專利名稱：人源抗?jié)h坦病毒糖蛋白中和性基因工程單克隆抗體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及治療用人源基因工程單克隆抗體的制備及應用，尤其是特異性針對漢坦病毒糖蛋白的中和性基因工程單克隆抗體。運用噬菌體表面表達(PhageDisplay)技術(shù)，從流行出血熱疫區(qū)恢復期病人抗凝血中分離到的外周淋巴細胞中提取了總細胞RNA，通過RT-PCR方法，用一組人IgGFab基因特異性引物，從合成的cDNA中PCR擴增了一組輕鏈和重鏈Fab段基因，將輕鏈和重鏈先后插入噬菌體載體pComb3，成功地建立了抗?jié)h坦病毒抗體基因庫，并用純化的漢坦病毒顆粒以及抗?jié)h坦病毒糖蛋白鼠單抗捕捉糖蛋白抗原的方法對此抗體庫進行了富積篩選表達，獲得人源中和性抗?jié)h坦病毒漢坦型基因工程單克隆抗體Fab段基因及其表達。核苷酸序列分析證實所獲基因為人源IgGFab基因，用特異性放射免疫沉淀(IP),IFAT和ELISA以及空斑減少中和試驗鑒定表明，表達的人Fab抗體識別漢坦病毒糖蛋白G1，具有體外中和活性。作為一種潛在的治療用抗體藥物，這種中和抗體有望在將來被用于漢坦病毒引起的腎綜合征出血熱。
自1975年B淋巴細胞雜交瘤細胞融合技術(shù)問世以來，單克隆抗體作為臨床診斷，臨床治療和預防的新型產(chǎn)物，其運用價值和開發(fā)前景已獲得普遍的肯定分子生物學和分子免疫學的研究發(fā)展導致了基因工程單克隆抗體的產(chǎn)生和發(fā)展。通過抗體分子基因水平的重組可獲得多種多樣的特異性鼠源，兔源及人源抗體，使對單克隆抗體的研究有了突破性進展并越來越顯示出其重要意義及實際運用前景國內(nèi)外對基因工程單克隆抗體，尤其是人源化或人源抗體的研究已有10余年。而80年代末90年代初興起的噬菌體抗體基因庫技術(shù)側(cè)已成為當今世界人源基因工程單克隆抗體研究的熱點。目前已發(fā)展成功的基因工程單克隆抗體的形式有1)人-鼠嵌合抗體，即將鼠單抗輕，重鏈可變區(qū)基因VL和VH分別與人抗體輕，重鏈恒定區(qū)基因CL和CH連接形成人-鼠嵌合輕鏈和重鏈基因，并在骨髓瘤細胞，昆蟲細胞及CHO細胞中獲得表達。2，重構(gòu)抗體或人源化抗體，即用特異性鼠單抗Fab段中的高變區(qū)CDR區(qū)替代人單抗Fab段中的CDR區(qū)或在人-鼠單抗中將鼠Fab段中FR區(qū)中的表面決定族堿基替換成人抗體相應的基因序列。我國也已有成功報道。3)小分子抗體，包括Fab(完整輕鏈和Fd),sFv(VH和VL經(jīng)一小連接肽相連)，F(xiàn)v(VH和VL組成)VH及MRU(最小識別單位)通過雜交瘤細胞或建立的噬菌體抗體基因庫，獲得Fab或sFv在原核細胞中表達。4，重組全抗體，即整個免疫球蛋白分子包括IgG,IgA分別在淋巴瘤細胞，非淋巴瘤細胞如CHO細胞以及桿狀病毒系統(tǒng)中的表達。
噬菌體表面表達多肽或蛋白技術(shù)創(chuàng)始于1985年。用此技術(shù)構(gòu)建噬菌體抗體基因庫是最近5-6年發(fā)展的熱點。從抗體庫篩選的抗體表達形式主要以Fab段抗體和scFv為主。用以構(gòu)建抗體基因庫的噬菌體載體系統(tǒng)目前已構(gòu)建和發(fā)展很多，其中比較有代表性的表達系統(tǒng)是由美國Scripps研究所研究而成的pComb系統(tǒng)，其基本原理是將PCR擴增的全套抗體輕鏈基因組和全套重鏈基因組插入噬菌體載體pComb3中，其中Fd以與蛋白Ⅲ或蛋白Ⅷ融合蛋白的形式，輕鏈則以獨立表達的形式，通過先導序列pelB分泌入細菌細胞間隙并組裝成Fab，經(jīng)輔助噬菌體感染后組成噬菌體抗體庫。