本發(fā)明涉及聚合物納米粒制劑技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種包封率高的補骨脂素聚合物納米粒制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
腫瘤是當(dāng)今危害人類健康的主要疾患之一。腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤最普遍的一種生物學(xué)行為和最本質(zhì)的特征，也是影響腫瘤患者生存和愈后的關(guān)鍵因素。因此，抗腫瘤藥物是本領(lǐng)域技術(shù)人員不斷研發(fā)的課題。近年來人們轉(zhuǎn)向其他途徑尋找逆轉(zhuǎn)腫瘤細胞mdr的有效方法。由于納米粒子的微小體積和特殊結(jié)構(gòu)，其在改善藥物吸收、分布、代謝、排泄以及毒性等方面顯示出獨特的優(yōu)勢，因此納米給藥系統(tǒng)及納米粒的制備日漸受到重視。納米給藥系統(tǒng)包括納米脂質(zhì)體、固體脂質(zhì)納米粒(solidlipidnanoparticle，sln)、聚合物納米粒(polymernanoparticle，pln)、納米球、納米囊和微乳等，納米給藥系統(tǒng)的粒徑一般介于10-500nm之間，通過納米給藥系統(tǒng)可起到逆轉(zhuǎn)腫瘤mdr作用。納米脂質(zhì)體具有類似生物膜的結(jié)構(gòu)，親脂或親水性藥物均可設(shè)計成脂質(zhì)體，其具有被動靶向特性，使用聚合物對納米脂質(zhì)體修飾可達到不同的治療需求，如靶向、緩釋、環(huán)境依賴性等。微乳是由乳化劑、助乳化劑、油相和水相組成的光學(xué)上各向同性及熱力學(xué)穩(wěn)定的液-液分散體系，藥物在微乳中的分散性好，其對難溶性藥物具有增溶作用，從而可提高生物利用度。sln是由脂質(zhì)材料制備的納米制劑，且sln可促進藥物穿透p-gp富集的血腦屏障，諸多研究基本集中于化療藥物sln的制備及其作用機制的研究，現(xiàn)有技術(shù)有將抗p-gp小分子抑制劑(如維拉帕米、環(huán)孢素a、gg918等)和抗腫瘤藥物一起制備sln的。pln是以雙(2-乙基己基)磺基丁二酸鈉為單體，經(jīng)聚合反應(yīng)制備的一種親水性膠團，由于非降解性材料具有潛在生物毒性，目前逐步以聚甲氰基丙烯酸酯、聚苯乙烯、聚酰胺等為材料制備能定向于溶酶體的可生物降解pln等。
關(guān)于化療藥物納米粒的研究及產(chǎn)品已有報道和上市，如abraxane是第一個非溶解納米白蛋白結(jié)合化療藥物，是用白蛋白包裹紫杉醇的納米顆粒，用于治療乳腺癌轉(zhuǎn)移；gliadelwafer是聚苯丙生20包裹卡莫司汀的納米顆粒，用于治療高分化惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤；daunoxome是柔紅霉素脂質(zhì)體，用于治療卡波西肉瘤；myocet是阿霉素脂質(zhì)體，與環(huán)磷酰胺聯(lián)用，用于治療轉(zhuǎn)移性乳腺癌；doxil是多柔比星脂質(zhì)體，用于治療轉(zhuǎn)移性卵巢癌；阿霉素半乳糖胺與n-(2-羥丙基)異丁烯?；０返墓簿畚飌k2用于治療肝癌。以上載藥系統(tǒng)的各種藥物制劑具有一定逆轉(zhuǎn)mdr活性作用，但也存在一些問題，如載藥量低、穩(wěn)定性差及易泄漏等。
