專利名稱：具有抗腫瘤活性的三核陽離子鉑絡(luò)合物及含有它們的藥用組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有抗腫瘤活性的鉑絡(luò)合物，其制備方法及含有它們的藥用組合物。
背景技術(shù)：
本領(lǐng)域已公知在癌癥的化學(xué)治療中使用鉑絡(luò)合物如順鉑和卡鉑。許多鉑絡(luò)合物如順鉑可用于治療睪丸，卵巢，頭和頸及小細(xì)胞肺癌。然而，用順鉑治療可產(chǎn)生嚴(yán)重的腎中毒性。臨床上進(jìn)一步的不足是在那些用該藥物難以治療的腫瘤中產(chǎn)生藥物耐受性的問題。
通常認(rèn)為鉑絡(luò)合物如順鉑通過與DNA的共價(jià)作用顯示其生物活性。尤其，順鉑誘導(dǎo)在DNA上形成一系列加合物，包括單齒配位體加合物，二齒配位體加合物，如GG或AG，和GNG鏈內(nèi)(intrastrand)交聯(lián)〔Reedijk等人，Structure and Bonding.(1987)67，53-89〕。順鉑也引起較小程度的鏈內(nèi)GG交聯(lián)和DNA-蛋白質(zhì)交聯(lián)〔Rahmouni等人，Biochemistry，(1987)26，7229-7234〕。這些DNA損傷引起構(gòu)象變化，這在DNA的彎曲和局部解開中可反映出來。已報(bào)道，這些DNA損傷抑制各種DNA聚合酶的活性〔Vallan等人，Nucl.Acids Res.，(1988)16，4407-4418；Pinto等人，Proc.Natl.Acad.Sci.(1985)82.4616-4619；和Gralla等人，Cancer Res.，(1987)47，5092-5096〕。也已表明，在相鄰的兩個(gè)鳥嘌呤堿之間的鏈內(nèi)交聯(lián)抑制RNA聚合酶的功能?！睱emaire等人，Proc.Natl.Acad.Sci.，(1991)88，1982-1985〕。因此，通常將順鉑的細(xì)胞毒性作用歸于這些DNA損傷的聯(lián)合作用，而不是任一特定損傷事件的結(jié)果。
在本領(lǐng)域中已知，單(鉑)和雙(鉑)絡(luò)合物分別含一個(gè)或兩個(gè)鉑原子(美國專利號4,225,529，4,250,189，4,533,502，4,565,884，4,571,335和4,797,393)。例如，單(鉑)絡(luò)合物包括單體氯胺正方平面形Pt(II)化合物，該化合物的配位數(shù)為4。在該化合物中的氯和氨基相對數(shù)可以變化并因此可通過通式來描述這些化合物〔PtClm(NH3)4－m〕(2－m)+因此，這些化合物的結(jié)構(gòu)可以從〔Pt(NH3)4〕2+(其中m＝0)到PtCl2-4(其中m＝4)變化。因?yàn)榕c氨相比，Cl是更不穩(wěn)定的取代基，因此認(rèn)為絡(luò)合物〔PtCl2(NH3)2〕和〔PtCl(NH3)3〕Cl分別為雙官能團(tuán)和單官能團(tuán)的，其中詞頭“雙”和“單”指離去配位體的數(shù)目。考慮到Pt(II)陽離子具有+2的形式電荷并且因此需要-2的負(fù)電荷以中和電荷，從而得到絡(luò)合物的電荷。例如，當(dāng)m＝0時(shí)，通過在配位中心(coordination sphere)外含兩個(gè)氯陰離子即可提供中和作用。
當(dāng)將NH3上的電子對給予Pt(II)原子上的空軌道時(shí)，可在鉑和中性配位體氨之間形成鍵。因此，在Pt和NH3之間沒有電子共用。由于不存在電子共用，中性配位體的數(shù)目不影響Pt配位中心的總電荷。因此，〔Pt(NH3)4〕2+在形式上為2+陽離子，為了中和該絡(luò)合物，需要具有凈負(fù)電荷為2-的非配位陰離子或反離子。例如，通過兩個(gè)一價(jià)負(fù)電荷的陰離子(例如NO-3，Cl-，PF-6，BF-4和具有通式RCOO-的單羧酸根)或一個(gè)二價(jià)負(fù)電荷陰離子(例如SO2-4，具有通式〔R(COO)2〕2-的二羧酸根)可提供中和作用。因此，由于同樣的原理，〔PtCl2(NH3)2〕為中性絡(luò)合物。
