本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種凝膠制劑及其制備方法。

背景技術(shù)：

地衣含有獨(dú)特而多樣的化學(xué)物質(zhì)，早在明代李時(shí)珍的《本草綱目》中就有作為藥物的記載。此外，地衣在食用、日用香料、生物試劑等方面也具有極好的應(yīng)用價(jià)值。實(shí)驗(yàn)研究表明，地衣多糖有較強(qiáng)的還原力，樹花多糖抑制oh、o-的ic分別為6.45mg/ml和10.63mg/ml,2種自由基的抑制能力由大小為oh>o-。頂果珊瑚枝(stereocaulonpomiferum)等富含5-甲基-β-苔黑酚酸甲酯(methyl5-methy-β-orcinolcarboxylate),苔色酸(orsellinicacid),扁枝衣酸(everainicacid),苔色酸甲酯(methylorsellinate),赤星衣酸乙酯(ethylhematommate),β-苔黑酚酸甲酯(methylβ-orcinolcarboxylate),假杯點(diǎn)素a(pseudocyphellarina),黑茶漬素(atranorin),茶漬酸(lecanoricacid),斑點(diǎn)酸(sticticacid),降斑點(diǎn)酸(norsticticacid),藻紋苔酸(salazinicacid),富馬原島衣酸(fumarprotocetraricacid),左旋和右旋松蘿酸(usnicacid),左旋地衣硬酸〔(-)-lichesterinicacid〕,右旋原地衣硬酸〔(+)-protolichesterinicacid〕和無(wú)羈萜(friedelin)，是較好的苔香型香料來(lái)源。

地衣體內(nèi)普遍含有地衣酸，并且含量較高，如松蘿酸，是較為理想的天然化妝品原料來(lái)源。

本發(fā)明是首次利用地衣聚篩蕊原料制備凝膠制劑的應(yīng)用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明旨在提供一種凝膠制劑及其制備方法，首次利用地衣聚篩蕊原料制備凝膠制劑，該凝膠制劑對(duì)綠膿桿菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和痢疾桿菌均有一定的抑菌作用，并對(duì)自由基有明顯的清除作用。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種凝膠制劑，以重量份1000份計(jì)包括如下組分：聚篩蕊提取物100份；卡波姆11份；丁二醇200份；甘油160份；吐溫10份；ve0.25份；三乙醇胺1.2份；玫瑰精油1.5份；蒸餾水余量。

上述凝膠制劑的制備方法，包括如下步驟：

s1稱取聚篩蕊藥材粉碎，以丙酮回流提取2h，過(guò)濾，濃縮成稠膏狀，得聚篩蕊提取物；聚篩蕊藥材和丙酮的料液比為1:15(g/ml)；

s2取卡波姆置入適量蒸餾水中，靜置過(guò)夜，使其充分溶脹，然后往其中加入甘油、吐溫、丁二醇和ve并攪勻；加入聚篩蕊提取物，攪勻；再加入玫瑰精油和三乙醇胺，調(diào)節(jié)ph至6.0～7.0；加蒸餾水調(diào)整到1000份，攪拌均勻，分裝即得。

本發(fā)明的有益效果在于：本發(fā)明的凝膠制劑對(duì)綠膿桿菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和痢疾桿菌均有一定的抑菌作用，并對(duì)自由基有明顯的清除作用。另外，經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明的凝膠制劑對(duì)于實(shí)驗(yàn)家兔皮膚的涂藥部位未見明顯的刺激性作用。

附圖說(shuō)明

圖1為本發(fā)明的制備方法的流程示意圖；

圖2為本發(fā)明凝膠制劑對(duì)dpph自由基清除率實(shí)驗(yàn)結(jié)果示意圖；

圖3為本發(fā)明凝膠制劑對(duì)羥基自由基清除率實(shí)驗(yàn)結(jié)果示意圖；

圖4為本發(fā)明凝膠制劑對(duì)超氧自由基清除率實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

具體實(shí)施方式

以下將結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的描述，需要說(shuō)明的是，本實(shí)施例以本技術(shù)方案為前提，給出了詳細(xì)的實(shí)施方式和具體的操作過(guò)程，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不限于本實(shí)施例。

