本發(fā)明屬于軟組織填充材料，具體涉及一種脫細(xì)胞基質(zhì)微粒凍干植入劑及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、膠原蛋白是一種在結(jié)締組織與彈性蛋白及多糖蛋白相互交織形成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，產(chǎn)生一定的機(jī)械強(qiáng)度，是承托人體曲線，體現(xiàn)挺拔體態(tài)的物質(zhì)基礎(chǔ)。膠原蛋白可以保持血管壁彈性，防止血管破裂，栓塞，提高關(guān)節(jié)、軟骨以及韌帶的潤(rùn)滑，減輕關(guān)節(jié)僵硬、酸痛、積水等癥狀。而人體皮膚中真皮的構(gòu)成約有70％是膠原蛋白，隨著年齡增長(zhǎng)，人體膠原蛋白含量會(huì)逐漸流失，肌膚就會(huì)失去彈性并變薄老化，同期會(huì)導(dǎo)致如皺紋、老化、松垮、色斑等狀況。目前通過膠原蛋白注射，利用非手術(shù)方式將微量的膠原蛋白植入皮下后能夠刺激人體自身纖維細(xì)胞和膠原蛋白再生，短時(shí)間內(nèi)可精確消除面部密集細(xì)小皺紋，如眉間、前額、眼外眥部、口角、頰部、頸部等皺紋，使皮膚光澤有彈性達(dá)到抗衰老效果。再生材料在注射過程中的補(bǔ)充作用，主要包括膠原蛋白(類人、豬源)填充劑與刺激膠原再生材料兩種。

2、脫細(xì)胞基質(zhì)是一種天然的細(xì)胞外基質(zhì)生物材料，具有多種膠原蛋白組分，以ⅰ型膠原蛋白為主，還含有一定量的生物活性成分及因子，如fn、ln等多糖蛋白以及vegf、tgf-β1、fgf，egf等因子，對(duì)于調(diào)節(jié)細(xì)胞的粘附、遷移、增殖和分化具有重要作用，同時(shí)可以促進(jìn)組織的修復(fù)再生。脫細(xì)胞基質(zhì)處理得到的脫細(xì)胞基質(zhì)微粒對(duì)細(xì)胞親和力高，生物學(xué)性能優(yōu)越，可誘導(dǎo)組織再生，用于各部位軟組織的缺損修復(fù)。在臨床研究中，脫細(xì)胞基質(zhì)微粒的軟組織填充修復(fù)材料與注射劑混合，應(yīng)用于軟組織缺損的修復(fù)，如皮膚組織損傷修復(fù)、口腔頜面部軟組織的填充修復(fù)等，既起到結(jié)構(gòu)重塑和容積填充的支撐作用，更能誘導(dǎo)受術(shù)者本身結(jié)構(gòu)的構(gòu)建，逐漸生成的新生結(jié)構(gòu)將與四周正常組織共同協(xié)調(diào)，從而起到矯形，恢復(fù)正常外觀的作用。

3、現(xiàn)有方法制備的脫細(xì)胞基質(zhì)微?？繂渭冄心コ煞哿娇赡苓_(dá)不到注射級(jí)要求，復(fù)溶分散過程中還會(huì)發(fā)生團(tuán)聚、沉降現(xiàn)象導(dǎo)致分布不均勻及注射困難的問題；通過加入助懸劑的方式制備的脫細(xì)胞基質(zhì)微粒產(chǎn)品凍干后外觀不規(guī)則，分裝后形態(tài)不佳，難以產(chǎn)品化，復(fù)溶分散性不穩(wěn)定；通過水油乳化的方式制備的脫細(xì)胞基質(zhì)微球，油相反應(yīng)體系多為機(jī)試劑，且大都為有毒副作用的成分，微球成球過程中會(huì)將有害成分引入內(nèi)部，且溶殘去除困難，影響終產(chǎn)品安全性。