這些考慮不僅適用于氨，而且也適用于中性配位體如伯胺或仲胺。
可注意到，陰離子配位體如Cl-可以通過配位鍵結(jié)合(即形成Pt-Cl鍵)或者可以發(fā)揮配對陰離子的作用而無需形成共價(jià)鍵。包含在給定的鉑絡(luò)合物中的陰離子如Cl-的確切形式依賴于理論上的考慮(動(dòng)力學(xué)與熱力學(xué)的作用)和用于制備該絡(luò)合物的實(shí)際合成方法(例如反應(yīng)程度，酸性，特定陰離子的濃度如反應(yīng)混合物中所包含的Cl-的濃度)。這些考慮也適用于其它陰離子和中性配位體。
單鉑絡(luò)合物的總電荷依賴于結(jié)合到Pt(II)金屬上的中性和陰離子配位體相對數(shù)目的事實(shí)同樣適用于多核絡(luò)合物(它包含一個(gè)以上的Pt(II)配位中心)和含Pt(IV)的絡(luò)合物，其中鉑部分的氧化態(tài)為4+。例如，通過二胺橋鍵形成劑將兩當(dāng)量Pt(II)配位中心連接在一起形成的二核絡(luò)合物可以由如下通式表示〔(PtClm(NH3)3－m)(二胺)〕2(2－m)+因此，當(dāng)m＝2并且含有兩個(gè)雙官能團(tuán)配位中心時(shí)，該化合物為中性。相反，當(dāng)m＝1時(shí)，僅含單官能團(tuán)配位中心并且鉑部分形式電荷為2+，必須通過一個(gè)或多個(gè)凈電荷為2-的配對陰離子來平衡。
最近，在文獻(xiàn)〔Yun Qu等人，Inorg.Chem.，32，2591-2593(1993)〕中報(bào)道了三核鉑絡(luò)合物(也稱三鉑絡(luò)合物)的實(shí)例。所述化合物(其中配位體具有順式構(gòu)型)是中性絡(luò)合物或具有總電荷為2+的絡(luò)合物并且它們可通過下列通式來表示 其中X指不穩(wěn)定的配位體(如氯原子)并且R指亞烷基鏈。顯然，由上述說明可知，在絡(luò)合物具有的總電荷為+2的情況下，所述電荷位于帶有四個(gè)中性配位體的中心鉑原子上，而兩個(gè)外周鉑原子在形式上為中性并且如上述定義為雙官能團(tuán)的。該文獻(xiàn)說明所述絡(luò)合物可能是抗腫瘤劑，但沒有給出實(shí)驗(yàn)證據(jù)。
本發(fā)明公開本發(fā)明涉及三鉑絡(luò)合物，其中通過二胺鏈將三個(gè)鉑原子連接起來并且其中中心鉑原子配位四個(gè)中性配位體，而兩個(gè)外周鉑原子都配位三個(gè)中性配位體和一個(gè)電荷為-1的配位體。
因此，本發(fā)明化合物不同于現(xiàn)有技術(shù)的化合物，本發(fā)明化合物具有的總電荷為+4并且尤其是中心鉑原子具有的形式電荷為+2并且兩個(gè)外周鉑原子各自具有的形式電荷為+1。
而且，如上所述，兩個(gè)外周鉑原子是單官能團(tuán)的。
與現(xiàn)有技術(shù)所述三鉑絡(luò)合物的又一不同是在本發(fā)明化合物中，配位體是反式構(gòu)型。
具體來說，本發(fā)明涉及式(I)的三鉑絡(luò)合物 其中n為2-7(包括2和7)的整數(shù)；Z-m為選自氯，溴、碘、硝酸根、硫酸根(m＝2)的陰離子；m為整數(shù)1或2。
優(yōu)選的式(I)化合物為n為整數(shù)6的那些化合物。
尤其優(yōu)選的式(I)化合物為n為整數(shù)6，Z-m為氯或硝酸根陰離子并且m為1的那些化合物。
本發(fā)明也涉及制備式(I)化合物的方法。
制備式(I)化合物的方法如下流程式所示，包括從通過用二甲基甲酰胺取代氯原子預(yù)先激活的反式鉑開始，通過使之與式(II)胺反應(yīng)來合成中間體(III) 其中P為適宜的常規(guī)保護(hù)基團(tuán)如叔丁氧基羰基或?qū)籽趸S氧基羰基，n如上定義。
保護(hù)基P斷裂后，式(III)中間體產(chǎn)生式(IV)中間體 其中n如上定義，Q-m為反離子，它依賴于基團(tuán)P的斷裂條件。例如，如果P為叔丁氧基羰基，Q-m可為氯或三氟乙酸根陰離子。
然后，通過在Q-m離子和硝酸根離子之間的交換反應(yīng)將中間體(IV)轉(zhuǎn)變成中間體(V) 其中n如上定義。當(dāng)Q-m為氯陰離子時(shí)，可在硝酸銀存在下，在溶劑如水或醇(甲醇，乙醇)中進(jìn)行所述交換反應(yīng)。