通過使用特異性抗原對抗體庫進行富積篩選獲得特異性抗體基因。1990年Scripps研究所從破傷風毒素免疫的供者外周血B細胞中首次獲得人抗體基因庫并獲得人抗破傷風毒素單克隆抗體。至今此技術(shù)已較廣泛用構(gòu)建鼠和人抗體基因庫并取得重要進展，通過噬菌體載體表達系統(tǒng)由其是pCom3表達系統(tǒng)建立抗體庫從而獲得抗病毒人單克隆抗體在國外已有成功的報道。目前世界上已報道的從噬菌體人抗體基因庫中篩選到的抗病毒人單抗有抗流感病毒單抗，抗HBsAg抗體，抗呼吸道合胞病毒(RSV)F蛋白抗體，抗單純皰疹病毒抗體，抗HIVgp120抗體以及抗?jié)h坦病毒核蛋白抗體等。上述抗體均以Fab段形式在大腸桿菌中表達，并同時獲得特異性抗體基因序列。
漢坦病毒是引起嚴重傳染病腎綜合征出血熱的病原體。腎綜合征出血熱在我國廣泛流行，每年有10萬左右的病人，其臨床病死率較高，嚴重危害人民生命健康，致今未有特異性藥物治療。漢坦病毒基因由S、M和L三個片段組成，分別編碼核蛋白、糖蛋白G1和G2以及病毒多聚酶。漢坦病毒中和抗原主要存在于由M片段編碼的糖蛋白G1和G2上。實驗證明抗G1和G2的中和性單克隆抗體具有被動保護地鼠免受漢坦病毒攻擊的被動保護作用。用流行性出血熱病人恢復期抗凝血或血清治療臨床出血熱病人，其療效已在我國疫區(qū)以及國外臨床運用中獲得肯定。因此在無特異性抗病毒治療藥物的情況下研制一種標準的抗?jié)h坦病毒感染的抗體制劑具有非常重要的臨床意義和良好的前景。
特異性抗病毒抗體可用于臨床病毒病治療已得到普遍公認。經(jīng)典途徑通過細胞融合篩選制備人單抗存在難度大，成功率低，選擇范圍小，表達細胞系不穩(wěn)定，抗體滴度低等不足之處。用分子生物學手段組建人抗體基因年庫，從中獲得穩(wěn)定的特異性抗體基因，可在原核或真核細胞中得到高效穩(wěn)定的表達。并可在基因年水平上任意改進CDR區(qū)域的基因以獲得高親和力的中和抗體。重鏈，輕鏈隨機組合大大增加了所獲抗體的多樣性，可獲得一些用常規(guī)方法難以獲得的人單抗。這是人特異性單抗研制技術(shù)中的一項重大突破。本研究技術(shù)可推廣運用于多種抗病毒單抗的研制，在抗病毒病治療中具有深遠的實際運用價值。
人-鼠嵌合抗體可用于多方面的基礎(chǔ)研究，但作為臨床用制劑，其存在明顯的缺點。雖然用人的Fc段替換了鼠的Fc段，但鼠的Fab段FR區(qū)仍然具有異源性，可誘導產(chǎn)生抗鼠體，不適合于反復應用某些嵌合抗體失去天然抗體的某些構(gòu)象而導致抗體活性下降或人源化抗體或重配抗體雖然將特異性鼠單抗CDR區(qū)域替代入人抗體的CDR區(qū)，但鼠源的CDR序列往往與位于其之間的FR序列不相適應而導致抗體構(gòu)象的改變。顯而易見，人源基因工程單抗是研制抗病毒抗體的最佳選擇。
本發(fā)明的目的是通過基因工程手段和噬菌體表面表達技術(shù)結(jié)合運用，直接從人抗體基因庫中篩選出中和性抗?jié)h坦病毒的基因工程單克隆抗體，獲得其抗體基因，為將來可能的臨床抗病毒治療提供可行性的特異性抗體藥物。
本發(fā)明陳述的人源抗?jié)h坦病毒糖蛋白中和性基因工程單克隆抗體Fab抗體包括(1)為一種人源的在原核細胞中獲得穩(wěn)定有效表達的重組IgG Fab抗體，命名為AH23。
(2)其抗體蛋白功能由存在于抗體基因輕鏈和重鏈可變區(qū)的決定族互補區(qū)域(Complementarity-Dertemining Regions,CDRs)CDR1、CDR2和CDR3中特異性核苷酸序列決定的，其相應的氨基酸序列構(gòu)成了抗體的特異性抗原結(jié)合區(qū)域(附