應(yīng)用可生物降解的pln可有效提高藥物穩(wěn)定性，從而起到緩釋和控釋的作用。目前可用的生物降解載體材料主要有可生物降解的高分子聚合物和天然大分子體系，可生物降解的高分子聚合物包括聚丙交酯(pla)、聚乙交酯(plg)、聚丙交酯-乙交酯(plga)、聚己內(nèi)酯(pcl)、聚原酸酯(poe)、聚氰基丙烯酸烷基酯(paca)、聚乙烯吡咯烷酮(pvp)等；天然大分子體系包括蛋白質(zhì)、多糖、明膠、聚丙烯酰淀粉、甲殼素及衍生物、海藻酸鈉、明膠、白蛋白、卵磷脂、膽固醇等。就上述聚合物，聚丙交酯-乙交酯(plga)是由乳酸和羥基乙酸聚合而成的高分子化合物，具有毒性低、成粒性好、生物相容性的優(yōu)點，plga載體材料可在水溶體系中通過酯鍵的斷裂發(fā)生降解，降解產(chǎn)生的乳酸和羥基乙酸最終在體內(nèi)進一步降解成水和二氧化碳排出體外，并通過plga自身降解速率達到調(diào)節(jié)包載藥物釋放，使藥物在較長時間內(nèi)得以穩(wěn)定速率釋放，維持穩(wěn)定血藥濃度。plga能增加脂溶性藥物的水溶性，提高脂溶性藥物的生物利用度，plga已被美國fda批準用于藥物載體等領(lǐng)域中，通過改變plga中乳酸和羥基乙酸的比例可影響和改變plga降解速率。目前，plga納米粒的制備方法中較為成熟的是復(fù)乳溶劑揮發(fā)法，對plga納米粒制劑研究報道只見對化療藥物的制備方法和理化性質(zhì)研究，而對plga納米載體包載耐藥逆轉(zhuǎn)劑并應(yīng)用于抗腫瘤mdr的研究尚未見報道。
對于不同的活性藥物，pln制劑的包封率和穩(wěn)定性等存在顯著差異，針對具體的pln制劑，如何提高其中活性藥物的包封率和穩(wěn)定性等，仍然是目前研究的熱點、重點和難點。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明針對現(xiàn)有的以補骨脂素為活性藥物的pln制劑的包封率低及穩(wěn)定性差的問題，提供一種通過優(yōu)化成分及制備條件從而獲得較高包封率及較好穩(wěn)定性的補骨脂素聚合物納米粒制劑，以及該種補骨脂素聚合物納米粒制劑的制備方法。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案。
一種包封率高的補骨脂素聚合物納米粒制劑，由以下重量份的各物質(zhì)制成：1-4份補骨脂素，5-50份聚丙交酯-乙交酯，20-100份大豆磷脂，200-600份吐溫-80。
優(yōu)選的，所述一種包封率高的補骨脂素聚合物納米粒制劑由以下重量份的各物質(zhì)制成：2-3份補骨脂素，10-20份聚丙交酯-乙交酯，40-60份大豆磷脂，450-550份吐溫-80。
更優(yōu)選的，所述一種包封率高的補骨脂素聚合物納米粒制劑由以下重量份的各物質(zhì)制成：3份補骨脂素，15份聚丙交酯-乙交酯，50份大豆磷脂，500份吐溫-80。
更優(yōu)選的，所述一種包封率高的補骨脂素聚合物納米粒制劑由以下重量份的各物質(zhì)制成：2份補骨脂素，10份聚丙交酯-乙交酯，40份大豆磷脂，500份吐溫-80。
優(yōu)選的，以上所述聚丙交酯-乙交酯中的乳酸與羥基乙酸的質(zhì)量比為1:1。
以上所述包封率高的補骨脂素聚合物納米粒制劑的制備方法，包括以下步驟：
s1、按所述重量份分別稱取補骨脂素、聚丙交酯-乙交酯、大豆磷脂和吐溫-80，備用。
將聚丙交酯-乙交酯溶解于有機溶劑中，然后向有機溶劑中加入補骨脂素，形成有機相；備用；所述聚丙交酯-乙交酯的質(zhì)量與有機溶劑的體積比是5-50g：1.6-2.4ml。
優(yōu)選的，所述有機溶劑為乙醇或丙酮。
s2、將大豆磷脂和吐溫-80溶于乙醇水溶液中，形成水相，備用；所述大豆磷脂的質(zhì)量與乙醇水溶液的體積比為1-5g：1ml。
優(yōu)選的，所述乙醇水溶液中乙醇的質(zhì)量分數(shù)為4％。
s3、將有機相注入水相中，形成混合液；加熱混合液至60-80℃后以10-30rmp的轉(zhuǎn)速攪拌混合液30-120min，形成乳液。
優(yōu)選的，將混合液加熱至75℃后進行攪拌。
優(yōu)選的，以20rmp的轉(zhuǎn)速攪拌混合液1h。
優(yōu)選的，用注射器將有機相均勻的注入水相中。
s4、將乳液倒入冰水中，并以10-30rmp的轉(zhuǎn)速攪拌混合物30-120min，形成納米粒溶液。