然后，將中間體(V)與0.5摩爾的反式鉑反應(yīng)，其中用2分子二甲基甲酰胺取代二個(gè)氯原子而預(yù)先將反式鉑激活，得到式(I)化合物 其中Z-m為硝酸根陰離子。然后通過文獻(xiàn)中大量報(bào)道的常規(guī)交換反應(yīng)，如用堿金屬或堿土金屬的鹵化物或硫酸鹽處理，可將所述化合物轉(zhuǎn)變?yōu)槠渲衂-m為鹵化物或硫酸根的式(I)化合物。或者，通過用硫酸銀處理，從其中Z-m＝鹵化物的相應(yīng)的式(I)化合物可得到其中Z-m為硫酸根陰離子的式(I)化合物。
從其中Z-m＝硝酸根的式(I)化合物制備其中Z-m＝氯化物的式(I)化合物的優(yōu)選方法為在0℃-50溫度范圍內(nèi)與過量摩爾的鹽酸反應(yīng)。
制備式(I)化合物的另一方法是首先將2摩爾式(II)胺與反式鉑反應(yīng)，其中通過用2分子二甲基甲酰胺取代兩個(gè)氯原子而預(yù)先將反式鉑激活，得到式(VI)中間體 其中P如上定義?；鶊F(tuán)P的斷裂產(chǎn)生式(VII)中間體，其中Q-m如上定義，隨后將其轉(zhuǎn)變?yōu)槭?VIII)中間體 通過在Q-m離子和硝酸根離子之間的交換反應(yīng)進(jìn)行所述的轉(zhuǎn)變。當(dāng)Q-m為氯陰離子時(shí)，可在硝酸銀存在下，并且在溶劑如水或醇(甲醇，乙醇)中進(jìn)行所述交換反應(yīng)。
然后，將中間體(VIII)與2摩爾反式鉑反應(yīng)，其中通過用二甲基甲酰胺取代一個(gè)氯原子而預(yù)先將反式鉑激活，得到式(I)化合物 其中，Z-m為硝酸根陰離子。然后，通過文獻(xiàn)在大量報(bào)道的常規(guī)交換反應(yīng)，如用堿金屬或堿土金屬的鹵化物或硫酸鹽處理，可將所述化合物轉(zhuǎn)變成其中Z-m為鹵化物或硫酸根的式(I)化合物。或者，通過用硫酸銀處理，可從其中Z-m為鹵化物的相應(yīng)的式(I)化合物得到其中Z-m為硫酸根陰離子的式(I)化合物。
從其中Z-m＝硝酸根的化合物(I)制備其中Z-m＝氯化物的化合物(I)的優(yōu)選方法為在0℃-50℃的溫度范圍內(nèi)與過量摩爾的鹽酸反應(yīng)。
除去基團(tuán)P的可能方法包括用無機(jī)酸(如含水的鹽酸或在醇或醚溶液中)或有機(jī)酸(如三氟乙酸)處理。當(dāng)P為叔丁氧基羰基時(shí)，優(yōu)選的斷裂條件是使用在醇溶液中的氯化氫。如上所述，在這種情況下，反離子Q-m將為氯離子。
通常，本發(fā)明化合物在水中，在生理和在能與水混合的溶劑中，具有良好的溶解。
本發(fā)明化合物不僅具有顯著的抗腫瘤活性，而且具有較低的毒性，因此，其治療指數(shù)是相當(dāng)有利的。
而且，本發(fā)明三鉑絡(luò)合物的高水溶性使得制備非腸道和口服藥物劑型更容易。
對各種腫瘤細(xì)胞系，其中包括鼠白血病L-1210，人卵巢癌A2780或各自的耐順鉑的亞系L-1210/CDDP和A2780/CDDP，在體外試驗(yàn)本發(fā)明化合物的細(xì)胞毒性作用。在細(xì)胞系A(chǔ)2780上的試驗(yàn)已被確立為用于評估鉑絡(luò)合物作為抗腫瘤劑的方法。而且，在體內(nèi)試驗(yàn)中試驗(yàn)本發(fā)明化合物，其中將L-1210腫瘤細(xì)胞在小鼠腹膜內(nèi)孵育并且在腫瘤細(xì)胞孵育后24，120和216小時(shí)，通過腹膜內(nèi)給予該化合物。在上述試驗(yàn)?zāi)Ｐ椭?，本發(fā)明化合物顯示較高的抗腫瘤作用。
當(dāng)給予可以以每平方米體表0.1mg-1.2g的劑量范圍用鉑絡(luò)合物治療的患腫瘤的人或動(dòng)物式(I)化合物時(shí)，該化合物可引起所述腫瘤退化。
因此，本發(fā)明的另一目的是利用式(I)化合物來制備用于治療腫瘤的藥物。
