本發(fā)明涉及蘋果屬植物海棠果多酚的提取方法技術(shù)，具體地說是一種海棠果多酚的提取方法，為凍干超聲提取及固相萃取純化的方法。
背景技術(shù)：
：海棠果是我國地方農(nóng)家蘋果資源的主要組成，因其風(fēng)味獨特，營養(yǎng)價值豐富，含豐富的多酚，含量比栽培蘋果高兩倍，具有預(yù)防高血壓、抗腫瘤、抗衰老、抗心腦血管疾病、抗基因突變、抗輻射、抗過敏、防齲齒、增強肌力。但是新鮮海棠果產(chǎn)品的附加值低，并且貨架期時間短，難以長距離運輸。因此，發(fā)展我國海棠果的加工業(yè)，開展海棠果產(chǎn)品的開發(fā)研究，突破加工的薄弱環(huán)節(jié)，對促進我國海棠果加工業(yè)、提高經(jīng)濟效益具有十分重要的意義。通常蘋果和海棠果的多酚提取有機溶劑超聲提取為主，輔助使用濾膜和樹脂過濾，其優(yōu)點是操作簡單，適用于大量果實多酚的提??；缺點是果實樣品定量不可控，提取純度有待提高，海棠果實提取時因去除果心，果肉氧化迅速，定量準(zhǔn)確性不高，常用的膜和樹脂過濾得到的多酚純度不高。這種提取方法對于大量的工業(yè)生產(chǎn)來說尚可，但是對于實驗室進行科學(xué)研究來說，這種方法果實材料定量不準(zhǔn)確、提取多酚純度較低。如何實現(xiàn)海棠果多酚提取的快速，并能準(zhǔn)確定量、獲得純度較高的多酚，便于進行海棠果多酚的科學(xué)研究，構(gòu)建海棠果多酚凍干超聲提取及固相萃取純化的方法急需解決。技術(shù)實現(xiàn)要素：為了能夠獲得海棠果多酚，本發(fā)明提出了一種海棠果多酚的提取方法。該方法通過凍干超聲提取及固相萃取純化步驟，實現(xiàn)海棠果多酚保質(zhì)保量的提取，解決海棠果多酚提取的技術(shù)問題。本發(fā)明解決技術(shù)問題所采用的方案是：（1）原料預(yù)處理：將原料海棠果洗凈、切成果粒；（2）凍干：將海棠果粒放入真空凍干機中真空凍干；（3）粉碎：將真空凍干海棠果粒用勻漿機粉碎，時間為20～40s；（4）一次提取：將粉碎的海棠果放入超聲設(shè)備中,加入料液比為1:8～1:15的乙醇溶液；加壓超聲處理,達到超聲時間后,取出料液；（5）取料液：將料液在3000r/min下離心15-25min,通過吸取裝置吸取澄清料液；（6）二次提取：重復(fù)步驟（4）；（7）取料液：重復(fù)步驟（5），并將兩次料液合并；（8）濃縮、回收：將合并的料液,利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器進行真空濃縮,得到海棠多酚濃縮液；（9）純化：將海棠多酚濃縮液經(jīng)過固相萃取小柱,填充料為大孔共聚物,進行吸附,并用乙醇溶液進行洗脫,得海棠多酚洗脫液；（10）濃縮、干燥：利用真空濃縮儀對海棠多酚洗脫液進行真空濃縮，得到海棠果多酚提取物成品。積極效果：本發(fā)明的一種海棠果多酚凍干超聲提取及固相萃取純化的方法，操作方便、條件可控、提取定量準(zhǔn)確、提取多酚純度高，便于海棠果多酚的快速提取，在一定程度解決了海棠果多酚提取不易定量、純度不高、操作不能精確控制的問題。適宜作為海棠果多酚提取方法應(yīng)用。