優(yōu)選的，以20rmp的轉(zhuǎn)速攪拌混合物1h。
s5、納米粒溶液經(jīng)離心處理后，用0.45μm的水系濾膜過濾上層清液，得補骨脂素聚合物納米粒制劑。
優(yōu)選的，所述納米粒溶液在1000rmp的轉(zhuǎn)速下離心5min。
所述補骨脂素聚合物納米粒制劑保存于4℃的環(huán)境中。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明以適量的補骨脂素、聚丙交酯-乙交酯、大豆磷脂和吐溫-80為原料，尤其是以吐溫-80為表面活性劑，以大豆磷脂為脂質(zhì)，可制備包封率和穩(wěn)定性均較高的補骨脂素聚合物納米粒制劑。通過優(yōu)化補骨脂素聚合物納米粒制劑的制備條件，可進一步提高補骨脂素聚合物納米粒制劑的包封率和穩(wěn)定性，包封率可高達82.45％，粒徑為91.56nm，在4℃下靜置3天，無白色沉淀出現(xiàn)，穩(wěn)定性好。
具體實施方式
為了更充分的理解本發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容，下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明的技術(shù)方案作進一步介紹和說明。
實施例1-86
實施例1-86提供的補骨脂素聚合物納米粒制劑的制備方法，具體步驟如下(各實施例中各物料的用量及工藝參數(shù)如表1和表2所示)：
(1)取料：按各組分的用量分別稱取補骨脂素、聚丙交酯-乙交酯、大豆磷脂和吐溫-80，備用。
(2)制有機相：將聚丙交酯-乙交酯溶解于有機溶劑中，然后向有機溶劑中加入補骨脂素，形成有機相；備用。
(3)制水相：將大豆磷脂和吐溫-80溶于乙醇水溶液中，形成水相，備用。
(4)制乳液：注射器將有機相均勻的注入水相中，形成混合液；加熱混合液至60-80℃后以10-30rmp的轉(zhuǎn)速攪拌混合液30-120min，形成乳液。
(5)制納米粒溶液：將乳液倒入冰水中，并以10-30rmp的轉(zhuǎn)速攪拌混合物30-120min，形成納米粒溶液。
(6)納米粒制劑：將所得納米粒溶液在1000rmp的轉(zhuǎn)速下離心5min，用0.45μm的水系濾膜過濾上層清液，得補骨脂素聚合物納米粒制劑。
(7)保存：將所得補骨脂素聚合物納米粒制劑保存于4℃的環(huán)境中。
表1實施例1-86中各物料的用量
表1中，pso指補骨脂素，plga指乳酸與羥基乙酸的質(zhì)量比為1:1的聚丙交酯-乙交酯。
表2實施例1-86中的制備參數(shù)
實施例87
本實施例提供的補骨脂素聚合物納米粒制劑的制備方法與實施例4的制備方法基本一致，不同之處在于：
步驟(1)取料為：分別稱取3mg補骨脂素、15mg聚丙交酯-乙交酯(與實施例4的相同)、42mg大豆磷脂、8mg合成磷脂(dlpc)和500mg吐溫-80，備用。
步驟(3)制水相為：將大豆磷脂、合成磷脂和吐溫-80溶于20ml的4wt.％乙醇水溶液中，形成水相，備用。
實施例88
本實施例提供的補骨脂素聚合物納米粒制劑的制備方法與實施例4的制備方法基本一致，不同之處在于：
步驟(1)取料為：分別稱取3mg補骨脂素、15mg聚丙交酯-乙交酯(與實施例4的相同)、50mg合成磷脂(dlpc)和500mg二甲胺基甲硼烷(dmab)，備用。
步驟(3)制水相為：將合成磷脂和二甲胺基甲硼烷溶于20ml的4wt.％乙醇水溶液中，形成水相，備用。
實施例89
本實施例提供的補骨脂素聚合物納米粒制劑的制備方法與實施例4的制備方法基本一致，不同之處在于：
步驟(1)取料為：分別稱取3mg補骨脂素、15mg聚丙交酯-乙交酯(與實施例4的相同)、10mg合成磷脂(dlpc)、40mg大豆磷脂和500mg二甲胺基甲硼烷(dmab)，備用。
步驟(3)制水相為：將大豆磷脂、合成磷脂和二甲胺基甲硼烷溶于20ml的4wt.％乙醇水溶液中，形成水相，備用。
實施例90
