專利名稱：6－取代的吡唑并[3,4－d]嘧啶－4－酮及其組合物和使用方法
背景技術：
(a)發(fā)明領域本發(fā)明涉及6-取代的吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，涉及含有它們的藥物組合物以及使用它們a)抑制c-GMP-磷酸二酯酶，b)治療心力衰竭和/或高血壓，c)逆轉或減輕硝酸酯誘導的耐藥性以及d)治療心絞痛，充血性心臟病和心肌梗塞的方法。
(b)參考文獻公開狀況Schmidt(施密特)等的1965年1月12日公布的U.S.專利，No.3,165,520公開了作為冠脈擴張劑的通式如下的吡唑并[3，4-d]嘧啶
其中R1表示氫原子或烷基，羥烷基，鹵代烷基或氧雜烷基或環(huán)烷基，環(huán)烷基烷基，芳烷基或雜環(huán)基烷基或者在大多數(shù)情況下為雙核芳基或雜環(huán)基；R3表示氫原子或低級烷基；R9表示脂族基團，環(huán)狀脂族基團，環(huán)狀脂族基團-脂族基基，芳基脂族基團或雜環(huán)基脂族基團；以及R6表示脂族基團或芳烷基或可被取代的雜環(huán)基烷基。
該專利更具體地公開了其中R1表示氫原子或低級烷基或環(huán)烷基。羥基低級烷基或鹵代低級烷基，氧雜低級烷基，或者可被鹵素，烷氧基，烷基，亞甲二氧基，三氟甲基，硝基，氨基或吡啶基單-，二-，或三-取代的芳基；R3表示氫原子或低級烷基；R5表示低級烷基或低級烷氨基；且R6表示低級烷基或芳烷基的化合物的特殊的價值。
它進一步公開了用于合成最終產(chǎn)物的中間體的一系列1-R1-3-R3-4-羥基-6-R6-吡唑并[3，4-d]嘧啶。在這些中間體中具體公開了1-環(huán)戊基-4-羥基-6-芐基-吡唑并[3，4-d]嘧啶和1-異丙基-4-羥基-6-m-甲氧基芐基吡唑并[3，4-d]嘧啶。
Schmidt(施密特)等的1965年10月12日公布的U.S.專利，No.3,211,731公開了通式如下的作為冠脈擴張劑的吡唑并[3，4-d]嘧啶
其中；R1表示氫，烷基，羥烷基，鹵代烷基或氧雜烷基，環(huán)烷基，環(huán)烷基烷基，芳烷基，雜環(huán)基烷基或者大多數(shù)情況下為雙核芳基或雜環(huán)基；R3表示氫，或其次，為低級烷基；以及R6表示可能被取代的芳烷基或雜環(huán)基烷基。
該專利更具體地公開了其中R1表示氫原子或低級烷基，環(huán)烷基，羥基低級烷基，鹵代低級烷基，氧雜低級烷基，或芳基；R3表示氫原子或低級烷基而R6為取代或未取代的芳烷基的化合物的特殊價值。在這些化合物中，特別公開了1-異丙基-4-羥基-6-(3′-甲氧苯基甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶，1-環(huán)戊基-4-羥基-6-芐基吡唑并[3，4-d]嘧啶，1-異丙基-4-羥基-6(β-苯乙基)吡唑并[3，4-d]嘧啶和1-異丙基-4-羥基-6-(4-氨基芐基)吡唑并[3，4-d]嘧啶。
Schmidt(施密特)等的1965年10月12日公布的U.S.專利3,211,732公開了作為中間體1-R1-3-R3-6-R6-4-羥基-吡唑并[3，4-d]嘧啶，其中R1表示氫原子，未取代或被羥基或低級烷基氧基取代的低級烷基，或環(huán)戊基或環(huán)己基或苯基或苯基低級烷基；R3表示氫原子或低級烷基；以及R6表示取代或未取代的苯基低級烷基。
特別公開了1-異丙基-4-羥基-6-芐基吡唑并[3，4-d]嘧啶。
也公開了作為中間體的1-R1-3-R3-6-R6-4-羥基吡唑并[3，4-d]嘧啶，其中R1表示氫原子，低級烷氧基低級烷基或羥基低級烷基，環(huán)戊基或環(huán)己基或可被取代的苯基或苯基低級烷基；R3定義如上；以及R6表示可被取代的苯基。特別公開了1-異丙基-4-羥基-6-苯基吡唑并[3，4-d]嘧啶。
Breuer(布勞爾)等的1973年5月8日公布的U.S.專利，No.3,732,225公開了作為低血糖劑和抗炎劑的通式如下的吡唑并[3，4-d]嘧啶
其中R為氫或低級烷基；R1為低級烷基，環(huán)烷基，苯基或取代苯基；R2為苯基，取代苯基或環(huán)烷基；以及R3為氫，低級烷基，環(huán)烷基，苯基或取代苯基。特別公開了1-甲基-6-苯基和1-甲基-6-(4-氯苯基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮。
Burch(布奇)的1967年10月31日公布的U.S.專利，No.3,350,397公開了作為抗菌劑的通式如下的吡唑并[3,4-d]嘧啶
其中R表示羥基，氯或-N(X)(Y)，其中X表示氫，(低級)烷基，羥基(低級)烷基，(低級)烷氧基(低級)烷基或氨基；Y表示氫，羥基(低級)烷基，(低級)烷氧基(低級)烷基或嗎啉基丙基；X和Y與N一起表示吡咯烷基；以及R1表示(低級)烷基或甲氧乙基。
該專利進一步公開了作為中間體的4-氨基和4-羥基-1-R1-6-(2-呋喃基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶。Burch于J.Med.Chem.1968，11，79進一步例舉了中間體的制備和最終產(chǎn)物的制備和生物試驗。
公開于1963年9月25日的英國專利937,722專利權屬于CIBALIMITED，公開了作為冠脈擴張劑的1-異丙基-4-羥基-6-芐基-吡唑并[3，4-d]嘧啶。
Hamilton(漢米爾頓)的1987年5月19日公布的U.S.專利，No.4,666,908公開了通式如下的吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮
其中R1包括一到六個碳原子的低級烷基，包括一到六個碳的低級亞烷基，包括一到六個碳的低級羥烷基，包括二到六個碳的低級羥基亞烷基，包括一到六個碳的低級氨烷基，或者，包括二到六個碳原子的低級氨基亞烷基；n為0-4；以及Ar為R2
或2，3，或4-嘧啶基，其中X，Y和Z各為(1)氫；(2)包括一到六個碳的低級烷基；(3)鹵素；(4)羥基；(5)包括一到六個碳的低級烷氧基；(6)硝基；(7)氨基；(8)NR′R″其中R′和R″各自為(a)氫或(b)包括一到六個碳的低級烷基，該烷基可非強制性地被(i)氨基，(ii)嗎啉代，或(iii)包括五到七個碳的環(huán)烷基取代，(9)磺?；?10)-SO2NR′R″，其中R′和R″定義如上。
該專利更具體地公開了其中Ar為R2的優(yōu)選化合物。這些化合物可用于治療心血管疾病。
Miyashita等于Heterocycles(雜環(huán))1990.，31，1309-1341公開了通式如下的一系列吡唑并[3，4-d]嘧啶的制備
其中R為苯基或甲基；以及R1為氫，甲基，乙基，丙基，異丙基，芐基，乙基羧酸酯或苯基。未公開其用途。
Hamilton(漢米爾頓)的公開于1988年1月14日的PCT申請WO88/00192，公開了一系列5-取代的吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮衍生物，這些化合物可用作強心劑，CNS刺激劑，抗過敏劑，抗哮喘劑或識別活化劑。
Bell(貝爾)等的公開于1992年1月2日的歐洲專利申請0463756公開了一系列5-(2，5-二取代的苯基)吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮，這些化合物可用于心血管疾病的治療。
Breuer和Treuner的1974年11月12日公布的U.S.專利3,847,908公開了下式的化合物
其中R1為低級烷基，環(huán)低級烷基，或苯基-低級烷基；R2為氫或低級烷基；以及R3為氫，低級烷基，鹵素，或三氟甲基。具體公開了1，3-二甲基-6-苯乙烯基-吡唑并[3，4-d]嘧啶，1-環(huán)戊基-6-(2-氯苯乙烯基)吡唑并[3，4-d]嘧啶，1-環(huán)己基-3-甲基-6-(苯乙烯基)吡唑并[3，4-d]嘧啶和1，3-二乙基-6-(4-氯苯乙烯基)吡唑并[3，4-d]嘧啶。據(jù)稱該化合物可被用作抗微生物劑并具有抗炎和膜穩(wěn)定的性質。
Morrison等的1981年4月7日公布的U.S.專利4,260,758公開了下式化合物的制備
其中R9選自低級烷基，苯基，由一個或多個羥基或低級烷氧基取代的苯基，或吡啶基。未公開該化合物的用途。
Burch的1967年3月14日公布的加拿大專利754,565公開了一系列4-取代的-1-烷基-6-(2-呋喃基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶，據(jù)稱該化合物可用作制備能抑制細菌生長的4-取代的-1-烷基-6-(5-硝基-2-呋喃基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶的中間體。
Podesva等的1973年11月13日公布的U.S.專利3,772,294公開了式I化合物的制備
其中X表示鹵原子，游離或取代的羥基，氨基或巰基以及R表示氫原子，或低級烷基或者取代或未取代的芳基。該文獻公開了這些化合物可有效地被用于治療與痛風有關的高尿酸血癥，另外，其中X表示鹵原子的化合物可被用作合成其他式I化合物的中間體。該文獻還具體公開了4-羥基-6-苯基-1-吡唑并[3，4-d]嘧啶。
Coates和Rawlings的1991年12月24日公布的U.S.專利5,075,310(該專利來自1989年6月23日公布的系列申請No.370,494)公開并要求保護下式化合物及其藥學上可接受的鹽；
其中
為下式(a)，(b)或(c)環(huán)
X為氧或硫；以及R1為C1-C6烷基，C2-6鏈烯基，C3-5環(huán)烷基-C1-4烷基，或由1到6個氟取代的C1-4烷基。該文獻具體公開了6-(2-丙氧苯基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4(5H)-酮。據(jù)稱該化合物可用作支氣管擴張劑及血管舒張劑。
發(fā)明概要本發(fā)明涉及式I化合物或其藥學上可接受的酸加成鹽和/或水合物
其中R1為叔丁基，或環(huán)戊基；R3為甲基，乙基，或苯甲基；X為-CH2-，-O-，或-NH-；以及R6為苯基(或由一到三個，相同或不同的選自低級烷氧基，羥基，鹵素，羧基低級烷氧基，4-嗎啉基低級烷氧基，5-四唑基低級烷氧基，二低級烷基氨基，三氟甲基，硝基，氨基，低級烷磺酰氨基，二低級烷基氨基-低級烷基苯基羰氧基，以及1-咪唑基的取代基取代的苯基)；或者當X為-CH2-時，R6另外為2-，3-，或4-吡啶基，1-吡咯基，1-苯并咪唑基，1，2，3，4-四氫-2-異喹啉基，1，2，3，4-四氫-1-喹啉基，羥基，1-咪唑基，1-低級烷基-2-，3-，4-，或5-吡咯基，1-吡唑基，3-，4-，或5-異噁唑基(或者在其任何可能的碳原子上由低級烷基取代的3-，4-，或5-異噁唑基)，2-噻吩基，或3-噻吩基。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)式I化合物具有c-GMP-PDEV抑制活性，因此可用于治療心力衰竭和/或高血壓。也已發(fā)現(xiàn)與硝酸酯結合使用式I化合物可用于逆轉或減輕硝酸酯誘導的耐藥性，因而可進一步被用于治療心絞痛，充血性心臟病和心肌梗塞。