4、因此，亟需研究出產(chǎn)品粒徑穩(wěn)定，凍干成型性好，易復(fù)溶、分散，安全可靠，并且可滿足注射要求的脫細(xì)胞基質(zhì)微粒。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于提供一種脫細(xì)胞基質(zhì)微粒凍干植入劑及其制備方法和應(yīng)用。

2、本發(fā)明提供了一種脫細(xì)胞基質(zhì)微粒凍干植入劑，其特征在于，所述脫細(xì)胞基質(zhì)微粒凍干植入劑由脫細(xì)胞基質(zhì)、助懸劑和凍干保護(hù)劑組成，其中脫細(xì)胞基質(zhì)、助懸劑和凍干保護(hù)劑的質(zhì)量比為0.5～10：0.5～10：0.5～6；脫細(xì)胞基質(zhì)微粒凍干植入劑的粒徑為10μm～1000μm。

3、進(jìn)一步地，所述脫細(xì)胞基質(zhì)、助懸劑和凍干保護(hù)劑的質(zhì)量比為2～8:1～4:2～6；

4、所述脫細(xì)胞基質(zhì)微粒凍干植入劑粒徑為30μm～800μm；

5、所述助懸劑選自透明質(zhì)酸、羧甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、膠原、明膠、甘露醇、阿爾法環(huán)糊精、羥乙甲纖維素、甘油、甘油三油酸酯、海藻酸鈉中的任意一種或兩種以上；

6、所述凍干保護(hù)劑選自蔗糖、海藻糖、枸櫞酸、乳糖、海藻酸、聚電解質(zhì)溶液中的任意一種或兩種以上；

7、所述聚電解質(zhì)溶液中的聚電解質(zhì)為氧化纖維素、羧甲基甲殼素、羧甲基殼聚糖、硫酸軟骨素、海藻糖、透明質(zhì)酸、羧甲基纖維素鈉、聚谷氨酸中的一種或兩種以上；

8、所述脫細(xì)胞基質(zhì)由脫細(xì)胞基質(zhì)膜制備得到，所述脫細(xì)胞基質(zhì)膜為脫細(xì)胞基質(zhì)鮮膜或脫細(xì)胞基質(zhì)凍干膜。

9、進(jìn)一步地，所述脫細(xì)胞基質(zhì)微粒凍干植入劑的粒徑為30μm～300μm。

10、進(jìn)一步地，所述的脫細(xì)胞基質(zhì)、助懸劑和凍干保護(hù)劑的質(zhì)量比為2～6:1～3:1～4，優(yōu)選為2～5:2～3:3～4。

11、進(jìn)一步地，所述脫細(xì)胞基膜為經(jīng)過消毒、脫脂、胰酶消化、脫細(xì)胞處理的脫細(xì)胞小腸黏膜下層鮮膜或其凍干膜、脫細(xì)胞真皮鮮膜或其凍干膜、脫細(xì)胞脂肪組織鮮膜或其凍干膜、脫細(xì)胞膀胱鮮膜或其凍干膜、脫細(xì)胞羊膜鮮膜或其凍干膜中的任意一種或兩種以上。

12、進(jìn)一步地，所述凍干保護(hù)劑為蔗糖，所述脫細(xì)胞基質(zhì)、助懸劑和蔗糖的質(zhì)量比為2:2:4；或，所述凍干保護(hù)劑為蔗糖和海藻糖，所述脫細(xì)胞基質(zhì)、助懸劑、蔗糖和海藻糖的質(zhì)量比為5：3：2：1。