一種凝膠制劑，以重量份1000份計(jì)包括如下組分：聚篩蕊提取物100份；卡波姆11份；丁二醇200份；甘油160份；吐溫10份；ve0.25份；三乙醇胺1.2份；玫瑰精油1.5份；蒸餾水余量。

如圖1所示，上述凝膠制劑的制備方法，包括如下步驟：

s1稱取聚篩蕊藥材粉碎，以丙酮回流提取2h，過(guò)濾，濃縮成稠膏狀，得聚篩蕊提取物；聚篩蕊藥材和丙酮的料液比為1:15(g/ml)；

s2取卡波姆置入蒸餾水中，靜置過(guò)夜，使其充分溶脹，然后往其中加入甘油、吐溫、丁二醇和ve并攪勻；加入聚篩蕊提取物，攪勻；再加入玫瑰精油和三乙醇胺，調(diào)節(jié)ph至6.0～7.0；加蒸餾水調(diào)整到1000份，攪拌均勻，分裝即得。

以下將通過(guò)實(shí)驗(yàn)對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的描述。

1、聚篩蕊提取工藝的研究

按3個(gè)因素，每個(gè)因素3水平進(jìn)行優(yōu)選。稱取聚篩蕊藥材共9份，按正交表l9(34)進(jìn)行正交試驗(yàn)。按照表1的因素水平，表2的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行直觀分析和方差分析。

表1聚篩蕊提取工藝因素水平表l9(3⁴)

表2聚篩蕊提取工藝正交試驗(yàn)安排表

按照巴巴酸的含量測(cè)定結(jié)果指標(biāo)評(píng)價(jià)，進(jìn)行直觀分析發(fā)現(xiàn)，各因素對(duì)巴巴酸提取效率的影響順序?yàn)閍>c>b，方差分析結(jié)果表明，因素a、b、c對(duì)結(jié)果均無(wú)顯著性影響。結(jié)合直觀分析，優(yōu)選出最佳工藝為a1b1c2，即提取溶劑為丙酮、提取時(shí)間2h、料液比1:15。試驗(yàn)結(jié)果如表3所示。

表3聚篩蕊提取工藝條件l9(3⁴)正交試驗(yàn)結(jié)果

按丙酮、提取時(shí)間2h、料液比1:15提取方法，平行制備3份聚篩蕊提取物，并按分別對(duì)巴巴酸的含量進(jìn)行測(cè)定，驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，巴巴酸的百分含量分別為1.37、1.41、1.35，均大于正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)值，rsd＝1.9％，表明該提取工藝穩(wěn)定可行。

2、凝膠制劑的成型工藝研究

通過(guò)正交試驗(yàn)考察卡波姆-u20、丙二醇、甘油的用量3個(gè)因素試驗(yàn)結(jié)果對(duì)制劑成型工藝的影響以確定最佳工藝參數(shù)，正交試驗(yàn)水平與因素設(shè)計(jì)如表4所示。

表4正交試驗(yàn)水平與因素設(shè)計(jì)l9(3⁴)

外觀、流動(dòng)相、涂展性為評(píng)價(jià)指標(biāo)，進(jìn)行直觀分析發(fā)現(xiàn)，根據(jù)極差可知，各因素對(duì)外觀、流動(dòng)相、涂展性影響順序?yàn)閏>b>a，方差分析結(jié)果表明，因素a、b、c對(duì)結(jié)果均無(wú)顯著性影響。結(jié)合直觀分析，優(yōu)選出最佳工藝為c2b3a3，即各因素的用量為卡波姆1.1g、甘油16g、丁二醇20g。試驗(yàn)結(jié)果如表5所示。

表5正交試驗(yàn)結(jié)果及分析

四、初步藥效學(xué)研究資料

試驗(yàn)結(jié)果表明，所述聚篩蕊提取物對(duì)綠膿桿菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和痢疾桿菌均有一定的抑菌作用，并且對(duì)自由基有明顯的清除作用。另外，本發(fā)明的凝膠制劑對(duì)于實(shí)驗(yàn)家兔皮膚的涂藥部位未見明顯的刺激性作用。