優(yōu)選的式I化合物為其中R1，R3和X定義如上，而R6為苯基(或由一到三個，相同或不同，選自低級烷氧基，羥基，羧基低級烷氧基，4-嗎啉基低級烷氧基，5-四唑基-低級烷氧基，二低級烷基氨基，三氟甲基，硝基，氨基，低級烷基磺酰氨基，二低級烷氨基-低級烷基苯基羰氧基，和1-咪唑基的取代基取代的苯基)；或者當X為-CH2-時，R6另外為2-，3-，或4-吡啶基，1-吡咯基，1-苯并咪唑基，1，2，3，4-四氫-2-異喹啉基，1，2，3，4-四氫-1-喹啉基，羥基，1-咪唑基，1-低級烷基-2-吡咯基，1-吡唑基，在其中任何可能的碳原子上由低級烷基取代的4-異噁唑基)，2-噻吩基，或3-噻吩基的化合物。
特別優(yōu)選的式I化合物為其中R1，R3和X定義如上，以及R6為苯基(或由一到三個，相同或不同，選自甲氧基，羥基，羧基甲氧基，2-(4-嗎啉基)乙氧基，1-(5-四唑基)甲氧基，二甲氨基，三氟甲基，硝基，氨基，甲基磺酰氨基，二乙氨基甲基苯基羰氧基，和1-咪唑基的取代基取代的苯基)；或者當X為-CH2-時，R6另外為2-，3-，或4-吡啶基，1-吡咯基，1-苯并咪唑基，1，2，3，4-四氫-2-異喹啉基，1，2，3，4-四氫-1-喹啉基，羥基，1-咪唑基，1-甲基-2-吡咯基，1-吡唑基，3，5-二甲基-4-異噁唑基)，2-噻吩基，或3-噻吩基的化合物。
更特別優(yōu)選的上述式I化合物為其中R1為環(huán)戊基；R3為乙基；以及X和R6定義如上的化合物。
本發(fā)明優(yōu)選的具體化合物為1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(4-甲氧基苯甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(4-羥基苯甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(苯甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，以及1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(4-氨基苯甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮。
本發(fā)明還涉及包含式I化合物以及藥學上可接受的載體，輔助劑，稀釋劑，或賦形劑的藥物組合物。
本發(fā)明還涉及抑制哺乳動物cGMP-磷酸二酯酶的方法，其中包括對該動物使用有效量的式I化合物。
本發(fā)明還涉及治療哺乳動物心力衰竭和/或高血壓的方法，其中包括對該動物使用有效量的式I化合物。
本發(fā)明還涉及逆轉或減輕哺乳動物在接受硝酸酯治療的過程中產(chǎn)生的硝酸酯誘導的耐藥性的方法，其中包括對該動物使用有效量的式I化合物。
本發(fā)明還涉及治療哺乳動物心絞痛，充血性心臟病和心肌梗塞的方法，其中包括對該動物與硝酸酯結合使用有效量的式I化合物。
優(yōu)選制備方案的詳細描述式I化合物可與相應的烯醇形式
以互變異構平衡的方式存在，只不過人們認為酮形式占優(yōu)并全部表示為這種形式，顯然本發(fā)明包括這兩種形式及其混合物。
這里使用的術語低級烷基表示具有一到約四個碳原子的直鏈或支鏈烴基，包括甲基，乙基，丙基，異丙基，正丁基，仲丁基，等。
這里使用的術語低級烷氧基表示具有一到約四個碳原子的直鏈或支鏈烷氧取代基，包括甲氧基，乙氧基，丙氧基，異丙氧基，丁氧基，仲丁氧基，等。
這里使用的術語鹵素，鹵化物或鹵表示溴，氯，碘或氟。
其中X為-CH2-的本發(fā)明化合物的合成可按流程A所示進行流程A
在約0℃到約室溫的溫度下，在合適的堿，如吡啶的存在下，非強制性地在合適的溶劑，如氯仿的存在下，用過量的合適地取代的式III酰氯，其中X′為鹵素，優(yōu)選氯，處理合適地取代的式II 5-氨基-1H-吡唑-4-甲腈，得到式IV羧酰胺。選擇地，也可以通過在合適的溶劑，如二甲基甲酰胺(DMF)中。用式II 5-氨基-1H-吡唑-4-甲腈處理過量的式R6CH2COOH酸或其酸加成鹽與過量堿，如氫化鈉，以及過量的合適的偶合劑，如N，N′-碳酰二咪唑的混合物而制得式IV羧酰胺。然后可在過量堿，優(yōu)選氫氧化鈉，或甲醇鈉的存在下，在溶劑如水，低級鏈烷醇，或水/低級鏈烷醇混合物中，當甲醇鈉用作堿時，優(yōu)選乙醇，當氫氧化鈉用作堿時，優(yōu)選水/乙醇混合物，在以約0℃到所用溶劑或溶劑混合物的沸點的溫度下，用過量的過氧化氫處理式IV羧酰胺，得到其中X為-CH2-的式I化合物。
選擇性地，其中X為-CH2-的式I化合物可按流程B所示制備流程B
在低級鏈烷醇溶劑，優(yōu)選乙醇中，在從約室溫到所用溶劑的沸點的溫度下，用過量堿，如堿金屬低級鏈烷醇化物，優(yōu)選乙醇鈉，和過量的合適地取代的式VI酯，其中R為低級烷基，優(yōu)選甲基或乙基，處理合適地取代的式V 5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺，得到其中X為-CH2-的式I化合物。
其中X為-O-，或-NH-的式I化合物可按流程C所示制備流程C
在從約80℃到所有溶劑的沸點，優(yōu)選約150℃到約160℃的溫度下，在合適的有機溶劑，如N-甲基-2-吡咯烷酮中，用過量的o-乙基黃原酸鹽，如鉀鹽處理合適地取代的式V 5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺，得到式V II6-硫代吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮。然后在過量堿，如K2CO3或氫化鈉的存在下。在合適的有機溶劑，如二甲基甲酰胺中，在從約0℃到約室溫的溫度下，用過量合適的甲基化試劑，如甲基碘或硫酸二甲酯處理式VII化合物，得到式VII 6-(甲硫基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮。然后可在合適的溶劑，如氯仿中，在約室溫的條件下，用過量合適的氧化劑，如m-氯過氧苯甲酸處理式VIII化合物，得到式IX 6-(甲基磺酰基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮。在從約室溫到約190℃，優(yōu)選從約170℃到190℃的溫度下，在過量堿，如氫化鈉，的非強制性地存在下，用過量式X的R6NH2衍生物，或過量的式XI的R6OH衍生物處理式IX衍生物，得到其中X為-O-或-NH-的式I化合物。
可使用化學領域技術人員已知或常規(guī)的簡單化學轉化來實現(xiàn)式I化合物的官能基的變化。例如，芳基酯的去烷基化得到相應的酚衍生物，用甲醛和二低級烷基胺處理芳基衍生物得到相應的二低級烷基氨基甲基衍生物，在堿存在下用甲磺酰氯處理其中X為-CH2-而R6為OH的式I化合物得到相應的甲磺酸酯，將其用1-乙?；溥蚧蜻吝蛱幚淼玫狡渲蠿為-CH2-而R6為1-咪唑基或1-吡唑基的式I化合物，催化還原硝基衍生物得到相應的胺，用低級烷基磺酰鹵磺化胺得到相應的低級烷基磺酰胺，以及在偶合劑，例如，N，N′-碳酰二咪唑，存在下用酸處理酚得到相應的酯。
既可使用游離堿形式的式I化合物，也可使用酸加成鹽形式的式I化合物，這兩種形式都屬于本發(fā)明的范圍。酸加成鹽形式為更便于使用的形式；實際上，鹽形式的用途本身相當于堿形式的用途?？捎脕碇苽渌峒映甥}的酸優(yōu)選地包括那些與游離堿結合時，產(chǎn)生藥學上可接受的鹽的酸，即，鹽的陰離子在該鹽的藥用劑量下對動物體相對無害，以致于游離堿本身的有益性質不會由于陰離子的副作用而有影響。在本發(fā)明的實施中便于使用的形式為游離堿的形式或鹽酸鹽，富馬酸鹽，甲苯磺酸鹽。甲磺酸鹽或馬來酸鹽。但是，本發(fā)明范圍內(nèi)其他合適的藥學上可接受的鹽可由其他無機酸和有機酸形成。堿性化合物的酸加成鹽可按本領域已知的標準方法制備，其中包括但不限于，將游離堿溶于含合適酸的含水醇溶液中，以及蒸發(fā)溶液分離鹽，或在有機溶劑中使酸和游離堿反應，其中直接分離鹽，或用第二種有機溶劑沉淀，或可通過濃縮溶液而得到。盡管優(yōu)選堿性化合物的醫(yī)學上可接受的鹽，但本發(fā)明包括所有的酸加成鹽。所有酸加成鹽都可被用作游離堿形式的來源，甚至某些特殊的鹽本身僅作為中間產(chǎn)物而被需要，例如，為了純化或鑒定而形成的鹽。或者，用作通過，例如，離子交換法，制備醫(yī)學上可接受的鹽的中間體的鹽。
被合適地取代的式II 5-氨基-1H-吡唑-4-甲腈和被合適地取代的式V 5-氨基-1H-吡唑-4-羧酰胺都是已知物，因此可按本領域已知方法制備(參見，例如，公布于1994年3月15日的U.S.專利5,294,612，其全部內(nèi)容按參考文獻改編于此)，或者可按下文實施例中描述的方法制備。式III酰氯，式VI酯，式X的R6NH2衍生物和式XI的R6OH衍生物既可在市場上得到，也可按本領域已知方法制備，也可按下文實施例中的方法制備。
本發(fā)明化合物的結構可通過合成方式，以及通過一種或多種選自元素分析，紅外，核磁共振和質譜的方法證實。反應的過程和產(chǎn)物的同一性及均一性可通過一種或多種選自薄層層析(TLC)，高壓液相色譜(HPLC)，或氣液色譜(GLC)的方法鑒定。
下面的實施例將進一步說明本發(fā)明，但它并不限制本發(fā)明。所給出的所有熔點(m.p.)都是攝氏度(℃)，未校正。
實施例1(a)在20分鐘的時間內(nèi)，在冰浴中，將苯乙酰氯(10.6ml，0.08mol)加入攪拌著的1-環(huán)戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲腈(8.2g，0.04mol)在吡啶(100ml)中的溶液中。將反應混合物在此溫度下攪拌2小時，然后在室溫下攪拌過夜。真空除去溶劑，并將殘留物分配于氯仿(200ml)和水(200ml)之間。分出有機層，真空濃縮，得到油狀物，將其通過硅膠柱色譜，用己烷/乙醚(1/1)洗脫，用乙醚/己烷重結晶后得到8.3g(64％)白色薄片狀1-環(huán)戊基-3-乙基-4-氰基-5-(苯甲基羰氨基)-1H-吡唑。
(b)將1-環(huán)戊基-3-乙基-4-氰基-5-(苯甲基羰氨基)-1H-吡唑(2.4g，7.4mmol)，乙醇(100ml)，30％H2O2(4.5ml，40mmol)，NaOH(0.3g，7.5mmol)和水(10ml)的混合物在室溫下攪拌1小時，然后回流1小時。再加入一部分30％H2O2(2.5ml)并將該混合物再回流1小時。真空濃縮溶劑，將殘留物用水(25ml)和乙酸(3ml)處理，將所形成的黃色沉淀過濾收集，用水洗滌并用異丙醇重結晶，得到0.79g橙色針晶狀1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(苯甲基)-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮。m.p.175-176℃。
選擇性地，該產(chǎn)物也可按下述制備將鈉(2.12g)溶于乙醇(145ml)中，然后加入1-環(huán)戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(10g，45mmol)。接著加入苯乙酸乙酯(2.8g)并將反應混合物回流過夜。將反應混合物冷卻至室溫，汽提，然后在殘留物中加入水，接著加入2N HCl。過濾收集產(chǎn)物，用乙酸乙酯重結晶，得到10.52g(73％)1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(苯甲基)-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮。