按照常規(guī)方法，由有經(jīng)驗(yàn)的醫(yī)生可確定本發(fā)明化合物的有效劑量。Freirech，E.J.等人在Quantitative Comparison of Toxicity of AnticancerAgents in Mouse，Rat，Hamster，Dog，Monkey and Man，CancerChemother.Rep.，50，N.4，219-244(1966)中描述了各個(gè)種類和大小的動(dòng)物所用劑量和人類所用劑量(以mg/m2體表為單位)之間的關(guān)系。
然而，通常病人接受0.1-1200mg/kg體重劑量的絡(luò)合物，有經(jīng)驗(yàn)的醫(yī)生對依賴各種因素變化的劑量方案是熟知。
有時(shí)，將本發(fā)明鉑絡(luò)合物與一種或多種促進(jìn)抗腫瘤活性或減輕不需要的鉑絡(luò)合物副作用的試劑一起給予是更有利的。
例如，如GB2174905和US4,871,528中所公開的，可以將本發(fā)明鉑絡(luò)合物與還原的谷胱甘肽一起給予。
而且，將本發(fā)明鉑絡(luò)合物與其它具有抗腫瘤活性的鉑絡(luò)合物聯(lián)合給予可能是有利的。
本發(fā)明進(jìn)一步的目的是提供含至少一種式(I)化合物和具有抗腫瘤活性的鉑絡(luò)合物的藥用組合物。
可以用本發(fā)明鉑絡(luò)合物治療的病人所患的腫瘤為那些已知用順鉑易于治療的腫瘤。對于某些耐順鉑的腫瘤，本發(fā)明絡(luò)合物也具有活性。
通常，本發(fā)明化合物可用于治療使用順鉑治療的相同的病理形式。這包括腫瘤的治療，放射致敏或促進(jìn)〔Douple等人，Cisplatin CurrentStatus and Developments，Ed.A.W.Prestayk等人，AcademicPress，125(1980)；Douple等人，Platinum Metals Res.，29，118(1985)〕和寄生病如非洲錐蟲病的治療〔Farrell等人，Biochem.Pharmacol.，33，961(1984)〕。
如有經(jīng)驗(yàn)的醫(yī)生公知的那樣，根據(jù)要治療腫瘤的類型和病人的狀況，可適當(dāng)?shù)馗淖冎委煼桨浮?br> 本發(fā)明進(jìn)一步的目的是提供含有與常規(guī)載體和賦形劑混合的治療有效量的至少一種式(I)化合物的藥用組合物。
優(yōu)選以適宜濃度(0.1-0.9mg/ml)含或不含氯化鈉的無菌水溶液形式給予本發(fā)明化合物。盡管在特殊狀態(tài)下可以使用其它給藥形式，但優(yōu)選通過靜脈內(nèi)或動(dòng)脈內(nèi)給予該溶液。
如上定義用于非腸道給藥的藥用組合物包括無菌的鹽水溶液，或供臨時(shí)制備溶液用的無菌粉劑，及供肌內(nèi)或腹膜內(nèi)給藥的油狀制劑。
其它有用的藥物組合物可以為糖漿劑或類似的液體劑型以及固體劑型如片劑，膠囊劑等。
按照已知的方法，如在Remington’s Pharmaceutical SciencesHandbook，XVII Ed.，Mack Pub.，N.Y.，U.S.A.中報(bào)道的那些方法，可制備本發(fā)明藥用組合物。
下列實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明。
制備1從N-BOC己二胺的鹽酸鹽(市售產(chǎn)品)開始制備N-BOC己二胺。
將2.1g N-BOC己二胺鹽酸鹽溶解在乙醚(20ml)中并在攪拌下，用16ml 1N氫氧化鈉水溶液處理。
然后，用鹽水洗滌有機(jī)相，經(jīng)硫酸鈉干燥并在減壓下蒸發(fā)掉溶劑，得到具有理論產(chǎn)率的N-BOC己二胺游離堿。
實(shí)施例1制備t-〔PtCl(NH3)2H2N-(CH2)6-NH-BOC〕+NO3-將2g反式鉑溶解在133ml無水二甲基甲酰胺(DMF)中并一次加入1.13g硝酸銀。在攪拌下，將反應(yīng)混合物避光18小時(shí)。然后，過濾掉沉淀的氯化銀，將澄清的濾液冷卻至-20℃并加入N-BOC-1，6-己二胺(1.36g)在40ml無水DMF中的溶液，加入過程持續(xù)約30分鐘。在攪拌下，將溶液保持在-20℃下3小時(shí)并在室溫下保持1小時(shí)。然后在減壓下蒸掉溶劑并保持溶液的溫度不超過40℃，將殘余物溶解在200ml乙醚中，在攪拌下保持20分鐘，然后過濾。將得到的固體溶解在200ml甲醇中，并在攪拌下保持15小時(shí)以便沉淀出任何微量的反式鉑。將析出的反式鉑濾掉并將溶液用活性炭(1g)處理，再過濾并且最后在減壓下蒸發(fā)掉溶劑。通過在攪拌下，將殘余物懸浮在丙酮(100ml)中30分鐘來純化殘余物。過濾后，得到2.3g產(chǎn)品。