圖1)(3)特異性的輕鏈和重鏈基因來源于對人源抗?jié)h坦病毒抗體基因庫的特異性富積篩選表達，輕鏈和重鏈相應的三個CDR區(qū)序列為本抗體特有的全新序列。
(4)特異性識別漢坦病毒包膜糖蛋白，并具有抗?jié)h坦病毒感染的中和活性(5)利用上述獲得的中和性Fab抗體基因，可以在原核細胞、酵母細胞、真核細胞及任何重組病毒系統(tǒng)中表達此抗體基因或以此為基礎(chǔ)的改建后的含有此抗體基因任何其他基因，獲得具有中和漢坦病毒感染的抗體產(chǎn)物，可在臨床上用于治療由漢坦病毒引起的腎綜合征出血熱。
傳統(tǒng)的利用雜交瘤細胞技術(shù)獲得人源單克隆抗體相當困難，而且建立的細胞系通常不穩(wěn)定，基因易丟失。本發(fā)明陳述的人源抗?jié)h坦病毒糖蛋白G1中和性基因工程單克隆抗體Fab抗體，是在獲得抗體基因的基礎(chǔ)上獲得基因產(chǎn)物的表達，此抗體基因可隨著質(zhì)粒DNA在細菌內(nèi)的復制而穩(wěn)定復制，并可根據(jù)不同需要任意改建抗體基因，從而獲得一種可行性的臨床治療用抗體制劑。
以下的優(yōu)先實施例對本發(fā)明作詳細說明，擔不意味著限制本發(fā)明的內(nèi)容在這些實施例中，為說明本發(fā)明，采用噬菌體表達載體為pComb3(Barbas C.Ⅲetal,Proc.Natl.Acas.Sci USA 1991,89:10164-10168)。所用主要菌株為商品化產(chǎn)品XLI-Blu(美國Strategene公司產(chǎn)品)。所用噬菌體為VCSM13(美國Strategene公司產(chǎn)品)。所用漢灘病毒毒株為國際標準漢灘病毒毒株76-118(SschmaljohnC.S.et al,Science 1985,227:1041-1044)和我國分離的漢灘病毒毒株84F-Li.(Liang M.F et al,Virus Research 1994,31:219-223)。
實施例1-4為人源抗?jié)h坦病毒糖蛋白中和性基因工程單克隆抗體Fab抗體AH23的篩選制備方法；實施例6為人源抗?jié)h坦病毒糖蛋白中和性基因工程單克隆抗體FabAH23的基因特征；實例7-11為人源抗?jié)h坦病毒糖蛋白中和性基因工程單克隆抗體Fab抗體AH23的蛋白及功能特征。
實例1人源IgG Fab段基因的PCR擴增用淋巴細胞分離液(上?；瘜W試劑廠)從安徽疫區(qū)EHF病人恢復期抗凝血中分離淋巴細胞，用Tril-Zon(美國Gibco,BRL)提取總細胞RNA，用Olig-dT引物將提取的RNA通過逆轉(zhuǎn)錄酶(美國Gibco,BRL)逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，用一組特異性IgGFabGamma鏈、Kampa鏈及Lamda鏈引物(表1)，對人源輕鏈和重鏈Fab基因進行PCR擴增。PCR條件為94℃1分鐘，54℃1分鐘、72℃2分鐘，35個循環(huán)(PE 480)，上述PCR產(chǎn)物分別經(jīng)瓊脂糖凝膠回收，經(jīng)過DNA純化柱Spin-X(美國Gibco,BRL)純化后，獲得650-700bp左右的Kamba、Lamda和Fd鏈PCR產(chǎn)物(附圖2)。