實施例2(a)在20分鐘內(nèi)，在冰浴冷卻下，將苯乙酰氯(2.3ml，17.2mol)在CHCl3(10ml)中的溶液加入攪拌著的1-環(huán)戊基-3-苯甲基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲腈(2.3g，8.6mmol)，CHCl3(50ml)和吡啶(20ml)的溶液中。將反應混合物在冰浴中攪拌3小時，然后在室溫攪拌2小時。真空除去溶劑，將殘留物在CHCl3(100ml)和水(50ml)之間分配，并分出有機層，濃縮有機層得到樹膠狀固體，將其用異丙醇重結晶，得到1.1g(88％)白色針晶狀1-環(huán)戊基-3-苯甲基-4-氰基-5-(苯甲基羰氨基)-1H-吡唑，m.p.166-168℃。
(b)在冰冷卻的1-環(huán)戊基-3-苯甲基-4-氰基-5-(苯甲基羰氨基)-1H-吡唑(1.1g，2.8mmol)在乙醇(30ml)中的溶液中加入30％H2O2(2.5ml)，接著加入溶于水(5ml)的NaOH(100mg)，將反應混合物在此溫度下攪拌1小時，然后在室溫攪拌1小時，然后在蒸汽浴中加熱3.5小時，最后將其在室溫攪拌過夜。將反應混合物濃縮至干，并分配于水(25ml)和CHCl3(50ml)之間。分出有機層，真空濃縮，用異丙醇結晶油狀殘留物，得到234mg(22％)白色固體狀1-環(huán)戊基-3-苯甲基-6-(苯甲基)-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.204-206℃。
實施例3(a)將1-環(huán)戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲腈(4.50g，0.022mol)，吡啶(5.21g，0.066mol)，和CHCl3(75ml)的混合物在冰浴中攪拌0.5小時，然后在3小時內(nèi)加入CHCl3(25ml)中的3，4-二甲氧基苯乙酰氯(9.44g，0.044mol)。將反應混合物在室溫下攪拌過夜，真空除去溶劑，將殘留物在CHCl3(250ml)和水之間分配。分層后，用CH2Cl2(2×150ml)萃取水層并將合并的有機層真空濃縮。將殘留物溶于CHCl3(20ml)并通過硅膠柱色譜純化，用乙醚洗脫，用己烷/CHCl3(10/1)重結晶后得到白色針晶狀1-環(huán)戊基-3-乙基-4-氰基-5-[(3，4-二甲氧基苯甲基)羰氨基]-1H-吡唑。
(b)在1-環(huán)戊基-3-乙基-4-氰基-5-[(3，4-二甲氧基苯甲基)羰氨基]-1H-吡唑(1.0g，2.7mmol)，乙醇(500ml)和NaOCH3(0.3g)的混合物中加入30％H2O2(4ml)。將反應混合物在室溫下攪拌過夜，另外加入30％H2O2(3當量)并將反應混合物在蒸汽浴上回流1小時。原料依然存在，所以另外加入3當量的30％H2O2并將反應混合物回流4小時。將反應混合物汽提至干，用乙酸和乙醇處理，并再次汽提至干。將油狀殘留物溶于乙醇，加入水，并用冰浴冷卻該溶液。過濾收集生成的固體，在90℃干燥，得到0.3g(30％)淡黃色固體狀1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(3，4-二甲氧基苯甲基)-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，1/10水合物，m.p.148-149℃。
實施例4(a)冰浴冷卻下，將NaH(1.0g，25mmol，60％礦物油中的分散系)加入4-吡啶乙酸鹽酸鹽(4.3g，25mmol)和DMF(50ml)的混合物中。將所得混合物攪拌30分鐘，然后加入N，N′-碳酰二咪唑(4.0g，24.6mmol)，30分鐘后，加入1-環(huán)戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲腈(4.1g，20mmol)。在相同的溫度下將反應混合物攪拌4小時，然后在室溫下攪拌2天，最后在蒸汽浴上加熱2小時。將反應混合物濃縮至干并加入水(50ml)和乙酸(5ml)。用CH2Cl2(300ml)萃取該混合物，將有機層真空濃縮，將所得油狀物用乙醚結晶，并通過硅膠柱色譜純化，用乙醚洗脫，得到2.8g(35％)粘油狀1-環(huán)戊基-3-乙基-4-氰基-5-[(4-吡啶基甲基)羰氨基]-1H-吡唑。
(b)將1-環(huán)戊基-3-乙基-4-氰基-5-[(4-吡啶基甲基)羰氨基]-1H-吡唑(2.8g，8.6mmol)，乙醇(50ml)，NaOCH3(1.0g，18mmol)和30％H2O2(4.5ml)的混合物在室溫下攪拌20分鐘，然后加熱回流3.5小時。另外加入30％H2O2(3ml)，再將反應混合物加熱回流2小時。將反應混合物真空濃縮，將殘留物在CHCl3(100ml)和10％NaHCO3水溶液(50ml)之間分配，分出有機層。將有機層真空濃縮，將殘留物用環(huán)己烷結晶，過濾收集固體。真空濃縮濾液，將殘留物通過硅膠柱色譜純化，用乙醚到10％甲醇/乙醚的溶劑系統(tǒng)洗脫，將所得產(chǎn)品用乙醚重結晶，得到420mg 1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(4-吡啶基甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.162-164℃。
實施例5冰冷卻下，向1-環(huán)戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(1.0g，4.5mmol)溶于苯(10ml)形成的溶液中加入三甲基鋁(4.9ml，2M，于甲基中)。將反應混合物在室溫下攪拌1小時，然后加入溶于苯(25ml)的1-(乙氧羰基甲基)吡咯(0.7g)并將該混合物回流過夜。將反應混合物冷卻，加入2N HCl并用CHCl3(3x)萃取該混合物。將有機層分出，用MgSO4干燥，并真空濃縮。將殘留物用乙醚煮解并從乙醚中重結晶，得到1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(1-吡咯基甲基)-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.170-172℃。
實施例6將鈉球(207mg)溶于乙醇(15ml)并加入1-環(huán)戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(1.0g)，隨后加入4-甲氧基苯基乙酸酯(1.62g，9mmol)。將反應混合物回流16小時，汽提溶劑，向殘留物中加入水，并將產(chǎn)物過濾收集，用乙醚重結晶，得到0.89g1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(4-甲氧基苯基甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.172-173℃。
實施例7向1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(4-甲氧基苯基甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮(1.0g，2.8mmol)溶于DMF(25ml)形成的溶液中加入97％的NaH(264mg)，20分鐘后加入丙硫醇(0.65g)。將反應混合物在室溫攪拌0.5小時，然后在蒸汽浴上加熱20小時，最后在120℃的油浴中加熱8小時。另外再加入97％NaH(264mg)和丙硫醇(0.77ml)并將反應混合物在130℃加熱32小時。將反應混合物加入冰水中，加入乙酸并將形成的沉淀過濾收集并干燥，用乙酸乙酯重結晶后，得到0.69g 1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(4-羥苯基甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.264-267℃(dec.)。
實施例8(a)將4-羥基苯基乙酸甲酯(10g，0.06)在DMF(100ml)中的溶液加入置于冰浴中的含97％NaH(1.78g，0.072mol)的DMF(60ml)中。將反應混合物攪拌0.5小時，然后加入含氯乙腈(5.44g，0.072mol)的DMF(50ml)。將該反應混合物在室溫下攪拌約2天，真空除去溶劑，將殘留物在水和乙醚之間分配。將有機層分離，先用飽和Na2CO3，然后用鹽水洗滌，并用MgSO4干燥，過濾，真空濃縮，得到12.2g 4-(氰基甲氧基)苯基乙酸甲酯。
(b)將鈉球(600mg)溶于乙醇(15ml)中，加入1-環(huán)戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(1.0g)，然后加入4-(氰基甲氧基)苯基乙酸酯(1.85g)。將反應混合物回流過夜，將溶劑汽提并加入水。過濾反應混合物，將濾液用2N HCl酸化，過濾收集產(chǎn)物，用乙酸乙酯重結晶，得到1-環(huán)戊基-3-乙基-6-[4-(羧甲氧基)苯基甲基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.218-220℃。
實施例9將金屬鈉(310mg)溶于乙醇(75ml)中，然后加入1-環(huán)戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(1.1g，5mmol)和2-吡啶基乙酸甲酯(1.52g，10mmol)。將反應混合物加熱回流28小時，真空除去溶劑，將殘留物溶于水(50ml)并用乙酸酸化。用CHCl3(100ml)萃取該混合物，除去溶劑，將油狀殘留物用環(huán)己烷結晶，得到0.85g粗產(chǎn)物。將該產(chǎn)物通過硅膠柱色譜純化，用乙醚洗脫，隨后用環(huán)己烷重結晶，得到黃色結晶狀1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(2-吡啶基甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.120-122℃。
實施例10(a)將97％的NaH(3.56g，0.14mol)懸浮于DMF(100ml)中并加入4-羥苯基乙酸甲酯(10g，0.06mol)。將該反應混合物攪拌0.5小時，然后加入N-(2-氯乙基)嗎啉鹽酸鹽(11.2g)并將該反應混合物在室溫攪拌約2天，然后在蒸汽浴上加熱2小時。將反應混合物冷卻，過濾并將濾液汽提。將殘留物在水和乙醚之間分配，分層，用乙醚萃取水層。將有機層合并，用鹽水洗滌，用MgSO4干燥，過濾并濃縮，得到11.59g(69％)4-[2-(4-嗎啉基)乙氧基]苯基乙酸甲酯。
(b)將鈉(414mg)溶于乙醇(30ml)中并加入1-環(huán)戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(2.0g)和4-[2-(4-嗎啉基)乙氧基]苯基乙酸甲酯(5.03g，18mmol)。將反應混合物回流過夜，汽提溶劑，在殘留物中加入水，隨后加入足量乙酸將pH調節(jié)至8-9。通過潷析收集油狀物，用水和飽和NaHCO3處理。將該混合物用乙酸乙酯萃取，用水，然后用飽和NaHCO3(2x)洗滌。將水層用另一部分乙酸乙酯萃取，將合并的有機層用2N NaOH和鹽水洗滌。將有機層用MgSO4干燥，過濾，汽提用乙醚煮解并過濾，得到粗產(chǎn)物。將該粗產(chǎn)物通過數(shù)次酸/堿處理，隨后用乙醚重結晶，得到1.67g 1-環(huán)戊基-3-乙基-6-[4-[2-(4-嗎啉基)乙氧基]苯基甲基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.136-137℃。