13、進(jìn)一步地，所述脫細(xì)胞基質(zhì)微粒凍干植入劑至少滿足以下條件之一：

14、(1)重金屬含量不大于5μg/g；

15、(2)有機(jī)溶劑殘留量不超過50μg/g；

16、(3)復(fù)溶后，滲透壓為270-350mosm/kg；

17、(4)含水量≤10％；

18、(5)細(xì)菌內(nèi)毒素含量不大于5eu/g；

19、(6)ph值6.8～7.6。

20、本發(fā)明還提供了一種制備上述脫細(xì)胞基質(zhì)微粒凍干植入劑的方法，所述方法包括以下步驟：將脫細(xì)胞基質(zhì)研磨，與助懸劑、凍干保護(hù)劑和水混合，高流體靜壓處理，得到脫細(xì)胞基質(zhì)漿料；分裝，凍干，密封，即得。

21、進(jìn)一步地，所述研磨的溫度為-80℃～15℃，優(yōu)選為-20℃～30℃，所述研磨工藝包括但不限于通過磨削、撞擊、剪切等對(duì)脫細(xì)胞基質(zhì)進(jìn)行粉碎，所述研磨后脫細(xì)胞基質(zhì)的粒徑小于等于2mm，優(yōu)選地，小于等于1mm。

22、進(jìn)一步地，所述高流體靜壓處理的條件為：依次在0bar～600bar壓力下處理，直至物料在最高壓力下完整循環(huán)1次；優(yōu)選地，所述高流體靜壓處理的條件為：依次在100bar～400bar壓力下處理，直至物料在最高壓力下完整循環(huán)1次。

23、進(jìn)一步地，所述高流體靜壓處理的條件為：依次在100bar、200bar、300bar、400bar壓力下處理，直至物料在最高壓力下完整循環(huán)1次；或者，所述高流體靜壓處理的條件為：在100bar壓力下循環(huán)1次。

24、進(jìn)一步地，所述凍干的條件為：在-40～30℃下升溫干燥，至含水量≤15％，更優(yōu)選地，至含水量≤10％；優(yōu)選地，所述凍干的條件為：在-40℃預(yù)凍3-5h后，再在-40～0℃的升溫條件下維持3-7h，再在25～30℃繼續(xù)干燥3～5h；更優(yōu)選地，所述凍干的條件為：在-40℃預(yù)凍4h后，再在-40～0℃的升溫條件下維持6h，再在25℃繼續(xù)干燥4h。

25、進(jìn)一步地，所述凍干是在真空條件下進(jìn)行的。

26、本發(fā)明還提供了上述的脫細(xì)胞基質(zhì)微粒凍干植入劑在制備軟組織填充材料、組織修復(fù)材料、瘢痕修復(fù)材料中的應(yīng)用。

27、本發(fā)明還提供了上述脫細(xì)胞基質(zhì)微粒凍干植入劑在制備醫(yī)療美容例如面部細(xì)紋的治療、面部凹陷的矯正、淚溝填充、面部雕塑、真皮層或皮下填充、傷口愈合、抗瘢痕的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

28、本發(fā)明還提供了一種軟組織填充材料和/或組織修復(fù)材料，它可包含上述的脫細(xì)胞基質(zhì)凍干植入劑和復(fù)溶溶劑。

29、本發(fā)明首次采用流體靜壓處理結(jié)合助懸劑、凍干保護(hù)劑，制備了外觀規(guī)則、易于長(zhǎng)期保存、使用前易復(fù)溶為可注射勻漿的脫細(xì)胞基質(zhì)微粒凍干產(chǎn)品。

30、本發(fā)明將脫細(xì)胞基質(zhì)材料微?；幚?，保留了材料的膨松度和三維空間，其特有的三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，能夠吸引和募集人體組織細(xì)胞以其為基地進(jìn)行增殖再生，誘導(dǎo)組織生長(zhǎng)，達(dá)到修復(fù)人體軟組織缺損的臨床效果。本發(fā)明開發(fā)了一種適應(yīng)組織填充修復(fù)的微?；摷?xì)胞基質(zhì)材料，其粒徑合適注射填充，易于保存，使用前復(fù)溶分散效率高，必要時(shí)能與其他注射劑均勻混合的一種脫細(xì)胞基質(zhì)微粒產(chǎn)品，適合用于真皮淺層組織、真皮深層組織或真皮下組織，以及不規(guī)則缺損組織的填充與修復(fù)，能更好地滿足組織修復(fù)再生的要求。