本實施例提供的補骨脂素聚合物納米粒制劑的制備方法與實施例4的制備方法基本一致，不同之處在于：
步驟(1)取料為：分別稱取3mg補骨脂素、15mg聚丙交酯-乙交酯(與實施例4的相同)、10mg合成磷脂(dlpc)、40mg大豆磷脂和20mg(mtc)，備用。
步驟(3)制水相為：將大豆磷脂、合成磷脂和mtc溶于20ml的4wt.％乙醇水溶液中，形成水相，備用。
實施例91
本實施例提供的補骨脂素聚合物納米粒制劑的制備方法與實施例4的制備方法基本一致，不同之處在于：
步驟(1)取料為：分別稱取3mg補骨脂素、15mg聚丙交酯-乙交酯(與實施例4的相同)、10mg合成磷脂(dlpc)、500mg二甲胺基甲硼烷(dmab)和20mg(mtc)，備用。
步驟(3)制水相為：將合成磷脂、二甲胺基甲硼烷和mtc溶于20ml的4wt.％乙醇水溶液中，形成水相，備用。
實施例92
本實施例提供的補骨脂素聚合物納米粒制劑的制備方法與實施例4的制備方法基本一致，不同之處在于：
步驟(1)取料為：分別稱取3mg補骨脂素、15mg聚丙交酯-乙交酯(與實施例4的相同)、50mg大豆磷脂和500mg二甲胺基甲硼烷(dmab)，備用。
步驟(3)制水相為：將大豆磷脂和二甲胺基甲硼烷溶于20ml的4wt.％乙醇水溶液中，形成水相，備用。
實施例93
本實施例提供的補骨脂素聚合物納米粒制劑的制備方法與實施例4的制備方法基本一致，不同之處在于：
步驟(1)取料為：分別稱取3mg補骨脂素、15mg聚丙交酯-乙交酯(與實施例4的相同)、50mg合成磷脂(dlpc)和500mg聚乙二醇1000維生素e琥珀酸酯(tpgs1000)，備用。
步驟(3)制水相為：將合成磷脂和聚乙二醇1000維生素e琥珀酸酯溶于20ml的4wt.％乙醇水溶液中，形成水相，備用。
實施例94
本實施例提供的補骨脂素聚合物納米粒制劑的制備方法與實施例4的制備方法基本一致，不同之處在于：
步驟(1)取料為：分別稱取3mg補骨脂素、15mg聚丙交酯-乙交酯(與實施例4的相同)、10mg合成磷脂(dlpc)、40mg聚乙二醇1000維生素e琥珀酸酯(tpgs1000)和500mg吐溫-80，備用。
步驟(3)制水相為：將合成磷脂、聚乙二醇1000維生素e琥珀酸酯和吐溫-80溶于20ml的4wt.％乙醇水溶液中，形成水相，備用。
實施例95
本實施例提供的補骨脂素聚合物納米粒制劑的制備方法與實施例4的制備方法基本一致，不同之處在于：
步驟(1)取料為：分別稱取3mg補骨脂素、15mg聚丙交酯-乙交酯(與實施例4的相同)、40mg大豆磷脂、10mg聚乙二醇1000維生素e琥珀酸酯(tpgs1000)和500mg吐溫-80，備用。
步驟(3)制水相為：將大豆磷脂、聚乙二醇1000維生素e琥珀酸酯和吐溫-80溶于20ml的4wt.％乙醇水溶液中，形成水相，備用。
以上實施例1-95制備的補骨脂素聚合物納米粒制劑的包封率、粒徑、電位、pdi(聚合物分散性指數(shù))及穩(wěn)定性(放置在4℃下一段時間后制劑的沉淀情況)如下表3所示。
表3實施例1-95制備的補骨脂素聚合物納米粒制劑的包封率、粒徑、電位、pdi和穩(wěn)定性
由上述實施例1-95制備的補骨脂素聚合物納米粒制劑的包封率、粒徑、電位、pdi和穩(wěn)定性可見，補骨脂素聚合物納米粒制劑的包封率、粒徑、電位、pdi和穩(wěn)定性等性質(zhì)受到諸多因素的影響，不僅制備補骨脂素聚合物納米粒制劑的主要組分會顯著影響其性質(zhì)，制備有機相和制備水相中使用的溶劑類型以及制備乳液過程中的溫度甚至攪拌的速度和時間均會對其性質(zhì)產(chǎn)生顯著的影響，因此需綜合平衡各因素才能制備出包封率高且穩(wěn)定性高的補骨脂素聚合物納米粒制劑。
以上所述僅以實施例來進一步說明本發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容，以便于讀者更容易理解，但不代表本發(fā)明的實施方式僅限于此，任何依本發(fā)明所做的技術(shù)延伸或再創(chuàng)造，均受本發(fā)明的保護。