元素分析(計(jì)算值/實(shí)測值％)C24.33/24.05；H5.57/5.64；N12.90/12.84；Cl6.53/6.40；Pt35.93/36.06。195Pt-NMR(在DMF/d7-DMF中)-2433ppm。
實(shí)施例2制備t-〔PtCl(NH3)2H2N-(CH2)6-NH3〕2+2NO3-將21ml 6.5M氯化氫在乙醇中的溶液加入到1.5gt-〔PtCl(NH3)2H2N-(CH2)6-NH-BOC〕+NO3-在150ml甲醇的溶液中。在室溫下，在攪拌下，將反應(yīng)混合物保持24小時(shí)，然后將固體過濾，在過濾器上用甲醇和乙醚洗滌并最后干燥。
將得到的固體溶解在180ml甲醇中并加入硝酸銀(0.825g)在45ml甲醇中的溶液。在室溫?cái)嚢柘?，將反?yīng)混合物保持30分鐘，濾掉氯化銀并將澄清的濾液蒸發(fā)至干。將殘余物溶解在丙酮中，在攪拌下保持15分鐘，過濾并干燥，得到0.925g產(chǎn)品。
元素分析(計(jì)算值/實(shí)測值％)C14.65/14.19；H4.71/4.66；N14.24/16.62；Cl7.21/6.91；Pt39.67/36.10。1955Pt-NMR(在DMF/d7-DMF中)-2433ppm。
實(shí)施例3制備t，t，t-〔PtCl(NH3)2H2N-(CH2)6-NH2-Pt(NH3)2H2N-(CH2)6-NH2PtCl(NH3)2〕4+4NO3-將61mg反式鉑懸浮在2ml無水二甲基甲酰胺中并加入69.1mg硝酸銀。在65℃攪拌下，將混合物保持6小時(shí)，然后將其冷卻至室溫并將氯化銀沉淀過濾掉。往濾液中加入t-〔PtCl(NH3)2H2N-(CH2)6-NH3〕2+2NO3-(200mg)在2ml二甲基甲酰胺中的溶液和0.4ml 1N氫氧化鈉在甲醇中的溶液。在室溫下，將得到的反應(yīng)混合物保持過夜，然后用乙醚稀釋直至析出固體，過濾，用乙醚洗滌，再用丙酮洗滌，最后干燥，得到220mg產(chǎn)品。
將所述產(chǎn)品懸浮在DMF(5ml)中并在攪拌下保持10分鐘，然后過濾回收并再懸浮于丙酮(10ml)中，在攪拌下再保持30分鐘。過濾并干燥后，得到150ml產(chǎn)品。元素分析(計(jì)算值/實(shí)測值％)C11.63/11.70；H4.07/3.95；N15.83/15.20；Cl5.72/4.60；Pt47.24/47.10。195Pt-NMR(在0.3％NaCl水溶液中)-2416ppm；-2667ppm。1H-NMR(200Mhz，在D2O中)1.35ppm(m，8H)；1.68ppm(m，8H)；2.65ppm(brm，8H)。
實(shí)施例4制備t-〔BOC-NH-(CH2)6-NH2-Pt(NH3)2H2N-(CH2)6-NH-BOC〕2+2NO3-將1.16g硝酸銀加入1.028g反式鉑在35ml無水二甲基甲酰胺的懸浮液中。將反應(yīng)混合物加熱至60℃，避光5小時(shí)，然后濾掉氯化銀沉淀。之后，加入N-BOC-1，6-己二胺(1.48g)在5ml二甲基甲酰胺中的溶液并在室溫下，將得到的反應(yīng)混合物保持過夜。通過用300ml乙醚稀釋，析出白色固體，過濾，再溶解于甲醇中并通過0.2μm的Millex過濾器過濾以便除去微量的銀鹽。然后用乙醚稀釋甲醇溶液。白色固體結(jié)晶出來，過濾并干燥，得到1.94g產(chǎn)品。元素分析(計(jì)算值/實(shí)測值％)C33.63/33.44；H6.93/7.00；N14.26/14.30；Pt24.83/25.06。195Pt-NMR(在DMF/d7-DMF中)-2687ppm。