實例2噬菌體抗體基因庫的建立將不同引物合成的Kamba和Lamda鏈PCR產(chǎn)物混合，將不同引物合成的Fd鏈混合，分別用SacI/XbaI和XhoI/SpeI克隆入噬菌體載體pComb3，將克隆入輕，重鏈基因的pComb3載體DNA連接產(chǎn)物經(jīng)乙醇沉淀后，用10ul蒸溜水懸起，電轉(zhuǎn)導入事先制備好的200ul電轉(zhuǎn)菌XLI-Blu，(電轉(zhuǎn)條件為Bio-Red電轉(zhuǎn)儀，0.2cm電轉(zhuǎn)杯，2.5K伏)，電轉(zhuǎn)后加10mlSOC培養(yǎng)液，37℃1小時，加入10ml帶有氨芐青霉素和四環(huán)素的SB培養(yǎng)液(3)，37℃l小時，加入80-100ml前述SB，37℃2小時后加入輔助噬菌體M13GCM 1×10 12,1小時后加入卡那霉素(70ug/ml)，37℃搖床培養(yǎng)過夜。用4％PEG8000和3％NaCl沉淀噬菌體上清，經(jīng)9000rpm，20分鐘，4℃離心后，用2ml 0.02M PBS PH 7.4重懸沉淀，建立噬菌體抗體庫，分裝保存于-20℃冰柜中。
實例3用于抗體庫富集篩選的漢坦病毒抗原的制備1)漢坦病毒顆粒的純化按照文獻方法(10)，將漢坦病毒76-118株感染后的細胞上清液用PEG沉淀，經(jīng)10-60％蔗糖密度梯度離心，收乳白色病毒帶作為純化的病毒顆?？乖?。2)感染細胞裂解液的制備按文獻方法，用漢坦病毒76-118,84-FLi感染E-6細胞后7天，用1％Trito-100，裂解液裂解細胞，制成漢坦病毒抗原。
實例4噬菌體抗體庫的特異性富積篩選分別用上述純化的漢坦病毒顆粒脫脂奶-PBS，37℃封閉2小時后加入上述噬菌體抗體庫每孔60ul,37C孵育2小時，用5％Tween-20,-TBS反復洗20遍，最后用每孔60ul,pH2.2甘氨酸一鹽酸洗脫液洗脫，pH9.6的Tris液中和。洗脫后的噬菌體繼續(xù)感染2ml新鮮的OD600=1.0左右的XL1-Blu菌，經(jīng)輔助噬菌體VCSM13(美國Stratagene)感染后進行下一輪篩選。如此反復篩選4-5次，將每輪特異性富積篩選后的噬菌體感染XL1-Blu菌，取適量菌(10-50ul)涂氨卞平皿37℃，4-5小時后，加5mMIPTG浸濕的硝酸纖維素膜，30℃過夜。此膜經(jīng)氯仿固定后，用5％脫脂奶封閉，加入HRP標記的抗人IgGFab抗體染色。獲得特異性抗體陽性克隆的富積增強。如圖3，是人抗體基因庫的富積篩選(硝酸纖維素膜免疫印跡法)。
實例5人IgGFab抗體AH23的可變區(qū)基因的核酸序列分析用QiagenMiniprepKit(美國Qiagen)制備挑選出的陽性克隆DNA，用雙脫氧法對特異性的人抗?jié)h坦病毒IgGFab抗體可變區(qū)基因進行核酸序列分析。測序所用試劑盒為Sequenase Version 2.0 Sequencing Kit(美國USB/Amacia)。來源于載體pComb3的引物(5‘-CTAACTAGCTAGTCGCC)被用于測定輕鏈可變區(qū)基因；而重鏈基因則需被亞克隆入PCRⅡ載體(美國Invitro Gene)，然后用M13或T7引物進行測定。至少3個克隆被用于確定同一相同的序列。所獲序列均用DNAStrider(美國微軟公司)序列分析軟件進行分析處理，并比較Internet網(wǎng)絡(luò)上基因庫中的IgG序列。證實人源抗?jié)h坦病毒糖蛋白中和性基因工程單克隆抗體AH23的Fab基因由人IgG鏈Fd和λ鏈組成，其基因特征由VH和VL結(jié)構(gòu)域中的6個CDR區(qū)的特異性核甘酸序列和氨基酸構(gòu)成，即VH-CDR1,VH-CDR2,VH-CDR3和VL-CDR1,VL-CDR2和VL-CDR3。如圖1，是人源抗?jié)h坦病毒糖蛋白基因工程單克隆抗體Fab段抗體AH23輕鏈和重鏈基因可變區(qū)的核苷酸和氨基酸序列。
