.至2.14.所述取代的，3.1.吡咯，3.2.吡唑，3.3.咪唑，3.4.三唑，3.5.噻吩，3.6.噻唑，3.7.噁唑，3.8.異噁唑，3.9.吡啶，3.10.嘧啶，3.11.吲哚，3.12.苯并噻吩，3.13.苯并咪唑，3.14.苯并噁唑，3.15.苯并噻唑；4.-OH和A是共價(jià)鍵；5.-O-R14和A是共價(jià)鍵、-CH＝CH-或-C≡C-，其中R14是1)(C1-C6)-烷基、2)(C3-C6)-環(huán)烷基、3)芐基或4)苯基；6.-COOH和A是共價(jià)鍵、-CH＝CH-或-C≡C-；7.(C1-C6)-烷基；8.(C3-C6)-環(huán)烷基-O-(C1-C4)-烷基；9.鹵素和A是共價(jià)鍵、-CH＝CH-或-C≡C-；10.-CN和A是共價(jià)鍵、-CH＝CH-或-C≡C-；11.-NO2和A是共價(jià)鍵、-CH＝CH-或-C≡C-；12.-CF3；而R2是1.HO(H)N-或2.R7-O-，其中R7是2.1.氫原子，2.2.(C1-C6)-烷基，2.3.烯丙基，2.4.芐基；R3和R4相同或不同，是1.氫原子，2.(C1-C6)-烷基，3.苯基-(CH2)m，其中苯基是未取代的或被如2.1.至2.14.所述單或二取代的，以及m是整數(shù)0、1、2或3，4.R8-(CO)-，其中R8是4.1(C1-C8)-烷基，4.2苯基-(CH2)m-，其中苯基是未取代的或被如2.1.至2.14.所述單或二取代的，以及m是整數(shù)0、1、2或3，4.3 R7-O-C(O)-(CH2)n-，其中R7定義如上而n是整數(shù)0、1、2、3、4、5或6，4.4 R7-N(H)-(R9)-C(H)-，其中R7定義如上，以及R9是蛋白原α-氨基酸的特征基，且其中R9是未取代的或在氧或硫原子上被(C1-C4)-烷基、芐基或烯丙基單或二取代，或被N-保護(hù)基取代，4.5 R7-C(O)-N(H)-(R9)-C(H)-，其中R7和R9定義如4.4，4.6 R10-O-C(O)-N(H)-(R9)-C(H)-，其中R9定義如4.4，以及R10是4.6.1(C1-C6)-烷基、4.6.2烯丙基、4.6.3芐基或4.6.4(9-芴基)甲基，5.R10-O-C(O)-，其中R10定義如4.6.1至4.6.4，6.R15-SO2-，其中R15是6.1C1-C6)-烷基，6.2烯丙基6.3苯基-(CH2)m-，其中苯基是未取代的或被如2.1.至2.14.所述單或二取代的，以及m是整數(shù)0、1、2或3，或7.H2N-C(＝NH)-；或R3和R4與氮原子一起形成式Xa或Xb的基團(tuán)；
或R3和R4與氮原子一起形成硝基；A是a)共價(jià)鍵，b)-O-，c)-CH＝CH-或d)-C≡C-；B是a)-(CH2)m-，其中m定義如上，b)-O-(CH2)q，其中q是整數(shù)1、2、3、4或5，或c)-CH＝CH-；以及X是-CH＝CH-，氧原子或硫原子。
2.制備如權(quán)利要求1所述式I化合物的方法，所述方法包括a)將式II化合物
轉(zhuǎn)化為式III化合物，
其中R10和R11是-NO2或氫原子，且R10和R11不同；和b)在堿存在下，將得自a)的式III化合物與式IV化合物反應(yīng)，
其中B、X、A和R1如式I中所定義，而R2是氯原子、咪唑基或-OH，或如果適宜的話(huà)，與脫水劑反應(yīng)生成式V化合物，
其中R10和R11是-NO2或氫原子，且R10和R11不同；和c)將b)中所得式V化合物進(jìn)行異構(gòu)體分離，并得到式I化合物，該式I化合物中R3和R4與氮原子一起形成在位置6或7與苯基鍵相連的NO2；或d)將c)中所得化合物還原為R3和R4為氫的式I化合物；或e)將d)中所得化合物用碳?；蚧酋Ｂ?、羧基或磺基咪唑烷、氯甲酸酯、活性酯或酸酐?；换騠)將d)中所得化合物與適宜的氨基酸、羧酸、醛或任選取代的胍反應(yīng)；或g)將d)中所得化合物基化；或h)使a)中所得化合物反應(yīng)生成式IV化合物，
其中E為N-保護(hù)基，R10和R11定義如上，將式VI化合物分離為式VII和VIII的區(qū)域異構(gòu)體，
并且，在如d)所述的條件下使硝基反應(yīng)并在如e)、f)或g)所述的條件下使所得化合物反應(yīng)；或i)或通過(guò)方法h)、g)、f)、e)或d)得到化合物反應(yīng)生成相應(yīng)的羧酸酯(R2＝O-R7)或使其與羥基胺反應(yīng)(R1＝-N(H)-OH)。
3.藥物，所述藥物含有有效量的至少一個(gè)如權(quán)利要求1所述的式I化合物和適合于藥用的和生理上可耐受的賦形劑、添加劑和/或其它活性化合物和輔助劑。
4.至少一個(gè)如權(quán)利要求1所述的式I化合物用于制備藥物的用途，所述藥物用于預(yù)防和治療在病程中與基質(zhì)-降解金屬蛋白酶的活性增長(zhǎng)有關(guān)的疾病。
5.如權(quán)利要求4所述的用途，所述用途包括治療關(guān)節(jié)創(chuàng)傷后或關(guān)節(jié)的半月板或膝蓋骨損傷或韌帶撕裂后的相當(dāng)長(zhǎng)期的關(guān)節(jié)固定術(shù)引起的變性關(guān)節(jié)疾病，如骨關(guān)節(jié)病、椎關(guān)節(jié)強(qiáng)硬、軟骨溶解；結(jié)締組織疾病，如膠原性疾病、牙周疾病、創(chuàng)傷愈合疾病和運(yùn)動(dòng)器官的慢性病，如與炎癥、免疫或代謝有關(guān)的急性或慢性關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)病、肌痛和骨代謝疾?。粷?、動(dòng)脈粥樣硬化和狹窄；此外，還包括治療炎癥、癌癥、瘤轉(zhuǎn)移的形成、惡病質(zhì)、厭食和膿毒性休克。
6.藥物的制備方法，其特征在于使用適于藥用的和生理上可耐受的賦形劑和，如果適宜的話(huà)，再進(jìn)一步使用其它活性化合物、添加劑或輔助劑使至少一個(gè)如權(quán)利要求1所述的式I化合物成為合適的給藥形式。
全文摘要
式Ⅰ化合物適于制備用于預(yù)防和治療在病程中與基質(zhì)－降解金屬蛋白酶的活性增長(zhǎng)有關(guān)的疾病的藥物。
文檔編號(hào)A61P19/00GK1199045SQ9810831
公開(kāi)日1998年11月18日 申請(qǐng)日期1998年5月12日 優(yōu)先權(quán)日1997年5月13日
發(fā)明者M·舒多克 申請(qǐng)人:赫徹斯特股份公司