實施例11(a)將4-(氰基甲氧基)苯基乙酸甲酯(2.5g，12mmol)，NaN3(0.87g)，NH4Cl(0.72g，13mmol)和DMF(20ml)的混合物在125℃加熱24小時。將該反應混合物冷卻，加入水，并該混合物真空汽提，但勿將溶液汽提至干。重復該操作(2x)然后加入水，接著加入2N HCl。將溶液中結晶出的產(chǎn)物過濾收集，用水洗滌，空氣干燥，得到1.7g(60％)4-(5-四唑基甲氧基)苯基乙酸甲酯。
(b)將鈉(0.253g)溶于乙醇(15ml)，然后加入1-環(huán)戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(0.813g，3.7mmol)和4-(5-四唑基甲氧基)苯基乙酸甲酯(17g，7.3mmol)。將反應混合物回流約2天，冷卻，然后真空除去溶劑。將殘留物用水和乙酸處理，將形成的沉淀過濾收集并在60℃真空干燥。將該產(chǎn)物溶于乙酸乙酯，用Na2CO3(4×200ml)萃取，將水層用濃HCl酸化至pH2.5，然后用乙酸乙酯(2×300ml)萃取水層，并將有機層用MgSO4干燥，過濾并真空濃縮。將固體殘留物用乙酸乙酯重結晶，得到0.21g 1-環(huán)戊基-3-乙基-6-[4-(5-四唑基甲氧基)苯基甲基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，2/5水合物，m.p.240-242℃。
實施例12(a)將97％的NaH(3.0g，0.12mol)在DMF(100mL)中的懸浮液攪拌0.5小時，然后在30分鐘內(nèi)加入存在于DMF(50mL)中的苯并咪唑(11.8g，0.1mol)，接著加入存在于DMF(50mL)中的溴代乙酸乙酯(20g，0.12mol)。將反應混合物在室溫下攪拌過夜，加入NH4Cl，并將反應混合物汽提，在殘留物中加入水，并將其用CH2Cl2(3×200mL)萃取。將有機層用MgSO4干燥，過濾，真空濃縮。將殘留物用乙酸乙酯處理，過濾收集白色固體，真空濃縮濾液，將殘留物用水重結晶，得到8.0g1-(乙氧羰基甲基)苯并咪唑，mp.63-64℃。
(b)將鈉(338mg)溶于乙醇(30mL)中，加入1-(乙氧羰基甲基)苯并咪唑(3.0g，14.7mmol)和-1-環(huán)戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(1.6g)。將反應混合物回流過夜，汽提溶劑并用水和乙酸處理殘留物。過濾收集所形成的沉淀，用水洗滌，得到1.96g(75％)1-環(huán)戊基-3-乙基-6-[1-苯并咪唑基甲基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.256-259℃。
實施例13將鈉(0.11g)溶于乙醇，然后加入1-環(huán)戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(0.49g，2.21mmol)，10分鐘后再加入含于乙醇(2mL)中的3-吡啶基乙酸乙酯(0.73g)。將反應混合物回流過夜，再加入3-吡啶基乙酸酯(0.35g)，將反應混合物再回流過夜。將反應混合物冷卻至室溫，汽提溶劑，并殘留物溶于水并用乙酸處理(至pH7)。將該混合物用CHCl3(3×50mL)萃取，將有機層合并，用MgSO4干燥，汽提，得到淺黃色油狀物。將該油狀物通過加入乙醚結晶，過濾收集產(chǎn)物，用乙醚洗滌，得到0.4g 1-環(huán)戊基-3-乙基-6-[3-吡啶基甲基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮。
實施例14將37％的甲醛(5mL)加入1-環(huán)戊基-3-乙基-6-[4-羥基苯甲基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮(2.68g，7.9mmol)和40％二乙胺(5mL)在乙酸(50mL)中的懸浮液中。將反應混合物在室溫攪拌2小時，然后將其在100℃的蒸汽浴上加熱4小時。汽提溶劑，在殘留物中加入乙醇，然后汽提乙醇，通過制備薄層層析純化殘留物，用5％異丙胺/乙酸乙酯展開，將得產(chǎn)物用乙醚重結晶后，得到0.79g 1-環(huán)戊基-3-乙基-6-[3，5-二甲基氨基-4-羥基苯甲基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.164-166℃。
實施例15(a)將溴代乙酸乙酯(20.9g)在乙腈(30mL)中的溶液加入K2CO3(27.6g，0.2mol)和1，2，3，4-四氫-2-異喹啉(13.3g，0.1mol)在乙腈(220mL)中的混合物中。將反應混合物在室溫下攪拌約2天，然后回流4小時。過濾反應混合物，真空濃縮濾液，將殘留物在乙醚和水之間分配。將乙醚層分出，用MgSO4干燥，真空濃縮，得到一種液態(tài)物質，將其溶于乙醚(200mL)，冷卻并用Et2O·HCl處理，得到12.5g(77％)1，2，3，4-四氫-2-異喹啉基乙酸乙酯鹽酸鹽。
(b)將1，2，3，4-四氫-2-異喹啉基乙酸乙酯鹽酸鹽(3.63g)溶于水(100mL)，用NaHCO3處理，然后用乙醚(3×75mL)萃取。將合并的有機層用MgSO4干燥，過濾并汽提，得到3.02g淺黃色液體狀1，2，3，4-四氫-2-異喹啉基乙酸乙酯。
(c)將鈉(0.24g)溶于乙醇(25mL)和1-環(huán)戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(1.09g，4.91mmol)中，隨后加入1，2，3，4-四氫-2-異喹啉基乙酸乙酯(2.15g)。將反應混合物回流約2天，汽提溶劑，用水和乙酸處理殘留物。用CHCl3(3×100ml)萃取所形成的膠狀物，并將合并的有機層用MgSO4干燥，過濾并汽提，得到黃色固體，將其用乙醚洗滌，得到粗產(chǎn)物(0.6g)。將該粗產(chǎn)物與來自相似的實驗途徑的粗產(chǎn)物合并，并將該混合物通過硅膠柱色譜純化，用乙酸乙酯/己烷(1/1)洗脫。另一部分產(chǎn)物也可從上述乙醚濾液的濃縮中得到，并可按上述進行柱層析純化。將產(chǎn)物流份沉淀并用乙醚重結晶，得到白色固體狀1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(1，2，3，4-四氫-2-異喹啉基甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.149-151℃。
實施例16(a)攪拌下，將溴代乙酸乙酯(8.4mL)滴入K2CO3(20.7g，150mmol)和1，2，3，4-四氫-1-喹啉(10.0g，75.08mmol)在乙腈(150mL)中的混合物中，并將該混合物在室溫攪拌48小時。將反應混合物過濾，真空濃縮濾液，將殘留物在乙醚和水之間分配。將有機層分出，用鹽水洗滌，用MgSO4干燥，蒸發(fā)，得到15.0g(91％)琥珀色液體狀1，2，3，4-四氫-1-喹啉基乙酸乙酯。
(b)將鈉(0.33g)溶于乙醇(30mL)和1-環(huán)戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(1.54g，6.94mmol)中，隨后加入乙醇(5-10mL)中的1，2，3，4-四氫-1-喹啉基乙酸乙酯(3.04g)。將反應混合物加熱回流約兩天，汽提溶劑，將所得油狀殘留物用水處理并用乙酸中和。將所形成的沉淀用CHCl3提取，用MgSO4干燥，汽提，得到琥珀色油。將該油通過硅膠柱色譜純化，用乙酸乙酯/己烷(1/1)洗脫，隨后用乙腈重結晶，得到白色結晶固體狀1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(1，2，3，4-四氫-1-喹啉基甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮。
實施例17將鈉(0.68g)溶于乙醇中，先后加入1-環(huán)戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(3.0g，13.5mmol)，甘醇酸乙酯(2.8g，27mmol)。將反應混合物回流過夜，將乙醇汽提，在殘留物中先后加入水和2N HCl。過濾收集形成的沉淀，先后用飽和NaHCO3和水洗滌。將產(chǎn)物先后用乙酸乙酯和乙醚重結晶，得到0.83g 1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(羥甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮m.p.183-184℃。
實施例18(a)在-50℃下，在1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(羥甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮(1.0g，3.8mmol)，CH2Cl2(25mL)和三乙胺(0.77g，7.6mmol)的混合物中加入CH2Cl2(5mL)中的甲磺酰氯(0.44g，3.8mmol)。將反應混合物攪拌1小時，加入CH2Cl2和水，分出有機層，用MgSO4干燥，過濾并真空濃縮，得到1.28g粗產(chǎn)物。將粗產(chǎn)物與來自相似的實驗途徑的產(chǎn)物合并，并將該混合物用乙醚(2x)重結晶，得到1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(甲磺酰氧甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.138-140℃。
(b)將1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(甲磺酰氧甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮(1.8g，15.3mmol)，1-(甲羰基)咪唑(640mg，5.8mmol)和CH3CN(36mL)的混合物加熱回流6小時。將溶劑汽提，加入冰水和飽和NaHCO3，并將該混合物用乙酸乙酯萃取，用MgSO4干燥，過濾并汽提。將該產(chǎn)物與來自相似的實驗途徑的產(chǎn)物合并，并將該混合物用乙酸乙酯重結晶。將該產(chǎn)物用2N HCl處理，用乙酸乙酯萃取，并用NaHCO3中和水層，用乙酸乙酯萃取，用MgSO4干燥，過濾并汽提。將殘留物用乙酸乙酯重結晶，得到0.54g 1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(1-咪唑基甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.252-253℃。
實施例19將鈉(1.19g)溶于乙醇(85mL)中，先后加入1-環(huán)戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(5.7g，26mmol)和3-甲氧苯基乙酸乙酯(10g)。將反應混合物回流過夜，冷卻至室溫，汽提溶劑。在殘留物中先后加入水和2N HCl，過濾收集形成的沉淀，并將其用乙酸乙酯重結晶，得到5.08g 1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(3-甲氧基苯甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.148-150℃。