實例6將帶有AH23Fab抗體輕重鏈基因插入的陽性克隆擴增后按常規(guī)方法提取質(zhì)粒DNA，用SpeⅠ和NpeⅠ切除載體中的gⅢ，變FdgⅢ融合蛋白為獨立表達的蛋白，連接后轉(zhuǎn)化XL1-Blu菌，從過夜生長的氨芐碟子中挑取單個菌落，接種SB或TB細菌培養(yǎng)液，當細菌長至OD=0.2-0.3，加入1mMIPTG，在30℃誘導表達10-12小時。收獲細菌，離心后加入原培養(yǎng)液10倍濃縮量的PBS(0.02M PH7.4)懸起，反復凍融3次，高速離心后其上清即為表達的Fab抗體。漢坦病毒感染Vero-E6細胞后制成抗原片，加入表達的Fab,37Cf孵育后加熒光素IFTC標記的抗人IgGFab抗體，特異性免疫熒光反應即證實獲得的人源基因工程單克隆抗體AH23針對漢坦病毒。如圖4，是表達的人源抗?jié)h坦病毒G1Fab抗體AH23對漢坦病毒的免疫熒光反應。
實例7酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA):1)分別用實例3中制備的純化的漢坦病毒抗原0.5ug和抗人IgGFab抗體0.1ug(美國Sigma)包被96孔板，加入不同稀釋度的上述制備的人Fab表達產(chǎn)物細菌裂解液，37℃孵育1.5小時后，加入HRP標記的羊抗人IgGFab抗體.(Sigma)。2)分別用抗?jié)h坦病毒核蛋白和糖蛋白單克隆抗體包被96孔板，加入上述方法4中所述的漢坦病毒感染的細胞裂解液，進一步加入人Fab抗體和HRP標記的抗人Fab抗體。顯色底物為TMB，加入4N硫酸終止反應后，在OD450nm檢測每孔OD值。結(jié)果證實本獲得的人源基因工程單克隆抗體AH23針對漢坦病毒糖蛋白。如圖5，是酶聯(lián)免疫反應(ELISA)檢測人源抗?jié)h坦病毒基因工程單克隆抗體Fab抗體。
實例8放射免疫沉淀特異性漢坦病毒結(jié)構(gòu)蛋白用過量的漢坦病毒76-118感染Vero-E6細胞，用35S標記蛋氨酸和/或3H標記亮氨酸標記病毒蛋白，用細胞裂解液將標記后的感染細胞裂解后，加入表達的Fab可溶性裂解上清液，4℃過夜孵育后加入抗人IgGFab抗體偶聯(lián)的蛋白A瓊脂糖，經(jīng)洗滌后，于沉淀中加入SDS-PAGE樣品緩沖液，進行SDS-PAGE電泳，特異性放射免疫信號顯示獲得的人源基因工程單克隆抗體AH23針對漢坦病毒糖蛋白G1。如圖6，是放射免疫沉淀鑒定表達的Fab對漢坦病毒結(jié)構(gòu)蛋白的特異性結(jié)合。
實例9空斑減少中和試驗(PRNT)在24孔細胞培養(yǎng)板中長成單層VeroE6細胞，將來自不同克隆的表達的Fab可溶性裂解上清液以及陰性對照從原液開始進行倍比稀釋，或?qū)⒓兓腇ab和牛血清白蛋白(BSA)標準化到200ug/ml，然后分別和30 PFU的漢坦病毒液混合，37℃孵育1.5小時，已每孔100ul加入板中，每個稀釋度2孔，然后加入第一層6％瓊脂糖(100ml含0.6克瓊脂糖，10％牛血清，1％PS，1％非必需氨基酸，4ml 7.5％谷氨酰胺和2ml 1M Hepes)。37℃,5％CO2條件下孵育7天，至第八天加第二層瓊脂糖(同上，4％中性紅)。以降低50％空斑數(shù)的抗體最高稀釋度為中和抗體滴度。獲得的人源基因工程單克隆抗體AH23具有體外中和漢坦病毒感染的功能，為中和性抗體。如圖7，是空斑減少中和試驗檢測純化的人Fab抗體對漢坦病毒76-118和84-Fli株的中和活性。