31、本發(fā)明脫細(xì)胞基質(zhì)微粒凍干植入劑的有益效果：

32、1、本發(fā)明脫細(xì)胞基質(zhì)微粒凍干植入劑中，可注射的脫細(xì)胞基質(zhì)微粒為形狀規(guī)則的圓柱形海綿固體。

33、2、使用時(shí)將液相注射劑注入產(chǎn)品中，即可對(duì)脫細(xì)胞基質(zhì)進(jìn)行分散，操作過程簡(jiǎn)易，能實(shí)現(xiàn)1min內(nèi)分散為勻漿，分散效率高。

34、3、本發(fā)明可注射的脫細(xì)胞基質(zhì)微粒凍干植入劑含有生物活性的細(xì)胞外基質(zhì)成分，主要成分為脫細(xì)胞基質(zhì)中的i、ii、iv和vi型膠原，其中還包括透明質(zhì)酸和氨基多糖等細(xì)胞外基質(zhì)成分，同時(shí)保留了脫細(xì)胞基質(zhì)的天然三維立體結(jié)構(gòu)、可作為支撐組織、細(xì)胞生長(zhǎng)的支架，其含有的活性成分可誘導(dǎo)和調(diào)控細(xì)胞的黏膜，增殖，遷移和分化，并促進(jìn)組織修復(fù)和再生。該可注射的脫細(xì)胞基質(zhì)微粒一方面可作為在創(chuàng)傷修復(fù)材料，另一方面能做醫(yī)美等后續(xù)重建組織的替代或填充物。

35、4、本發(fā)明脫細(xì)胞基質(zhì)微粒凍干植入劑中，微?；摷?xì)胞基質(zhì)粒徑大小及延展性保證充填劑可通過27g細(xì)小針頭輕松注入皮下，實(shí)現(xiàn)注射填充。注射劑屬于軟組織材料，注射后能夠達(dá)到最自然的效果，無(wú)硬結(jié)。

36、5、本發(fā)明脫細(xì)胞基質(zhì)微粒凍干植入劑中的微?；摷?xì)胞基質(zhì)注射入治療部位，3d微觀結(jié)構(gòu)起到細(xì)胞支架的作用，有效促進(jìn)成纖維細(xì)胞的增殖，進(jìn)而加快成纖維細(xì)胞合成膠原，有助于填充部位補(bǔ)充膠原蛋白，也能起到持久性形態(tài)維持的目的。

37、6、本發(fā)明脫細(xì)胞基質(zhì)微粒凍干植入劑所含有的膠原、糖蛋白、多糖及活性因子等作為生物信號(hào)分子，能高效促進(jìn)組織再生及修復(fù)；且成分均為人體所需，能夠被完全吸收，無(wú)代謝負(fù)擔(dān)，兼具安全及有效性。

38、7、本發(fā)明脫細(xì)胞基質(zhì)微粒凍干植入劑存儲(chǔ)便捷，注射劑瓶預(yù)灌封凍干海綿狀脫細(xì)胞基質(zhì)可存儲(chǔ)于不高于35℃的自然環(huán)境，而非限制于低溫儲(chǔ)存。

39、8、本發(fā)明產(chǎn)品粒徑穩(wěn)定，凍干成型性好，易復(fù)溶、分散，并且實(shí)現(xiàn)可注射的要求。

40、9、本發(fā)明脫細(xì)胞基質(zhì)微粒凍干植入劑重金屬含量不大于5μg/g；各項(xiàng)有機(jī)溶劑殘留量不超過50μg/g；經(jīng)復(fù)溶后，滲透壓為270-350mosm/kg；含水量≤10％；細(xì)菌內(nèi)毒素含量不大于5eu/g；ph值6.8～7.6。

41、顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識(shí)和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。

42、以下通過實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。