實(shí)施例5制備t-〔NH3-(CH2)6-NH2-Pt(NH3)2H2N-(CH2)6-NH3〕4+4Cl將500mg t-〔BOC-NH-(CH2)6-NH2-Pt(NH3)2H2N-(CH2)6-NH-BOC〕2+2NO3-溶解在50ml甲醇中并加入5ml 6.5M氯化氫在乙醇中的溶液。在室溫?cái)嚢柘聦⒎磻?yīng)混合物保持42小時(shí)，然后將固體過濾并用乙醚洗滌，得到340mg產(chǎn)品。
元素分析(計(jì)算值/實(shí)測值％)C23.81/23.14；H6.66/6.73；N13.88/13.51；Cl23.42/22.03；Pt32.23/31.68。195Pt-NMR(在水中)-2674ppm。
實(shí)施例6制備t，t，t-〔PtCl(NH3)2H2N-(CH2)6-NH2-Pt(NH3)2H2N-(CH2)6-NH2PtCl(NH3)2〕4+4NO3將200mg t-〔NH3-(CH2)6-NH2-Pt(NH3)2H2N-(CH2)6-NH3〕4+4Cl-溶解在10ml蒸餾水中并用224mg硝酸銀處理。在室溫?cái)嚢柘?，將得到的懸浮液保?0分鐘，然后過濾除掉氯化銀沉淀。將濾液濃縮近干，然后用丙酮稀釋。白色固體析出，過濾，用丙酮洗滌并干燥，得到204mg t-〔NH3-(CH2)6-NH2-Pt(NH3)2H2N-(CH2)6-NH3〕4+4NO3-。
用98mg硝酸銀處理172mg反式鉑在21.5ml無水二甲基甲酰胺中的溶液。在室溫?cái)嚢柘?，將得到的懸浮液保持過夜，避光，然后濾掉氯化銀沉淀。用0.57ml 1N氫氧化鈉在甲醇中的溶液處理204mgt-〔NH3-(CH2)6-NH2-Pt(NH3)2H2N-(CH2)6-NH3〕4+4NO3-在7ml二甲基甲酰胺中的溶液，然后在室溫下，將所述溶液加到先前含用二甲基甲酰胺激活的反式鉑的濾液中。6小時(shí)后，通過0.2μm的Millex過濾器將溶液過濾以便除去任何微量的銀鹽，然后用乙醚稀釋濾液。過濾分離沉淀的固體，得到326mg產(chǎn)品。195Pt-NMR(在0.3％NaCl水溶液中)-2416ppm；-2667ppm。1H-NMR(200Mhz，在D2O中)1.35ppm(m，8H)；1.68ppm(m，8H)；2.65ppm(brm，8H)。
實(shí)施例7制備t，t，t-〔PtCl(NH3)2H2N-(CH2)6-NH2-Pt(NH3)2H2N-(CH2)6-NH2PtCl(NH3)2〕4+4Cl-將326mg t，t，t-〔PtCl(NH3)2H2N-(CH2)6-NH2-Pt(NH3)2H2N-(CH2)6-NH2PtCl(NH3)2〕4+4NO3-溶解在鹽水溶液(0.9％氯化鈉)中，然后，通過0.2μmMillex過濾器將溶液過濾并濃縮直至析出白色固體，過濾，得到187mg產(chǎn)品。
元素分析(計(jì)算值/實(shí)測值％)C12.73/12.60；H4.45/4.45；N12.37/12.85；Cl18.78/14.77；Pt51.68/48.33。195Pt-NMR(在0.3％NaCl水溶液中)-2416ppm；-2671ppm。1H-NMR(200Mhz，在D2O中)1.40ppm(m，8H)；1.70ppm(m，8H)；2.70ppm(brm，8H)。
實(shí)施例8按照實(shí)施例1，2和3所描述的程序，或者實(shí)施例4，5和6中所描述的程序，以適宜的單保護(hù)二胺開始，得到下列反式三鉑絡(luò)合物[PtCl(NH3)2H2N-(CH2)5-NH2-Pt(NH3)2H2N-(CH2)5-NH2PtCl(NH3)2]4+4NO3-；[PtCl(NH3)2H2N-(CH2)4-NH2-Pt(NH3)2H2N-(CH2)4-NH2PtCl(NH3)2]4+4NO3-；[PtCl(NH3)2H2N-(CH2)3-NH2-Pt(NH3)2H2N-(CH2)3-NH2PtCl(NH3)2]4+4NO3-；[PtCl(NH3)2H2N-(CH2)2-NH2-Pt(NH3)2H2N-(CH2)2-NH2PtCl(NH3)2]4+4NO3-；[PtCl(NH3)2H2N-(CH2)7-NH2-Pt(NH3)2H2N-(CH2)7-NH2PtCl(NH3)2]4+4NO3-.195Pt-NMR(在0.3％NaCl水溶液中)-2422ppm；-2670ppm。