實例10人Fab表達產(chǎn)物的親和層析純化將抗人IgG抗體偶聯(lián)到ProteinA-Sepharose4B(美國Sigma)，然后進行親和層析純化。獲得人源基因工程單克隆抗體AH23的電泳純蛋白。如圖8，是人源抗?jié)h坦病毒單克隆抗體Fab段抗體AH23表達產(chǎn)物的SDS-PAGE。泳道從左到右1．Mr低分子量蛋白標準品2．純化的AH23Fab 3．未純化的含有AH23Fab表達產(chǎn)物的細菌裂解液。
權(quán)利要求
1.人源抗?jié)h坦病毒糖蛋白中和性基因工程單克隆抗體，其特征在于(1)為一種在原核細胞中獲得穩(wěn)定有效表達的基因重組的人源抗?jié)h坦病毒糖蛋白中和性基因工程單克隆抗體Fab抗體(2)其抗體蛋白功能由存在于抗體基因輕鏈和重鏈可變區(qū)的決定族互補區(qū)域(Complementarity-Dertemining Regions,CDRs)CDR1、CDR2和CDR3中特異性核苷酸序列決定的，其相應的氨基酸序列構(gòu)成了抗體的特異性抗原結(jié)合區(qū)域(附圖1)(3)特異性的輕鏈和重鏈基因來源于對人源抗?jié)h坦病毒抗體基因庫的特異性富積篩選表達，其相應的三個CDR區(qū)序列為本抗體特有的全新序列。(4)特異性識別漢坦病毒包膜糖蛋白，并具有抗?jié)h坦病毒感染的中和活性
2.人源抗?jié)h坦病毒糖蛋白中和性基因工程單克隆抗體的用途，其特征在于利用上述獲得的中和性Fab抗體基因，可以在原核細胞、酵母細胞、真核細胞及任何重組病毒系統(tǒng)中表達此抗體基因或以此為基礎(chǔ)的改建后的含有此抗體基因任何其他基因，獲得具有中和漢坦病毒感染的抗體產(chǎn)物，可在臨床上用于治療由漢坦病毒引起的腎綜合癥出血熱。
3.根據(jù)權(quán)利要求1人源抗?jié)h坦病毒糖蛋白中和性基因工程單克隆抗體Fab抗體，其特征在于編碼所述特異性Fab抗體蛋白的基因為人源抗?jié)h坦病毒中和性抗體基因，可被用于任何表達系統(tǒng)表達抗?jié)h坦病毒中和抗體。
4.根據(jù)權(quán)利要求1人源抗?jié)h坦病毒糖蛋白中和性基因工程單克隆抗體Fab抗體，其特征在于編碼所述特異性Fab抗體蛋白的基因為人源中和性抗?jié)h坦病毒抗體基因，其核苷酸序列或由此產(chǎn)生的氨基酸序列可被用于相關(guān)基因的改造，而表達抗?jié)h坦病毒糖蛋白的中和性抗體或多肽產(chǎn)物。
5.根據(jù)權(quán)利要求1人源抗?jié)h坦病毒糖蛋白中和性基因工程單克隆抗體Fab抗體，其特征在于所述抗體具有識別漢坦病毒糖蛋白上中和抗原，從而阻斷漢坦毒感染的功能，其基因表達產(chǎn)物望在臨床上用于治療由漢坦病毒引起的腎綜合征出血熱。
全文摘要
人源抗?jié)h坦病毒糖蛋白中和性基因工程單克隆抗體,包括人源抗?jié)h坦病毒糖蛋白中和性基因工程單克隆抗體Fab段抗體基因、基因產(chǎn)物及其應用,其特征在于此重組抗體是由存在于抗體基因輕鏈和重鏈可變區(qū)的高變區(qū)(CDRs)中特異性基因序列(摘要附圖)決定的并獲得有效表達的特異性識別漢坦病毒糖蛋白并具有抗病毒中和活性的功能性抗體。其今后的可能用途在于利用獲得的中和性Fab抗體基因及其表達產(chǎn)物,可在臨床上用于治療腎綜合征出血熱。
文檔編號A61K39/395GK1214367SQ9712206
公開日1999年4月21日 申請日期1997年12月22日 優(yōu)先權(quán)日1997年12月22日
發(fā)明者梁米芳, 李德新, 薛潁, 杭長壽, 宋干 申請人:中國預防醫(yī)學科學院病毒學研究所