實施例20將97％NaH(1.26g)加入1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(3-甲氧基苯甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮(4.49g，13mmol)在DMF(123mL)中的溶液中，20分鐘后，加入丙硫醇(2.96g，39mmol)。將反應混合物在130℃加熱過夜，冷卻至室溫，然后先后加入冰水和乙酸。過濾收集形成的沉淀，用乙醚重結晶，在110℃及2mmHg下干燥，得到2.72g 1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(3-羥基苯甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.195-197℃。
實施例21(a)將3-羥基苯乙酸(10g，66mmol)，HCl乙醇溶液(160mL)和H2SO4(1mL)的混合物回流過夜。汽提溶劑，得到11.66g(98％)3-羥基苯乙酸乙酯。
(b)將97％NaH(1.75g，0.07mol)在DMF(50mL)中的懸浮液攪拌15分鐘，然后加入DMF(25mL)中的3-羥基苯乙酸乙酯(5.4g，0.03mol)。將反應混合物攪拌0.5小時，然后在冰浴中冷卻，并加入N-(2-氯乙基)嗎啉鹽酸鹽(5.6g，0.03mol)。將反應混合物在室溫下放置過夜，然后在蒸汽浴上加熱四小時。汽提溶劑，將殘留物在冷水和乙醚之間分配，分出有機層，并用乙醚萃取水層。將有機層合并，用MgSO4干燥，過濾并汽提，得到粗產(chǎn)物，將其通過硅膠柱色譜純化，用乙酸乙酯洗脫，得到4.64g 3-[2-(4-嗎啉基)乙氧基]苯乙酸乙酯。
(c)將鈉(364mg)溶于乙醇(30mL)然后依次加入1-環(huán)戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(1.75g)和乙醇(7mL)中的3-[2-(4-嗎啉基)乙氧基]苯乙酸乙酯(4.64g)。將反應混合物回流2天，汽提溶劑，在殘留物中依次加入水和乙酸。將該混合物用NaHCO3處理，用乙酸乙酯(2×300mL)萃取，將有機層合并并用飽和Na2CO3洗滌，然后用鹽水洗滌。將有機層用MgSO4干燥，過濾并汽提，得到2.89g的粗產(chǎn)物。將該粗產(chǎn)物通過硅膠柱色譜純化，用乙酸乙酯洗脫，用乙醚重結晶，在75℃及0.2mmHg干燥后得到1.21g 1-環(huán)戊基-3-乙基-6-[3-[2-(4-嗎啉基)乙氧基]苯甲基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮。
實施例22將鈉粒(1.0g，43.5mmol)在回流下溶于乙醇(50mL)中，然后依次加入1-環(huán)戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(2.2g，10mmol)和乙醇(30ml)中的1-甲基吡咯-2-乙酸甲酯(3.06g，20mmol)。將反應混合物在氬氣氛下回流過夜，冷卻至室溫，蒸發(fā)至干。將殘留物溶于水，冷卻該溶液過濾收集所得固體，得到回收的原料。將濾液冷凍，過濾收集形成的固體，用水成漿，用2N HCl酸化。將該混合物冷卻，過濾收集產(chǎn)物，在110℃真空干燥，得到1.2g 1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(1-甲基-2-吡咯基甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.214.5-216.5℃。通過乙酸酸化濾液，過濾收集產(chǎn)物，用乙酸乙酯重結晶，可得到另一部分產(chǎn)物(0.6g)。
實施例23(a)將1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(羥甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮(5.15g)在CH2Cl2(1 20mL)中的溶液冷卻至-50℃，依次加入三乙胺(4.7mL)，CH2Cl2(24mL)中的甲磺酰氯(2.09g，18mmol)。將反應混合物溫熱至室溫并攪拌3小時。向反應混合物中加入水和CH2Cl2，使其分層，用CH2Cl2萃取水層。將有機層合并，用MgSO4干燥，過濾并汽提。將殘留物轉入乙醚中，潷出分離出的油，用活性炭處理濾液，過濾，真空濃縮。將殘留物用乙醚重結晶并在75℃及0.2mmHg下干燥，得到1.58g l-環(huán)戊基-3-乙基-4-甲磺酰氨基-6-(甲磺酰氧甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶，m.p114-116℃。
(c)將97％NaH(0.158g)在DMF(25mL)中攪拌15分鐘，然后依次加入吡唑(0.372g，58mmol)，和1-環(huán)戊基-3-乙基-4-甲磺酰氧基-6-(甲磺酰氧基甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶(1.22g，2.9mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌2小時，然后在蒸汽浴上加熱過夜。在反應混合物中加入水，接著加入足量2N HCl酸化混合物。將該混合物放置1.5小時，過濾收集產(chǎn)物并用水洗滌。將該產(chǎn)物通過硅膠制備薄層層析純化，用50％乙酸乙酯/己烷展開，用乙醚重結晶，在75℃及0.2mmHg下干燥后，得到0.26g 1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(1-吡唑基甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.130-131℃。
實施例24(a)將4-三氟甲基苯乙酸(15g)，HCl乙醇溶液(200mL)和H2SO4(1mL)的混合物回流過夜。汽提溶劑，將殘留物在乙酸乙酯和飽和NaHCO3間分配，分出有機層，用鹽水洗滌，用MgSO4干燥，過濾并濃縮，得到15.35g(90％)4-三氟甲基苯乙酸乙酯。
(b)將鈉(622mg)溶于乙醇(45mL)中，然后依次加入1-環(huán)戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(3.0g，13.5mmol)和4-三氟甲基苯乙酸乙酯(6.27g，27mmol)。將反應混合物回流過夜，冷卻至室溫，汽提溶劑。在殘留物中依次加入水和2N HCl，過濾收集產(chǎn)物，用乙醚重結晶，在110℃及0.2mmHg干燥，得到3.03g 1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(4-三氟甲基苯甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.212-213℃。
實施例25(a)和(b)在-10到-15℃下，向90％HNO3(95mL)中加入1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(苯甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮(9.62g，30mmol)。將反應混合物在上述溫度下攪拌1.5小時，然后將其倒入冰水中。過濾收集形成的沉淀，用乙酸乙酯重結晶，在100℃及0.2mmHg下干燥，得到2.31g 1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(4-硝基苯甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.221-223℃[標記為實施例25(a)]。將母液合并，真空濃縮，得到1-環(huán)戊基-3 乙基-6-(2-硝基苯甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮和1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(3-硝基苯甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-的混合物[標記為實施例25(b)]。
實施例26使用10％鈀炭(200mg)作為催化劑，在55psi氫化DMF(50mL)中的1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(4-硝基苯甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮(2.12g，5.8mmol)。將反應混合物通過SUPERCELL過濾，真空濃縮濾液，將殘留物用乙酸乙酯重結晶，在100℃及0.2mmHg干燥后，得到1.28g 1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(4-氨基苯甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮1/4水合物，m.p.198-199℃。
實施例27(a)向2-羥基苯乙酸(25g，0.16mol)在DMF(300mL)中的溶液中依次加入K2CO3(56.7g，0.41mol)和碘甲烷(46.7g，0.32mol)。將反應混合物攪拌約3天，過濾，汽提濾液。將殘留物轉入乙酸乙酯，用水飽和Na2CO3和鹽水洗滌，將有機層用MgSO4干燥，過濾，汽提，得到26.4g(92％)2-甲氧基苯乙酸甲酯。
(b)將鈉(590mg)溶于乙醇(45mL)，然后依次加入1-環(huán)戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(2.65g，12mmol)，和2-甲氧基苯乙酸甲酯(4.7g，26mmol)。將反應混合物回流過夜，汽提溶劑，依次用水和2N HCl處理殘留物。過濾收集產(chǎn)物，用乙酸乙酯重結晶，得到2.23g 1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(2-甲氧基苯甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.145-146℃。
實施例28(a)將3-乙?；?4-氧代戊酸乙酯(37.24g，0.2mol)，羥基胺鹽酸鹽(1 4.6g，0.21mol)，NaOAc(17.23g，0.21mol)和乙醇(500mL)的混合物回流4小時。將反應混合物過濾，真空濃縮濾液，并將殘留物在乙酸(12.61g，0.21mol)和甲苯(300mL)中加熱6到6.5小時，以除去水。過濾反應混合物，真空濃縮濾液，得到棕黃色油，將其冷卻結晶。過濾收集產(chǎn)物，用乙醚洗滌，得到1.26g 3，5-二甲基-4-異噁唑基乙酸乙酯，m.p.180-182℃。通過濃縮乙醚濾液并在69-81.5℃及0.05mmHg蒸餾殘留物將得到另一部分產(chǎn)物，共31.18g(85％)。