實(shí)施例9按照實(shí)施例7中所描述的方法，從實(shí)施例8得到的反式三鉑絡(luò)合物開始，制備下列化合物[PtCl(NH3)2H2N-(CH2)5-NH2-Pt(NH3)2H2N-(CH2)5-NH2PtCl(NH3)2]4+4Cl-；[PtCl(NH3)2H2N-(CH2)4-NH2-Pt(NH3)2H2N-(CH2)4-NH2ptCl(NH3)2〕4+4Cl-；[PtCl(NH3)2H2N-(CH2)3-NH2-Pt(NH3)2H2N-(CH2)3-NH2PtCl(NH3)2〕4+4Cl-；[PtCl(NH3)2H2N-(CH2)2-NH2-Pt(NH3)2H2N-(CH2)2-NH2PtCl(NH3)2]4+4C1-；[PtCl(NH3)2H2N-(CH2)7-NH2-Pt(NH3)2H2N-(CH2)7-NH2PtCl(NH3)2]4+4C1-.1H-NMR(200Mhz，在D2O中)1.39ppm(s，12H)；1.68ppm(brm，8H)；2.67ppm(brm，8H)。
實(shí)施例10制備t，t，t-〔PtCl(NH3)2H2N-(CH2)6-NH2-Pt(NH3)2H2N-(CH2)6-NH2-PtCl(NH3)2〕4+4Cl-在氮?dú)夥障?，制備t，t，t-〔PtCl(NH3)2H2N-(CH2)6-NH2-Pt(NH3)2H2N-(CH2)6-NH2-PtCl(NH3)2〕4+4NO3-(1.3g)在0.1N鹽酸水溶液(65ml)中的懸浮液，然后在54℃下溶解。在該溫度下1小時(shí)后，將溶液在20℃下冷卻并在玻璃纖維過濾器上過濾以便除去機(jī)械雜質(zhì)向澄清的溶液中加入7.8ml 4N鹽酸水溶液并且在幾分鐘內(nèi)開始沉淀。在20℃下，將懸浮液攪拌30分鐘，在10℃下再攪拌30分鐘。然后在Buckner漏斗上過濾沉淀物并用0.4N鹽酸水溶液(0.5ml)和丙酮洗滌。在40℃真空下，將收集到的白色固體干燥過夜，得到1.03g產(chǎn)品。
元素分析(計(jì)算值/實(shí)測值％)×2H2OC12.33/12.34；H4.65/4.73；N11.98/12.05；Cl18.21/17.55；Pt50.07/49.97。
權(quán)利要求
1.通式(I)的化合物 其中n為2-7(包括2和7在內(nèi))的整數(shù)；Z-m為選自氯，溴，碘，硝酸根，硫酸根的陰離子；m為整數(shù)1或2。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中n為整數(shù)6。
3.根據(jù)權(quán)利要求1-2的化合物，其中Z選自氯離子或硝酸根并且m為1。
4.根據(jù)上述權(quán)利要求的化合物，它選自[PtCl(NH3)2H2N-(CH2)6-NH2-Pt(NH3)2H2N-(CH2)6-NH2PtCl(NH3)2]4+4NO3-；[PtCl(NH3)2H2N-(CH2)6-NH2-Pt(NH3)2H2N-(CH2)6-NH2PtCl(NH3)2]4+4Cl-；[PtCl(NH3)2H2N-(CH2)6-NH2-Pt(NH3)2H2N-(CH2)6-NH2PtCl(NH3)2]4+2SO42-。
5.一種制備權(quán)利要求1-4的化合物的方法，它包括下列步驟a)通過在硝酸銀存在下，用二甲基甲酰胺取代氯原子而激活反式鉑；b)激活的中間體與式(II)的二胺反應(yīng)H2N-(CH2)n-NH-P(II)其中n為2-7(包括2和7)的整數(shù)，P為適宜的常規(guī)保護(hù)基，在將所述保護(hù)基團(tuán)P斷裂后，得到式(IV)中間體 其中n如上定義，m為整數(shù)1或2并且Q-m為根據(jù)斷裂基團(tuán)P的條件產(chǎn)生的反離子；c)在溶劑如水或醇中，在Q-m陰離子和NO3-陰離子之間進(jìn)行交換反應(yīng)，得到式(V)中間體 其中n如上定義；d)將式(V)中間體與反式鉑以1∶0.5的摩爾比率反應(yīng)，其中反式鉑預(yù)先在硝酸銀存在下，通過用2分子二甲基甲酰胺取代兩個(gè)氯原子而被激活，得到式(I)化合物，其中n如上定義，m為1并且Z-m為陰離子硝酸根；并且，如果需要，e)將所述硝酸根陰離子和另一種Z-m陰離子進(jìn)行交換反應(yīng)，其中Z-m如上定義。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的方法，其中所述基團(tuán)P選自叔丁氧基羰基和對甲氧基芐氧基羰基。