1、dpph自由基的清除試驗(yàn)

配制0.1mmol/l的dpph溶液，18支干凈具塞試管，每個(gè)濃度3只試管，分別編為號(hào)1～3號(hào)，根據(jù)表6，分別在試管中加入相應(yīng)體積的溶液，振搖均勻；把18支裝有供試液的試管在室溫下，避光靜置30min；計(jì)算好時(shí)間后，在紫外分光光度計(jì)517nm處分別測(cè)定每只試管的吸光度值。實(shí)驗(yàn)試劑用量如表6所示。

表6dpph自由基清除率實(shí)驗(yàn)試劑用量表

實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)經(jīng)過(guò)處理計(jì)算后，聚篩蕊提取物在517nm處，6個(gè)濃度對(duì)dpph自由基的清除率分別為：1︰1濃度的清除率為35﹪、1︰2濃度的清除率為55﹪、1︰3濃度的清除率為58﹪、1︰4濃度的清除率為60﹪、1︰5濃度的清除率為61﹪、1︰6濃度的清除率為65﹪，如圖2所示。

2、羥基自由基的清除試驗(yàn)

配制不同濃度聚篩蕊提取物、鄰二氮菲溶液、硫酸亞鐵銨溶液以及ph為7.4的tris-hcl溶液，待用；取8只干凈的具塞試管，編號(hào)1～8號(hào)；先向8支試管分別加入0.3ml鄰二氮菲溶液，再加入1mlph為7.4的tris-hcl溶液，然后再加入0.3ml硫酸亞鐵銨溶液；取出1～6號(hào)試管，分別依次加入6個(gè)濃度的聚篩蕊提取物；7號(hào)試管加入0.3mlh2o2；8號(hào)試管用去離子水定容，即可進(jìn)行測(cè)量吸光度。試驗(yàn)數(shù)據(jù)如表7所示。

表7聚篩蕊提取物對(duì)羥基自由基清除率試驗(yàn)數(shù)據(jù)

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明聚篩蕊提取物在517nm處，測(cè)定6個(gè)濃度吸光度值計(jì)算清除率。1︰1濃度的清除率為62﹪；1︰2濃度的清除率為75﹪；1︰3濃度的清除率為75﹪；1︰4濃度的清除率為78﹪；1︰5濃度的清除率為79﹪；1︰6濃度的清除率為85﹪。如圖3所示。

3、超氧自由基清除試驗(yàn)

配制不同濃度的聚篩蕊提取物，取6支干凈的具塞試管，編號(hào)1～6號(hào)，1～5號(hào)試管加入ph值為8.2的tris-hcl溶液；再加入0.3ml不同濃度待測(cè)聚篩蕊提取物；6號(hào)試管加入0.3ml去離子水作為空白對(duì)照；將6支試管放入37℃水浴鍋中恒溫水浴20min，取出后立即加入0.3ml7.5mmol/l的連苯三酚溶液，迅速振搖均勻，在吸收波長(zhǎng)320nm處，每間隔30s測(cè)一次吸光度值，連續(xù)測(cè)定5min，取出10次結(jié)果的間隔值算出其平均值，再計(jì)算出吸光度值即可。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)如表8所示。

表8聚篩蕊提取物對(duì)超氧自由基清除率濃度組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

聚篩蕊提取物對(duì)超氧自由基的清除實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：提取物濃度為1︰1的清除率為44﹪、濃度為1︰2的清除率為56﹪、濃度為1︰3的清除率為60﹪、濃度為1︰4清除率72﹪、濃度為1︰5的清除率為80﹪、濃度為1︰6的清除率為88﹪。如圖4所示。