(b)將鈉粒(0.23g)溶于回流的乙醇(50mL)中，然后依次加入1-環(huán)戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(1.1g，5mmol)和3，5-二甲基-4-異噁唑基乙酸乙酯(1.83g，10mmol)。將反應混合物在氬氣氛下回流72小時，用乙酸酸化，然后真空濃縮。用乙醚提取殘留物，將乙醚層用水洗滌，用MgSO4干燥，過濾，蒸發(fā)，用CH3CN/乙醚重結晶，得到0.65g黃色結晶固體狀1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(3，5-二甲基-4-異噁唑基甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.179.5-180℃。
實施例29在冰浴冷卻下，將三乙胺(0.54mL，3.8mmol)加入1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(4-氨基苯甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮(1.3g，3.8mmol)在吡啶(30mL)中的溶液中，然后加入甲磺酰氯(0.52g，4.6mmol)。將反應混合物在相同的溫度下攪拌3小時，然后在室溫下攪拌過夜。在反應混合物中加入水，過濾收集粗產(chǎn)物。將粗產(chǎn)物轉入乙酸乙酯中，用2N HCl洗滌，并將該混合物過濾。將濾液用MgSO4干燥，過濾，汽提，用乙酸乙酯重結晶，在110℃及0.2mmHg下干燥，得到0.65g 1-環(huán)戊基-3-乙基-6-[4-(甲磺酰氨基)苯甲基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.242-243℃。
實施例30將1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(2-甲氧基苯甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮(1.64g，4.6mmol)在DMF(45ml)中的溶液用97％NaH(0.46g，19mmol)處理，隨后加入3-丙硫醇(1.08g，14mmol)。將反應混合物在130℃加熱過夜，冷卻至室溫。依次加入冰水和乙酸，過濾收集產(chǎn)物，并用水洗滌。將產(chǎn)物用乙酸乙酯重結晶，在100℃及0.2mmHg下干燥，得到1.27g(8.2％)1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(2-(2-羥基苯甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.191-193℃。
實施例31將鈉(414mg)溶于乙醇(45mL)中，依次加入1-環(huán)戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(2g，9mmol)，3-噻吩基乙酸乙酯(3.1g，18mmol)。將反應混合物回流約2天，將溶劑汽提。將殘留物依次用水和稀HCl處理，過濾收集產(chǎn)物。將產(chǎn)物用乙酸乙酯重結晶，在100℃及0.2mmHg下干燥，得到1.25g 1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(3-噻吩甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.210-211實施例32將鈉(414mg)溶于乙醇(45mL)中，依次加入1-環(huán)戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(2g，9mmol)和2-噻吩基乙酸乙酯(3.1g，18mmol)。將反應混合物回流過夜，冷卻至室溫并將乙醇汽提。在殘留物中依次加入水和2N HCl，過濾收集產(chǎn)物，并用水洗滌，將產(chǎn)物用乙酸乙酯重結晶，在90℃及0.2mmHg下干燥，得到119g 1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(2-噻吩甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.173-174℃。
實施例33(a)在冰浴冷卻下，在20分鐘內(nèi)，將二乙胺(32.2g，0.44mol)滴入4-氯甲基苯甲酸(17.1g，0.1mol)在乙醇(200ml)中的溶液中。將反應混合物回流17小時，冷卻至室溫并將溶劑汽提。將殘留物溶于1NNaOH(50ml)。用乙醚(50-100ml)萃取，用2N HCl將水層酸化至pH3。汽提水層，用乙醇處理殘留物，過濾，將乙醇汽提。將殘留物用異丙醇(3x)重結晶，得到13.54g 4-二乙氨基甲基苯甲酸鹽酸鹽，m.p.189-191℃。
(b)將4-二乙氨基甲基苯甲酸鹽酸鹽(360mg，1.5mmol)，N，N′-碳酰二咪唑(264mg，1.5mmol)和二噁烷(20ml)的混合物在油浴上加熱1小時。將反應混合物冷卻至室溫，加入1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(4-羥基苯甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮(500mg，105mmol)和二噁烷(10ml)，將此混合物在100℃加熱過夜。將反應混合物冷卻，汽提溶劑，然后加入水和乙酸乙酯。分出乙酸乙酯層，用2N HCl(4×150ml)洗滌。將水層合并，用濃NH4OH處理，然后用乙酸乙酯(2x)萃取。將乙酸乙酯層用鹽水洗滌，用MgSO4干燥，過濾并汽提，得到粗產(chǎn)物。將粗產(chǎn)物與來自相似實驗途徑的粗產(chǎn)物合并，將該混合物用乙醚重結晶，得到0.46g 1-環(huán)戊基-3-乙基-6-[4-[4-(二乙氨基甲基)苯基羰氧基]苯甲基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.143-145℃。
實施例34在10％鈀炭(700mg)存在下，在55psi的壓力下氫化1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(2-硝基苯甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮和1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(3-硝基苯甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮(7.1g，19mmol)在DMF(300mL)中的混合物，用SUPERCELL過濾反應混合物，將濾液汽提，得到粗產(chǎn)物。將該粗產(chǎn)物與來自另外兩個相似的實驗途徑的粗產(chǎn)物合并，將該混合物用乙酸乙酯重結晶，然后通過硅膠色譜純化，用50％乙酸乙酯/己烷洗脫，用乙酸乙酯重結晶，得到111g 1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(2-氨基苯甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.190-192℃。
實施例35(a)將4-二甲氨基苯乙酸(10g，56mmol)，HCl的乙醇溶液(160mL)和濃H2SO4(1mL)的混合物(1mL)回流過夜。汽提溶劑，在殘留物中加入乙酸乙酯和稀NH4OH，并分層。將有機層用鹽水洗滌，用MgSO4干燥，過濾并汽提，得到8.32g(72％)4-二甲氨基苯乙酸乙酯。
(b)將鈉(920mg)溶于乙醇(67mL)，依次加入4-二甲氨基苯乙酸乙酯(8.32g，40mmol)和1-環(huán)戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(4.44g，20mmol)，將反應混合物回流約2天。將反應混合物冷卻至室溫，汽提乙醇，在殘留物中加入水。過濾收集產(chǎn)物，用水洗滌，用乙酸乙酯(2x)重結晶，在100℃及0.2mmHg下干燥，得到3.41g 1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(4-二甲氨基苯甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.225-226℃。實施例36(a)用40％TRITONB的甲醇溶液(3mL)處理4-(1-咪唑基)苯甲醛(5.08g，29.5mmol)和甲基(甲硫基)甲基亞砜(2.57g，21mmol)在THF(5mL)中的混合物。將反應混合物回流4小時，加入另一部分甲基(甲硫基)甲基亞砜(1.09g，8.5mmol)，再將反應混合物回流2小時。將反應混合物冷卻至室溫，加入CH2Cl2，將有機層依次用水和鹽水洗滌，用MgSO4干燥，過濾并汽提。將殘留物轉入HCl乙醇溶液(180mL)，回流16小時。冷卻反應混合物，汽提乙醇，將殘留物用水(200mL)處理，并用乙酸乙酯(250mL)萃取。將水層用稀NH4OH處理，用乙酸乙酯(2x)萃取。然后將有機層用鹽水洗滌，用MgSO4干燥，過濾并汽提，得到粗產(chǎn)物。將該粗產(chǎn)物轉入乙酸乙酯，依次用25％亞硫酸氫鈉和鹽水振搖。將水層用乙酸乙酯萃取，將合并的有機層用用MgSO4干燥，過濾并汽提，得到193g 4-(1-咪唑基)苯乙酸乙酯。
(b)將鈉(193mg)溶于乙醇(25mL)，依次加入1-環(huán)戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(0.93g，4.2mmol)，和乙醇(7mL)中的4-(1-咪唑基)苯乙酸乙酯(1.93g，8.4mmol)。將反應混合物回流過夜，汽提乙醇，在殘留物中加入水。冷卻該混合物，過濾收集粗產(chǎn)物。將粗產(chǎn)物與1N HCl攪拌，過濾收集鹽酸鹽形式的產(chǎn)物。將該鹽酸鹽用稀NH4OH處理，過濾收集所得沉淀，將其用乙酸乙酯重結晶，在100℃知0.2mmHg下干燥，得到0.4g 1-環(huán)戊基-3-乙基-6-[4-(1-咪唑基)苯甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.232-234℃。
實施例37(a)將三乙胺(70mL，0.5mol)加入(1-乙氧基亞乙基)丙二腈(68g，0.5mol)和叔丁基肼鹽酸鹽(62.3g，0.5mol)在乙醇(500mL)中的混合物中。將反應混合物在室溫下攪拌2小時，然后在冰中冷卻，過濾收集產(chǎn)物并用乙醚洗滌，得到85.9g 1-叔丁基-3-甲基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲腈2/3Et3N-HCl。通過濃縮母液，將殘留物用乙醇重結晶可得到另外46.2g所需產(chǎn)物。
(b)將1-叔丁基-3-甲基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲腈2/3Et3N·HCl(38g，0.12mol)和水(250mL)的混合物加熱至85℃。過濾收集從反應混合物中沉淀出的產(chǎn)物，得到23.25g 1-叔丁基3-甲基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲腈，m.p.156-157℃。
(c)在0℃，在水(200mL)，乙醇(120mL)和KOH(37g，0.56mol)的混合物中依次加入30％H2O2(89.1g，0.786mol)和1-叔丁基-3-甲基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲腈(20.0g，0.112mol)，將反應混合物攪拌4小時，過濾收集產(chǎn)物，用水洗滌，干燥，得到20.64g(94％)白色針晶狀1-叔丁基-3-甲基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺，m.p.195-196℃。