具體實施方式一種海棠果多酚的提取方法，其具體實施包括以下步驟：（1）原料預(yù)處理：將原料海棠果洗凈、切碎為長寬高各不超過10mm的果粒；（2）凍干：將海棠果粒放入真空凍干機，在≤20pa、溫度-45～-55℃條件下將海棠果粒真空凍干；（3）粉碎：將真空凍干海棠果粒用勻漿機粉碎，時間為20～40s；（4）一次提取：將粉碎的海棠果放入超聲設(shè)備中,加入料液比為1:8～1:15的65％-85％乙醇溶液；加壓超聲處理,超聲頻率為99khz,超聲功率為850w-1250w；超聲時間為20～40min,超聲溫度為35℃～55℃,達到超聲時間后,取出料液；（5）取料液：將料液在3000r/min下離心15-25min,通過吸取裝置吸取澄清料液；（6）二次提?。褐貜?fù)步驟（4）；（7）取料液：重復(fù)步驟（5），并將兩次料液合并；（8）濃縮、回收：將合并的料液,利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器進行真空濃縮,得到海棠多酚濃縮液；（9）純化：將海棠多酚濃縮液經(jīng)過固相萃取小柱,填充料為大孔共聚物,進行吸附,并用80～100％甲醇溶液進行洗脫,得海棠多酚洗脫液；（10）濃縮、干燥：利用真空濃縮儀對海棠多酚洗脫液進行真空濃縮，得到海棠果多酚提取物成品。實施例：以窄葉海棠、扁果海棠和八棱海棠3份海棠果的果實為材料，見表1，將海棠果洗凈、切碎為長寬高各不超過10mm的果粒，將海棠果粒放入真空凍干機，在≤20pa、溫度-45～-55℃條件下將海棠果粒真空凍干，凍干后用勻漿機粉碎20～40s；將粉碎的海棠果各稱取5.00g,放入超聲設(shè)備中,設(shè)置3個料液比為1:5、1:10和1:15的65％-85％乙醇溶液；加壓超聲處理,超聲頻率為99khz,超聲功率為850w-1250w；超聲時間為20～40min,超聲溫度為35℃～55℃,達到超聲時間后,取出料液；將料液在3000r/min下離心15-25min,通過吸取裝置吸取澄清料液；重復(fù)超聲提取和取料液，并將兩次料液合并，將合并的料液,利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器進行真空濃縮,得到海棠多酚濃縮液，設(shè)置兩個純化方式為固相萃取小柱和大孔吸附樹脂進行吸附,并用80～100％甲醇溶液進行洗脫,得海棠多酚洗脫液，再利用真空濃縮儀對海棠多酚洗脫液進行真空濃縮，得到海棠果多酚提取物成品,用福林酚法測定所得多酚的質(zhì)量，過程設(shè)置為單因素試驗，不同料液比大孔共聚物純化為一組，篩選出的料液比與兩種純化方式為一組，過程經(jīng)定量檢測相同質(zhì)量海棠果所得多酚的質(zhì)量。所得結(jié)果經(jīng)方差分析，料液比間多酚得率1:10和1:15的較1:5差異顯著，1:10和1:15間差異不顯著，即料液比1:10和1:15的多酚提取得率最高，考慮成本則以料液比1:10為優(yōu)，純化方式大孔共聚物和大孔吸附樹脂間差異顯著，以大孔共聚物的多酚得率最高。綜合以上形成海棠果多酚提取的方法。所形成的該方法在一定程度上解決了海棠果多酚不易定量的問題，提高了提取多酚的得率，為相關(guān)研究和生產(chǎn)提供解決方案。表1.3份蘋果種質(zhì)資源材料編號名稱所屬種1窄葉海棠m.angustifolia(ait.)michx.2扁果海棠m.platycarparehd.3八棱海棠m.robusta(carr.)rehd.表2.不同料液比海棠果多酚提取的比較表3.不同純化方式對海棠果多酚得率比較當(dāng)前第1頁12