7.根據(jù)權(quán)利要求5的方法，其中所述基團(tuán)P為叔丁氧基羰基并且用鹽酸斷裂所述基團(tuán)。
8.根據(jù)權(quán)利要求5的方法，其中在步驟e)中，首先將所述陰離子硝酸根與Z-m氯陰離子交換，然后，將氯陰離子與硫酸根陰離子交換，在該方法中，通過用硫酸銀處理，在所述氯陰離子和所述硫酸根之間發(fā)生交換。
9.根據(jù)權(quán)利要求5的方法，其中在步驟e)中，通過在0℃-50℃范圍內(nèi)的溫度下，與過量摩爾的鹽酸水溶液反應(yīng)將所述硝酸根陰離子與氯陰離子交換。
10.一種制備權(quán)利要求1-4的化合物的方法，它包括下列步驟a)將式(II)胺與反式鉑以2∶1的摩爾比率反應(yīng)H2N-(CH2)n-NH-P(II)其中n為2-7(包括2和7在內(nèi))的整數(shù)，并且P為適宜的常規(guī)保護(hù)基，反式鉑已預(yù)先在硝酸銀存在下，通過用2分子二甲基甲酰胺取代兩個(gè)氯原子而被激活，得到式(VI)中間體 其中n和P如上定義；b)將保護(hù)基團(tuán)P斷裂，得到式(VII)中間體 其中n如上定義并且Q-m為斷裂反應(yīng)產(chǎn)生的陰離子；c)在Q-m陰離子和NO3-陰離子之間進(jìn)行交換反應(yīng)，得到相應(yīng)的式(VIII)硝酸鹽 d)將式(VIII)中間體與反式鉑以1∶2的摩爾比率反應(yīng)，其中反式鉑已預(yù)先在硝酸銀存在下，通過用1分子二甲基甲酰胺取代一個(gè)氯原子而被激活，得到式(I)化合物 其中n如上定義，m為1并且Z-m為硝酸根陰離子，并且，如果需要e)在所述硝酸根陰離子和另一Z-m陰離子之間進(jìn)行交換反應(yīng)，其中Z-m如上定義。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的方法，其中所述基團(tuán)P選自叔丁氧基羰基和對甲氧基芐氧基羰基。
12.根據(jù)權(quán)利要求10的方法，其中所述基團(tuán)P為叔丁氧基羰基并且用鹽酸斷裂所述基團(tuán)。
13.根據(jù)權(quán)利要求10的方法，其中在步驟e)中，首先將所述硝酸根陰離子與Z-m氯陰離子交換，然后將氯陰離子與硫酸根陰離子交換，在該方法中，通過用硫酸銀處理，在所述氯陰離子和所述硫酸根之間發(fā)生交換。
14.根據(jù)權(quán)利要求10的方法，其中在步驟e)中，通過在0℃-50℃范圍內(nèi)的溫度下，與過量摩爾的鹽酸水溶液反應(yīng)，將所述陰離子硝酸根與氯陰離子交換。
15.權(quán)利要求1-4的化合物在制備用于治療腫瘤的藥物中的用途。
16.藥物組合物，含有與常規(guī)載體和賦形劑混合的治療有效量的至少一種權(quán)利要求1-4的化合物作為活性組分。
17.根據(jù)權(quán)利要求16的組合物，其中所述有效量是指給予0.1-1200mg/kg體重劑量的活性組分。
18.根據(jù)權(quán)利要求16-17的組合物，用于非腸道給藥。
19.根據(jù)權(quán)利要求16-18的藥物組合物，含有至少一種權(quán)利要求1-4的化合物和具有抗腫瘤活性的鉑絡(luò)合物。
全文摘要
通式(I)的化合物其中n為2-7(包括2和7在內(nèi))的整數(shù)；Z
文檔編號A61P35/00GK1145624SQ95192295
公開日1997年3月19日 申請日期1995年3月22日 優(yōu)先權(quán)日1994年3月31日
發(fā)明者M·瓦塞奇, M·康蒂, L·德·格里克, C·布加蒂, E·門塔, F·C·朱里亞尼, C·曼佐蒂, S·斯皮尼利, N·法里爾 申請人:意大利柏林格·曼海姆股份公司