(d)將1-叔丁基-3-甲基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(1.0g，5.1mmol)，苯乙酸乙酯(1.67g，10.2mmol)，NaOCH3(1.74g，31mmol)和乙醇(50mL)的混合物回流約3天。將反應混合物汽提至干，將殘留物用水處理，然后用乙酸酸化。過濾收集產(chǎn)物，用水洗滌，干燥，得到0.53g(35％)1-叔丁基-3-甲基-6-(苯甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮1/5水合物，m.p.196-197℃。
實施例38(a)將1-環(huán)戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(4.6g，20.7mmol)，o-乙基黃原酸鉀鹽(6.4g，40mmol)和N-甲基-2-吡咯烷酮(15mL)的混合物在150-160℃加熱5小時。冷卻反應混合物。加入水，并將該混合物過濾。用活性炭處理濾液，然后用乙酸酸化。過濾收集形成的沉淀，用水洗滌并在90-95℃干燥，得到4.7g 1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(硫代)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.249-251℃。
(b)將1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(硫代)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮(5.2g，19.6mmol)，DMF(50mL)和K2CO3(2.76g，20mmol)的混合物在室溫下攪拌25分鐘，然后加入硫酸二甲酯(3.88mL，40mmol)。將反應混合物攪拌2小時，然后倒入冷水中，過濾收集產(chǎn)物，用水洗滌，用環(huán)己烷/乙醚重結晶，在70-75℃真空干燥，得到4.6g1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(甲硫基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.200-202℃。
選擇性地，該產(chǎn)物也可如下制備在攪拌下，在15分鐘內(nèi)，將NaH(4.0g，0.1mol，60％礦物油中的分散系)加入1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(硫代)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮(23.4g，0.09mol)在DMF(250mL)中的混合物中。將所得混合物在冰浴中冷卻，然后在20分鐘內(nèi)加入甲基碘(6.3mL，0.1mol)，并將所得混合物攪拌3小時。將反應混合物倒入冰水(400mL)中，過濾收集形成的沉淀，依次用水和己烷洗滌，在80-85℃真空干燥，得到18.6g(74％)1-環(huán)戊基-3乙基-6-(甲硫基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.203-205℃。
(c)將1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(甲硫基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮(4g)，CHCl3(100mL)和m-氯過氧苯甲酸(10.3g)的混合物攪拌過夜。將反應混合物用飽和NaHCO3水溶液(100mL)萃取，將CHCl3層用MgSO4干燥，過濾并濃縮至干。放置使油狀殘留物結晶，用環(huán)己烷重結晶，在70-75℃真空干燥，得到1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(甲磺酰基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.＞300℃。
(d)1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(甲磺酰基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮(2.3g，7.4mmol)和苯胺(1.2g，13mmol)的混合物在180-190℃加熱3小時。將反應混合物冷卻至室溫并在室溫下放置過夜。在反應混合物中加入乙醚，過濾收集產(chǎn)物，用乙醚洗滌，在80-85℃真空干燥，得到粗產(chǎn)物。將粗產(chǎn)物用飽和NaHCO3(25mL)處理，過濾收集不溶物，將其溶于熱異丙醇，用活性炭處理，真空濃縮。將殘留物用乙醚結晶，在80-85℃真空干燥，得到0.58g(25％)1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(苯氨基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮。
實施例39將1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(甲磺酰基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮(3g，9.6mmol)，苯酚(6g，64mmol)和NaH(O.5g，12.8mmol，60％礦物油中的分散系)的混合物在170-175℃加熱5小時。將反應混合物倒入水(50mL)中，用CHCl3(100mL)萃取。將CHCl3層真空濃縮，將殘留物通過硅膠柱色譜純化，用10％乙醚/己烷洗脫，得到2.1g(68％)白色固體狀1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(苯氧基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.175-177℃。
生物試驗結果在標準的生物試驗步驟中，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)式I化合物具有c-GMP-PDEV(以前被稱為c-GMP-PDEI)抑制活性，因此可被用于治療心力衰竭和高血壓?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，與硝酸酯結合使用式I化合物可被用于逆轉或減少硝酸酯引起的耐受性，因此可被用于治療心絞痛，充血性心臟病和心肌梗塞。
哺乳動物細胞中的環(huán)核苷酸磷酸二酯酶(PDE)的多同功酶形式已被鑒定。這些同功酶將環(huán)磷酸腺苷(cAMP)和/或環(huán)鳥苷單磷酸(cGMP)水解為可能無生物活性的5′-核苷磷酸。血管平滑肌中的細胞內(nèi)cGMP升高引起一系列變化導致肌肉緊張的減輕。同時腎小管細胞cGMP升高刺激尿鈉排泄和利尿。血管平滑肌和腎細胞含有對cGMP水解具有低km(1μM)的磷酸二酯酶同功酶，該同功酶已被稱為cGMP-PDE或cGMP-PDE V(以前被稱為cGMP-PD I，因為用濃度在150-200mM之間的乙酸鈉從陰離子交換瓊脂糖樹脂上洗脫時，它在第一個PDE活性峰中)。因此cGMP-PDE同功酶的抑制是一個能生存的亞細胞機理，由于通過cGMP的增加，可產(chǎn)生總的外周阻力的減小以及尿鈉排泄和利尿的刺激。cGMP-PDE抑制劑的發(fā)展預示著將要發(fā)現(xiàn)可用于治療心力衰竭和高血壓的藥劑。例如，對cGMP-PDE具有高抑制作用的化合物被認為可降低血壓及誘導尿鈉排泄和多尿。
本發(fā)明的典型化合物的cGMP-PDE V抑制活性可能下列步驟證明。
cGMP-PDE和其他PDE同功酶可按Silver等，Sec.Messeng.Phos.1313-25，1991中所述，通過陰離子-交換和親合色譜從各種動物和人的心血管組織(心臟和主動脈)中分離，有無試驗化合物存在下的PDE活性基本上按Thompson等，Adv Cyclic Nucleotide Res.1069-92所述測定。為了測定化合物作為PDE抑制劑的效力和選擇性，可測定它們在10μM時對環(huán)狀核苷水解的影響。如果觀察到≥50％的PDE活性抑制率，就會得到IC50值(導致50％PDE活性減少的化合物濃度)和相應的95％可信的間隔。IC50可按Tallarida和Murray，Manual of PharmacologicCalculations with Computer Programs，Procedure 8，Graded Dose-response，PP.14-19，Springer-Verlag，New York，1981(“計算機程序藥理學計算指南”)所述的方法由相應的濃度曲線計算。
下表概括了由本發(fā)明典型化合物試驗所得的結果。
以給出的μM或IC50(nM)形式的百分抑制率實施例 cGMP-PDEV1(b)102(b)9％(1μM)3(b)224(b)6505 3106 237 198(b)12009 54010(b) 27011(b) 31012(b) 39％(1μM)或17％(0.1μM)13 66014 77％(10μM)或28％(1μM)15(c) 177016(b) 90％(10μM)或32％(1μM)17 61％(10μM)或20％(1μM)18(b) 33％(1μM)19 3320 8621(c) 42022 30023(b) 33％(1μM)24(b) 18025(a) 7626 8.727(b) 73％(1μM)或25％(0.1μM)28(b) 48％(1μM)29 94％(0.1μM)或77％(0.01μM)30 73％(1μM)或43％(0.1μM)
以給出的μM或IC50(nM)形式的百分抑制率實施例 cGMP-PDEV31 3032 89％(1μM)或58％(0.1μM)或24％(0.01μM)33(b) 56％(0.1μM)34 78％(1μM)或45％(0.1μM)35 53％(1μM)或34％(0.1μM)36(b) 62％(1μM)或26％(0.1μM)37(d) 78％(1μM)或36％(0.1μM)38(d) 27039 74％(1μM)或33％(0.1μM)本發(fā)明典型化合物的抗高血壓活性按下列步驟證明。
將自發(fā)性高血壓的大鼠(SHR)用戊巴比妥鈉(50mg/kg，ip)麻醉，在腔靜脈和腹主動脈的下方安裝導管以給入藥物和分別記錄動脈血壓和心率。術后恢復2天后，以5分鐘的間隔對清醒的SHR作三基線血壓測量。以與劑量有關的方式(0.3-10mg主劑/kg)靜脈注入試驗化合物或賦形劑，同時用多種波動描記器連續(xù)記錄動脈血壓。在給入各種劑量的試驗化合物及以累積劑量方式給入下一劑量后5分鐘測量平均血壓反應。以與三基線測量平均值的差計算各劑量試驗化合物的反應。
下表概括了由本發(fā)明典型化合物試驗所得的結果。