4、鋼環(huán)法考察聚篩蕊提取物的抑菌效果

稱取聚篩蕊原藥材10g，加入丙酮150ml，然后回流提取4小時(shí)，趁熱過(guò)濾，棄去濾渣，然后與水浴鍋上蒸發(fā)濃縮至50ml，得藥物濃度為0.2g/ml的聚篩蕊丙酮提取液，用0.9％生理鹽水將聚篩蕊提取液稀釋4個(gè)倍數(shù)，即1:1，1:2，1:3，1:4，備用。在無(wú)菌操作臺(tái)上分別用棉簽蘸取大腸桿菌、綠膿桿菌、痢疾桿菌、金黃色葡萄球菌菌種放入已準(zhǔn)備好的肉湯內(nèi)進(jìn)行細(xì)菌接種，然后再放入37℃的溫箱內(nèi)培養(yǎng)6～8小時(shí)。

在無(wú)菌操作臺(tái)上，分別將每個(gè)菌種用棉簽蘸取均勻涂于營(yíng)養(yǎng)瓊脂制作的平板上，每個(gè)菌種做三個(gè)，每個(gè)平板放入5個(gè)鋼環(huán)，中間放陽(yáng)性對(duì)照品慶大霉素周圍放4個(gè)不同稀釋倍數(shù)的聚篩蕊提取物。然后將每個(gè)平板放入37℃的溫箱，24小時(shí)后觀察結(jié)果，并測(cè)定抑菌圈直徑。結(jié)果如表9所示。

表9聚篩蕊提取物鋼環(huán)法抑菌結(jié)果

注：1、2、3、4分別為4個(gè)不同稀釋倍數(shù)比例的聚篩蕊提取物。抑菌圈直徑在20mm以上為極敏，15-20mm為高敏，10-14mm為中敏，10mm以下為低敏。以上樣品平行測(cè)定3次。

用鋼環(huán)法做抑菌試驗(yàn)，結(jié)果表明聚篩蕊提取物對(duì)綠膿桿菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、痢疾桿菌均具有良好的抑菌作用。

5、本發(fā)明凝膠制劑對(duì)家兔皮膚刺激性試驗(yàn)

選擇6只健康白色的實(shí)驗(yàn)家兔，購(gòu)買于重慶藤鑫生物技術(shù)有限公司，由第三軍醫(yī)大學(xué)提供，合格證號(hào)：scxk(軍)2012-0010。體重分別在2.0-2.5kg之間，雌雄各半，把實(shí)驗(yàn)用兔分別單獨(dú)關(guān)籠飼養(yǎng)，每只實(shí)驗(yàn)用兔給相同的食物和水進(jìn)行喂食。在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)之前，需要把6只實(shí)驗(yàn)家兔放置于實(shí)驗(yàn)中動(dòng)物房?jī)?nèi)地方中喂養(yǎng)3d以適應(yīng)環(huán)境，同時(shí)給相同質(zhì)量食物和水。

進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前1d，分別將實(shí)驗(yàn)家兔背部?jī)蓚?cè)毛用電子剃毛器剃除，然后去除干凈，去毛范圍控制在3cm×3cm，涂抹面積2.5cm×2.5cm，左側(cè)去毛區(qū)作為自身對(duì)照，不給予干預(yù)，而右側(cè)去毛區(qū)用棉簽蘸取0.5g本發(fā)明的凝膠制劑在指定的區(qū)域里涂抹均勻。涂抹4h后用溫水洗去殘留的凝膠制劑，并在去除凝膠制劑后的1h、24h、48h、72h時(shí)觀察涂抹部位有無(wú)紅斑、水腫等情況變化，觀察結(jié)果均與動(dòng)物左側(cè)去毛區(qū)皮膚作為自身對(duì)照以判斷是否存在皮膚刺激性。

根據(jù)《中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》，以紅斑、水腫等為評(píng)價(jià)指標(biāo)，結(jié)果如表10所示。

表10本發(fā)明凝膠制劑給藥對(duì)家兔皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

本發(fā)明的凝膠制劑經(jīng)皮膚給藥動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果表明，涂藥部位與空白對(duì)照比較無(wú)明顯紅腫、紅斑水腫等刺激性作用，其皮膚刺激性平均分值<0.25分。

對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，可以根據(jù)以上的技術(shù)方案和構(gòu)思，作出各種相應(yīng)的改變和變形，而所有的這些改變和變形都應(yīng)該包括在本發(fā)明權(quán)利要求的保護(hù)范圍之內(nèi)。