SHR iv以給定的mg/kg或ED25(mg/kg)表示的實施例 平均動脈血壓變化的百分率1(b) -15％(1mg/kg)或-29％(30mg/kg)6 8.4或-30％(10mg/kg)7 4.610(b) -17％(10mg/kg)11(b) -4％(10mg/kg)19 11.0或-21％(10mg/kg)20 10.1或-23％(10mg/kg)24(b) -8％(10mg/kg)25(a) -5％(10mg/kg)26 4.2或-46％(10mg/kg)或-56％(10mg/kg，po)33(b) 9.3或-27％(10mg/kg)本發(fā)明典型化合物逆轉或緩減硝酸酯誘導的耐藥性的活性可按下述步驟證明通過反復給以高劑量的硝酸甘油(100mg/kg，s.c.，3次/天，連續(xù)給藥3天)使自發(fā)性高血壓大鼠(17-25周齡)對硝酸甘油產(chǎn)生耐藥性。為了進一步證實耐藥性，將1-300μg/kg劑量范圍的硝酸甘油靜脈給藥，記錄各劑量在平均動脈血壓(MAP)方面的最大變化。在激發(fā)劑量的硝酸甘油給藥前的5-10分鐘，用本發(fā)明化合物(耐藥性預處理組)或用賦形劑(0.05N NaOH)(耐藥性賦形劑預處理組)對分組的耐藥的大鼠進行靜脈給藥預處理。對非耐藥大鼠(非耐藥性組)給以激發(fā)劑量的硝酸甘油導致與劑量有關的10到40mmHg之間的MAP的降低。對耐藥性賦形劑預處理組給入激發(fā)劑量的硝酸甘油導致明顯的高血壓反應的減輕。對用本發(fā)明化合物預處理的耐藥大鼠(耐藥性預處理組)給入激發(fā)劑量的硝酸甘油導致高血壓反應的不同程度的康復。計算非耐藥性組以及耐藥性賦形劑預處理組和耐藥性預處理組劑量-MAP曲線下的面積。磷酸酯誘導的耐藥性的百分逆轉率按下式計算百分逆轉率＝(AUCtol-pretreated-AUC(tol-veh)/(AUCnontol-AUCtol-veh)×100其中AUCnontol＝非耐藥性組劑量-MAP曲線下的面積。
AUCtol-veh＝耐藥賦形劑預處理組劑量-MAP曲線下的面積AUCtol-pretreated＝耐藥預處理組劑量-MAP曲線下的面積100％或更大的百分逆轉率說明對硝酸酯誘導的耐藥性的完全逆轉，而0％的百分逆轉率說明對所產(chǎn)生的硝酸酯誘導的耐藥性完全沒有逆轉。下表概括了用本發(fā)明典型化合物試驗所得到的結果。實施例 劑量(mg/kg) 對硝酸甘油誘導的耐藥性的百分逆轉率61.0 6973.0 1400.3 461.0 45通過本領域已知的常規(guī)藥物學方法可將本發(fā)明化合物制備成適用藥用的藥物組合物；即通過制備包含本發(fā)明化合物或其藥學上可接受的鹽與一種或多種生理學上可接受的載體，輔助劑，稀釋劑或賦形劑的組合物，制備成用于口服給藥的固體或液體形式，用于非胃腸道給藥，表面給藥或汽霧劑吸入給藥，等。
口服給藥的固體組合物包括壓片劑，丸劑，粉末和顆粒。在這些固體組合物中，活性化合物與至少一種惰性稀釋劑如淀粉，碳酸鈣，蔗糖或乳糖混合。這些組合物也可含稀釋劑以外的其他物質，例如，潤滑劑，如硬脂酸鎂，滑石等。
口服給藥的液體組合物包括藥學上可接受的乳液，溶液，懸浮液，糖漿和酏劑，這些制劑中含有常用于本領域的惰性稀釋劑，如水和液體石蠟。除惰性稀釋劑以外，這些組合物也可含有輔助劑，如潤濕劑和懸浮劑，以及甜味劑，芳香劑，香料和防腐劑。按照本發(fā)明，用于口服的化合物也可包含在可吸收物質如明膠的膠囊中，該膠囊包含上述活性組分以及可含或可不含另外的稀釋劑或賦形劑。
用于本發(fā)明非胃腸道給藥的制劑包括無菌水，水-有機，以及有機溶液，懸浮液和乳液。有機溶劑或懸浮介質的例子包括丙二醇，聚乙二醇，植物油如橄欖油和注射用有機酯如油酸乙酯。這些組合物中也可含有輔助劑如穩(wěn)定劑，防腐劑，潤濕劑，乳化劑和分散劑。
本發(fā)明的表面給藥或氣霧劑吸入給藥制劑包括本發(fā)明化合物溶于或分散于藥學上可接受的賦形劑如水，含水醇，乙二醇，油溶液或油水乳液等中的制劑。
如果需要，可進一步將本發(fā)明化合物混入緩釋或靶向釋放系統(tǒng)如聚合物基質，脂質體，和微球體。
活性組分在這些組合物的百分比可有變化，以便獲得合適的劑量。對于特殊患者的給藥劑量可根據(jù)臨床醫(yī)生的判斷而有變化，所使用的判斷標準有給藥途徑，治療周期，病人的大小和身體條件，活性組分的效力和病人的反應。因此活性組分的有效劑量可在臨床醫(yī)生考慮了所有標準后，使用他對病人表現(xiàn)的最佳判斷，而容易地決定。
權利要求
1.下式化合物或其藥學上可接受的酸加成鹽和/或水合物
其中R1為叔丁基，或環(huán)戊基；R3為甲基，乙基，或苯甲基；X為-CH2-，-O-，或-NH-；以及R6為苯基(或由從一到三個，相同或不同，選自低級烷氧基，羥基，鹵素，羧基低級烷氧基，4-嗎啉基低級烷氧基，5-四唑基低級烷氧基，二低級烷基氨基，三氟甲基，硝基，氨基，低級烷基磺酰氨基，二低級烷基氨基-低級烷基苯基羰氧基，和1-咪唑基的取代基取代的苯基)；或者當X為-CH2-時，R6另外為2-，3-，或4-吡啶基，1-吡咯基，1-苯并咪唑基，1，2，3，4-四氫-2-異喹啉基，1，2，3，4-四氫-1-喹啉基，羥基，1-咪唑基，1-低級烷基-2，3，4或5-吡咯基，1-吡唑基，3-，4-，或5-異噁唑基(或在其任何可能的碳原子上由低級烷基取代的3，4，或5-異噁唑基)，2-噻吩基或3-噻吩基。
2.根據(jù)權利要求1的化合物，其中R6為苯基(或由從一到三個，相同或不同，選自低級烷氧基，羥基，羧基低級烷氧基，4-嗎啉基-低級烷氧基，5-四唑基-低級烷氧基，二低級烷基氨基，三氟甲基，硝基，氨基，低級烷基磺酰氨基，二低級烷基氨基-低級烷基苯基羰氧基，和1-咪唑基的取代基取代的苯基)；或者當X為-CH2-時，R6另外為2，3，或4-吡啶基，1-吡咯基，1-苯并咪唑基，1，2，3，4-四氫-2-異喹啉基，1，2，3，4-四氫-1-喹啉基，羥基，1-咪唑基，1-低級烷基-2-吡咯基，1-吡唑基，在其任何可能的碳原子上由低級烷基取代的4-異噁唑基)，2-噻吩基，或3-噻吩基。
3.根據(jù)權利要求2的化合物，其中R6為苯基(或從一到三個，相同或不同，選自甲氧基，羥基，羧基甲氧基，2-(4-嗎啉基)乙氧基，1-(5-四唑基)-甲氧基，二甲氨基，三氟甲基，硝基，氨基，甲基磺酰氨基，二乙氨基甲基苯基羰氧基，和1-咪唑基的取代基取代的苯基)；或者當X為-CH2-時，R6另外為2-，3-，或4-吡啶基，1-吡咯基，1-苯并咪唑基，1，2，3，4-四氫-2-異喹啉基，1，2，3，4-四氫-1-喹啉基，羥基，1-咪唑基，1-甲基-2-吡咯基，1-吡唑基，3，5-二甲基-4-異噁唑基)，2-噻吩基，或3-噻吩基。
4.根據(jù)權利要求3的化合物，其中R3為甲基，或乙基。
5.根據(jù)權利要求4的化合物，其中R7為環(huán)戊基，而R3為乙基。
6.根據(jù)權利要求5的化合物，其中選自1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(4-甲氧苯基甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(4-羥基苯基甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(苯甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，和1-環(huán)戊基-3-乙基-6-(4-氨基苯甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮。
7.一種藥物組合物，其中包括根據(jù)權利要求1的化合物以及藥學上可接受的載體，輔助劑，稀釋劑，或賦形劑。
8.一種藥物組合物，其中包括根據(jù)權利要求2的化合物以及藥學上可接受的載體，輔助劑，稀釋劑，或賦形劑。
9.一種藥物組合物，其中包括根據(jù)權利要求3的化合物以及藥學上可接受的載體，輔助劑，稀釋劑，或賦形劑。
10.一種藥物組合物，其中包括根據(jù)權利要求4的化合物以及藥學上可接受的載體，輔助劑，稀釋劑，或賦形劑。
11.一種藥物組合物，其中包括根據(jù)權利要求5的化合物以及藥學上可接受的載體，輔助劑，稀釋劑，或賦形劑。
12.一種藥物組合物，其中包括根據(jù)權利要求6的化合物以及藥學上可接受的載體，輔助劑，稀釋劑，或賦形劑。
13.一種抑制哺乳動物cGMP-磷酸二酯酶的方法，其中包括對該動物使用有效量的權利要求1的化合物。
14.一種抑制哺乳動物cGMP-磷酸二酯酶的方法，其中包括對該動物使用有效量的權利要求2的化合物。
15.一種抑制哺乳動物cGMP-磷酸二酯酶的方法，其中包括對該動物使用有效量的權利要求3的化合物。
16.一種抑制哺乳動物cGMP-磷酸二酯酶的方法，其中包括對該動物使用有效量的權利要求4的化合物。
17.一種抑制哺乳動物cGMP-磷酸二酯酶的方法，其中包括對該動物使用有效量的權利要求5的化合物。
18.一種抑制哺乳動物cGMP-磷酸二酯酶的方法，其中包括對該動物使用有效量的權利要求6的化合物。
19.一種治療哺乳動物心力衰竭和/或高血壓的方法，其中包括對該動物使用有效量的權利要求1的化合物。
20.一種治療哺乳動物心力衰竭和/或高血壓的方法，其中包括對該動物使用有效量的權利要求2的化合物。
21.一種治療哺乳動物心力衰竭和/或高血壓的方法，其中包括對該動物使用有效量的權利要求3的化合物。
22.一種治療哺乳動物心力衰竭和/或高血壓的方法，其中包括對該動物使用有效量的權利要求4的化合物。
23.一種治療哺乳動物心力衰竭和/或高血壓的方法，其中包括對該動物使用有效量的權利要求5的化合物。
24.一種治療哺乳動物心力衰竭和/或高血壓的方法，其中包括對該動物使用有效量的權利要求6的化合物。
25.一種逆轉或減輕哺乳動物在接受硝酸酯治療的過程中由硝酸酯誘導的耐藥性的方法，其中包括對該動物使用有效量的權利要求1的化合物。
26.一種逆轉或減輕哺乳動物在接受硝酸酯治療的過程中由硝酸酯誘導的耐藥性的方法，其中包括對該動物使用有效量的權利要求2的化合物。
27.一種逆轉或減輕哺乳動物在接受硝酸酯治療的過程中由硝酸酯誘導的耐藥性的方法，其中包括對該動物使用有效量的權利要求3的化合物。
28.一種逆轉或減輕哺乳動物在接受硝酸酯治療的過程中由硝酸酯誘導的耐藥性的方法，其中包括對該動物使用有效量的權利要求4的化合物。
29.一種逆轉或減輕哺乳動物在接受硝酸酯治療的過程中由硝酸酯誘導的耐藥性的方法，其中包括對該動物使用有效量的權利要求5的化合物。
30.一種逆轉或減輕哺乳動物在接受硝酸酯治療的過程中由硝酸酯誘導的耐藥性的方法，其中包括對該動物使用有效量的權利要求6的化合物。
31.一種治療哺乳動物心絞痛，充血性心臟病和心肌梗塞的方法，其中包括對該動物與硝酸酯結合使用有效量的權利要求1的化合物。
32.一種治療哺乳動物心絞痛，充血性心臟病和心肌梗塞的方法，其中包括對該動物與硝酸酯結合使用有效量的權利要求2的化合物。
33.一種治療哺乳動物心絞痛，充血性心臟病和心肌梗塞的方法，其中包括對該動物與硝酸酯結合使用有效量的權利要求3的化合物。
34.一種治療哺乳動物心絞痛，充血性心臟病和心肌梗塞的方法，其中包括對該動物與硝酸酯結合使用有效量的權利要求4的化合物。
35.一種治療哺乳動物心絞痛，充血性心臟病和心肌梗塞的方法，其中包括對該動物與硝酸酯結合使用有效量的權利要求5的化合物。
36.一種治療哺乳動物心絞痛，充血性心臟病和心肌梗塞的方法，其中包括對該動物與硝酸酯結合使用有效量的權利要求6的化合物。
全文摘要
6－取代的吡唑并[3,4－d]嘧啶－4－酮衍生物,含有它們的藥物組合物以及使用它們a)抑制c－GMP－磷酸二酯酶,b)治療心力衰竭和高血壓,c)逆轉或減輕硝酸酯誘導的耐藥性和d)治療心絞痛,充血性心臟病和心肌梗塞的方法。
文檔編號A61K31/505GK1177960SQ96192462
公開日1998年4月1日 申請日期1996年3月5日 優(yōu)先權日1996年3月5日
發(fā)明者E·R·巴肯, S·J·多姆, B·辛格 申請人:圣諾菲藥品有限公司